高考生物一輪復(fù)習(xí)重難點(diǎn)專項(xiàng) 專題54 微生物的篩選和計(jì)數(shù)-試卷下載-教習(xí)網(wǎng)

?高考一輪生物復(fù)習(xí)策略
1、落實(shí)考點(diǎn)。
一輪復(fù)習(xí)時要在熟讀課本、系統(tǒng)掌握基礎(chǔ)知識、基本概念和基本原理后，要找出重點(diǎn)和疑點(diǎn)；通過結(jié)合復(fù)習(xí)資料，篩選出難點(diǎn)和考點(diǎn)，有針對地重點(diǎn)復(fù)習(xí)。這就需要在掌握重點(diǎn)知識的同時，要善于進(jìn)行知識遷移和運(yùn)用，提高分析歸納的能力。
2、注重理論聯(lián)系實(shí)際，高三生物的考試并不僅僅是考概念，學(xué)會知識的遷移非常重要，并要靈活運(yùn)用課本上的知識。
不過特別強(qiáng)調(diào)了從圖表、圖形提取信息的能力。歷年高考試題，圖表題都占有比較大的比例。那些圖表題雖不是教材中的原圖，但它源于教材而又高于教材，是對教材內(nèi)容和圖表的變換、深化、拓展，使之成了考查學(xué)生讀圖能力、綜合分析能力、圖文轉(zhuǎn)換能力的有效途徑。
3、一輪復(fù)習(xí)基礎(chǔ)知識的同時，還要重點(diǎn)“攻堅(jiān)”，突出對重點(diǎn)和難點(diǎn)知識的理解和掌握。
這部分知識通常都是學(xué)生難于理解的內(nèi)容，做題時容易出錯的地方。分析近幾年的高考生物試題，重點(diǎn)其實(shí)就是可拉開距離的重要知識點(diǎn)?！?br /> 4、學(xué)而不思則罔，思而不學(xué)則殆。
這一點(diǎn)對高三生物一輪復(fù)習(xí)很重要。尤其是對于錯題。錯題整理不是把錯題抄一遍。也不是所有的錯題都需要整理。

專題54 微生物的篩選和計(jì)數(shù)

1．土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)
(1)分離原理：土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕?，這種物質(zhì)在把尿素分解成無機(jī)物的過程中起到催化作用。
(2)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目一般用稀釋涂布平板法。

①統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時，培養(yǎng)基表面生長的1個菌落，來源于樣品稀釋液中1個活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300_的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。
②從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)的計(jì)算方法是(平均菌落數(shù)÷涂布的稀釋液體積)×稀釋倍數(shù)_。
③利用稀釋涂布平板法成功統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)南♂尪萠。
特別提醒　用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，這是因?yàn)楫?dāng)兩個或多個細(xì)胞在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。
(3)實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣→樣品的稀釋→微生物的培養(yǎng)與觀察→細(xì)菌的計(jì)數(shù)。
知識鏈接：用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法

①結(jié)構(gòu)：常用的是1 mm×1 mm×0.1 mm方格的計(jì)數(shù)板(如圖)。每個計(jì)數(shù)板上有兩個計(jì)數(shù)室，每個計(jì)數(shù)室上刻有9個大方格，其中只有中間的大方格為計(jì)數(shù)室，大方格的長和寬各為1 mm，深度為0.1 mm，其容積為0.1 mm3；大方格內(nèi)分為25中格，每一中格又分為16小格，即大方格是由400個小方格組成。
②操作：將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室上加蓋專用的蓋玻片，用吸管吸取稀釋后的菌液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行緩緩滲入，充滿計(jì)數(shù)室。
③計(jì)數(shù)：在顯微鏡下計(jì)數(shù)4～5個中方格內(nèi)的菌體數(shù)，求出每個小方格所含有的細(xì)菌的平均數(shù)，按照以下公式計(jì)算：每毫升原液含有的菌數(shù)＝每小格平均細(xì)菌數(shù)×400×104×原液被稀釋倍數(shù)。
2．分解纖維素的微生物的分離
(1)纖維素酶
①組成：纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。
②作用

(2)纖維素分解菌的篩選
①原理

②篩選方法：剛果紅染色法，即通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。
③培養(yǎng)基：以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。
④實(shí)驗(yàn)流程

解題技巧
兩種微生物篩選方法的比較
項(xiàng)目
土壤中分解尿素的
細(xì)菌的分離
分解纖維素的
微生物的分離
方法
使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)
利用富含纖維素的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)
原理
土壤中不能分解尿素的微生物因缺乏脲酶而不能正常生長，能夠分解尿素的微生物能利用尿素為氮源正常生長，從而起到選擇作用
因?yàn)榕囵B(yǎng)基中含有豐富的纖維素，因此能夠分解纖維素的微生物具有更多的生存機(jī)會而大量繁殖
特有
代表
過程
CO(NH2)2＋H2OCO2＋2NH3
纖維素
纖維二糖葡萄糖

一、單選題
1．用106倍稀釋液以稀釋涂布平板法（涂布量為0.1ml）測定某土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，作如下操作，正確的是（　　）
A．涂布1個平板，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)是230，計(jì)算出菌落總數(shù)為2.3×109個/ml
B．涂布2個平板，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)是303和287，計(jì)算出菌落總數(shù)為2.95×109個/ml
C．涂布3個平板，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)是21、212和256，計(jì)算出菌落總數(shù)為1.63×109個/ml
D．涂布3個平板，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)是210、240和250，計(jì)算出菌落總數(shù)為2.33×109個/ml
【答案】D
【分析】
稀釋涂布平板計(jì)數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計(jì)的計(jì)數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細(xì)胞。計(jì)數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使成單個細(xì)胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細(xì)胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個細(xì)胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，即可計(jì)算出樣品中的含菌數(shù)。
【詳解】
在進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)時，一定要至少涂布3個平板，作為重復(fù)組，減少誤差，且每個平板上菌落數(shù)量為30-300個才算有效，計(jì)算方法：每克樣品中的菌落數(shù)=平板上菌落數(shù)的平均值÷體積×稀釋倍數(shù)。
故選D。
2．測定土壤中細(xì)菌數(shù)量一般用104、105、106倍的稀釋液進(jìn)行培養(yǎng)，而測定真菌的數(shù)量一般用102、103、104倍稀釋，其原因是（　?。?br /> A．細(xì)菌在土壤中比真菌多
B．細(xì)菌易稀釋、真菌不易稀釋
C．細(xì)菌個體小、真菌個體大
D．真菌在土壤中比細(xì)菌多
【答案】A
【分析】
土壤中的微生物大多是細(xì)菌，真菌的數(shù)量要比細(xì)菌少。樣品的稀釋度越高，在平板上生成的菌落數(shù)目就越少。在實(shí)際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在30-300之間，適于平板計(jì)數(shù)。
【詳解】
在稀釋涂布平板法的實(shí)際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在30-300之間，適于平板計(jì)數(shù)。土壤中的微生物中真菌的數(shù)量要比細(xì)菌少，所以測定的稀釋倍數(shù)也小，A正確。
故選A。
3．如圖為“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)中樣品稀釋示意圖。據(jù)圖分析正確的是（　?。?br />
A．3號試管的稀釋倍數(shù)為103倍
B．4號試管中稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)得到的菌落平均數(shù)可為5號試管的10倍
C．5號試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為1．7×1010個
D．該實(shí)驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)得到的結(jié)果往往會比實(shí)際活菌數(shù)目要高
【答案】B
【分析】
從土壤中分離尿素分解菌的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株。圖中5支試管為梯度稀釋，最后經(jīng)稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后進(jìn)行計(jì)數(shù)。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)在30~300的平板，取其平均值，進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)公式為（C÷V）×M。（C為平均菌落數(shù)，V為涂布液體積，M為稀釋倍數(shù)）
【詳解】
A、據(jù)圖可知，3號試管的稀釋倍數(shù)為104倍，A錯誤；
B、4號試管中稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，由于4號稀釋倍數(shù)比5號的低10倍，如果稀釋倍數(shù)適當(dāng)，得到的菌落平均數(shù)可能是5號的10倍，B正確；
C、5號試管進(jìn)行稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為（168+175+167）÷3÷0.1×106=1.7×109個，C錯誤；
D、稀釋涂布平板得到的菌落可能存在兩個或多個細(xì)菌細(xì)胞長成一個菌落，使該實(shí)驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)得到的結(jié)果往往會比實(shí)際活菌數(shù)目要低，D錯誤。
故選B。
4．限量補(bǔ)充培養(yǎng)法可用于營養(yǎng)缺陷型菌株的檢出（如圖）。將誘變后的菌株接種在基本培養(yǎng)基上，野生型菌株迅速形成較大菌落，營養(yǎng)缺陷型菌株生長緩慢，不出現(xiàn)菌落或形成微小菌落?；九囵B(yǎng)基中補(bǔ)充精氨酸后，營養(yǎng)缺陷型菌株快速生長。下列敘述正確的是（　　）

A．用紫外線照射可誘導(dǎo)野生型菌株發(fā)生定向突變
B．精氨酸缺陷型菌株缺乏吸收利用精氨酸的能力
C．③步驟加入精氨酸后抑制了野生型菌株的生長
D．選擇圖乙中菌落B分離精氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株
【答案】D
【分析】
結(jié)合題圖分析，A表示野生型菌株形成的菌落，B表示營養(yǎng)缺陷型菌株形成的菌落。
【詳解】
A、用紫外線照射誘導(dǎo)野生型菌株發(fā)生的變異是基因突變，是不定向的，A錯誤；
B、精氨酸缺陷型菌株缺乏將其他物質(zhì)轉(zhuǎn)化為精氨酸的能力，B錯誤；
C、圖中A表示野生型菌株形成的菌落，將圖乙與圖甲對比可知，③步驟加入精氨酸后促進(jìn)了野生型菌株的生長，C錯誤；
D、對比甲和乙可知，③步驟加入精氨酸后才出現(xiàn)的B是精氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株，所以可以選擇B分離獲得精氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株，D正確。
故選D。
5．油煙污染由多種有害物質(zhì)組成，不易降解。某同學(xué)從長期受到金龍魚油產(chǎn)生的油煙污染的土壤中分離出油煙降解菌，其篩選分離過程如下圖所示，下列敘述錯誤的是（　　）

A．圖中①～③的過程為梯度稀釋
B．在④中加入金龍魚油，其作用是為微生物提供碳源和能源
C．要判斷④是否起到選擇作用，應(yīng)設(shè)計(jì)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作對照
D．分離得到的降解菌可采用甘油管藏的方法長期保存
【答案】A
【分析】
1、培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。
2、圖中①②③不斷經(jīng)過選擇培養(yǎng)，提高目的菌株的濃度。
【詳解】
A、圖中①～③的過程稱為選擇培養(yǎng)，A錯誤；
B、在④中的固體培養(yǎng)基加入金龍魚油，其作用是為微生物提供碳源和能源，B正確；
C、若要判斷④固體培養(yǎng)基是否起到了選擇的作用，應(yīng)設(shè)計(jì)一個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（完全培養(yǎng)基）作對照，C正確；
D、長期保存菌種應(yīng)該采用甘油管藏法，D正確。
故選A。
6．欲想探究1g土壤中有多少能分解尿素的細(xì)菌，需要用科學(xué)的方法測定微生物數(shù)量。下列相關(guān)敘述正確的是（）
A．利用以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基，可從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌
B．平板劃線法能將單個微生物分散到培養(yǎng)基上，可用來測定樣品中的活菌數(shù)
C．樣品的稀釋度直接影響平板上的菌落數(shù)目，因此稀釋度越大越好
D．利用顯微鏡進(jìn)行直接計(jì)數(shù)，可快速直觀地測定樣品中的活菌數(shù)
【答案】A
【分析】
選擇培養(yǎng)基是用來將某種或某類微生物從混雜的微生物群體中分離出來的培養(yǎng)基。設(shè)計(jì)選擇培養(yǎng)基時，主要考慮某些微生物的特殊營養(yǎng)需求或它們對某些化學(xué)物質(zhì)具有的抗性。例如，教材中所述的以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，能選擇出可以合成脲酶、分解尿素的微生物。下表列出了幾種選擇培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)。
顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是利用顯微鏡、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板等工具對純培養(yǎng)懸浮液直接計(jì)數(shù)來檢測樣本中的細(xì)胞數(shù)目。該方法能直觀、快速地檢測出單細(xì)胞狀態(tài)下的微生物或絲狀微生物所產(chǎn)生的孢子的數(shù)目，但是不能區(qū)分死細(xì)胞和活細(xì)胞，不適合細(xì)胞密度低的樣品。
釋涂布平板法常常需要先將樣品進(jìn)行一系列的稀釋，然后吸取適量稀釋樣品涂布在平板上，在稀釋度適宜的情況下一個菌落是由一個活細(xì)胞繁殖形成的，從而通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)來推算活菌數(shù)。該方法能靈敏地檢測出樣品中的活菌數(shù)，但實(shí)驗(yàn)過程手續(xù)繁、耗時長、影響因素較多。
顯微鏡直接計(jì)數(shù)法由于不能區(qū)分死菌和活菌，因此計(jì)數(shù)結(jié)果往往比實(shí)際活菌數(shù)偏高。為避免把死菌計(jì)數(shù)在內(nèi)，可用臺盼藍(lán)染色: 被染成藍(lán)色的為死菌，反之為活菌。稀釋涂布平板法測定活菌數(shù)目的時候，由于相鄰兩個或多個細(xì)胞連在一起，可能形成一個菌落，因此測定值比實(shí)際值小。
【詳解】
A、以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基，可從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌，A正確；
B、平板劃線法能將單個微生物分散到培養(yǎng)基上，但是不可以用來測定樣品中的活菌數(shù)，稀釋涂布平板法可以計(jì)數(shù)，B錯誤；
C、樣品的稀釋度太大，會導(dǎo)致微生物數(shù)量太少，一般要求稀釋后平板上的菌落數(shù)在30 到300之間比較合適，C錯誤；
D、利用顯微鏡進(jìn)行直接計(jì)數(shù)，可快速直觀地測定樣品中的活菌數(shù)和死菌數(shù)，D錯誤。
故選A。
7．研究者從熱泉中篩選出耐高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如圖所示。相關(guān)說法錯誤的是（）

A．①過程需要用無菌水對嗜熱菌菌液進(jìn)行稀釋
B．②過程中用涂布器在選擇培養(yǎng)基上連續(xù)劃線
C．接種后的培養(yǎng)皿倒置放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
D．所獲菌株還需要在高溫下對酶活性進(jìn)行測定
【答案】B
【分析】
1、據(jù)圖分析：①過程是梯度稀釋，②過程是稀釋涂布平板法接種，目的是篩選單菌落。
2、采用的接種方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法；常用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌、灼燒滅菌和干熱滅菌。
【詳解】
A、①過程是梯度稀釋，為避免雜菌污染，該過程需要用無菌水對嗜熱菌菌液進(jìn)行稀釋，A正確；
B、進(jìn)行平板劃線法操作時，需要用接種環(huán)進(jìn)行劃線；涂布器適用于稀釋涂布平板法操作，B錯誤；
C、在培養(yǎng)時，需將接種后的培養(yǎng)皿倒置并放在恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)皿需用記號筆在皿底做好標(biāo)記，C正確；
D、本操作目的是選出能高效生產(chǎn)高溫淀粉酶的嗜熱菌，故所獲菌株還需要在高溫下對酶活性進(jìn)行測定，D正確。
故選B。
8．下列關(guān)于微生物培養(yǎng)和計(jì)數(shù)的敘述，不正確的是（）
A．接種操作中，充分稀釋和連續(xù)劃線的目的都是為了獲得單菌落
B．一種培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件不能符合全部微生物的生長需求
C．利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)微生物前需要對菌液進(jìn)行適當(dāng)稀釋
D．利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)能逐一對細(xì)胞進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，比平板計(jì)數(shù)更精確
【答案】D
【分析】
培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細(xì)菌時需將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧微生物時則需要提供無氧的條件。
【詳解】
A、接種操作中，充分稀釋和連續(xù)劃線的目的都是為了獲得單菌落，A正確；
B、不同微生物的營養(yǎng)需求不一定相同，故一種培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件不能符合全部微生物的生長需求，B正確；
C、利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)微生物前需要對菌液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，便于計(jì)數(shù)單個微生物，C正確；
D、顯微直接計(jì)數(shù)不能區(qū)分死菌和活菌，所以其精確度不會比平板計(jì)數(shù)法高，D錯誤。
故選D。
9．分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)操作有誤的是（）
A．經(jīng)選擇培養(yǎng)后將樣品即可涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上
B．選擇培養(yǎng)這一步可省略，但得到的纖維素分解菌會較少
C．可通過定時測定葡萄糖產(chǎn)量的變化來衡量纖維素分解菌培養(yǎng)液中的纖維素酶的產(chǎn)量
D．對照組可用等量的纖維素分解菌培養(yǎng)液涂布到完全培養(yǎng)基上
【答案】A
【分析】
分離分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣→選擇培養(yǎng)（此步是否需要，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定）→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上→挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。
【詳解】
A、經(jīng)選擇培養(yǎng)后，再經(jīng)適度梯度稀釋，才能將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上，A錯誤；
B、選擇培養(yǎng)即富集培養(yǎng)可省略，但培養(yǎng)分離的纖維素分解菌可能會少，B正確；
C、纖維素酶的測定方法一般是采用對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量的測定，C正確；
D、實(shí)驗(yàn)組和對照組遵循單一變量原則，對照組可用等量的纖維素分解菌培養(yǎng)液涂布到不含纖維素的培養(yǎng)基上，實(shí)驗(yàn)組可用等量的纖維素分解菌培養(yǎng)液涂布到纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基上，通過設(shè)置對照能證明經(jīng)“濃縮”培養(yǎng)的確得到了欲分離的微生物，D正確。
故選A。
10．從土壤中篩選纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，正確的是（）
A．土壤取樣→梯度稀釋→稀釋涂布平板→挑選菌落
B．土壤取樣→選擇培養(yǎng)→稀釋涂布平板→挑選菌落
C．土壤取樣→梯度稀釋→選擇培養(yǎng)→挑選菌落
D．土壤取樣→梯度稀釋→稀釋涂布平板→選擇培養(yǎng)→挑選菌落
【答案】B
【分析】
從土壤中分離纖維素分解菌的一般步驟是：土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→涂布培養(yǎng)和篩選菌株．篩選纖維素分解菌需要用以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，纖維素分解菌可以用剛果紅染液進(jìn)行鑒別，在培養(yǎng)基中加入剛果紅染液，在其菌落周圍會出現(xiàn)透明圈。
【詳解】
從從土壤中分離纖維素分解菌的一般步驟是：土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→涂布培養(yǎng)和篩選菌株。
故選B。
11．為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上接種纖維素降解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是（）

A．圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，說明接種前菌液稀釋度太低
B．圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落
C．該實(shí)驗(yàn)結(jié)果因單菌落分布不均，不能達(dá)到菌種純化的目的
D．菌落周圍的纖維素被降解后，可被剛果紅染成紅色
【答案】B
【分析】
分析平板結(jié)果可知，采用的接種方法為平板劃線法，且劃線順序是Ⅰ區(qū)、Ⅱ區(qū)、Ⅲ區(qū)，可以看到Ⅲ區(qū)中出現(xiàn)了單菌落。
【詳解】
A、圖中采用的接種方法為平板劃線法，在劃線的開始，微生物連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后形成單菌落，Ⅰ區(qū)、Ⅱ區(qū)沒有出現(xiàn)單菌落，說明細(xì)菌數(shù)量太多，但不能說明接種前菌液稀釋度太低，A錯誤；
B、Ⅰ區(qū)、Ⅱ區(qū)沒有出現(xiàn)單菌落，說明細(xì)菌數(shù)量太多，故應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，B正確；
C、培養(yǎng)基中已經(jīng)出現(xiàn)單菌落，說明達(dá)到了菌種純化的目的，C錯誤；
D、剛果紅是一種染料，可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，纖維素被降解后，紅色復(fù)合物無法形成，培養(yǎng)基上出現(xiàn)透明圈， D錯誤。
故選B。
12．紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)是在涂有細(xì)菌的瓊脂平板培養(yǎng)基上按照一定要求貼浸有不同種類抗生素的紙片，培養(yǎng)一段時間后測量抑菌圈大小，從而得岀受試菌株藥物敏感性的結(jié)論。某次實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖，下列有關(guān)敘述正確的是（　　）

