（1）細胞培養(yǎng)肉制造過程中主要涉及的生物技術(shù)有______。（編號選填）①核移植技術(shù) ②細胞培養(yǎng)技術(shù) ③干細胞技術(shù) ④試管動物技術(shù)
（2）圖1步驟②的生物反應器中，在滿足細胞培養(yǎng)所需要的溫度、PH和溶解氧等條件下，以下操作正確的是 。（多選）
A 嚴格控制無菌環(huán)境B. 定期更換培養(yǎng)液
C. 及時清除代謝產(chǎn)物D. 定期添加瓊脂
（3）圖1步驟②的生物反應器中，所有細胞均能發(fā)生的生理過程為________，只能發(fā)生在干細胞增殖過程中的生理過程為_________。（圖2中的編號選填）
（4）圖1的步驟①→②過程中，能夠說明干細胞已被成功地培養(yǎng)為肌細胞的證據(jù)是細胞 。（多選）
A. 形態(tài)呈梭形B. 具備收縮功能
C. 具有肌原纖維蛋白基因D. 能合成肌漿蛋白
某科研團隊探究了維生素C對豬肌肉干細胞體外增殖的影響，部分實驗結(jié)果如圖3所示，圖4是驗證維生素C通過影響P13K（一種與細胞增殖相關(guān)的信號分子）水平來影響細胞增殖的實驗及獲得的數(shù)據(jù)。
（5）在豬肌肉干細胞培養(yǎng)基中添加的維生素C屬于 。（單選）
A. 碳源B. 氮源C. 能源D. 生長因子
（6）圖3實驗所研究的各濃度中，___________μM維生素C對豬肌肉干細胞體外增殖有促進作用。圖4中實驗組合____________可對照說明維生素C的促增殖作用被PI3K信號抑制劑抑制。
2．（2024屆·上海市黃浦區(qū)·統(tǒng)考一模）深海微生物研究：開展深海微生物研究對于開發(fā)海洋資源具有重要意義。我國研究人員采集了深海冷泉附近的沉積物樣品，采用新型分離策略，純化、鑒定得到了全新的擬桿菌菌株，并進一步研究了其生物學特性，具體過程如圖1所示，圖中I ~ V是操作步驟。
（1）擬桿菌是厭氧生物，細胞呈彎曲桿狀，透射電鏡觀察細胞長2.0 ~ 6.0μm，寬0.5 ~ 0.8μm。擬桿菌一定具有的細胞結(jié)構(gòu)是_____。（單選）
A. 線粒體B. 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)C. 細胞核D. 核糖體
（2）研究人員經(jīng)基因組測序發(fā)現(xiàn)擬桿菌中與藻類多糖降解有關(guān)的基因數(shù)量明顯高于其他菌種，因此向基本培養(yǎng)基中分別添加不同藻類多糖來配制系列培養(yǎng)基①，并以此對菌種進行分離?；九囵B(yǎng)基中應該含有的營養(yǎng)成分包括_____。（編號選填）
①碳源 ②氮源 ③生長因子 ④無機鹽 ⑤水
（3）圖1步驟I ~ V中，須無菌操作的是_____；須對菌株進行培養(yǎng)的是_____。
（4）結(jié)合實驗目的，下列關(guān)于培養(yǎng)基① ~ ③的敘述正確的是_____。（多選）
A. ①是固體培養(yǎng)基B. ① ~ ③的碳源種類可以完全相同
C. ②是液體培養(yǎng)基D. ③的碳源濃度可以與①的不同
純化獲得的擬桿菌經(jīng)基因組測序鑒定得到了全新菌株WC007。該菌株在含不同藻類多糖的培養(yǎng)基中測定的生長曲線如圖2所示。
（5）據(jù)圖2，比較各組實驗結(jié)果的異同_____。
（6）藻類細胞解體后的多糖物質(zhì)難降解，通常會聚集形成碎屑沉降到深海底部。從生態(tài)系統(tǒng)組成的角度分析，WC007菌株對深海生態(tài)系統(tǒng)主要價值在于_____。
3．（2024屆·上海市黃浦區(qū)·統(tǒng)考一模）5. 條件性基因敲除小鼠：為構(gòu)建肝特異性CD36基因敲除小鼠模型，研究人員利用Cre-lxP系統(tǒng)開展實驗。
【實驗原理】
如圖1所示，該系統(tǒng)中的Cre可識別DNA分子中特定的lxP序列，當DNA分子上存在兩個同向lxP序列時，Cre可將兩個lxP序列之間的DNA序列剪除，切口連接形成的環(huán)化產(chǎn)物被降解，從而達到敲除特定基因的目的。
（1）Cre的作用類似于基因工程中的_____，DNA切口環(huán)化連接的過程需要_____。（編號選填）
①質(zhì)粒 ②DNA連接酶 ③DNA聚合酶 ④限制性內(nèi)切核酸酶
【實驗過程】
圖2顯示兩類工具鼠，區(qū)別于未經(jīng)人工改造的野生型小鼠，其中A鼠成對的CD36基因兩側(cè)均分別引入一個同向lxP序列（基因型表示為L+L+，野生型為L-L-），B鼠中含一個外源導入的Cre編碼序列（基因型表示為C +C -，野生型為C -C -），Alb表示肝臟組織特異性啟動子。研究人員利用A、B兩類工具鼠作為親本，選用合適的雜交策略，即可獲得基于Cre-lxP系統(tǒng)的肝特異性CD36基因敲除目標小鼠。
（2）目標小鼠的基因型應為______。（單選）
A. L+L+C +C -B. L+L+C -C -C. L-L-C+C+D. L+L-C+C -
（3）選擇合適的雜交策略，目標小鼠最早可出現(xiàn)在______。（單選）
A. 子一代B. 子二代C. 子三代D. 子四代
（4）雜交產(chǎn)生目標小鼠過程中，基因L+/L-、C+/C -發(fā)生的行為包括______。（多選）
A. 突變B. 重組C. 分離D. 復制
【實驗結(jié)果】
研究人員取鼠尾細胞通過瓊脂糖凝膠電泳鑒定子代1~8號小鼠的基因型，結(jié)果如圖3。并對鑒定出的目標小鼠不同組織中CD36蛋白相對表達量進行了檢測，結(jié)果如圖4。
（5）已知A鼠、B鼠的基因型檢測結(jié)果分別與圖3中子代6號、1號小鼠相同，則圖3中代表目標小鼠的是______號。
（6）為檢驗目標小鼠體內(nèi)CD36基因的敲除效果，圖4中對照小鼠應選擇______（野生型小鼠/A鼠/B鼠）。
（7）下列①~④表示對小鼠不同組織細胞基因檢測的結(jié)果，+表示存在，-表示缺失，其中符合目標小鼠情況的是_____。（編號選填）
（8）據(jù)題意和圖4，描述Cre-lxP系統(tǒng)在目標小鼠體內(nèi)發(fā)揮作用的機制______。
4．（2024屆·上海市嘉定區(qū)·統(tǒng)考一模）研究表明羊乳中的β-乳球蛋白（BLG）是人體主要過敏源，圖為研究人員利用基因編輯技術(shù)敲除山羊中BLG基因同時敲入人乳鐵蛋白（hLF）基因并獲得轉(zhuǎn)基因山羊的操作過程。
圖中sgBLG /Cas9復合物中，sgBLG為能準確識別圖中山羊DNA特定序列的RNA，并引導Cas9蛋白對DNA進行切割。檢測發(fā)現(xiàn)過程②中，hLF基因成功插入在母羊乙成纖維細胞中的一條常染色體上。
（1）上述操作過程中的目的基因是______，獲得該目的基因的主要方法是______。
（2）Cas9蛋白類似于基因工程中常用到的____酶，但Cas9蛋白特性與該酶的區(qū)別是___。
（3）圖中復合物1 所識別的DNA序列為5’-TATACTGGC-3’，則sgBLG的序列為 。（單選）
A. 5’-AUAUGACCG-3’B. 5’-GCCAGTATA -3’
C. 5’-ATATGACCG-3’D. 5’-GCCAGUAUA-3’
（4）下列①—⑥生物技術(shù)中，過程①②運用到的技術(shù)有_____，過程③④⑤中，運用到的技術(shù)有______。（編號選填）
①顯微注射技術(shù)②動物細胞培養(yǎng)技術(shù)③胚胎移植技術(shù)④DNA重組技術(shù)⑤動物細胞融合技術(shù)⑥細胞核移植技術(shù)
（5）與圖中獲得的轉(zhuǎn)基因山羊性狀最相似的是母羊 。（單選）
A. 甲B. 乙C. 丙D. 丁
（6）科研團隊想進一步獲得純合能穩(wěn)定遺傳“人乳鐵蛋白基因”轉(zhuǎn)基因山羊，其技術(shù)路線的設計思路是________________。
5．（2024屆·上海市金山區(qū)·統(tǒng)考一模）賴氨酸是人類和哺乳動物的必需氨基酸之一，機體不能自身合成，必須從食物中補充。
（1）全世界每年對賴氨酸有巨大的需求，主要通過谷氨酸棒狀桿菌等微生物生產(chǎn)。這種通過微生物生產(chǎn)賴氨酸的技術(shù)屬于___（單選）。
A. 發(fā)酵工程B. 細胞工程
C. 基因工程D. 蛋白質(zhì)工程
（2）除了優(yōu)化菌種外，控制適應的條件也能有效提高賴氨酸產(chǎn)量。下列選項屬于需要控制的條件的是___（多選）。
A. 攪拌速度B. 溫度和pH
C. 營養(yǎng)物濃度D. 溶解氧
在谷類食物如高粱中賴氨酸含量很低。天冬氨酸激酶（AK）和二氫吡啶羧酸合酶（DHPS）是賴氨酸合成途徑中兩種重要的酶，并協(xié)同控制植物中游離賴氨酸的合成速率。圖1為野生高粱細胞內(nèi)賴氨酸合成與分解的部分過程，其中LKP和SDH是賴氨酸分解代謝的關(guān)鍵酶。

