?第2節(jié) 微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用
第1課時(shí) 微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)
[基礎(chǔ)檢查] 
1.不同培養(yǎng)基的具體配方不同,但一般都含 (  )
A.碳源、磷酸鹽和維生素
B.氮源和維生素
C.水、碳源、氮源和無機(jī)鹽
D.稀有元素
解析:不同的培養(yǎng)基一般都需要含有最基礎(chǔ)的成分,即水、無機(jī)鹽、碳源和氮源等。
答案:C
2.某桿菌只有在含蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉和微量維生素的培養(yǎng)基中才能生長,此時(shí)微量維生素對(duì)該菌的培養(yǎng)而言屬于 (  )
A.碳源 B.氮源
C.激素 D.特殊營養(yǎng)物質(zhì)
解析:碳源是指能為微生物生長發(fā)育提供所需碳元素的營養(yǎng)物質(zhì),如蛋白胨、牛肉膏均可作為碳源;氮源是指能為微生物生長發(fā)育提供所需氮元素的營養(yǎng)物質(zhì),如蛋白胨、牛肉膏;激素不是細(xì)菌培養(yǎng)基的成分;特殊營養(yǎng)物質(zhì)是指微生物生命活動(dòng)不可缺少,而微生物自身又不能合成的微量有機(jī)物,如維生素。
答案:D
3.關(guān)于培養(yǎng)基的配制,下列敘述錯(cuò)誤的是(  )
A.在配制培養(yǎng)乳酸桿菌的培養(yǎng)基時(shí),需加入維生素
B.微生物的適應(yīng)性強(qiáng),配制培養(yǎng)基時(shí)可以不考慮pH
C.在液體培養(yǎng)基中加入瓊脂可以制成固體培養(yǎng)基
D.配制培養(yǎng)基時(shí)要注意各種養(yǎng)分的濃度和比例
解析:培養(yǎng)基除需要滿足碳源、氮源、水和無機(jī)鹽幾種營養(yǎng)物質(zhì)外,還需要滿足微生物生長對(duì)pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求,如培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素;在液體培養(yǎng)基中加入瓊脂后制成的瓊脂固體培養(yǎng)基,是實(shí)驗(yàn)室最常用的培養(yǎng)基之一;不同微生物的生長對(duì)各種營養(yǎng)物質(zhì)的需求不同,配制培養(yǎng)基時(shí)要注意各種養(yǎng)分的濃度和比例。
答案:B
4.在微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)過程中,獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是 (  )
A.將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌
B.接種純種細(xì)菌
C.適宜條件下培養(yǎng)
D.防止外來雜菌的入侵
解析:獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是無菌技術(shù),即防止外來雜菌的入侵。
答案:D
5.下列關(guān)于滅菌和消毒的理解,錯(cuò)誤的是(  )
A.滅菌是指殺滅物體內(nèi)外一切微生物的細(xì)胞、芽孢和孢子
B.消毒和滅菌實(shí)質(zhì)上是相同的
C.接種環(huán)用灼燒法滅菌
D.常用滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、濕熱滅菌
解析:消毒是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物(不包括芽孢和孢子)。滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包括芽孢和孢子。兩者實(shí)質(zhì)有很大區(qū)別。
答案:B
6.細(xì)菌培養(yǎng)過程中分別采用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理,這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌 (  )
A.接種環(huán)、手、培養(yǎng)基
B.高壓鍋、手、接種環(huán)
C.培養(yǎng)基、手、接種環(huán)
D.接種環(huán)、手、高壓鍋
解析:高壓蒸汽用于培養(yǎng)基的滅菌,酒精用于手的消毒,火焰灼燒用于接種環(huán)的滅菌。
答案:C
7.下列操作與無菌技術(shù)無關(guān)的是 (  )
A.接種前用火焰灼燒接種環(huán)
B.接種前用酒精棉球擦拭雙手
C.將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
D.在酒精燈的火焰旁完成接種
解析:接種用具、器皿、空氣中都充滿了微生物,都有污染的可能,必須嚴(yán)格地消毒、滅菌。A、B、D三項(xiàng)是實(shí)驗(yàn)操作過程中滅菌或防止雜菌污染的措施。將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)與無菌技術(shù)無關(guān)。
答案:C
8.下列有關(guān)平板劃線操作的敘述,錯(cuò)誤的是 (  )
A.在第二次劃線時(shí),接種環(huán)上的菌種直接來源于菌液
B.從第二次劃線開始,每次劃線前,灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種
C.第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物
D.劃線結(jié)束后,灼燒接種環(huán)能及時(shí)殺死接種環(huán)上的菌種,避免污染環(huán)境和感染操作者
解析:在第二次劃線時(shí),接種環(huán)上的菌種直接來源于第一次劃線的末端。
答案:A
9.將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入37 ℃恒溫箱的目的是 (  )
A.對(duì)比觀察培養(yǎng)基有沒有被微生物利用
B.對(duì)比分析培養(yǎng)基上是否生有雜菌
C.沒必要放入未接種的培養(yǎng)基
D.為了下次接種時(shí)再使用
解析:分析培養(yǎng)基上是否生有雜菌常用的方法是將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入37 ℃恒溫箱培養(yǎng),看未接種的培養(yǎng)基是否有菌落產(chǎn)生,若有菌落產(chǎn)生,則說明培養(yǎng)基上生有雜菌。
答案:B
10.做“酵母菌的純培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)時(shí),下列敘述錯(cuò)誤的是 (  )
A.接種時(shí)為了獲得單菌落,從第二次開始每次劃線前都要灼燒接種環(huán)
B.倒平板時(shí),拔出錐形瓶棉塞后,應(yīng)將瓶口迅速通過火焰
C.倒平板要在酒精燈火焰旁進(jìn)行,防止雜菌污染
D.為了防止雜菌污染,接種環(huán)經(jīng)火焰灼燒滅菌后,應(yīng)趁熱快速蘸取菌液
解析:從第二次開始每次劃線前灼燒接種環(huán)的目的是殺死接種環(huán)上的菌種,以達(dá)到菌種稀釋的目的,最后獲得單菌落;倒平板時(shí),拔出錐形瓶棉塞后,應(yīng)將瓶口迅速通過火焰,以防止雜菌污染;為了防止雜菌污染,倒平板要在酒精燈火焰旁進(jìn)行;接種環(huán)經(jīng)火焰灼燒滅菌后,應(yīng)該在火焰旁待接種環(huán)冷卻后再蘸取菌液,以免接種環(huán)因溫度過高而殺死菌種。
答案:D
11.下表是某微生物培養(yǎng)基的配方,請(qǐng)分析回答下列問題。
編號(hào)



