一、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)1.概念:使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。融合后形成的雜交細(xì)胞具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息。2.誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的常用方法(1)物理法:電融合法等。(2)化學(xué)法:PEG融合法等。(3)生物法:滅活病毒誘導(dǎo)法等。3.意義:利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)發(fā)展起來(lái)的雜交瘤技術(shù),為制造單克隆抗體開(kāi)辟了新途徑。
預(yù)習(xí)反饋1.判斷正誤。(1)動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程中既有細(xì)胞膜的融合也有細(xì)胞核的融合。( √ )(2)與植物原生質(zhì)體融合相比,動(dòng)物細(xì)胞融合特有的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇、滅活的病毒。( × )(3)動(dòng)物體細(xì)胞融合后的雜交細(xì)胞仍然是二倍體細(xì)胞。( × )
2.下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與植物體細(xì)胞雜交技術(shù)的說(shuō)法,正確的是(　　 )A.基本原理相同B.誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法相同C.細(xì)胞融合前的處理過(guò)程相同D.融合后都需要進(jìn)行篩選答案D解析植物體細(xì)胞雜交技術(shù)的原理為細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞的全能性,而動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)利用的是細(xì)胞膜的流動(dòng)性(和細(xì)胞增殖);動(dòng)物細(xì)胞融合常用滅活的病毒誘導(dǎo),該誘導(dǎo)方法不適用于植物體細(xì)胞雜交;植物體細(xì)胞雜交常用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁,而動(dòng)物細(xì)胞融合不用;細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)融合后會(huì)形成多種融合細(xì)胞,還有未融合細(xì)胞,因此要進(jìn)行篩選。
二、單克隆抗體及其應(yīng)用1.傳統(tǒng)抗體的制備(2)缺點(diǎn):產(chǎn)量低、純度低、特異性差。
2.單克隆抗體的制備(1)(2)解決思路:將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合為雜交瘤細(xì)胞。
(3)制備過(guò)程(4)單克隆抗體的特點(diǎn):能準(zhǔn)確識(shí)別抗原的細(xì)微差異,與特異抗原發(fā)生特異性結(jié)合,并可大量制備。(5)單克隆抗體的應(yīng)用:被廣泛用作診斷試劑,在多種疾病的診斷和病原體鑒定中發(fā)揮重要作用。
預(yù)習(xí)反饋1.判斷正誤。(1)單克隆抗體的制備可從未經(jīng)免疫的小鼠體內(nèi)提取B淋巴細(xì)胞。( × )(2)單克隆抗體制備過(guò)程中的兩次篩選目的相同。( × )
2.下列關(guān)于單克隆抗體的制備和應(yīng)用的敘述,正確的是(　　)A.B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合,一般需要滅活的病毒或聚乙二醇誘導(dǎo)B.融合后形成的雜交瘤細(xì)胞既能無(wú)限增殖,又能產(chǎn)生單克隆抗體C.體外培養(yǎng)時(shí),一個(gè)B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體,也能無(wú)限增殖D.單克隆抗體與常規(guī)抗體相比,特異性強(qiáng),靈敏度高,利用分子克隆技術(shù)大量制備
答案A解析動(dòng)物細(xì)胞的融合需要物理、化學(xué)或生物的方法來(lái)誘導(dǎo)才能實(shí)現(xiàn),其中生物方法是利用滅活的病毒來(lái)誘導(dǎo),化學(xué)方法是利用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑,A項(xiàng)正確;第一次篩選出的融合細(xì)胞——雜交瘤細(xì)胞不一定能產(chǎn)生針對(duì)特定抗原的單克隆抗體,需要進(jìn)行第二次篩選才能達(dá)到目的,B項(xiàng)錯(cuò)誤;在體外培養(yǎng)條件下,一個(gè)B淋巴細(xì)胞是不可能無(wú)限增殖的,C項(xiàng)錯(cuò)誤;與一般的血清抗體相比,單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)在于其特異性強(qiáng)、靈敏度高,它可以利用雜交瘤細(xì)胞的克隆而實(shí)現(xiàn)大量制備,而非分子克隆,D項(xiàng)錯(cuò)誤。
動(dòng)物細(xì)胞融合情境導(dǎo)引動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交主要有哪些區(qū)別?結(jié)合下面動(dòng)物細(xì)胞融合的過(guò)程,探究下列問(wèn)題。
1.從融合的過(guò)程看,首先是A、B細(xì)胞膜融合,接著是　　　　　融合,最后完成　　　　　　融合。?答案細(xì)胞質(zhì)　細(xì)胞核2.細(xì)胞膜融合的過(guò)程體現(xiàn)出細(xì)胞膜具有　　　　　　　　　　　　　　　　。?答案一定的流動(dòng)性3.融合后重組細(xì)胞的特點(diǎn)為融合形成的雜種細(xì)胞C具有兩種細(xì)胞的　　　　　,通過(guò)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),雜種細(xì)胞C表現(xiàn)出兩個(gè)親本細(xì)胞的特點(diǎn)。?答案遺傳信息
4.誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合和誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合都可使用的方法有　。?答案物理方法(電融合法等)和化學(xué)方法(PEG融合法等)5.若A、B細(xì)胞為單倍體煙草植物的體細(xì)胞,在兩細(xì)胞融合前需用酶解法去掉　　　　　　,所用酶是　　　　　　　、　　　　　　,雜交細(xì)胞C經(jīng)培養(yǎng)形成的高度液泡化、無(wú)定形的薄壁細(xì)胞團(tuán)稱(chēng)為　　　　　　　　。?答案細(xì)胞壁　纖維素酶　果膠酶　愈傷組織