（3）圖2示天冬氨酸結(jié)構(gòu)式。由天冬氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)橘嚢彼?，是改變了天冬氨酸結(jié)構(gòu)式中的___（編號選填）。

（4）據(jù)圖1分析可知，野生高粱中賴氨酸含量較低的原因是___（多選）。
A. 賴氨酸在LKP催化下被分解
B. 過多的賴氨酸抑制AK活性
C. 賴氨酸在SDH催化下被分解
D. 過多的賴氨酸抑制DHPS活性
細菌基因編碼的AK和DHPS對賴氨酸濃度不敏感?？茖W家把來源于細菌的外源AK基因和DHPS基因與胚乳特異性啟動子導入高粱，獲得游離賴氨酸含量顯著增加的轉(zhuǎn)基因高粱植株。
（5）為了獲得大量目的基因，一般可采用PCR。PCR的基本程序是___（用編號和箭頭表示）。
①聚合②退火③切割④變性
（6）將含目的基因的表達載體導入高粱細胞，常采用的方法是___（單選）。
A. 電擊法B. 氯化鈣法
C. 農(nóng)桿菌法D. 顯微注射法
（7）篩選獲得轉(zhuǎn)基因高粱細胞后，還需要依次通過___，才能獲得轉(zhuǎn)基因高粱植株。（編號選填）
①核移植②細胞融合③再分化④脫分化
（8）從轉(zhuǎn)基因高粱植株中提取mRNA，逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA，再進行PCR擴增并對擴增產(chǎn)物進行凝膠電泳，結(jié)果如圖3所示。轉(zhuǎn)基因植株___中外源AK和DHPS基因均成功轉(zhuǎn)錄。

