?高考一輪生物復(fù)習(xí)策略
1、落實考點。
一輪復(fù)習(xí)時要在熟讀課本、系統(tǒng)掌握基礎(chǔ)知識、基本概念和基本原理后，要找出重點和疑點；通過結(jié)合復(fù)習(xí)資料，篩選出難點和考點，有針對地重點復(fù)習(xí)。這就需要在掌握重點知識的同時，要善于進行知識遷移和運用，提高分析歸納的能力。
2、注重理論聯(lián)系實際，高三生物的考試并不僅僅是考概念，學(xué)會知識的遷移非常重要，并要靈活運用課本上的知識。
不過特別強調(diào)了從圖表、圖形提取信息的能力。歷年高考試題，圖表題都占有比較大的比例。那些圖表題雖不是教材中的原圖，但它源于教材而又高于教材，是對教材內(nèi)容和圖表的變換、深化、拓展，使之成了考查學(xué)生讀圖能力、綜合分析能力、圖文轉(zhuǎn)換能力的有效途徑。
3、一輪復(fù)習(xí)基礎(chǔ)知識的同時，還要重點“攻堅”，突出對重點和難點知識的理解和掌握。
這部分知識通常都是學(xué)生難于理解的內(nèi)容，做題時容易出錯的地方。分析近幾年的高考生物試題，重點其實就是可拉開距離的重要知識點。　
4、學(xué)而不思則罔，思而不學(xué)則殆。
這一點對高三生物一輪復(fù)習(xí)很重要。尤其是對于錯題。錯題整理不是把錯題抄一遍。也不是所有的錯題都需要整理。

專題53 微生物的實驗室培養(yǎng)

1．培養(yǎng)基
(1)概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。
(2)營養(yǎng)組成：一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽。此外，還需要滿足微生物生長對pH、氧氣以及特殊營養(yǎng)物質(zhì)的要求。
(3)種類
①按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。
②按照成分的來源可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。
③按照功能用途可分為選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等。
2．無菌技術(shù)
(1)含義：在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。
(2)常用方法

3．大腸桿菌的純化培養(yǎng)
(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基
→→→→
(2)純化大腸桿菌的方法
①平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。
特別提醒　a．操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要進行火焰灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束時，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的如下表：

第一次操作
每次劃線之前
劃線結(jié)束
目的
殺死接種環(huán)上原有的微生物
殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少
殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者

b.灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。
c．第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落。
d．劃線時最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。
e．劃線用力大小要適當，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。
②稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。


(3)菌種的保存方法
①對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法。
②對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。
解題技巧
1．培養(yǎng)基的配制原則
(1)目的要明確：配制時應(yīng)根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類。
(2)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。
(3)pH要適宜：細菌為6.5～7.5，放線菌為7.5～8.5，真菌為5.0～6.0，培養(yǎng)不同微生物所需的pH不同。
2．微生物對主要營養(yǎng)物質(zhì)的需求特點
(1)自養(yǎng)型微生物所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)是無機鹽，碳源可來自大氣中的CO2，氮源可由含氮無機鹽提供。
(2)異養(yǎng)型微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)主要是有機物，即碳源必須由含碳有機物提供，氮源也主要是由有機物提供，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無機氮源。
兩種純化細菌方法的比較
項目
優(yōu)點
缺點
適用范圍
平板劃線法
可以觀察菌落特征，對混合菌進行分離
不能計數(shù)
適用于
好氧菌
稀釋涂布平板法
可以計數(shù)，可以觀察菌落特征
吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延
適用于厭氧菌和兼性厭氧菌

