通過對培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基進行滅菌，了解消毒和滅菌的原理及方法。（科學思維）
掌握通過配制培養(yǎng)基，了解配制培養(yǎng)基的基本步驟，以及培養(yǎng)基中各類營養(yǎng)物質(zhì)的配比。（生命觀念）
通過對酵母菌進行純培養(yǎng)，理解并掌握微生物接種、分離和培養(yǎng)的基本原理和過程。（科學探究）
基本成分：碳源、氮源、水、無機鹽
特殊需求：維生素（如乳酸桿菌）、堿基等
溫故知新：培養(yǎng)基的配制和無菌技術(shù)
問題1：微生物結(jié)構(gòu)簡單、形體微小，眼睛看不到，若想看某種純凈的微生物,當我們掌握了培養(yǎng)基配制和無菌技術(shù)后，我們接下來該如何操作？
（一）培養(yǎng)物、純培養(yǎng)物、純培養(yǎng)概念辨析：
在微生物學中，將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體。
由單一個體繁殖所獲得的微生物群體。
獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。
酵母菌的純化培養(yǎng)過程（視頻）
1.倒平板時(1)為什么需要使錐形瓶的瓶口過火焰？(2)平板冷凝后，為什么要將平板倒置？(3)怎么確定所倒平板未被雜菌污染？2.平板劃線法時注意事項有哪些？3.接種過程中在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？4.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？5.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時,仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？
合作探究一：請同學們自主學習教材P11-13頁，小組合作思考討論完成問題。
稱取去皮的馬鈴薯200g
加水1000mL，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛
濾液中加入20g葡萄糖，15~20g瓊脂
用蒸餾水定容至1000mL
將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞
包上牛皮紙，并用皮筋勒緊
壓力100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15 ~ 30min
放入干熱滅菌箱內(nèi)，160 ~ 170℃滅菌2h
待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板。
操作：在酒精燈火焰附近
問題1：為什么需要使錐形瓶的瓶口過火焰？
通過灼燒滅菌，防止瓶口微生物污染培養(yǎng)基
問題2：平板冷凝后，為什么要將平板倒置？
防止培養(yǎng)基表面的水分過度揮發(fā);防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染
問題3：怎么確定所倒平板未被雜菌污染？
將所倒平板放入 37℃ 的恒溫箱中培養(yǎng) 12～24?h ，觀察是否有菌落存在以確定是否被污染或滅菌是否徹底。
1.下列關(guān)于倒平板的敘述，錯誤的是( ) A.待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右時倒平板 B.倒平板整個過程應(yīng)在酒精燈火焰旁進行 C.完全打開培養(yǎng)皿皿蓋，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋 D.為避免水滴滴入培養(yǎng)基，平板應(yīng)倒過來放置
4.接種和分離酵母菌：
劃3個平板（重復實驗）1個不劃線（空白對照）
（1）接種環(huán)只蘸一次菌液,但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次
（2）劃線首尾不能相接
（3）每次劃線前灼燒接種環(huán)進行滅菌
（4）劃線操作結(jié)束后，仍需灼燒接種環(huán)
問題4：在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？
以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。
問題5：在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？
劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。
問題6：為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時,仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？
接種前，殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)基
殺死殘留菌種，確保每次劃線菌種來自上次劃線的末端
劃線結(jié)束后，殺死殘留菌種，避免環(huán)境污染和感染操作者
接種環(huán)三個不同時期灼燒的目的
完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個未接種的平板倒置，放入28℃左右的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-28h。
