
動物細胞工程—動物細胞培養(yǎng)技術和單克隆抗體
動物細胞是否也可以發(fā)生融合呢?
人工誘導—人-鼠細胞融合
動物細胞融合技術是指使兩個或多個動物細胞融合形成一個細胞的技術。
原理: 細胞膜的流動性
動物細胞融合的方法:PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導法等
動物細胞融合特有滅活病毒誘導法
資料:19世紀30年代,科學家曾在肺結核、天花和麻疹等疾病的病人的病理組織中觀察到多核細胞。
病人體內病毒等誘導多個體細胞融合形成了多核細胞。
PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導法等
細胞核的融合,標志融合完成
應用:成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段,特別是利用雜交瘤技術制造單克隆抗體
意義:突破了有性雜交的局限,使遠緣雜交成為可能
細胞膜的流動性、植物細胞的全能性
用果膠酶和纖維素酶去除細胞壁
用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細胞分散成單個細胞
電融合法、離心法、聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2+-高pH融合法
PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導法
突破了有性雜交的局限,使遠緣雜交成為可能
打破生殖隔離,實現(xiàn)遠緣雜交育種,培育植物新品種
植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較
一種B淋巴細胞(只產生一種特定抗體)
能在體外大量增殖的骨髓瘤細胞
由于發(fā)明了單克隆抗體的制備技術,米爾斯坦和科勒于1984年獲得了諾貝爾生理學或醫(yī)學獎
①未融合的細胞、②多種雜交細胞
抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞(能產生特定抗體的雜交瘤細胞)
用特定的選擇培養(yǎng)基第一次篩選
克隆化培養(yǎng)、抗體檢測第二次篩選(可進行多次)
誘導融合后的細胞有多少種,該如何進行篩選呢?
特定的HAT選擇培養(yǎng)基進行篩選: 未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡,只有融合的雜交瘤細胞才能生長。
由于小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激,所以經第一次篩選獲得的雜交瘤細胞中存在產生其他抗體的細胞。
獲得的雜交瘤細胞一定是所需的嗎?
每一個孔中盡量只接種一個雜交瘤細胞
檢測原理:抗原和抗體能夠特異性結合(分子水平的鑒定) --抗原抗體雜交法。
融合的雜交瘤細胞特點:既能大量繁殖,又能產生專一的抗體。
抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞
從細胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取大量的單克隆抗體
單克隆抗體最主要的優(yōu)點在于它的特異性強,靈敏度高,并可大量制備。
單克隆抗體應用—作為診斷試劑
女性懷孕后會分泌一種糖蛋白一一人絨毛膜促性腺激素(HCG),用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體檢測即抗HCG單克隆抗體(抗原-抗體雜交原理)制備試紙可以測試女性是否懷孕。
此外,還可廣泛用于新冠病毒、乙肝病毒等多種疾病的診斷;利用同位素標記的單克隆抗體,在特定組織中成像,可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病。診斷腫瘤、心血管畸形等。
單克隆抗體應用—作為治療疾病和運載藥物—“生物導彈”
把抗癌細胞的單克隆抗體跟放射性同位素、化學藥物或細胞毒素相結合,如抗體-藥物偶聯(lián)物(ADC)通過將細胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結合對腫瘤細胞選擇性殺傷。
1.關于動物細胞融合的說法錯誤的是( )
A.動物細胞融合后形成的具有原來兩個或多個動物細胞遺傳信息的多核細胞稱為雜交細胞B.動物細胞融合己成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育的重要手段C.常用于誘導動物細胞融合手段有聚乙二醇、滅活的病毒、電激等D.細胞融合技術突破了有性雜交方法的局限,使遠緣雜交成為可能
2.單克隆抗體制備過程中,對骨髓瘤細胞和B淋巴細胞誘導融合后,要用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞。在這種培養(yǎng)基上不能存活、增殖的細胞是( )①B淋巴細胞 ②骨髓瘤細胞 ③B淋巴細胞自身融合細胞 ④骨髓瘤細胞自身融合細胞 ⑤雜交瘤細胞A.①②③④B.①③⑤C.②④D.①③
3.某科研人員將病毒A注射到小鼠體內,制備針對病毒A的單克隆抗體。下列有關敘述正確的是( )A.小鼠體內產生的漿細胞與病毒A結合并產生抗體B.只有同種小鼠的漿細胞與骨髓瘤細胞能夠融合C.與骨髓瘤細胞相比,雜交瘤細胞的高爾基體發(fā)達D.雜交瘤細胞的遺傳物質與漿細胞相同
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