A．接種細(xì)菌時應(yīng)選用稀釋涂布平板法
B．未出現(xiàn)抑菌圈說明細(xì)菌在接觸抗生素后發(fā)生了基因突變
C．抑菌圈越小，說明細(xì)菌對該種抗生素越敏感
D．不同抗生素在培養(yǎng)基中的擴(kuò)散速率不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果
【答案】A
【分析】
由題圖信息分析可知，不同的抑菌藥物的抑菌圈直徑不同，是因?yàn)槭芩幬镌诃傊袛U(kuò)散速度的影響，抑菌圈的大小可以反映測試菌對藥物的敏感程度。抑菌圈越大，說明該菌對此藥敏感性越大，反之越小，若無抑菌圈，則說明該菌對此藥具有耐藥性。透明圈直徑大小與藥物濃度、細(xì)菌濃度有直接關(guān)系。
【詳解】
A、圖中需要比較不同種類抗生素的紙片周圍的抑菌圈，則要求培養(yǎng)基的菌落分布比較均勻，故在圖示培養(yǎng)基上的接種方法為稀釋涂布平板法，A正確；
B、基因突變是在接觸抗生素之前產(chǎn)生的，而不是細(xì)菌在接觸抗生素后發(fā)生的，B錯誤；
C、抑菌圈的大小可以反映測試菌對藥物的敏感程度，由此推測形成的抑菌圈越小，說明細(xì)菌對該種抗生素抗性越強(qiáng)，對抗生素越不敏感，C錯誤；
D、在平板上擴(kuò)散速度慢的抗生素，形成的透明圈可能會比實(shí)際結(jié)果偏小，因此，不同抗生素在平板上的擴(kuò)散速度不同會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響，D錯誤。
故選A。
13．下列關(guān)于剛果紅染色法的說法中，正確的是（）
A．纖維素分解菌菌落周圍出現(xiàn)剛果紅
B．倒平板時就加入剛果紅，可在培養(yǎng)皿中先加入CR溶液后再加入培養(yǎng)基
C．倒平板時就加入剛果紅，長期培養(yǎng)有可能被其他微生物分解形成透明圈
D．先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)，不需用氯化鈉溶液洗去浮色
【答案】C
【分析】
剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理：剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅-纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣，我們就可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。
【詳解】
A、纖維素分解菌菌落周圍出現(xiàn)透明圈，A錯誤；
B、倒平板時就加入剛果紅，可在培養(yǎng)皿中先加入10mg/mLCR溶液，滅菌后按照每200mL培養(yǎng)基加入1ml的比例加入CR溶液，B錯誤；
C、倒平板時就加入剛果紅，長期培養(yǎng)剛果紅有可能被其他微生物分解形成透明圈，C正確；
D、先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)，需用氯化鈉溶液洗去浮色，若在細(xì)菌菌落形成前倒平板時加入剛果紅，則不需要用氯化鈉溶液洗去浮色，D錯誤。
故選C。
14．顯微鏡直接計(jì)數(shù)是測定微生物數(shù)量的常用方法之一，欲檢測某培養(yǎng)液中纖維素分解菌的數(shù)量，某同學(xué)將其稀釋100倍，在顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)，下圖是計(jì)數(shù)某一小方格時的活菌分布情況。下列相關(guān)敘述錯誤的是（）

A．稀釋培養(yǎng)液時，使用無菌水，可以避免雜菌的干擾
B．制作裝片時，先將蓋玻片放在計(jì)數(shù)室上，再用吸管吸取稀釋后的培養(yǎng)液滴于其邊緣，讓培養(yǎng)液自行滲入
C．為排除死菌的干擾，計(jì)數(shù)時最好用剛果紅染色劑進(jìn)行染色處理
D．若計(jì)數(shù)室容積為0.1mm3，則1mL培養(yǎng)液中纖維素分解菌為3.2×109個
【答案】C
【分析】
分析題圖：計(jì)數(shù)時，應(yīng)該將方格內(nèi)的纖維素分解菌計(jì)數(shù)在內(nèi)，對于邊界線上的纖維素分解菌應(yīng)該計(jì)數(shù)相鄰兩邊及其夾角中的個體，則圖中纖維素分解菌數(shù)量為8個。
【詳解】
A、稀釋培養(yǎng)液時，使用無菌水，可以避免雜菌的干擾，A正確；
B、制作裝片時，先將蓋玻片放在計(jì)數(shù)室上，再用吸管吸取稀釋后的培養(yǎng)液滴于其邊緣，讓培養(yǎng)液自行滲入，多余培養(yǎng)液滲入（凹）槽內(nèi)，B正確；
C、為排除死菌的干擾，可利用活細(xì)胞的細(xì)胞膜具有選擇透過性的原理，計(jì)數(shù)時用臺盼藍(lán)染色法來區(qū)分死菌和活菌，C錯誤；
D、若計(jì)數(shù)室容積為0.1mm3，由以上分析可知，每個小方格平均有8個酵母菌，那1mL培養(yǎng)液中酵母細(xì)胞個數(shù)=平均每個小方格的酵母菌數(shù)×400×104×稀釋倍數(shù)=8×400×104×100=3.2×109個，D正確。
故選C。
15．研究人員從土壤中篩選得到酵母菌纖維素酶高產(chǎn)菌株，并對其降解纖維素的條件進(jìn)行了研究。據(jù)圖分析正確的是（　　）

A．篩選該高產(chǎn)菌株需要在纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)
B．探究最適溫度時應(yīng)盡可能將發(fā)酵液的pH控制在12左右
C．該酵母菌高產(chǎn)菌株產(chǎn)生纖維素酶的最適溫度是35 ℃
D．利用該高產(chǎn)菌株降解纖維素時需嚴(yán)格保持厭氧環(huán)境
【答案】A
【分析】
分析圖1：隨著pH的升高，纖維素酶活性逐漸增高，pH=9為其最適pH，超過9，其活性下降；分析圖2：隨著溫度的升高，纖維素酶活性逐漸增高，但圖中不能看出其最適溫度。
【詳解】
A、要篩酵母菌纖維素酶高產(chǎn)菌株應(yīng)在纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)，A正確；
B、探究該酶的最適溫度時，pH為無關(guān)變量，應(yīng)控制在最適pH，即將發(fā)酵液的pH控制在9左右，B錯誤；
C、由于圖中隨著溫度的升高，纖維素酶活性逐漸增高，還沒有到達(dá)頂點(diǎn)，故35℃不一定是其最適溫度，C錯誤；
D、酵母菌屬于兼性厭氧型生物，既能進(jìn)行有氧呼吸，也能進(jìn)行無氧呼吸，故利用該高產(chǎn)菌株降解纖維素時不需嚴(yán)格保持厭氧環(huán)境，D錯誤。
故選A。
16．幽門螺桿菌（Hp）感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進(jìn)行分離培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)基本步驟如下：請選擇下列敘述錯誤的一項(xiàng)（　?。?br />
A．在倒平板后和培養(yǎng)時，需將培養(yǎng)皿倒置
B．在配制培養(yǎng)基時，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因?yàn)镠p含有脲酶，它能以尿素作為氮源；若有Hp，則菌落變黑
C．臨床上用14C呼氣試驗(yàn)檢測人體是否感染Hp，其基本原理是Hp能將14C標(biāo)記的尿素分解為氨和14CO2
D．步驟X表示接種，在無菌條件下操作時，先將菌液稀釋，然后將菌液涂布到培養(yǎng)基平面上，菌液稀釋的目的是為了獲得單菌落
【答案】B
【分析】
幽門螺桿菌含有脲酶，能分解尿素為菌體提供氮源，因此在配制培養(yǎng)基時要加入尿素；加入酚紅指示劑的目的是檢驗(yàn)是否有Hp存在，若有Hp存在會分解尿素，培養(yǎng)基pH會升高，酚紅指示劑將變紅；用14C呼氣試驗(yàn)檢測人體是否感染Hp，其基本原理是Hp能將14C標(biāo)記的尿素分解為NH3和14CO2，據(jù)此分析。
【詳解】
A、在倒平板后，平板冷凝皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。在培養(yǎng)時，也需將培養(yǎng)皿倒置并放在恒溫培養(yǎng)箱中，若不倒置培養(yǎng)，將導(dǎo)致無法形成單菌落，A正確；
B、在配制培養(yǎng)基時，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因?yàn)镠p含有脲酶，它能以尿素作為氮源；若有Hp，則會產(chǎn)生脲酶，將尿素分解為氨，pH升高，遇酚紅指示劑變紅色，B錯誤；
C、臨床上用14C呼氣試驗(yàn)檢測人體是否感染Hp，其基本原理是幽門螺桿菌含有脲酶，能分解尿素為菌體提供氮源，故Hp能將14C標(biāo)記的尿素分解為NH3和14CO2，C正確；
D、步驟X表示在培養(yǎng)基上接種Hp，在無菌條件下操作時，先將菌液稀釋，然后將菌液涂布到培養(yǎng)基平面上，菌液稀釋的目的是為了獲得單菌落，以便分離到單一菌種，D正確。
故選B。
17．某科研人員欲從被石油污染的土壤中分離獲得能降解石油成分“多環(huán)芳烴菲”的菌株X，為消除石油污染提供微生物資源。下列敘述錯誤的是（　?。?br />
A．若上圖中A~C以“多環(huán)芳烴菲”為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，可提高降解菌的濃度
B．本實(shí)驗(yàn)用到的固體培養(yǎng)基在接種前是不透明的，周圍有透明圈的菌落即為目的菌落
C．在接種前，可將滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時間，目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格
D．可用平板劃線法或稀釋涂布平板法對分離出的菌種進(jìn)行純化并計(jì)數(shù)
【答案】D
【分析】
分析題圖：圖示表示科研人員從被石油污染的土壤中分離獲得能降解多環(huán)芳烴菲菌株X的主要步驟。其中步驟A→B的培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液中加入多環(huán)芳烴菲作為唯一碳源，目的是篩選出菌株X；該過程還需將錐形瓶放在搖床上振蕩，目的有兩個，一方面使菌株與培養(yǎng)液充分接觸，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率；另一方面能增加培養(yǎng)液中的溶氧量。
【詳解】
A、步驟A～C應(yīng)為選擇培養(yǎng)，分離獲得能降解石油成分“多環(huán)芳烴菲”的菌株X，培養(yǎng)液中加入多環(huán)芳烴菲作為唯一碳源，，可提高降解菌的濃度，A正確；
B、固體培養(yǎng)基接種前是不透明的，原因是培養(yǎng)基中含“多環(huán)芳烴菲”，當(dāng)“多環(huán)芳烴菲”被降解后，培養(yǎng)基會變透明，所以其中有透明圈菌落即為目的菌落，B正確；
C、在接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時間，目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，若滅菌后的空白平板培養(yǎng)一段時間后沒有菌落生長，說明培養(yǎng)基平板滅菌合格，C正確；
D、平板劃線法不能對微生物計(jì)數(shù)，D錯誤。
故選D。
18．為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是（）

A．倒平板后需間歇晃動，以保證表面平整
B．該實(shí)驗(yàn)結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的
C．圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑選單菌落
D．菌落周圍的纖維素被降解后，可被剛果紅染成紅色
【答案】C
【分析】
微生物常見的接種的方法：
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在劃線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。
【詳解】
A、倒平板時需左三圈，右三圈的輕輕晃動，以保證表面平整，A錯誤；
B、該實(shí)驗(yàn)的Ⅲ區(qū)已經(jīng)出現(xiàn)由單個細(xì)菌繁殖而形成的菌落，因此已經(jīng)達(dá)到菌種純化的目的，B錯誤；
C、據(jù)圖分析可知，圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的菌落連在一起，細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，C正確；
D、剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，纖維素分解菌產(chǎn)生的纖維素酶可以水解纖維素而使菌落周圍出現(xiàn)透明圈，D錯誤。
故選C。
19．下圖表示從土壤中分離能降解酚類化合物對羥基苯甲酸的微生物的實(shí)驗(yàn)過程。下列與該實(shí)驗(yàn)相關(guān)的敘述中不正確的是（）

A．實(shí)驗(yàn)中所用的培養(yǎng)基①②③④均屬于選擇培養(yǎng)基
B．圖中Ⅰ、Ⅱ過程實(shí)現(xiàn)了對目標(biāo)微生物的稀釋
C．統(tǒng)計(jì)⑤處培養(yǎng)基中的菌落數(shù)并不一定代表接種到④上的活菌數(shù)
D．在⑤處培養(yǎng)基上形成菌落的微生物同化作用類型為異養(yǎng)型
【答案】B
【分析】
選擇培養(yǎng)基可用于篩選具有特定代謝特點(diǎn)的微生物，從土壤中篩選出能降解對羥基苯甲酸的微生物，需要對羥基苯甲酸應(yīng)為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。根據(jù)所學(xué)知識，結(jié)合圖示可知，該實(shí)驗(yàn)全過程包括篩選→擴(kuò)大培養(yǎng)→純化→鑒定。
【詳解】
A、從混合物中分離某種微生物要用選擇培養(yǎng)基，需要在培養(yǎng)基中加入特定的物質(zhì)，如羥基苯甲酸，在該培養(yǎng)基中所需要的微生物能大量繁殖，實(shí)驗(yàn)中所用的培養(yǎng)基①②③④均屬于選擇培養(yǎng)基，目的是篩選能降解酚類化合物對羥基苯甲酸的微生物，A正確；
B、圖中Ⅰ、Ⅱ過程的目的是增大降解對羥基苯甲酸的微生物的比例，B錯誤；
C、稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目的原理，當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活細(xì)菌。由于當(dāng)兩個或多個菌體連在一起生長時，培養(yǎng)基上統(tǒng)計(jì)到的是一個菌落，所以統(tǒng)計(jì)⑤處培養(yǎng)基中的菌落數(shù)并不一定代表接種到④上的活菌數(shù)，C正確；
D、在⑤處培養(yǎng)基上形成菌落的微生物同化作用類型為異養(yǎng)型，原因是微生物所利用的唯一碳源是對羥基苯甲酸是有機(jī)物，D正確。
故選B。
20．下列關(guān)于分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)、分解纖維素的微生物的分離的敘述，不正確的是（）
A．纖維素酶包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，均能催化纖維素分解成葡萄糖
B．分解尿素的細(xì)菌能合成脲酶將尿素分解為氨和CO2
C．尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，農(nóng)作物不能直接吸收利用
D．采用稀釋涂布平板法進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，其結(jié)果可能會偏小
【答案】A
【分析】
1.篩選目的微生物時應(yīng)該使用只有目的微生物能夠生存，而其他微生物不能生存的選擇培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指通過培養(yǎng)混合的微生物，僅得到或篩選出所需要的微生物，其他不需要的種類在這種培養(yǎng)基上是不能生存的。
2.纖維素酶是一種復(fù)合酶，包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。但剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，并不和水解后的產(chǎn)物發(fā)生這種反應(yīng)。
【詳解】
A、纖維素酶包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，其中C1酶和CX酶能使纖維素分解成纖維二糖，葡萄糖苷酶能將纖維二糖分解成葡萄糖，A錯誤；
B、分解尿素的細(xì)菌能合成脲酶，在脲酶的催化下將尿素分解為氨和CO2，被農(nóng)作物利用，B正確；
C、尿素是一種重要的氮肥，農(nóng)作物不能將其直接吸收利用，而是通過土壤中的細(xì)菌將其分解為氨和CO2后才能被農(nóng)作物利用，C正確；
D、采用稀釋涂布平板法進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，有的菌落有可能是由多個細(xì)菌形成的，所以其結(jié)果可能會偏小，D正確。
故選A。
21．解磷菌是土壤中的一類功能微生物，包括細(xì)菌、真菌和放線菌。篩選出土壤中的高效解磷菌并制成生物菌劑，可以提高難溶性磷的利用率。下表為“分離出土壤中具有解磷功能的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)”的培養(yǎng)基配方，下列說法正確的是（）
物質(zhì)
葡萄糖
(NH4)2SO4
NaCl
KCl
CaCO3
磷酸三鈣
瓊脂
質(zhì)量/g
10
0.5
3
0.3
5
20
15
A．培養(yǎng)基中的瓊脂除凝固作用外還可作為解磷菌的碳源
B．該培養(yǎng)基是以磷酸三鈣為唯一磷源的選擇培養(yǎng)基
C．用平板劃線法純化解磷菌可以計(jì)數(shù)其活菌的數(shù)量
D．可根據(jù)培養(yǎng)基中透明圈的大小確定菌株的解磷能力
【答案】B
【分析】
微生物常見的接種的方法：（1）平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種、劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。（2）稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。
【詳解】
A、固體培養(yǎng)基中的瓊脂的作用是凝固，一般不會被微生物所利用，A錯誤；
B、該培養(yǎng)基是以磷酸三鈣為唯一磷源的選擇培養(yǎng)基，B正確；
C、用稀釋涂布平板法純化解磷菌可以計(jì)數(shù)其活菌的數(shù)量，C錯誤；
D、可根據(jù)透明圈直徑（D）與菌落直徑（d）的比值（D/d）代表微生物解磷能力大小，D錯誤。
故選B。
二、多選題
22．科學(xué)家將營養(yǎng)缺陷型菌株A、B在缺乏A、B所需的某些特定營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，結(jié)果如下圖。下列敘述正確的是（　?。?br />
A．各組實(shí)驗(yàn)所用的培養(yǎng)基均需滅菌處理
B．菌株A、B混合后能在上述培養(yǎng)基上生長
C．U型管實(shí)驗(yàn)證明菌株A、B釋放的代謝產(chǎn)物形成了互補(bǔ)
D．推測菌株A、B通過接觸發(fā)生了遺傳物質(zhì)重新組合
【答案】ABD
【分析】
菌株A、B單獨(dú)培養(yǎng)都不能生長，用U型管也不能生長，說明菌株A、B釋放的代謝產(chǎn)物沒有形成互補(bǔ)；但混合培養(yǎng)長成了菌落，可能是菌株A、B通過接觸發(fā)生了遺傳物質(zhì)重新組合。
【詳解】
A、微生物培養(yǎng)需要給培養(yǎng)基滅菌，A正確；
B、如圖可知菌株A、B混合后能在.上述培養(yǎng)基上長成菌落，B正確；
C、代謝產(chǎn)物可以通過濾板，但在U型管不能生長，說明菌株A、B釋放的代謝產(chǎn)物沒有形成互補(bǔ)，C錯誤；
D、混合培養(yǎng)長成了菌落，但在U型管不能生長，說明可能是菌株A、B通過接觸發(fā)生了遺傳物質(zhì)重新組合，D正確。
故選ABD。
三、綜合題
23．塑料袋造成的“白色污染”早已成為地球公害，塑料袋的自然分解需要20-1000年不等。2008年7月3日加拿大媒體報(bào)道：16歲的高中生丹尼爾-伯德從土壤中找到了一類假單胞桿菌，能將聚乙烯塑料的自然降解過程縮短至3個月，而且分解產(chǎn)物只有水和二氧化碳。伯德也因此被譽(yù)為“塑料袋的克星”。以下是伯德尋找到聚乙烯降解菌的大致過程。請回答：