既可以防止培養(yǎng)基表面的水分揮發(fā)；又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染
作對照，該培養(yǎng)皿無菌落說明培養(yǎng)基沒有污染
①配制培養(yǎng)基（馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂、水）
③倒平板（在酒精燈火焰附近操作）
培養(yǎng)基：濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌鍋）
培養(yǎng)皿：干熱滅菌（干熱滅菌鍋）
用接種環(huán)在固體培養(yǎng)基上用平板劃線法接種
平板倒置，放入28℃左右的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)
2.下列為幾位同學描述的平板劃線接種法的劃線方式，其中正確的是（ ）
3.下圖表示培養(yǎng)和純化X細菌的部分操作步驟，下列相關(guān)敘述正確的是( )。
4.下圖為微生物平板劃線示意圖，劃線的順序為1、2、3、4、5，下列敘述正確的是( )。
A.在每一區(qū)域內(nèi)劃線時接種環(huán)上的菌種直接來源于菌液 B.劃線操作時應(yīng)在酒精燈火焰旁邊打開皿蓋，劃線接種 C.每次劃線只能從上一次劃線的末端開始，才能確保菌種逐步稀釋以得到單菌落 D.第1區(qū)和第5區(qū)的劃線最終要連接起來，以便比較前后的菌落數(shù)
5.在分離、純化細菌的實驗中，劃線接種(甲)、培養(yǎng)結(jié)果(乙)如下圖，a、b、c、d是劃線的四個區(qū)域。下列敘述錯誤的是
A.每次劃線前后都要對接種環(huán)灼燒滅菌B.連續(xù)劃線的目的是獲得單個細菌形成的菌落C.甲圖中的a區(qū)域為劃線的起始區(qū)域D.蘸取菌液和劃線要在酒精燈火焰旁進行
6.下列關(guān)于倒平板及對菌種純化的說法，正確的是(　　) A.倒平板時左手將滅過菌的培養(yǎng)皿蓋完全打開，右手將錐形瓶中培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿(10～20 mL)，左手立即蓋上培養(yǎng)皿蓋 B.使用已滅菌的接種環(huán)及培養(yǎng)基之后不需要再滅菌 C.平板冷凝后要將平板倒置，以防皿蓋上的冷凝水流入培養(yǎng)基 D.平板劃線法是首先進行梯度稀釋，然后將稀釋的菌種通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基上連續(xù)劃線，從而將聚集的菌種逐漸分散形成單個菌落
7.有關(guān)純化酵母菌實驗操作的敘述，錯誤的是(　　) A.在第二區(qū)域內(nèi)劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于菌液 B.第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物 C.每次劃線前，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種 D.劃線結(jié)束后，灼燒接種環(huán)能及時殺死接種環(huán)上的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者
8.防止雜菌入侵，獲得純凈的培養(yǎng)物，是研究和應(yīng)用微生物的前提。下列敘述錯誤的是（ ） A．實驗室里可以用紫外線或化學藥物進行消毒 B．在實驗室中，切記不可吃東西、喝水，離開實驗室時一定要洗手，以防被微生物感染 C．接種環(huán)、接種針等金屬用具，直接在酒精燈火焰的不充分燃燒層灼燒 D．使用后的培養(yǎng)基丟棄前一定要進行滅菌處理，以免污染環(huán)境
9．下列有關(guān)平板劃線操作的敘述，正確的是（ ） A．待灼燒滅菌的接種環(huán)冷卻后再進行劃線 B．用接種環(huán)蘸取菌種后需要立即塞上棉塞 C．劃線結(jié)束后要形成首尾相連的環(huán)形圈 D．每次劃線都要在菌液中蘸取一環(huán)菌液
10.滅菌、消毒、無菌操作是生物學實驗中常見的操作。下列敘述正確的是（ ）A．動、植物細胞DNA的提取必須在無菌條件下進行B．微生物、動物細胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染C．為防止蛋白質(zhì)變性，不能用高壓蒸汽滅菌法對牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進行滅菌D．可用高壓蒸汽滅菌法對實驗中所使用的微量離心管、細胞培養(yǎng)瓶等進行滅菌
11．下列關(guān)于無菌技術(shù)的敘述，錯誤的是（ ）A．經(jīng)過巴氏消毒法處理的食品因微生物未徹底消滅，不能在常溫下長期保存B．接種用的操作臺需要進行滅菌處理C．使用巴氏消毒法處理牛奶是因為高溫容易破壞牛奶的營養(yǎng)成分D．在分解纖維素的純培養(yǎng)過程中，在培養(yǎng)基中觀察到不同形態(tài)的菌落，可能是雜菌污染造成的

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一 微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)

版本： 人教版 (2019)

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