第55講 動物細(xì)胞工程
1.闡明動物細(xì)胞培養(yǎng)是從動物體獲得相關(guān)組織，分散成單個細(xì)胞后，在適宜的 培養(yǎng)條件下讓細(xì)胞生長和增殖的過程。動物細(xì)胞培養(yǎng)是動物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。2.闡明動物細(xì)胞核移植一般是將體細(xì)胞核移入一個去核的卵母細(xì)胞中，并使重 組細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動物個體的過程。3.闡明動物細(xì)胞融合是指通過物理、化學(xué)或生物學(xué)等手段，使兩個或多個動物 細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程。4.概述細(xì)胞融合技術(shù)是單克隆抗體制備的重要技術(shù)。5.簡述干細(xì)胞在生物醫(yī)學(xué)工程中有廣泛的應(yīng)用價值。
考點(diǎn)二　動物細(xì)胞融合技術(shù)和單克隆抗體
考點(diǎn)三　動物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物
主要考點(diǎn) 必備知識
動物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞融合、動物細(xì)胞核移植、生產(chǎn)單克隆抗體等，其中動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。
其它動物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)
2.原理：細(xì)胞增殖（有絲分裂）。
1.動物細(xì)胞培養(yǎng)概念:從動物體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)條件下，讓這些細(xì)胞生長和增殖的技術(shù)。
3.目的：獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物；不能獲得完整動物個體。
動物細(xì)胞培養(yǎng)需要什么樣的條件？
4.動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件:營養(yǎng)、無菌、無毒 的環(huán)境、溫度和pH、氣體環(huán)境。
營養(yǎng)（1）成分:已知成分:將細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)按種類和所需量嚴(yán)格配制的培養(yǎng)基。稱為合成培養(yǎng)基。 未知成分：使用合成培養(yǎng)基時，通常需加入血清等一些天然成分。血清中含有人類尚未全部研究清楚、細(xì)胞生長和增殖所必需的物質(zhì)。 （2）培養(yǎng)基的物理性質(zhì)：培養(yǎng)動物細(xì)胞一般使用液體培養(yǎng)基，也稱為培養(yǎng)液。
動物細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時通常要添加血清
血清中含有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白質(zhì)主要為白蛋白和球蛋白。氨基酸有多種，是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的基本成分，其中有些氨基酸動物細(xì)胞本身不能合成（稱為必需氨基酸），必須由培養(yǎng)液提供。血清激素有胰島素、生長激素等及多種生長因子（如表皮生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子、類胰島素生長因子等）；血清還含有多種未知的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子及其他活性物質(zhì)，能促進(jìn)細(xì)胞的生長、增殖和貼附。因此，細(xì)胞培養(yǎng)時，要保證細(xì)胞能夠順利生長和增殖，一般需添加10%～20%的血清。
（1）保證無菌、無毒環(huán)境的具體措施 ①對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行滅菌處理。 ②在無菌環(huán)境下進(jìn)行操作。 ③培養(yǎng)液需要定期更換，以便清除代謝物，防止細(xì)胞代謝物積累對細(xì)胞自身造成危害。
思考題：如何防止培養(yǎng)過程中的微生物污染？
在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素
適宜的溫度、pH和滲透壓
（1）適宜的溫度：哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)的溫度多以36.5±0.5℃為宜。 （2）適宜的pH：多數(shù)動物細(xì)胞生存的適宜pH為7.2-7.4。 （3）適宜的滲透壓：維持細(xì)胞正常的形態(tài)和功能。
通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶。并將它們置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
O2：細(xì)胞代謝所必需的。 CO2：主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。
放入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
用機(jī)械的方法，或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理的方法，將組織分散成單個細(xì)胞
一般取材于動物胚胎或幼齡動物的組織、器官。 因?yàn)檫@些細(xì)胞分化程度低，增殖能力強(qiáng)，容易培養(yǎng)。
（1）將細(xì)胞分散成單個細(xì)胞。方法：①機(jī)械的方法。 ②用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理一段時間。
（2）用培養(yǎng)液將細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。
原因：①從動物體取出的成塊組織中，細(xì)胞與細(xì)胞靠在一起，彼此限制了生長和增殖； ②能使細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸，更易進(jìn)行物質(zhì)交換。
注意： 胰蛋白酶除了可以消化細(xì)胞間的蛋白外，長時間的作用也會消化細(xì)胞膜蛋白，對細(xì)胞有損傷作用，因此必須控制好胰蛋白酶的消化時間。 一般來說幼年動物的組織細(xì)胞比老年動物的組織細(xì)胞易于培養(yǎng)。同樣，組織細(xì)胞的分化程度越低，則增殖能力越強(qiáng)，所以更容易培養(yǎng)。 一般而言，動物細(xì)胞培養(yǎng)不需經(jīng)過脫分化過程。因高度分化的動物細(xì)胞發(fā)育潛能變窄，失去了發(fā)育成完整個體的能力，所以，動物細(xì)胞也就沒有類似植物組織或細(xì)胞培養(yǎng)時的脫分化過程了。要想使培養(yǎng)的動物細(xì)胞定向分化，通常采用定向誘導(dǎo)動物干細(xì)胞，使其分化成所需要的組織或器官。
