專題跟蹤檢測(cè)(十四)1．(2021·合肥模擬)紅樹(shù)莓所含的維生素E高居水果之首，可幫助人體清理血液中的垃圾，排出有害物質(zhì)，從而提高人的身體素質(zhì)?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)在紅樹(shù)莓汁的加工過(guò)程中需要加入果膠酶，其主要作用是__分解果膠，瓦解植物細(xì)胞的細(xì)胞壁及胞間層__，使果汁澄清。(2)利用紅樹(shù)莓果實(shí)經(jīng)過(guò)發(fā)酵獲得紅樹(shù)莓酒的過(guò)程中，在酵母菌細(xì)胞的__細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)__(填場(chǎng)所)中產(chǎn)生乙醇，產(chǎn)生的乙醇與__酸性重鉻酸鉀__試劑反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色，這一反應(yīng)可用于乙醇的檢驗(yàn)。與無(wú)氧條件相比，在有氧條件下，酵母菌繁殖速度__快__。隨著發(fā)酵過(guò)程的進(jìn)行，果酒的顏色逐漸加深，其主要原因是__紅樹(shù)莓果實(shí)中的色素進(jìn)入了發(fā)酵液中__。(3)為探究發(fā)酵溫度對(duì)紅樹(shù)莓果酒發(fā)酵的影響，科研工作者進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，發(fā)酵的最適溫度為_(kāi)_24__℃。(4)科研工作者在釀造紅樹(shù)莓酒的過(guò)程中，發(fā)酵進(jìn)行一段時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)殘?zhí)橇坎辉俳档?，其原因可能是__酒精度數(shù)過(guò)高導(dǎo)致酵母菌死亡(不再分解糖類(lèi)物質(zhì))__；而酒精度數(shù)逐漸下降，其原因可能是__發(fā)酵液中的酒精被分解為其他物質(zhì)__。【解析】　(1)果膠酶的主要作用是分解果膠，瓦解植物細(xì)胞的細(xì)胞壁及胞間層，使果汁澄清。(2)酵母菌通過(guò)無(wú)氧呼吸產(chǎn)生酒精，而無(wú)氧呼吸的場(chǎng)所是細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)；酒精可用酸性重鉻酸鉀溶液鑒定，顏色由橙色變成灰綠色；與無(wú)氧呼吸相比，酵母菌有氧呼吸能產(chǎn)生大量的能量，因此與無(wú)氧條件相比，在有氧條件下，酵母菌繁殖速度快。隨著發(fā)酵過(guò)程的進(jìn)行，果酒的顏色逐漸加深，其主要原因是紅樹(shù)莓果實(shí)中的色素進(jìn)入發(fā)酵液中。(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，發(fā)酵的最適溫度為24 ℃。(4)科研工作者在釀造紅樹(shù)莓酒的過(guò)程中，發(fā)酵進(jìn)行一段時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)殘?zhí)橇坎辉俳档?，其原因可能是酒精度?shù)過(guò)高導(dǎo)致酵母菌死亡(不再分解糖類(lèi)物質(zhì))；而酒精度數(shù)逐漸下降，其原因可能是發(fā)酵液中的酒精被分解為其他物質(zhì)。2．(2021·重慶高三三模)隨著人們生活質(zhì)量的提高，餐飲含油脂廢水的排放量大量增加，合理處置油脂廢水也成為新的課題。已知芽孢桿菌中有多種分解油脂并產(chǎn)酸的菌種，科研人員欲采用下列流程篩選出能高效分解油脂的微生物。菌種取樣→分離培養(yǎng)→菌株的篩選→形態(tài)特征觀察和生理生化反應(yīng)鑒定，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)選取飯店附近排污渠的含油脂廢水為樣本，采樣約0.2 ml，立即裝于試管內(nèi)，此試管使用前需要經(jīng)過(guò)__滅菌__處理。(2)樣品分離培養(yǎng)前，一般需要將菌液進(jìn)行__稀釋__處理，然后吸取0.2 ml菌液涂布到營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，記錄菌落總數(shù)。將分離出的菌株按照菌落__形狀、大小、隆起程度和顏色__(至少答3點(diǎn))等表觀特征初步分類(lèi)。(3)上述步驟篩選的菌株分別接種到含“花生油”的瓊脂培養(yǎng)基中，37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，篩選出油脂降解菌，培養(yǎng)基中“花生油”主要為菌種繁殖提供__碳源和能源__。