高中生物人教版 (2019)選擇性必修3一 微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)完美版課件ppt

這是一份高中生物人教版 (2019)選擇性必修3一 微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)完美版課件ppt，共39頁。PPT課件主要包含了學(xué)習(xí)目標(biāo)，微生物的數(shù)量測(cè)定，一統(tǒng)計(jì)菌體數(shù)目，顯微鏡直接計(jì)數(shù)法，稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法，間接計(jì)數(shù)法，直接計(jì)數(shù)法，1原理，樣品稀釋液，2計(jì)數(shù)原則等內(nèi)容，歡迎下載使用。
通過對(duì)土壤中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)，理解并掌握微生物計(jì)數(shù)的方法。（科學(xué)探究）
通過實(shí)例，理解各類微生物都能適應(yīng)其生活環(huán)境。（生命觀念）
根據(jù)微生物的代謝類型，配制選擇培養(yǎng)基，總結(jié)分離微生物的過程和測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法。（科學(xué)思維）
系列梯度稀釋操作和涂布平板操作
接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線
從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體
在具有顯著的菌落特征的區(qū)域挑取菌體
可以計(jì)數(shù)，但是操作復(fù)雜，需涂布多個(gè)平板
使培養(yǎng)基上形成由單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖而來的子細(xì)胞群體——菌落
溫故知新：稀釋涂布平板法和平板劃線法的比較
問題1:怎么通過稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)活菌的數(shù)目呢？還有哪些統(tǒng)計(jì)活菌的方法呢？
當(dāng)樣品的稀釋度足夠 時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè) ，來源于 中的一個(gè) 。通過計(jì)數(shù)平板上的 數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少 。
樣品的稀釋度將直接影響平板上的菌落數(shù)目
選擇菌落數(shù)為30~300的平板計(jì)數(shù)。
同一稀釋度下，應(yīng)至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值
統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低
統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)。
恰當(dāng)?shù)南♂尪?、涂布是否均勻是成功統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵。
C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)
V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)
每g樣品中的菌落數(shù)＝
1.甲同學(xué)做此實(shí)驗(yàn)在稀釋倍數(shù)105獲得3個(gè)平板，菌落數(shù)分別是80、90、100，涂布平板時(shí)均使用0.1ml菌液，試計(jì)算每克土壤中可以分離尿素的細(xì)菌數(shù)目？
（80+90+100）/3
× 105 =9 ×107個(gè)
2.某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106 的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均數(shù)為234，那么每g樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1mL) ( ) A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4
3.用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，其中正確的是( ) A.涂布了1個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230 B.涂布了2個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260，取平均值238 C.涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是13、234和254，取平均值167 D.涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為210、240和250，取平均值233
利用細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。
常用于相對(duì)較大的酵母菌細(xì)胞、霉菌孢子等的計(jì)數(shù)。
對(duì)細(xì)菌等較小的細(xì)胞進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)。
A.不能區(qū)分死菌和活菌→偏大B.不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)細(xì)菌的計(jì)數(shù)。C.個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察。
每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)＝每小格平均細(xì)菌數(shù)×400×10000×稀釋倍數(shù)
4.關(guān)于土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)的敘述,正確的(　　) A.培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源,該細(xì)菌與硝化細(xì)菌所利用的碳源是相同的 B.對(duì)微生物進(jìn)行分離、純化用平板劃線法,而稀釋涂布平板法只能用于計(jì)數(shù) C.對(duì)10 mL土樣稀釋106倍后,取0.1 mL該溶液進(jìn)行重復(fù)的涂布實(shí)驗(yàn),測(cè)得的菌落數(shù)分別為18、234、276,則該10 mL土樣中分解尿素的細(xì)菌數(shù)為2.55×108個(gè) D.應(yīng)該設(shè)置對(duì)照以排除非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾,提高可信度