（l）根據(jù)你的生活經(jīng)驗(yàn)推測，伯德這項(xiàng)研究的“土壤樣品”最可能取自于_____________。
（2）圖中“…”表示對土壤懸浮液進(jìn)行一系列的____________________，目的是使聚集在一起的微生物分散成單個細(xì)胞，從而能在Ⅰ號培養(yǎng)基表面形成單個_____________。
（3）Ⅰ號培養(yǎng)基屬于______培養(yǎng)基，其作用是使目的菌能“脫穎而出”。如圖采用的接種方法為____________。使用Ⅱ號培養(yǎng)基的目的是使目的菌數(shù)目增多，培養(yǎng)基中必須包含水、無機(jī)鹽、___________等基本營養(yǎng)成分，從物理性質(zhì)來看，Ⅱ號培養(yǎng)基中不能添加_______________。
（4）將1mL培養(yǎng)液稀釋一定倍數(shù)，在3個平板上用涂布法分別接種0．1mL稀釋液，經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37，經(jīng)計(jì)算得出1mL培養(yǎng)液的活菌數(shù)為3．8×104個，則稀釋倍數(shù)為________。
【答案】垃圾場梯度稀釋菌落選擇稀釋涂布平板法碳源和氮源凝固劑或瓊脂 100
【分析】
微生物常見的接種的方法：
（1）平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。
（2）稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。
【詳解】
（1）由題干信息分析可知，塑料袋造成的“白色污染”早已成為地球公害，根據(jù)生活經(jīng)驗(yàn)推測，伯德這項(xiàng)研究的“土壤樣品”最可能取自于垃圾場（含有大量的塑料）。
（2）圖中“…”表示對土壤懸浮液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，目的是使聚集在一起的微生物分散成單個細(xì)胞，從而能在Ⅰ號培養(yǎng)基表面形成單個菌落。
（3）本實(shí)驗(yàn)要篩選出聚乙烯降解菌，由圖觀察可知，Ⅰ號培養(yǎng)基是選擇培養(yǎng)基，目的是篩選出目的菌株。圖中采用的接種方法為稀釋涂布平板法。使用Ⅱ號培養(yǎng)基的目的是使目的菌數(shù)目增多，培養(yǎng)基中必須包含水、無機(jī)鹽、碳源、氮源等基本營養(yǎng)成分，從物理性質(zhì)來看，Ⅱ號培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，其中不能添加凝固劑或瓊脂。
（4）根據(jù)稀釋涂布平板法的計(jì)算公式可知，（39+38+37）÷3÷0.1×稀釋倍數(shù)=3.8×104，因此稀釋倍數(shù)=100。
【點(diǎn)睛】
本題以篩選、分離聚乙烯降解菌為背景，考查了微生物實(shí)驗(yàn)中的無菌技術(shù)要求、接種方法和培養(yǎng)基的種類和功能等知識，意在考查學(xué)生識記所學(xué)知識要點(diǎn)，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系，形成知識網(wǎng)絡(luò)的能力，同時獲取題干信息準(zhǔn)確答題。
24．分解尿素的細(xì)菌廣泛存在于農(nóng)田等土壤中，某生物實(shí)驗(yàn)小組嘗試對分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離與計(jì)數(shù)，請回答下列問題：
（1）分解尿素的細(xì)菌含有的分解尿素的酶是_____________，為篩選出能分解尿素的細(xì)菌，配制培養(yǎng)基時應(yīng)以_____作為唯一氮源，這種允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基稱為______培養(yǎng)基。
（2）本實(shí)驗(yàn)用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)目的接種微生物的方法是_________。此種方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目_________。這是因?yàn)開____________。此外，分離純化菌種常用的另外一種接種方法是_____________。
（3）該小組對分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時，在接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時間，這樣做的目的是______________。將 1 mL 樣液稀釋 104 倍，在 3 個平板上分別涂布 0．1 mL 稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目，每隔一個“時間間隔”統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，最后選取_________作為結(jié)果。如果 3 個平板的菌落數(shù)分別為 48、52 和 53，據(jù)此可得出每毫升樣液中活菌數(shù)為_____。
【答案】脲酶尿素選擇稀釋涂布平板法低當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落平板劃線法檢驗(yàn)平板滅菌是否徹底菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄 5.1×106個
【分析】
分解尿素的細(xì)菌的分離原理：在培養(yǎng)基中以尿素作為唯一的氮源，只有能分解尿素的微生物（能產(chǎn)生脲酶的微生物）才能利用其氮源，在其上生長。其他微生物不能分解尿素，不能利用氮源無法生長。由于細(xì)菌分解在尿素的過程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，PH升高，所以可以用檢測pH的變化的方法來判斷尿素是否被分解，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨，PH升高，指示劑變紅。
【詳解】
（1）分解尿素的微生物含有脲酶；培養(yǎng)基的成分一般包括水、無機(jī)鹽、碳源、氮源，篩選出能分解尿素的細(xì)菌，在培養(yǎng)基中以尿素作為唯一的氮源，只有能分解尿素的微生物（能產(chǎn)生脲酶的微生物）才能利用其氮源，在其上生長，其他微生物不能分解尿素，不能利用氮源被抑制生長，這種培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。
（2）接種微生物的方法有兩種：平板劃線法和稀釋涂布平板法?？梢杂脕碛脕斫y(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)目的是稀釋涂布平板法，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，原因是當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。
（3）該小組在接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時間，用于檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格；每隔一個“時間間隔”統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，最后選菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，根據(jù)題干提供數(shù)據(jù)，可得出毎毫升樣液中分解尿素的微生物活菌數(shù)=（48+52+53）÷3÷0.1×10000=5.1×106個。
【點(diǎn)睛】
本題考查了微生物的分離和培養(yǎng)的有關(guān)知識，要求考生掌握利用培養(yǎng)基對微生物進(jìn)行選擇的方法和原理，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題。
25．PCB是一種對人體有害的有機(jī)物，某科技小組欲從受PCB污染的土填中分離出能分解PCB的細(xì)菌，請回答問題：
（1）要從受PCB污染的土壤中分離出能分解PCB的細(xì)菌，應(yīng)配制以PCB作為唯一的碳源的__________（選填“選擇”或“鑒別”）培養(yǎng)基；配制培養(yǎng)基時用到的玻璃器皿常用_____________（填儀器名稱）進(jìn)行滅菌。
（2）分離前可通過選擇培養(yǎng)以____________________________。
（3）用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)PCB分解菌的濃度時，同時進(jìn)行空白培養(yǎng)基的培養(yǎng)，這樣做的目的是檢測所用培養(yǎng)基____________________。若實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)空白培養(yǎng)基上生長有3個菌落，為準(zhǔn)確測定樣液中PCB分解菌的濃度，則需要_________________________。
（4）在純化土境中的PCB分解菌時，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成一片，最可能的原因是______________________________，怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象？_________________________。
【答案】選擇干熱滅菌箱增加PCB分解菌的濃度滅菌是否徹底（或：是否被雜菌污染）重新配制培養(yǎng)基進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 菌液濃度過高（或：菌液稀釋倍數(shù)太?。? 對菌液進(jìn)行梯度稀釋（或：加大菌液稀釋倍數(shù)）
【分析】
自然界中目的菌株的篩選的依據(jù)是根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。選擇培養(yǎng)基是根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率。
【詳解】
（1）分析題意可知，要從土壤中篩選出能分解PCB的細(xì)菌，應(yīng)采用以PCB作為唯一的碳源的選擇培養(yǎng)基；實(shí)驗(yàn)中的玻璃器皿一般采用干熱滅菌法進(jìn)行滅菌，使用的儀器是干熱滅菌箱。
（2）分離前可通過選擇培養(yǎng)增加土壤中PCB分解菌的濃度，目的是確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物。
（3）用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)PCB分解菌的濃度時，為了檢測所用培養(yǎng)基滅菌是否徹底，需要培養(yǎng)空白培養(yǎng)基作為對照。若實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)空白培養(yǎng)基上生長有3個菌落，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底，為準(zhǔn)確測定樣液中PCB分解菌的濃度，則需要重新配制培養(yǎng)基進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
（4）若PCB分解菌的菌落在培養(yǎng)基上連成一片，說明菌液濃度過高，稀釋倍數(shù)太小，應(yīng)該對菌液進(jìn)行梯度稀釋。
【點(diǎn)睛】
答題關(guān)鍵在于掌握微生物的分離與培養(yǎng)等有關(guān)知識，理解實(shí)驗(yàn)步驟及目的。
26．牛、羊等反芻動物具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活著多種微生物，其中許多微生物能分解纖維素?？蒲腥藛T按照如圖所示的流程分離瘤胃中的纖維素分解菌，實(shí)驗(yàn)中需要甲、乙兩種培養(yǎng)基。

（注：①②③表示相應(yīng)操作）
（1）從①開始分離篩選纖維素分解菌，甲培養(yǎng)基中除含有水、無機(jī)鹽外還應(yīng)有______、______成分，將瘤胃液先接種到培養(yǎng)基甲中進(jìn)行培養(yǎng)，其目的是______。
（2）培養(yǎng)基乙與甲相比還需多添加的成分是______。在培養(yǎng)基表面均加入一層無菌的石蠟，其作用是______。
（3）剛果紅是一種染料，可與纖維素等多糖形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈。將剛果紅加入培養(yǎng)基乙中，③應(yīng)挑取______的菌落進(jìn)行接種，多次篩選獲得高效分解纖維素的菌株。
（4）隨著對纖維素水解研究的不斷深入，利用纖維廢料發(fā)酵產(chǎn)生燃料酒精已取得很大成功，這對維護(hù)良好的生態(tài)環(huán)境有何積極作用？________________________
【答案】氮源纖維素篩選出纖維素分解菌并富集培養(yǎng) 瓊脂瘤胃中的厭氧微生物不能在有氧環(huán)境中生存、繁殖，用石蠟密封創(chuàng)設(shè)無氧環(huán)境透明圈直徑與菌落直徑之比大解決能源短缺問題、減少環(huán)境污染
【分析】
牛、羊等反芻動物具有特殊的瘤胃，在瘤胃中生活著多種厭氧微生物，其中許多微生物能分解纖維素。在篩選和分離降解纖維素的微生物時，確保能夠分離得到目的微生物，一般先將樣液進(jìn)行選擇培養(yǎng)，以增大樣液中目的微生物的數(shù)量。然后用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)，分離得到單個菌落。
剛果紅是一種染色劑，可與纖維素等多糖形成紅色復(fù)合物。如果培養(yǎng)基中唯一的碳源纖維素被降解了，那么菌落周邊就會出現(xiàn)沒有紅色的透明圈。且透明圈越大，說明微生物降解纖維素的能力越強(qiáng)。
【詳解】
（1）從①開始分離篩選纖維素分解菌，甲培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，目的是增大樣液中降解纖維素的微生物的數(shù)量，篩選出纖維素分解菌并富集培養(yǎng)，其營養(yǎng)成分中除含有水、無機(jī)鹽外還應(yīng)有纖維素唯一碳源、氮源。
（2）培養(yǎng)基乙為固體培養(yǎng)基，與甲相比還需多添加的成分是瓊脂。在培養(yǎng)基表面均加入一層無菌的石蠟，其作用是隔絕空氣，制造嚴(yán)格的無氧環(huán)境，因?yàn)榱鑫钢械奈⑸餅閰捬跷⑸铩?br /> （3）剛果紅是一種染料，可與纖維素等多糖形成紅色復(fù)合物，如果纖維素被分解了，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈。透明圈越大代表降解能力越強(qiáng)，所以將剛果紅加入培養(yǎng)基乙中，③應(yīng)挑透明圈大的菌落進(jìn)行接種，多次篩選獲得高效分解纖維素的菌株。
（4）利用纖維廢料發(fā)酵產(chǎn)生燃料酒精，對維護(hù)良好的生態(tài)環(huán)境有重要作用，例如減少環(huán)境污染，解決能源短缺的問題等。
【點(diǎn)睛】
本題考查篩選分離降解纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)。重點(diǎn)是理解使用液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基的目的。
27．纖維素是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)，對于人類食物來源和能源開發(fā)有重要意義。請分析回答以下問題。
（1）地球上的纖維素40%-60%能被纖維素分解菌分解，原因是纖維素分解菌能產(chǎn)生纖維素酶，纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包含C1酶、Cx酶和_____酶。
（2）選擇纖維素分解菌時，在以_____為唯一碳源的培養(yǎng)基中進(jìn)行選擇，在鑒別纖維素分解菌時，應(yīng)該添加_____作指示劑，可以通過_____選出高效分解纖維素的菌株。
（3）在對纖維素分解菌計(jì)數(shù)時，通常選擇菌落數(shù)為_____的平板計(jì)數(shù)，結(jié)果往往比實(shí)際值偏小，原因是_____。
（4）已知纖維素會被纖維素酶分解為葡萄糖，為檢測纖維素酶的活性，可以用酶的反應(yīng)速率來表示，即單位時間內(nèi)_____。若要將這些酶固定，一般適合采用的方法有_____。
【答案】葡萄糖苷酶纖維素剛果紅透明圈大?。ɑ蛱睢熬渲睆脚c透明圈直徑之比”） 30-300 當(dāng)兩個或多個菌落連在一起，平板上觀察到的只是單個菌落葡萄糖的生產(chǎn)量或纖維素的減少量物理吸附法和化學(xué)結(jié)合法
【分析】
纖維素的單體是葡萄糖，纖維素酶能夠?qū)⒗w維素水解為葡萄糖，纖維素酶是一種復(fù)合酶，包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶；纖維素分解菌可以用剛果紅染液進(jìn)行鑒別，能夠產(chǎn)生透明圈的菌落就是纖維素分解菌。
【詳解】
（1）纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包含C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。
（2）選擇纖維素分解菌時，在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基中進(jìn)行選擇，在鑒別纖維素分解菌時，應(yīng)該添加剛果紅作指示劑，可以通過透明圈大小選出高效分解纖維素的菌株，菌落周圍的降解圈最大，說明降解纖維素能力最強(qiáng)。
（3）在對纖維素分解菌計(jì)數(shù)時，通常選擇菌落數(shù)為30-300的平板計(jì)數(shù)，由于當(dāng)兩個或多個菌落連在一起時，平板上觀察到的只是單個菌落，因此結(jié)果往往比實(shí)際值偏小。
（4）纖維素酶的測定方法一般是采用對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量的測定，因此為檢測纖維素酶的活性，可以用用單位時間內(nèi)葡萄糖的生產(chǎn)量或纖維素的減少量來表示酶的反應(yīng)速率。若要將這些酶固定，一般適合采用的方法有物理吸附法和化學(xué)結(jié)合法。
【點(diǎn)睛】
本題主要考查纖維素分解菌的相關(guān)知識，意在強(qiáng)化學(xué)生對纖維素分解菌的相關(guān)知識點(diǎn)的識記與理解。
28．利用農(nóng)作物秸稈通過纖維素分解菌發(fā)酵來獲取生產(chǎn)酒精的原料，是獲取清潔再生能源的有效途徑。研究者從牛的瘤胃中篩選出纖維素分解菌，其篩選過程如下圖所示。剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素分解菌分解后，復(fù)合物無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以這些菌為中心的透明圈?；卮鹣铝袉栴}：

（1）從牛的瘤胃中篩選纖維素分解菌的原因是____________。
（2）培養(yǎng)基的配方中一般都含有____________，培養(yǎng)基通常采用____________滅菌。圖中所示培養(yǎng)基是以____________為唯一碳源的培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基稱為____________。Ⅰ號培養(yǎng)基中加入剛果紅的目的是________________________________________________。
（3）Ⅰ號培養(yǎng)基中所采用的接種方法稱作____________，操作中對接種工具的滅菌操作是____________。從Ⅰ號培養(yǎng)基中____________的菌落上挑取菌種通過連續(xù)劃線的操作接種到Ⅱ號培養(yǎng)基，連續(xù)劃線的目的是________________________________________________。
【答案】牛的瘤胃中含有較多的纖維素分解菌水、無機(jī)鹽、碳源、氮源高壓蒸汽（濕熱）纖維素選擇培養(yǎng)基鑒別有纖維素分解菌存在稀釋涂布平板法先浸在盛有酒精的燒杯里，再在酒精燈上灼燒透明圈大的將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面
【分析】
1、微生物常見的接種的方法：（1）平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。
（2）稀釋涂布平板法:將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。
2、培養(yǎng)基的種類
分類標(biāo)準(zhǔn)
培養(yǎng)基類型
配制特點(diǎn)
主要應(yīng)用
物理性質(zhì)
固體培養(yǎng)基
加入瓊脂較多
菌種分離、鑒定、計(jì)數(shù)
半固體培養(yǎng)基
加入瓊脂較少
菌種保存
液體培養(yǎng)基
不加入瓊脂
工業(yè)生產(chǎn)，連續(xù)培養(yǎng)
化學(xué)組成
合成培養(yǎng)基
由已知成分配制而成，培養(yǎng)基成分明確
菌種分類、鑒定
天然培養(yǎng)基
由天然成分配制而成，培養(yǎng)基成分不明確
工業(yè)生產(chǎn)，降低成本
目的用途

鑒別培養(yǎng)基
添加某種指示劑或化學(xué)藥劑
菌種的鑒別
選擇培養(yǎng)基
添加(或缺少)某種化學(xué)成分
菌種的分離
【詳解】
（1）從牛的瘤胃中篩選纖維素分解菌的原因是，牛以農(nóng)作物的秸稈為食，它的瘤胃中含有較多的纖維素分解菌。（2）培養(yǎng)基的配方中一般都含有水、無機(jī)鹽、碳源、氮源等，同時還需要滿足微生物生長對特殊營養(yǎng)物質(zhì)、酸堿度以及氧氣的要求。獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的污染，培養(yǎng)基通常采用高壓蒸汽（濕熱）滅菌。實(shí)驗(yàn)的目的是篩選纖維素分解菌所以培養(yǎng)基是以纖維素為唯一碳源，這種培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。在以纖維素為唯一碳源的Ⅰ號培養(yǎng)基中加入剛果紅，觀察是否有透明圈的產(chǎn)生，可用來鑒定纖維素分解菌的有無。
（3）Ⅰ號培養(yǎng)基中所采用的接種方法稱作稀釋涂布平板法，在操作中對接種工具的滅菌操作是先浸在盛有酒精的燒杯里，再在酒精燈上灼燒；培養(yǎng)基中透明圈越大說明細(xì)菌分解纖維素的能力越強(qiáng)，所以從Ⅰ號培養(yǎng)基中的菌落上挑取透明圈大的菌種通過連續(xù)劃線的操作接種到Ⅱ號培養(yǎng)基，連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。
【點(diǎn)睛】
本題著重考查了微生物的選擇培養(yǎng)、培養(yǎng)基的成分和制備，常用接種方法和滅菌方法等有關(guān)知識，要求考生具有運(yùn)用所學(xué)知識解決實(shí)際問題的能力。
29．聯(lián)苯菊酯是農(nóng)藥中的重要成分，在土壤中難以降解。研究人員從農(nóng)藥廢水中分離出聯(lián)苯菊酯降解菌，并對培養(yǎng)液中的聯(lián)苯菊酯降解菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。請回答下列問題：
（1）欲分離聯(lián)苯菊酯降解菌應(yīng)當(dāng)以______作為唯一碳源。
（2）研究人員為了對聯(lián)苯菊酯降解菌菌液中的目的菌數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)，將菌液進(jìn)行了梯度稀釋，然后選擇多個稀釋倍數(shù)的菌液進(jìn)行涂布，其目的是__________________。從稀釋倍數(shù)為103的菌液中各取0.1mL涂布到三個平板，形成的菌落數(shù)分別為45、46和47個，則每毫升原菌液中降解菌的數(shù)量為______個。利用該方法統(tǒng)計(jì)的微生物的數(shù)量一般比實(shí)際數(shù)量偏______（填“大”“小”）。
（3）如圖表示培養(yǎng)溫度對聯(lián)苯菊酯降解率的影響。降解菌降解聯(lián)苯菊酯的最適溫度是______，溫度過高或過低都會導(dǎo)致降解率降低的原因是__________________。