在該培養(yǎng)基還需加入中性紅染料(中性紅為脂溶性染料，遇酸為紅色，遇堿為黃色)，挑選菌株要挑選顯__紅色__降解圈的菌株，并且選顏色較__深__(填“深”或“淺”)的為宜。(4)實(shí)際操作中，由于油脂易聚集成液滴，常在培養(yǎng)基中加入2～3滴乳化劑使油脂分散均勻，鑒定效果更好，試分析原因__油脂乳化后均勻分散在培養(yǎng)基表面，分解油脂的微生物產(chǎn)生的降解圈更為明顯，便于快速分離和鑒定__。【解析】　(1)微生物培養(yǎng)過(guò)程中需要無(wú)菌操作，防止雜菌污染，所以試管使用前需要經(jīng)過(guò)滅菌處理。(2)菌液一般需要先經(jīng)過(guò)稀釋處理，再進(jìn)行涂布。不同微生物菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色不同，所以可以根據(jù)菌落的特征初步分類(lèi)。(3)花生油的主要成分是脂肪，所以可為菌種提供碳源和能源。培養(yǎng)基中的中性紅染料遇酸變?yōu)榧t色，而脂肪可以被分解為甘油和脂肪酸，使培養(yǎng)基呈酸性，所以可選擇紅色降解圈的菌株，并且顏色較深的脂肪酸含量越高，說(shuō)明油脂降解菌的分解能力越強(qiáng)。(4)油脂乳化后均勻分散在培養(yǎng)基表面，分解油脂的微生物產(chǎn)生的降解圈更為明顯，便于快速分離和鑒定，所以常在培養(yǎng)基中加入2－3滴乳化劑使油脂分散均勻，鑒定效果更好。3．(2021·河北滄州市·高三三模)土壤中的難溶性磷酸鹽積累會(huì)造成土壤板結(jié)，溶磷微生物能將難溶性磷酸鹽轉(zhuǎn)變成植物可吸收利用的磷酸鹽。研究人員將采集到的土壤接種到含有難溶性磷酸鹽及必需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中，經(jīng)過(guò)如圖所示的系列分離純化過(guò)程，最終篩選出了溶磷能力強(qiáng)的拜萊青霉菌。回答下列問(wèn)題：(1)培養(yǎng)基含有的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有無(wú)機(jī)鹽、__水、碳源和氮源__。為篩選到溶磷能力強(qiáng)的拜萊青霉菌，培養(yǎng)基中還應(yīng)加入鏈霉素(抗生素)以避免__其他細(xì)菌__生長(zhǎng)而帶來(lái)的污染。(2)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，振蕩培養(yǎng)有利于物質(zhì)充分利用，也能為目的菌的生長(zhǎng)繁殖提供充足的__氧氣__。培養(yǎng)若干天后，應(yīng)選擇培養(yǎng)瓶中難溶性磷酸鹽含量__最少__的培養(yǎng)液，接入新的培養(yǎng)液中連續(xù)培養(yǎng)，該操作的目的是__對(duì)目的菌進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)(或獲取更多的目的菌)__。(3)將菌液接種到固體培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，以便于__純化目的菌__。獲得的菌種可采用__甘油管藏__的方法進(jìn)行長(zhǎng)期保存。【解析】　(1)微生物的生長(zhǎng)需要培養(yǎng)基提供基本的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，包括水、無(wú)機(jī)鹽、碳源和氮源等。青霉菌屬于真菌，在培養(yǎng)真菌的過(guò)程中，常往培養(yǎng)基中添加抗生素，目的是抑制其他細(xì)菌的生長(zhǎng)，這種培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。(2)振蕩培養(yǎng)能使培養(yǎng)液溶解更多的氧氣，有利于微生物的生長(zhǎng)繁殖，也有利于培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被充分利用。由于拜萊青霉菌能將難溶性磷酸鹽轉(zhuǎn)變?yōu)橹参锟晌绽玫牧姿猁}，因此培養(yǎng)后，培養(yǎng)液中難溶性磷酸鹽含量越低，說(shuō)明目的菌的溶磷能力越強(qiáng)，液體培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)能對(duì)目的菌進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。