（1）操作過程：將細(xì)胞懸液放入培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶內(nèi)，置于適宜環(huán)境中培養(yǎng)。原代培養(yǎng)：通常將分瓶之前的細(xì)胞培養(yǎng)，即動物組織經(jīng)處理后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。
（2）體外培養(yǎng)的動物細(xì)胞類型
①懸浮生長類：能夠懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖。 ②貼壁生長類：需要貼附于某些基質(zhì)表面才能生長增殖（細(xì)胞貼壁），大多數(shù)細(xì)胞屬于此類。
為什么要進(jìn)行分瓶培養(yǎng)？
會因細(xì)胞密度過大、有害代謝物積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏
細(xì)胞貼壁:懸液中分散的細(xì)胞貼附在瓶壁生長的現(xiàn)象。
接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，細(xì)胞通常會停止分裂增殖。
（2）分瓶的具體做法
（1）將分瓶后的細(xì)胞培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)。
在沉淀中得到細(xì)胞，同時去掉上清液中的胰蛋白酶。
注意：細(xì)胞以一個培養(yǎng)瓶移至另一個培養(yǎng)瓶，由此培養(yǎng)液有所稀釋，即稱為“一代”不是細(xì)胞分裂次數(shù)，一般一代細(xì)胞分裂2~3次。
思考：正常細(xì)胞能否一直傳代培養(yǎng)下去？
不可以； 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)一般傳至10代后就不易傳下去，這時細(xì)胞能保持細(xì)胞正常的二倍體核型； 傳至10-50代左右時，增殖會逐漸緩慢，以至于完全停止，這時部分細(xì)胞的細(xì)胞核型可能會發(fā)生變化，這一階段的細(xì)胞稱為細(xì)胞株； 繼續(xù)傳代培養(yǎng)時，少部分細(xì)胞會克服細(xì)胞壽命的自然極限，獲得不死性，這些細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生了突變，正在朝著等同于癌細(xì)胞的方向發(fā)展，這一階段的細(xì)胞稱為細(xì)胞系，細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)一定改變了；
動物胚胎或幼齡動物的組織、器官
少部分突破細(xì)胞壽限“癌變”，無限傳代
動物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成動物體
分化程度低，增殖能力強(qiáng)
植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較
用機(jī)械法或胰蛋白酶、膠原蛋白酶將組織細(xì)胞分散開。
離體植物器官、組織、細(xì)胞
有機(jī)營養(yǎng)成分；無機(jī)營養(yǎng)成分；植物激素。
糖類、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素等營養(yǎng)物質(zhì)及一些天然成分如血清。
①培養(yǎng)過程中細(xì)胞都進(jìn)行有絲分裂，不涉及減數(shù)分裂；②均需無菌操作，需要適宜的溫度、pH等條件。
6.干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用
（2）干細(xì)胞分布：存在于早期胚胎、骨髓和臍帶血等多種組織和器官中。
（1）干細(xì)胞概念：機(jī)體中能進(jìn)行自我更新（產(chǎn)生與自身相同的子代細(xì)胞）并具有多向分化潛能（分化形成不同細(xì)胞類型）的一類細(xì)胞稱為干細(xì)胞。
干細(xì)胞基本特征:干細(xì)胞能產(chǎn)生與自己相同的子代細(xì)胞，即自我更新能力。同時也具有分化成不同細(xì)胞類型的潛能.
胚胎干細(xì)胞（簡稱ES細(xì)胞）：也叫全能干細(xì)胞。①分布：存在于早期胚胎中，②特點(diǎn)：具有分化為成年動物體內(nèi)的任何一種類型的細(xì)胞，并進(jìn)一步形成機(jī)體的所有組織和器官甚至個體的潛能。③應(yīng)用實(shí)例：ES細(xì)胞在體外分化成心肌細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞和造血干細(xì)胞等。
包括胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞等。
成體干細(xì)胞：①分布：存在于成體組織或器官內(nèi)中，②常見類別：包括骨髓中的造血干細(xì)胞（多能干細(xì)胞）、神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)干細(xì)胞和睪丸中的精原干細(xì)胞（專能干細(xì)胞）等。③特點(diǎn)：一般認(rèn)為，成體干細(xì)胞具有組織特異性，只能分化成特定的細(xì)胞或組織，不具有發(fā)育成完整個體的能力。
④發(fā)現(xiàn)最早、研究最多的、應(yīng)用最成熟的實(shí)例：造血干細(xì)胞，主要存在于成體的骨髓、外周血和臍帶血中。
①概念：通過體外誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞，獲得了類似胚胎干細(xì)胞的一種細(xì)胞，稱為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞，簡稱iPS細(xì)胞。
（4）誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）
②誘導(dǎo)多能干細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)：a.誘導(dǎo)過程無須破壞胚胎；b.iPS細(xì)胞可以來源于病人自身的體細(xì)胞，將它移植回病人體內(nèi)后，理論上可以避免免疫排斥反應(yīng)。
③誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞的制備
轉(zhuǎn)入相關(guān)因子，細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化
制備iPS細(xì)胞的其他方法
借助載體將特定基因?qū)爰?xì)胞中誘導(dǎo)形成iPS細(xì)胞