一、單選題
1．下列無菌操作錯誤的是（　　）
A．取出已經(jīng)過滅菌的物品時，容器蓋勿全開，能方便取出即可
B．取出已經(jīng)過滅菌的物品，如未使用，應(yīng)立即放回
C．疑有污染或己被污染時，應(yīng)更換或重新滅菌
D．手持無菌容器時應(yīng)托住底部，手只能觸及容器邊緣
【答案】B
【分析】
在微生物的實驗室培養(yǎng)中獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵。無菌技術(shù)圍繞著如何避免雜菌的污染展開，主要包括以下幾個方面：
1、對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒；
2、將用于微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌；
3、為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行；
4、實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。
【詳解】
A、周圍物品可能會含有雜菌，為防止雜菌污染，無菌技術(shù)操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍物品的接觸，取出已經(jīng)過滅菌的物品時，容器蓋勿全開，能方便取出即可，A正確；
B、取出已經(jīng)過滅菌的物品，如未使用，不應(yīng)立即放回，會污染其他物品，B錯誤；
C、疑有污染或己被污染時，應(yīng)更換或重新滅菌，達到無菌的要求，C正確；
D、手持無菌容器時應(yīng)托住底部，手只能觸及容器邊緣，防止污染無菌容器，D正確。
故選B。
2．氫氣是一種清潔能源，可由產(chǎn)氫菌群無氧發(fā)酵產(chǎn)生。科研人員從厭氧活性污泥中獲得產(chǎn)氫菌群，在分離、純化產(chǎn)氫菌群的操作中，為防止雜菌污染，對培養(yǎng)皿、接種環(huán)、涂布器，培養(yǎng)基等都可采用下列哪種方法處理? （ ）
A．巴氏消毒法 B．灼燒災(zāi)菌
C．干熱滅菌 D．高壓蒸汽滅菌
【答案】D
【分析】
實驗室常用的滅菌方法：
1、灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌。
2、干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌。
3、高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，為達到良好的滅菌效果，一般在壓力為100 kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30 min。
【詳解】
培養(yǎng)基不能通過灼燒滅菌和干熱滅菌的方法進行滅菌，玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）一般不用灼燒滅菌的方法滅菌，而巴氏消毒法是指在75℃煮30min或80℃煮15min進行殺菌，屬于消毒；故在分離、純化產(chǎn)氫菌群的操作中，為防止雜菌污染，對培養(yǎng)皿、接種環(huán)、涂布器，培養(yǎng)基等都可采用高壓蒸汽滅菌方法處理，即D符合題意。
故選D。
3．高溫滅菌的原理是（　?。?br /> A．微生物對高溫環(huán)境不適應(yīng)
B．高溫降低了環(huán)境中氧的濃度
C．每種微生物生長的最適溫度是一定的
D．高溫破壞了細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸，影響其生命活動
【答案】D
【分析】
高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，為達到良好的滅菌效果，一般在壓力為100 kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30 min。
【詳解】
蛋白質(zhì)和核酸是細胞表現(xiàn)生命活動的最重要物質(zhì)，它們都是高分子化合物，具有復(fù)雜的空間結(jié)構(gòu)，高溫能使他們的空間結(jié)構(gòu)受到破壞而失去活性，所以高溫滅菌的原理是高溫破壞了細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸，影響其生命活動，故選D。
4．下列操作不需要在酒精燈火焰旁進行的是（ ）
A．土壤取樣 B．平板劃線
C．稀釋土壤溶液 D．涂布平板
【答案】A
【分析】
無菌技術(shù)的主要內(nèi)容：①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒；②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌；③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行；④實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。
【詳解】
酒精燈火焰附近存在一個無菌區(qū)，平板劃線、稀釋土壤溶液、涂布平板操作都需要在酒精燈火焰附近進行，以免雜菌污染；土壤是微生物的土壤培養(yǎng)基，土壤取樣時不需要在酒精燈旁操作，A符合題意。
故選A。
5．牛奶消毒及細菌檢測實驗的過程如下圖所示，下列相關(guān)敘述正確的是（　?。?br />
A．步驟①為巴氏消毒法，這種方法可以殺死所有的微生物以及芽孢和孢子
B．實驗中試管、培養(yǎng)基可采用熱滅菌
C．實驗中采用稀釋涂布平板法計數(shù)，可能導(dǎo)致實驗結(jié)果偏高
D．稀釋涂布平板法操作中涂布器需經(jīng)灼燒滅菌冷卻后再涂布
【答案】D
【分析】
巴氏消毒法：采用較低溫度(一般在60～82℃)，在規(guī)定的時間內(nèi)，對食品進行加熱處理，達到殺死微生物營養(yǎng)體的目的，是一種既能達到消毒目的又不損害食品品質(zhì)的方法。獲取純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌污染。
【詳解】
A、①為巴氏消毒法，不能殺死所有芽孢和孢子，A錯誤；
B、實驗中試管用干熱滅菌，培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌，B錯誤；
C、采用稀釋涂布平板法計數(shù)，可能導(dǎo)致實驗結(jié)果偏低，原因是當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，C錯誤；
D、稀釋涂布平板法操作中涂布器需經(jīng)灼燒滅菌冷卻后再涂布，防止燒傷菌種，D正確。
故選D。
6．在三個培養(yǎng)皿中各加入等量但不同種的大腸桿菌培養(yǎng)基，在培養(yǎng)皿中培養(yǎng) 36 小時后，統(tǒng)計大 腸桿菌的菌落數(shù)（如表）。下列表述錯誤的是（ ）
培養(yǎng)皿
培養(yǎng)基成分
菌落數(shù)/個
Ⅰ
瓊脂、糖類
35
Ⅱ
瓊脂、糖類和維生素
250
Ⅲ
瓊脂和維生素
0
A．本實驗使用的是固體培養(yǎng)基
B．對照培養(yǎng)皿Ⅰ和Ⅱ，說明維生素是大腸桿菌需要的生長因子
C．對照培養(yǎng)皿Ⅱ和Ⅲ，說明糖類是大腸桿菌需要的碳源
D．對照培養(yǎng)皿Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ，說明瓊脂是培養(yǎng)基中必需的營養(yǎng)成分
【答案】D
【分析】
1、培養(yǎng)基的基本成分：水、無機鹽、碳源、氮源。
2、實驗設(shè)計的原則有單一變量原則和對照原則。該實驗設(shè)置的自變量是培養(yǎng)基中糖類和維生素的有無，因變量是培養(yǎng)基中的菌落數(shù)。為了確保實驗結(jié)果只是由自變量的不同引起的，應(yīng)當使對照實驗中的實驗組和對照組所處的溫度等環(huán)境條件都相同。
【詳解】
A、本實驗添加了瓊脂，使用的是固體培養(yǎng)基，A正確；
B、培養(yǎng)皿Ⅰ和Ⅱ的區(qū)別在于是否添加維生素，結(jié)果I中菌落數(shù)少于II中，說明維生素是大腸桿菌需要的生長因子，B正確；
C、培養(yǎng)皿Ⅱ和Ⅲ的區(qū)別在于是否添加糖類，結(jié)果II中的菌落數(shù)多而III中無菌落，說明糖類是大腸桿菌需要的碳源，C正確；
D、培養(yǎng)基的基本成分：水、無機鹽、碳源、氮源，瓊脂是凝固劑，不是營養(yǎng)成分，D錯誤。
故選D。
7．漆酶屬于木質(zhì)降解酶類，在環(huán)境修復(fù)、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域有著廣泛用途。下圖是分離、純化和保存漆酶菌株的過程，相關(guān)敘述正確的是（　?。?br />
A．生活污水中含有大量微生物，是分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品
B．選擇培養(yǎng)基中需要加入漆酶的底物作為唯一碳源
C．在已涂布的平板上直接劃線可以進一步純化獲得單菌落
D．斜面培養(yǎng)基中含有大量營養(yǎng)物質(zhì)，可在常溫下長期保存菌株
【答案】B
【分析】
稀釋平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細胞。計數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細胞分散開，使成單個細胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計菌落數(shù)目，即可計算出樣品中的含菌數(shù)。此法所計算的菌數(shù)是培養(yǎng)基上長出來的菌落數(shù)，故又稱活菌計數(shù)。一般用于某些成品檢定（如殺蟲菌劑等）、生物制品檢驗、土壤含菌量測定及食品、水源的污染程度的檢驗。
用途：一般多用于篩選菌株。一般用于平板培養(yǎng)基的回收率計數(shù)。
優(yōu)點：可以計數(shù)，可以觀察菌落特征。
缺點：吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延。如果菌液密度大的話，長不出單菌落。
【詳解】
A.生活污水中含有大量微生物，而漆酶屬于木質(zhì)降解酶類，因此污水中不一定含有產(chǎn)漆酶的菌株，A錯誤；
B.選擇培養(yǎng)基中需要加入漆酶的底物作為唯一碳源，通過菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落，從而獲得漆酶菌株，B正確；
C.劃線前需要將接種環(huán)進行滅菌，且利用平板劃線法需要連續(xù)劃線，才能逐漸分離得到單菌落，C錯誤；
D.短期保存可利用試管斜面培養(yǎng)基，在0-4℃冰箱中保存，長期保存菌株是在-20℃用甘油管藏，D錯誤。
故選：B。
8．如圖是實驗室培養(yǎng)和純化大腸桿菌過程中的部分操作步驟。下列說法錯誤的是（　?。?br />
A．①步驟使用的培養(yǎng)基已經(jīng)高溫高壓蒸汽滅菌且冷卻至50℃左右
B．②過程挑取菌種前后試管口均需通過火焰
C．③所示的接種方法不能用來進行細菌計數(shù)
D．④操作過程中，需灼燒接種環(huán)5次
【答案】D
【分析】
如圖是實驗室培養(yǎng)和純化大腸桿菌過程中的部分操作步驟，①是倒平板，②是用接種環(huán)沾取菌液，③是進行平板劃線，④是培養(yǎng)。
【詳解】
A、①步驟表示倒平板，使用的培養(yǎng)基已經(jīng)高溫高壓蒸汽滅菌且冷卻至50℃左右，A正確；
B、②過程挑取菌種前后試管口均需通過火焰，防止被雜菌污染，B正確；
C、③是進行平板劃線，平板劃線法開始得到的菌體是連在一起生長的，故該方法不能用于計數(shù)活菌，只能用于分離菌種，C正確；
D、接種環(huán)在每次接種前和接種結(jié)束后都要通過灼燒來滅菌，所以完成步驟④中5次劃線操作前都要灼燒滅菌，接種結(jié)束后還需灼燒滅菌1次，防止造成污染，由此可見，完成步驟④共需灼燒接種環(huán)6次，D錯誤。
故選D。
9．生長圖形法是一種測定微生物營養(yǎng)需求的簡便方法。為探究某嗜熱菌所需生長因子的種類，某研究小組把該菌的懸浮液與不含任何生長因子但含有其他必需營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基混合后倒成平板，然后在平板上劃分數(shù)區(qū)，將甲、乙、丙三種生長因子分別添加到不同區(qū)域，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示，下列說法正確的是（　?。?br />
A．本實驗不需要另外設(shè)置對照實驗
B．圖示結(jié)果表明該菌需要生長因子乙或丙
C．平板中添加完生長因子，待冷凝后需倒置培養(yǎng)
D．實驗結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基必需消毒后倒掉
【答案】C
【分析】
把某嗜熱菌的懸浮液與不含任何生長因子但含有其他必需營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基混合后倒成平板，然后在平板上劃分數(shù)區(qū)，將甲、乙、丙三種生長因子分別添加到不同區(qū)域，據(jù)圖可知，只在乙和丙交接處有微生物生長。
【詳解】
A、本實驗需要設(shè)置空白對照，判斷培養(yǎng)基配制是否合理，及沒有生長因子時的生長狀況，A錯誤；
B、由于只在乙和丙交接處有微生物生長，可判斷該菌生長需要的生長因子是乙和丙，B錯誤；
C、為了防止形成的冷凝水滴落在培養(yǎng)基上造成雜菌污染和培養(yǎng)基的水分過快蒸發(fā)，平板要倒置培養(yǎng)，C正確；
D、實驗結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該滅菌后再倒掉，消毒不一定能完全殺死孢子和芽孢，D錯誤。
故選C。
10．下列有關(guān)倒平板的操作，正確的是（　?。?br /> A．培養(yǎng)基冷卻到常溫再進行倒平板
B．培養(yǎng)皿打開后培養(yǎng)皿蓋倒放在桌面上
C．整個倒平板操作過程無需在酒精燈火焰旁進行
D．待平板冷卻凝固后需要倒過來放置
【答案】D
【分析】
倒平板操作的步驟：將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞；右手拿錐形瓶，將瓶口迅速通過火焰；用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋；等待平板冷卻凝固后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下、皿底在上，這樣可以防止皿蓋上的水分滴到培養(yǎng)基上造成培養(yǎng)基的污染。
【詳解】
A、已滅菌的培養(yǎng)基冷卻到大約50℃時可倒平板，A錯誤；
B、應(yīng)將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，而不是將培養(yǎng)皿打開，培養(yǎng)皿蓋倒放在桌子上，這樣可能會造成雜菌污染，B錯誤；
C、倒平板過程需要在酒精燈火焰旁進行，防止空氣中的雜菌污染，C錯誤；
D、待平板冷卻凝固后需要倒過來放置，防止皿蓋上的水珠滴落到培養(yǎng)基上，D正確。
故選D。
11．下列關(guān)于滅菌和消毒的敘述中，不正確的是（　?。?br /> A．滅菌是指殺滅環(huán)境中的一切微生物的細胞、芽孢和孢子
B．消毒和滅菌實質(zhì)上是相同的
C．接種環(huán)用灼燒法滅菌
D．常用滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
【答案】B
【分析】
使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外一切微生物的細胞、芽孢和孢子的過程稱為滅菌，常用的方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。消毒是指用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體體表或內(nèi)部的一部分微生物的過程，常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外線或化學(xué)藥物消毒法等。
【詳解】
A、滅菌是指采用強烈的理化因素殺死一定環(huán)境中所有微生物的細胞、芽孢和孢子的措施，是徹底殺死，A正確；
B、消毒是一種采用較溫和的理化因素殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的病原菌，而對被消毒物體基本無害的措施，是部分殺滅，故消毒和滅菌實質(zhì)上不相同， B錯誤；
C、接種環(huán)用灼燒法滅菌，C正確；
D、常用滅菌方法有灼燒法、干熱滅菌法、高壓蒸汽滅菌法，D正確。
故選 B。
12．細菌培養(yǎng)過程中分別采用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒、干熱滅菌等幾種不同的處理，這些方法依次用于殺死哪些部位的雜菌（ ）
A．接種環(huán)、手、培養(yǎng)基、涂布器 B．高壓鍋、手、接種環(huán)、培養(yǎng)基
C．培養(yǎng)基、手、接種環(huán)、試管 D．接種環(huán)、手、高壓鍋、培養(yǎng)皿
【答案】C
【分析】
消毒是使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）；殺菌是使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）。
【詳解】
高壓蒸汽滅菌鍋是滅菌的一個設(shè)備，通常用于培養(yǎng)基的滅菌；用酒精擦拭雙手是消毒的一種方法；火焰灼燒，可以迅速徹底地滅菌，適用于微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種環(huán)等金屬用具；干熱滅菌一般適用于玻璃器皿的滅菌，如試管。C符合題意。
故選C。
13．下表所示為某微生物培養(yǎng)基的配方，有關(guān)敘述錯誤的是（ ）
成分
含量
成分
含量
NaNO3
3 g
FeSO4
0．01 g
K2HPO4
1 g
(CH2O)
30 g
瓊脂
15 g
H2O
1 000 mL
MgSO4·7H2O
0．5 g
青霉素
0．1萬單位
A．依物理性質(zhì)劃分，該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基；依用途劃分，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基
B．本培養(yǎng)基中青霉素的添加滿足了微生物生長對特殊營養(yǎng)物質(zhì)的要求
C．由培養(yǎng)基的原料可知，所培養(yǎng)的微生物可以是酵母菌或毛霉，其同化作用類型是異養(yǎng)型
D．若用該培養(yǎng)基分離能分解尿素的細菌，應(yīng)除去青霉素和NaNO3，并應(yīng)加入尿素
【答案】B
【分析】
各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。培養(yǎng)基按其物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基三類。培養(yǎng)基按其特殊用途可分為加富培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂可以制作固體培養(yǎng)基。
【詳解】
A、從培養(yǎng)基成分看，配方中含有有瓊脂等凝固劑，屬于固體培養(yǎng)基；依用途劃分，該培養(yǎng)基中加入青霉素，因此屬于選擇培養(yǎng)基，A正確；
B、本培養(yǎng)基中青霉素的添加是為了篩選能夠抗青霉素的微生物，而非滿足微生物生長對特殊營養(yǎng)物質(zhì)的要求，B錯誤；
C、由培養(yǎng)基的原料可知，葡萄糖屬于有機碳源，因此所培養(yǎng)微生物的同化作用類型是異養(yǎng)型，培養(yǎng)的微生物可以是酵母菌或毛霉，C正確；
D、若用該培養(yǎng)基分離能分解尿素的細菌，應(yīng)以尿素為唯一氮源，故應(yīng)除去青霉素和NaNO3，并應(yīng)加入尿素，D正確。
故選B。
14．下列關(guān)于微生物培養(yǎng)及利用的敘述，正確的是（　?。?br /> A．利用尿素固體培養(yǎng)基可迅速殺死其他微生物，而保留利用尿素的微生物
B．酵母菌釀酒時，不能直接利用糯米淀粉發(fā)酵得到糯米酒
C．果膠經(jīng)過果膠酶和果膠甲酯酶水解后的產(chǎn)物是半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯
D．尿素固體培養(yǎng)基在滅菌并完全冷卻后再加入經(jīng)過濾滅菌的尿素溶液
【答案】B
【分析】
果膠是植物細胞壁以及胞間層的主要組成成分之一.它是由半乳糖醛酸聚合而成的一種高分子化合物，不溶于水，果膠酶能夠分解果膠，瓦解植物的細胞壁及胞間層，使榨取果汁變得更容易。果膠酶并不特指某一種酶，而是分解果膠的一類酶的總稱，包括多聚半乳糖醛酸酶和果膠酯酶等。
【詳解】
A、尿素固體培養(yǎng)基上只有能利用尿素的微生物可以正常生長，但不能迅速殺死其他微生物，A錯誤；
B、酵母菌釀酒時，只能利用糯米淀粉分解產(chǎn)生的葡萄糖發(fā)酵得到糯米酒，B正確；
C、果膠經(jīng)過果膠酶和果膠甲酯酶水解后的產(chǎn)物是半乳糖醛酸和甲醇，C錯誤；
D、制備尿素固體培養(yǎng)基時，在加入尿素溶液后再滅菌，D錯誤。
故選B。
15．下列對菌落的表述不正確的是（　　）
A．并不是所有培養(yǎng)基上都能形成菌落
B．菌落的形狀、大小、顏色等，可作為鑒別不同微生物的依據(jù)
C．一般情況下，培養(yǎng)基上的一個菌落可看做是一個種群
D．培養(yǎng)基上的每個菌落都是由單個菌體細胞大量繁殖而成
【答案】D
【分析】
菌落是指由微生物的一個細胞在或一堆同種細胞在適宜固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長繁殖到一定程度，形成肉眼可見的子細胞群體。
【詳解】
A、菌落是在固體培養(yǎng)基上形成的，因此并不是所有培養(yǎng)基上都能形成菌落，例如液體培養(yǎng)基，A正確；
B、菌落的特征，如形狀、大小、顏色等，可作為鑒別不同微生物的依據(jù)，B正確；
C、一般情況下，培養(yǎng)基上的一個菌落是由單個細胞經(jīng)過分裂形成的，是同種生物，可看做是一個種群，C正確；
D、培養(yǎng)基上的菌落也可能是由2個或多個連在一起的菌體細胞大量繁殖而成的，D錯誤。
故選D。
16．某同學(xué)在做“微生物的分離與培養(yǎng)”實驗時，下列滅菌方法中，操作正確的是（　?。?br /> A．在高壓蒸汽滅菌鍋外層鍋內(nèi)加適量水，放入裝有待滅菌物品的內(nèi)桶，關(guān)閉排氣閥，打開電源加熱
B．在干熱滅菌箱滅菌結(jié)束后，立即關(guān)掉電源，打開箱門，取出物品
C．采用紫外線照射滅菌時，可在物體表面噴灑適量石碳酸等化學(xué)抑菌劑，以加強消毒效果
D．在用灼燒法對接種環(huán)滅菌時，適當向灼燒后的接種環(huán)吹氣，以加速其冷卻
【答案】C
【分析】
實驗室常用的滅菌方法：
1、灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌。
2、干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌。
3、高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，為達到良好的滅菌效果，一般在壓力為100 kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30 min。
【詳解】
A、在高壓蒸汽滅菌鍋外層鍋內(nèi)加適量水，放入裝有待滅菌物品的內(nèi)桶，打開電源加熱，把鍋內(nèi)水加熱煮沸并將其中原有冷空氣徹底排出后，關(guān)閉排氣閥，將鍋密閉，A錯誤；
B、在干熱滅菌箱滅菌結(jié)束后，立即關(guān)掉電源，等溫度下降至室溫后再打開箱門，取出物品，B錯誤；
C、采用紫外線照射滅菌時，可在物體表面噴灑適量石碳酸等化學(xué)抑菌劑，可以加強消毒效果，C正確；
D、在用灼燒法對接種環(huán)滅菌時，可將灼燒后的接種環(huán)接觸菌種瓶內(nèi)壁，以加速其冷卻，D錯誤。
故選C。
17．下列能用固體培養(yǎng)基進行直接計數(shù)的是（ ）
A．一種癌細胞 B．濃縮培養(yǎng)的噬菌體 C．大腸桿菌 D．菊花組織細胞
【答案】C
【分析】
固體培養(yǎng)基可用于微生物的培養(yǎng)和計數(shù)，培養(yǎng)液中的細胞可用血細胞計數(shù)板進行計數(shù)。
【詳解】
A、癌細胞培養(yǎng)液中的癌細胞可以用血細胞計數(shù)板直接計數(shù)，不能用培養(yǎng)基直接計數(shù)，A錯誤；
B、噬菌體是病毒，不能用培養(yǎng)基培養(yǎng)，在光學(xué)顯微鏡下不能觀察到，B錯誤；
C、固體培養(yǎng)基上的大腸桿菌菌落可以直接用肉眼觀察到，可以在固體培養(yǎng)基上直接計數(shù)，C正確；
D、菊花組織細胞中的細胞都連接在一起，無法直接計數(shù)，D錯誤。
故選C。
18．下列關(guān)于微生物培養(yǎng)基營養(yǎng)成分和作用的敘述，正確的是（ ）
A．微生物培養(yǎng)基只含有水、碳源、氮源和無機鹽
B．蛋白胨能為微生物提供磷酸鹽
C．牛肉膏能為微生物提供特殊營養(yǎng)物質(zhì)
D．銨鹽、硝酸鹽是異養(yǎng)微生物的主要氮源
【答案】C
【分析】
培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)；根據(jù)物理性質(zhì)分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源和無機鹽。在提供上述幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物種和氧氣的要求。
【詳解】
A、微生物培養(yǎng)基的配方中，一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽，有些培養(yǎng)基還需要加入一些特殊營養(yǎng)物質(zhì)，A錯誤；
B、蛋白胨提供的主要營養(yǎng)有碳源、氮源和維生素，但不能提供磷酸鹽，B錯誤；
C、牛肉膏提供的主要營養(yǎng)有碳源、氮源、磷酸鹽和維生素，能提供特殊營養(yǎng)物質(zhì)維生素，C正確；
D、異養(yǎng)微生物的主要氮源是有機氮源，D錯誤。
故選C。
19．下列操作屬于滅菌方法的是（ ）
A．接種前用酒精棉球擦拭雙手和工作臺面
B．接種時將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中，并將涂布器放在火焰上灼燒
C．牛奶在80℃下煮15min以殺死其中的微生物
D．接種室用此紫外線照射30min以殺死物體表面或空氣中的微生物
【答案】B
【分析】
滅菌是指使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外一切微生物的細胞、芽孢和孢子的過程，常用的方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌；消毒是指用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體體表或內(nèi)部的一部分微生物的過程，常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外線或化學(xué)藥物消毒法等。
【詳解】
A、接種前用酒精棉球擦拭雙手和工作臺面屬于消毒，A不符合題意；
B、進行涂布平板操作前，要對涂布器進行滅菌，一般做法是先將涂布器浸在盛有70%酒精的燒杯中，然后將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，屬于滅菌，B符合題意；
C、牛奶在80℃下煮15min以殺死其中的絕大多數(shù)微生物屬于消毒，C不符合題意；
D、接種室在使用前要進行紫外線照射照射30min，以殺死物體表面和空氣中的微生物，屬于消毒，D不符合題意。
故選B。
20．某科研小組用濾膜法測定飲用水中大腸桿菌的含量（所用濾膜孔徑小于大腸桿菌）。下列敘述正確的是（ ）
A．大腸桿菌在含有酚紅指示劑的培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到的菌落呈紅色
B．可根據(jù)培養(yǎng)基上紅色菌落的數(shù)目估算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量
C．將濾膜轉(zhuǎn)移培養(yǎng)后統(tǒng)計出的菌落數(shù)目往往比活菌的實際數(shù)目要多
D．血清、毒素、抗生素等不耐熱生物制品可以采用濾膜過濾除去細菌
【答案】D
【分析】
濾膜法是檢測水樣中大腸桿菌群的方法；將一定量水樣注入已滅菌的微孔薄膜的濾器中，經(jīng)過抽濾，細菌被截留在濾膜上，將濾膜貼于伊紅美藍培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）上，經(jīng)培養(yǎng)后計數(shù)和鑒定濾膜上生長的大腸桿菌菌落，依據(jù)過濾水樣體積計算每升或每100毫升水樣中的大腸桿菌菌群數(shù)；該方法操作簡單、快速，主要適用于雜質(zhì)較少的水樣。
【詳解】
A、大腸桿菌在含有伊紅美藍的培養(yǎng)基表面長出的菌落呈黑色，A錯誤；
B、將已知體積的飲用水過濾后，將濾膜放在加入伊紅美藍的培養(yǎng)基上（大腸桿菌菌落呈黑色），根據(jù)黑色菌落的數(shù)目，可計算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量，B錯誤；
C、將濾膜轉(zhuǎn)移培養(yǎng)后統(tǒng)計菌落數(shù)目時，由于培養(yǎng)過程中兩個或多個細胞可能生長在一起形成一個菌落，導(dǎo)致統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低，C錯誤；
D、濾膜法經(jīng)過抽濾，細菌被截留在濾膜上，故血清、毒素、抗生素等不耐熱生物制品可以采用濾膜過濾除去細菌，D正確。
故選D。
21．如圖是“微生物平板劃線”示意圖，劃線的順序為1→2→3→4→5，下列有關(guān)敘述正確的是（ ）