【答案】聯(lián)苯菊酯獲得菌落數(shù)在30~300之間適于計(jì)數(shù)的平板 4.6×105 小 30℃ 溫度過低或過高都會影響降解酶的活性
【分析】
稀釋平板計(jì)數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計(jì)的計(jì)數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細(xì)胞。計(jì)數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使成單個細(xì)胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細(xì)胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。
選擇培養(yǎng)基：根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率。
【詳解】
（1）分離聯(lián)苯菊酯降解菌應(yīng)當(dāng)以聯(lián)苯菊酯為唯一碳源。
（2）選擇多個稀釋倍數(shù)的菌液進(jìn)行涂布，其目的是獲得菌落數(shù)在30~300之間適于計(jì)數(shù)的平板，根據(jù)稀釋涂布平板法的計(jì)算公式可以得出每毫升原菌液中降解菌的數(shù)量為（45+46+47）÷3÷0.1×103=4.6×105個，由于存在兩個或者多個細(xì)菌形成一個菌落，所以測得數(shù)值一般偏小。
（3）從圖中可以看出在30℃左右，聯(lián)苯菊酯降解率最高，因此最適溫度是30℃，溫度過高或者過低都會影響降解酶的活性，從而導(dǎo)致降解率降低。
【點(diǎn)睛】
本題考查了微生物分離與純化的有關(guān)知識，要求考生掌握選擇培養(yǎng)的原理，根據(jù)題干信息確定該培養(yǎng)基的碳源，掌握稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)的方法和計(jì)算公式。
30．下表為土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)課題使用的培養(yǎng)基，分析培養(yǎng)基配方，回答下面的問題：
KH2PO4
1．4g
Na2HPO4
2．1g
MgSO4·7H2O
0．2g
葡萄糖
10．0g
尿素
1．0g
瓊脂
15．0g
用蒸餾水定容到1000mL
（1）在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是_______。
（2）按物理性質(zhì)劃分該培養(yǎng)基屬于_______培養(yǎng)基，理由是培養(yǎng)基中含有_____；該類培養(yǎng)基常用于微生物的_______等。
（3）由于_________________________________，所以該培養(yǎng)基只能用于能夠合成______的微生物的培養(yǎng)。用此培養(yǎng)基培養(yǎng)土壤浸出液能夠從土壤中篩選出_______的細(xì)菌。
（4）在微生物學(xué)中，將_______的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。
【答案】葡萄糖和尿素固體瓊脂純化、分離、計(jì)數(shù) 培養(yǎng)基中只有尿素一種氮源脲酶分解尿素允許特定種類的微生物生長，并能抑制或阻止其他種類的微生物生長
【分析】
微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。一般固體培養(yǎng)基中會加入瓊脂作為凝固劑。制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的步驟為計(jì)算→稱量→溶化→調(diào)pH→滅菌→倒平板。
【詳解】
（1）在該培養(yǎng)基的配方中，葡萄糖為微生物的生長提供碳源，尿素提供氮源。
（2）培養(yǎng)基中含有瓊脂凝固劑為固體培養(yǎng)基；固體培養(yǎng)基常用于菌種的純化、分離、計(jì)數(shù)等。
（3）由于培養(yǎng)基中只有尿素一種氮源，所以該培養(yǎng)基只能用于能夠合成脲酶的微生物的培養(yǎng)。用此培養(yǎng)基培養(yǎng)土壤浸出液能夠從土壤中篩選出分解尿素的細(xì)菌。
（4）在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，并能抑制或阻止其他種類的微生物生長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。
【點(diǎn)睛】
本題是基礎(chǔ)考查題，考查了培養(yǎng)基的成分、各成分的作用、培養(yǎng)基的分類以及選擇培養(yǎng)基的含義等知識，要求考生能夠識記相關(guān)基礎(chǔ)知識，能夠結(jié)合所學(xué)知識準(zhǔn)確答題。
31．下表為培養(yǎng)某種微生物的培養(yǎng)基配方，請回答有關(guān)問題：
KH2PO4
Na2HPO4
MgSO4·7H2O
葡萄糖
尿素
蒸餾水
1.4g
2.1g
0.2g
10.0g
1.0g
定容1000mL
（1）根據(jù)配方可知該培養(yǎng)基只允許分解_____的細(xì)菌生長，從功能上看，這種培養(yǎng)基被稱作_____培養(yǎng)基。為防止雜菌污染，對培養(yǎng)基采用的滅菌方法是_____。
（2）若要通過統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)基中菌落數(shù)來估計(jì)樣品中的細(xì)菌數(shù)，接種時應(yīng)采用_____法。該方法接種培養(yǎng)后的菌落如下圖，其中適合用于計(jì)數(shù)的平板是_____。

（3）某同學(xué)涂布平板時用0.lmL稀釋液，稀釋液的稀釋倍數(shù)為105，平板中測得菌落數(shù)分別為17、156、179、451、175，則每1mL樣品中的細(xì)菌數(shù)約是_____個。從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌后，要對其作進(jìn)一步的鑒定，可在上述培養(yǎng)基中加入_____。
【答案】尿素選擇高壓蒸汽滅菌稀釋涂布平板法 C 1.7×108 酚紅指示劑
【分析】
1、選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長，有利于所需微生物的生長。
2、稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使成單個細(xì)胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細(xì)胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)．經(jīng)培養(yǎng)后，由單個細(xì)胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，即可計(jì)算出樣品中的含菌數(shù)。
【詳解】
（1）該培養(yǎng)基以尿素為唯一氮源，只允許能產(chǎn)生脲酶分解尿素的細(xì)菌生長，故這種培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基會抑制其它種類微生物生長，其原因是該培養(yǎng)基以尿素為唯一的氮源，不能利用尿素的細(xì)菌不能在該培養(yǎng)基上生長。為防止雜菌污染，對該培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌法。
（2）若要通過統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)基中菌落數(shù)來估計(jì)樣品中的細(xì)菌數(shù)，接種時應(yīng)采用稀釋涂布平板法法。用稀釋涂布平板法測定細(xì)菌數(shù)時，在每一個梯度濃度內(nèi)，至少要涂布3個平板，選擇菌落數(shù)在30～300的進(jìn)行記數(shù)，因此圖中C平板適合用于計(jì)數(shù)。
（3）某同學(xué)涂布平板時用0.1mL稀釋液，稀釋液的稀釋倍數(shù)為105，一般選擇30～300的培養(yǎng)基進(jìn)行記數(shù)，則17和451應(yīng)舍棄，156、179、175三平板中測得菌落數(shù)的平均值為170，則每1mL樣品中的細(xì)菌數(shù)約=170÷0.1×105=1.7×108個，從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌后，要對其作進(jìn)一步的鑒定，可在上述培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。
【點(diǎn)睛】
本題考查了微生物培養(yǎng)技術(shù)的相關(guān)知識，考生要明確選擇培養(yǎng)基的選擇作用，識記培養(yǎng)基為微生物提供的營養(yǎng)成分，識記常用的接種方法和具體操作過程，對于微生物培養(yǎng)技術(shù)的掌握及分解尿素的菌的分離和計(jì)數(shù)的掌握應(yīng)用是解題的關(guān)鍵。
32．研究人員欲從土壤中篩選高淀粉酶活性的細(xì)菌（目標(biāo)菌），并對其進(jìn)行研究?；卮鹣铝袉栴}。

（1）微生物的生長需要營養(yǎng)物質(zhì)，在實(shí)驗(yàn)室通常使用培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物，培養(yǎng)基配制完成后需要立即進(jìn)行滅菌，常用的滅菌方法為___________。
（2）在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液進(jìn)行系列梯度稀釋，其原因是__________。
（3）倒平板時，等待平板冷卻凝固后，需將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿底在上。這樣放置的理由是____________________。
（4）從土壤中篩選目標(biāo)菌時，加碘液染色后，平板上出現(xiàn)了A、B和C三種菌落（如圖所示）。如果要得到淀粉酶活力最高的菌株，應(yīng)該選擇__________（填“A”“B”或“C”）菌落進(jìn)一步純化。說明選擇的理由_____________________。
（5）有些使用后的培養(yǎng)基在丟棄前需要經(jīng)過________處理，這種處理可以殺死丟棄物中所有的微生物。
【答案】高壓蒸汽滅菌法土壤菌數(shù)量較多，菌液濃度較大，如直接接種，菌落密集，在固體培養(yǎng)基表面無法形成單個菌落平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，將平板倒置，既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，又可以避免培養(yǎng)基中的水分過快地?fù)]發(fā) B 比較單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明該菌株的分解能力強(qiáng)，淀粉酶活力高滅菌
【分析】
實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選原理實(shí)驗(yàn)室篩選：人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度、pH等），同時抑制或阻止其他微生物生長。
【詳解】
（1）對培養(yǎng)基常用的滅菌方法為高壓蒸汽滅菌法。
（2）由于土壤菌數(shù)量較多，菌液濃度較大，如直接接種，菌落密集，在固體培養(yǎng)基表面無法形成單個菌落，故在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液進(jìn)行系列梯度稀釋。
（3）平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，倒平板時，等待平板冷卻凝固后，需將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿底在上，這樣放置既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，又可以避免培養(yǎng)基中的水分過快地?fù)]發(fā)。
（4）從土壤中篩選目標(biāo)菌時，加碘液染色后，平板上出現(xiàn)了A、B和C三種菌落。比較單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明該菌株的分解能力強(qiáng)，淀粉酶活力高，圖中B的分解圈最大，如果要得到淀粉酶活力最高的菌株，故應(yīng)該選擇B菌落進(jìn)一步純化。
（5）有些使用后的培養(yǎng)基在丟棄前需要經(jīng)過滅菌處理，這種處理可以殺死丟棄物中所有的微生物，以防止對環(huán)境造成污染。
【點(diǎn)睛】
本題考查分解纖維素的微生物分離的實(shí)驗(yàn)原理，要求考生識記相關(guān)知識，意在考查學(xué)生識記所學(xué)知識要點(diǎn)，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系，形成知識網(wǎng)絡(luò)的能力，同時獲取題干信息準(zhǔn)確答題。
33．鮮牛糞中的有些細(xì)菌能夠降解污水中的氨，并準(zhǔn)備從中篩選出除氨菌?；卮鹣铝杏嘘P(guān)問題：

① ② ③ ④ ⑤ ⑥
（1）先將10g新鮮的牛糞加入到某液體培養(yǎng)基中，振蕩30min后恒溫培養(yǎng)。該培養(yǎng)基中的NH4cl為唯一氮源，該培養(yǎng)基從功能上應(yīng)屬于________培養(yǎng)基。進(jìn)行富集培養(yǎng)的目的是________________________。
（2）培養(yǎng)基在配制和滅菌時，滅菌與調(diào)節(jié)pH的先后順序是________，實(shí)驗(yàn)室中對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的方法是________________________。
（3）圖中A和B的培養(yǎng)結(jié)果分別是通過________法進(jìn)行接種得到的。用A接種方法培養(yǎng)了3個培養(yǎng)皿，菌落數(shù)分別為181個、179個、180個，則可以推測富集培養(yǎng)后的菌液中除氨菌的濃度為________個/ml，如果該方法測定的菌含量比實(shí)際值低，最可能的原因是________。
【答案】選擇增加除氨菌的數(shù)量先調(diào)pH再滅菌高壓蒸汽滅菌稀釋涂布平板法，平板劃線法 1．8×106 當(dāng)兩個或多個細(xì)胞聚集在一起就長出一個菌落
【分析】
1.富集培養(yǎng)可以使用液體培養(yǎng)基．選擇培養(yǎng)基是指通過培養(yǎng)混合的微生物，僅得到或篩選出所需要的微生物，其他不需要的種類在這種培養(yǎng)基上是不能生存的。
2.稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)：為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。
3.計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。
【詳解】
（1）富集培養(yǎng)主要增加微生物的數(shù)量，一般用液體培養(yǎng)基，故富集培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基不需要加入瓊脂，培養(yǎng)基中NH4Cl為唯一氮源。通過富集培養(yǎng)不僅可以增加除氨菌的數(shù)量，還可以對除氨菌進(jìn)行初步篩選，因此該培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基。
（2）培養(yǎng)基在配制和滅菌時，應(yīng)該先調(diào)節(jié)pH，而后再滅菌，這樣可以避免調(diào)節(jié)pH過程中造成的雜菌污染，實(shí)驗(yàn)室中對培養(yǎng)基通常采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌。
（3）根據(jù)菌落的分布狀態(tài)可知，圖中A和B對應(yīng)的接種方法分別是稀釋涂布平板法、平板劃線法。圖中經(jīng)過三次稀釋，故圖中總的稀釋倍數(shù)是103，若用A（稀釋涂布平板法）對應(yīng)的接種方法接種菌液到3個培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)一段時間后，得到的菌落數(shù)分別為181、179、180個，則可以推測富集培養(yǎng)后的菌液中每毫升含除氨菌數(shù)為（181+179+180）÷3÷0.1×103=1.8×106個/ml。運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往比實(shí)際值低，原因是當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。
【點(diǎn)睛】
熟知微生物培養(yǎng)和分離以及計(jì)數(shù)方法是解答本題的關(guān)鍵，能正確分析圖中的相關(guān)信息是解答本題的前提，本題重點(diǎn)考查學(xué)生利用所學(xué)的微生物知識解決生活問題的能力。
34．某種細(xì)茵能夠產(chǎn)生一種脂肪酶，該酶可催化植物油與甲醇反應(yīng)合成生物柴油。作為一種可再生清潔能源，生物柴油的使用可減少對化石燃料的消耗，對緩解溫室效應(yīng)具有重要的意義?；卮鹣铝袉栴}：
（1）用于生產(chǎn)生物柴油的植物油不易揮發(fā)，不宜選用________（填“蒸餾法” 或“壓榨法”或“萃取法”）從油料作物中提取。
（2）篩選產(chǎn)脂肪酶細(xì)菌時，配置的培養(yǎng)基應(yīng)以______為唯一碳源，從功能上看該培養(yǎng)基為_______________。對細(xì)菌培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，宜采用___________________法。為確定培養(yǎng)基滅菌是否徹底，需要設(shè)置對照組，將未經(jīng)接種的滅菌培養(yǎng)基與接種后的培養(yǎng)基在相同且適宜的條件下培養(yǎng)一段時間，如果____________________則可說明所用培養(yǎng)基是無菌的。
（3）圖示分離產(chǎn)脂肪酶細(xì)菌用的方法是__________，其中操作正確的是_____________________。

（4）從純化培養(yǎng)得到的細(xì)菌中分離提取脂肪酶后，可與_________________混合，通過測定單位時間、單位體積中生物柴油的生成量，來確定該脂肪酶的活性。
【答案】蒸餾法脂肪（或植物油）選擇培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌未接種組不形成菌落平板劃線法 B 植物油與甲醇
【分析】
1、植物芳香油的提取方法：蒸餾法、壓榨法和萃取等。
2、微生物常見的接種的方法（1）平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落；不能用于菌落計(jì)數(shù)。（2）稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落；可用于菌落計(jì)數(shù)。
【詳解】
（1）根據(jù)題意，生產(chǎn)生物柴油的植物油不易揮發(fā)，所以不適合采用蒸餾法提取，應(yīng)采用壓榨法或萃取法從油料作物中提取。
（2）細(xì)菌的培養(yǎng)需要碳源、氮源、水和無機(jī)鹽等物質(zhì)，篩選產(chǎn)脂肪酶細(xì)菌時，配置的培養(yǎng)基應(yīng)以為植物油唯一碳源，該培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基；對細(xì)菌培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，因?yàn)榕囵B(yǎng)基中含有水分，可利用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌，為了確定培養(yǎng)基滅菌是否徹底，需要設(shè)置對照組，將未經(jīng)接種的滅菌培養(yǎng)基與接種后的培養(yǎng)基在相同且適宜的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，若未接種組不形成菌落則滅菌徹底。
（3）圖示分離產(chǎn)脂肪酶細(xì)菌用的接種方法是平板劃線法，正確的劃線分離操作應(yīng)該多次劃線，且從上一次劃線的末端開始劃線，因此B的劃線分離操作最為合理，故選B。
（4）脂肪酶可催化植物油與甲醇反應(yīng)合成生物柴油，從純化培養(yǎng)得到的細(xì)菌中分離提取脂肪酶后，則可以將植物油和甲醇混合，通過測定單位時間、單位體積中生物柴油的生成量，來確定該脂肪酶的活性。
【點(diǎn)睛】
本題考查微生物的分離與培養(yǎng)和植物有效成分的提取，意在考查考生對基礎(chǔ)知識的掌握和靈活運(yùn)用基礎(chǔ)知識的能力。
35．研究發(fā)現(xiàn)，土壤中某種微生物能降解石油。分離降解石油的菌株和探索其降解機(jī)制的實(shí)驗(yàn)過程如圖所示。回答下列問題：

（1）微生物生長繁殖需要的營養(yǎng)物質(zhì)除了水、無機(jī)鹽外，還有______________，該實(shí)驗(yàn)所用的振蕩培養(yǎng)的培養(yǎng)基只能以石油作為唯一碳源，其原因是______________________________________。
（2）振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中____________的含量，同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高_(dá)___________的利用率。
（3）若要測定培養(yǎng)液中活菌數(shù)量，應(yīng)選擇的接種方法是____________。利用該方法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)量的原理是________________________。
（4）為探究石油的降解機(jī)制，將該菌種的培養(yǎng)液過濾離心取上清液做圖乙所示實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)的假設(shè)是________________________。該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理？為什么？___________________。
【答案】碳源、氮源只有能利用石油的微生物能正常生長繁殖溶解氧營養(yǎng)物質(zhì) 稀釋涂布平板當(dāng)樣品稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌目的菌株能分泌降解石油的蛋白質(zhì) 不合理，缺少空白對照
【分析】
分析題圖：圖示是探索石油降解機(jī)制的實(shí)驗(yàn)過程，圖甲中，首先用選擇培養(yǎng)基從土壤中篩選菌種，再采用平板劃線法分離出相應(yīng)的菌種；圖乙中：乙圖用于測定石油降解率。
【詳解】
（1）生物的各種培養(yǎng)基配方一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽四類營養(yǎng)。選擇培養(yǎng)基只允許特定種類的微生物生長，又要抑制或阻止其他種類微生物生長，因而要篩選能降解石油的微生物，應(yīng)該用以石油為唯一碳源的培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基上只有能利用石油的微生物能正常生長繁殖。
（2）振蕩培養(yǎng)可以增加液體培養(yǎng)基的氧氣含量，促進(jìn)好氧型微生物的生長；同時還能使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率。
（3）接種微生物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法可用于測定活菌數(shù)量，原理是當(dāng)樣品稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。
（4）從圖乙上清液中加入蛋白酶溶液可知是用于水解上清液中的某蛋白質(zhì)的，由此可判定實(shí)驗(yàn)假設(shè)是目的菌株通過分泌某種蛋白質(zhì)來降解石油。探究實(shí)驗(yàn)需要遵循對照原則和單一變量原則，該實(shí)驗(yàn)尚需設(shè)置不加入蛋白酶的對照組實(shí)（即缺少空白對照），否則沒有說服力，因而不合理。
【點(diǎn)睛】
本題結(jié)合探究實(shí)驗(yàn)過程，考查微生物的培養(yǎng)和分離、探究實(shí)驗(yàn)等知識，要求考生識記培養(yǎng)基的成分、種類及作用；掌握分離微生物常用的兩種方法及操作過程；掌握探究實(shí)驗(yàn)的原則，能結(jié)合圖中信息知識答題。
36．生活污水和養(yǎng)殖廢水直接影響人們的生活環(huán)境，為了解決傳統(tǒng)污水處理存在的不足，科研人員利用小球藻進(jìn)行了相關(guān)研究。
（1）從城市周邊河流采集水樣，進(jìn)行富集培養(yǎng)。采用_____________法將其接種到不含碳源的平板上，篩選出小球藻單藻落，并進(jìn)一步純化得到X、Y、S、L和B五種藻株。
（2）研究人員對奶牛養(yǎng)殖廢水沼液進(jìn)行10倍和5倍稀釋，以控制廢水中污染物的濃度。將上述5種藻株擴(kuò)大培養(yǎng)后，分別接種于不同稀釋倍數(shù)的奶牛養(yǎng)殖廢水沼液中，置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，測定培養(yǎng)液中小球藻的數(shù)量，結(jié)果如下圖。