直接將特定蛋白導(dǎo)入受體細(xì)胞中誘導(dǎo)形成iPS細(xì)胞
用小分子化合物來誘導(dǎo)形成iPS細(xì)胞誘導(dǎo)形成iPS細(xì)胞
成纖維細(xì)胞以及已分化的T細(xì)胞、B細(xì)胞
因此，普遍認(rèn)為iPS細(xì)胞的應(yīng)用前景優(yōu)于胚胎干細(xì)胞。
干細(xì)胞應(yīng)用面臨的問題:存在導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的風(fēng)險。
實(shí)例：有著自我更新能力及分化潛能的干細(xì)胞，與組織、器官的發(fā)育、再生和修復(fù)等密切相關(guān),因而在醫(yī)學(xué)上有著廣泛的應(yīng)用。
治療白血病及一些惡性腫瘤放療或化療后引起的造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)功能障礙等疾病
治療神經(jīng)組織損傷和神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾?。ㄈ缗两鹕?、阿爾茨海默病等）
可治療小鼠的鐮狀細(xì)胞貧血癥，在治療阿爾茲海默病、心血管疾病、白血病、帕金森病等領(lǐng)域的研究也取得了新進(jìn)展
1.下列有關(guān)動物細(xì)胞培養(yǎng)的表述，正確的是(　　)A．培養(yǎng)環(huán)境中需要氧氣，不需要二氧化碳B．培養(yǎng)的細(xì)胞有兩類：懸浮生長和貼壁生長，都需定期用胰蛋白酶處理，分瓶后才能繼續(xù)增殖C．干細(xì)胞是從胚胎中分離提取的細(xì)胞D．幼齡動物細(xì)胞比老齡動物細(xì)胞更易于培養(yǎng)
解析:動物細(xì)胞培養(yǎng)過程既需要O2，也需要CO2，A錯誤；動物細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞具有貼壁生長以及接觸抑制的特點(diǎn)，因此在培養(yǎng)中需要用胰蛋白酶處理貼壁的細(xì)胞并進(jìn)行分瓶培養(yǎng)，B錯誤；胚胎干細(xì)胞是從早期胚胎或原始性腺中分離提取的細(xì)胞，干細(xì)胞不一定來自胚胎，如造血干細(xì)胞，C錯誤；幼齡動物組織細(xì)胞分裂能力強(qiáng)，因此選擇幼齡動物的組織細(xì)胞更易于培養(yǎng)，D正確。故選D。
[對點(diǎn)訓(xùn)練]1．下列有關(guān)動物細(xì)胞培養(yǎng)所需條件的敘述，錯誤的是(　　)A．為保證培養(yǎng)的動物細(xì)胞處于無菌、無毒的環(huán)境，培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具等需要進(jìn)行消毒處理B．動物細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在含95%空氣和5%CO2的恒溫箱中培養(yǎng)，CO2的作用是維持培養(yǎng)液的pHC．培養(yǎng)液中有糖類、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素等D．使用合成培養(yǎng)基時，應(yīng)加入動物的血清等一些天然成分
解析:為保證培養(yǎng)的動物細(xì)胞處于無菌、無毒的環(huán)境，培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具等需要進(jìn)行滅菌處理。
考向 　干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用
2.治療性克隆有望最終解決供體器官的短缺和器官移植出現(xiàn)的排異反應(yīng)。如圖表示治療性克隆的過程，下列有關(guān)敘述不正確的是(　　)
A．上述過程利用了動物細(xì)胞核移植、動物細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)B．上述過程充分說明動物細(xì)胞具有全能性C．①過程的完成離不開胚胎干細(xì)胞的增殖和分化潛能D．①、②過程都發(fā)生DNA復(fù)制和蛋白質(zhì)合成
解析:根據(jù)題意和圖示分析可知：該過程涉及到許多生物技術(shù)，如動物細(xì)胞核移植、胚胎干細(xì)胞經(jīng)過①②等過程涉及到動物細(xì)胞培養(yǎng)，A正確；細(xì)胞全能性指高度分化的細(xì)胞離體后能發(fā)育成完整的生物個體的潛能。上述過程僅獲得了臟器組織細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等，沒有得到個體，因而沒有體現(xiàn)動物細(xì)胞的全能性，B錯誤；①過程依賴于胚胎干細(xì)胞的增殖使細(xì)胞數(shù)量增多，依賴于細(xì)胞分化得到臟器組織干細(xì)胞和神經(jīng)組織干細(xì)胞，C正確；①、②過程都有細(xì)胞增殖，在細(xì)胞增殖的間期發(fā)生DNA復(fù)制和蛋白質(zhì)合成，D正確。故選B。
1.制備肝細(xì)胞懸液時先用剪刀剪碎肝組織，再用胃蛋白酶處理(　　)2.動物細(xì)胞培養(yǎng)時，O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH(　　)
3.肝細(xì)胞培養(yǎng)過程中通常在培養(yǎng)液中通入5%的CO2刺激細(xì)胞呼吸(　　)4.在25 ℃的實(shí)驗(yàn)條件下可順利完成大鼠神經(jīng)細(xì)胞的培養(yǎng)(　　)
1.(選擇性必修3 P44)細(xì)胞貼壁：　　　　　　　　　　　　　　　。2.(選擇性必修3 P44)接觸抑制：_________________________________　　　　　　　　　　　　　　。3.(選擇性必修3 P44)細(xì)胞在培養(yǎng)過程中分裂受阻的原因：_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________。
細(xì)胞貼附在培養(yǎng)瓶的瓶壁上的現(xiàn)象
當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，
細(xì)胞通常會停止分裂增殖的現(xiàn)象
會因細(xì)胞密度過大、有害代謝物積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等因素而分裂受阻；對于貼壁細(xì)胞來說，除上述因素外，還會因?yàn)榻佑|抑制而停止分裂增殖
4.選擇性必修3 P44“旁欄思考”：進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)時常用胰蛋白酶分散細(xì)胞，是因?yàn)榧?xì)胞間物質(zhì)主要是　　　。不能用胃蛋白酶的原因是 。
胃蛋白酶作用的適宜pH為1.5左右，而動物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2～7.4，
胃蛋白酶在此環(huán)境中沒有活性
動物細(xì)胞融合技術(shù)和單克隆抗體
