專題跟蹤檢測(十五)1．(2021·福建廈門市·廈門雙十中學高三其他模擬)Ti質粒上的T區(qū)即為T－DNA，雖然是在原核生物中產(chǎn)生的，但是當其整合到植物細胞核基因組后，也能進行轉錄和翻譯。下圖為用Ti質粒作為載體進行植物基因工程的部分步驟示意圖。回答下列問題：(1)圖中①②過程需要用到的工具酶是__限制性核酸內(nèi)切酶(或限制酶)、DNA連接酶__。③過程常用的方法是__Ca2＋處理法(或感受態(tài)細胞法或Ca2＋溶液處理法)__。(2)pBR322質粒載體是研究最多、使用最早且應用最廣泛的大腸桿菌質粒載體之一，作為高質量的載體，應具備的條件有__具有復制起點(或具有自我復制能力或能夠自我復制)；具有標記基因；具有一個或多個限制酶的切割位點；對受體細胞無害；分子大小合適便于操作__(答2條)。(3)圖中的“植物基因”是目的基因，常用的擴增技術是__PCR(多聚酶鏈式反應)__，其原理是__DNA雙鏈復制__。將該基因插入到T－DNA的非必需區(qū)域而不是其它區(qū)域的原因是__防止破壞T－DNA的轉移(轉移整合)特性和表達能力(轉移、整合、表達(轉錄和翻譯)__。(4)目的基因進入受體細胞后，維持穩(wěn)定和表達的過程稱為__轉化__。若將圖中質粒和目的基因通過同種限制酶處理后進行連接，形成重組質粒，導入重組質粒到植物細胞后，經(jīng)檢測，部分含有重組質粒的植物細胞中目的基因不能正確表達，其最可能的原因是__同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因與質粒反向連接__。【解析】　(1)識圖分析可知，圖中①過程為構建基因表達載體，需要限制酶和DNA連接酶，③過程是將重組質粒導入土壤桿菌，將目的基因導入微生物細胞通常采用Ca2＋處理法。(2)高質量的質粒，需要有①在宿主細胞中能保存下來并能大量復制，且對受體細胞無害，②有多個限制酶切點，③含有多個復制起始位點，能夠獨立復制，④有一定的標記基因便于篩選等條件。(3)目的基因常用的擴增技術是PCR技術，其原理是DNA雙鏈復制，將基因插入T－DNA的非必需區(qū)域，否則會破壞T－DNA的轉移(轉移整合)特性和表達能力，導致基因在受體細胞內(nèi)無法穩(wěn)定存在并表達。(4)目的基因進入受體細胞后，維持穩(wěn)定和表達的過程稱為轉化。導入重組質粒到植物細胞后，經(jīng)檢測，部分含有重組質粒的植物細胞中目的基因不能正確表達，原因是同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因與質粒反向連接影響了基因的正確表達。2．(2021·湖北襄陽市襄陽五中高三一模)閱讀以下資料，回答(1)～(6)題。資料一：S蛋白是新冠病毒(SARS－CoV－2)感染機體的關鍵組分，也是研制新冠疫苗的關鍵起點。2021年2月25日，由中國工程院院士陳薇領銜研發(fā)的以腺病毒為載體的疫苗獲準上市注冊申請，為我國乃至世界預防新冠疫情又增加了一件利器。下圖為陳薇團隊以缺失E1等基因的人復制缺陷腺病毒(E1基因是腺病毒基因組復制的關鍵基因)為載體的新冠疫苗研制流程示意圖。(1)HEK細胞是一種特殊的人胚胎腎源細胞，在該細胞中，質粒I和質粒II可在相關酶的作用下進行同源重組，形成含S蛋白基因的復制缺陷重組腺病毒。為保證上述重組腺病毒能夠大量復制，HEK細胞應含有__E1__基因及其表達產(chǎn)物。對獲得的重組腺病毒除用PCR檢測S蛋白基因外，還需用__抗原－抗體雜交__的方法檢測S蛋白。(2)與復制型腺病毒相比，利用復制缺陷腺病毒為載體制備成的疫苗的優(yōu)點是__該疫苗不能在人體細胞中復制，因而具有更高的安全性__。