向經(jīng)過殺菌處理的牛奶中添加對人體有益的乳酸菌，再經(jīng)過發(fā)酵就可以制成酸奶，在家里自制酸奶雖然方便，但是食用自制酸奶導(dǎo)致腸胃不適的事件屢見不鮮，主要原因是在制作過程中有雜菌混入。
思考：怎樣才能保證無處不在的雜菌不混入發(fā)酵物中呢？
這需要應(yīng)用無菌技術(shù)和微生物的培養(yǎng)技術(shù)。
概念：個體無法用肉眼觀察的微小生物。
1.概念：個體無法用肉眼觀察的微小生物。
難以用肉眼觀察的微小生物，包括 細(xì)菌、真菌、病毒及一些原生生物等。本章提及的微生物主要指用于發(fā)酵的細(xì)菌和真菌。
在實驗室培養(yǎng)微生物的基本要求：
(1）提供微生物生長繁殖所需營養(yǎng)和環(huán)境條件
(2）確保其它微生物無法混入
(3)并將需要的微生物分離出來
人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)叫做培養(yǎng)基。
① 培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物。
不含凝固劑，呈液體狀態(tài)。
僅作為凝固劑，不能為微生物生長提供能量和碳源。
液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基（半固體培養(yǎng)基）
資料1：100g馬鈴薯中含有80g水、2g蛋白質(zhì)、16g碳水化合物，還有無機(jī)鹽等。
資料2：下表為1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成
問題：比較上述兩種培養(yǎng)基的成分共同點，說出培養(yǎng)基的必備營養(yǎng)成分有哪些？
4.培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分：
（1）培養(yǎng)基的必備營養(yǎng)成分有：碳源（提供碳元素的物質(zhì)）、氮源（提供氮元素的物質(zhì)）、無機(jī)鹽、水
培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的需求。
1、培養(yǎng)乳酸桿菌時，需要在培養(yǎng)基中添加 ； 2、培養(yǎng)霉菌時，需要將培養(yǎng)基調(diào)制 ； 3、培養(yǎng)細(xì)菌時，需要將培養(yǎng)基調(diào)制 ； 4、培養(yǎng)厭氧微生物時，需要提供 條件。
思考：所有微生物是否都可以用培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)?
否。病毒是沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的微生物,必須在活細(xì)胞內(nèi)寄生并以復(fù)制的方式增殖,因此不能用培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（應(yīng)用最廣泛普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基）
牛肉膏和蛋白胨來源于動物，含有糖、維生素和有機(jī)氮等營養(yǎng)物質(zhì)。
無菌技術(shù)還能有效避免操作者被微生物感染。
無菌技術(shù)：獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染。無菌技術(shù)應(yīng)圍繞著如何避免雜菌污染展開。
使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。
100℃煮沸5~6min?？蓺⑺牢⑸锏臓I養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢。
62~65℃煮30min或80~90℃下處理0.5~1min。
用70%酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等。
對接種室、接種箱或超凈工作臺用紫外線照射30min，以殺死物體表面或空氣中的微生物。
牛奶選用巴氏消毒法是因為該方法可以殺死牛奶中絕大多數(shù)微生物，并且基本不破壞牛奶的營養(yǎng)成分
注：使用后的培養(yǎng)基必須滅菌后才能丟棄，以免污染環(huán)境。
①濕熱滅菌：利用沸水、流通蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。
效果最好--高壓蒸汽滅菌鍋：壓力在100kPa、121 ℃下維持15-30min。
用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外的所有的微生物，包括芽孢和孢子。
耐高溫，需保持干燥的物品，適用于玻璃器皿 (如試管、培養(yǎng)皿、吸管、注射器)金屬器具 (如針頭、 鑷子、剪刀等)的滅菌
160~170℃的熱空氣中，1~2h進(jìn)行滅菌的方法。
③灼燒滅菌：酒精燈火焰灼燒
接種工具：涂布器、接種環(huán)、接種針，或其他金屬用具。
（1）避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。
（2）為避免周圍微生物污染，實驗操作都應(yīng)在超凈工作臺并在酒精燈火焰旁進(jìn)行。
比較消毒和滅菌對微生物作用效果的差異
1.培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種針、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌或消毒方法依次是（ ）①化學(xué)消毒 ?、谧茻郎缇? ?、鄹蔁釡缇、茏贤饩€消毒⑤濕熱滅菌 ⑥巴氏消毒法A.⑤③②①④⑥ B.⑤③②⑥④①C.⑤⑥②③④① D.③④②①⑥⑤2．下列有關(guān)無菌技術(shù)的說法，正確的是(　　)A．無菌技術(shù)的關(guān)鍵是殺滅實驗室中的所有的微生物B．培養(yǎng)微生物的試劑和器具都要進(jìn)行濕熱滅菌C．經(jīng)巴氏消毒法處理的食品因微生物未被徹底消滅，不能在常溫下長期保存D．無菌技術(shù)中，若處理對象為液體，則只能消毒，不能滅菌 3.(2021·天津等級考)下列操作能達(dá)到滅菌目的的是(　　)A.用免洗酒精凝膠擦手 B.制作泡菜前用開水燙洗容器C.在火焰上灼燒接種環(huán) D.防疫期間用石炭酸噴灑教室
請同學(xué)們自主閱讀教材P11-13，完成以下問題：
1.相關(guān)概念：培養(yǎng)物？純培養(yǎng)物？純培養(yǎng)？（P11）2.什么是菌落？單菌落？（P12）3.獲得單菌落的方法？（P12）4.酵母菌的純培養(yǎng)的基本步驟？（注意倒平板和接種的具體操作）