歸納提升1.對(duì)動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程的理解(1)細(xì)胞融合的過(guò)程包括細(xì)胞膜的融合、細(xì)胞質(zhì)融合和細(xì)胞核融合,其中細(xì)胞膜的融合是細(xì)胞融合的先導(dǎo),在細(xì)胞膜融合中體現(xiàn)出細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性。(2)動(dòng)物細(xì)胞融合完成的標(biāo)志:來(lái)自不同細(xì)胞的兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞核融合成一個(gè)細(xì)胞核。
2.動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較
易錯(cuò)提醒病毒在生物技術(shù)中的應(yīng)用(1)滅活的病毒能作為誘導(dǎo)劑,不滅活的病毒不能作為誘導(dǎo)劑。(2)病毒在不同過(guò)程或操作中的“身份不同”。在免疫調(diào)節(jié)中病毒屬于抗原,在基因工程中可作為載體,在細(xì)胞工程中可作為誘導(dǎo)劑。
典例剖析(多選)如圖為細(xì)胞融合的示意圖,下列敘述正確的是(　　)A.若a細(xì)胞和b細(xì)胞是植物細(xì)胞,需先去壁再誘導(dǎo)融合B.a細(xì)胞和b細(xì)胞之間的融合需要促融處理后才能實(shí)現(xiàn)C.c細(xì)胞的形成與a、b細(xì)胞膜的流動(dòng)性都有關(guān)D.c細(xì)胞將同時(shí)表達(dá)a細(xì)胞和b細(xì)胞中的所有基因答案ABC
解析若a細(xì)胞和b細(xì)胞是植物細(xì)胞,需先去細(xì)胞壁再誘導(dǎo)融合,A項(xiàng)正確;a細(xì)胞和b細(xì)胞之間的融合需要促融處理后才能實(shí)現(xiàn),B項(xiàng)正確;c細(xì)胞的形成,依賴(lài)細(xì)胞膜的流動(dòng)性,C項(xiàng)正確;因?yàn)閏細(xì)胞中含有a、b兩種細(xì)胞的遺傳物質(zhì),因此,c細(xì)胞將選擇性地表達(dá)a細(xì)胞和b細(xì)胞中的基因,D項(xiàng)錯(cuò)誤。
活學(xué)活練下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞融合的說(shuō)法,不正確的是(　　)A.動(dòng)物細(xì)胞融合是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程B.動(dòng)物細(xì)胞融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞稱(chēng)為雜交細(xì)胞C.細(xì)胞融合技術(shù)突破了有性雜交的局限,使遠(yuǎn)緣雜交成為可能D.常用的誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的因素有:聚乙二醇、滅活的病毒、電激、紫外線(xiàn)照射等
答案D解析動(dòng)物細(xì)胞融合是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程,A項(xiàng)正確;動(dòng)物細(xì)胞融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞稱(chēng)為雜交細(xì)胞,B項(xiàng)正確;細(xì)胞融合技術(shù)突破了有性雜交的局限,使遠(yuǎn)緣雜交成為可能,C項(xiàng)正確;常用于誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合手段有:化學(xué)法(聚乙二醇)、生物法(滅活的病毒)、物理法(電激),紫外線(xiàn)照射不是誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的手段,D項(xiàng)錯(cuò)誤。
單克隆抗體及其應(yīng)用情境導(dǎo)引如何進(jìn)行單克隆抗體的制備?下圖是單克隆抗體制備過(guò)程的各階段圖解,請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題。
1.請(qǐng)用箭頭把代表各圖解的字母按單克隆抗體制備過(guò)程的順序連接起來(lái)。答案2.在單克隆抗體制備過(guò)程中,選用B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的雜交瘤細(xì)胞具有的特點(diǎn)是　　　　　　　　　　　。?答案既能迅速大量增殖,又能產(chǎn)生抗體3.由圖中可以看出,在單克隆抗體制備過(guò)程中運(yùn)用了　　　　　　　　　　　　和　　　　　　　　　　等動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)手段。?答案動(dòng)物細(xì)胞融合　動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)4.請(qǐng)寫(xiě)出圖中兩次篩選的目的:??　　　　　　　　。?答案第一次篩選出雜交瘤細(xì)胞,第二次篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞
歸納提升1.單克隆抗體的制備流程
4.單克隆抗體制備過(guò)程中兩次篩選的區(qū)別
典例剖析單克隆抗體制備過(guò)程中,骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞。在這種培養(yǎng)基上不能存活、增殖的細(xì)胞是(　　)①B淋巴細(xì)胞?、谛∈蠊撬枇黾?xì)胞?、跙淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞?、苄∈蠊撬枇黾?xì)胞自身融合細(xì)胞?、蓦s交瘤細(xì)胞A.①②③④B.①③⑤ C.②④D.①③答案A解析特定培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞的目的是篩選出既能大量增殖,又能產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞,因此其他的細(xì)胞都不能在此培養(yǎng)基上生存。在這種培養(yǎng)基上不能存活和繁殖的細(xì)胞有①B淋巴細(xì)胞、②小鼠骨髓瘤細(xì)胞、③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞、④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞。
活學(xué)活練下列有關(guān)單克隆抗體的制備的敘述,正確的是(　　)A.小鼠骨髓瘤細(xì)胞染色體數(shù)為40,其B淋巴細(xì)胞的染色體數(shù)為40,融合后形成的雜交瘤細(xì)胞DNA分子數(shù)為80B.在單克隆抗體的制備過(guò)程中,只有一次篩選C.單克隆抗體的制備需要用到動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合和動(dòng)物體細(xì)胞核移植等技術(shù)D.B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞融合后有三種細(xì)胞類(lèi)型(若僅考慮兩兩融合的情況)

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