(3)將菌液接種到固體培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，可獲得由單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而來(lái)的菌落，便于純化目的菌株。菌種長(zhǎng)期保存的方法是甘油管藏。臨時(shí)保存的方法是接種于固體斜面培養(yǎng)基4 ℃冰箱保存。4．(2021·天津高三三模)水污染是全球性的環(huán)境問(wèn)題，微生物降解是水污染治理的有效手段之一。聚乙烯醇(PVA)是存在于化工污水中的一種難以降解的大分子有機(jī)物，PVA分解菌能產(chǎn)生PVA酶分解PVA。PVA與碘作用時(shí)能產(chǎn)生藍(lán)綠色復(fù)合物，當(dāng)PVA被分解時(shí)藍(lán)綠色復(fù)合物消失，形成白色透明斑。(1)要從土壤中篩選出能高效分解PVA的細(xì)菌，應(yīng)采用以__聚乙烯醇(或PVA)__作為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)中還應(yīng)設(shè)置對(duì)照組。將菌液稀釋相同的倍數(shù)，對(duì)照組培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)明顯__多于__選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，從而說(shuō)明選擇培養(yǎng)基具有篩選作用。(2)要測(cè)定土壤稀釋液中微生物的數(shù)目，可在顯微鏡下用__血細(xì)胞計(jì)數(shù)板(血球計(jì)數(shù)板)__直接計(jì)數(shù)。若將100 mL含有PVA分解菌的土壤樣品溶液稀釋104倍后，取0.1 mL稀釋液均勻涂布在選擇培養(yǎng)基表面，測(cè)得菌落數(shù)的平均值為160個(gè)，空白對(duì)照組平板上未出現(xiàn)菌落。則100 mL原菌液中有PVA分解菌__1.6×109__個(gè)，該方法的測(cè)量值與實(shí)際值相比一般會(huì)__偏小__(填“偏大”“偏小”或“相等”)。(3)要鑒定分離出的細(xì)菌是否為PVA分解菌，培養(yǎng)PVA分解菌的培養(yǎng)基中除了加入必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外還需要加入__碘__用于鑒別PVA分解菌。要比較不同菌株降解PVA能力的大小，用含相同PVA濃度的上述培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)不同菌株，一定時(shí)間后，通過(guò)測(cè)定__白色透明斑的大小(或直徑)__來(lái)確定不同菌株降解PVA能力的大小。【解析】　(1)要從土壤中篩選出能高效分解PVA的細(xì)菌，應(yīng)采用以聚乙烯醇(PVA)作為唯一的碳源的選擇培養(yǎng)基，目的是淘汰不能分解聚乙烯醇(PVA)的細(xì)菌。實(shí)驗(yàn)中設(shè)置的對(duì)照組培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因?yàn)閷?duì)照組沒(méi)有淘汰不能分解聚乙烯醇(PVA)的細(xì)菌，從而說(shuō)明選擇培養(yǎng)基具有篩選作用。(2)要測(cè)定土壤稀釋液中微生物的數(shù)目，可在顯微鏡下用血細(xì)胞(血球)計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)。根據(jù)題意，100 ml原菌液中有PVA分解菌的數(shù)量為160÷0.1×104×100＝1.6×109個(gè)。由于該方法得到的菌落可能是兩個(gè)或者多個(gè)細(xì)菌共同產(chǎn)生一個(gè)菌落導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)較實(shí)際菌落數(shù)偏少，所以該方法的測(cè)量值與實(shí)際值相比一般會(huì)偏小。(3)根據(jù)題意可知，鑒定PVA分解菌的原理“PVA與碘作用時(shí)能產(chǎn)生藍(lán)綠色復(fù)合物，當(dāng)PVA被分解時(shí)藍(lán)綠色復(fù)合物消失，形成白色透明斑”可知，要鑒定分離出的細(xì)菌是否為PVA分解菌，培養(yǎng)PVA分解菌的培養(yǎng)基中除了加入必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外還需要加入碘用于鑒別PVA分解菌。