（9）請結(jié)合圖1和題干等相關(guān)知識，從基因工程或者從蛋白質(zhì)工程方面考慮，再提出一種提高高粱賴氨酸含量的思路___。
6．（2024屆·上海市普陀區(qū)·統(tǒng)考一模） 材料一：白細胞表面抗原2（SLA-2）在抗原呈遞、機體器官移植以及免疫應答方面有著重要作用。為進一步研究SLA-2的結(jié)構(gòu)與功能，科研人員以能穩(wěn)定傳代的豬腎上皮細胞為材料，構(gòu)建了穩(wěn)定高表達SLA-2基因的細胞株，過程如下圖。其中，Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Purr為嘌呤霉素抗性基因，BclI、NtI、XbaI、San3AI為限制酶酶切位點，括號內(nèi)數(shù)值表示距復制原點的長度。
材料二：研究中，一般利用最小致死濃度（使某種細胞全部死亡的最小濃度）的嘌呤霉素溶液浸染細胞以篩選出轉(zhuǎn)化的豬腎上皮細胞。
（1）簡要概述材料一中實驗過程____。
（2）采用PCR電泳設計實驗鑒定重組質(zhì)粒3，需包括實驗過程以及結(jié)論（電泳圖）____。
（3）概述材料二的實驗以及判斷哪種細胞更好，并說明理由____。
7.（2024屆·上海市徐匯區(qū)·統(tǒng)考一模） I.纖維素是地球上儲量最豐富的可再生資源之一，經(jīng)纖維素酶催化水解后，可被微生物發(fā)酵利用。真核生物長枝木霉的纖維素酶基因通常隨機分布在染色體上。某研究人員用重離子束誘變育種得到了高產(chǎn)纖維素酶的長枝木霉菌株，并對高產(chǎn)纖維素酶的機理進行了研究。如圖為高產(chǎn)纖維素酶機理的部分示意圖。
（1）根據(jù)題意可知，圖中纖維素酶基因所含遺傳信息的傳遞方向是______。
A、細胞核→細胞質(zhì) B、細胞質(zhì)→細胞質(zhì)
C、細胞質(zhì)→核糖體 D、質(zhì)?！颂求w
（2）纖維素酶基因的表達受葡萄糖等降解物的影響，形成阻遏效應。由圖可知，關(guān)于該阻遏效應的說法正確的是______。
A、負反饋調(diào)節(jié) B、分級調(diào)節(jié)
C、葡萄糖為信息分子 D、阻遏葡萄糖的過度產(chǎn)生
（3）纖維素酶為復合酶系，主要包括三種組分，它們分別使纖維素長鏈變短鏈、短鏈變二糖、二糖變單糖。請推測，這種降解纖維素的協(xié)同作用得以實現(xiàn)的原因不包括它們______。
A、分子結(jié)構(gòu)不同 B、催化反應類型相同
C、底物相同 D、最適pH相近
（4）研究發(fā)現(xiàn)，PDI和OST是纖維素酶加工修飾的關(guān)鍵蛋白分子。根據(jù)以上信息和所學知識分析，高產(chǎn)菌株可以高效合成、分泌纖維素酶可能依賴于__________（編號選填）。
①PDI和OST在核糖體上高效工作
②菌株分泌纖維素酶的方式
③在外界碳源的誘導作用下快速啟動纖維素酶基因的轉(zhuǎn)錄
④囊泡的生成和移動不消耗能量
（5）重離子束誘變后的高產(chǎn)長枝木霉不可能發(fā)生的改變是______。
A、基因數(shù)目 B、新生多肽的合成方式
C、組蛋白修飾水平 D、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的結(jié)構(gòu)
II.工業(yè)上，還可通過基因工程改造長枝木霉，從而獲得高效生產(chǎn)纖維素酶的菌株。如圖為攜帶OST高表達基因（OST-H基因）的重組質(zhì)粒導入野生型長枝木霉后，從中篩選高產(chǎn)菌株的流程。其中培養(yǎng)基④中富含纖維素，接種菌株后用剛果紅進行染色，而剛果紅可與多糖形成紅色沉淀，菌落周圍的透明圈大小可反映菌株所產(chǎn)纖維素酶的酶活力。
（6）圖中步驟I-IV中需在超凈臺上進行的是___________。
（7）關(guān)于②號培養(yǎng)基的配制方法正確的是______。
A、以OST-H為碳源 B、以纖維素酶為碳源
C、以纖維素為碳源 D、以纖維素酶為氮源
（8）上述過程中，接種的正確操作是______。
A、僅步驟I為稀釋涂布法接種 B、步驟I、III均為稀釋涂布法接種
C、步驟I的接種工具可用火焰灼燒滅菌 D、步驟III使用接種環(huán)為接種工具
（9）為達到篩選高產(chǎn)菌株的目的，正確的說法是______。
A、步驟II中應挑選直徑較大的菌落
B、菌種轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)基③目的是為了擴大培養(yǎng)
C、步驟III接種前應進行菌種稀釋
D、培養(yǎng)基④應先滅菌再調(diào)pH
（10）如表為步驟IV測得的1-4號待選菌株和野生型菌株的數(shù)據(jù)，請分析菌株4透明圈最大的原因？____________________________________。
8.（2024屆·上海市徐匯區(qū)·統(tǒng)考一模）慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，可改造為基因工程載體，其可有效感染肝細胞、腫瘤細胞等多種細胞。如圖為慢病毒包裝及侵染過程，已知轉(zhuǎn)移質(zhì)粒攜帶目的基因，包裝質(zhì)粒攜帶慢病毒的結(jié)構(gòu)基因和逆轉(zhuǎn)錄酶基因，包膜質(zhì)粒攜帶糖蛋白基因。
（1）慢病毒有廣泛的宿主范圍，能夠有效地感染細胞。下列慢病毒的宿主細胞中一般不具有分裂能力的有_______（編號選填）
①神經(jīng)元 ②干細胞 ③腫瘤細胞 ④心肌細胞 ⑤漿細胞
（2）圖中共轉(zhuǎn)染肝細胞屬于基因工程中的_______。
A. 獲取目的基因B. 構(gòu)建表達載體
C. 將表達載體導入受體細胞D. 篩選和鑒定含目的基因的受體細胞
（3）關(guān)于肝細胞培養(yǎng)，下列說法錯誤的有_______。
A. 培養(yǎng)基pH會影響慢病毒產(chǎn)量
B. 肝細胞培養(yǎng)過程中會發(fā)生同源染色體分離
C. 步驟①不需要在無菌環(huán)境中進行
D. 若發(fā)生接觸抑制，可用胰蛋白酶、纖維素酶等處理
（4）包膜質(zhì)粒上的糖蛋白基因與信息識別有關(guān)，下列說法錯誤的有______。
A. 該基因是標記基因
B. 子代慢病毒中該基因的表達經(jīng)過轉(zhuǎn)錄和翻譯過程
C. 該基因可通過PCR技術(shù)擴增
D. 若發(fā)生DNA甲基化，會改變子代慢病毒的遺傳信息
（5）步驟②后獲得的肝細胞中主要有細胞A和細胞B兩種，對于兩種細胞的說法正確的是_______。
A. 細胞B的數(shù)量實際遠大于細胞A
B. 可利用抗原-抗體雜交原理檢測目的蛋白的存在
C. 兩種細胞中的DNA組成完全一致
D. 電泳結(jié)果的差異主要是由于基因的選擇性表達
（6）線粒體受損會引起肝細胞死亡和肝衰竭，主要與缺乏能量供應有關(guān)。科研人員將線粒體與人工合成的蛋白質(zhì)A混合并純化形成復合物，將復合物通過靜脈注射，靶向遞送至活體大鼠的肝臟。關(guān)于上述研究，下列推測合理的有______。
A. 口服該復合物可以達到相同的效果
B. 該復合物進入肝細胞有賴于質(zhì)膜的半流動性
C. 蛋白質(zhì)A可能與肝細胞特異性識別有關(guān)
D. 該復合物可直接促進肝細胞內(nèi)的糖酵解
科研人員借助慢病毒載體提出了一種巨噬細胞導向的基因轉(zhuǎn)移策略。通過靶向輸送干擾素，增強抗原呈遞過程。為了明確基因工程中轉(zhuǎn)移質(zhì)粒需包含的序列，首先構(gòu)建兩種包含GFP（綠色熒光蛋白）基因的模擬轉(zhuǎn)移質(zhì)粒（部分），通過熒光檢測衡量模擬轉(zhuǎn)移質(zhì)粒上的基因在動物細胞的表達情況，如圖1、2所示。
（7）抗原呈遞過程與巨噬細胞中的溶酶體有關(guān)，關(guān)于溶酶體的敘述不正確的是（ ）
A. 是內(nèi)膜系統(tǒng)的重要成分
B. 含有大量溶菌酶和蛋白水解酶
C. 對抗原的加工只存在于體液免疫
D. 若存在功能障礙，容易造成細胞內(nèi)錯誤蛋白積累
（8）根據(jù)題干信息并結(jié)合圖1和2，選擇基因工程中所用的轉(zhuǎn)移質(zhì)粒需包含的序列______（編號選填），并闡述原因______________________________。
①啟動子②終止子③起始密碼子④終止密碼子⑤GFP基因⑥WPRE⑦miRNA序列⑧干擾素基因
9.（2024屆·上海市楊浦區(qū)·統(tǒng)考一模）OTOF基因突變會導致遺傳性耳聾，其中的機理之一是無法產(chǎn)生結(jié)構(gòu)完整的OTOF蛋白。臨床上針對該病通常有兩條治療策略：一是導入正?；颍▓D1上方為該基因全序列，構(gòu)建表達載體需要雙AAV載體，因為其能夠裝載的基因大小有限），以表達正常蛋白（圖中①-⑧代表引物）；二是導入校正基因，使突變后的OTOF基因仍能產(chǎn)生正常蛋白（如圖2）。

（1）在構(gòu)建AAV-OTOF表達載體時，需用PCR獲取正?；颍瑩?jù)圖1分析，所需要的引物是________（編號選填）。
（2）為了確保AAV載體發(fā)揮其應有的功能，在改造該載體時需保留原有腺病毒的部分DNA序列，其目的最可能是_________。
A. 確保自我復制B. 防止核酸酶降解
C. 便于目的基因連接D. 使表達載體留在胞質(zhì)中
（3）AAV表達載體的克隆過程需要滿足的培養(yǎng)條件包括__________。（編號選填）
①5%CO2 ②無菌 ③光照 ④無機鹽 ⑤生長因子
（4）圖1中受體細胞（人體胚胎腎細胞）是經(jīng)過遺傳改造的，在其克隆培養(yǎng)過程，涉及________。
A. 細胞增殖B. 細胞分化C. 原代培養(yǎng)D. 傳代培養(yǎng)
（5）為測定受體細胞內(nèi)OTOF蛋白的表達量，從細胞內(nèi)分離純化該蛋白，加入雙縮脲試劑后，溶液顏色為________。定量測定該蛋白質(zhì)需先制備標準曲線，該曲線縱坐標應設定為__________。
A. 蛋白質(zhì)含量B. 吸光值
C. 測定液總體積D. 反應溫度
（6）某患者OTOF基因編碼鏈第1273位5'-CGA-3'（編碼精氨酸）突變?yōu)?'-TGA3'，導致終止密碼子提前出現(xiàn)，肽鏈中斷合成。在圖2所示的治療策略中，校正基因表達出的校正tRNA可識別mRNA上的該終止密碼子，但同時能攜帶精氨酸，試判斷校正基因的編碼鏈上編碼該反密碼子的序列是________。