A．操作前用無水乙醇對接種人員的雙手進行消毒處理
B．劃線操作時，把培養(yǎng)皿蓋完全打開后在酒精燈火焰上方進行
C．在5個區(qū)域中，最好選擇最后區(qū)域的菌落
D．劃線前后灼燒接種環(huán)的目的相同
【答案】C
【分析】
平板劃線的操作的基本步驟是：
1、右手持接種環(huán)，經(jīng)火焰滅菌，待涼后，在火焰旁打開盛有菌液的試管棉塞，并將試管口過火焰，將以冷卻的接種環(huán)伸入菌液，沾取一環(huán)菌液，將試管口過火焰丙塞上棉塞。
2、左手斜持瓊脂平板，皿蓋打開一條縫，右手于火焰近處將接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋，接種環(huán)不應(yīng)劃破培養(yǎng)基表面。
3、燒灼接種環(huán)，殺滅環(huán)上殘留菌液，待冷卻（是否冷卻，可先在培養(yǎng)基邊緣處試觸，若瓊脂溶化，表示未涼，稍等再試），從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)內(nèi)劃線，重復(fù)以上操作，在第三四五區(qū)內(nèi)劃線，注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。
4、將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
【詳解】
A、操作前用70%的酒精溶液對接種人員的雙手進行消毒處理，A錯誤；
B、劃線操作時，培養(yǎng)皿蓋不要完全打開，且須在酒精燈火焰周圍進行，以防空氣中雜菌污染，B錯誤；
C、在5個區(qū)域中，最后區(qū)域更容易獲得單個活細菌形成的菌落，故最好選擇最后區(qū)域的菌落，C正確；
D、初次劃線灼燒的目的是防止雜菌污染，其后劃線后灼燒的目的是殺死上次劃線結(jié)束后殘留在接種環(huán)上的菌種，使下一個區(qū)域的菌種只來自上一個區(qū)域的末尾，最后一次灼燒的目的是防止菌體污染環(huán)境，故劃線前后灼燒接種環(huán)的目的不相同，D錯誤。
故選C。
22．下列有關(guān)細菌純培養(yǎng)的說法，不正確的是（　?。?br /> A．每次劃線后接種環(huán)要在酒精燈火焰上灼燒滅菌
B．培養(yǎng)基上的單個菌落都是一個細菌細胞的克隆
C．實驗操作者接種前要用70%的酒精棉球擦手消毒
D．菌液梯度稀釋后用涂布法接種，得到單菌落便于計數(shù)
【答案】B
【分析】
1、無菌技術(shù)的主要內(nèi)容：
①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒；
②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌；
③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行；
④實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。
2、微生物常見的接種的方法：
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。
【詳解】
A、為殺死接種環(huán)上殘留的菌種，每次劃線后接種環(huán)要在酒精燈火焰上灼燒滅菌，A正確；
B、培養(yǎng)基上的單個菌落都是一個細菌細胞或幾個同種細菌細胞的克隆，B錯誤；
C、對操作者的衣著和手要進行消毒，一般接種前要用70%的酒精棉球擦手消毒，C正確；
D、菌液梯度稀釋后用涂布法接種，得到單菌落便于計數(shù)，D正確。
故選B。
23．在農(nóng)田土壤的表層自生固氮菌較多，用表層土制成的稀泥漿接種到特制的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，可將自生固氮菌與其他細菌分開，對培養(yǎng)基的要求是（ ）
①加抗生素 ?、诓患涌股??、奂拥亍、懿患拥? ⑤加葡萄糖?、薏患悠咸烟恰、?9℃恒溫箱中培養(yǎng)?、?8～30℃恒溫箱中培養(yǎng)
A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧ C．②④⑤⑧ D．②④⑥⑦
【答案】C
【分析】
1、自生固氮微生物屬于細菌，其細胞壁的主要成分是肽聚糖，對抗生素敏感。
2、自生固氮微生物是一類能夠獨立進行固氮的微生物。
3、自生固氮微生物的代謝類型是異養(yǎng)需氧型。
【詳解】
①②自生固氮微生物屬于細菌，其細胞壁的主要成分肽聚糖，對抗生素敏感，培養(yǎng)基不能添加抗生素，①錯誤，②正確；
③④自生固氮微生物是一類能夠獨立進行固氮的微生物，培養(yǎng)基中可以不添加氮素，③錯誤，④正確；
⑤⑥自生固氮微生物的代謝類型是異養(yǎng)需氧型，培養(yǎng)基必須添加葡萄糖作為碳源和能源，⑤正確，⑥ 錯誤；
⑦⑧應(yīng)在28°C～30°C溫度下培養(yǎng)，這是因為該溫度是自生固氮微生物的最適宜溫度，⑦錯誤，⑧正確。
綜上所述②④⑤⑧，ABD錯誤，C正確。
故選C。
24．菜籽粕含有35%~45%蛋白質(zhì)，是畜禽飼料的重要原料，但其中的單寧等抗營養(yǎng)因子限制了菜籽粕的應(yīng)用。研究者將不同菌種接種到菜籽粕與麩皮制成的固體培養(yǎng)基中發(fā)酵48h，測定菜籽粕中單寧的含量，結(jié)果如圖。下列相關(guān)敘述錯誤的是（ ）

A．菜籽粕與麩皮為微生物提供碳源和氮源
B．接種后需對培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌
C．黑曲霉菌對單寧的去除效果最為理想
D．實驗所用菌種均有細胞壁但成分不同
【答案】B
【分析】
由柱形圖分析可知，4種菌種處理的發(fā)酵菜籽粕中的單寧含量都低于對照組，去除單寧效果由大到小的排序為黑曲霉菌＞植物乳酸菌＞釀酒酵母菌＞枯草芽孢桿菌。
【詳解】
A、菜籽粕含有較多的粗蛋白和維生素等物質(zhì)，麥麩含有粗纖維、蛋白質(zhì)和微量元素，故菜籽粕與麩皮能夠為微生物提供碳源和氮源，A正確；
B、接種前的培養(yǎng)基需要進行高壓蒸汽滅菌，培養(yǎng)基的制作過程為：計算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板，B錯誤；
C、由柱形圖分析可知，黑曲霉處理的發(fā)酵菜籽粕中的單寧含量最低，由此說明黑曲霉菌對單寧的去除效果最為理想，C正確；
D、實驗用的植物乳酸菌和枯草芽孢桿菌是原核生物，細胞壁主要成分是肽聚糖，酵母菌細胞壁的主要成分是葡聚糖和甘露聚糖，黑曲霉菌細胞壁的主要成分是幾丁質(zhì)，D正確。
故選B。
25．在分離、純化大腸桿菌實驗中，劃線接種（甲）、培養(yǎng)結(jié)果（乙）如下圖，有關(guān)敘述正確的是 （　　）

A．在第c區(qū)域內(nèi)劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于菌液
B．劃線操作時，如不劃線操作時，如接種環(huán)不慎劃破培養(yǎng)基，可以繼續(xù)正常操作
C．接種過程中至少需要對接種環(huán)灼燒6次
D．甲中d區(qū)域為劃線的起始位置
【答案】D
【分析】
平板劃線的操作的基本步驟是：
1、右手持接種環(huán)，經(jīng)火焰滅菌，待涼后，在火焰旁打開盛有菌液的試管棉塞，并將試管口過火焰，將以冷卻的接種環(huán)伸入菌液，沾取一環(huán)菌液，將試管口過火焰丙塞上棉塞。
2、左手斜持瓊脂平板，皿蓋打開一條縫，右手于火焰近處將接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋，接種環(huán)不應(yīng)劃破培養(yǎng)基表面。
3、燒灼接種環(huán)，殺滅環(huán)上殘留菌液，待冷卻（是否冷卻，可先在培養(yǎng)基邊緣處試觸，若瓊脂溶化，表示未涼，稍等再試），從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)內(nèi)劃線，重復(fù)以上操作，在第三四五區(qū)內(nèi)劃線，注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。
4、將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
【詳解】
A、在第c區(qū)域內(nèi)劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于第一區(qū)域的劃線末端，A錯誤；
B、劃線操作時，如接種環(huán)不慎劃破培養(yǎng)基，則該培養(yǎng)基將不能繼續(xù)使用，B錯誤；
C、每次劃線前后都需要將接種環(huán)灼燒滅菌，因此按照圖中劃線順序（d→c→b→a），整個劃線過程需要對接種環(huán)灼燒5次，C錯誤；
D、每次劃線的菌種來自上一區(qū)域的末端，因此劃線的起始區(qū)域菌落最多，由圖乙可知，圖甲中的d區(qū)域菌落多，為劃線的起始位置，D正確。
故選D。
26．漆酶屬于木質(zhì)素降解酶類，在環(huán)境修復(fù)、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域有著廣泛用途。下圖是分離、純化和保存漆酶菌株的過程，相關(guān)敘述不正確的是　（ ）