(1)概念： 動物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指使兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的技術(shù)，融合后形成的具有原來兩個或多個細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。 (2)原理：細(xì)胞膜具有一定的流動性。 (3)融合方法：物理法：電融合法; 化學(xué)法：聚乙二醇(PEG)融合法、 生物法：滅活病毒誘導(dǎo)法等。
注意：滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理是病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但是并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。
(4)融合實(shí)質(zhì)及完成的標(biāo)志：細(xì)胞核的融合 (6)意義：①突破有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。 ②研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。 ③利用動物細(xì)胞融合技術(shù)而發(fā)展起來的雜交瘤技術(shù)，為制造單克隆抗體開辟了新途徑。
細(xì)胞膜具有一定的流動性、植物細(xì)胞的全能性
細(xì)胞膜具有一定的流動性
用果膠酶和纖維素酶去除細(xì)胞壁
用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散成單個細(xì)胞
聚乙二醇（PEG）融合法、電融合法、離心法；高Ca2+-高pH融合法
聚乙二醇（PEG）融合法、電融合法、滅活病毒誘導(dǎo)法
主要用于制造單克隆抗體
打破生殖隔離，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種，培育植物新品種
突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能
傳統(tǒng)抗體制備方法：向動物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，使動物產(chǎn)生抗體，然后從動物血清中分離所需抗體。
缺陷：產(chǎn)量低、純度低， 且抗體的特異性差、靈敏度低。
（1）單克隆抗體的制備原理：一種B淋巴細(xì)胞只能分泌一種抗體，B淋巴細(xì)胞在體外不能無限增殖；骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖；B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合得到的雜交瘤細(xì)胞，既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體。
(2)單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：能準(zhǔn)確地識別抗原的細(xì)微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以大量制備。
圖中給小鼠注射特定的抗原蛋白，其目的是什么？
能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞
刺激機(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答，從而產(chǎn)生特定的B淋巴細(xì)胞。
誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？
物理:電融合法化學(xué):聚乙二醇 生物：滅活的病毒 （動物細(xì)胞特有）
在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會死亡，只有融合的雜種細(xì)胞才能生長。
補(bǔ)充資料：第一次篩選獲得雜交瘤細(xì)胞
1.細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。2.人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但不能分裂增殖。 3.鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。
篩選出雜交瘤細(xì)胞方法？
細(xì)胞無增殖能力的細(xì)胞在培養(yǎng)基中存活僅5-7天，細(xì)胞的多聚體也容易死去。
將誘導(dǎo)融合后的細(xì)胞接種于HAT培養(yǎng)基后兩周，則細(xì)胞生存狀況及原因?yàn)椋築細(xì)胞和B-B細(xì)胞________________________________________骨髓瘤細(xì)胞和瘤-瘤細(xì)胞_____________________________________________雜交瘤細(xì)胞________________________________________________
死亡；能進(jìn)行補(bǔ)救合成途徑，但是無增殖能力；
死亡；兩種途徑均無法進(jìn)行，無法合成DNA，無法增殖；
存活；能進(jìn)行補(bǔ)救合成途徑，能合成DNA，可大量增殖；
第2次篩選的目的是得到能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。
篩選原理：用96孔板培養(yǎng)，在每一個孔中盡量只接種一個雜交瘤細(xì)胞的情況下，進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測（進(jìn)行多次篩選）。選擇抗體檢測呈陽性的雜交瘤細(xì)胞，即分泌的抗體能與特定的抗原結(jié)合。
每一個孔中盡量只接種一個雜交瘤細(xì)胞
補(bǔ)充資料：第二次篩選——克隆化培養(yǎng)和抗體檢測
單克隆抗體制備過程中兩次篩選的方法及目的
誘導(dǎo)融合后得到的細(xì)胞中，除雜交瘤細(xì)胞之外，還有未融合的親本細(xì)胞，也有融合的具有同種核的細(xì)胞
由于小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激，所以經(jīng)第一次篩選之后獲得的雜交瘤細(xì)胞中有能產(chǎn)生其他抗體的細(xì)胞
用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選
用96孔板培養(yǎng)，在每一個孔中盡量只接種一個雜交瘤細(xì)胞的情況下，進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測（進(jìn)行多次篩選）
獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞
既可以產(chǎn)生特異性抗體，又可以大量增殖
獲取大量所需雜交瘤細(xì)胞?
體外培養(yǎng)或小鼠腹腔內(nèi)增殖.