A. 5'-TGA-3'B. 5'-TCA-3'
C. 5'-ACT-3'D. 5'-CGA-3'
（7）遺傳性耳聾大約與90余個基因的1000多個突變位點有關(guān)。一些顯性突變基因不僅無功能，而且干擾正常等位基因產(chǎn)物的功能。對于顯性突變引發(fā)的遺傳性耳聾，下列預防或治療措施有效的是__________。
A. 孕期B超檢查
B. 體外受精后基因檢測
C. 在患者體內(nèi)注射針對顯性突變基因表達產(chǎn)物的單克隆抗體
D. 基于RNA干擾技術(shù)，在病變組織細胞中阻斷突變基因表達
（8）表觀遺傳是基因選擇性表達的分子機制，也是細胞分化及脫分化的分子基礎。有人提出：“將患者體細胞在體外誘導形成誘導性多能干細胞（iPS細胞），再移植至病變部位，可以治療顯性突變引起的遺傳性耳聾”，試根據(jù)資料及所學知識判斷該說法是否合理，并闡述理由________。
10.（2024屆·上海市寶山區(qū)·期末題）以乳酸為主要原料可合成聚乳酸，是一種可生物降解的材料，有廣泛應用。為了提高乳酸產(chǎn)量，科研人員以光合生物制造技術(shù)構(gòu)建聚球藻細胞工廠來生產(chǎn)乳酸，圖表示一個天然缺乏乳酸合成途徑的聚球藻細胞經(jīng)改造后的乳酸合成途徑，途徑①中LdhD是合成乳酸所需的NADH依賴型乳酸脫氫酶，來自保加利亞乳酸菌，途徑②中LdhDs是NADPH依賴型的乳酸脫氫酶，虛線部分代表改造后新增的代謝過程。

（1）如圖所示，聚球藻無核膜包被的細胞核，能進行光合作用，由此可見生物進行光合作用必須具備的內(nèi)部條件有____________。（編號選填）
① 葉綠體② 光合色素③ 適宜光照 ④ 相關(guān)酶⑤ 二氧化碳
（2）在改造后的聚球藻中，可能發(fā)生的能量轉(zhuǎn)換有 。
A. 光能轉(zhuǎn)換為活躍化學能
B. 活躍化學能轉(zhuǎn)換為穩(wěn)定化學能
C. 穩(wěn)定化學能轉(zhuǎn)換為熱能
D. 穩(wěn)定化學能轉(zhuǎn)換為活躍化學能
（3）科研人員最初利用來自保加利亞乳酸菌中的LdhD基因構(gòu)建了通過途徑①合成乳酸的聚球菌，構(gòu)建的表達載體應具備________，構(gòu)建過程中需要用到________。（編號選填）
① LdhD基因②乳酸轉(zhuǎn)運蛋白基因③標記基因④DNA聚合酶⑤限制性內(nèi)切核酸酶⑥D(zhuǎn)NA連接酶
（4）經(jīng)培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，構(gòu)建了途徑①的聚球藻生產(chǎn)乳酸的效率不高，有可能是因為 。
A. 聚球藻胞內(nèi)環(huán)境不適合LdhD發(fā)揮作用
B. 聚球藻內(nèi)表達出來的LdhD結(jié)構(gòu)發(fā)生改變
C. 轉(zhuǎn)入的基因在聚球藻內(nèi)表達效率低
D. 乳酸轉(zhuǎn)運蛋白效率低下，細胞內(nèi)乳酸積累抑制合成速率
（5）繼續(xù)研究發(fā)現(xiàn)，若將LdhD中第176到178位原有氨基酸序列替換為丙氨酸-精氨酸-絲氨酸，則可得到利用NADPH為其主要輔因子的突變酶，即LdhDs，設計引物以PCR獲取突變酶目的基因，屬于蛋白質(zhì)工程的_______（定點突變/定向進化）策略。最終獲得目的基因后在聚球藻內(nèi)構(gòu)建出途徑②，培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)乳酸產(chǎn)量大增。
（6）耐熱地衣芽孢桿菌中也有活性較高的LdhD，圖4為來自保加利亞乳酸菌和耐熱地衣芽孢桿菌的LdhD酶活性比較，試分析將耐熱地衣芽孢桿菌的LdhD基因轉(zhuǎn)入聚球藻，是否可以進一步提高其產(chǎn)乳酸的能力______。