從功能上分，該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基。不同菌株降解PVA能力的大小不同，會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生的白色透明斑的大小不同，要比較不同菌株降解PVA能力的大小，用含相同PVA濃度的上述培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)不同菌株，一定時(shí)間后，通過(guò)測(cè)定白色透明斑的大小(或直徑)來(lái)確定不同菌株降解PVA能力的大小。5．(2021·運(yùn)城市新康國(guó)際實(shí)驗(yàn)學(xué)校高三模擬)纖維素是地球上最豐富的可再生碳源物質(zhì)之一，科學(xué)合理地利用纖維素有助于解決能源危機(jī)和環(huán)境污染等重大問(wèn)題。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)分離纖維素分解菌時(shí)，從富含有機(jī)質(zhì)的土壤中取樣，將土壤濾液加入含有纖維素的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行選擇培養(yǎng)，選擇培養(yǎng)的目的是__增加纖維素分解菌的濃度__。如果將選擇培養(yǎng)后的液體培養(yǎng)基離心，人們__能__(填“能”或“不能”)從上清液中獲得纖維素酶。(2)剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不與纖維素降解產(chǎn)物纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩到了幾株有透明降解圈的菌落(見(jiàn)下圖)。圖中降解圈大小與纖維素酶的__量和活性__有關(guān)，圖中降解纖維素能力最強(qiáng)的菌株是__①__(填圖中序號(hào))。(3)將纖維素酶粗提取液裝入透析袋中，置于pH適宜的磷酸緩沖液中進(jìn)行透析處理，可除去其中__分子量較小__的雜質(zhì)。為進(jìn)一步純化分離纖維素酶，可將樣品加入__凝膠色譜柱__中進(jìn)行洗脫、收集。(4)研究人員測(cè)定了不同溫度對(duì)游離酶和固定化酶酶活力的影響，結(jié)果如圖所示。根據(jù)以上數(shù)據(jù)可以看出，在溫度為30 ℃～80 ℃的變化范圍內(nèi)，隨著溫度的升高固定化酶和游離酶的酶活力均呈現(xiàn)出__先增加后降低__的變化趨勢(shì)。該趨勢(shì)是由以下兩個(gè)方面共同作用的結(jié)果：反應(yīng)體系溫度升高時(shí)，底物和酶分子動(dòng)能增大，使反應(yīng)速率__加快__；溫度可改變酶的__空間結(jié)構(gòu)__，其活性會(huì)隨著溫度的升高而降低甚至失活。【解析】　(1)本實(shí)驗(yàn)中選擇培養(yǎng)也可稱為富集培養(yǎng)，目的是增加纖維素分解菌的濃度。纖維素分解菌能夠分解周?chē)h(huán)境中的纖維素，說(shuō)明該酶合成后能夠釋放到周?chē)h(huán)境中，因此將液體培養(yǎng)的目標(biāo)菌離心，人們可以從上清液中獲得纖維素酶。(2)有透明降解圈說(shuō)明纖維素被纖維素酶催化降解，則降解圈大小與纖維素酶的量與活性有關(guān)。降解圈越大，說(shuō)明降解纖維素能力越強(qiáng)，由圖可知，①菌落周?chē)慕到馊ψ畲螅f(shuō)明該菌株降解纖維素能力最強(qiáng)。(3)纖維素酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)，可以使用凝膠色譜法和電泳法對(duì)其進(jìn)行分離和純度鑒定。將纖維素酶粗提取液裝入透析袋中，置于pH適宜的磷酸緩沖液中進(jìn)行透析處理，可除去其中分子量較小的雜質(zhì)。為進(jìn)一步純化分離纖維素酶，可將樣品加入凝膠色譜柱中進(jìn)行洗脫、收集。(4)識(shí)圖分析可知，在溫度為30 ℃～80 ℃的變化范圍內(nèi)，隨著溫度的升高固定化酶和游離酶的酶活力均呈現(xiàn)出先增加后降低的變化趨勢(shì)，原因在于反應(yīng)體系溫度升高時(shí)，底物和酶分子動(dòng)能增大，使反應(yīng)速率加快；由于溫度影響了酶的活性，溫度可改變酶的空間結(jié)構(gòu)，其活性會(huì)隨著溫度的升高而降低甚至失活。6．(2021·寧夏銀川市高三其他模擬)乳糖主要用于乳品工業(yè)，可使低甜度和低溶解度的乳糖轉(zhuǎn)變?yōu)檩^甜的、溶解度較大的單糖。