體外培養(yǎng)：從細(xì)胞培養(yǎng)液中獲取。小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)：從小鼠腹水中獲取。
(1)作為診斷試劑：在多種疾病的診斷和病原體鑒定中發(fā)揮重要的作用。
原理：單克隆抗體能準(zhǔn)確地識別抗原的細(xì)微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以大量制備。
①多種疾病的診斷實(shí)例：利用同位素或熒光標(biāo)記的單克隆抗體在特定組織中成像的技術(shù)，可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病。②病原體的鑒定實(shí)例：乙肝病毒表面抗原定量檢測試劑盒。③其他類型診斷實(shí)例：早早孕診斷試劑盒。
用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”，靈敏度很高，在妊娠的第8天就可以做出診斷，比原來的診斷方法提前了10天左右，可以避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用藥物而對胎兒造成不利影響。該方法檢測的準(zhǔn)確率在90％以上。
(2)運(yùn)載藥物：抗體—藥物偶聯(lián)物(ADC)通過將細(xì)胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。ADC通常由抗體、接頭和藥物(如細(xì)胞毒素)三部分組成。
ADC的作用機(jī)制示意圖
ADC的抗體和藥物各具有什么作用？
ADC的抗體和藥物具有的作用分別是導(dǎo)向和治療。
除了細(xì)胞毒素，還有哪些物質(zhì)理論上可以作為ADC偶聯(lián)的藥物？
放射性同位素和化學(xué)藥物等。
ADC在臨床應(yīng)用上的作用機(jī)理是什么？
其作用機(jī)理是通過單克隆抗體的靶向作用特異性地識別腫瘤細(xì)胞表面抗原，然后利用細(xì)胞本身具備的內(nèi)吞作用使化學(xué)藥物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞體內(nèi)發(fā)生藥力，從而達(dá)到殺死腫瘤細(xì)胞的目的。
1.動物細(xì)胞融合屬于動物細(xì)胞工程的技術(shù)手段之一，下列有關(guān)動物細(xì)胞融合的敘述正確的是(　　)A．動物細(xì)胞融合產(chǎn)生的細(xì)胞稱為重組細(xì)胞B．融合后形成的細(xì)胞為單核或多核細(xì)胞C．常用的誘導(dǎo)融合的生物誘導(dǎo)劑是聚乙二醇、滅活的病毒等D．也稱細(xì)胞雜交，可由兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合成一個細(xì)胞
解析:動物細(xì)胞融合產(chǎn)生的細(xì)胞稱為雜交細(xì)胞，核移植產(chǎn)生的細(xì)胞稱為重組細(xì)胞，A錯誤；融合后形成具有兩個或多個細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，B錯誤；誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的生物誘導(dǎo)劑是滅活的病毒，聚乙二醇屬于化學(xué)誘導(dǎo)劑，C錯誤；動物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程，D正確。故選D。
[對點(diǎn)訓(xùn)練]1．下列有關(guān)動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交比較的敘述錯誤的是(　　)A．都可以用電融合法或PEG融合法誘導(dǎo)B．雜種細(xì)胞都能形成新個體C．都突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能D．它們的原理都涉及細(xì)胞膜的流動性
解析:動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交都可用電融合法或聚乙二醇(PEG)作為融合誘導(dǎo)劑，A正確；動物細(xì)胞融合形成雜交細(xì)胞，植物體細(xì)胞雜交可形成雜交個體，B錯誤；動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交突破了有性雜交方法的局限，克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能，C正確；動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的原理都涉及細(xì)胞膜的流動性，D正確。故選B。
2.如圖表示抗人體胃癌的單克隆抗體的制備過程。下列敘述錯誤的是(　　)
A．反復(fù)給小鼠注射甲的目的是讓小鼠體內(nèi)產(chǎn)生更多的抗體B．人工誘導(dǎo)細(xì)胞融合獲得乙的常用方法是用滅活的病毒C．丁細(xì)胞既能無限增殖又能產(chǎn)生抗甲抗原的抗體D．制備的單克隆抗體可以早期診斷人體胃癌的發(fā)生情況
解析:甲為抗原，反復(fù)給小鼠注射甲的目的是對小鼠進(jìn)行免疫，以便產(chǎn)生更多的能分泌相應(yīng)抗體的漿細(xì)胞，A錯誤；人工誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的常用方法是用滅活的病毒，還可以用聚乙二醇、電激，B正確；丁細(xì)胞為篩選出來的雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞既能無限增殖又能產(chǎn)生抗甲抗原的特異性抗體，C正確；單克隆抗體特異性強(qiáng)，靈敏度高，可以在早期檢測出人體胃癌的發(fā)生情況，D正確。故選A。
[對點(diǎn)訓(xùn)練]2．使用高效的細(xì)胞毒素類藥物進(jìn)行化療可以有效殺傷腫瘤細(xì)胞。臨床上運(yùn)用抗體—藥物偶聯(lián)物(ADC)將藥物與抗體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。ADC通常由抗體、接頭和藥物(如細(xì)胞毒素)三部分組成。下列敘述錯誤的是(　　)A．ADC中的抗體主要是發(fā)揮治療效應(yīng)B．ADC中的抗體能特異性識別腫瘤抗原C．ADC中的抗體可以通過雜交瘤技術(shù)大量制備D．可以將ADC中的藥物換成放射性同位素，標(biāo)記單克隆抗體進(jìn)行靶向放療
解析:ADC中抗體的作用是特異性識別腫瘤細(xì)胞表面的抗原并與之結(jié)合，A錯誤；抗體能特異性識別抗原并與其結(jié)合，題中ADC中的抗體能特異性識別腫瘤抗原，B正確；雜交瘤細(xì)胞可以大量制備單克隆抗體，C正確；用放射性同位素標(biāo)記的單克隆抗體可對腫瘤進(jìn)行靶向治療，D正確。故選A。