（7）結(jié)合以上圖文信息，闡述與保加利亞乳酸菌比較，利用改造的聚球藻生產(chǎn)乳酸具有哪些不同之處______。
11.（2024屆·上海市寶山區(qū)·等級考）甜味蛋白是一類具有甜度高，熱量低等特性的天然甜味劑，有望經(jīng)生物技術(shù)改造和量產(chǎn)后能廣泛應用于食品，飲料，藥品生產(chǎn)等。莫內(nèi)林最初是從一種西非植物的漿果中分離提純到的甜味蛋白，甜度是蔗糖的3000倍左右。圖示利用大腸桿菌生產(chǎn)莫內(nèi)林，其中M基因可表達合成莫內(nèi)林。表是為PCR擴增M基因設計的引物，畫線部分是所需使用的限制性內(nèi)切核酸酶的識別序列。
（1）引物1的結(jié)合位點可能在___________（選填圖中的編號）。畫線部分的序列在A中___________（有/沒有），在B中____________（有/沒有）。
（2）已知C中的培養(yǎng)基成分有水、酵母粉、蛋白胨和氯化鈉，并按一定比例添加氨芐青霉素。將C中有生長優(yōu)勢的菌落經(jīng)擴大培養(yǎng)后作為菌種在發(fā)酵罐中培養(yǎng)，積累產(chǎn)物，以下操作合理的是 。
A. 發(fā)酵罐和培養(yǎng)基需嚴格滅菌
B. 發(fā)酵罐中培養(yǎng)基成分可去掉氨芐青霉素和瓊脂
C. 為避免雜菌污染，培養(yǎng)過程中不能補充培養(yǎng)基
D. 培養(yǎng)過程中，只需合理控制好溫度和pH
為了探究莫內(nèi)林對血糖濃度的影響，將上述大腸菌生產(chǎn)的莫內(nèi)林配制成與20mg/L蔗糖溶液等甜度閾值的濃度胃灌空腹小鼠，得實驗結(jié)果如圖（a），另用不同濃度的莫內(nèi)林溶液胃灌空腹小鼠，實驗結(jié)果如圖（b）
（3）結(jié)合相關(guān)信息和所學知識，分析實驗可知 。
A. 莫內(nèi)林可升高血糖，不適宜作為代糖
B. 與蔗糖相比，莫內(nèi)林升血糖的效果不顯著
C. 莫內(nèi)林和蔗糖元素組成相同，因此可轉(zhuǎn)化為血糖
D. 一定范圍內(nèi)，莫內(nèi)林對血糖的影響不隨其濃度顯著變化
（4）通過大腸桿菌生產(chǎn)的莫內(nèi)林甜度較天然莫內(nèi)林大為降低，天然莫內(nèi)林也易因溫度等降低甜度甚至甜味消失，請結(jié)合所學知識和利用相關(guān)的生物技術(shù)，分析兩種莫內(nèi)林甜度降低的原因并提出進一步改進的工程思路___。
12.（2024屆·上海市奉賢區(qū)·期末題）
骨關(guān)節(jié)炎是一種退行性疾病，病因是關(guān)節(jié)內(nèi)軟骨細胞的 ATP和NADPH耗竭，使細胞合成代謝受損，導致細胞退變和衰老。浙江大學的林賢豐團隊提取菠菜類囊體，制成了納米類囊體（NTUs），然后用小鼠軟骨細胞膜（CM）進行封裝，制備出 CM-NTUs，注射到患有骨關(guān)節(jié)炎的小鼠膝關(guān)節(jié)，對該部位進行光照后，發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)的合成代謝得到了改善，軟骨退化減慢，體內(nèi)衰老細胞活力恢復。具體過程如圖所示。
（1）注射了納米類囊體的軟骨細胞具有的功能是____。（編號選填）
①將光能轉(zhuǎn)化為活躍的化學能
②將活躍的化學能轉(zhuǎn)化為光能
③將活躍的化學能轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的化學能
④將穩(wěn)定的化學能轉(zhuǎn)化為活躍的化學能
（2）“霜打”后的菠菜，隨著可溶性糖的增加，口感會更好。菠菜葉增加的可溶性糖的來源有____。（編號選填）
①淀粉水解 ②糖酵解 ③光反應 ④碳反應
（3）受低溫脅迫的菠菜細胞常表現(xiàn)為輕度的質(zhì)壁分離狀態(tài)。低溫處理后的菠菜液泡內(nèi)可溶性糖的含量增加，則可以在顯微鏡下觀察到____。
A. 質(zhì)壁分離程度增加B. 細胞吸水漲破
C. 質(zhì)壁分離復原D. 無明顯變化
（4）CM-NTUs進入小鼠軟骨細胞的方式是____。
A. 自由擴散B. 協(xié)助擴散
C. 主動運輸D. 胞吞
（5）研究人員把 CM-NTUs而不是NTUs注入患病小鼠的膝關(guān)節(jié)，原因是____。
（6）另一研究發(fā)現(xiàn)：腫瘤區(qū)域高濃度的 H2O2造成腫瘤區(qū)域缺氧而成為細胞信號促進腫瘤的惡性增殖，而 O?可轉(zhuǎn)化成高毒性的單線態(tài)氧，誘導腫瘤細胞凋亡；類囊體膜上有豐富的過氧化氫酶，請?zhí)岢鲆粭l不同于傳統(tǒng)放療或化療的腫瘤治療新思路，并說出理由____。
13.（2024屆·上海市奉賢區(qū)·期末題）阿爾茲海默癥（AD）是一種發(fā)生于老年和老年前期的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，β-淀粉樣前體蛋白（APP）基因是 AD發(fā)病關(guān)聯(lián)基因?？茖W家嘗試構(gòu)建含人APP基因的轉(zhuǎn)基因小鼠動物模型（如圖1），以研究AD疾病的發(fā)病機制。
（1）下列對培養(yǎng)基X和培養(yǎng)基 Y 的說明正確的是____。
A. 培養(yǎng)基 X是鑒別培養(yǎng)基
B. 培養(yǎng)基 Y 應選用液體培養(yǎng)基
C. 培養(yǎng)基X上生長大腸桿菌均含有重組質(zhì)粒
D. 培養(yǎng)基 Y 上生長大腸桿菌均含有重組質(zhì)粒
（2）下列關(guān)于過程Ⅳ的培養(yǎng)條件，說明合理的是____。
A. 加入抗生素—防止細菌感染
B. 5%CO2—維持酸堿平衡
C. 適宜溫度—維持酶活性
D. 適宜滲透壓—維持水平衡
（3）在繁育轉(zhuǎn)基因小鼠過程中采用的生物技術(shù)與工程是____。（編號選填）
①重組DNA 技術(shù)
②動物細胞培養(yǎng)技術(shù)
③動物細胞融合技術(shù)
④細胞核移植技術(shù)
⑤胚胎移植技術(shù)
（4）若過程Ⅰ中質(zhì)粒pUCl8選用了 Xh I和BclⅠ進行切割，表為4種限制酶的識別序列和切割位點。為實現(xiàn)其與目的基因相連，可在人APP基因兩端分別添加____（編號選填）：若要保證過程Ⅱ能夠成功回收 APP 基因，則應在人 APP 基因兩端分別添加____。（編號選填）
①XhI 和 BclI的識別序列
②SacI 和 BclI的識別序列
③Xh I 和 BamHI的識別序列
④Sac I 和 BamHI 的識別序列
科學家研究發(fā)現(xiàn)AD與腦部的β淀粉樣蛋白（Aβ）寡聚有關(guān)，Aβ寡聚體能引起一系列的神經(jīng)細胞毒性反應，造成神經(jīng)細胞死亡。相關(guān)機制如圖2，請回答：
（5）有的神經(jīng)遞質(zhì)為小分子化合物，但仍以圖8所示方式釋放，其意義是____。
A. 不利于神經(jīng)沖動快速傳遞
B. 避免被酶降解
C. 短時間內(nèi)可大量釋放
D. 減少能量的消耗
（6）神經(jīng)遞質(zhì)與突觸后膜上的 NMDA受體結(jié)合會引起Na?通道打開，Aβ寡聚體與NMDA受體結(jié)合后突觸后膜興奮性將____（增強/減弱/不變）。AD患者的神經(jīng)纖維常常出現(xiàn)纏結(jié)原因是Aβ寡聚體導致微管穩(wěn)定性丟失，由微管蛋白組成的____（細胞結(jié)構(gòu)）被破壞，不能維持細胞的正常形態(tài)。
（7）請據(jù)圖2及所學知識分析AD患者與糖尿病的相關(guān)性____。
14.（2024屆·上海市虹口區(qū)·期末題） 諺語“白露不露身”，是提醒人們“白露”過后，天氣冷暖多變，要注意保暖。在正常情況下，當氣溫下降時，人體可以通過自我調(diào)節(jié)維持穩(wěn)態(tài)。對于感冒易感人群而言，“寒冷”可能是引發(fā)感冒的誘因。從“防”的角度，注射流感疫苗是預防感冒的一種方法；從“治”的角度，口服中草藥是我國治療感冒的一種手段。圖1為甲流mRNA疫苗制備的部分流程，其中I~Ⅺ分別表示過程；X、Y、Z分別表示DNA分子的長度；kb表示千堿基對。圖2為研究人員利用“角茴香”（一種植物）治療感冒的相關(guān)實驗結(jié)果。

（1）據(jù)已學知識判斷，當環(huán)境溫度下降時，人體參與體溫調(diào)節(jié)的生理反應有____。
A. 骨骼肌戰(zhàn)栗B. 腎上腺素分泌增多
C. 皮膚血管舒張D. 甲狀腺激素分泌增多
（2）甲流病毒是一種RNA病毒，下列人體內(nèi)的物質(zhì)與該病毒儲存與傳遞遺傳信息的生物大分子在元素組成上相同的是____。（編號選填）
① DNA ② ATP ③ 磷脂 ④ 蛋白質(zhì)
（3）在制備甲流疫苗的過程中，據(jù)圖1判斷，需要以核糖核苷三磷酸為原料的過程是____（編號選填）；在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中存活的大腸桿菌的環(huán)形質(zhì)粒長度可能是____kb；若用HindⅢ和EcRⅠ完全酶切上述培養(yǎng)基中某個菌落的質(zhì)粒，則凝膠電泳后可觀察到的DNA條帶長度是____ kb。
① II ② Ⅲ ③ Ⅴ ④ Ⅵ
（4）據(jù)圖1判斷，若注射甲流mRNA疫苗后，機體內(nèi)由T淋巴細胞參與的細胞免疫應答過程有____。（編號選填）
① Ⅷ ② Ⅸ ③ Ⅹ ④ Ⅺ
（5）將甲流病毒抗原肽基因逆轉(zhuǎn)錄后的編碼鏈部分序列為5’-GTGTAATATA-3’，若將該序列所編碼的天冬酰胺替換為纈氨酸，可提高mRNA疫苗的安全性。據(jù)此及已學知識判斷，采用定點突變改造天然抗原肽時，可作為PCR合成抗原肽突變基因引物的是____。（密碼子：天冬酰胺5’-AAU-3’，纈氨酸5’-GUC-3’）
A. 5’ -GTGTGTCATA-3 ’B. 5’ -TATCAGACAC-3’
C. 5’ -GTGTCTGATA-3’D. 5’ -TATGACACAC-3’
2023年諾貝爾生理學或醫(yī)學獎表彰了在mRNA中通過Ψ（一種核苷，如圖3所示）替換某種結(jié)構(gòu)相似的核苷，獲得性能優(yōu)化的mRNA疫苗的研究。