①從培養(yǎng)液中隨機(jī)取樣加入到_____________上，然后在顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)小球藻數(shù)量。在取樣時為降低實(shí)驗(yàn)誤差，正確的操作是______________。
②據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測藻株_____________可作為目標(biāo)藻株，原因是_____________。
（3）進(jìn)一步檢測該目標(biāo)藻株對稀釋5倍奶牛養(yǎng)殖廢水沼液中總氮、總磷和COD（有機(jī)物含量）的去除效果，結(jié)果如下表。
天數(shù)（d）
檢測指標(biāo)（mg·mL-1）
0
4
8
12
16
20
24
28
總氮
105
100
93
88
50
43
43
43
總磷
47
45
39
30
25
20
20
20
COD
520
520
500
420
420
300
270
270
①結(jié)果表明，該藻株在沼液中分別經(jīng)歷了適應(yīng)期、正常生長期和生長停滯期，依據(jù)是_________________。目標(biāo)藻株對沼液中______________的去除效果最好。
②解釋實(shí)驗(yàn)中COD下降的原因__________________________。
（4）若要將該研究結(jié)果應(yīng)用于養(yǎng)殖污水的處理，為提高處理效果，請?zhí)岢鲆粋€需進(jìn)一步研究的問題。______
【答案】稀釋涂布平板法（或平板劃線法）血球計(jì)數(shù)板充分搖勻后取樣、多次取樣計(jì)數(shù) X X藻在10倍和5倍稀釋的廢水沼液中相對數(shù)量均最多，適應(yīng)能力最強(qiáng) 總氮、總磷和COD的濃度在0~4d無顯著變化，8~16d均明顯下降，20~28d均在較低水平保持穩(wěn)定總氮、總磷由于小球藻數(shù)量的增加，產(chǎn)生的大量氧氣促進(jìn)了分解者數(shù)量的增加，分解者利用分解有機(jī)物，使得COD下降探究在處理污水時X藻和分解者的最佳配比；探究污水處理最好效果的X藻的投放量；探究環(huán)境條件對X藻處理污水效果的影響（合理即可得分）
【分析】
1微生物常用的接種方法是稀釋涂布平板法或平板劃線法，微生物的計(jì)數(shù)方法可以用稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。
【詳解】
（1）分離單個菌落的接種方法是稀釋涂布平板法或平板劃線法，所以采用稀釋涂布平板法或平板劃線法將富集培養(yǎng)的水樣接種到不含碳源的平板上，篩選出小球藻單藻落，并進(jìn)一步純化得到X、Y、S、L和B五種藻株。
（2）①可用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板對小球藻直接計(jì)數(shù)，即從培養(yǎng)液中隨機(jī)取樣加入到血球計(jì)數(shù)板上，然后在顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)小球藻數(shù)量。在取樣時為降低實(shí)驗(yàn)誤差，正確的操作是需將培養(yǎng)液充分搖勻后取樣，使小球藻分布均勻、多次取樣計(jì)數(shù)。
②X藻在10倍和5倍稀釋的廢水沼液中相對數(shù)量均最多，適應(yīng)能力最強(qiáng)，所以跟據(jù)該實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測藻株X可作為目標(biāo)藻株。
（3）①依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果總氮、總磷和COD的濃度在0~4d無顯著變化，8~16d均明顯下降，20~28d均在較低水平保持穩(wěn)定，結(jié)果表明，該藻株在沼液中分別經(jīng)歷了適應(yīng)期、正常生長期和生長停滯期。根據(jù)題表信息可知，目標(biāo)藻株對沼液中總氮、總磷的去除效果最好。
②解釋實(shí)驗(yàn)中COD是有機(jī)物的量，下降的原因由于小球藻數(shù)量的增加，產(chǎn)生的大量氧氣促進(jìn)了分解者數(shù)量的增加，分解者利用分解有機(jī)物，使得COD下降。
（4）若要將該研究結(jié)果應(yīng)用于養(yǎng)殖污水的處理，為提高處理效果，需進(jìn)一步研究的問題是探究在處理污水時X藻和分解者的最佳配比；探究污水處理最好效果的X藻的投放量；探究環(huán)境條件對X藻處理污水效果的影響?！　　　　?br /> 【點(diǎn)睛】
本題以生活污水和養(yǎng)殖廢水為背景，主要考查微生物培養(yǎng)、計(jì)數(shù)的相關(guān)知識，要求考生能夠從表格和圖形中獲取有效信息，綜合分析解決實(shí)際問題。
37．土壤中含有大量的難溶性磷酸鹽，為了從土壤中篩選出能夠?qū)㈦y溶性磷酸鹽轉(zhuǎn)化為植物能吸收的可溶性磷的優(yōu)良解磷菌株，以便將其添加到有機(jī)肥中，改善植物磷元素供應(yīng)，科研人員進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)：
實(shí)驗(yàn)原理：固體培養(yǎng)基中難溶性磷酸鹽在微生物的作用下溶解，會在菌落周圍形成透明圈（如圖1），透明圈直徑（D）與菌落直徑（d）的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小。

實(shí)驗(yàn)步驟：
步驟1 取某地區(qū)土樣5 g制得土壤溶液后稀釋，取稀釋液1 mL接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基A上，在適宜溫度下培養(yǎng)72 h。
步驟2 在基礎(chǔ)培養(yǎng)基A上用接種環(huán)挑取代表性菌落再次接種，培養(yǎng)3~4 d后觀察菌落特征和透明圈的大小，初步篩選出三種優(yōu)良解磷菌株（如表）。
菌株
透明圈直徑（D）
菌落直徑（d）
D/d
M-3-01
18．8
12．3
1．5
B3-5-6
20．7
8．0
2．6
T1-4-01
9．1
6．5
1．4
請據(jù)以上資料，回答下列問題：
（1）從物理形態(tài)上看，培養(yǎng)基A屬于__________培養(yǎng)基，為了篩選出優(yōu)良解磷菌株，培養(yǎng)基中加入的磷源是__________。
（2）步驟1中的接種方法是__________，應(yīng)該在__________旁完成操作。根據(jù)表中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以確定溶解磷能力最強(qiáng)的菌株是__________。
（3）為測定初步篩選的三種菌株實(shí)際溶解磷的能力，研究人員將它們接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基B中，并在37℃、200 r·min-1搖床培養(yǎng)，定期取上清液，測定溶液中可溶性磷含量，得到如圖2所示曲線，結(jié)果表明最優(yōu)良的解磷菌株是__________。
（4）為進(jìn)一步檢測發(fā)酵過程中上述最優(yōu)良菌的數(shù)量，實(shí)驗(yàn)者將1 mL該菌發(fā)酵液稀釋1000倍后，分別取0．1 mL稀釋菌液均勻涂布在5個平板上，經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，長出的菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191，據(jù)此可得出每毫升發(fā)酵液中的活菌數(shù)為__________個。與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比，此計(jì)數(shù)方法測得的細(xì)菌數(shù)較__________。
【答案】固體難溶性磷酸鹽稀釋涂布平板法酒精燈火焰 B3-5-6 M-3-01 1．75×106 少
【分析】
土壤是微生物的天然培養(yǎng)基。從土壤中篩選出能夠?qū)㈦y溶性磷酸鹽轉(zhuǎn)化為植物能吸收的可溶性磷的優(yōu)良解磷菌株必須使用以難溶性磷酸鹽作為唯一磷源的選擇培養(yǎng)基。表格中的透明圈越大，菌落直徑越小，說明降解難溶性磷酸鹽的能量越強(qiáng)。圖1是表示固體培養(yǎng)基中難溶性磷酸鹽在微生物的作用下溶解，在菌落周圍形成透明圈，圖2代表不同菌株實(shí)際溶解磷的能力，其中M-3-01菌株搖床培養(yǎng)后，溶液中可溶性磷含量最高，說明M-3-01實(shí)際溶解磷能力最強(qiáng)。
【詳解】
（1）菌落在固體培養(yǎng)基上才能形成（培養(yǎng)過程中菌體不能運(yùn)動），所以從物理形態(tài)上看，培養(yǎng)基A屬于固體培養(yǎng)基。要篩選溶解難溶性磷能力強(qiáng)的菌株，必須以難溶性磷酸鹽作為唯一磷源。
（2）步驟1的目的是從土壤微生物中篩選解磷微生物，由于土壤樣液中微生物種類和數(shù)量多，需要稀釋后再接種，故采用的是稀釋涂布平板法進(jìn)行接種，為了避免雜菌污染，應(yīng)該在酒精燈火焰旁完成操作。根據(jù)實(shí)驗(yàn)原理中“透明圈直徑與菌落直徑比代表微生物溶解磷的能力大小”，結(jié)合表格數(shù)據(jù)可以確定解磷能力最強(qiáng)的菌株是B3-5-6，因?yàn)锽3-5-6的D/d值最大。
（3）為測定初步篩選的三種菌株實(shí)際溶解磷的能力，研究人員對其進(jìn)行搖床培養(yǎng)，根據(jù)根據(jù)實(shí)驗(yàn)曲線圖，不難看出在一定時間區(qū)間里，M-3-01實(shí)際溶解磷能力最強(qiáng)。
（4）稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)，需要取菌落數(shù)在30-300之間的進(jìn)行計(jì)數(shù)，故根據(jù)題意可知，每毫升發(fā)酵液中的活菌數(shù)為（156+178+191）/（3×0.1）×1000=1.75×106。與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比，此計(jì)數(shù)方法測得的細(xì)菌數(shù)較少，因?yàn)橄♂屚坎计桨宸ㄔ谟?jì)算菌落時兩個或多個細(xì)菌連接在一起，往往統(tǒng)計(jì)的是一個菌落。
【點(diǎn)睛】
本題結(jié)合實(shí)驗(yàn)表格結(jié)果考查了微生物培養(yǎng)和分離的有關(guān)知識，要求考生掌握微生物分離與純化的方法，能夠根據(jù)表格數(shù)據(jù)確定溶解磷能力最強(qiáng)的菌株，具備一定分析和計(jì)算的能力。
38．對某品牌的一次性口罩中的微生物進(jìn)行檢測，通過分析微生物的種類和數(shù)量來確定口罩的合格性?；卮鹣铝袉栴}。
（1）準(zhǔn)確稱取10g（近似10mL）樣品，剪碎后加入到90m無菌水中充分混勻，待樣液自然沉降后取上清液進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)前需先配置______培養(yǎng)基（按物理性質(zhì)分類），使用高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌時，壓力達(dá)到設(shè)定要求而鍋內(nèi)并沒有達(dá)到相應(yīng)溫度，最可能的原因待冷卻后采用稀釋涂布平板法分別接種0.1mL樣液并放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，平板上長出的菌落數(shù)分別為37個、45個、19個、346個和44個，那么1g口罩樣品中細(xì)菌數(shù)量為______個。根據(jù)《中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》對一次性口罩的微生物指標(biāo)要求細(xì)菌菌落總數(shù)≤100個/g，該研究小組檢測的口罩______（填“符合”或“不符合”）標(biāo)準(zhǔn)。
（2）在微生物培養(yǎng)過程中配置的培養(yǎng)基除了提供水、碳源、氮源、無機(jī)鹽等幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)以外，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH、氧氣以及______的要求。顯微直接計(jì)數(shù)也是測定微生物數(shù)量的常用方法，該方法的主要缺點(diǎn)是______。為確定檢測樣液中大腸桿菌數(shù)目，需在培養(yǎng)基中加入用于______鑒別，統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)基上深紫色菌落的數(shù)目。
（3）某些自養(yǎng)微生物能利用空氣中的CO2作為碳源。生物興趣小組從樣品中分離出一種細(xì)菌X，請?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)探究細(xì)菌X能否利用空氣中的CO2作為碳源，寫出實(shí)驗(yàn)思路并預(yù)期結(jié)果和結(jié)論。
實(shí)驗(yàn)思路：______。
預(yù)期結(jié)果和結(jié)論：______。
【答案】固體培養(yǎng)基 4200 不符合特殊營養(yǎng)物質(zhì) 不能區(qū)分死菌與活菌伊紅美藍(lán) 將X細(xì)菌接種到無碳的培養(yǎng)基上，置于適宜的環(huán)境中培養(yǎng)一段時間后，觀察有無菌落的形成若有菌落形成，則X細(xì)菌能利用空氣中的CO2作為碳源
【分析】
微生物常見的接種的方法：①平板劃線法；②稀釋涂布平板法。后者可用于微生物的計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)時，取菌落數(shù)在30～300的平板，計(jì)算平均菌落數(shù)。計(jì)算公式為：每克（ml）樣品中的菌株數(shù)=（C÷V）×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積，M代表稀釋倍數(shù)。
【詳解】
（1）按物理性質(zhì)分類，培養(yǎng)基分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基。據(jù)題干信息可知，符合計(jì)數(shù)要求的平板的菌落平均值=（37+45+44）÷3=42，故1g口罩樣品中細(xì)菌數(shù)量=（C÷V）×M=（42÷0.1）×10=4200個。根據(jù)《中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》對一次性口罩的微生物指標(biāo)要求細(xì)菌菌落總數(shù)≤100個/g，該研究小組檢測的口罩不符合標(biāo)準(zhǔn)。
（2）培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成：①根據(jù)微生物生長繁殖的需要來確定；②主要營養(yǎng)物質(zhì)有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽；③其他條件有pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣等。顯微直接計(jì)數(shù)法是利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下對微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)，該方法的缺點(diǎn)是不能區(qū)分死菌與活菌，使計(jì)數(shù)的結(jié)果偏大。不同微生物的菌落特征不同，大腸桿菌在加入伊紅美藍(lán)的固體培養(yǎng)基上，會形成黑色菌落，可用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基檢測樣液中大腸桿菌數(shù)目。
（3）要想證明該結(jié)論（X細(xì)菌能否利用空氣中的CO2作為碳源），應(yīng)將X細(xì)菌接種在無碳源的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，能利用空氣中的CO2作為碳源的細(xì)菌就能在該培養(yǎng)基上形成菌落。
實(shí)驗(yàn)思路：將X細(xì)菌接種到無碳源的培養(yǎng)基上，置于適宜的環(huán)境中培養(yǎng)，一段時間后觀察有無菌落的形成；預(yù)期結(jié)果：有大量菌落形成；結(jié)論：X細(xì)菌能夠利用空氣中的CO2作為碳源。
【點(diǎn)睛】
本題考查了微生物的分離和培養(yǎng)的有關(guān)知識，要求考生能夠識記培養(yǎng)基的成分，掌握實(shí)驗(yàn)室常用的消毒和滅菌的方法；識記接種微生物常用的兩種方法及計(jì)數(shù)微生物的方法，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題。
39．口臭是一種自口腔散發(fā)的令人不愉悅的氣味，同時也是身體健康程度的重要表征?？诔舻某梢蛞话銇碜匀矫妫嚎谇恍l(wèi)生差，微生物利用食物殘?jiān)M(jìn)行發(fā)酵；消化道菌群失調(diào)，尤其是胃部被幽門螺桿菌感染：機(jī)體代謝異常，特殊代謝廢物經(jīng)血液循環(huán)自肺部排出。幽門螺桿菌是棲息在胃黏膜的螺旋形的細(xì)菌（該菌對萬古霉素、兩性霉素B等抗生素不敏感，對青霉素高度敏感），感染后可引起胃炎、消化道潰瘍等疾病。
（1）下列關(guān)于幽門螺桿菌的說法中，錯誤的是____。
A．具有核糖體，能獨(dú)立合成蛋白質(zhì) B．幽門螺桿菌生命系統(tǒng)的邊界是細(xì)胞壁
C．幽門螺桿菌以二分裂方式進(jìn)行增殖 D．幽門螺桿菌可以在酸性條件下生存
（2）為研究培養(yǎng)幽門螺桿菌所需的氣體條件，某研究小組利用半固體培養(yǎng)基（瓊脂含量3．5g/L）對幽門螺桿菌進(jìn)行培養(yǎng)。如圖代表微生物可能出現(xiàn)的四種生長狀態(tài)。

結(jié)果顯示幽門螺桿菌的生長狀態(tài)類似②號試管，則培養(yǎng)幽門螺桿菌的氣體最適條件應(yīng)為下列選項(xiàng)中的____。
A．純氧 B．90%N、10%CO2 C．無菌空氣 D．5%O2、85%N2、10%CO2
（3）為了從胃炎患者的胃黏膜提取稀釋液中分離得到幽門螺桿菌，應(yīng)將稀釋液樣品接種在以____為唯一氮源的____（填“固體”或“液體”）培養(yǎng)基上，以____（填方法）接種后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。若要鑒別是否是幽門螺桿菌，可向培養(yǎng)基中添加____指示劑，在培養(yǎng)過程中若出現(xiàn)紅色環(huán)帶的菌落，表明該菌落為幽門螺桿菌菌落。
（4）若要將得到的幽門螺桿菌進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，可采用布氏肉湯基礎(chǔ)培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)液中需加入混合抗生素（包括萬古霉素、兩性霉素B等)，其目的是：________________。
（5）幽門螺桿菌能產(chǎn)生有較強(qiáng)活性的脲酶，該酶能催化熱穩(wěn)定性低的尿素分解為NH3，和CO2。體檢時可通過14C尿素呼氣試驗(yàn)來檢測幽門螺桿菌感染情況。受試者口服14C標(biāo)記的尿素膠囊后，定時收集受試者吹出的氣體并測定其中是否含有14CO2以及量的多少，作為診斷指標(biāo)。14C—尿素呼吸檢測的原理是患者消化道細(xì)胞內(nèi)____（填“有”或“無”）脲酶活性，若呼出的氣體中含有14CO2，則為____的代謝產(chǎn)物。
【答案】B D 尿素固體稀釋涂布平板法或平板劃線法酚紅抑制除幽門螺桿菌以外的其他雜菌的生長(抑制對萬古霉素、兩性毒素B敏感的微生物生長) 有幽門螺桿菌
【分析】
微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。
【詳解】
（1）A、幽門螺桿菌是原核生物，具有核糖體，能獨(dú)立合成蛋白質(zhì) ，A正確；
B、幽門螺桿菌生命系統(tǒng)的邊界是細(xì)胞膜，B錯誤；
C、幽門螺桿菌是細(xì)菌，以二分裂方式進(jìn)行增殖， C正確；
D、幽門螺桿菌可以生活在胃部強(qiáng)酸低氧的環(huán)境中，D正確。
故選B。
（2）由圖可知，幽門螺桿菌在試管④中濃度最大，說明其繁殖需要較低的氧濃度，D正確。
故選D。
（3）由題意可知，幽門螺桿菌可以產(chǎn)生活性高的脲酶，利用尿素作為唯一氮源，因此利用以尿素作為唯一氮源的固體培養(yǎng)基可以進(jìn)行有效篩選，同時酚紅指示劑可以鑒別有無脲酶催化尿素分解。
（4）若要對幽門螺桿菌進(jìn)行擴(kuò)大化培養(yǎng)則要抑制其他雜菌生長，應(yīng)使用萬古毒素和兩性毒素B。
（5）已知幽門螺桿菌能產(chǎn)生有較強(qiáng)活性的脲酶，該酶能催化熱穩(wěn)定性低的尿素分解為NH3和CO2，受試者口服14C標(biāo)記的尿素膠囊后，患者消化道細(xì)胞內(nèi)有脲酶活性，若呼出的氣體中含有14CO2，則為幽門螺桿菌的代謝產(chǎn)物。
【點(diǎn)睛】
本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記培養(yǎng)基的種類及功能;識記接種微生物常用的兩種方法，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題。
40．乳酸有L－乳酸、D－乳酸和DL－乳酸三類，人體只能代謝L－乳酸，而過多攝入D－乳酸會危害健康；傳統(tǒng)酸菜發(fā)酵產(chǎn)物多為D－乳酸。為了從酸菜中篩選出高產(chǎn)L－乳酸的菌株，某科研小組進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)材料和步驟：
①準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料：酸菜汁、發(fā)酵培養(yǎng)基、MRS培養(yǎng)基（成分見下表，pH6.2~6.4）等。
有機(jī)物
牛肉膏10.0g
蛋白陳10.0g
酵母膏5.0g
葡萄糖20.0g
有機(jī)鹽：乙酸鈉2.0g、檸檬酸二銨2.0g
瓊脂粉15.0g
無機(jī)物
K2HPO4 2.0g
MgSO4·7H2O 0.58g
MgSO4·4H20 0.25g
水1.0L