成分
(NH4)2SO4
KH2PO4
FeSO4
含量
0.4 g
4.0 g
0.5 g

編號(hào)



成分
CaCl2
H2O

含量
0.5 g
定容至100 mL


(1)從培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分看,此培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)的微生物的同化作用類型是     。利用該培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物時(shí),微生物所需要的碳源來自       。?
(2)此表中含有的微生物所需的營養(yǎng)成分是?           。?
(3)若去除該培養(yǎng)基中的①后再加入不含氮元素的有機(jī)物,則此培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物種類是 。?
(4)若將氨基酸加入培養(yǎng)基,則它可充當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)成分是      ?!?
(5)若要觀察微生物的菌落的特點(diǎn),培養(yǎng)基中還應(yīng)添加的成分是   。?
解析:(1)從培養(yǎng)基的成分看,該培養(yǎng)基缺少碳源,因此可以培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物,微生物所需的碳源只能由空氣中的CO2提供。(2)培養(yǎng)基中的成分包括微生物需要的氮源、無機(jī)鹽和水。(3)培養(yǎng)基中的①是該培養(yǎng)基中唯一的氮源,去掉后則成為無氮培養(yǎng)基,可用于培養(yǎng)自生固氮微生物,因?yàn)樽陨痰⑸锟梢岳么髿庵械腘2作為氮源。(4)在培養(yǎng)基中加入氨基酸,可以為微生物提供碳源、氮源和特殊營養(yǎng)物質(zhì)。(5)微生物的菌落需要在固體培養(yǎng)基的表面生長,因此培養(yǎng)基中需要添加凝固劑(瓊脂),使液體培養(yǎng)基凝固成固體培養(yǎng)基。
答案:(1)自養(yǎng)型 空氣中的CO2 (2)水、無機(jī)鹽、氮源
(3)自生固氮微生物 (4)碳源、氮源和特殊營養(yǎng)物質(zhì)
(5)凝固劑(瓊脂)