（6）據(jù)此推測，下列核苷最可能被Ψ替換的是____。

（7）據(jù)相關(guān)信息及已學知識推測，科學家通過Ψ替換mRNA特定位點的核苷所生產(chǎn)的mRNA疫苗的優(yōu)點可能是提高____。（編號選填）
①安全性 ②轉(zhuǎn)錄效率 ③穩(wěn)定性 ④翻譯效率
（8）為探究角茴香治療病毒性感冒的療效，研究人員用角茴香提取液灌胃感染甲流的小鼠，5天后測定小鼠血液中能反映炎癥反應程度的細胞因子（TNF-α）的表達量，實驗結(jié)果如圖2所示。據(jù)此評價，角茴香治療甲流的療效，并寫出分析過程____。
15.（2024屆·上海市靜安區(qū)·期末題）擬南芥世代短、子代多，遺傳背景清楚，是被科研工作者廣泛使用的模式生物。研究基因的功能也常用擬南芥。春蘭具有很高的觀賞價值，為喜陰植物，栽培養(yǎng)護較為困難。miR396是植物體內(nèi)的一類小RNA，與植物生長發(fā)育密切相關(guān)。為研究miR396對春蘭葉片和光合作用的影響，科研人員利用擬南芥研究了轉(zhuǎn)錄出miR396的基因cg-MIR396的功能。圖1是部分實驗過程，其中Kamr表示卡那霉素抗性基因，Ner表示新霉素抗性基因，ri表示復制起點，I~Ⅵ表示實驗過程。
（1）選擇春蘭葉片作為實驗材料提取DNA的原因可能是______。
A. 只有葉肉細胞中才含有cg-MIR396基因
B. 只有葉肉細胞中的cg-MIR396基因才能轉(zhuǎn)錄出miR396
C. 相比其他組織細胞，葉肉細胞多且容易被破碎
D. 相比其他組織細胞，葉肉細胞中的核DNA更多
（2）利用PCR技術(shù)獲取cg-MIR396需要PCR擴增儀及PCR體系。下列各項中，屬于PCR體系的有______。（編號選填）
①引物②耐熱DNA連接酶③耐熱DNA聚合酶④耐熱DNA解旋酶⑤四種核糖核苷三磷酸⑥四種脫氧核苷三磷酸
（3）圖所示Ⅰ~Ⅵ中，表示構(gòu)建表達載體的是______。該過程一般包括“切”和“接”兩個步驟，其中“切”指用限制性內(nèi)切核酸酶切割______。
（4）用酶解法制備擬南芥原生質(zhì)體時，一般使用______酶和______酶。
（5）用含抗生素的培養(yǎng)基篩選時，含目的基因的擬南芥原生質(zhì)體表現(xiàn)為對卡那霉素______（有/無）抗性，對新霉素______（有/無）抗性。
（6）用擬南芥原生質(zhì)體培育出完整植株的過程主要有______。（編號選擇并排序）
①細胞融合②細胞壁再生③再分化④脫分化⑤人工授粉
觀測相同生長期的野生型和轉(zhuǎn)cg-MIR396基因擬南芥，得到了如表所示的結(jié)果。
*表示與野生型相比有顯著性差異
（7）測定葉綠素含量常用______（層析法/分光光度法/顯微測量法）。
（8）根據(jù)題干信息分析，下列敘述正確的是______。
A. miR396能促進擬南芥生長、促進葉片擴張
B. 轉(zhuǎn)基因擬南芥葉綠素含量下降可能是由于細胞增大而葉綠體未明顯增加
C. miR396可能通過影響葉片生長、葉綠素含量來調(diào)控春蘭生長
D. 敲除cg-MIR396基因能提高春蘭的凈光合作用速率
16.（2024屆·上海市閔行區(qū)·期末題）蛋白質(zhì)谷氨酰胺酶（PG酶）能催化蛋白質(zhì)發(fā)生脫酰胺反應，增大蛋白質(zhì)的溶解性，提高食品工業(yè)中蛋白質(zhì)的利用率。以谷氨酰胺-甘氨酸為唯一氮源，可以篩選土壤中產(chǎn)PG酶的金黃桿菌，流程如圖所示。
（1）培養(yǎng)基I中的谷氨酰胺-甘氨酸遇熱易分解，滅菌時應選擇______。（單選）
A. 過濾除菌B. 輻射滅菌C. 烘箱干燥D. 高壓蒸汽滅菌
（2）結(jié)合下圖分析不同培養(yǎng)基的類型和目的：培養(yǎng)基II______；培養(yǎng)基III______。（編號選填）
①固體培養(yǎng)基②半固體培養(yǎng)基③液體培養(yǎng)基④富集培養(yǎng)⑤分離目標微生物 ⑥發(fā)酵培養(yǎng)獲得目的產(chǎn)物
經(jīng)檢測從土壤中篩選得到的金黃桿菌PG酶產(chǎn)量較低。為獲得高產(chǎn)PG酶菌株，研究員以兩株野生型PG酶菌株為親本，用細胞融合技術(shù)擬獲得PG酶高產(chǎn)融合菌株。
（3）制備細菌的原生質(zhì)體時，需利用______去除細胞壁；獲得原生質(zhì)體后，可利用______促使原生質(zhì)體融合。（編號選填）
①纖維素酶和果膠酶②溶菌酶③胰蛋白酶④滅活的仙臺病毒⑤農(nóng)桿菌⑥聚乙二醇
研究人員還設計了利用基因工程高效生產(chǎn)PG酶的方案，流程如圖1：
（4）圖1中過程①應用了PCR技術(shù)，以下說法正確的是______。（多選）
A. PCR中引物長度是影響PCR特異性的關(guān)鍵因素之一
B. PCR過程中新鏈的合成方向只能從5’—3’
C. PCR過程中引物可以重復利用
D. 退火時引物與單鏈DNA模板結(jié)合
（5）完成過程②需要先將PG酶基因與pPIC9K質(zhì)粒重組，這個過程稱為______；圖6為相關(guān)限制性內(nèi)切核酸酶的識別和切割位點，根據(jù)圖1、圖2分析，選擇用于切割pPIC9K質(zhì)粒的限制性內(nèi)切核酸酶是______。
（6）該重組DNA技術(shù)的受體細胞是______（產(chǎn)PG酶的野生菌/大腸桿菌/酵母）。
（7）在過程⑤中，每隔一段時間取1mL發(fā)酵液，離心后取上清液，加入SDS使蛋白質(zhì)變性（變?yōu)榫€性形狀）后，進行蛋白質(zhì)凝膠電泳（原理同DNA凝膠電泳），得到圖3結(jié)果。已知PG酶的理論分子質(zhì)量約為35kDa。請根據(jù)圖3結(jié)果分析本實驗中PG酶酵母表達體系是否構(gòu)建成功，并說明理由______。
17.（2024屆·上海市浦東新區(qū)·期末題）癌細胞周圍的內(nèi)環(huán)境(微環(huán)境)特征與正常組織有很多不同。研究發(fā)現(xiàn)癌細胞快速增殖會加速氧氣的消耗， 同時導致血管異?；?， 減少正常組織氧氣的供應。
（1）相對于正常細胞，癌細胞內(nèi)發(fā)生變化可能有 。
A. 無氧呼吸增強B. 細胞周期變長
C. 糖酵解速度加快D. 葡萄糖攝入加快
（2）推測與正常細胞微環(huán)境相比，癌細胞所處的微環(huán)境具有 的特征。
A. O?含量高B. O?含量低C. pH 較高D. pH 較低
腫瘤患者體內(nèi)T 細胞產(chǎn)生的 IFN-γ(抗癌因子)會減少， 科學家嘗試用“細菌療法”以提高患者體內(nèi) IFN-γ的含量來治療癌癥，如圖所示，其中 ri 是復制起點，AMP是氨芐青霉素抗性基因，EcRI等是限制酶的酶切位點。已知Clts基因表達Clts蛋白能抑制啟動子PR、P?，在大于42℃時 Clts蛋白失活。用超聲誘導可產(chǎn)生短暫熱效應，提高溫度。
（3）根據(jù)題意判斷，可作為“細菌療法”中基因工程改造的細菌代謝類型為_____(厭氧/需氧)。
（4）該基因工程所需的目的基因為_________。
（5）現(xiàn)通過 PCR 來擴增目的基因，下圖中能起到擴增作用的引物是 。
A. 引物1B. 引物2C. 引物3D. 引物4
（6） 下列關(guān)于重組溫控質(zhì)粒的說法正確的是 。
A. 多種限制性內(nèi)切酶酶切位點有利于目基因與質(zhì)粒拼接
B. PR和PL雙啟動子的作用可能是保證目的基因的正常表達
C. 能在氨芐青霉素培養(yǎng)基中生長的是含有重組質(zhì)粒的工程菌
D. 30℃條件下產(chǎn)生 Clts蛋白可以阻礙目的基因的表達
某研究小組為研究“細菌療法”的治療效果，按照下圖的流程進行實驗， 實驗分組和實驗結(jié)果見下表。
（7）根據(jù)上述實驗方案， 能否證明“超聲能誘導工程菌表達 IFN-γ， 抑制乳腺癌細胞生長”， 請說明理由。_______________________________________________________。
（8）聯(lián)系已學知識和上述信息，分析采用“細菌療法”治療癌癥的優(yōu)點 。
A. 實現(xiàn)腫瘤的靶向治療
B. 根據(jù)需要無創(chuàng)調(diào)控 IFN-γ的量
C. 工程菌在體內(nèi)不被破壞，持久發(fā)揮效應
D. 對正常細胞傷害小
（2024屆·上海市青浦區(qū)·期末題）
異丁醇是一種新型能源?？蒲腥藛T研究了釀酒酵母的異丁醇合成途徑（如圖1），嘗試對其進行改造，以期實現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)（如圖2）。其中，質(zhì)粒pUC18可實現(xiàn)目的基因在真核、原核細胞中過表達。