②篩選高產(chǎn)L－乳酸菌種：將酸菜汁稀釋107倍，取0.1mL稀釋液涂抹在MRS培養(yǎng)基中于32℃下培養(yǎng)2~4d獲得單菌落，鑒定后將獲得的L－乳酸菌種接種于MRS液體培養(yǎng)基中，在32℃下培養(yǎng)24h，檢測L－乳酸的產(chǎn)量。
③發(fā)酵條件優(yōu)化：分別探究發(fā)酵時間、溫度等因素對發(fā)酵效果的影響。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論：高產(chǎn)L－乳酸菌株的最佳發(fā)酵溫度是2℃、發(fā)酵最佳時間是20h、發(fā)酵的初始pH是6.2。
請回答下列問題：
（1）在MRS培養(yǎng)基中添加葡萄糖的作用是________________，無機(jī)鹽可能起到________ 的作用。MRS培養(yǎng)基常用________法滅菌，使用高壓蒸汽滅菌鍋時應(yīng)注意________________。
（2）將用________稀釋后的酸菜汁涂布在MRS培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后可通過菌落的________________（答出兩點(diǎn)）等特征將目的菌株鑒定出來；將獲得的目的菌株接種于液體MRS培養(yǎng)基中可達(dá)到________的目的。
（3）如何確定發(fā)酵的最佳時間？__________。
【答案】為乳酸菌生長提供碳源和能源調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透壓高壓蒸汽滅菌要先向滅菌鍋內(nèi)倒入適量水，并加熱煮沸，將其中原有冷空氣徹底排出后將鍋密閉。無菌水梯度形狀、大小、隆起程度和顏色增加高產(chǎn)L－乳酸菌株數(shù)目每隔相同時間，測定培養(yǎng)基中L－乳酸的含量，L－乳酸的含量最高的組對應(yīng)的時間即為發(fā)酵的最佳時間
【分析】
（1）培養(yǎng)基的成分一般包括水、無機(jī)鹽、碳源、氮源和生長因子；
（2）常用的滅菌方法有干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌和灼燒滅菌；
（3）接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法．接種的目的是使聚集在一起的微生物分散成單個細(xì)胞，并在培養(yǎng)基表面形成單個細(xì)菌繁殖而成的子細(xì)胞群體-菌落。
【詳解】
（1）在MRS培養(yǎng)基中添加葡萄糖的作用是為乳酸菌生長提供碳源和能源。無機(jī)鹽可能起到調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透壓的作用。MRS培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌法滅菌，使用高壓蒸汽滅菌鍋時應(yīng)注意要先向滅菌鍋內(nèi)倒入適量水，并加熱煮沸，將其中原有冷空氣徹底排出后將鍋密閉。
（2）將用無菌水梯度稀釋菌液涂布在MRS培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后可通過菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征將目的菌株鑒定出來；將高產(chǎn)L－乳酸菌株接種于液體MRS培養(yǎng)基中可達(dá)到增加高產(chǎn)L－乳酸菌株數(shù)目。
（3）通過每隔相同時間，測定培養(yǎng)基中L－乳酸的含量，L－乳酸的含量最高的組對應(yīng)的時間即為發(fā)酵的最佳時間。
【點(diǎn)睛】
本題考查微生物的篩選相關(guān)知識，要求考生識記相關(guān)知識，意在考查考生的識記能力和從題干中獲取有效信息的能力。
41．物質(zhì)W是一種含氮有機(jī)物，會污染土壤，W在培養(yǎng)基中達(dá)到一定量時培養(yǎng)基表現(xiàn)為不透明。某研究小組欲從土壤中篩選出能降解W的細(xì)菌（目標(biāo)菌），回答下列問題。

（1）若要從土壤中分離出目標(biāo)菌，所用的培養(yǎng)基應(yīng)為_____，使用前應(yīng)用_____法進(jìn)行嚴(yán)格滅菌；其中的氮源應(yīng)該是_____。
（2）在從土壤中分離目標(biāo)菌的過程中，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上甲、乙兩種細(xì)菌都能生長并形成菌落（如圖所示）。如果要得到目標(biāo)菌，應(yīng)該選擇_____菌落進(jìn)一步純化，選擇的依據(jù)是_____。
（3）該小組將人工合成的一段DNA轉(zhuǎn)入大腸桿菌，使大腸桿菌產(chǎn)生能降解W的酶（酶E）。為了比較酶E與天然酶降解W能力的差異，該小組擬進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)，請完善相關(guān)內(nèi)容。
①在含有一定濃度W的固體培養(yǎng)基上，A處滴加含有酶E的緩沖液，B處滴加含有相同濃度天然酶的緩沖液，C處滴加_____，三處滴加量相同。
②一段時間后，測量透明圈的直徑。若C處沒有出現(xiàn)透明圈，說明_____；若A、B處形成的透明圈直徑大小相近，說明_____。
【答案】選擇培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌 W 乙乙菌落周圍出現(xiàn)透明圈，說明乙菌能降解W 緩沖液緩沖液不能降解W 酶E與天然酶降解W的能力相近
【分析】
選擇培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或?qū)δ承┗瘜W(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的，能選擇性地區(qū)分這種微生物的培養(yǎng)基。利用選擇培養(yǎng)基，可使混合菌群中的目標(biāo)菌種變成優(yōu)勢種群，從而提高該種微生物的篩選效率。
【詳解】
（1）要從土壤中分離目標(biāo)菌，需要在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)成分，使目標(biāo)菌變成混合菌樣中的優(yōu)勢菌，從而提高目標(biāo)菌的篩選率，這樣起到選擇培養(yǎng)作用的培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。培養(yǎng)基使用前應(yīng)用高壓蒸汽滅菌進(jìn)行嚴(yán)格滅菌，防止其他微生物污染。該研究小組的目標(biāo)菌是能夠降解物質(zhì)W的細(xì)菌，而物質(zhì)W是一種含氮有機(jī)物，故可作篩選培養(yǎng)基中的氮源。
（2）研究小組的目標(biāo)菌，是能夠降解物質(zhì)W的細(xì)菌，培養(yǎng)基中乙菌落的周圍出現(xiàn)透明圈，說明乙菌落能夠降解物質(zhì)W ，故乙菌落為該小組的目標(biāo)細(xì)菌，應(yīng)該選擇乙菌落進(jìn)一步純化。
（3）①C處作為空白對照，要排除作為溶劑的緩沖液對實(shí)驗(yàn)可能造成的影響，故需要在C處滴加緩沖液，且保持滴加量相同。
②培養(yǎng)基中的透明圈表示物質(zhì)W被降解的情況，若空白對照組C處不出現(xiàn)透明圈，則說明緩沖液不能降解物質(zhì)W；若A、B處形成的透明圈直徑大小相近，說明物質(zhì)W被降解的程度相近，即酶E與天然酶降解物質(zhì)W的能力相近。
【點(diǎn)睛】
本題考查篩選培養(yǎng)基的配置和使用，針對不同要求的目標(biāo)菌種，選擇不同物質(zhì)配制不同篩選作用的培養(yǎng)基。并且要求學(xué)生理解識別目標(biāo)菌種篩選的現(xiàn)象，判斷篩選結(jié)果。
42．研究人員為獲得用于煙氣脫硫的脫硫細(xì)菌，進(jìn)行了如下操作。請回答：
（1）取樣與篩選：在某熱電廠煙囪周圍區(qū)域采集土樣，取樣用的小鐵鏟和盛裝土樣的信封在使用前都需要_____。為確保能夠從土樣中分離到目的菌，可以進(jìn)行選擇培養(yǎng)，目的是_____。
（2）馴化：將目的菌轉(zhuǎn)移到含少量無菌水的錐形瓶中，邊攪拌邊持續(xù)通入 SO2 氣體，馴化幾分鐘后接種到固體培養(yǎng)基上，待長出菌落后再重復(fù)上述步驟，并逐步延長通 SO2 的時間，與此同時逐步降低培養(yǎng)基的 pH。由此分化獲得具有____________和_____________________能力的煙氣脫硫細(xì)菌。
（3）培養(yǎng)與觀察：培養(yǎng)一段時間后，當(dāng)脫硫細(xì)菌_____穩(wěn)定時，即可作為菌種用于繼續(xù)研究與生產(chǎn)。
（4）培養(yǎng)大量的目的菌用于生產(chǎn)，研究人員需連續(xù)取樣進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)方法一般有稀釋涂布平板法和_____法。當(dāng)用前者進(jìn)行計(jì)數(shù)時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的_____。統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)即可推測出樣品中含有的活菌數(shù)目。通常情況下，用此計(jì)數(shù)方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù) 目_____。原因是_____。
【答案】滅菌增加（煙氣）脫硫細(xì)菌的濃度耐（受）SO2 耐酸菌落特征顯微鏡直接計(jì)數(shù) 一個活菌少兩個或兩個以上的細(xì)菌重疊在一起形成一個菌落
【分析】
根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康目芍?，?shí)驗(yàn)需要獲得“煙氣脫硫的脫硫細(xì)菌”，因此需要使用選擇培養(yǎng)基將該菌篩選出，即題中的“馴化”；
菌落：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個細(xì)胞，使其長成單個的菌落，這個單個菌落就是一個純化的細(xì)菌菌落。
【詳解】
（1）為了防止雜菌的污染，取樣用的小鐵鏟和盛裝土樣的信封在使用前都需要滅菌；為確保能夠從土樣中分離到目的菌，增加脫硫細(xì)菌的濃度，可以進(jìn)行選擇培養(yǎng).
（2）脫硫細(xì)菌能利用SO2，根據(jù)馴化過程可知，馴化過程中不斷通入SO2，并且延長時間，與此同時逐步降低培養(yǎng)基的pH，因此分化獲得具有耐受SO2和適應(yīng)酸性環(huán)境能力的煙氣脫硫細(xì)菌。
（3）一段時間后，將菌種轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基上，當(dāng)在培養(yǎng)基上觀察到脫硫細(xì)菌的菌落特征穩(wěn)定時，即可作為菌種用于繼續(xù)研究與生產(chǎn)。
（4）培養(yǎng)大量的目的菌用于生產(chǎn)，計(jì)數(shù)方法一般有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)法；稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌；用稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時，由于所產(chǎn)生的菌落可能是由兩個或多個細(xì)胞形成的，所以統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目偏低．
【點(diǎn)睛】
本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)的有關(guān)知識，要求掌握微生物選擇的方法，能夠根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)確定培養(yǎng)基的成分以及理化性質(zhì)，掌握微生物計(jì)數(shù)的一般方法，并比較兩者各自的優(yōu)缺點(diǎn)。
43．網(wǎng)絡(luò)上有傳言稱“手機(jī)上的細(xì)菌比馬桶多”。兩個興趣小組就此進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。請回答相關(guān)問題：

（1）該實(shí)驗(yàn)需制備__________（選填“固體”或“液體）培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中一般含有______________________________________________等營養(yǎng)物質(zhì)。
（2）據(jù)圖，兩興趣小組均采用_________________法接種，接種前需要采用_________________法對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。
（3）通過觀察菌落的_________________________________________（至少答出兩點(diǎn)）等特征以初步盜定手機(jī)屏幕和馬桶按鈕上的生物類群。
（4）按圖示操作取樣面積，興趣小組測定某手機(jī)屏幕的細(xì)菌數(shù)量，將10mL菌懸液進(jìn)行梯度稀釋，分別取0.1L稀釋倍數(shù)為100的樣品液接種到三個培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)分別為99、101、100，則該手機(jī)屏幕的細(xì)菌數(shù)為________個/平方厘米。該實(shí)驗(yàn)是否需要設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)？若需要，請簡要寫出對照實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)方案：若不需要，請說明理由。_______，___________________________________。
【答案】固體碳源、氮源、水、無機(jī)鹽（缺一不得分）稀釋涂布平板高壓蒸汽滅菌形狀、大小、隆起程度和顏色等（答出任意兩點(diǎn)即可） 4×104 需要取培養(yǎng)基涂布0.1mL無菌水進(jìn)行培養(yǎng)
【分析】
1、培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)；培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。在提供上述幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物種和氧氣的要求。
2、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法：（1）顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)；③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。（2）間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）： ①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌．通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。②操作：a、設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性；b、為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。③計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（C÷V）×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。
【詳解】
（1）該實(shí)驗(yàn)需分離純化細(xì)菌，故需制備固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基一般都含有水、無機(jī)鹽、碳源、氮源等營養(yǎng)成分；
（2）兩組均采用稀釋涂布平板法接種，培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的方法是高壓蒸汽滅菌；
（3）通過觀察菌落的形態(tài)、大小、顏色、隆起程度等特征，可知手機(jī)屏幕和馬桶按鈕都存在多種微生物。兩小組的實(shí)驗(yàn)操作均正確且完全一致，但結(jié)果截然不同，可能是因?yàn)槭謾C(jī)的取樣和馬桶的取樣都不相同；
（4）按圖操作取樣面積，實(shí)驗(yàn)員測定某手機(jī)屏幕的細(xì)菌數(shù)量，將10mL菌懸液進(jìn)行梯度稀釋，分別取0.1L稀釋倍數(shù)為102的樣品液接種到三個培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)分別為99、101、100，則該手機(jī)屏幕的細(xì)菌數(shù)=（99+101+100）÷3÷0.1÷（5×5）×102×10=4×104個/平方厘米。該實(shí)驗(yàn)對照組應(yīng)取培養(yǎng)基涂布0.1mL無菌水放置于和實(shí)驗(yàn)組相同的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
【點(diǎn)睛】
本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)的有關(guān)知識，要求考生能夠識記培養(yǎng)基的成分，掌握微生物分離和計(jì)數(shù)的方法，能夠根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測實(shí)驗(yàn)誤差的原因等。
44．測定水樣是否符合飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，常用濾膜法測定大腸桿菌的數(shù)目。濾膜法的大致流程：用濾膜過濾待測水樣→水樣中的細(xì)菌留在濾膜上→將濾膜轉(zhuǎn)移到伊紅美藍(lán)的培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）上培養(yǎng)→統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目。如圖甲為大腸桿菌含量檢測操作簡圖，圖乙為伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基配方．回答下列相關(guān)問題：

（1）圖甲中濾膜的孔徑應(yīng)______________（填“大于”或“小于”）大腸桿菌。
（2）配制圖乙中的基礎(chǔ)培養(yǎng)基時，除了水分、無機(jī)鹽以外，還應(yīng)加入______________（一種營養(yǎng)成分），以及______________。待各成分都溶化后和分裝前，要進(jìn)行的是______________和滅菌。
（3）將完成過濾之后的濾膜緊貼在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，這屬于微生物培養(yǎng)中的______________操作。伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上生長的大腸桿菌菌落呈現(xiàn)______________色，從功能上劃分，該培養(yǎng)基屬于______________培養(yǎng)基。
（4）對大腸桿菌桿菌進(jìn)行培養(yǎng)時需要將平板倒置，其主要目的是______________。將接種后的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)時，要將一個未接種的培養(yǎng)基也放入恒溫箱中培養(yǎng)，目的是______________。
（5）某生物興趣小組的某同學(xué)嘗試按照上述方法進(jìn)行測定，無菌操作下將10 mL待測水樣加入到 90 mL 無菌水中，稀釋后的菌液通過濾膜法測得伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上大腸桿菌菌落數(shù)平均為31，則推測1升待測水樣中的大腸桿菌數(shù)目為______________個。
（6）該同學(xué)進(jìn)一步思考，利用濾膜法也可用于測定待測水樣中其他微生物的數(shù)目。他取了兩份水樣，一份待測水樣來自變酸的果酒，從中檢測到兩種微生物，它們在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別是______________。另一份來自湖水，若要通過測量藍(lán)藻的數(shù)目來研究水華，應(yīng)更換上述過濾裝置中的濾膜，為了減少細(xì)菌的干擾，應(yīng)選擇孔徑______________ （填“更小”“不變”或“更大”）的濾膜，而培養(yǎng)基配方中則必須添加______________（從“水”“無機(jī)鹽”“碳源”和“氮源”中選擇）。
【答案】小于氮源（或蛋白胨）瓊脂調(diào)整pH 接種黑色鑒別防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否滅菌合格 3100 酵母菌有（以核膜為界限的）細(xì)胞核，而醋酸菌沒有更大水、無機(jī)鹽、氮源
【分析】
濾膜法是檢測水樣中大腸細(xì)菌群的方法，將一定量水樣注入已滅菌的微孔薄膜的濾器中，經(jīng)過抽濾，細(xì)菌被截留在濾膜上，將濾膜貼于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后計(jì)數(shù)和鑒定濾膜上生長的大腸菌群菌落即可推測計(jì)算出水樣中的大腸桿菌數(shù)；伊紅為酸性染料，美藍(lán)為堿性染料，大腸桿菌在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基的菌落呈深紫色，并有金屬光澤。
【詳解】
（1）圖甲中濾膜的孔徑應(yīng)小于大腸桿菌，才能將細(xì)菌截留在濾膜上。
（2）配制細(xì)菌的基礎(chǔ)培養(yǎng)基時，除了水分、無機(jī)鹽以外，還應(yīng)加入氮源（或蛋白胨），以及瓊脂。待各成分都溶化后和分裝前，要進(jìn)行調(diào)整pH并滅菌。
（3）將完成過濾之后的濾膜緊貼在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，就是在培養(yǎng)基上接種過濾出來的大腸桿菌。伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上生長的大腸桿菌菌落呈現(xiàn)深紫色（黑色）帶有金屬光澤，從功能上劃分，屬于鑒別培養(yǎng)基。
（4）接種后的平板需倒置，以防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染。將一個未接種的培養(yǎng)基也放入恒溫箱中培養(yǎng)作為對照以檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否滅菌合格。
（5）根據(jù)題意，該100ml樣本中有大操場桿菌31個，稀釋倍數(shù)為10倍，31÷100×1000×10＝3100則推測1升待測水樣中的大腸桿菌數(shù)目為3100個。
（6）變酸的果酒中可能有酵母菌和醋酸桿菌兩種微生物，它們在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別是酵母菌有（以核膜為界限的）細(xì)胞核，而醋酸菌沒有。藍(lán)藻細(xì)胞較普通細(xì)菌為大，為了減少細(xì)菌的干擾，應(yīng)選擇孔徑更大的濾膜，而作為自養(yǎng)型生物，可以不用在培養(yǎng)基中添加碳源，必須添加水、無機(jī)鹽、氮源。
【點(diǎn)睛】
本題考查微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)，培養(yǎng)基配制等，是基礎(chǔ)知識點(diǎn)的識記。
45．不同品牌的酸奶具有不同的口味。某研究小組利用含碳酸鈣的固體培養(yǎng)基探究甲、乙兩品牌酸奶中乳酸菌的類型是否相同(乳酸能夠溶解碳酸鈣，使培養(yǎng)基變得透明)。請回答下列問題：

（1）將甲、乙兩品牌酸奶中的乳酸菌純化，分別接種在含碳酸鈣的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，根據(jù)菌落周圍透明圈的大小，可確定酸奶中乳酸菌的類型。不同乳酸菌菌落透明圈大小不同的原因是________________________________________________。
（2）家庭制作酸奶時，在純牛奶中加入少量酸奶相當(dāng)于微生物培養(yǎng)技術(shù)中_______的操作。純牛奶變成酸奶，改變了口味但含有的能量減少，原因是 ____________。
（3）為長期保存純化的優(yōu)質(zhì)乳酸菌，可將菌液與___________充分混勻，置于-20℃的冷凍箱中保存。
（4）該研究小組進(jìn)一步探究甲品牌酸奶中乳酸菌數(shù)量，實(shí)驗(yàn)操作如下圖。接種微生物的方法有很多，圖中過程①②③所示的方法為______________，用該方法統(tǒng)計(jì)樣本菌落數(shù)后，所得數(shù)據(jù)需要乘以10n后，才可表示乳酸菌的數(shù)量(單位：個/ml)，這里的n=______，用該方法統(tǒng)計(jì)樣本菌落數(shù)時，同時需要做A、B、C三個平板，目的是_______________。如果平板菌落數(shù)超過300，一般還需進(jìn)一步__________。
【答案】（在相同時間內(nèi)）不同類型的乳酸菌產(chǎn)生乳酸的量不同，不同量的乳酸能夠溶解碳酸鈣的量不同，形成的透明圈大小不同接種乳酸菌在發(fā)酵時使牛奶中的營養(yǎng)成分發(fā)生改變，乳酸菌細(xì)胞呼吸消耗部分有機(jī)物，從而使能量減少滅菌的甘油稀釋涂布平板法 6 設(shè)置重復(fù)組，取平均值，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠稀釋
【分析】
本實(shí)驗(yàn)的原理是：由于乳酸菌分泌的乳酸能夠溶解碳酸鈣，使培養(yǎng)基變得透明，所以不同類型的乳酸菌分泌乳酸的量不同，分泌量多的產(chǎn)生的透明圈較大，而分泌量少的產(chǎn)生的透明圈則較小。因此可以根據(jù)菌落周圍透明圈的大小，來探究甲，乙兩品牌酸奶中乳酸菌的類型。
【詳解】
（1）(在相同時間內(nèi))不同類型的乳酸菌產(chǎn)生乳酸的量不同，不同量的乳酸能夠溶解碳酸鈣量不同，所以不同乳酸菌菌落形成的透明圈大小不同。
（2）在純牛奶中加入少量酸奶相當(dāng)于微生物培養(yǎng)技術(shù)中的接種操作。純牛奶變成酸奶，改變了口味但含有的能量減少，因?yàn)槿樗峋诎l(fā)酵時使牛奶中的營養(yǎng)成分發(fā)生改變，乳酸菌細(xì)胞呼吸消耗部分有機(jī)物，從而使能量減少。
（3）為長期保存純化的優(yōu)質(zhì)乳酸菌，可將菌液與滅菌的甘油充分混勻，置于-20℃的冷凍箱中保存。
（4）要對微生物計(jì)數(shù)可以采用活菌計(jì)數(shù)法或顯微鏡直接計(jì)數(shù)法，題目所給的圖片信息是采用的活菌計(jì)數(shù)法，具體操作是通過稀釋涂布平板法完成的。由①②的操作可知這時已對酸奶樣品稀釋了100倍， ②重復(fù)3次又稀釋了1000倍，從中取出0.1ml樣進(jìn)行涂布，所用到的量是原來的10-6，因此這里的n=6，用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時，要至少涂布3個平板，目的是設(shè)置重復(fù)組，取平均值，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)中30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，如果平板菌落數(shù)超過300，說明稀釋倍數(shù)不夠，一般還需進(jìn)一步稀釋。
【點(diǎn)睛】
本題考查微生物的分離和培養(yǎng)相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的識記能力和分析問題解決問題的能力。
46．綠水青山就是金山銀山，污水治理是生態(tài)文明建設(shè)的一項(xiàng)重要任務(wù)，利用微生物降解是水污染治理的有效手段之一。聚乙烯醇（PVA）是存在于化工污水中的一種難以降解的大分子有機(jī)物，PVA分解菌能產(chǎn)生PVA酶分解PVA，PVA與碘作用時能產(chǎn)生藍(lán)綠色復(fù)合物，當(dāng)PVA被分解時藍(lán)綠色復(fù)合物消失，形成白色透明斑，請回答下列問題：
成分
MgSO4
蛋白質(zhì)
X物質(zhì)
水
瓊脂
用量
5g
10g
7g
1000 mL
20g