A．生活污水中含有大量微生物，是分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品
B．篩選培養(yǎng)基中需要加入漆酶的底物，通過菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落
C．在涂布平板上長出的菌落，再通過劃線進一步純化
D．斜面培養(yǎng)基中含有大量營養(yǎng)物，可在低溫下臨時保存菌株
【答案】A
【分析】
1、分析題圖：分離、純化和保存菌株的一般過程為：取樣→制成樣品懸液→涂布→劃線→接種。
2、分離和純化細菌需多次進行選擇培養(yǎng)。
3、利用平板劃線法純化目的菌時，在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)。
【詳解】
A、根據(jù)題意可知，漆酶屬于木質(zhì)降解酶類，因此森林的土壤是分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品，生活污水中含有大量微生物，但不一定含有產(chǎn)漆酶的微生物，A錯誤；
B、產(chǎn)漆酶能分解木質(zhì)素，篩選培養(yǎng)基中需要加入漆酶的底物，通過菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落，從而獲得漆酶菌株，B正確；
C、平板劃線法可以用來分離和純化微生物，在涂布平板上長出的菌落，再通過劃線進一步純化，C正確；
D、保存菌種一般在低溫下保存，將菌株接種于固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后可在4℃的冰箱中臨時保藏，D正確。
故選A。
27．某學(xué)生為了觀察根瘤菌（共生固氮菌：只有共生才能固氮）的菌落形態(tài)，做了兩組實驗；A組把根瘤菌接種到無氮培養(yǎng)基中，其他營養(yǎng)成分均齊全；B組把根瘤菌接種到全素培養(yǎng)基中（各種營養(yǎng)成分均齊全）。兩組根瘤菌的固氮量與菌落的情況是（ ）
A．A組的固氮量與菌落比B組的多且大 B．B組的固氮量與菌落比A組的多且大
C．A組的固氮量與菌落大小與B組幾乎一樣 D．A、B組均不能固氮，B組能形成菌落
【答案】D
【分析】
分析題意可知，本實驗的自變量為氮元素的有無，因變量為菌落的生長狀況，其余無關(guān)變量應(yīng)保持等量且適宜，據(jù)此分析作答。
【詳解】
因共生固氮菌只有和其它生物，如和豆科植物共生形成根瘤后才能固氮，故A組把根瘤菌接種到無氮培養(yǎng)基中，其B組把根瘤菌接種到全素培養(yǎng)基中，因缺少共生物，兩組均不能固氮，但B組營養(yǎng)齊全，可以形成菌落。D符合題意。
故選D。
28．甲、乙、丙是三種微生物，下表Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用來培養(yǎng)微生物的三種培養(yǎng)基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生長繁殖；甲能在Ⅰ中正常生長繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生長繁殖，甲、丙都不能。下列說法正確的是（　?。?br />
粉狀硫
10 g
K2HPO4
4 g
FeSO4
0.5 g
蔗糖
10 g
（NH4）2SO4
0.4 g
H2O
100 mL
MgSO4
9.25 g
CaCl2
0.5 g
Ⅰ
＋
＋
＋
＋
－
＋
＋
＋
Ⅱ
＋
＋
＋
－
＋
＋
＋
＋
Ⅲ
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
注：“＋”表示培養(yǎng)基中加入了這種物質(zhì)，“－”表示培養(yǎng)基中沒有加入這種物質(zhì)。
A．甲、乙、丙都是異養(yǎng)型微生物
B．甲、乙都是自養(yǎng)型微生物，丙是異養(yǎng)型微生物
C．甲是異養(yǎng)型微生物，乙是固氮微生物，丙是自養(yǎng)型微生物
D．甲是固氮微生物，乙是自養(yǎng)型微生物，丙是異養(yǎng)型微生物
【答案】D
【分析】
據(jù)表分析：Ⅰ培養(yǎng)基的特點是缺氮，能在這樣的培養(yǎng)基上存活的只能是固氮微生物；Ⅱ培養(yǎng)基的特點是沒有有機碳源，是培養(yǎng)自養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基；Ⅲ培養(yǎng)基是適宜異養(yǎng)微生物生長的培養(yǎng)基。
【詳解】
根據(jù)題意可知，甲能在Ⅰ中正常生長繁殖，而乙和丙都不能，而Ⅰ培養(yǎng)基缺氮，說明甲能夠自身固氮，屬于固氮微生物；乙能在Ⅱ中正常生長繁殖，而甲和丙都不能，Ⅱ培養(yǎng)基中沒有有機碳源，說明乙能夠合成有機物，屬于自養(yǎng)微生物；而丙不能在Ⅰ培養(yǎng)基，說明不能固氮；又不能在Ⅱ培養(yǎng)基中生長，說明不能合成有機物，只能在Ⅲ培養(yǎng)基中生長，說明屬于異養(yǎng)微生物。
故選D。
29．下列有關(guān)培養(yǎng)基和菌種鑒定的敘述，錯誤的是（ ）
A．根據(jù)培養(yǎng)基的物理性質(zhì)可將其分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基
B．可利用固體培養(yǎng)基上菌落的特征來判斷和鑒別細菌的類型
C．利用剛果紅培養(yǎng)基上是否形成透明圈來篩選纖維素分解菌
D．在無氮培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑鑒定尿素分解菌
【答案】D
【分析】
培養(yǎng)基按物理性質(zhì)分可分固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基中加入凝固劑可以制成固體培養(yǎng)基；固體培養(yǎng)基一般用于微生物的鑒別、分離和計數(shù)，液態(tài)培養(yǎng)基常用于擴大化生產(chǎn)，觀察細菌運動；剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅—纖維素復(fù)合物便不能形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，可通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌；分解尿素的細菌能合成脲酶，將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強，因此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細菌，若指示劑變紅，可確定該種細菌能夠分解尿素。
【詳解】
A、根據(jù)培養(yǎng)基的物理性質(zhì)可將其分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基，A正確；
B、每一種細菌在固體培養(yǎng)基上形成固定的菌落特征，這些特征對菌種識別、鑒定有一定意義，B正確；
C、當纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅-纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，可通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌，C正確；
D、在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑可用來鑒定尿素分解菌，D錯誤。
故選D。
二、多選題
30．下圖中甲是稀釋涂布平板法中的部分操作，乙是平板劃線法的操作結(jié)果。下列敘述中錯誤的是（　?。?br />
A．甲中涂布前要將涂布器灼燒接著涂菌液
B．甲、乙操作中只有甲可以用于微生物的計數(shù)
C．乙中接種環(huán)需要灼燒5次
D．乙中的連續(xù)劃線的起點是上一次劃線的末端
【答案】AC
【分析】
1、平板劃線法和稀釋涂布平板法都能純化細菌，但平板劃線法不能計數(shù)，稀釋涂布平板法能使細菌分離成單個，便于計數(shù)。
2、關(guān)于平板劃線法中灼燒接種環(huán)的次數(shù)，接種前灼燒一次，是為了避免接種環(huán)上可能存在的雜菌污染菌種，以后每次接種前灼燒接種環(huán)，是為了殺死上次劃線結(jié)束時接種環(huán)上殘留的菌種；劃線結(jié)束時灼燒接種環(huán)，是為了及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。
【詳解】
A、為防止雜菌污染，題圖甲中的涂布平板操作 ，涂布前要將涂布器灼燒，冷卻8~10 s后才能進行涂布，若灼燒后立即涂布，則會將菌體殺死，A錯誤；
B、甲是稀釋涂布平板法，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落，通過統(tǒng)計菌落數(shù)，可以推測出菌液中微生物的數(shù)量，乙是平板劃線法，接種環(huán)在劃線前后都要滅菌（殺死殘留在接種環(huán)上的菌種），平板劃線法能用于菌種的分離純化，無法計數(shù)，因此只有甲可以用于微生物的計數(shù)，B正確；
C、乙是平板劃線法中，在每次劃線前都要灼燒接種環(huán)，在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)，乙總共劃線5次，接種環(huán)需要灼燒6次，C錯誤；
D、乙中連續(xù)劃線的起點是上一次劃線的末端，這樣能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終得到由單個活菌繁殖而來的菌落，D正確。
三、綜合題
31．肺炎克雷伯菌是腸桿菌科細菌，常存在于人體上呼吸道和腸道，當機體免疫力降低時，經(jīng)呼吸道進人肺內(nèi)而引起相關(guān)病癥。醫(yī)學(xué)實驗室用中國藍培養(yǎng)基培養(yǎng)克雷伯菌，連續(xù)培養(yǎng)24小時和48小時結(jié)果分別如圖（a）和圖（b）所示。

中國藍培養(yǎng)基的配方（每升）：蛋白胨10.0g 牛肉膏粉3.0g 乳糖10.0g 氯化鈉5.0g瓊脂13.0g 中國藍0.05g 玫紅酸0.1g，水添加至1L （最終pH7.0±0.2）
（1）本實驗使用了_____法接種克雷伯菌，培養(yǎng)基中瓊脂的作用是_____，實驗室可用_____法長期保存該菌種。
（2）根據(jù)培養(yǎng)基的配方可知，培養(yǎng)基一般都含有水、_____、_____和_____四類營養(yǎng)物質(zhì)，菌落數(shù)目統(tǒng)計時，選取菌落數(shù)目的范圍在_____個的平板進行計數(shù)。
（3）此培養(yǎng)基中的中國藍為指示劑，分解乳糖的細菌在培養(yǎng)基上形成藍色菌落，不分解乳糖的細菌在培養(yǎng)基上形成淡紅色的透明菌落。據(jù)此判斷，中國藍培養(yǎng)基屬于_____培養(yǎng)基。
（4）在培養(yǎng)克雷伯菌時，將接種的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基都放入恒溫箱中培養(yǎng)，這樣操作的目的是_____。
【答案】平板劃線 作為凝固劑 甘油管藏 碳源 氮源 無機鹽 30~300 鑒別 檢測培養(yǎng)基滅菌是否徹底
【分析】
克雷伯菌屬于細菌，可以用培養(yǎng)基直接培養(yǎng)。培養(yǎng)基中一般需要具備水、碳源、氮源、無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì)。接種微生物一般有平板劃線法、稀釋涂布平板法、穿刺接種和斜面接種，根據(jù)所培養(yǎng)微生物的特性和實驗?zāi)康倪x擇合適的接種方式。根據(jù)圖中培養(yǎng)結(jié)果，本實驗用了平板劃線法，48小時時的菌落數(shù)目多于24小時。
【詳解】
（1）本實驗用了平板劃線法接種克雷伯菌，培養(yǎng)基中瓊脂的作用是作為凝固劑，使培養(yǎng)基呈現(xiàn)固態(tài)，實驗室用甘油管藏法長期保存該菌種。
（2）根據(jù)培養(yǎng)基的配方可知，培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽四類營養(yǎng)物質(zhì)，菌落數(shù)目統(tǒng)計時，選取菌落數(shù)目的范圍在30~300的平板進行計數(shù)。
（3）中國藍指示劑對不同菌種所形成的菌落呈現(xiàn)不同顏色，據(jù)此判斷，中國藍培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基。
（4）在培養(yǎng)克雷伯菌時，將接種的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基都放入恒溫箱中培養(yǎng)，這樣操作的目的是檢查培養(yǎng)基滅菌是否徹底。若空白培養(yǎng)基上長出菌落，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底。
【點睛】
本題考查微生物實驗室培養(yǎng)的基本內(nèi)容，要求考生熟記課本內(nèi)容，并理解應(yīng)用。
32．開發(fā)新能源是解決全球能源危機的有效途徑，利用微生物生產(chǎn)油脂是開發(fā)新能源的重要方向。科研人員發(fā)現(xiàn)某些酵母菌能將碳水化合物、碳氫化合物和普通油脂在菌體內(nèi)轉(zhuǎn)化為具有商業(yè)價值的脂類。回答下列問題：
（1）為了獲得產(chǎn)油酵母菌種，科研人員將土壤樣品制成懸濁液，置于以甘油為唯一碳源的液體培養(yǎng)基中進行選擇培養(yǎng)，選擇培養(yǎng)的目的是_________。甘油進入產(chǎn)油酵母菌體內(nèi)的主要作用是__________（答出兩點）。
（2）準確移取0．1mL選擇培養(yǎng)液，采用_________法將其接種于固定培養(yǎng)基上培養(yǎng)2~4d，形成分布均勻的菌落。挑取平板上的單菌落置于載玻片上，加熱固定后用蘇丹III染液染色，再置于顯微鏡下觀察，若酵母菌細胞內(nèi)出現(xiàn)__________色的脂肪顆粒，則說明酵母菌細胞中已有脂肪積累。
（3）為獲取菌體內(nèi)的油脂，科研人員將產(chǎn)油酵母菌置于一定濃度的鹽酸中，浸泡24h，沸水浴15~20min，此步驟的目的是_________。再將得到的液體冷卻后加入氯仿，充分振蕩后離心，取氯仿層經(jīng)過處理得到油脂，采用氯仿萃取脂肪的原理是_________。
【答案】篩選產(chǎn)油酵母菌并增加其濃度 為酵母菌的生命活動提供能量，為合成其他有機物提供原料 涂布平板 橘黃 破碎細胞，釋放細胞中的物質(zhì) 油脂易溶于氯仿
【分析】
篩選目的微生物時應(yīng)該使用只有目的微生物能夠生存，而其他微生物不能生存的選擇培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指通過培養(yǎng)混合的微生物，僅得到或篩選出所需要的微生物，其他不需要的種類在這種培養(yǎng)基上是不能生存的。
【詳解】
（1）以甘油為唯一碳源的液體培養(yǎng)基中進行選擇培養(yǎng)，能分解甘油的微生物能大量繁殖，即篩選產(chǎn)油酵母菌并增加其濃度。甘油作為有機碳源，在產(chǎn)油酵母菌體內(nèi)不僅能氧化分解提供能量，同時為合成其他有機物提供原料。
（2）由題干“形成分布均勻的菌落”可知，接種方法為稀釋涂布平板法，蘇丹III染液把脂肪染成橘黃色。
（3）產(chǎn)油酵母菌置于一定濃度的鹽酸中，浸泡24h，沸水浴15~20min，目的是破碎細胞，釋放細胞中的物質(zhì)。
（4）氯仿是有機溶劑，依據(jù)相似相溶原理，脂類易溶于有機溶劑，且與水不互溶。
【點睛】
本題考查篩選目的微生物的原理和方法，掌握無菌技術(shù)，微生物的接種方法，把相關(guān)知識融合進題中，解決問題。
33．石油田的土壤中可能含有豐富的產(chǎn)油脂芽孢桿菌，該微生物合成的油脂是制備生物柴油的新型原料。回答下列問題：
（1）若要分離土壤中產(chǎn)油脂芽孢桿菌，主要實驗步驟：取樣→___________→___________→培養(yǎng)→___________。
（2）實驗操作前，在密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒，其原因是紫外線能___________。實驗結(jié)束時，培養(yǎng)微生物用的培養(yǎng)基要___________處理，才能倒掉。
（3）選擇培養(yǎng)產(chǎn)油脂芽孢桿菌的培養(yǎng)基中加的主要碳源是___________。制備醋酸菌初篩平板時，需要將培養(yǎng)基的pH調(diào)至___________性。用平板培養(yǎng)細菌時一般需要將平板___________（填“倒置”或“正置”）。
（4）單個細菌在平板上會形成菌落，研究人員通?？筛鶕?jù)菌落的形狀、大小、顏色等特征來初步區(qū)分不同種的微生物，原因是___________。
【答案】稀釋 涂布（或平板劃線） 挑選菌落 破壞DNA結(jié)構(gòu) 滅菌 石油 中性或微堿性 倒置 在一定的培養(yǎng)條件下，不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征
【分析】
消毒和滅菌的辨析
項目
條件
結(jié)果
常用方法
應(yīng)用范圍
消毒
較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法
僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物(不包括芽孢和孢子)
煮沸消毒法
日常用品
巴氏消毒法
不耐高溫的液體
化學(xué)藥物消毒法
用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源
滅菌
強烈的理
化方法
殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子
灼燒滅菌法
接種工具
干熱滅菌法
玻璃器皿、金屬用具
濕熱滅菌(如：高壓蒸汽滅菌法)
培養(yǎng)基及容器的滅菌
【詳解】
（1）油田的土壤中可能含有豐富的產(chǎn)油脂芽孢桿菌，若要分離土壤中產(chǎn)油脂芽孢桿菌，取樣后首先應(yīng)進行稀釋，然后通過涂布平板法或平板劃線法接種到以石油為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在該培養(yǎng)基上能生長的菌落就是目的菌落，可挑選后進一步培養(yǎng)，故步驟為：取樣→稀釋→涂布（或平板劃線）→培養(yǎng)→挑選菌落。（2）實驗操作前，在密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒，其原因是紫外線能破壞DNA結(jié)構(gòu)。實驗結(jié)束時，培養(yǎng)微生物用的培養(yǎng)基要通過滅菌，消滅其中所有微生物，然后才能倒掉，以避免污染環(huán)境。
（3）選擇培養(yǎng)產(chǎn)油脂芽孢桿菌的培養(yǎng)基中加的主要碳源是石油。醋酸菌屬于細菌，培養(yǎng)基的最適pH為為微堿性或中性，制備醋酸菌初篩平板時，需要將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或微堿性。用平板培養(yǎng)細菌時一般需要將平板倒置，以防止冷凝水污染培養(yǎng)基。
（4）在一定的培養(yǎng)條件下，不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征，單個細菌在平板上會形成菌落，可根據(jù)菌落的形狀、大小、顏色等特征來初步區(qū)分不同種的微生物。
【點睛】
細菌的最適pH為中性或微堿性，霉菌的的最適pH為酸性。
34．科研人員從青藏高原祁連山地區(qū)的土壤中分離出一株高效耐低溫原油降解菌YF28—1（8），應(yīng)用該菌能夠提高高寒地區(qū)石油等烴類污染物的分解效率，為我國的環(huán)境保護事業(yè)做岀貢獻。請回答相關(guān)問題
（1）選擇青藏高原祁連山地區(qū)進行菌種篩選，原因是_______________________________________。
（2）篩選原油降解菌的培養(yǎng)基中應(yīng)加入_________作為唯一碳源；從功能上看，該培養(yǎng)基屬于______培養(yǎng)基。
（3）在實驗室中，玻璃和金屬器材一般采用________方法進行滅菌。用平板劃線法純化細菌時，第2次劃線及其以后劃線總是從上次劃線的末端開始，目的是___________________________________。
（4）用稀釋涂布平板法培養(yǎng)細菌，要定期取樣進行菌落計數(shù)，一般選擇菌落數(shù)在____________的平板進行計數(shù)。
【答案】該地區(qū)的微生物更耐低溫（或能找到高效耐低溫原油降解菌） 原油（或石油） 選擇 干熱滅菌 將聚集的微生物逐漸稀釋以便獲得單個菌落 30～300
【分析】
采用強烈的理化因素使任何物體內(nèi)外部的一切微生物永遠喪失其生長繁殖能力的措施，稱為滅菌。滅菌常用的方法有化學(xué)試劑滅菌、射線滅菌、干熱滅菌、濕熱滅菌和過濾除菌等?？筛鶕?jù)不同的需求，采用不同的方法，如培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌，空氣則采用過濾除菌。
【詳解】
（1）選擇青藏高原祁連山地區(qū)進行菌種篩選，原因是該地區(qū)的微生物更耐低溫（或能找到高效耐低溫原油降解菌）。
（2）篩選原油降解菌的培養(yǎng)基中應(yīng)加入原油（或石油）作為唯一碳源；從功能上看，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。
（3）在實驗室中，玻璃和金屬器材一般采用干熱滅菌。用平板劃線法純化細菌時，第2次劃線及其以后劃線總是從上次劃線的末端開始，目的是將聚集的微生物逐漸稀釋以便獲得單個菌落。
（4）用稀釋涂布平板法培養(yǎng)細菌，要定期取樣進行菌落計數(shù)，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。
【點睛】
本題主要考查微生物培養(yǎng)的相關(guān)知識，其中準確理解微生物的分離培養(yǎng)方法，是解題的關(guān)鍵。
35．下表是某種微生物培養(yǎng)基的配方表，請據(jù)表回答下面的問題：
牛肉膏
蛋白胨
NaCl
瓊脂
蒸餾水
0．5g
1 g
0．5 g
1 g
200 mL
（1）此培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分有五類，其中蛋白胨提供的營養(yǎng)物質(zhì)是_________________。
（2）在培養(yǎng)基制備過程中，各種成分溶化后分裝前，必須的操作是_________。
（3）在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)研究上，常需要進行微生物的培養(yǎng)和計數(shù)。如下圖是利用______法進行微生物接種，把聚集的菌種逐步分散到培養(yǎng)基的表面。為達到這一目的，操作上應(yīng)注意：___________________（至少答兩項）。