土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)
土壤中含有能分解尿素的細(xì)菌，我們?nèi)绾畏蛛x它們？每克土壤樣品究竟含有多少這樣的細(xì)菌？
利用以“尿素作為唯一氮源”的選擇培養(yǎng)基，可以分離。
絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌。
合作探究一：請(qǐng)同學(xué)們自主學(xué)習(xí)教材P18-19頁，觀看土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)視頻，小組合作思考討論完成問題。
1.結(jié)合對(duì)照組，分析培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出一些菌落。2.你是否獲得了某一稀釋度下菌落數(shù) 為30～300的平板在這一稀釋度下，是否至少有2個(gè)平板的菌落數(shù)接近？3.你統(tǒng)計(jì)的每克土樣中能分解尿素的細(xì)菌的菌落數(shù)是多少？與其他同學(xué)統(tǒng)計(jì)的結(jié)果接近嗎？如果差異很大，可能是什么原因引起的？
①要求：富含有機(jī)質(zhì)、酸堿度接近中性且潮濕的土壤
②取樣土層：距地表3~8cm的土壤層
以尿素為唯一氮源（選擇培養(yǎng)基）
在酒精燈火焰旁稱取土壤10g，放入90mL無菌水的錐形瓶中，震蕩使土壤與水充分混合，將細(xì)菌分散，制成101倍土壤稀釋液。用1支1mL無菌吸管從中吸取1mL土壤懸液注入盛有9mL無菌水的試管中，吸取三次，充分混勻，制成102倍的土壤稀釋液。以此類推，制成103、104、105、106、107倍的土壤稀釋液。
圖中的1、2、3平板是選擇培養(yǎng)基，4平板為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，以判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用；另外，還要有兩個(gè)對(duì)照，即不涂布稀釋液的選擇培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基以驗(yàn)證培養(yǎng)基中是否含有雜菌。
培養(yǎng)條件：不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。 細(xì)菌一般在30～37℃的溫度下培養(yǎng)1～2d。觀察：每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致菌落數(shù)目遺漏。結(jié)果：一般來說，在相同的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征，如形狀、大小和顏色等。
注意事項(xiàng)：本實(shí)驗(yàn)使用的平板和試管較多，為了避免混淆，最好在使用前做好標(biāo)記。例如，在標(biāo)記培養(yǎng)皿時(shí)應(yīng)該注明組別、培養(yǎng)日期和平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度等。
當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，同一稀釋度下至少計(jì)數(shù)3個(gè)平板，求出平均值，并根據(jù)所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。設(shè)計(jì)如下表格記錄并計(jì)數(shù)。
問題1:結(jié)合對(duì)照組，分析培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出一些菌落。
如果沒有接種的培養(yǎng)基上沒有菌落生長(zhǎng)，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。如果接種后的完全培養(yǎng)基上的菌落數(shù)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，說明選擇培養(yǎng)基篩選出了一些尿素分解菌。
問題2:你是否獲得了某一稀釋度下菌落數(shù) 為30～300的平板？在這一稀釋度下，是否至少有2個(gè)平板的菌落數(shù)接近？
如果得到了兩個(gè)或多個(gè)菌落數(shù)為30~300的平板，說明稀釋度合適，操作比較成功，能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。
問題3:你統(tǒng)計(jì)的每克土樣中能分解尿素的細(xì)菌的菌落數(shù)是多少？與其他同學(xué)統(tǒng)計(jì)的結(jié)果接近嗎？如果差異很大，可能是什么原因引起的？
如果是用同一土樣進(jìn)行的操作，數(shù)據(jù)應(yīng)該比較接近。如果差異很大，就需要從操作是否規(guī)范、培養(yǎng)基配制是否合理等方面查找原因。
問題4:得到的菌落一定是分解尿素的細(xì)菌嗎？
不一定，還需要進(jìn)一步的鑒定
本活動(dòng)只是初步篩選了能分解尿素的細(xì)菌,對(duì)分離的菌種進(jìn)行鑒定還需要借助生物化學(xué)的方法。你可以查閱相關(guān)資料,進(jìn)一步設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)來鑒定自己分離的菌種。
脲酶催化尿素分解成氨→培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)→ 酚紅變紅→脲酶陽性
呈堿性，遇酚紅指示劑呈 色。
在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果PH升高，指示劑將變紅，說明該細(xì)菌能夠分解尿素。
可以觀察菌落周圍是否出現(xiàn)紅色環(huán)帶，紅色環(huán)帶直徑與菌落直徑比值越大，說明分解能力越強(qiáng)。
可以直接看液體的變色情況。
在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品(不影響微生物正常生長(zhǎng))，使微生物的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中的特定指示劑或化學(xué)藥品發(fā)生反應(yīng)。從而達(dá)到鑒定的作用。
伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌
選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的比較