[拓展應(yīng)用]
12.下列關(guān)于4種微生物的敘述,錯(cuò)誤的是 (  )
A.CO2 和NH3 分別是硝化細(xì)菌的碳源和氮源,該生物所需的能源來自 NH3 的氧化
B.CO2和硝酸鹽分別是藍(lán)細(xì)菌的碳源和氮源,該生物所需的能源來自太陽能
C.糖類和N2 是乳酸菌的碳源和氮源,該生物所需的能源來自乳酸的氧化分解
D.葡萄糖既是酵母菌的碳源也是其能源,但CO2 一定不是酵母菌的碳源
解析:硝化細(xì)菌是化能自養(yǎng)需氧型微生物,CO2和NH3分別是硝化細(xì)菌的碳源和氮源,該生物所需的能源來自NH3的氧化;藍(lán)細(xì)菌是自養(yǎng)生物,能進(jìn)行光合作用,CO2和硝酸鹽分別是藍(lán)細(xì)菌的碳源和氮源,該生物所需的能源來自太陽能;乳酸菌是異養(yǎng)厭氧型微生物,糖類和有機(jī)酸是乳酸菌的碳源和氮源,該生物所需的能源來自糖類的氧化分解;酵母菌是異養(yǎng)生物,葡萄糖既是酵母菌的碳源也是其能源,酵母菌不能直接利用CO2。
答案:C
13.將馬鈴薯去皮切塊,加水煮沸一定時(shí)間,過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入一定量的蔗糖和瓊脂,用水定容后滅菌,得到M 培養(yǎng)基。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(  )
A.若M 培養(yǎng)基中加入青霉素,可用于真菌的篩選
B.制備培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)將pH調(diào)至酸性
C.M 培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液可為微生物提供無機(jī)鹽
D.倒平板時(shí),應(yīng)將皿蓋打開一條稍大于瓶口的縫隙
解析:青霉素可抑制細(xì)菌生長,篩選出真菌;制備培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)將pH調(diào)至中性或弱堿性;M培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液可為微生物提供碳源、氮源、無機(jī)鹽等;倒平板時(shí),應(yīng)將皿蓋打開一條稍大于瓶口的縫隙。
答案:B
14.下表為某培養(yǎng)基的配方,下列敘述正確的有 (  )
成分
蛋白胨
葡萄糖
K2HPO4
伊紅
含量
10 g
10 g
2 g
0.4 g

成分
亞甲藍(lán)
H2O
瓊脂
含量
0.065 g
定容至1 000 mL
20 g

①從物理性質(zhì)看該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基,從用途看該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基
②培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖,屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨
③該培養(yǎng)基中的蛋白胨可提供特殊營養(yǎng)物質(zhì)
④該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的pH和消毒后就可以接種使用
⑤該培養(yǎng)基可以用于培養(yǎng)HIV
⑥該培養(yǎng)基可以用于大腸桿菌的鑒定,其菌落為帶金屬光澤且為深紫色
A.2項(xiàng) B.3項(xiàng) C.4項(xiàng) D.5項(xiàng)
解析:此配方中含有瓊脂,從物理性質(zhì)看該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基,含伊紅和亞甲藍(lán),從用途看該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基;葡萄糖是主要的碳源,蛋白胨可作為氮源,同時(shí)還可提供碳源、維生素等物質(zhì);該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的pH后,需要進(jìn)行滅菌處理;HIV營寄生生活,需要用活細(xì)胞培養(yǎng),不能用培養(yǎng)基直接培養(yǎng);大腸桿菌在固體培養(yǎng)基上與伊紅和亞甲藍(lán)結(jié)合,其菌落為帶金屬光澤且為深紫色。
答案:C
15.下圖為實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)和純化大腸桿菌過程中的部分操作步驟示意圖,下列說法錯(cuò)誤的是 (  )

