一.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)二.單克隆抗體技術(shù)三.單克隆抗體的應(yīng)用
為什么抗原試紙能準(zhǔn)確檢測(cè)出新冠病毒呢？
向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原
從動(dòng)物血清中分離所需抗體
有什么方法解決這個(gè)問題？
傳統(tǒng)抗體制備方法及缺陷
有什么方法解決傳統(tǒng)抗體制備存在產(chǎn)量低、純度低、特異性差的問題？
在體外培養(yǎng)條件下，一個(gè)B淋巴細(xì)胞是不可能無限增殖的！
1975年，英國科學(xué)家米爾斯坦和德國科學(xué)家科勒設(shè)計(jì)了一個(gè)極富創(chuàng)造性的試驗(yàn)方案：
使______或_______動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成________細(xì)胞的技術(shù)。
形成的 具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的 。
3.原理： .
細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性
突破了 的局限，使 成為可能。
雜交細(xì)胞：具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息
化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)融合法
生物法：滅活病毒誘導(dǎo)法
(1)細(xì)胞融合技術(shù)已經(jīng)成為研究________、_________、______和______________等的重要手段。(2)利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)發(fā)展起來的_________，為________________開辟了新途徑。
用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但并不破壞它們的抗原結(jié)構(gòu)（無核酸）。
病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合
1.“滅活病毒”中滅活的具體含義是什么？
2.滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理是什么？
骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無限增殖
一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體
既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專一抗體
一個(gè)極富創(chuàng)造力的方案：
①用特定抗原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫的原因？
獲得能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞
將骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合
不能產(chǎn)生抗體，但能大量增殖
能產(chǎn)生抗體，但不能大量增殖
1.單克隆抗體制備的過程：
②誘導(dǎo)融合后的細(xì)胞有幾種類型，若僅考慮兩兩細(xì)胞融合呢？
③ 雜交瘤細(xì)胞是如何篩選出來的？
選擇培養(yǎng)基只允許雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖，未融合的親本細(xì)胞和融合了同種核的細(xì)胞不能生存.
④是否所有的雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生所需的抗體？
每一個(gè)孔中盡量只接種一個(gè)雜交瘤細(xì)胞
抗原-抗體雜交技術(shù)原理：抗原和抗體能夠特異性結(jié)合
陽性細(xì)胞（分泌的抗體能與特定抗原結(jié)合）
經(jīng)多次篩選，可獲得足夠數(shù)量能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞
⑤ 如何擴(kuò)大培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體？
從小鼠腹水中提取（體內(nèi)培養(yǎng)）
（能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞）
特異性強(qiáng)靈敏度高可大量制備
培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的方法比較
易于控制培養(yǎng)條件（如無需提供無菌環(huán)境等），操作簡(jiǎn)單，成本較低
可大規(guī)模培養(yǎng)，大量生產(chǎn)
需要人為控制培養(yǎng)條件，成本相對(duì)較高
①細(xì)胞合成 DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基蝶呤阻斷。②人B淋巴細(xì)胞中有這兩 種DN A 的合成途徑，但不能分裂增殖。③鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D 途徑 ，沒 有S途徑，但能不斷分裂增殖。如果D途徑被阻斷，它會(huì)因不能合成DNA 而死。
篩選出雜交瘤細(xì)胞方法?
不能無限增殖，死亡不能無限增殖，死亡能無限增殖，生長(zhǎng)
B淋巴細(xì)胞及同型融合細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞及同型融合細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞
第一次篩選獲得雜交瘤細(xì)胞
在單克隆抗體制備過程中，兩次篩選的目的和方法是不相同的。
抗 體 檢 測(cè)的方法 — —抗原 - 抗體雜交法
一段時(shí)間后，檢測(cè)各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體