【答案】碳源、氮源、維生素 調(diào)節(jié)pH 平板劃線法 ①每次劃線前要灼燒接種環(huán)；②冷卻后從上一區(qū)劃線末端開始劃；③首尾區(qū)不重疊（任選兩項）
【分析】
培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細菌時需將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧微生物時則需要提供無氧的條件。
【詳解】
（1）培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分有五類，其中蛋白胨提供的營養(yǎng)物質(zhì)是碳源、氮源、維生素。
（2）在培養(yǎng)基制備過程中，各種成分溶化后分裝前，要調(diào)節(jié)pH。
（3）圖示為平板劃線法接種微生物；該接種方法的原理是把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。為達到這一目的，操作上應(yīng)注意：每次劃線前接種環(huán)進行灼燒滅菌，冷卻后從上一區(qū)劃線的末端開始劃，以確保下一次劃線的菌種來自上一次的末端，首尾區(qū)不相連。
【點睛】
本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成，掌握制備培養(yǎng)基的步驟；識記接種微生物常用的兩種方法，尤其是平板劃線法的相關(guān)操作，能結(jié)合所學(xué)的知識準確答題。
36．在實驗室培養(yǎng)微生物，一方面需要為培養(yǎng)的微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件，另一方面需要確保無處不在的其他微生物無法混入。請回答下列相關(guān)問題：
（1）培養(yǎng)基能為培養(yǎng)的微生物提供營養(yǎng)。各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有______、_________、_________、_______；另外，培養(yǎng)基還需要滿足微生物對_______、______、______的要求。
（2）獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，需進行清潔和______ （填“消毒”或“滅菌”）；對用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等需進行______ （填“消毒”或“滅菌”）。
（3）微生物接種的方法很多，其核心都是要防止雜菌的污染，保證培養(yǎng)物的純度。微生物接種最常用的方法______和______。
【答案】水 碳源 氮源 無機鹽 pH 特殊營養(yǎng)物質(zhì) 氧氣 消毒 滅菌 平板劃線法 稀釋涂布法
【分析】
營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。
無菌技術(shù)（1）關(guān)鍵：防止外來雜菌的入侵；（2）具體操作①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒；②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌；③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行；④實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸。
【詳解】
（1）各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。
（2）獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵，對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，需進行清潔和消毒，對用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等需進行滅菌。
（3）常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布法。
【點睛】
本題主要考查微生物實驗室培養(yǎng)的相關(guān)知識，意在考查考生對相關(guān)知識的理解，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系的能力。
37．回答下列與細菌培養(yǎng)相關(guān)的問題
（1）在細菌培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中能同時提供碳源、氮源的成分是________（填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”）。通常，制備培養(yǎng)基時要根據(jù)所培養(yǎng)細菌的不同來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH，其原因是_______________________。硝化細菌在沒有碳源的培養(yǎng)基上_______（填“能夠”或“不能”）生長，原因是_________________________。?
（2）用平板培養(yǎng)細菌時一般需要將平板________（填“倒置”或“正置”）。?
（3）單個細菌在平板上會形成菌落，研究人員通?？筛鶕?jù)菌落的形狀、大小、顏色等特征來初步區(qū)分不同種的微生物，原因是在一定的培養(yǎng)條件下，_________________________________。
（4）有些使用后的培養(yǎng)基在丟棄前需要經(jīng)過________處理，這種處理可以殺死丟棄物中所有的微生物。
【答案】蛋白胨 不同細菌生長繁殖所需的最適pH不同 能夠 硝化細菌可以利用空氣中的CO2作為碳源 倒置 不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征 滅菌
【分析】
1、微生物培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成：①各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽；②不同培養(yǎng)基還要滿足不同微生物對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。
2、配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的注意事項：①倒平板的溫 度一般50℃左右適宜，溫度過高會燙手，過低培養(yǎng)基又會凝固；②平板需倒置，這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。
【詳解】
（1）葡萄糖只能為細菌提供碳源，硝酸鈉為細菌提供無機鹽，而蛋白胨既可以為細菌碳源，也可以為細菌提供氮源；由于不同細菌生長繁殖所需的最適pH不同，所以通常在制備培養(yǎng)基時要根據(jù)所培養(yǎng)細菌的不同來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH；硝化細菌屬于化能自養(yǎng)型微生物，其可以利用氨氧化釋放的能量將空氣中的二氧化碳固定為有機物，因此硝化細菌可以在無碳培養(yǎng)基中生長。
（2）用平板培養(yǎng)細菌時，一般需要將平板倒置培養(yǎng)，以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。
（3）由于每一大類微生物都有其獨特的細胞形態(tài)，不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征，因而其菌落形態(tài)特征也各異，因此根據(jù)菌落的形態(tài)、大小、顏色等特征來初步區(qū)分不同種的微生物。
（4）有些使用后的培養(yǎng)基在丟棄前需要經(jīng)過滅菌處理，這種處理可以殺死丟棄物中所有的微生物，以免污染環(huán)境。
【點睛】
解答本題的關(guān)鍵是識記微生物培養(yǎng)基的成分、培育條件、培養(yǎng)過程以及注意事項，能夠根據(jù)不同微生物的代謝類型判斷其所需營養(yǎng)成分的種類，進而結(jié)合題干要求分析答題。
根據(jù)微生物的分離和培養(yǎng)的知識，回答下列問題：
38．在微生物的實驗室培養(yǎng)過程中，獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是__________________。
39．配制培養(yǎng)基時，各種成分在溶化后分裝前必須調(diào)節(jié)_____。
40．實驗結(jié)束時，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)進行滅菌處理后才能倒掉，這樣做的目的是_______。
41．以下材料請選擇合適的方法消毒或滅菌：
①培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基：______________；
②實驗操作者的雙手：____________；
③實驗過程中的接種環(huán)：_______________。
42．在培養(yǎng)基上還有其他雜菌的菌落，能否肯定該大腸桿菌的菌種原液被污染了？為什么？__________，_____________________。
【答案】
38．防止外來雜菌的入侵
39．pH
40．避免雜菌污染環(huán)境
41． 高壓蒸汽菌 用（70%）的酒精消毒 灼燒滅菌
42． 不能 因為雜菌可能來自培養(yǎng)基或來自培養(yǎng)過程
【分析】
1、無菌技術(shù)：泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法,是成功地培養(yǎng)微生物的關(guān)鍵。
2、消毒和滅菌：
（1）消毒：用溫和的化學(xué)或物理方法，殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢、孢子）的過程。
（2）消毒的方法：①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min；②巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或80 ℃ 下煮15min(低溫消毒法)；③化學(xué)藥劑消毒法：用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒;氯氣消毒水源；④紫外線消毒：對實驗室空氣消毒。
（3）滅菌：以強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有微生物（包括芽孢、孢子） ，達到完全無菌的過程。
（4）滅菌的方法：①灼燒滅菌：微生物學(xué)實驗室的接種環(huán)、接種針、試管口等的滅菌②干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。適用于玻璃器皿(如試管、培養(yǎng)皿、吸管、注射器)和金屬器具(如針頭、鑷子、剪刀等)的滅菌。③高壓蒸汽滅菌：100kPa、121 ℃下維持15-30min. 最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。④其他滅菌方法：紫外線、超聲波、微波、化學(xué)藥物消毒等。
3、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基：
（1）計算根據(jù)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方的比例，計算配制100mL的培養(yǎng)基時，各種成分的用量。
（2）稱量：準確地稱取各種成分。牛肉膏比較黏稠，可以用玻棒挑取，放在稱量紙上稱量。牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮，稱取時動作要迅速，稱后要及時蓋上瓶蓋。
（3）溶化：將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放人燒杯，加入少量的水，加熱。當牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻棒取出稱量紙。往燒杯中加人稱量好的蛋白胨和氯化鈉，用玻棒攪拌，使其溶解。加入瓊脂，加熱使其熔化。在此過程中，不斷用玻棒攪拌，防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。當瓊脂完全熔化后，補加自來水至100 mL。
（4）滅菌將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高壓滅菌鍋，在 100kPa，溫度為121℃條件下滅菌15- 30 min。將培養(yǎng)皿用幾層舊報紙包緊，5-8套培養(yǎng)皿作一包，包好后放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160-170℃下滅菌2h。
（5）倒平板：待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板。
38．
在微生物的實驗室培養(yǎng)過程中，獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵。
39．
配制培養(yǎng)基時，各種成分在溶化后分裝前必須調(diào)節(jié)pH。
40．
實驗結(jié)束時，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)進行滅菌處理后才能倒掉，這樣做的目的是避免雜菌污染環(huán)境。
41．
①培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基：高壓蒸汽菌；
②實驗操作者的雙手：用（70%）的酒精消毒；　　　　　　　　　　　　
③實驗過程中的接種環(huán)：灼燒滅菌。
42．
在培養(yǎng)基上還有其他雜菌的菌落，不能肯定該大腸桿菌的菌種原液被污染了，因為雜菌可能來自培養(yǎng)基或來自培養(yǎng)過程。
【點睛】
本題考查微生物的培養(yǎng)和分離，重點考查培養(yǎng)基的制備過程,要求考生識記培養(yǎng)基制備的具體步驟，掌握各步驟中需要注意的細節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準確判斷各選項。
43．為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細菌含量，并進行了細菌的分離等工作?；卮鹣铝袉栴}
（1）該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是_______________________；然后，將1mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0．1mL稀釋液；經(jīng)適當培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為_________________。
（2）該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌。操作時，接種環(huán)通過______滅菌，在第二次及以后劃線時，總是從上一次的末端開始劃線。這樣做的目的是___________________________
（3）示意圖A和B中，______表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。