乳糖酶的制備及固定化流程如下圖，請(qǐng)回答：→→→(1)篩選產(chǎn)乳糖酶的微生物L(fēng)時(shí)，宜用乳糖作為培養(yǎng)基的唯一__碳源__，在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落可以將乳糖水解為_(kāi)_葡萄糖__和半乳糖。(2)產(chǎn)乳糖酶微生物L(fēng)的培養(yǎng)過(guò)程中需要將培養(yǎng)瓶放置在搖床上不停振蕩培養(yǎng)，其目的是__有利于微生物L(fēng)與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充分接觸__、__有利于氧氣充分溶解在培養(yǎng)基中__。此培養(yǎng)基中__無(wú)__(填“有”或“無(wú)”)菌落生長(zhǎng)。(3)在相同條件下，帶電荷相同的蛋白質(zhì)在特定的緩沖液中遷移的速度越快，說(shuō)明其分子量越小，根據(jù)這一原理，純化后的乳糖酶可用__電泳__法檢測(cè)其分子量大小。(4)乳糖酶宜采用化學(xué)結(jié)合法進(jìn)行固定化，可通過(guò)檢測(cè)固定化乳糖酶的__(酶)活性(活力)__確定其應(yīng)用價(jià)值，而酵母細(xì)胞固定化宜采用__包埋法__。【解析】　(1)乳糖酶能夠催化乳糖水解為葡萄糖和半乳糖，因此篩選產(chǎn)乳糖酶的微生物L(fēng)時(shí)，宜用乳糖作為培養(yǎng)基中的唯一碳源。(2)培養(yǎng)產(chǎn)乳糖酶微生物L(fēng)時(shí)，需要將培養(yǎng)瓶放置在搖床上不停振蕩培養(yǎng)，這樣有利于微生物L(fēng)與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充分接觸，還有利于氧氣充分溶解在培養(yǎng)基中；在固體培養(yǎng)基上可以生長(zhǎng)出菌落，而在該液體培養(yǎng)基中不會(huì)有菌落生長(zhǎng)。(3)根據(jù)題意分析，在相同條件下，帶電荷相同的蛋白質(zhì)在特定的緩沖液中遷移的速度越快，說(shuō)明其分子量越小，因此純化后的乳糖酶可用電泳法檢測(cè)其分子量大小。(4)乳糖酶宜采用化學(xué)結(jié)合法進(jìn)行固定化，可通過(guò)檢測(cè)固定化乳糖酶的活性確定其應(yīng)用價(jià)值；酵母細(xì)胞體積比較大，不適宜化學(xué)結(jié)合或物理吸附，所以一般采用包埋法固定。7．(2021·四川涼山彝族自治州·高三三模)酵母菌是世界上研究最多的微生物之一，廣泛應(yīng)用于釀造、食品、醫(yī)藥等諸多領(lǐng)域。利用不同的育種手段可以篩選出不同用途的酵母菌。請(qǐng)回答下列相關(guān)問(wèn)題：(1)分離不同應(yīng)用的酵母菌時(shí)，常用稀釋涂布平板法或__平板劃線__法進(jìn)行接種，兩種方法均能在固體培養(yǎng)基上形成由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的子細(xì)胞群體，該群體稱為_(kāi)_(單)菌落__。(2)利用高產(chǎn)果膠酶的酵母菌制備果膠酶的流程圖如下：發(fā)酵液→離心→含酶的發(fā)酵液→透析→粗提物→純化→純酶①透析的目的是__去除小分子雜質(zhì)__；粗提物中包含果膠酶等多種蛋白質(zhì)，請(qǐng)寫(xiě)出一種純化得到果膠酶的方法及其依據(jù)。__凝膠色譜法(分配色譜法)，根據(jù)蛋白質(zhì)的分子大小進(jìn)行純化(電泳法，根據(jù)蛋白質(zhì)之間電荷、分子大小等差異進(jìn)行純化。)__。②利用得到的純果膠酶用于果汁加工，可提高果汁的澄清度，其原因是果膠酶將果膠分解成可溶性的__半乳糖醛酸__。(3)利用高產(chǎn)胡蘿卜素的酵母菌提取胡蘿卜素，萃取胡蘿卜素過(guò)程中宜采用__水浴__加熱以防止溫度過(guò)高。(4)可以通過(guò)酵母細(xì)胞的固定化技術(shù)提高釀造效率，在制備固定化酵母細(xì)胞時(shí)，一般不宜采用化學(xué)結(jié)合法或物理吸附法，原因是__細(xì)胞體積大，難以被吸附或結(jié)合__。【解析】　(1)常用的接種方式有稀釋涂布平板法及平板劃線法，在固體培養(yǎng)基上接種培養(yǎng)后，均能形成由一個(gè)酵母菌繁殖形成的酵母菌菌落。(2)①透析是為了去除小分子雜質(zhì)。分離不同種蛋白質(zhì)可以用凝膠色譜法，根據(jù)蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的不同，將果膠酶與雜蛋白分離。也可用電泳法，根據(jù)蛋白質(zhì)之間電荷、分子大小等差異進(jìn)行純化。②果膠酶是指能夠分解果膠物質(zhì)的多種酶的總稱，如果膠分解酶、果膠酯酶、多聚半乳糖醛酸酶，能將植物組織內(nèi)的果膠分解成半乳糖醛酸。