在微生物學(xué)中，將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含有特定種類微生物的群體。
由單一個體繁殖所獲得的微生物群體。
①分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，這就是菌落。
一個菌落就是一個種群。
鑒別菌種：菌落的大小、形狀、顏色等是鑒定菌種的重要依據(jù)。
②采用平板劃線法和稀釋涂布平板法能將單個微生物分散在固體培養(yǎng)基上，之后經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由單個微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。
① 學(xué)會配制培養(yǎng)酵母菌的培養(yǎng)基并倒平板② 學(xué)會進(jìn)行無菌操作③ 嘗試通過平板劃線操作來獲得純化的酵母菌菌落
①酵母菌培養(yǎng)液、馬鈴薯、葡萄糖(或蔗糖)、瓊脂、蒸餾水②天平，小刀，紗布，燒杯，錐形瓶，棉塞、牛皮紙（或報紙）③皮筋，培養(yǎng)皿，接種環(huán)，酒精燈，超凈工作臺④高壓蒸汽滅菌鍋，干熱滅菌箱和恒溫培養(yǎng)箱等
稱取去皮的馬鈴薯200g
加水1000mL，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛。
濾液中加入20g葡萄糖，15~20g瓊脂。
用蒸餾水定容至1000mL
將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞。
包上牛皮紙，并用皮筋勒緊。
壓力100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15 ~ 30min。
放入干熱滅菌箱內(nèi)，160 ~ 170℃滅菌2h。
培養(yǎng)基冷卻到50℃左右，在酒精燈火焰附近倒平板。
1.防止培養(yǎng)基水分過快蒸發(fā)。
2.防止皿蓋上冷凝水滴落，造成污染。
通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。
不能完全打開，以免雜菌污染培養(yǎng)基。
可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺溫度下降到剛剛不燙手即可。
1、怎么確定所倒平板未被雜菌污染？
將所倒平板放入37℃的恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h，觀察是否有菌落存在以確定是否被污染或滅菌是否徹底。
2、在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？
最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。防止空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。
通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)過數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到單菌落。
【平板劃線法注意事項】
1.接種環(huán)只蘸一次菌液，但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次。
2.劃線不要將最后一次的劃線與第一次的劃線相連。
3.每次劃線前灼燒接種環(huán)進(jìn)行滅菌；劃線操作結(jié)束后，仍需灼燒接種環(huán)。
將聚集的菌種進(jìn)行稀釋，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。
思考：為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)的原因。
（2）每次劃線前灼燒：
（3）接種結(jié)束后灼燒：
滅菌，殺死接種環(huán)上原有微生物。
殺死上次劃線時殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端，從而使每次劃線時菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個細(xì)胞。
殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。
1.在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻再進(jìn)行劃線，目的是什么？
3.為什么劃線時要注意不能劃破培養(yǎng)基？
2.除第一次劃線外，每次劃線都從上一次劃線的末端開始，目的是什么？
①一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；②存留在劃破處的單個細(xì)胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。
完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個未接種的平板倒置，放入28℃左右（培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異）的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h。
對照：說明培養(yǎng)基是否被雜菌污染。
劃3個平板（重復(fù)實驗）和1個不劃線（空白對照）
防止皿蓋上冷凝水滴落，造成污染。
1.倒平板后，待平板冷凝之后需將其倒置( 　)2.倒平板時，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上 ( 　)3.若皿蓋和皿底之間濺上培養(yǎng)基，這個培養(yǎng)基不可再用( 　)4.為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落( 　)5.平板劃線法中每一次劃線后要將接種環(huán)灼燒( 　)6.培養(yǎng)微生物的溫度因菌種不同而稍有差異 ( 　)
7.下列關(guān)于平板劃線的操作，正確的是（ ）A. 每次劃線前都要蘸取菌液B. 灼燒接種環(huán)后，要立即用接種環(huán)接種 C. 平板劃線操作時劃出了五個區(qū)域菌落數(shù)逐漸增多 D. 接種前，要將菌種試管口通過火焰

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一 微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)

版本： 人教版 (2019)

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