【答案】檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格 3．8×107 灼燒 將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落 B
【分析】
實驗室常用的滅菌方法：
（1）灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌。此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌；
（2）干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌；
（3）高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，為達到良好的滅菌效果，一般在壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30min。
【詳解】
（1）該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格；然后，將1mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為（39+38+37）÷3÷0.1×100×1000=3.8×107。
（2）該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌。操作時，接種環(huán)通過灼燒滅菌，在第二次及以后劃線時，總是從上一次的末端開始劃線。這樣做的目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落。
（3）示意圖A和B中，圖B表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果，圖A表示的是用平板劃線法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。
【點睛】
本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，意在考查學(xué)生識記所學(xué)知識要點，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系，形成知識網(wǎng)絡(luò)的能力，同時獲取題干信息準確答題。
從自然菌樣篩選較理想生產(chǎn)菌種的一般步驟是：采集菌樣→富集培養(yǎng)→純種分離→性能測定。
44．不同微生物的生存環(huán)境不同，獲得理想微生物的第一步是從適合的環(huán)境采集菌樣，然后再按一定的方法分離、純化。培養(yǎng)噬鹽菌的菌樣應(yīng)從__________環(huán)境采集。
45．富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適合待分離微生物旺盛生長的特定環(huán)境條件，使其群落中的數(shù)量大大增加，從而分離出所需微生物的培養(yǎng)方法。對產(chǎn)耐高溫淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)應(yīng)選擇____________________的培養(yǎng)基，并在__________條件下培養(yǎng)。
46．下面兩組圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解，請分析接種的具體方法。

獲得圖A效果的接種方法是__________，獲得圖B效果的接種方法是__________。
47．配制培養(yǎng)基時各種成分在溶化后分裝前必須進行__________，接種前要進行____________，在整個微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在______條件下進行。
【答案】
44．海灘等高鹽
45． 以淀粉為唯一碳源 高溫
46． 稀釋涂布平板法 平板劃線法
47． pH調(diào)整 高壓蒸汽滅菌 無菌
【分析】
自然界中目的菌株的篩選的依據(jù)是根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找．實驗流程為土壤取樣→樣品的稀釋→將稀釋液涂布到以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上→挑選能生長的菌落→鑒定．常用的接種方法主要有平板劃線法與稀釋涂布平板法。
44．
噬鹽菌能適應(yīng)高鹽環(huán)境，故噬鹽菌的菌樣應(yīng)從海灘等高鹽環(huán)境采集?
45．
產(chǎn)耐高溫淀粉酶微生物能產(chǎn)生耐高溫淀粉酶說明其碳源是淀粉，應(yīng)選擇以淀粉為唯一碳源的培養(yǎng)基，并在高溫條件下培養(yǎng)。
46．
圖A菌落分布較均勻，接種方法是稀釋涂布平板法，圖B菌落集中呈線狀，接種方法是平板劃線法。
47．
配制培養(yǎng)基時各種成分在溶化后分裝前必須進行調(diào)整pH，接種前要進行高壓蒸汽滅菌，在實驗中要注意在無菌條件下進行。
【點睛】
本題主要考查微生物的篩選與培養(yǎng)，意在強化學(xué)生對相關(guān)知識的識記、理解與運用。
酸牛奶酒是在牛奶中加入乳酸菌和酵母菌混合發(fā)酵而成的一種乳飲料。請回答下列有關(guān)問題：
48．牛奶在加入菌種前應(yīng)進行___________（填消毒或滅菌），酵母菌不具有的結(jié)構(gòu)有___________（填擬核、葉綠體或細胞壁）。
49．已知“改良MC瓊脂培養(yǎng)基”中含有碳酸鈣，遇酸溶解而使培養(yǎng)基變得透明；“孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基”含氯霉素，可抑制絕大多數(shù)細菌的生長。對乳酸菌進行計數(shù)時應(yīng)選擇上述______培養(yǎng)基，用______（填方法）接種，挑選出的菌落進行計數(shù)。
50．對乳酸菌、酵母菌雙菌混合培養(yǎng)和各自單獨培養(yǎng)過程中的活菌數(shù)進行定時檢測，由結(jié)果可知，雙菌混合培養(yǎng)時兩種菌的最大活菌數(shù)均高于其單獨培養(yǎng)時，從代謝產(chǎn)物角度分析，其原因可能是______________________________________、除了上述的活菌計數(shù)外，_______________ 也是測定微生物數(shù)量的常用方法。
【答案】
48． 消毒 擬核、葉綠體
49． 改良MC瓊脂培養(yǎng)基 稀釋涂布平板法
50． 酵母菌和乳酸菌可以相互利用對方的代謝產(chǎn)物，從而相互促進生長 顯微鏡直接計數(shù)法
【分析】
1、酵母菌屬于真核生物，也是兼性厭氧型生物，既能進行有氧呼吸也能進行無氧呼吸。
2、 接種微生物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法可對微生物進行計數(shù)。
48．
為避免目的菌被殺死，牛奶在加入菌種前應(yīng)進行消毒處理；酵母菌為真菌 ，無擬核，也無葉綠體。
49．
根據(jù)題意可知，“孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基”含氯霉素，可抑制乳酸菌的生長，因此對乳酸菌進行計數(shù)時應(yīng)選擇改良MC瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)基；對微生物計數(shù)需要用稀釋涂布平板法方法接種，挑選出具有透明圈的菌落進行計數(shù)。
50．
結(jié)合題意可知，雙菌培養(yǎng)時兩種菌的最大活菌數(shù)均高于其單獨培養(yǎng)時，從代謝產(chǎn)物角度分析，其原因可能是酵母菌和乳酸菌可以相互利用對方的代謝產(chǎn)物，從而相互促進生長；除稀釋涂布平板法可以計數(shù)外，顯微鏡直接計數(shù)法 也是測定微生物數(shù)量的常用方法。
【點睛】
本題主要考查微生物分離和培養(yǎng)的相關(guān)知識，意在考查考生對所學(xué)知識的理解，把握知識間內(nèi)在聯(lián)系的能力。
大腸桿菌是寄生于人和動物腸道中的細菌，其代謝產(chǎn)物能與染料伊紅美藍反應(yīng)，使菌落呈黑色。下面是其培養(yǎng)基配方：
成分
蛋白胨
乳糖
磷酸二氫鉀
瓊脂
蒸餾水
2%伊紅水溶液
0．5%美藍水溶液
含量
10g
10g
2g
20~30g
1000ml
20ml
13ml
回答下列問題：
51．培養(yǎng)細菌時，培養(yǎng)基PH一般調(diào)至__________________。該培養(yǎng)基中，蛋白胨為大腸桿菌提供的主要營養(yǎng)有_____________________和維生素。從功能上分類，該培養(yǎng)基屬于____________培養(yǎng)基。
52．對該培養(yǎng)基進行滅菌時，可采用_____________法。在接種大腸桿菌前，需先將滅菌后的空白培養(yǎng)基放在恒溫箱中培養(yǎng)一段時間，觀察是否有菌落生成，其目的是_______________________________________________________________________。
53．為檢測嚴重污染水體中大腸桿菌數(shù)量，將水樣適當稀釋后，取樣涂布在上述平板培養(yǎng)基中，應(yīng)選擇顏色為____________的菌落進行計數(shù)。該方法是通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推測樣品中的活菌數(shù)，其原理是____________________________________________。
【答案】
51． 中性或微堿性 碳源、氮源 鑒別
52． 高壓蒸汽滅菌 檢測培養(yǎng)基制備是否合格（滅菌是否徹底）
53． 黑色 當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌
【分析】
1、微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。
2、鑒別、培養(yǎng)大腸桿菌可使用伊紅-美藍培養(yǎng)基，菌落呈黑色或紫黑色有金屬光澤。
51．
微生物培養(yǎng)時需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求，如培養(yǎng)細菌時需將pH調(diào)至中性或微堿性；蛋白胨既可以為大腸桿菌提供碳源，也可以為大腸桿菌提供氮源；據(jù)表格信息可知，該培養(yǎng)基成分中伊紅-美藍水溶液，故屬于鑒別培養(yǎng)基。
52．
對該培養(yǎng)基進行滅菌時，可采用高壓蒸汽滅菌法；在接種大腸桿菌前，需先將滅菌后的空白培養(yǎng)基放在恒溫箱中培養(yǎng)一段時間，觀察是否有菌落生成，其目的是檢測培養(yǎng)基制備是否合格（滅菌是否徹底）：若有菌落生成，則證明滅菌不徹底。
53．
大腸桿菌的代謝產(chǎn)物能與染料伊紅美藍反應(yīng)，使菌落呈黑色，為檢測嚴重污染水體中大腸桿菌數(shù)量，將水樣適當稀釋后，取樣涂布在上述平板培養(yǎng)基中，應(yīng)選擇顏色為 黑色的菌落進行計數(shù)；通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推測樣品中的活菌數(shù)的原理是當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌。
【點睛】
本題考查了微生物分離與培養(yǎng)的有關(guān)知識，要求考生能夠根據(jù)實驗原理補充實驗步驟，識記培養(yǎng)基的主要成分，并能結(jié)合題意分析作答。
下圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法，請回答相關(guān)問題：

54．甲、乙兩種接種方法所用的接種工具分別是_________和_________；對這兩種接種工具進行滅菌的方法是_________。
55．平板劃線時，為保證微生物的數(shù)目隨劃線次數(shù)的增加而逐步減少，每次劃線都要從_________開始，平板劃線結(jié)束后，最后一次劃的線不能與第一次劃的線_________________。
56．接種操作之所以一定要在火焰附近進行，是因為__________________。
57．下圖是接種后培養(yǎng)的效果圖解，據(jù)此判斷接種時采用的是甲、乙兩種接種方法中的_______________。

58．假設(shè)用圖乙所示方法接種培養(yǎng)結(jié)束后，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上菌落連成一片，可能的原因是_________________________。
【答案】
54． 接種環(huán) 涂布器 灼燒
55． 上一次劃線末端 相連(或相接、相交、交叉等)
56．火焰附近存在著無菌區(qū)域
57．乙
58．稀釋倍數(shù)不夠，菌液的濃度太高
【分析】
1．微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。
2．分析題圖：圖甲的接種方法是平板劃線法，圖乙的接種方法為稀釋涂布平板法。
54．
根據(jù)圖甲接種后的結(jié)果可知，甲接種微生物采用的是平板劃線法，這種方法的接種工具是接種環(huán)；圖乙在培養(yǎng)基中央滴了一滴培養(yǎng)液，可見其利用的是稀釋涂布平板，該方法的接種工具是涂布器。對這兩種接種工具進行滅菌和消毒的方法依次是灼燒滅菌和酒精消毒。
55．
平板劃線法接種時，為保證微生物的數(shù)目隨劃線次數(shù)的增加而逐步減少，每次劃線都要從上一次劃線的末端開始，平板劃線結(jié)束后，最后一次劃的線不能與第一次劃的線相交（相接、相連、交叉等）。
56．
由于火焰附近存在著無菌區(qū)域，因此為了防止雜菌污染，接種操作一定要在火焰附近進行。
57．
由圖可知，菌落均勻的分布在培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基上，說明該接種方法為稀釋涂布平板法，為方法乙。
58．
假設(shè)利用稀釋涂布平板法接培養(yǎng)結(jié)束后，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上菌落連成一片，可能的原因是：①稀釋倍數(shù)不夠，菌液的濃度太高。
【點睛】
本題結(jié)合圖解，考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生掌握接種微生物的兩種方法及無菌技術(shù)，能正確分析題圖，再結(jié)合所學(xué)的知識準確答題。
59．酸牛奶由新鮮牛奶經(jīng)乳酸菌發(fā)酵制成。經(jīng)乳酸發(fā)酵后，牛奶中的乳糖可轉(zhuǎn)化成葡萄糖和半乳糖，進而轉(zhuǎn)變?yōu)槿樗岬刃》肿踊衔铮子谙?。乳酸菌還能改變腸道環(huán)境，抑制有害菌繁殖，調(diào)整胃腸道菌群的平衡。低溫酸奶一般在2-6℃可儲藏21天，在室溫下乳酸桿菌加快繁殖，會因過度生長發(fā)酵而提前死亡，并造成酸奶營養(yǎng)損失和酸度增加。保加利亞乳酸桿菌為酸奶發(fā)酵的常用菌種，最適生長溫度為42-45℃。某研究小組欲驗證室溫長期保存會導(dǎo)致保加利亞乳酸桿菌死亡，從而造成酸奶品質(zhì)下降。請完善下列實驗方案。
（1）制備培養(yǎng)基：篩選保加利亞乳酸桿菌需使用_________培養(yǎng)基，其成分除了水、碳源、氮源和無機鹽外，還應(yīng)加入_______作為凝固劑。
（2）滅菌：對培養(yǎng)基進行滅菌的方法是_________，如需調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH應(yīng)在滅菌_______（前/后）進行。
（3）接種培養(yǎng)：將2-6℃和室溫保存10天的酸奶分別用緩沖液稀釋104、105、106倍，再使用______________法將稀釋液接種到滅菌后的培養(yǎng)基上，放入_______（有氧/無氧）環(huán)境、42℃恒溫箱中培養(yǎng)48小時，以利于其長出穩(wěn)定菌落。此過程還需要設(shè)置________平板作為對照，目的是__________________。統(tǒng)計平板上呈現(xiàn)不規(guī)則圓形的灰白色菌落數(shù)。
（4）預(yù)期結(jié)果：________________________。
【答案】選擇 瓊脂 濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌） 前 稀釋涂布平板 無氧 未接種酸奶稀釋液的空白 排除培養(yǎng)基被雜菌污染 室溫保存的酸奶實驗組不規(guī)則圓形灰白色菌落的平均數(shù)少于2-6℃低溫保存的對照組
【分析】
（1）培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽。培養(yǎng)基的分類：①按物理性質(zhì)分，分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基中含有凝固劑，一般是瓊脂。②按化學(xué)成分分，分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)。兩者的區(qū)別是天然培養(yǎng)基成分不確定，合成培養(yǎng)基成分的含量是確定的。③按用途分，分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基主要是培養(yǎng)、分離特定的微生物，培養(yǎng)酵母菌可在培養(yǎng)基中加入青霉素；鑒別培養(yǎng)基可以鑒定不同的微生物，比如鑒別飲用水中是否含有大腸桿菌，可以用伊紅-美藍培養(yǎng)基，如果菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤，說明有大腸桿菌。
（2）常用滅菌方法：灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法。培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌和消毒方法依次：高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌、化學(xué)消毒、紫外線滅菌、巴氏消毒法。
（3）接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。接種的目的是使聚集在一起的微生物分散成單個細胞，并在培養(yǎng)基表面形成單個細菌繁殖而成的子細胞群體--菌落。
【詳解】
（1）篩選保加利亞乳酸桿菌需使用選擇培養(yǎng)基，其成分除了水、碳源、氮源和無機鹽外，還應(yīng)加入瓊脂作為凝固劑。
（2）采用濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌）對培養(yǎng)基進行滅菌，如需調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH應(yīng)在滅菌前進行。
（3）將2-6℃和室溫保存10天的酸奶分別用緩沖液稀釋104、105、106倍，再使用稀釋涂布平板法將稀釋液接種到滅菌后的培養(yǎng)基上，乳酸桿菌進出無氧呼吸，產(chǎn)生乳酸，所以在培養(yǎng)放入無氧環(huán)境、42℃恒溫箱中培養(yǎng)48小時，以利于其長出穩(wěn)定菌落。此過程還需要設(shè)置未接種酸奶稀釋液的空白平板作為對照，目的是排除培養(yǎng)基被雜菌污染。統(tǒng)計平板上呈現(xiàn)不規(guī)則圓形的灰白色菌落數(shù)。
（4）實驗的目的是驗證室溫長期保存會導(dǎo)致保加利亞乳酸桿菌死亡，從而造成酸奶品質(zhì)下降。實驗培養(yǎng)設(shè)置的了常溫培養(yǎng)和2-6℃培養(yǎng)，預(yù)期結(jié)果：室溫保存的酸奶實驗組不規(guī)則圓形灰白色菌落的平均數(shù)少于2-6℃低溫保存的對照組。
【點睛】
本題的知識點是微生物培養(yǎng)過程，接種微生物的常用的接種方法，主要考生能理解所學(xué)知識的要點，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系的能力。
60．經(jīng)人工誘變后，部分細菌由于某種酶被破壞，其細胞中某些化學(xué)反應(yīng)不能正常進行，就形成了營養(yǎng)缺陷型菌株，這在工業(yè)生產(chǎn)上有較廣闊的應(yīng)用前景。以下是實驗人員利用影印法初檢某種氨基酸缺陷型菌株的過程，請回答下列問題：