資料二：疫苗從研制走向臨床使用，需經(jīng)動物實驗和臨床實驗等多重檢測，以保證其安全性和有效性。陳薇團隊對上述復制缺陷重組腺病毒疫苗的特異性免疫反應及其保護效果進行評價。圖1、2表示不同的接種劑量和接種方式對小鼠免疫的影響，圖3表示接種不同劑量疫苗，14天后接種新冠病毒，72小時后檢測小鼠肺組織的病毒含量。(3)IFNY是一種能增強效應T細胞活力的淋巴因子，在免疫系統(tǒng)組成中，它與抗體均屬于__免疫活性物質__。由圖1、圖2結果可知，該疫苗可誘導小鼠產(chǎn)生明顯的__細胞免疫和體液__免疫。(4)圖3實驗中對照組的處理為__注射等量的不含疫苗的生理鹽水，14天后接種等量新冠病毒__，結果顯示疫苗對感染小鼠有明顯的保護作用。為了達到最大的保護效果，該疫苗最適合的接種方式和劑量為__肌肉注射、高劑量__。(5)有人認為，最近出現(xiàn)的變異新冠病毒有可能使該疫苗失去保護作用。你是否贊同他的觀點？請說明理由。__贊同。理由是：若變異病毒的S蛋白基因發(fā)生突變，表達出的S蛋白與疫苗的S蛋白結構差異過大，會導致人體注射疫苗后產(chǎn)生的抗體或記憶細胞無法識別新病毒，故疫苗失去保護作用。(或答不贊同，理由是：若變異病毒發(fā)生突變后表達出的S蛋白與疫苗的S蛋白結構差異不大，人體注射疫苗后產(chǎn)生的抗體或記憶細胞仍能識別并清除該病毒，疫苗仍有保護作用)__【解析】　(1)由于人為構建了復制缺陷腺病毒，該病毒不能復制是由于缺少了E1，而這種復制缺陷腺病毒要在HEK細胞中進行大量復制，則需要HEK細胞含有病毒復制有關的E1基因及其表達產(chǎn)物。若要檢測S蛋白的產(chǎn)生，需要使用抗原－抗體雜交法。(2)復制缺陷腺病毒缺少E1基因，不能在人體細胞中進行復制，因此該疫苗不能在人體細胞中復制，因而具有更高的安全性。(3)淋巴因子和抗體都屬于免疫系統(tǒng)中的免疫活性物質；圖1顯示注射疫苗后可以使得抗體增加，圖2顯示接種疫苗后產(chǎn)生IFNY的T細胞比例增加，進而可以增強效應T細胞的活力，因此該疫苗可以誘導小鼠產(chǎn)生明顯的體液免疫和細胞免疫。(4)該實驗的自變量為接種的疫苗的劑量，因此空白對照組應該注射等量的不含疫苗的生理鹽水，14天后接種等量新冠病毒；結合圖2和圖3的實驗結果可知，選高劑量注射組能產(chǎn)生更多抗體，免疫效力強，肌肉注射可以產(chǎn)生更多的分泌IFNY的T細胞。因此為了達到最大的保護效果，該疫苗最適合的接種方式是肌肉注射，劑量為高劑量。(5)變異的病毒主要是指遺傳物質改變，若影響疫苗的使用，主要是考慮新產(chǎn)生的病毒還能否被免疫系統(tǒng)識別，因此需要圍繞S蛋白來回答，答案為：贊同。理由是：若變異病毒的S蛋白基因發(fā)生突變，表達出的S蛋白與疫苗的S蛋白結構差異過大，會導致人體注射疫苗后產(chǎn)生的抗體或記憶細胞無法識別新病毒，故疫苗失去保護作用。(或答不贊同。理由是：若變異病毒發(fā)生突變后表達出的S蛋白與疫苗的S蛋白結構差異不大，人體注射疫苗后產(chǎn)生的抗體或記憶細胞仍能識別并清除該病毒，疫苗仍有保護作用)。3．(2021·山西呂梁市·高三三模)P17蛋白是非洲豬瘟病毒(ASFV)主要的編碼蛋白，由P17基因編碼，鑒于此，科研人員利用桿狀病毒表達系統(tǒng)表達重組ASFVP17蛋白并制備單克隆抗體，具體的操作流程為P17重組蛋白的真核表達及鑒定→小鼠免疫P17蛋白→檢測P17抗體→細胞融合及篩選→單克隆抗體腹水的制備，回答下列有關問題：(1)若P17基因序列已知，則可以通過__PCR擴增、DNA合成儀人工合成__(答出2種)的方法獲取，要檢測Р17基因在受體細胞中是否成功表達，在分子水平可用__抗原-抗體雜交__技術鑒定。