注：Ampr為氨芐青霉素抗性基因，氨芐青霉素可抑制細菌細胞壁的形成，對真核生物生長無影響his為組氨酸合成酶基因，組氨酸是微生物生長所必需限制性內(nèi)切核酸酶識別序列及切割位點：BamHI：5’-G↓GATCC-3’ XhI：5’-C↓TCGAG-3’ Sau3AI：5’-↓GATC-3’ SacI：5’-GAGCT↓C-3’
（1）為實現(xiàn)異丁醇大規(guī)模生產(chǎn)，可選取的目的基因是____。
A. 酶A基因B. 酶B抑制基因
C. 酶E基因D. 酶F抑制基因
（2）若選用XhI和Sau3AI對質(zhì)粒pUC18進行切割，為實現(xiàn)其與目的基因的連接，可在目的基因兩端添加____。（編號選填）
①XhI和Sau3AI的識別序列
②XhI和BamHI的識別序列
③SacI和Sau3AI識別序列
④SacI和BamHI的識別序列
（3）下列關(guān)于培養(yǎng)基I~ III的敘述正確的是____。
A. 培養(yǎng)基I是鑒別培養(yǎng)基
B. 培養(yǎng)基II可形成單個菌落
C. 培養(yǎng)基I和II的營養(yǎng)成分相同
D. 培養(yǎng)基I和III的營養(yǎng)成分相同
（4）啟動子的表達具有物種特異性，為了大量獲得重組質(zhì)粒并高效篩選異丁醇生產(chǎn)菌種，圖10中的大腸桿菌和釀酒酵母需具備的特點是____。
A. 氨芐青霉素抗性大腸桿菌
B. 氨芐青霉素敏感大腸桿菌
C. 組氨酸合成正常釀酒酵母
D. 組氨酸合成缺陷釀酒酵母
（5）線性化后的重組質(zhì)?？呻S機整合到釀酒酵母的染色體DNA中并穩(wěn)定表達。經(jīng)上述流程獲得的異丁醇生產(chǎn)菌種在適宜條件下培養(yǎng)，異丁醇產(chǎn)量較野生型釀酒酵母減少，試分析此類菌種異丁醇產(chǎn)量減少的原因。____。
為初步篩選異丁醇高產(chǎn)菌種，科研人員構(gòu)建了相關(guān)載體，并導入異丁醇生產(chǎn)菌種，載體的部分序列及篩選原理如圖3。

（6）已知BmR基因的編碼鏈序列為5’-GTGTTAATAT······GATTCATGAA-3’，若將其編碼的亮氨酸替換為天冬氨酸，可提高BmR蛋白與異丁醇的結(jié)合能力?，F(xiàn)利用PCR技術(shù)定點突變改造BmR蛋白，需設計的引物的序列是____。（編號選填）（密碼子：亮氨酸5’-UUA-3’，天冬氨酸5’-GAC-3’）
①5’- ATATGTCCAC -3’ ②5’-GTGGACATAT -3’
③5’- GATTCATGAA -3’ ④5’-TTCATGAATC -3’
（7）結(jié)合圖3及所學知識，分析利用上述載體篩選異丁醇高產(chǎn)菌種的原理____。
（8）發(fā)酵罐是發(fā)酵工程中常用的生物反應器，其主要作用是____。
A. 隔絕外界空氣
B. 模擬微生物細胞代謝所需環(huán)境
C. 殺滅微生物的芽孢
D. 提供液體環(huán)境便于收集發(fā)酵液
（2024屆·上海市松江區(qū)·期末題）
火龍果不僅味道香甜，還具有很高的營養(yǎng)價值。用火龍果制作的果酒具有鎮(zhèn)靜、助消化、利尿、預防便秘等多種作用?；瘕埞频尼勗觳⒉粡碗s，一般用火龍果、大米和酒曲（含酵母菌等微生物）為原材料，圖1為簡易的發(fā)酵瓶，圖2為細胞呼吸的相關(guān)代謝途徑。