（1）表中是篩選出能高效分解PVA的細(xì)菌的培養(yǎng)基配方，營養(yǎng)物質(zhì)X最可能為__________。
（2）若圖中污水取樣是從聚乙烯醇（PVA）污染的水體中采集，通過圖示過程分離出分解聚乙烯醇（PVA）的菌落，則進(jìn)行過程1的作用是__________
（3）若將100mL含有PVA分解菌的土壤樣品溶液稀釋104倍后，取0.1mL稀釋液均勻涂布在選擇培養(yǎng)基表面，測得菌落數(shù)的平均值為160個，空白對照組平板上未出現(xiàn)菌落，則100 mL原菌液中有PVA分解菌__________個，該接種方法是__________方法，通過該方法測量的菌落數(shù)值與實(shí)際值相比一般會__________（填“偏大”“偏小”或“相等”）。
（4）要鑒定分離出的細(xì)菌是否為PVA分解菌，培養(yǎng)PVA分解菌的培養(yǎng)基中除了加入必需的營養(yǎng)物質(zhì)外還需要加入_______用于鑒別PVA分解菌。若用上述培養(yǎng)基比較不同菌株降解PVA能力的大小，請用簡潔的語言寫出設(shè)計(jì)思路：____________
【答案】聚乙烯醇（或PVA）通過選擇培養(yǎng)增加PVA分解菌的數(shù)量 1．6×109 稀釋涂布平板法偏小碘用含相同PVA濃度的上述培養(yǎng)基來培養(yǎng)不同菌株，一定時間后，通過測定白色透明斑的大?。ɑ蛑睆剑﹣泶_定不同菌株降解PVA能力的大小
【分析】
1、選擇培養(yǎng)基是根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率。
2、微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。
【詳解】
（1）表格是篩選出能高效分解PVA的細(xì)菌的培養(yǎng)基配方，即該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的配制過程中應(yīng)該以PVA為唯一碳源，因此表中X物質(zhì)最可能為聚乙烯醇（PVA）。
（2）若圖中污水取樣是從聚乙烯醇（PVA）污染的水體中采集，通過圖示過程分離出分解聚乙烯醇（PVA）的菌落，則進(jìn)行的過程1為選擇培養(yǎng)，其作用是通過增加PVA分解菌的數(shù)量。
（3）要測定土壤稀釋液中微生物的數(shù)目，可在顯微鏡下用血細(xì)胞（血球）計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)。若將100mL含有PVA分解菌的土壤樣品溶液稀釋104倍后，取0.1mL稀釋液均勻涂布在選擇培養(yǎng)基表面，測得菌落數(shù)的平均值為160個，空白對照組平板上未出現(xiàn)菌落（說明制備的平板合格，且實(shí)驗(yàn)操作可靠），則100mL原菌液中有PVA分解菌=160÷0.1×104×100=1.6×109個；這種接種方法為稀釋涂布平板法，由于在涂布過程中會出現(xiàn)兩個或多個細(xì)菌聚集在一起只能產(chǎn)生一個菌落的情況，則會導(dǎo)致該方法的測量值與實(shí)際值相比一般會偏小的情況。
（4）根據(jù)題意可知，“PVA與碘作用時能產(chǎn)生藍(lán)綠色復(fù)合物，當(dāng)PVA被分解時藍(lán)綠色復(fù)合物消失，形成白色透明斑”，因此要鑒定分離出的細(xì)菌是否為PVA分解菌，培養(yǎng)PVA分解菌的培養(yǎng)基中還需要加入碘與PVA作用形成藍(lán)綠色復(fù)合物，若菌落周圍出現(xiàn)白色透明斑，則該菌為PVA分解菌。若用上述培養(yǎng)基比較不同菌株降解PVA能力的大小，設(shè)計(jì)思路如下：用含相同PVA濃度的上述培養(yǎng)基來培養(yǎng)不同菌株，一定時間后，通過測定白色透明斑的大小（或直徑）來確定不同菌株降解PVA能力的大小。
【點(diǎn)睛】
熟本題考查了微生物培養(yǎng)、分離和鑒別的原理和操作流程，考生能根據(jù)題目中的相關(guān)目的設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)過程是解答本題的另一關(guān)鍵，能提取題干中的有用信息并能合理的利用是解答本題的必備能力，稀釋涂布平板法的應(yīng)用及其計(jì)數(shù)特點(diǎn)和相關(guān)的計(jì)算也是本題的考查點(diǎn)。
47．尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料，經(jīng)微生物分解后能更好地被植物利用。某生物興趣小組試圖探究土壤中微生物對尿素是否有分解作用，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)并成功篩選到能高效分解尿素的細(xì)菌（目的菌）。培養(yǎng)基成分如下表所示。將表中物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到100 mL。實(shí)驗(yàn)過程如圖所示，回答下列問題：
KH2PO4
1．4 g
Na2HPO4
2．1 g
MgSO4·7H2O
0．2 g
葡萄糖
10 g
尿素
1 g
瓊脂
15 g

（1）該培養(yǎng)基能篩選出目的菌的原因是______________________。
（2）圖中將細(xì)菌轉(zhuǎn)到固體培養(yǎng)基上接種時，可采用的方法是_____________。初步篩選出來的菌種還需要進(jìn)一步的鑒定：在培養(yǎng)基中加入________指示劑，接種并培養(yǎng)初步篩選的菌種，若指示劑變成________色，則可說明該菌種能夠分解尿素。
（3）在實(shí)驗(yàn)中，下列材料或用具需要滅菌的是________，需要消毒的是________（填序號）。
①培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿
②玻棒、試管、錐形瓶和吸管
③實(shí)驗(yàn)操作者的雙手
（4）在進(jìn)行分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時，A同學(xué)從培養(yǎng)基上篩選出大約50個菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約20個菌落。A同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的原因可能有________（填序號）。
①所取土樣不同 ②培養(yǎng)基被污染
③接種操作錯誤 ④沒有設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)
【答案】尿素是唯一的氮源，只有能利用尿素的微生物才能生長平板劃線法或稀釋涂布平板法酚紅紅 ①和② ③ ①②③
【分析】
1、鑒別培養(yǎng)基依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計(jì)，在培養(yǎng)基中加入某種試劑或化學(xué)藥品而制成。
2、滅菌分為灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌，對接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等采用滅菌處理；消毒分為煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法，適用于操作空間、某些液體、雙手等。
3、微生物常見的接種的方法：
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)，在劃線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落；
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。
【詳解】
（1）該培養(yǎng)基中不加其他氮素，只以尿素作為唯一氮源，在此培養(yǎng)基上只有能夠產(chǎn)生脲酶將尿素分解的細(xì)菌（目的菌）才能獲得氮源，而不能分解尿素的細(xì)菌將因缺少氮源無法生長繁殖，故能從眾多微生物中篩選出能分解尿素的目的菌。
（2）題圖中可采用稀釋涂布平板法或平板劃線法將細(xì)菌接種到固體培養(yǎng)基上，以便于獲得單菌落繼續(xù)培養(yǎng)。分解尿素的細(xì)菌能合成脲酶，脲酶能將尿素分解成NH3，NH3會使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，因此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素。
（3）微生物培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，需要對培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿，玻璃棒、試管、錐形瓶和吸管進(jìn)行滅菌處理；對實(shí)驗(yàn)操作者的雙手進(jìn)行消毒。故需要滅菌的是①②，需要消毒的是③。
（4）該同學(xué)與其他同學(xué)獲得的菌落數(shù)差異很大，可能的原因是采用的土樣不同，培養(yǎng)基滅菌不徹底，培養(yǎng)基被污染；或者是實(shí)驗(yàn)過程中沒有進(jìn)行無菌操作，或者是接種操作錯誤。故選①②③。
【點(diǎn)睛】
對于微生物培養(yǎng)技術(shù)、選擇培養(yǎng)基的選擇作用、培養(yǎng)基為微生物提供的營養(yǎng)成分、植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基的成分、常用的接種方法和具體操作過程的理解把握知識點(diǎn)間的內(nèi)在聯(lián)系是解題的關(guān)鍵。
48．氰化物是指含有CN基團(tuán)的化合物，許多氰化物有劇毒，極少量就會使生物在短時間內(nèi)中毒死亡。世界衛(wèi)生組織《飲用水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，必須嚴(yán)格控制水中氰化物的含量，含有氰化物的廢水要經(jīng)過處理才能排放。采用生物法降解氰化物是減輕水中氰化物污染的有效途徑之一。自然界中對氰化物有降解能力的微生物約有50種，它們能產(chǎn)生氰（腈）水合酶和氰（腈）水解酶等，最終將氰化物中的C和N轉(zhuǎn)變?yōu)镃O2和NH3。
（1）欲從水體中分離出能夠降解氰化物的微生物，首先應(yīng)制備兩種培養(yǎng)基，一種是牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，另一種是以______作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。然后將兩種培養(yǎng)基倒平板，設(shè)置如下表所示的對照組和實(shí)驗(yàn)組：
對照組
實(shí)驗(yàn)組
①______
②______
③已接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板
④
對照組①、②分別為______。若對照組的平板上沒有菌落生長，說明培養(yǎng)基在使用前未被雜菌污染；若實(shí)驗(yàn)組③平板上的菌落數(shù)顯著多于同一稀釋度的④平板上的菌落數(shù)，說明______。
（2）用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)能夠降解氰化物的微生物時，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)就能推測出樣品中的活菌數(shù)，原因是______。計(jì)數(shù)時，同一個稀釋濃度下應(yīng)至少對______個平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)。若某同學(xué)在4個平板培養(yǎng)基上分別接種稀釋倍數(shù)為106的菌液0.1mL，培養(yǎng)后菌落數(shù)分別為155、160、176、149個，則每毫升原菌液中上述目的菌的數(shù)量約為______。經(jīng)實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)出的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少，原因是______。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行______處理才能倒掉，以防造成環(huán)境污染。
（3）脫除污水中氰化物的方法有多種，目前采用較多的是化學(xué)氧化法，但該處理過程中易產(chǎn)生毒性比HCN更大的揮發(fā)性氣體CNCl。與化學(xué)氧化法相比，生物降解法具有更好的應(yīng)用前景，原因是______。
【答案】氰化物未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板和未接種的選擇培養(yǎng)基平板選擇培養(yǎng)基具有選擇作用平板上的一個菌落一般來源于稀釋液中的一個活菌 3 1.6×109 當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落滅菌生物降解法能將氰化物徹底分解成CO2和NH3等產(chǎn)物，比化學(xué)方法更安全
【分析】
培養(yǎng)基的概念及營養(yǎng)構(gòu)成
（1）概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。
（2）營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求．例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細(xì)菌時需將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧微生物時則需要提供無氧的條件。
選擇培養(yǎng)基是指一類根據(jù)特定微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某理化因素抗性的原理而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。具有只允許特定的微生物生長，而同時抑制或阻止其他微生物生長的功能。
【詳解】
（1）欲從水體中分離出能夠降解氰化物的微生物，首先應(yīng)制備兩種培養(yǎng)基，一種是牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，另一種是以氰化物作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。然后將兩種培養(yǎng)基倒平板，設(shè)置如下表所示的對照組和實(shí)驗(yàn)組，對照組的作用是為了說明培養(yǎng)基是否合格，因此，對照組①、②分別為　　　　　　未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板和未接種的選擇培養(yǎng)基平板，若相同的時間內(nèi)，對照組培養(yǎng)基上無菌落出現(xiàn)，則說明實(shí)驗(yàn)組的數(shù)據(jù)具有說服力，④的處理是接種了等量菌種的選擇培養(yǎng)基（以氰化物作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基）；若實(shí)驗(yàn)組③平板上的菌落數(shù)顯著多于同一稀釋度的④平板上的菌落數(shù)，說明選擇培養(yǎng)基具有選擇作用。
（2）用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)能夠降解氰化物的微生物時，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)就能推測出樣品中的活菌數(shù)，因?yàn)楫?dāng)稀釋倍數(shù)足夠高時，就可以在平板上獲得由一個活菌長成的菌落，因此，此時的菌落數(shù)可代表稀釋液中的活菌數(shù)。計(jì)數(shù)時，同一個稀釋濃度下應(yīng)至少對3個平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求平均值，這樣可以減小實(shí)驗(yàn)誤差。若某同學(xué)在4個平板培養(yǎng)基上分別接滅菌處理才能倒掉，這樣可避免微生物對環(huán)境造成污染。
（3）脫除污水中氰化物的方法有多種，目前采用較多的是化學(xué)氧化法，但該處理過程中易產(chǎn)生毒性比HCN更大的揮發(fā)性氣體CNCl。而對氰化物有降解能力的微生物能產(chǎn)生氰（腈）水合酶和氰（腈）水解酶等，在這些酶的催化下，最終將氰化物中的C和N轉(zhuǎn)變?yōu)镃O2和NH3，CO2和NH3可被植物吸收利用，不會造成污染，因此，與化學(xué)氧化法相比，生物降解法具有更好的應(yīng)用前景。
【點(diǎn)睛】
熟知微生物培養(yǎng)基的制備和培養(yǎng)基的種類是解答本題的關(guān)鍵，掌握兩種接種方法是解答本題的前提，能根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑O(shè)計(jì)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)，并理解微生物在治理環(huán)境污染上的應(yīng)用前景是解答本題的另一關(guān)鍵。
49．近年來，高氨氮廢水的處理不當(dāng)以及持續(xù)排放，導(dǎo)致了水體污染的日益嚴(yán)重。生物脫氮法相對于物化法來說，工藝簡單、處理成本低、無二次污染，是較好的氨氮廢水處理方法。某科研團(tuán)隊(duì)從湖底污泥中分離、篩選出能降解氨氮的菌株，并研究其降解氨氮的最適條件，包括培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、起始的pH等，實(shí)驗(yàn)步驟如下?；卮鹣铝袉栴}：
（1）步驟一：將1g水底污泥加入9 mL無菌水中制成懸液，接種至100mL液體培養(yǎng)基中，于30℃的溫度條件下在搖床中培養(yǎng)7天。期間，每天向培養(yǎng)基中加入1mL濃度為5％的（NH4）2SO4溶液，這項(xiàng)操作的目的是______________________________。
（2）步驟二：將培養(yǎng)后的菌液用____________法涂布到分離培養(yǎng)基中，倒置于30℃的恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)至長出菌落。若平板中菌落過于密集，應(yīng)進(jìn)一步_______________________。反復(fù)分離純化，至同一平板中只出現(xiàn)同種形態(tài)的菌落。
（3）步驟三：將篩選分離后的各菌株分別接種到氨氮含量為120 mg·L﹣1的液體篩選培養(yǎng)基（模擬高濃度氨氮水樣）中，在30℃的溫度條件下?lián)u瓶培養(yǎng)24小時后，取培養(yǎng)液進(jìn)行離心10分鐘，取其上清液，_________________，從而計(jì)算出各個降解菌的氨氮降解率。
（4）步驟四：將篩選出的最優(yōu)菌種于30℃的溫度條件下在搖床中培養(yǎng)24小時。每隔2小時對培養(yǎng)基進(jìn)行測定，研究降解氨氮的最佳培養(yǎng)時間。下圖是某菌株的氨氮降解率曲線圖，據(jù)圖可以得到的結(jié)論有_______（寫出兩點(diǎn)）。

（5）步驟五：若要探究所分離純化出的菌株對氨氮降解的最適培養(yǎng)溫度，實(shí)驗(yàn)思路是：____________________________________________________________________________________________。
【答案】篩選出能降解并耐受高氨氮的菌株稀釋涂布平板法稀釋測量上清液中氨氮的殘余量 ①氨氮降解率達(dá)到一定值后則不再隨培養(yǎng)時間的延長而增加，②培養(yǎng)4小時后，該菌株的氨氮降解率即可達(dá)到50%，培養(yǎng)14小時后，降解率可以達(dá)到90%。設(shè)置一系列的溫度梯度，其他條件相同且適宜，將分離純化出的菌株和氨氮含量為120 mg·L﹣1的液體篩選培養(yǎng)基（模擬高濃度氨氮水樣）分組編號，在各溫度下分別保溫，將相同溫度條件下的菌株接種到培養(yǎng)基中，繼續(xù)保溫24小時，測定各組的降解菌的氨氮降解率。
【分析】
1、純化微生物的方法：（1）通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。（2）稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。
2、圖是某菌株的氨氮降解率曲線圖，據(jù)圖可知，實(shí)驗(yàn)最初4小時，隨著培養(yǎng)時間增加，氨氮降解率持續(xù)增加達(dá)到50%，在4~10小時，氨氮降解率略有增加幾乎不變，10~14小時，氨氮降解率再次增加達(dá)到90%，14小時之后，氨氮降解率不再變化。
【詳解】
（1）以（NH4）2SO4為唯一氮源的培養(yǎng)液屬于選擇培養(yǎng)基，只有能利用銨鹽的微生物才能生存，且不斷升高銨鹽的濃度，故目的是篩選出能降解并耐受高氨氮的菌株。
（2）將培養(yǎng)后的菌液用稀釋涂布平板法涂布到分離培養(yǎng)基中，倒置于30℃的恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)獲得菌落。若平板中菌落過于密集，應(yīng)進(jìn)一步稀釋，再涂布到分離培養(yǎng)基中，直到獲得單菌落。
（3）將篩選分離后的各菌株分別接種到氨氮含量為120 mg·L﹣1的液體篩選培養(yǎng)基（模擬高濃度氨氮水樣）中，在30℃的溫度條件下?lián)u瓶培養(yǎng)24小時后，取培養(yǎng)液進(jìn)行離心10分鐘，取其上清液，測量上清液中氨氮的殘余量，進(jìn)而計(jì)算出實(shí)驗(yàn)前后氨氮含量的減少量，從而計(jì)算出各個降解菌的氨氮降解率。
（4）圖是某菌株的氨氮降解率曲線圖，據(jù)圖可知，實(shí)驗(yàn)最初4小時，隨著培養(yǎng)時間增加，氨氮降解率持續(xù)增加達(dá)到50%，在4~10小時，氨氮降解率略有增加幾乎不變，10~14小時，氨氮降解率再次增加達(dá)到90%，14小時之后，氨氮降解率不再變化，據(jù)此可知，①該菌降的氨氮降解率和培養(yǎng)時間并非線性關(guān)系，氨氮降解率達(dá)到一定值后則不再隨培養(yǎng)時間的延長而增加，②培養(yǎng)4小時后，該菌株的氨氮降解率即可達(dá)到50%，培養(yǎng)14小時后，降解率可以達(dá)到90%。
（5）設(shè)置一系列的溫度梯度，其他條件相同且適宜，將分離純化出的菌株和氨氮含量為120 mg·L﹣1的液體篩選培養(yǎng)基（模擬高濃度氨氮水樣）分組編號，在各溫度下分別保溫，將相同溫度條件下的菌株接種到培養(yǎng)基中，繼續(xù)保溫24小時，測定各組的降解菌的氨氮降解率。
【點(diǎn)睛】
本題以篩選能降解氨氮的菌株為背景，考查微生物的培養(yǎng)、分離等相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的實(shí)際應(yīng)用能力和分析問題解決問題的能力。
50．營養(yǎng)缺陷型菌株就是在人工誘變或自發(fā)突變后，微生物細(xì)胞代謝調(diào)節(jié)機(jī)制中的某些酶被破壞，使代謝過程中的某些合成反應(yīng)不能進(jìn)行的菌株。這種菌株能積累正常菌株不能積累的某些代謝中間產(chǎn)物，為工業(yè)生產(chǎn)提供大量的原料產(chǎn)物。以下是實(shí)驗(yàn)人員利用影印法初檢氨基酸缺陷型菌株的過程。請回答下列問題：