(3)萃取胡蘿卜素時(shí)應(yīng)采用水浴加熱法，防止溫度過(guò)高而導(dǎo)致原料焦糊。(4)固定酵母細(xì)胞時(shí)一般使用包埋法，而不是用物理吸附法的原因是酵母體積較大，易于包埋，且難以用物理方法吸附。8．幽門(mén)螺桿菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化道潰瘍的主要致病因素。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進(jìn)行分離培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)基本步驟如下：配制培養(yǎng)基→滅菌、倒平板→接種→培養(yǎng)→觀察。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)在配制培養(yǎng)基時(shí)，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因?yàn)镠p含有__脲酶__，它能以尿素作為氮源。若有Hp，則菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)紅色環(huán)帶。(2)高壓蒸汽滅菌加熱結(jié)束時(shí)，待高壓鍋或滅菌鍋__壓力與大氣壓相同__時(shí)，開(kāi)啟鍋蓋。(3)接種時(shí)，先將菌液用__無(wú)菌水__稀釋，然后用__移液管__取0.1 mL稀釋液加到培養(yǎng)皿中，再用涂布器涂布到整個(gè)平面上。(4)在培養(yǎng)時(shí)，需將培養(yǎng)皿倒置并放在恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)皿需用記號(hào)筆在__皿底__(填“皿蓋”或“皿底”)做好標(biāo)記。(5)觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)，若實(shí)驗(yàn)操作都正確規(guī)范，但通過(guò)菌落計(jì)數(shù)計(jì)算，稀釋倍數(shù)高的組計(jì)算結(jié)果往往大于稀釋倍數(shù)低的組，導(dǎo)致這種結(jié)果的原因最可能是__稀釋倍數(shù)低的組菌液濃度更大，可能出現(xiàn)多個(gè)細(xì)菌連在一起形成一個(gè)菌落，導(dǎo)致菌落計(jì)數(shù)偏低__。(6)臨床上14C呼氣試驗(yàn)檢測(cè)是一種安全、準(zhǔn)確地檢測(cè)Hp的方法，其基本原理是當(dāng)被檢測(cè)者服用含有14C標(biāo)記的尿素的膠囊后，如被檢測(cè)者的胃內(nèi)存在Hp感染，則可檢測(cè)到被標(biāo)記的__14CO2__。【解析】　(1)由于Hp含有脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會(huì)使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，pH升高，在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑后，指示劑變紅。(2)高壓蒸汽滅菌加熱結(jié)束時(shí)，待高壓鍋或滅菌鍋壓力與大氣壓相同時(shí)，開(kāi)啟鍋蓋。(3)接種時(shí)，先將菌液用無(wú)菌水稀釋，然后用移液管取0.1 mL稀釋液加到培養(yǎng)皿中，再用涂布器涂布到整個(gè)平面上。(4)在培養(yǎng)時(shí)，需將培養(yǎng)皿倒置并放在恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)皿需用記號(hào)筆在皿底做好標(biāo)記。(5)觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)，若實(shí)驗(yàn)操作都正確規(guī)范，但通過(guò)菌落計(jì)數(shù)計(jì)算，稀釋倍數(shù)高的組計(jì)算結(jié)果往往大于稀釋倍數(shù)低的組，原因可能是稀釋倍數(shù)低的組菌液濃度較大，出現(xiàn)多個(gè)細(xì)菌連在一起形成一個(gè)菌落的現(xiàn)象，導(dǎo)致菌落計(jì)數(shù)偏低。(6)臨床上用14C呼氣試驗(yàn)檢測(cè)人體是否感染Hp，其基本原理是Hp能將14C標(biāo)記的尿素分解為NH3和14CO2。

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