3.制備單克隆抗體時，要選用已免疫的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞(　　)4.滅活的病毒能促進(jìn)動物細(xì)胞融合，但不能促進(jìn)植物細(xì)胞融合(　　)
1.植物原生質(zhì)體融合與動物細(xì)胞融合的原理是相同的(　　)2.雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)培養(yǎng)，更容易控制培養(yǎng)條件(　　)
1.選擇性必修3 P48“相關(guān)信息”：(1)滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去　　　　　，但并不破壞病原體的　　　　　。(2)滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合與病毒和細(xì)胞所含的　　　　有關(guān)。
2.選擇性必修3 P48～49圖2－16(1)制備單克隆抗體過程中，若僅考慮細(xì)胞的兩兩融合，B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞融合后產(chǎn)生的細(xì)胞有_______________________________ 3種類型，出現(xiàn)不同種類型是因?yàn)? 。
B細(xì)胞自身融合、骨髓瘤細(xì)胞自身融
3.(選擇性必修3 P49)雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是__________________________　　　　　　。
既能大量繁殖，又能產(chǎn)生足夠數(shù)
4.(選擇性必修3 P50)單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)是__________________________　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
能準(zhǔn)確地識別抗原的細(xì)微差異，
與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以大量制備
動物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物
1.動物細(xì)胞核移植技術(shù)
注意：克隆動物屬于無性繁殖，遺傳物質(zhì)主要來自于A，一小部分來自于B，與C無關(guān)。證明了動物細(xì)胞核具有全能性，卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)有助于體細(xì)胞核的全能性表達(dá)。
將動物的一個細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎， 這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。
2.動物體細(xì)胞核移植技術(shù)種類：
細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易。
細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)全能性十分困難。
3.非人靈長類動物體細(xì)胞核移植的困難原因 ①供體細(xì)胞的細(xì)胞核在核卵母細(xì)胞中不能完全恢復(fù) 其分化前的功能狀態(tài)，這導(dǎo)致了胚胎發(fā)育率低。 ②對非人靈長類動物胚胎進(jìn)行操作的技術(shù)尚不完善。
4.體細(xì)胞核移植的過程
將胚胎移入受體（代孕）母牛體內(nèi)
采集牛卵巢中的卵母細(xì)胞，在體外培養(yǎng)到MⅡ期
生出與供體奶牛遺傳物質(zhì)基本相同的犢牛
從供體身體某一部位上取體細(xì)胞
將供體細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞
通過電融合法使兩細(xì)胞融合，供體核進(jìn)入卵母細(xì)胞
用物理或化學(xué)方法激活重構(gòu)胚，使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育過程
（1）選擇MⅡ期卵母細(xì)胞的原因
①含有促進(jìn)細(xì)胞核表現(xiàn)全能性的物質(zhì)和營養(yǎng)條件。
②細(xì)胞體積大，易于操作。
（2）卵母細(xì)胞去核方法：顯微操作（去核）法。通常是顯微操作去除紡錘體-染色體復(fù)合物。也可以采用梯度離心、紫外線短時間照射和化學(xué)物質(zhì)處理等方法在沒有穿透卵母細(xì)胞透明帶的情況下去核或使其中的DNA變性。
（3）“去核”去的是什么？
去除的為紡錘體-染色體復(fù)合物。
*去核時，由于MⅡ期卵母細(xì)胞核的位置靠近第一極體，用微型吸管一般一并吸出第一極體。
使核移植得到的胚胎或動物核內(nèi)遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價值的動物。
（5）供體細(xì)胞注入卵母細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)：
對卵母細(xì)胞損傷較小，保證供核不被破壞，操作也更方便。
*直接將供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞的透明帶內(nèi)。
人工重新構(gòu)建的胚胎，具有發(fā)育成完整個體的能力。
（7）激活重構(gòu)胚的方法:
②化學(xué)方法:Ca2+載體、乙醇和蛋白酶合成抑制
(8)以上方法處理重構(gòu)胚的目的
激活重構(gòu)胚，使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育過程。
證明了動物已分化的體細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性。
（10）克隆動物的培養(yǎng) 并非全在體外， 還需在代孕個體 子宮內(nèi)孕育。
你認(rèn)為用上述體細(xì)胞核移植技術(shù)培育的克隆動物，是對體細(xì)胞供體動物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？
（1）克隆動物絕大部分DNA來自供體動物的細(xì)胞核，但線粒體中的DNA （細(xì)胞質(zhì)中的DNA）同時來自供體細(xì)胞和受體卵母細(xì)胞。
（2）性狀是基因與環(huán)境共同作用的結(jié)果，克隆動物所處的環(huán)境與核供體 細(xì)胞生活的環(huán)境不會完全相同。
（3）克隆動物在個體發(fā)育過程中有可能發(fā)生基因突 變、染色體變異等可遺傳變異。
2.體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景和存在的問題