（1）微生物生長需要的營養(yǎng)物質(zhì)有水、碳源和_______________等，除此之外，制備如圖所示的培養(yǎng)基還需要加入__________________。
（2）培養(yǎng)基的滅菌方法一般為_______________。過程①的接種方法是__________________。
（3）根據(jù)用途分類，圖中基本培養(yǎng)基屬于________（填“選擇”或“鑒別”）培養(yǎng)基。
（4）科研人員用放射線處理目的菌獲得兩個突變株C和D，然后對突變株C和D進行實驗，結(jié)果如表所示。
接種的菌種
一般培養(yǎng)基
實驗處理及結(jié)果
C
不生長
添加營養(yǎng)物質(zhì)甲，能生長
D
不生長
添加營養(yǎng)物質(zhì)乙，能生長
C＋D
能生長
不添加營養(yǎng)物質(zhì)甲、乙，都能生長
突變株C不能在一般培養(yǎng)基上生長的原因最可能是___________________________。將突變株C和D混合在一起，接種于一般培養(yǎng)基上，都能生長的最可能的原因是________________________________________________________________________。
【答案】氮源、無機鹽 凝固劑（或瓊脂） 高壓蒸汽滅菌法 稀釋涂布平板法 選擇 自身不能合成物質(zhì)甲 突變株C 能合成物質(zhì)乙，突變株D能合成物質(zhì)甲，因此一起培養(yǎng)可以相互支持保證必須的營養(yǎng)要素
【分析】
分析題圖，圖中首先利用稀釋涂布平板法分離細菌，然后運用“影印法”將菌種接種到兩種培養(yǎng)基中：基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基，則在基本培養(yǎng)基中，氨基酸缺陷型菌株不能生長，而在完全培養(yǎng)基中能夠生長，因此可以選擇出氨基酸缺陷型菌株。
【詳解】
（1）微生物的營養(yǎng)物質(zhì)包括水、無機鹽、碳源、氮源等，圖示培養(yǎng)基上最后都長出了菌落，說明為固體培養(yǎng)基，因此制備培養(yǎng)基時需要加入凝固劑，常見的凝固劑是瓊脂。
（2）培養(yǎng)基的滅菌的常用方法是高壓蒸汽滅菌法。過程①導(dǎo)致菌落均勻分布，因此該方法為稀釋涂布平板法。
（3）圖示過程最終篩選出了氨基酸缺陷型菌株，說明圖中基本培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基.
（4）突變株C不能在一般培養(yǎng)基上生長的直接原因是自身不能合成物質(zhì)甲．將突變株C和D混合在一起接種于一般培養(yǎng)基中，卻能正常生長的最可能原因是突變株C能合成物質(zhì)乙，突變株D能合成物質(zhì)甲，因此一起培養(yǎng)可以相互支持保證必須的營養(yǎng)要素。
【點睛】
本題以圖文結(jié)合的形式綜合考查學(xué)生對微生物的實驗室培養(yǎng)、微生物的分離與計數(shù)等相關(guān)知識的識記和理解能力。解答本題需熟記并理解相應(yīng)的基礎(chǔ)知識并形成清晰的知識網(wǎng)絡(luò)。在此基礎(chǔ)上，結(jié)合問題情境，從題圖中提取有效信息進行相關(guān)問題的解答。
61．酸奶和泡菜的制作都離不開乳酸菌，某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實驗材料純化乳酸菌。分離純化所用的固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣從而產(chǎn)生溶鈣圈。據(jù)此回答下列問題：
（1）下列生物的代謝類型和乳酸菌相同的是____（酵母菌，醋酸桿菌，破傷風桿菌，藍藻），題目中分離純化乳酸菌所用的培養(yǎng)基從功能角度判斷屬于__________培養(yǎng)基，分離純化時應(yīng)挑選出有______________的菌落作為候選菌。
（2）下圖是用不同方法分離純化乳酸菌得到的結(jié)果，A和B所用的接種方法分別是___________________和__________，兩種方法都有將聚集的微生物進行稀釋的操作，目的是_________________。如果要統(tǒng)計泡菜汁中乳酸菌的數(shù)目，應(yīng)選擇方法______________（A，B，A和B均可）。

（3）如果要對分離得到的乳酸菌進行保藏，對于頻繁使用的菌種采用______________法，對于要長期保存的菌種采用 ________________法
【答案】破傷風桿菌 鑒別 溶鈣圈 平板劃線法 稀釋涂布平板法 培養(yǎng)基表面形成由單個細胞繁殖而來菌落 B 臨時保藏法 甘油管藏法
【分析】
1、酸奶和泡菜的制作原理：在無氧條件下，乳酸菌將葡萄糖分解成乳酸。2、接種微生物常用的兩種方法：①平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。②稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。
【詳解】
（1）酵母菌是兼性厭氧型、醋酸桿菌是異養(yǎng)需氧型、破傷風桿菌是異養(yǎng)厭氧型、藍藻是自養(yǎng)需氧型，乳酸菌是異養(yǎng)厭氧型。故代謝類型和乳酸菌相同的是破傷風桿菌。題目中分離純化乳酸菌所用的培養(yǎng)基從功能角度判斷屬于鑒別培養(yǎng)基。分離純化所用的固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣從而產(chǎn)生溶鈣圈。故分離純化時應(yīng)挑選出有溶鈣圈的菌落作為候選菌。
（2）據(jù)圖可知，A所用的接種方法是平板劃線法，B所用的接種方法是稀釋涂布平板法，兩種方法都有將聚集的微生物進行稀釋的操作，目的是在培養(yǎng)基表面形成由單個細胞繁殖而來菌落?？捎梅椒˙來統(tǒng)計泡菜汁中乳酸菌的數(shù)目。
（3）如果要對分離得到的乳酸菌進行保藏，對于頻繁使用的菌種采用臨時保藏法，用試管固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)乳酸菌，在4℃冰箱保藏；對于要長期保存的菌種采用 甘油管藏法，在-20℃冷凍箱中保存。
【點睛】
本題考查微生物的分離和培養(yǎng)及菌種的保藏，對于此類試題，需要考生注意的細節(jié)較多，如實驗的原理、實驗采用的方法、實驗步驟等，需要考生在平時的學(xué)習(xí)過程中注意積累。
62．定水樣是否符合飲用水衛(wèi)生標準，常用濾膜法測定大腸桿菌的數(shù)目。濾膜法的大致流程如圖所示：用濾膜過濾待測水樣→水樣中的細菌留在濾膜上→將濾膜轉(zhuǎn)移到EMB培養(yǎng)基上培養(yǎng)→統(tǒng)計菌落數(shù)目。請據(jù)圖回答問題：

注：EMB培養(yǎng)基的成分：蛋白胨、NaCl、乳糖、水、X和瓊脂
（1）EMB培養(yǎng)基中為細菌提供碳源的是___________，添加的X是__________，大腸桿菌在含有X的培養(yǎng)基表面長出的菌落呈黑色，從功能上看，EMB培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。
（2）待測水樣過濾完之后，還有部分細菌吸附在濾杯杯壁上，將這部分細菌也盡可能集中到濾膜上的操作為：在無菌條件下，用___________沖洗濾杯，并再次過濾水樣。
（3）取10mL待測水樣加入90mL無菌水稀釋，稀釋后取10mL菌液通過濾膜法測得三個平板上的黑色菌落數(shù)分別為13、15、17，推測1L待測水樣中的大腸桿菌數(shù)目為________個。
（4）在培養(yǎng)過程中，發(fā)現(xiàn)空白對照組的平板上檢測到少許菌落，請分析最可能的原因是______________。
（5）如果在實驗組的培養(yǎng)基上添加了青霉素再進行相同的操作，預(yù)測檢測的大腸桿菌菌落數(shù)_______（填“會”或“不會”）變化，原因是______________。
【答案】蛋白胨和乳糖 伊紅美藍 鑒別 無菌水 1500 培養(yǎng)基滅菌不合格（不徹底）或培養(yǎng)過程被雜菌污染 會 青霉素會抑制細菌的生長
【分析】
濾膜法是檢測水樣中大腸桿菌群的方法。將一定量水樣注入已滅菌的微孔薄膜的濾器中，經(jīng)過抽濾，細菌被截留在濾膜上，將濾膜貼于伊紅美藍培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）上，經(jīng)培養(yǎng)后計數(shù)和鑒定濾膜上生長的大腸桿菌菌落，依據(jù)過濾水樣體積計算每升或每100毫升水樣中的大腸桿菌菌群數(shù)。該方法操作簡單、快速，主要適用于雜質(zhì)較少的水樣。
【詳解】
（1）通過EMB培養(yǎng)基（伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基）配方可知，EMB培養(yǎng)基中為細菌提供碳源的是蛋白胨和乳糖，添加的X是伊紅美藍，從功能上看，EMB培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基。
（2）待測水樣過濾完之后，還有部分細菌吸附在濾杯杯壁上，可在無菌條件下，用無菌水沖洗濾杯，再次過濾，將這部分細菌也盡可能集中到濾膜上，使實驗測定結(jié)果更準確。
（3）無菌操作下將10ml 待測水樣加入到90ml無菌水中，即稀釋了10倍，稀釋后的1mL菌液通過濾膜法測得EMB培養(yǎng)基上的菌落數(shù)平均為（13+15+17）÷3÷10=1.5個，黑色菌落為大腸桿菌，則推測1升待測水樣中的大腸桿菌數(shù)目為1.5×1000=1500個。
（4）在培養(yǎng)過程中，發(fā)現(xiàn)空白對照組的平板上檢測到少許菌落，可能是培養(yǎng)基滅菌不合格（不徹底）或培養(yǎng)過程被雜菌污染。
（5）如果在實驗組的培養(yǎng)基上添加了青霉素再進行相同的操作，預(yù)測檢測的大腸桿菌菌落數(shù)會變化，原因是青霉素會抑制細菌的生長。
【點睛】
本題以實驗流程圖為載體，考查了微生物的分離與計數(shù)的有關(guān)知識，要求考生能根據(jù)圖示明確濾膜法的原理和步驟，掌握大腸桿菌的鑒定、分離與計數(shù)方法，結(jié)合題干信息準確答題。
63．苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對環(huán)境有嚴重危害。小明同學(xué)準備依據(jù)下圖操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請回答下列問題：

（1）酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作為碳源的有_____。
（2）將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸_____，以達到富集酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過于密集，應(yīng)進一步_____，以便于菌落計數(shù)與分離。制備平板培養(yǎng)基時除了需要水、營養(yǎng)物質(zhì)外，還必須添加_____。
（3）下圖為連續(xù)劃線法示意圖，在圖中_____（填圖中序號）區(qū)域更易獲得單菌落。在做第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上次劃線的末端開始劃線？_________。

（4）采用比色測定法（使用苯酚顯色劑）檢測降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進行顯色反應(yīng)，下表中1～5 號比色管的苯酚濃度應(yīng)依次為_____。
管號
1
2
3
4
5
6
苯酚濃度/（mg·L-1）