(2)上述操作流程中“檢測P17抗體”的目的是__獲得產(chǎn)生特異性抗體的雜交細胞__，“細胞融合及篩選”中想獲得__B細胞__和__骨髓瘤細胞__的融合細胞，常用__滅活的病毒、聚乙二醇__(至少答出2種)的方法誘導細胞融合，最終篩選出的細胞是__既能無限增殖，又能產(chǎn)生所需抗體__，單克隆抗體除從腹水中獲取外，還可通過__體外培養(yǎng)__方法獲得。(3)單克隆抗體的優(yōu)點有__特異性強、靈敏度高、可大量制備__(答出2點)。【解析】　(1)若目的基因(P17基因)序列已知，則可通過該序列設計引物，進而通過PCR的技術進行擴增，也可通過DNA合成儀以化學方法人工合成；基因的表達產(chǎn)物通常是蛋白質，故要檢測Р17基因在受體細胞中是否成功表達，在分子水平可用抗原－抗體雜交技術進行鑒定：若出現(xiàn)雜交帶，則證明表達成功。(2)結合單克隆抗體的制備過程可知，上述操作流程中“檢測P17抗體”的目的是篩選能產(chǎn)生特異性抗體的雜交細胞；單克隆抗體的制備中，為獲得B淋巴細胞和骨髓瘤細胞的融合細胞，可用物理方法(如離心、振動、電擊)、化學方法(如聚乙二醇)和滅活的病毒等方法誘導融合；經(jīng)選擇培養(yǎng)基和專一抗體檢驗陽性后，最終篩選出的細胞是既能無限增殖，又能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞；單克隆抗體除從腹水中獲取外，還可通過體外培養(yǎng)的方法從培養(yǎng)液中獲得。(3)單克隆抗體的優(yōu)點是特異性強、靈敏度高，可大量制備。4．(2021·黑龍江大慶市大慶中學高三其他模擬)科研所將菊花的花色基因C導入牡丹葉肉細胞來培育具有新型花色的牡丹，流程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：(1)圖中切割花色基因C和質粒的限制酶應該選擇　PstⅠ和EcoRⅠ　。獲得花色基因C后，可用PCR技術在體外將其擴增，該技術利用的主要是__DNA雙鏈復制__的原理。(2)途中①過程用農(nóng)桿菌轉化時，應選用牡丹__受損傷的__(填“受損傷的”或“完好的”)葉片與含重組質粒的農(nóng)桿菌共同培養(yǎng)，選用這種葉片的理由是__傷口處的細胞會分泌大量的酚類物質__，吸引農(nóng)桿菌移向這些細胞。構建基因表達載體時，需要將花色基因C插入質粒的T－DNA中，其主要原因是__T－DNA可以將花色基因C轉移至受體細胞，并整合到受體細胞的染色體DNA上__。(3)②過程的目的是讓已經(jīng)分化的細胞失去其特有的__結構和功能__而轉變成未分化細胞，③過程主要是將②過程得到的愈傷組織轉接到含有__生長素和細胞分裂素__(激素名稱)的分化培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，誘導出甲。(4)假設某種轉基因作物因為受到病毒感染而減產(chǎn)，若要以該轉基因作物為材料獲得脫毒苗，應選用__芽尖__作為外植體進行組織培養(yǎng)。【解析】　(1)由于SmaⅠ會破壞目的基因，故應該用PstⅠ和EcoRⅠ切割目的基因和載體。PCR的原理是DNA雙鏈復制。(2)①表示將目的基因導入受體細胞，由于牡丹受傷的細胞會釋放大量的酚類物質，吸引農(nóng)桿菌向這些細胞移動，故使用農(nóng)桿菌轉化法將目的基因導入受體細胞時，應該選擇受傷的細胞。T－DNA可以將花色基因C轉移至受體細胞，并整合到受體細胞的染色體DNA上，故構建基因表達載體時，需要將花色基因C插入質粒的T－DNA中。