將雜交瘤細(xì)胞群稀釋，約每孔1個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)(克隆化培養(yǎng))
單克隆抗體制備過程中兩次篩選的比較
由于小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激，所以經(jīng)選擇培養(yǎng)獲得的雜交瘤細(xì)胞中有能產(chǎn)生其他抗體的細(xì)胞
用特定的選擇培養(yǎng)基篩 選 ：未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì) 死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能 生長(zhǎng)。
篩選出 能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞
用96孔板培養(yǎng)，在每一個(gè)孔中盡量只接種一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，經(jīng)多次篩選得到足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。
比原來診斷方法提前了10d左右，準(zhǔn)確率在90%以上。 具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速特點(diǎn)
1.診斷試劑——最廣泛應(yīng)用
抗人絨毛促性腺激素單克隆抗體
單克隆抗體+同位素（熒光標(biāo)記）
在特定組織中成像的技術(shù)，可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病。
“生物導(dǎo)彈”是免疫導(dǎo)向藥物的形象稱呼，它由單克隆抗體與藥物、酸或放射性同位素配合而成，因帶有單克隆抗體而能自動(dòng)導(dǎo)向，在生物體內(nèi)與特定目標(biāo)細(xì)胞或組織結(jié)合，并由其攜帶的藥物產(chǎn)生治療作用。
ADC（抗體—藥物偶聯(lián)物）
資料2：使用高效的細(xì)胞毒素類藥物進(jìn)行化療可以有效殺傷腫瘤細(xì)胞。但細(xì)胞毒素沒有特異性，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)還會(huì)對(duì)健康細(xì)胞造成傷害，這限制了它在臨床上的應(yīng) 用 ?？贵w一藥物偶聯(lián)物(antibdy-drugcnjugate,ADC) 通過將細(xì)胞毒素與能特異性識(shí)別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。ADC 通常由抗體、接頭和藥物(如細(xì)胞毒素)三部分組成，它的作用機(jī)制如下圖所示。
1.ADC的抗體和藥物各具有什么作用？
抗體主要發(fā)揮靶向運(yùn)輸作用，即通過特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細(xì)胞；藥物發(fā)揮治療效應(yīng)，如殺傷靶細(xì)胞。
2.除了細(xì)胞毒素，還有哪些物質(zhì)理論上可以作為ADC偶聯(lián)的藥物？
①可以用放射性同位素標(biāo)記單克隆抗體進(jìn)行靶向放療；②可以將阻斷腫瘤細(xì)胞的信號(hào)通路的藥物與單克隆抗體結(jié)合來抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)
3.單克隆抗體診斷試劑盒和ADC在臨床應(yīng)用上各具有什么優(yōu)勢(shì)？
①單克隆抗體診斷試劑盒中的單克隆抗體只與特定的抗原反應(yīng)， 因此檢測(cè)的特異性和靈敏度大大提高；②生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)、冷凍保存和復(fù)蘇利用， 有利于控制產(chǎn)品的質(zhì)量和標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)診斷試劑盒；③ADC能夠協(xié)同發(fā)揮抗體特異性識(shí)別的靶向作用和細(xì)胞毒素對(duì)腫瘤細(xì)胞 的殺傷作用，因此它在臨床上具有靶點(diǎn)清楚、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)。
3.用于治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療,如PD-1抗體或PD-L1抗體。
臨床上主要用來治療淋巴瘤的一種單克隆抗體藥物。利妥昔單抗是一種人鼠嵌合型單克隆抗體，能特異性地結(jié)合B細(xì)胞上CD20抗原，啟動(dòng)介導(dǎo)B細(xì)胞溶解的免疫反應(yīng)。
動(dòng)物細(xì)胞 融合 技術(shù) 與單 克隆 抗體
1.動(dòng)物細(xì)胞融合的概念、結(jié)果、原理、意義是什么 2.動(dòng)物細(xì)胞融合常用的方法，3.動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較
1.單克隆抗體制備的研究背景2.單克隆抗體制備
1.診斷試劑2.運(yùn)載藥物3.治療疾病
1.抗體—藥物偶聯(lián)物(ADC)通過將細(xì)胞毒素與單克隆抗體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷，過程如圖所示。下列敘述不正確的是( )
A.抗體進(jìn)入細(xì)胞后激活溶酶體酶，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡B.ADC可通過胞吞方式進(jìn)入腫瘤細(xì)胞C.單克隆抗體攜帶細(xì)胞毒素與腫瘤細(xì)胞特異性結(jié)合D.腫瘤細(xì)胞凋亡是細(xì)胞主動(dòng)死亡的過程，會(huì)產(chǎn)生新的蛋白質(zhì)

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二 動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體

版本： 人教版 (2019)

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