加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育
有望增加瀕危物種的存活數(shù)量
轉(zhuǎn)基因克隆動物可以作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白
①轉(zhuǎn)基因克隆動物的細(xì)胞、組織或器官可以作為異種移植的供體。②以患者作為供體培育的人核移植胚胎干細(xì)胞，經(jīng)過誘導(dǎo)分化能形成相應(yīng)的細(xì)胞、組織或器官，將它們移植給患者時可以避免免疫排斥反應(yīng)。
①研究克隆動物可使人類更深入地了解胚胎發(fā)育及衰老過程。②克隆一批遺傳背景相同的動物，可以通過它們之間的對比來分析致病基因。③克隆特定疾病模型的動物，還能為研究該疾病機(jī)制和開發(fā)相應(yīng)的藥物提供幫助。
①體細(xì)胞核移植技術(shù)的成功率非常低②各個技術(shù)環(huán)節(jié)有待進(jìn)一步改進(jìn)③絕大多數(shù)克隆動物存在健康問題，表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷
考向　動物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物
1.下列關(guān)于體細(xì)胞核移植技術(shù)應(yīng)用的敘述，錯誤的是(　　)A．利用體細(xì)胞核移植技術(shù)可以加速家畜遺傳改良進(jìn)程B．利用體細(xì)胞核移植技術(shù)培育的轉(zhuǎn)基因克隆動物，可以作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)許多珍貴的醫(yī)用蛋白C．轉(zhuǎn)基因克隆動物不能作為異種移植的供體進(jìn)行器官移植，因?yàn)闀l(fā)生免疫排斥反應(yīng)D．利用體細(xì)胞核移植技術(shù)培育后代可以避免細(xì)胞核供體的線粒體遺傳病基因傳遞給后代
解析:利用體細(xì)胞核移植技術(shù)已展示出廣闊的應(yīng)用前景，可以快速繁殖具有優(yōu)良品質(zhì)的家畜，可以加速家畜遺傳改良進(jìn)程，A正確；利用體細(xì)胞核移植技術(shù)培育的轉(zhuǎn)基因克隆動物可以作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白，如乳腺生物反應(yīng)器、膀胱生物反應(yīng)器等，B正確；設(shè)法去除豬抗原決定基因，再結(jié)合克隆技術(shù)，培育出沒有免疫排斥反應(yīng)的轉(zhuǎn)基因克隆豬器官，可作為異種移植的供體進(jìn)行器官移植，C錯誤；利用體細(xì)胞核移植技術(shù)培育后代由于細(xì)胞質(zhì)來自卵細(xì)胞的供體，可以避免細(xì)胞核供體的線粒體遺傳病基因傳遞給后代，D正確。
[對點(diǎn)訓(xùn)練]1.科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)，在核移植過程中，卵母細(xì)胞通過表達(dá)一些特異因子“修補(bǔ)”了體細(xì)胞核中缺失的端粒酶基因，最終成功地從端粒酶雜合缺失的小鼠體細(xì)胞中得到多能干細(xì)胞，該多能干細(xì)胞的端粒長度被有效延長，功能得以恢復(fù)。通過核移植后形成的多能干細(xì)胞，能分化發(fā)育成身體內(nèi)多種細(xì)胞，可用于自身組織修復(fù)，并具有安全性。這一成果從實(shí)驗(yàn)和理論層面都表明人類“返老還童”不再是夢想。請回答下列問題：(1)動物體細(xì)胞核移植所用的受體細(xì)胞通常是_____________________，選擇該細(xì)胞的主要原因是__________________________________________。(2)目前動物核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是__________。哺乳動物的核移植可以分為________________和體細(xì)胞核移植，其中移植成功率較高的是________________。
(MⅡ期)去核的卵母細(xì)胞　
卵細(xì)胞內(nèi)含有激發(fā)體細(xì)胞核全能性表達(dá)的成分
[對點(diǎn)訓(xùn)練]1.科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)，在核移植過程中，卵母細(xì)胞通過表達(dá)一些特異因子“修補(bǔ)”了體細(xì)胞核中缺失的端粒酶基因，最終成功地從端粒酶雜合缺失的小鼠體細(xì)胞中得到多能干細(xì)胞，該多能干細(xì)胞的端粒長度被有效延長，功能得以恢復(fù)。通過核移植后形成的多能干細(xì)胞，能分化發(fā)育成身體內(nèi)多種細(xì)胞，可用于自身組織修復(fù)，并具有安全性。這一成果從實(shí)驗(yàn)和理論層面都表明人類“返老還童”不再是夢想。請回答下列問題：(3)端粒學(xué)說認(rèn)為，細(xì)胞衰老的原因是染色體上的端粒結(jié)構(gòu)縮短，而端粒酶能夠修復(fù)縮短的端粒，從而延緩細(xì)胞衰老。由此分析，題干中核移植小鼠的端粒酶活性應(yīng)較正常小鼠的________。(4)早期胚胎最終要通過________技術(shù)才能發(fā)育成一個完整的個體。
1.克隆動物都只具備一個親本的遺傳特性(　　)2.克隆動物的制備屬于有性繁殖(　　)
3.體細(xì)胞核移植過程中通常采用MⅡ期的去核卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞(　　)
3.選擇性必修3 P54“相關(guān)信息”：目前動物細(xì)胞核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是　　　　　。也有人采用梯度離心、紫外線短時間照射和化學(xué)物質(zhì)處理等方法。這些方法是在沒有穿透卵母細(xì)胞透明帶的情況下去核或使其中的　　　　　。
1.(選擇性必修3 P54)核移植技術(shù)中必須先去掉受體卵母細(xì)胞的細(xì)胞核的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。2.(選擇性必修3 P54)通過體細(xì)胞核移植技術(shù)培育的克隆動物，不是對體細(xì)胞供體動物進(jìn)行了100%的復(fù)制，原因是__________________________________________________________________________________________。此外，動物的一些行為、習(xí)性的形成與所處環(huán)境有很大關(guān)系。
保證核移植動物的核遺傳物質(zhì)全部來自供體細(xì)胞
克隆動物絕大部分DNA來自供體
細(xì)胞核，其核外還有少量的DNA，即線粒體中的DNA來自受體卵母細(xì)胞