(3)②表示脫分化，是為了讓已經(jīng)分化的細胞失去其特有的結構和功能而變成未分化的狀態(tài)，形成愈傷組織。③表示再分化，需要在含有生長素和細胞分裂素的培養(yǎng)基上進行。(4)由于芽尖幾乎不含病毒，故一般選擇芽尖作為外植體進行組織培養(yǎng)，來獲得脫毒苗。5．(2021·寧夏固原高三模擬)Hela細胞系是人工培養(yǎng)、具有無限增殖能力的永生癌細胞系，在世界各地的相關實驗室中為研究者提供了相同的研究對象?；卮鹣铝袉栴}：(1)Hela細胞源自一位美國婦女的宮頸癌細胞，目前實驗室中為了進一步研究Hela細胞，需進行__傳代__(填“原代”或“傳代”)培養(yǎng)，細胞體外培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質有糖、氨基酸、無機鹽等，通常還需要加入__血清、血漿__等天然成分。在動物細胞培養(yǎng)過程中，需要用胰蛋白酶，而不用胃蛋白酶的原因是__在多數(shù)動物細胞培養(yǎng)液適宜的pH范圍內(nèi)，胃蛋白酶已失去活性__。(2)某小組為研究葡萄糖饑餓對Hela細胞生長的抑制情況，其他營養(yǎng)條件適宜，用不同葡萄糖濃度的培養(yǎng)基培養(yǎng)Hela細胞24 h，實驗結果如表所示：葡萄糖濃度/(mmol·L－1)Hela細胞生長抑制率/%056.161.036.301.525.002.016.44該實驗__需要__(填“需要”或“不需要”)另設對照組。實驗結果表明：葡萄糖濃度與Hela細胞生長抑制率的關系是__葡萄糖濃度越低，Hela細胞生長抑制率越高__。體內(nèi)低濃度葡萄糖可__抑制__癌細胞的增殖，為腫瘤的限食療法提供理論依據(jù)。(3)Hela細胞在生物醫(yī)學領域應用廣泛，例如，它幫助科學家首次實現(xiàn)了人源細胞與小鼠細胞融合。兩個或多個細胞融合形成的單核細胞叫做__雜交細胞__，細胞融合技術的意義是__突破了有性雜交局限，使遠緣雜交成為可能__。(4)科學家從某些無限增殖細胞的細胞質中分離出了無限增殖調控基因(prG)，該基因能激發(fā)動物細胞分裂，這為單克隆抗體的制備提供了更多的思路。除本題描述的一種制備單克隆抗體技術外，請再簡要寫出一種制備單克隆抗體的思路：__通過基因工程向效應B細胞中導入prG(或利用核移植技術將效應B細胞的細胞核移植到去核的無限增殖細胞中)__。【解析】　(1)目前實驗室中為了進一步研究Hela細胞，需進行傳代培養(yǎng)，細胞體外培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質有糖、氨基酸、無機鹽等，通常還需要加入血清、血漿等天然成分。在動物細胞培養(yǎng)過程中，需要用胰蛋白酶，而不用胃蛋白酶的原因是在多數(shù)動物細胞培養(yǎng)液適宜的pH范圍內(nèi)，胃蛋白酶已失去活性。(2)分析表格數(shù)據(jù)，該實驗需要另設對照組，觀察在正常條件下細胞生長情況。實驗結果表明：葡萄糖濃度與Hela細胞生長抑制率的關系是葡萄糖濃度越低，Hela細胞生長抑制率越高。體內(nèi)低濃度葡萄糖可抑制癌細胞的增殖，為腫瘤的限食療法提供理論依據(jù)。(3)兩個或多個細胞融合形成的單核細胞叫作雜交細胞，細胞融合技術的意義是突破了有性雜交局限，使遠緣雜交成為可能。(4)抗體是由效應B細胞合成、分泌的。利用無限增殖調控基因(prG)制備單克隆抗體，可以借助基因工程技術，其思路：通過基因工程向效應B細胞中導入prG；也可以借助核移植技術，其思路：利用核移植技術將效應B細胞的細胞核移植到去核的無限增殖細胞中。6．