將一定體積的水用細(xì)菌過濾器過濾后，將濾膜放到 伊紅-美藍(lán) 培養(yǎng)基上培養(yǎng)，大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色，通過記算得出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。
測(cè)定飲水中大腸桿菌數(shù)量的方法：
間接計(jì)數(shù)法 — 稀釋涂布平板法
直接計(jì)數(shù) —計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法
土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)
（3）稀釋涂布平板法接種
（4）微生物的培養(yǎng)與觀察
5.某興趣小組在校園土壤中取樣,進(jìn)行“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)。小明從稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中篩選出約120個(gè)菌落,而其他同學(xué)只篩選出約40個(gè)菌落。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　) A.小明出現(xiàn)這種結(jié)果的可能原因是和其他同學(xué)取樣的土壤不同? B.要證明培養(yǎng)基是否受到污染,可將小明配制的培養(yǎng)基不加土樣進(jìn)行培養(yǎng) C.當(dāng)稀釋倍數(shù)太小時(shí),可能由于菌落重疊而導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果偏小 D.在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑可初步鑒定尿素分解菌
6.某同學(xué)將1 mL土壤樣液稀釋100倍，在3個(gè)平板上用稀釋涂布平板法分別接入0.1 mL稀釋液，經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為56、57和58。下列敘述錯(cuò)誤的是(　　)A.可得出土壤樣液中活菌大約為5.7×107個(gè)/LB.此方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比實(shí)際的活菌數(shù)目低C.一般選擇菌落數(shù)為30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)D.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的是稀釋液中的活菌數(shù)
7.下列關(guān)于土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)的敘述正確的是(　　)A.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素B.統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)目一般用平板劃線法C.篩選分解尿素的細(xì)菌時(shí)，應(yīng)以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的營養(yǎng)物質(zhì) D.在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變藍(lán)，則表明篩選到了分解尿素的細(xì)菌
8.下列關(guān)于“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，錯(cuò)誤的是(　　)A.利用稀釋涂布平板法準(zhǔn)確估計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是有恰當(dāng)?shù)南♂尪菳.若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對(duì)照C.該實(shí)驗(yàn)應(yīng)采用稀釋涂布平板法D.用以尿素為唯一氮源且添加了酸堿緩沖劑的培養(yǎng)基來培養(yǎng)該細(xì)菌后不會(huì)使酚紅指示劑變紅
9.下列是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是(　　)A.用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板B.取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1 mL，分別涂布于各組平板上C.將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37 ℃恒溫培養(yǎng)24～48 hD.確定對(duì)照組無菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)
10.關(guān)于微生物培養(yǎng)和數(shù)目統(tǒng)計(jì)的說法，錯(cuò)誤的是（ ） A.因?yàn)橥寥乐懈黝愇⑸锏臄?shù)量不同，所以為獲得不同類型的微生物，要按不同的稀釋倍數(shù)進(jìn)行分離。 B.測(cè)定土壤中細(xì)菌的總量和測(cè)定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選擇的稀釋度范圍相同。 C.不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。 D.每次統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，應(yīng)選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。
11.在涂布有大腸桿菌的培養(yǎng)基上進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，在a、b、c處分別貼浸有不同抗生素(濃度相同)的無菌濾紙片，d處濾紙片浸有無菌水。培養(yǎng)后的結(jié)果如圖。以下判斷錯(cuò)誤的是(　　) A. a處抑菌效果小于b處 B. b處的濾紙片沒有瀝干 C. c處抗生素?zé)o效 D. d為對(duì)照
12.如圖為“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)中樣品稀釋示意圖。請(qǐng)據(jù)圖分析，下列說法錯(cuò)誤的是(　　)
A.③號(hào)試管的稀釋倍數(shù)為103 B.④號(hào)試管中稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)得到的菌落平均數(shù)可能為⑤號(hào)試管的10倍 C.⑤號(hào)試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為1.7×109 D.將涂布器在酒精燈火焰上灼燒冷卻后，再進(jìn)行涂布