（1）過程①的接種方法為___________。從培養(yǎng)基成分分析，基本培養(yǎng)基與完全培養(yǎng)基存在差異的成分是_________________。
（2）進(jìn)行②過程培養(yǎng)時，應(yīng)先將絲絨布轉(zhuǎn)印至基本培養(yǎng)基上，從____________培養(yǎng)基上獲得相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型菌株。
（3）統(tǒng)計(jì)菌落種類和數(shù)量時要每隔24 h觀察統(tǒng)計(jì)一次，直到各類菌落數(shù)目穩(wěn)定，以防止培養(yǎng)時間不足導(dǎo)致________，或培養(yǎng)時間太長導(dǎo)致_________________。
（4）為了進(jìn)一步完成對初檢的營養(yǎng)缺陷型菌株的鑒定，實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行了如下操作：
①用接種針挑取__________（填“菌落A”或“菌落B”）接種于盛有完全培養(yǎng)液的離心管中，28 ℃振蕩培養(yǎng)1~2天后，離心，取沉淀物用無菌水洗滌3次，并制成菌懸液。
②吸取1 mL菌懸液加入無菌培養(yǎng)皿中，傾注15 mL融化并冷卻至50 ℃左右的基本培養(yǎng)基，待其冷凝后用記號筆在_______________（填“ 皿蓋”或“皿底”）劃分五個區(qū)域，標(biāo)記A、B、C、D、E。
③在劃分的五個區(qū)域上放入少量分組的氨基酸粉末（如下表所示），經(jīng)培養(yǎng)后，觀察生長圈出現(xiàn)的區(qū)域，從而確定屬于何種氨基酸缺陷型。
組別

A
組氨酸
蘇氨酸
谷氨酸
天冬氨酸
亮氨酸
B
精氨酸
蘇氨酸
賴氨酸
甲硫氨酸
苯丙氨酸
C
酪氨酸
谷氨酸
賴氨酸
色氨酸
丙氨酸
D
甘氨酸
天冬氨酸
甲硫氨酸
色氨酸
絲氨酸
E
半胱氨酸
亮氨酸
苯丙氨酸
丙氨酸
絲氨酸
在上述鑒定實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基A、D區(qū)域出現(xiàn)生長圈，說明該營養(yǎng)缺陷型菌株屬于______。
【答案】稀釋涂布平板法氨基酸完全遺漏菌落的種類和數(shù)目菌落粘連影響計(jì)數(shù)、培養(yǎng)基表面干燥脫水、微生物衰敗菌落特征不易觀察菌落A 皿底天冬氨酸缺陷型
【分析】
分析題圖：圖中首先利用稀釋涂布平板法分離細(xì)菌，然后運(yùn)用“影印法”將菌種接種到兩種培養(yǎng)基中：基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基。在基本培養(yǎng)基中，氨基酸缺陷型菌株不能生長；而在完全培養(yǎng)基中能夠生長，據(jù)此可以選擇出氨基酸缺陷型菌株。
【詳解】
（1）根據(jù)過程①所得培養(yǎng)基中菌落的分布結(jié)可以判斷，該過程所采用的接種方法為稀釋涂布平板法，圖示為利用影印法初檢氨基酸缺陷型菌株的過程，據(jù)此可知，與基本培養(yǎng)基（只含碳源、無機(jī)鹽、水）相比，完全培養(yǎng)基中的特有的成分為氨基酸。
（2）為了防止將特定營養(yǎng)成分帶入培養(yǎng)基，進(jìn)行②過程培養(yǎng)時，應(yīng)先將絲絨布轉(zhuǎn)印至基本培養(yǎng)基上。在基本培養(yǎng)基中，氨基酸缺陷型菌株不能生長，而在完全養(yǎng)基中能夠生長，因此從完全培養(yǎng)基上可獲得相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型菌株。
（3）統(tǒng)計(jì)菌落種類和數(shù)量時要每隔2h觀察統(tǒng)計(jì)一次，直到各類菌落數(shù)目穩(wěn)定，以防止因?yàn)榕囵B(yǎng)時間不足遺漏菌落的種類和數(shù)目，或培養(yǎng)時間太長導(dǎo)致菌落粘連影響計(jì)數(shù)、培養(yǎng)基表面干燥脫水、微生物衰敗菌落特征不易觀察。
（4）①在基本培養(yǎng)基中，氨基酸缺陷型菌株不能生長，而在完全培養(yǎng)基中能夠生長，因此圖中菌落A應(yīng)該為氨基酸缺陷型菌祩，則用接種針挑取菌落A接種于盛有完全培養(yǎng)液的離心管中，28℃振蕩培養(yǎng)1～2天后，離心，取沉淀物用無菌水洗滌3次，并制成菌懸液；
②吸取1mL菌懸液加入無菌培養(yǎng)皿中，傾注15mL融化并冷卻至45～50℃的基本培養(yǎng)基，待其冷凝后用記號筆在皿底劃分五個區(qū)城，標(biāo)記A、B、C、D、E；
③根據(jù)表中信息顯示：A、D區(qū)城含有、其他區(qū)域不含有的氨基酸是天冬氨酸，而實(shí)驗(yàn)結(jié)果只有A、D區(qū)城出現(xiàn)生長圖，說明該營養(yǎng)缺陷型菌株屬于天冬氨酸缺陷型。
【點(diǎn)睛】
本題以圖文結(jié)合的形式綜合考查學(xué)生對微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)、微生物的分離與計(jì)數(shù)等相關(guān)知識的識記和理解能力，解答本題需熟記并理解相應(yīng)的基礎(chǔ)知識并形成清晰的知識網(wǎng)絡(luò)。
51．丙烯腈（結(jié)構(gòu)式為）是一種重要的化工原料，會對環(huán)境造成較大污染。丙烯腈水解酶產(chǎn)生菌能將丙烯腈轉(zhuǎn)化為丙烯酸，在工業(yè)生產(chǎn)和環(huán)境治理上具有重要的作用。下圖為實(shí)驗(yàn)室中篩選丙烯腈水解酶產(chǎn)生菌的過程。

（1）②號試管中微生物的種類少于①號，原因是②號試管中的培養(yǎng)基以______為唯一氮源，對微生物具有______作用。
（2）Ⅱ號培養(yǎng)基采用的接種方法是_______________，進(jìn)行該操作的目的是__________。
（3）溴甲酚紫乙醇溶液是一種酸堿指示劑，變色范圍為pH5.2（黃色）~6.8（紫色），可用于丙烯腈水解酶產(chǎn)生菌菌落的篩選。在Ⅰ號培養(yǎng)基中加入溴甲酚紫乙醇溶液，培養(yǎng)一段時間后，應(yīng)挑選黃色透明圈直徑______（填“大”或“小”）的菌落繼綾培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中會形成黃色透明圈的原因是____________________。
（4）將Ⅱ號培養(yǎng)基中挑出的菌落繼續(xù)接種至液體培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大化培養(yǎng)，此過程中需要將培養(yǎng)裝置置于搖床上培養(yǎng)，目的是____________________。
【答案】丙烯腈選擇（篩選）平板劃線法在平板上得到由單個細(xì)胞形成的菌落大培養(yǎng)過程中丙烯腈水解酶產(chǎn)生菌產(chǎn)生的丙烯腈水解酶將丙烯腈分解為丙酸，使菌落周圍的pH降低，使溴甲酚紫乙醇溶液變黃增加培養(yǎng)液中氧氣含量，有利于營養(yǎng)物質(zhì)的充分利用
【分析】
分析圖示可知，①②兩個試管屬于富集培養(yǎng)，I 號培養(yǎng)基為稀釋涂布平板法接種，Ⅱ號培養(yǎng)基為平板劃線法接種。
【詳解】
（1）②號試管中微生物的種類少于①號，說明②號試管為選擇培養(yǎng)基，丙烯腈水解酶產(chǎn)生菌能將丙烯腈轉(zhuǎn)化為丙烯酸，所以②號試管中的培養(yǎng)基以丙烯腈為唯一氮源，不能以丙烯腈為氮源的微生物不能在此培養(yǎng)液中生長，故對微生物具有選擇作用。
（2）據(jù)圖可知，Ⅱ號培養(yǎng)基采用的接種方法是平板劃線法，目的是在平板上得到由單個細(xì)胞形成的菌落。
（3）溴甲酚紫乙醇溶液是一種酸堿指示劑，變色范圍為pH5.2（黃色）~6.8（紫色），可用于丙烯腈水解酶產(chǎn)生菌菌落的篩選。由于丙烯腈水解酶產(chǎn)生菌能將丙烯腈轉(zhuǎn)化為丙烯酸，使菌落周圍的pH降低，使溴甲酚紫乙醇溶液變黃，故在Ⅰ號培養(yǎng)基中加入溴甲酚紫乙醇溶液，培養(yǎng)一段時間后，應(yīng)挑選黃色透明圈直徑大的菌落繼綾培養(yǎng)。
（4）將培養(yǎng)裝置置于搖床上培養(yǎng)，目的是增加培養(yǎng)液中氧氣含量，有利于營養(yǎng)物質(zhì)的充分利用。
【點(diǎn)睛】
本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，意在考查考生對所學(xué)知識的應(yīng)用能力。
52．PET全稱為“聚對苯二甲酸乙二酯”，是以石油為原料制造的常見化工材料，廣泛用于生產(chǎn)食品容器和電子產(chǎn)品，而PET塑料制品廢棄后在自然界中極難降解，成為塑料“白色污染”的主要來源。為篩選出能高效分解PET塑料的微生物，某團(tuán)隊(duì)進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)，回答下列問題：
（1）硏究人員在垃圾填埋場的PET塑料瓶殘骸尋找目的菌株的原因是_____。
（2）在篩選所需微生物時，以PET顆粒和薄膜為唯一碳源的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，其中PET可以為微生物的生存提供_____和_____（從細(xì)胞呼吸意義的角度考慮）。對配制好的培養(yǎng)基用_____法進(jìn)行滅菌，而對接種環(huán)用_____法滅菌。待長出菌落后，直接挑取菌落采用_____（接種方法）將菌落接種至PET顆粒（2g·L-1）無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基和無PET顆粒的無機(jī)鹽培養(yǎng)基，最終篩選純化得到能夠?qū)ET塑料具有降解作用的菌株。將菌落接種至無PET顆粒的無機(jī)鹽培養(yǎng)基的目的是_____。
（3）已知含有PET顆粒的培養(yǎng)基具有不透明的特點(diǎn)，微生物將PET顆粒分解后，培養(yǎng)基呈現(xiàn)出透明圈。據(jù)圖判斷，應(yīng)該選擇_____（填“A”、“B”、“C”、“D”、“E”）為選擇的菌種，判斷的理由是_____。

【答案】該環(huán)境下淘汰了絕大多數(shù)微生物，而能高效分解PET塑料的細(xì)菌含量較高生命活動所需的能量合成其他有機(jī)物所需的原料高壓蒸汽灼燒平板劃線法作為（陰性）對照（，排除為自養(yǎng)型微生物） E 透明圈直徑與菌落直徑的比值與微生物對PEP的分解能力成正相關(guān)，而菌落E的兩者比值最大
【分析】
１、微生物的接種方法很多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法，平板劃線的操作是將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅，然后在在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開盛有菌液的試管的棉塞，將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，沾取一環(huán)菌液，將試管口通過火焰，塞上棉塞。
２、分析題意，PET為含碳有機(jī)物，可為微生物的生存提供碳源；PEP降解后形成的透明圈越大，說明被降解的越多，菌落面積的大小，說明微生物數(shù)目的多少。
【詳解】
（1）在尋找目的菌株時，要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找，因此研究人員在垃圾填埋場的PET塑料瓶殘骸尋找目的菌株的原因是該環(huán)境下淘汰了絕大多數(shù)微生物，而PET細(xì)菌含量較高。
（2）以PET顆粒和薄膜為唯一碳源的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，其中PET可以為微生物的生存提供生命活動提供能量和為其他有機(jī)物的合成提供原料。對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時，多采取高壓蒸汽滅菌法，而對接種環(huán)用灼燒滅菌。待長出菌落后，采用平板劃線法（該方法簡單）將菌落接種至PET顆粒（2g·L-1）無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基和無PET顆粒的無機(jī)鹽培養(yǎng)基，最終篩選純化得到能夠?qū)ET塑料具有降解作用的菌株。將菌落接種至無PET顆粒的無機(jī)鹽培養(yǎng)基的目的是作為陰性對照，排除為自養(yǎng)型微生物。
（3）透明圈是由于PEP降解后形成的，透明圈越大，說明被降解的越多，菌落面積的大小，說明微生物數(shù)目的多少，因此透明圈直徑與菌落直徑的比值與微生物對PEP的分解能力成正相關(guān)，應(yīng)選擇菌落E作為菌種。
【點(diǎn)睛】
本題以塑料分解菌的篩選為情境，考查的必備知識是微生物的培養(yǎng)、篩選；考查的關(guān)鍵能力是實(shí)驗(yàn)探究能力。
53．某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機(jī)化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌（目的菌）。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所示。請分析回答下列問題：

（1）培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是篩選________，這種培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。
（2）轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)基時，常采用________和稀釋涂布平板法進(jìn)行接種，在前一種方法接種過程中所用的接種工具是________，這種工具在操作時采用的滅菌方法是________。
（3）某同學(xué)計(jì)劃統(tǒng)計(jì)污水池中目的菌的總數(shù)，他選用104、105、106稀釋液進(jìn)行涂布平板，每種稀釋液都設(shè)置3個重復(fù)組，各吸取0．1 mL稀釋液涂布平板，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間后，對平板的菌落數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果如下：
稀釋度/倍
104
105
106
平板
1
2
3
1
2
3
1
2
3
平板菌落數(shù)/個
432
421
445
78
67
74
9
6
8
為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，應(yīng)選擇上述稀釋________倍的平板菌落數(shù)作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果，計(jì)算出每毫升樣品中目的菌菌株數(shù)為______個。
（4）測定微生物的數(shù)量常采用_______法，其統(tǒng)計(jì)的數(shù)值往往比實(shí)際數(shù)目低，原因是_________________。
【答案】目的菌選擇平板劃線法接種環(huán) 灼燒滅菌 105 7．3×107 稀釋涂布平板兩個或多個細(xì)胞連在一起時，觀察到的只是一個菌落
【分析】
1、培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)；培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。在提供上述幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的要求。
2、微生物常見的接種的方法：（1）平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。（2）稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。
【詳解】
（1）由題干信息可知，本實(shí)驗(yàn)的目的是篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌，故該培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是為分解化合物A的微生物（目的菌）提供碳源和氮源，分離出能分解化合物A的微生物，不能分解化合物A的微生物不能在此培養(yǎng)基上生長，所以該培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基。
（2）轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)基時，常采用平板劃線法和稀釋涂布平板法進(jìn)行接種，平板劃線法接種過程中所用的接種工具是接種環(huán)，接種環(huán)需要灼燒滅菌。
（3）菌體計(jì)數(shù)時需要選擇菌落數(shù)在30～300之間的稀釋倍數(shù)，根據(jù)表格數(shù)據(jù)可知，應(yīng)選擇上述稀釋105倍的平板菌落數(shù)作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果，每毫升樣品中目的菌菌株數(shù)為（78+67+74）÷3÷0．1×105=7．3×107個。
（4）測定微生物的數(shù)量常采用稀釋涂布平板法，由于平板上兩個或多個細(xì)胞連在一起時，觀察到的只是一個菌落，故用該方法統(tǒng)計(jì)的數(shù)值往往比實(shí)際數(shù)目低。
【點(diǎn)睛】
本題考查微生物的培養(yǎng)與計(jì)數(shù)的相關(guān)知識，意在考查考生微生物培養(yǎng)與選擇的實(shí)驗(yàn)，包括理解實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理、方法和操作步驟，掌握相關(guān)的操作技能，并能將這些實(shí)驗(yàn)涉及的方法和技能進(jìn)行綜合運(yùn)用的能力。
54．大熊貓是我國特有的珍稀野生動物，每只成年大熊貓每日進(jìn)食竹子量可達(dá)12～38kg。大熊貓可利用竹子中8%的纖維素和27%的半纖維素。研究人員從大熊貓糞便和土壤中篩選纖維素分解菌，回答下列問題：
（1）纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即_________。為篩選纖維素分解菌，將大熊貓新鮮糞便樣品稀釋液接種至以_________為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，該培養(yǎng)基從功能上分類屬于_________培養(yǎng)基。
（2）配制的培養(yǎng)基必須進(jìn)行滅菌處理，目的是_________。檢測固體培養(yǎng)基滅菌效果的常用方法是_________。
（3）纖維素分解菌的篩選用的是_________染色法。
（4）為高效降解農(nóng)業(yè)秸稈廢棄物，研究人員利用從土壤中篩選獲得的3株纖維素分解菌，在37℃條件下進(jìn)行玉米秸稈降解實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表所示。在該條件下纖維素酶活力最高的是菌株_________，理由是_________。
菌株
秸稈總重（g）
秸稈殘重（g）
秸稈失重（%）
纖維素降解率（%）
A
2．00
1．51
24．50
16．14
B
2．00
1．53
23．50
14．92
C
2．00
1．42
29．00
23．32
【答案】C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶纖維素選擇為殺死培養(yǎng)基中所有的微生物（殺死微生物、芽孢、孢子）不接種培養(yǎng)（或空白培養(yǎng)）剛果紅 C 接種C菌株后，秸稈失重最大，纖維素的降解率也最大
【分析】
分解纖維素的微生物分離的實(shí)驗(yàn)原理：（1）土壤中存在著大量纖維素分解酶，包括真菌、細(xì)菌和放線菌等，它們可以產(chǎn)生纖維素酶。纖維素酶是一種復(fù)合酶，可以把纖維素分解為纖維二糖，進(jìn)一步分解為葡萄糖被微生物加以利用，故在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長，其他微生物則不能生長。（2）在培養(yǎng)基中加入剛果紅，可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，紅色復(fù)合物不能形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，從而可篩選纖維素分解菌。
【詳解】
（1）纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長，其他微生物則不能生長。為篩選纖維素分解菌，將大熊貓新鮮糞便樣品稀釋液接種至以纖維素為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；培養(yǎng)基從功能上分類可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基，故該培養(yǎng)基從功能上分類屬于選擇培養(yǎng)基。
（2）配制的培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌法滅菌，即將培養(yǎng)基置于壓力100kPa、溫度121℃條件下維持15～30分鐘，目的是為了殺死培養(yǎng)基中的所有微生物（微生物和芽孢、孢子）。為檢測滅菌效果可對培養(yǎng)基進(jìn)行空白培養(yǎng)，即將未接種的培養(yǎng)基在適宜條件下培養(yǎng)一段時間，若在適宜條件下培養(yǎng)無菌落出現(xiàn)，說明培養(yǎng)基滅菌徹底，否則說明培養(yǎng)基滅菌不徹底。
（3）剛果紅可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，紅色復(fù)合物不能形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，從而可篩選纖維素分解菌，所以纖維素分解菌的篩選用的是剛果紅染色法。
（4）測定酶活力時可以用單位時間內(nèi)、單位體積中反應(yīng)物的減少量或產(chǎn)物的增加量來表示。由表格可知，在適宜的條件下，C菌株在相同的溫度和時間下，秸稈失重最多，纖維素降解率最大，說明該菌株的纖維素分解菌產(chǎn)生的纖維素酶活力最大。
【點(diǎn)睛】
本題考查微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)，要求考生識記培養(yǎng)基的種類及功能；掌握纖維素分解分離和鑒別的原理，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題。

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