1
如果廢水為50 mg/L苯酚溶液，降解后約有21% 的苯酚殘留，則需將殘留液稀釋_____（填序號：①5?、?0?、?0）倍后，再進行比色。
【答案】蛋白胨、苯酚 增加 稀釋或稀釋涂布 凝固劑或瓊脂 ③ 劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少。每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終能得到由單個細菌繁殖而成的菌落。 0、0.2、0.4、0.6、0.8 ③
【分析】
稀釋涂布平板法和平板劃線法接種目的菌進行分離、純化，前者主要應(yīng)用于對目的菌進行計數(shù)，通過形成菌落來估算，后者僅僅是純化菌種，但也需要挑選單菌落，所以二者都需要在固體培養(yǎng)基上完成培養(yǎng)。為了防止操作中、操作后造成雜菌污染，所以應(yīng)注意每個環(huán)節(jié)中盡可能做到無菌操作，如對接種環(huán)的灼燒，在酒精燈的火焰旁進行接種環(huán)操作等等。
【詳解】
（1）從培養(yǎng)基的成分來看，只有蛋白胨和苯酚內(nèi)含有碳元素，其中可作為碳源的有蛋白胨、苯酚。
（2）因為最終要獲得的菌株為可以高效降解酚的菌株，所以苯酚的用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸增加；稀釋涂布平板法可以分離密集菌落，同時便于菌落的分離和計數(shù)，因此若上圖平板中菌落過于密集，應(yīng)進一步稀釋或稀釋涂布，以便于菌落計數(shù)與分離；平板培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，在制備時除應(yīng)加入的水及其他營養(yǎng)物質(zhì)后，還需加入凝固劑（瓊脂）。
（3）圖示為平板劃線法得到的平板，依據(jù)是每次劃線的菌種都來自上一次劃線的末端，最后一次劃線結(jié)束時更容易獲得單菌落，因此圖中③區(qū)域更易獲得單菌落。平板劃線法操作在作第二次以及其后的劃線操作時，劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少。每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終能得到由單個細菌繁殖而成的菌落。
（4）題干中提到要制作系列濃度梯度進行顯色反應(yīng)，共配制了六支比色管，所以六支比色管的濃度值依次分別為0、0.2、0.4、0.6、0.8、1；廢水中含有50mg/L 苯酚溶液，降解后剩余21%，則剩余中含有50×21%=10.5mg/L 苯酚溶液，經(jīng)過5倍或10倍稀釋后分別為2.1mg/L 和1.05mg/L ，不在比色區(qū)間內(nèi)，而20倍稀釋后濃度為0.5mg/L ，在比色區(qū)間內(nèi)，因此要稀釋20倍后再進行比色。
故選③。
【點睛】
本題涉及用稀釋涂布平板法和平板劃線法接種目的菌進行分離、純化和計數(shù)，關(guān)鍵是需要明確它們的操作方法和要求。如為什么需要對菌液進行稀釋，為什么需要對接種環(huán)進行灼燒，為什么要用固體培養(yǎng)基等等。
營養(yǎng)缺陷型菌株就是在人工誘導(dǎo)（或自發(fā)突變）下，微生物細胞代謝調(diào)節(jié)機制中的某些酶被破壞掉，使代謝過程中的某些合成反應(yīng)不能進行，從而為工業(yè)生產(chǎn)積累大量的原料產(chǎn)物。以下是實驗人員利用影印法初檢氨基酸缺陷型菌株的過程，請回答。

64．過程①的方法為 _________________ ，與基本培養(yǎng)基（只含碳源、無機鹽、水）相比，待測培養(yǎng)皿中特有的成分有______________________。
65．過程②應(yīng)將印在絲絨布上的菌落先轉(zhuǎn)印至____________培養(yǎng)基上，原因是___________________________________________________________________。 釆用影印法培養(yǎng)的優(yōu)點是________________________________________ 。
66．為進一步完成對初檢的缺陷型菌株的鑒定，實驗人員進行了如下操作：
①用接種針挑取_____________（選填“菌落A”或“菌落B”）菌落接種于盛有完全培養(yǎng)液的離心管中，28℃震蕩培養(yǎng)1—2天后，離心，取沉淀用 _____________洗滌菌體3次并制備成菌懸液。②吸取1mL菌懸液加入無菌培養(yǎng)皿中，傾注約15mL融化并冷卻至45—50℃的基本瓊脂培養(yǎng)基，冷凝后用記號筆在培養(yǎng)皿的皿底劃分五個區(qū)域，做好標記。
③在劃分的五個區(qū)域上放入少量分組的氨基酸結(jié)晶或粉末（五組混合氨基酸如下表所示），經(jīng)培養(yǎng)后，觀察生長圈出現(xiàn)的區(qū)域，從而確定屬于何種氨基酸缺陷型。
組別
所含氨基酸
A
組氨酸
蘇氨酸
谷氨酸
天冬酰胺
亮氨酸
B
精氨酸
蘇氨酸
賴氨酸
甲硫氨酸
苯丙氨酸
C
酪氨酸
谷氨酸
賴氨酸
色氨酸
丙氨酸
D
甘氨酸
天冬氨酸
甲硫氨酸
組氨酸
絲氨酸
E
胱氨酸
亮氨酸
苯丙氨酸
丙氨酸
絲氨酸
在上述鑒定實驗中，發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基的A、D區(qū)域出現(xiàn)生長圈，則說明該缺陷型屬于_________。
【答案】
64． 稀釋涂布平板法 氨基酸
65． 基本 防止基本培養(yǎng)基中混入特殊的（氨基酸）營養(yǎng)成分 保證不同培養(yǎng)皿同種菌株的接種位置相同
66． 菌落A 無菌水 組氨酸缺陷型
【分析】
分析圖可知：圖中首先利用稀釋涂布平板法分離細菌，然后運用“影印法”將菌種接種到兩種培養(yǎng)基中：基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基，在基本培養(yǎng)基中，氨基酸缺陷型菌株不能生長，而在完全培養(yǎng)基中能夠生長，因此可以選擇出氨基酸缺陷型菌株。
64．
分析圖解可知，過程①導(dǎo)致菌落均勻分布，因此該方法為稀釋涂布平板法。兩種培養(yǎng)基分別培養(yǎng)是為了篩選出氨基酸缺陷型菌株，因此與基本培養(yǎng)基（只含碳源、無機鹽、水）相比，待測培養(yǎng)皿中特有的成分有氨基酸，類似于完全培養(yǎng)基。
65．
過程②應(yīng)將印在絲絨布上的菌落先轉(zhuǎn)印至基本培養(yǎng)基上，原因是防止基本培養(yǎng)基中混入特殊的（氨基酸）營養(yǎng)成分。采用影印法培養(yǎng)的優(yōu)點是保證不同培養(yǎng)皿同種菌株的接種位置相同。
66．
①比較基本培養(yǎng)基（缺乏氨基酸）和完全培養(yǎng)基（含有氨基酸）中的菌落可知，菌落A為氨基酸缺陷型菌株（菌落更多），因此需要用接種針挑取菌落A接種于盛有完全培養(yǎng)液的離心管中，28°C震蕩培養(yǎng) 1-2天后，離心，取沉淀用(無菌) 生理鹽水洗滌菌體3次并制備成菌懸液。
③在劃分的五個區(qū)域上放入少量分組的氨基酸結(jié)晶或粉末（五組混合氨基酸如下表所示），經(jīng)培養(yǎng)后，觀察生長圈出現(xiàn)的區(qū)域，根據(jù)題意可知，在培養(yǎng)基的A、D區(qū)域出現(xiàn)生長圈，說明A和D兩種培養(yǎng)基中存在缺陷的氨基酸（因為加入了氨基酸，缺陷型菌株會生長，從而出現(xiàn)生長圈），與BCD組比較可知，AD組中的組氨酸是特有且相同的氨基酸，因此說明該缺陷型屬于組氨酸缺陷型。
【點睛】
本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)的有關(guān)知識，要求考生能夠根據(jù)題干信息確定該菌種的篩選過程，同時能夠根據(jù)表格信息確實能夠缺陷的氨基酸種類，意在考查考生的信息處理能力。
67．蘋果干腐病是由某種真菌感染引起的疾病，某植保人員設(shè)計實驗研究了藥物苦參堿和福美砷的抑菌效果。實驗結(jié)果如下表所示，回答下列相關(guān)問題：
材料：經(jīng)0．1%氯化汞消毒的9cm感染組織塊
組別
無菌水
0．5%苦參堿
（植物源殺蟲劑）
40%福美砷藥液
（化學(xué)農(nóng)藥）
抑菌率（%）
PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)配方：馬鈴薯、葡萄糖、鏈霉素、瓊脂、蒸餾水
A
＋
－
－
0
B
－
＋
－
84.0
C
－
－
＋
82.6
注：＋表示加入，－表示不加。
（1）設(shè)置A組的作用是_________，PDA培養(yǎng)基是________（填物理狀態(tài)）培養(yǎng)基，需采用_______法滅菌，推測PDA培養(yǎng)基中添加鏈霉素的目的是____________________________。
（2）本實驗觀測指標是：__________________________。
（3）根據(jù)實驗結(jié)果，植保人員建議使用0．5%苦參堿防治蘋果干腐病，建議的依據(jù)是①_________________；②_____________________。
【答案】對照 固體 高壓蒸汽滅菌 抑制細菌生長，不影響真菌生長 培養(yǎng)基上的菌落數(shù) 0．5%苦參堿的抑菌效果與40%福美砷相當 苦參堿是植物源殺蟲劑無殘留不會污染環(huán)境，而福美砷是化學(xué)農(nóng)藥，長期使用會污染環(huán)境、影響人體健康
【分析】
培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)；分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源和無機鹽，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因為它們來源于動物原料，含有糖、維生素和有機氮等營養(yǎng)物質(zhì)。在提供上述幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物種和氧氣的要求。
【詳解】
（1）本實驗是研究藥物苦參堿和福美砷的抑菌效果，A組沒有加入藥物苦參堿和福美砷，而是加入了等量的無菌水、目的是作為對照組。PDA培養(yǎng)基成分中含有瓊脂，所以是固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基滅菌應(yīng)用高壓蒸汽滅菌。PDA培養(yǎng)基中添加鏈霉素的目的抑制細菌生長，但不影響真菌生長，可排除細菌對該實驗的影響。
（2）該實驗是研究藥物苦參堿和福美砷的抑菌效果，若菌體生長被抑制，則培養(yǎng)基上的菌落數(shù)減少，所以本實驗的觀測指標是培養(yǎng)基上的菌落數(shù)。
（3）通過上述實驗，植保人員建議使用0.5%苦參堿防治蘋果干腐病。這是因為0.5%苦參堿的抑菌效果比40%福美砷略好，并且苦參堿是植物源殺蟲劑、無殘留、不會污染環(huán)境，而福美砷是化學(xué)農(nóng)藥，長期使用會污染環(huán)境、影響人體健康。
【點睛】
本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，以蘋果干腐病的防治為背景，考查了培養(yǎng)基的類型和無菌技術(shù)等知識，要求考生能夠分析實驗結(jié)構(gòu)得出正確的實驗結(jié)論。
68．酵母的蛋白質(zhì)含量可達自身干重的一半，可作為飼料蛋白的來源。有些酵母可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進行培養(yǎng)，這樣既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類酵母，并進行大量培養(yǎng)。如圖所示為操作流程，請回答下列問題：

（1）配制培養(yǎng)基時，按照培養(yǎng)基配方準確稱量各組分，將其溶解、定容后，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的___________，及時對培養(yǎng)基進行分裝，并進行___________滅菌。
（2）取步驟②中不同梯度的稀釋液加入標記好的無菌培養(yǎng)皿中，在步驟③中將溫度約_________（在25℃，50℃或80℃中選擇）的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻，冷凝后__________培養(yǎng)。
（3）挑取分離平板中長岀的單菌落，按步驟④所示進行劃線。劃線應(yīng)注意的事項有__________________（答出兩項即可）；步驟⑤中，為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過程中需保證充足的營養(yǎng)和_________供應(yīng)。
（4）研究人員從土壤樣品中獲得該類酵母后，若需要長期保存，可以采用______________的方法。
【答案】pH 高壓蒸汽 50℃ 倒置 為保證無菌操作，接種環(huán)使用前都必須滅菌；每次劃線結(jié)束后要進行灼燒；每一次在上一次劃線結(jié)束處開始；劃線時應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，以免不能形成正常菌落等 氧氣 甘油管藏
【分析】
據(jù)圖分析，①稱量土樣，里面含有需要分離的酵母菌；②表示梯度稀釋，③④表示平板劃線法，進行純化培養(yǎng)；⑤表示擴大培養(yǎng)，獲得更多的酵母菌。
【詳解】
（1）配制培養(yǎng)基的操作步驟為稱量→溶化→定容→調(diào)pH→分裝→包扎→滅菌→倒平板，因此微生物的培養(yǎng)基配制好后應(yīng)先調(diào) pH，再分裝。常見的滅菌方法有：高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌。培養(yǎng)基適宜用高壓蒸汽滅菌法滅菌。
（2）倒平板時需待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時倒平板，冷凝后倒置培養(yǎng)，防止冷凝形成的水珠落入培養(yǎng)基后污染培養(yǎng)基。
（3）在劃線過程中，接種針、接種環(huán)使用前必須滅菌，以防止雜菌污染培養(yǎng)基；每次劃線結(jié)束后要進行灼燒，以清除接種環(huán)上殘留菌種；每一次在上一次劃線結(jié)束處開始，為了保證接種環(huán)上的酵母菌來自于上一次劃線末端，通過增加劃線次數(shù)使每一次劃線時的酵母菌數(shù)目逐漸減少，最終得到由單個細胞繁殖而來的菌落；劃線時應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，大量酵母菌聚集，不能形成正常菌落。酵母菌的代謝類型是兼性厭氧型，有氧呼吸可以產(chǎn)生大量能量供酵母菌大量繁殖，所以需提供足夠的氧使酵母數(shù)量迅速增加。
（4）對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。
【點睛】
本題主要考查對食用菌菌種擴大培養(yǎng)并保存的過程中涉及的培養(yǎng)基配制、滅菌及菌種轉(zhuǎn)移和保藏的一些基礎(chǔ)知識，考生需注意歸納總結(jié)，才能減少犯錯。





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