（1）火龍果榨汁時，破除細胞壁可提高出汁率，可使用的酶是_______。（編號選填）
①纖維素酶②蛋白酶③磷脂酶④果膠酶
（2）從培養(yǎng)基成分角度分析，火龍果汁為酵母菌提供的營養(yǎng)物質(zhì)有_____。（編號選填）
①碳源②氮源③水④生長因子⑤無機鹽
（3）將火龍果汁、大米、酒曲等原料裝入圖1所示發(fā)酵瓶時，需留出1/3的空間。然后塞好瓶塞，夾緊進氣管和出氣管，靜置即可。留出1/3空間的目的是_______。
A. 便于觀察發(fā)酵程度
B. 給酒曲中的酵母菌增殖提供空氣
C. 對發(fā)酵液中的pH變化起調(diào)節(jié)作用
D. 發(fā)酵過程會產(chǎn)氣體，防止瓶內(nèi)氣壓過大
（4）按上題操作，靜置時，發(fā)酵瓶內(nèi)酵母菌可進行圖2中的_____過程。（編號選填）
（5）火龍果酒釀造過程中，發(fā)酵瓶內(nèi)酵母菌的種群數(shù)量變化符合曲線______。
A. B. C. D.
（6）釀好的火龍果酒若置于某種特定的條件下，酒味會逐漸消失并出現(xiàn)醋酸味，火龍果酒逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)榛瘕埞住ｊP(guān)于該過程的分析，正確的是________
A. 果酒中的乙醇轉(zhuǎn)化為乙醛，再轉(zhuǎn)化為醋酸
B. 果酒轉(zhuǎn)變?yōu)楣椎木N與制作酸奶所用的菌種相同
C. 若要加速果酒轉(zhuǎn)變?yōu)楣祝l(fā)酵瓶應繼續(xù)保持密封
D. 若要加速果酒轉(zhuǎn)變?yōu)楣?，應打開發(fā)酵瓶的進、出氣管
（2024屆·上海市松江區(qū)·期末題）
I.在未斷奶的小牛胃中存在一種凝乳酶，其凝乳及蛋白水解功能可使奶制品形成特殊風味和質(zhì)地，被廣泛應用于奶酪和酸奶生產(chǎn)。如圖A為利用生物工程技術(shù)生產(chǎn)凝乳酶的過程，①-④為具體操作步驟。
（1）根據(jù)題干信息及所學知識，步驟①中提取的質(zhì)粒中應含有______。
A 、目的基因B 、啟動子和終止子
C、標記基因D、起始密碼子和終止密碼子
（2）下圖是從小牛胃中分離得到的含凝乳酶基因的DNA，其兩端的序列已知。限制性內(nèi)切核酸酶的酶切位點如圖所示。
a.可以采用_______擴增該DNA。（編號選填）
①化學合成法 ②聚合酶鏈式反應 ③大規(guī)模篩選法
b.要成功擴增出凝乳酶基因，所設計的引物應結(jié)合在圖中的________位置。（用圖中的編號選填）
c.切割目的基因選用的限制性內(nèi)切核酸酶是_________。（編號選填）
①HindⅢ ②EcRⅠ ③Bam HⅠ
II.圖甲是研究人員利用平板劃線法，分離純化得到的含重組質(zhì)粒的大腸桿菌。
（3）由菌落分布規(guī)律可知，劃線順序應為_________。（用編號和箭頭表示）
（4）挑取圖甲中的菌落轉(zhuǎn)接至圖乙所示培養(yǎng)基，用于擴大培養(yǎng)。下列步驟可能涉及圖乙培養(yǎng)基的配制過程，請選擇正確的編號并排序__________。（用編號和箭頭表示）
①倒平板 ②調(diào)整pH ③溶解 ④滅菌 ⑤稱量 ⑥分裝
（5）研究發(fā)現(xiàn)，通過圖A過程獲得的凝乳酶活性較低，請分析可能的原因__________________。
（6）已知凝乳酶第20、24位氨基酸變成半胱氨酸，其活性可顯著提高。科研人員希望運用蛋白質(zhì)工程技術(shù)從大腸桿菌中獲得活性更強的凝乳酶，請選用合適的措施編號并排序___________。（用編號和箭頭表示）
①重組DNA分子導入大腸桿菌 ②隨機改變凝乳酶基因的序列
③對突變蛋白進行結(jié)構(gòu)和功能分析 ④改變凝乳酶基因特定序列
⑤培養(yǎng)細胞后提純突變蛋白 ⑥將改變后的凝乳酶基因與質(zhì)粒重組
（2024屆·上海市長寧區(qū)·期末題）
移植異體心臟時，異體心臟中的樹突狀細胞容易引起患者體內(nèi)強烈的免疫排斥反應（如圖）。
（1）在免疫系統(tǒng)中，樹突狀細胞屬于________________（編號選填），B細胞是______________（編號選填）。免疫反應中C細胞能分泌____________。
①T淋巴細胞 ②B淋巴細胞 ③抗原呈遞細胞④細胞毒性T細胞⑤輔助性T細胞
（2）關(guān)于圖6免疫排斥反應的分析，正確的是（ ）
A. 引發(fā)免疫排斥的主要信息來自樹突狀細胞上的MHC
B. 樹突狀細胞上被識別的MHC和心肌細胞上的不同
C. 樹突狀細胞和心肌細胞中的遺傳信息不同
D. 刺激A細胞的信號會逐漸消失，免疫系統(tǒng)重歸穩(wěn)態(tài)
未成熟的樹突狀細胞培養(yǎng)至第6天時才能激活免疫排斥，且樹突狀細胞中Dectin-1基因過量表達能抑制MHC的表達。為減輕免疫排斥反應，研究人員利用Dectin-1基因（甲）和帶有綠色熒光蛋白基因（GFP）的噬菌體載體（乙）構(gòu)建重組DNA（如圖）。各限制酶的酶切位點分別是BglⅡ（-A↓GATCT-）、EcRI（-G↓AATTC-）和Sau3AI（-↓GATC-）。
（3）構(gòu)建表達載體時，為提高重組率，最適合的酶切組合是（ ）
A. 用EcRI切割目的基因和P1噬菌體載體
B. 用BglⅡ和EcRI切割目的基因和P1噬菌體載體
C. 用BglⅡ和Sau3AI切割目的基因和P1噬菌體載體
D. 用EcRI和Sau3AI切割目的基因和P1噬菌體載體
（4）在制備受體細胞時，最為合理的操作是__________（編號選填）。
①提取小鼠骨髓中的細胞②提取小鼠心臟中的細胞③原代培養(yǎng)獲得多種細胞 ④ 原代培養(yǎng)獲得樹突狀細胞⑤傳代培養(yǎng)獲得多種細胞⑥ 傳代培養(yǎng)獲得樹突狀細胞
（5）細胞培養(yǎng)至第6天時，受體細胞發(fā)生了（ ）
A. 分裂B. 分化C. 生長D. 凋亡
（6）分別對含重組DNA、未導入DNA分子的兩種受體細胞進行檢測， “+”表示檢測物表達，“-”表示檢測物不表達，表中①、②、③處的檢測結(jié)果分別是________、________、_________（選填“+”/“-”） 。
（7）除了含重組DNA的樹突狀細胞、未導入DNA分子的樹突狀細胞兩組實驗外，還應設置的實驗組是______________________，目的是_________________________________________。 編號
細胞類型
Cre編碼序列
CD36基因
①
肝臟細胞
+
-
②
腎臟細胞
+
+
③
脂肪細胞
+
-
④
心肌細胞
-
+
限制酶
BclⅠ
NtⅠ
XbaⅠ
San3AⅠ
識別序列及切割位點
T↓GATCA
GC↓GGCCGC
T↓CTAGA
↓GATC
PCR電泳圖：
編號
透明圈大小（mm）
1
4.21±0.54
2
4.62±0.23
3
4.55±0.32
4
5.09±0.41
野生
0.05±0.18
引物1
5’GGAATTCCATATGGGCGAATGGGAAATTATCG3’
引物2
5’TTTGGATCCTTACGGCGGCGGAACCGGAC3’
限制性內(nèi)切核酸酶
BamHl
Xh l
Bcl l
Sac l
識別序列及切割位點
5'-C↓GATCG-3'
5'-C↓TCGAG-3'
5'-↓GATC-3'
5'-GAGCT↓C-3'
擬南芥
株高/mm
葉面積/mm2
葉綠素含量/
凈光合速率/
野生型
347.53
330.57
2.27
6.92
轉(zhuǎn)基因
427.37*
527.45*
1.61*
7.97

1 組
2 組
3 組
實驗處理
靜脈注射生理鹽水，不施加超聲處理
靜脈注射含工程菌的生理鹽水，不施加超聲處理
靜脈注射含工程菌的生理鹽水，并施加超聲處理
檢測指標
IFN-γ
+
+
+++
腫瘤體積
+++

+
檢測物
細胞A
細胞B
第1天
第3天
第6天
第1天
第3天
第6天
綠色熒光蛋白
+
+
+
①
MHC
②
③

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