(2021·云南大理白族自治州高三二模)下面是以小鼠為對象進行的研究工作，請分析回答問題。(1)進行小鼠胚胎工程操作時，首先在光控周期下(光照14 h，黑暗10 h)飼養(yǎng)成年雌鼠，并注射促性腺激素，目的是__促進排卵(或促進超數(shù)排卵)__。該過程中涉及的內(nèi)分泌腺包括__下丘腦、垂體、卵巢__。(2)從雄鼠附睪中取出精子，在一定條件下培養(yǎng)一段時間，目的是__使精子獲能__。精卵共同作用4 h，沖洗后繼續(xù)培養(yǎng)。定時在顯微鏡下觀察胚胎的變化，第5天可以看到胚胎收縮，細胞間隙擴大，接著胚胎內(nèi)部出現(xiàn)裂隙，這是胚胎__囊胚__期開始的標志。(3)如果體外受精后，在雄原核與雌原核融合之前，用微型吸管吸除雄原核，再用細胞松弛素B處理(作用類似于用秋水仙素處理植物細胞)，處理后的受精卵可發(fā)育成小鼠。這種方法在動物新品種選育中的顯著優(yōu)點是__容易獲得純合子并縮短育種時間__。(4)如果將小鼠甲的體細胞核移入小鼠乙的去核卵母細胞中，由重組細胞發(fā)育成小鼠丙，則小鼠丙的基因來源于__小鼠甲(體細胞)的核基因和小鼠乙(卵母細胞)的細胞質基因__。(5)胚胎干細胞體外培養(yǎng)誘導分化可形成大量皮膚干細胞，其原因是__胚胎干細胞具有發(fā)育的全能性__。根據(jù)胚胎干細胞的這種功能特性，當小鼠體內(nèi)的某一類細胞功能出現(xiàn)異?；蛲嘶瘯r，利用胚胎干細胞的治療思路是__通過誘導胚胎干細胞定向分化來及時修補__。【解析】　(1)注射促性腺激素和在光控周期下飼養(yǎng)成年雌鼠的目的是促進排卵。在光控周期下成年雌鼠通過神經(jīng)-體液調節(jié)促進卵子的生成，該過程涉及下丘腦、垂體、卵巢等內(nèi)分泌腺。(2)取出的精子在一定條件下培養(yǎng)是為了使精子獲能；囊胚期開始的標志是胚胎收縮，細胞間隙擴大，胚胎內(nèi)部出現(xiàn)裂隙。(3)題干所述處理類似于單倍體育種，因此，其優(yōu)點是容易獲得純合子并能縮短育種時間。(4)利用核移植方法獲得的動物，其核基因來自提供細胞核的動物，細胞質基因來自提供卵母細胞的動物。(5)胚胎干細胞具有全能性，因此可以通過誘導其定向分化成各種組織和器官，用于器官移植和修復。7．(2021·河南高三模擬)如圖是“三親嬰兒”男嬰的培育過程示意圖，請據(jù)圖回答下列問題：(1)上述“三親嬰兒”的染色體由__母親甲和父親丙__提供，線粒體中的遺傳物質由__捐獻者乙__提供，由此可見，“三親嬰兒”的意義在于可以避免子代__細胞質__遺傳病的發(fā)生。(2)過程④是__早期胚胎培養(yǎng)__，需將受精卵移入__發(fā)育培養(yǎng)液__繼續(xù)培養(yǎng)，體外培養(yǎng)需要滿足的條件：__無菌無毒__、營養(yǎng)、適宜的溫度和pH，并置于　含95%空氣與5%二氧化碳　的混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。(3)過程⑤是__胚胎移植__技術，其實質是__早期胚胎在相同生理條件下空間位置的轉移__。取__囊胚期__的滋養(yǎng)層細胞可以對移植前的胚胎進行性別鑒定，采用SRY－PCR的鑒定方法，在該擴增過程中若消耗引物分子14個，則DNA擴增了__3__次。【解析】　(1)由圖可知，“三親嬰兒”的核染色體由母親甲和父親丙提供，細胞質中線粒體遺傳物質由捐獻者乙提供。由此可見，“三親嬰兒”的意義在于可以避免子代細胞質遺傳病的發(fā)生。