① ② ③ ④
A.①②③步驟操作時(shí)需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行
B.步驟①中,需待倒入的培養(yǎng)基冷卻后蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋
C.步驟③中,每次劃線后都需對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒處理
D.劃線接種結(jié)束后,將平板倒置后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
解析:①②③步驟操作時(shí)需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行,防止被雜菌污染;倒完平板后立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋,冷凝后將平板倒過來放置;灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種,使下一次劃線時(shí),接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端,從而通過劃線次數(shù)的增加,使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少,以便得到單菌落;劃線接種結(jié)束后,將平板倒置后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng),有利于表面的水分更好地?fù)]發(fā)和防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。
答案:B
16.某同學(xué)配制含瓊脂的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基后,對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行高壓蒸汽滅菌,當(dāng)培養(yǎng)基溫度下降到50 ℃時(shí),在酒精燈火焰附近倒平板,待培養(yǎng)基冷卻至室溫,按表處理。將處理完畢的培養(yǎng)皿置于適宜溫度下培養(yǎng)2~3 d,觀察每個(gè)培養(yǎng)皿中的菌落特征和數(shù)目。請(qǐng)思考回答下列問題。
組別
處理
A
打開培養(yǎng)皿蓋,距地面0.3 m處暴露15 min
B
打開培養(yǎng)皿蓋,距地面0.6 m處暴露15 min
C
打開培養(yǎng)皿蓋,距地面0.9 m處暴露15 min
D
打開培養(yǎng)皿蓋,距地面1.2 m處暴露15 min
E
不打開培養(yǎng)皿蓋

(1)上述實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖?   。若E組的培養(yǎng)基表面有菌落生長,說明       。?
(2)培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨主要為微生物生長提供   和     。在酒精燈火焰附近進(jìn)行相關(guān)操作是為了           ?!?
(3)實(shí)驗(yàn)過程特別強(qiáng)調(diào)溫度控制,請(qǐng)簡要說明下列溫控措施的目的。
①“待培養(yǎng)基冷卻至室溫”的目的有 。?
②“將處理完畢的培養(yǎng)皿置于適宜溫度下培養(yǎng)”的目的是 。?
(4)培養(yǎng)微生物時(shí)將培養(yǎng)皿倒置的目的是? 。?
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,對(duì)使用過的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行    處理。?
解析:(1)由題表內(nèi)容可知,該實(shí)驗(yàn)的自變量是打開皿蓋的培養(yǎng)皿距地面的高度,實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖翘骄坎煌叨瓤諝庵形⑸锏姆N類和數(shù)量。若E組的培養(yǎng)基表面有菌落生長,說明培養(yǎng)基滅菌不合格(或受到雜菌污染)。(2)培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨主要為微生物生長提供碳源和氮源。在酒精燈火焰附近進(jìn)行相關(guān)操作是為了避免周圍環(huán)境中微生物的污染。(3)①“待培養(yǎng)基冷卻至室溫”的目的是使培養(yǎng)基凝固及防止培養(yǎng)基溫度過高殺死接種在其上的微生物。②“將處理完畢的培養(yǎng)皿置于適宜溫度下培養(yǎng)”的目的是讓微生物在適宜的溫度下生長(繁殖)。(4)培養(yǎng)微生物時(shí)將培養(yǎng)皿倒置的目的是防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上(污染培養(yǎng)基和破壞菌落)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,對(duì)使用過的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行滅菌處理。
答案:(1)探究不同高度空氣中微生物的種類和數(shù)量 培養(yǎng)基滅菌不合格(或受到雜菌污染) (2)碳源 氮源 避免周圍環(huán)境中微生物的污染 (3)①使培養(yǎng)基凝固及防止培養(yǎng)基溫度過高殺死接種在其上的微生物 ②讓微生物在適宜的溫度下生長(繁殖) (4)防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上(污染培養(yǎng)基和破壞菌落) 滅菌

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一 微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)

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