1.(2019·江蘇卷改編)下圖為雜交瘤細(xì)胞制備示意圖。骨髓瘤細(xì)胞由于缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT－)，在HAT篩選培養(yǎng)液中不能正常合成DNA，無法生長。下列敘述錯誤的是(　　)A．可用滅活的仙臺病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合B．兩兩融合的細(xì)胞都能在HAT培養(yǎng)液中生長C．雜交瘤細(xì)胞需進(jìn)一步篩選才能用于生產(chǎn)D．細(xì)胞膜的流動性是細(xì)胞融合的基礎(chǔ)
解析:動物細(xì)胞融合的方法有滅活病毒誘導(dǎo)法、聚乙二醇(PEG)融合法、電融合法等，A正確；兩兩融合的細(xì)胞包括：免疫B細(xì)胞與免疫B細(xì)胞的融合細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞，據(jù)題干信息骨髓瘤細(xì)胞在HAT篩選培養(yǎng)液中無法生長，因此骨髓瘤細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合細(xì)胞在HAT培養(yǎng)液中無法生長，而免疫B細(xì)胞與免疫B細(xì)胞的融合細(xì)胞不能無限增殖，故也不能生長，雜交瘤細(xì)胞可以在HAT培養(yǎng)液中生長，B錯誤；融合后產(chǎn)生的雜交瘤細(xì)胞并不是都能表達(dá)產(chǎn)生所需的單克隆抗體，還需要進(jìn)一步篩選才能用于生產(chǎn)，C正確；動物細(xì)胞融合依據(jù)的原理是細(xì)胞膜的流動性，D正確。
2.(2018·全國卷Ⅲ)2018年《細(xì)胞》期刊報道，中國科學(xué)家率先成功地應(yīng)用體細(xì)胞對非人靈長類動物進(jìn)行克隆，獲得兩只克隆猴——“中中”和“華華”?；卮鹣铝袉栴}：(1)“中中”和“華華”的獲得涉及核移植過程，核移植是指______________________________________________________________________________________________________________。通過核移植方法獲得的克隆猴，與核供體相比，克隆猴體細(xì)胞的染色體數(shù)目_______(填“加倍”或“不變”)。(2)哺乳動物的核移植可以分為胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植，胚胎細(xì)胞核移植獲得克隆動物的難度________(填“大于”或“小于”)體細(xì)胞核移植，其原因是__________________________________________。
將動物一個細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中，使這個重新組合的細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動物個體的技術(shù)
胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性相對容易
2.(2018·全國卷Ⅲ)2018年《細(xì)胞》期刊報道，中國科學(xué)家率先成功地應(yīng)用體細(xì)胞對非人靈長類動物進(jìn)行克隆，獲得兩只克隆猴——“中中”和“華華”?；卮鹣铝袉栴}：(3)在哺乳動物核移植的過程中，若分別以雌性個體和雄性個體的體細(xì)胞作為核供體，通常，所得到的兩個克隆動物體細(xì)胞的常染色體數(shù)目________(填“相同”或“不同”)，性染色體組合________(填“相同”或“不同”)。
解析:(1)核移植是將動物一個細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中，使這個重新組合的細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動物個體的技術(shù)。因?yàn)槿旧w在細(xì)胞核中，所以克隆動物體細(xì)胞的染色體數(shù)目與提供細(xì)胞核的個體的體細(xì)胞相同。(2)由于動物的胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性相對容易，而動物的體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)全能性十分困難，因此，動物體細(xì)胞核移植的難度明顯高于胚胎細(xì)胞核移植。(3)哺乳動物雌雄個體的體細(xì)胞中，細(xì)胞核內(nèi)常染色體的數(shù)目是相同的，性染色體組合是不同的。若分別以雌性個體和雄性個體的體細(xì)胞作為核供體，則得到的克隆動物的體細(xì)胞中常染色體的數(shù)目相同，性染色體組合不同。
3．(2020·全國卷Ⅰ)為研制抗病毒A的單克隆抗體，某同學(xué)以小鼠甲為實(shí)驗(yàn)材料設(shè)計了以下實(shí)驗(yàn)流程。
回答下列問題：(1)上述實(shí)驗(yàn)前必須給小鼠甲注射病毒A，該處理的目的是________________ ________________。 (2)寫出以小鼠甲的脾臟為材料制備單細(xì)胞懸液的主要實(shí)驗(yàn)步驟:__________ _____________________________________________________________________________________。
誘導(dǎo)小鼠甲產(chǎn)生能夠分泌抗病
取小鼠甲脾臟剪碎，用胰蛋白酶或膠原蛋白酶等處理使其分散成單個細(xì)胞，加入培養(yǎng)液制成單細(xì)胞懸液
回答下列問題：(3)為了得到能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，需要進(jìn)行篩選。圖中篩選1所采用的培養(yǎng)基屬于________，使用該培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的結(jié)果是_____________________。圖中篩選2含多次篩選，篩選所依據(jù)的基本原理是____________________________。 (4)若要使能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞大量增殖，可采用的方法有________________________________________________(答出2點(diǎn)即可)。
只有雜交瘤細(xì)胞能夠生存
抗原與抗體的反應(yīng)具有特異性
將雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖；將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)

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