(2)過程④早期胚胎培養(yǎng)，需將受精卵移入發(fā)育培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，體外培養(yǎng)的條件：無菌無毒、營養(yǎng)、適宜的溫度和pH，并置于含95%空氣與5%二氧化碳的混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。(3)過程⑤是胚胎移植技術，實質是早期胚胎在相同生理條件下空間位置的轉移。取囊胚期的滋養(yǎng)層細胞可以對移植前的胚胎進行性別鑒定，采用SRY－PCR的鑒定方法，若某雙鏈DNA分子擴增過程中消耗引物分子14個，說明通過DNA復制產(chǎn)生(14＋2)÷2＝8個DNA分子，因此DNA擴增了3次。8．(2021·江西省高三三模)某農(nóng)業(yè)生態(tài)工程示意圖如圖，請回答下列問題：(1)該農(nóng)業(yè)生態(tài)工程體現(xiàn)的生態(tài)工程原理主要是__物質循環(huán)再生原理__。對該工程的經(jīng)濟效益分析，可從系統(tǒng)內(nèi)部的投入和產(chǎn)出、__系統(tǒng)的實際消費__、系統(tǒng)的有效貢獻等三方面進行核算。(2)若要提高該工程的經(jīng)濟效益，可采用農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的__間種__技術在?；显俜N植大豆，也可采用農(nóng)業(yè)生態(tài)工程的__種植業(yè)和畜牧業(yè)合理優(yōu)化__技術，放養(yǎng)適量的雞鴨等動物以調整該工程的產(chǎn)業(yè)結構。(3)某小組應用基因工程方法開展適用于該生態(tài)工程的抗蟲植物改良研究。為提高將重組DNA分子導入受體細胞的效率，除考慮導入方法、篩選條件、防止污染外，還需考慮的主要因素有__重組DNA的質量和濃度、受體細胞的生長狀態(tài)與密度__(答出2點即可)。農(nóng)桿菌介導法是目前植物轉基因的常用方法，該方法的基本過程是農(nóng)桿菌感染植物時，__攜帶目的基因的Ti質粒轉移到受體細胞__，并將其T－DNA片段插入受體細胞的基因組中。欲獲得穩(wěn)定遺傳的抗蟲性強的轉基因植物品種，則轉入的抗蟲基因必須能在受體細胞中__穩(wěn)定和高效地表達__。【解析】　(1)該農(nóng)業(yè)生態(tài)工程體現(xiàn)的生態(tài)工程原理主要是物質循環(huán)再生原理。對該工程的經(jīng)濟效益分析，可從系統(tǒng)內(nèi)部的投入和產(chǎn)出、系統(tǒng)的實際消費、系統(tǒng)的有效貢獻等三方面進行核算。(2)若要提高該工程的經(jīng)濟效益，可采用農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的間種技術在桑基上再種植大豆，也可采用農(nóng)業(yè)生態(tài)工程的種植業(yè)和畜牧業(yè)合理優(yōu)化技術，放養(yǎng)適量的雞鴨等動物以調整該工程的產(chǎn)業(yè)結構。(3)某小組應用基因工程方法開展適用于該生態(tài)工程的抗蟲植物改良研究。重組DNA分子導入受體細胞的效率，主要與導入方法、篩選條件、重組DNA的質量和濃度、受體細胞的生長狀態(tài)與密度、外源DNA污染有關。農(nóng)桿菌介導法的基本過程是農(nóng)桿菌感染植物時，攜帶目的基因的Ti質粒轉移到受體細胞，并將其T－DNA片段插入受體細胞的基因組中。欲獲得穩(wěn)定遺傳的抗蟲性強的轉基因植物品種，則轉入的抗蟲基因必須能在受體細胞中穩(wěn)定和高效地表達。

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