1．(2023·山東高考)平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說法正確的是( )
A．不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)
B．平板涂布時涂布器使用前必須進行消毒
C．接種后未長出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄
D．利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物
解析：選D 不含氮源的平板可用于固氮微生物的培養(yǎng)，A錯誤；平板涂布時涂布器使用前必須浸在酒精中，然后在火焰上灼燒滅菌，B錯誤；使用后的培養(yǎng)基即使未長出菌落也要在丟棄前進行滅菌處理，不能直接丟棄，以免污染環(huán)境，C錯誤；只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物，D正確。
2．微生物的接種技術(shù)有很多，下列有關(guān)常用的兩種微生物接種方法的敘述，錯誤的是( )
A．只能應(yīng)用于固體培養(yǎng)基接種
B．都可以用于微生物的計數(shù)
C．接種培養(yǎng)后均可獲得單菌落
D．接種用具都需進行嚴(yán)格滅菌
解析：選B 將微生物接種到固體培養(yǎng)基中的方法通常為平板劃線法和稀釋涂布平板法，A正確；稀釋涂布平板法常用來進行微生物的計數(shù)，平板劃線法常用來篩選分離微生物，B錯誤；兩種接種方法都可以在培養(yǎng)基中形成單個菌落，C正確；為防止雜菌污染，接種工具需要滅菌后使用，D正確。
3．某同學(xué)將土壤浸出液涂布在選擇培養(yǎng)基上分離出分解尿素的細(xì)菌，以下操作正確的是( )
A．首先要用蒸餾水對土壤樣液進行梯度稀釋
B．利用菌落的特征即可篩選與鑒定出分解尿素的細(xì)菌
C．本實驗應(yīng)始終保證無菌操作，否則會影響實驗結(jié)果
D．在25 ℃下選擇培養(yǎng)3～4天即可獲得分解尿素的細(xì)菌
解析：選 C 首先要用無菌水對土壤樣液進行梯度稀釋，A錯誤；鑒定分解尿素的細(xì)菌的方法是在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素，而利用菌落的特征只能初步識別和判斷微生物的類型，B錯誤；篩選尿素分解菌的實驗應(yīng)始終保證無菌操作，否則會影響實驗結(jié)果，C正確；本實驗的流程是土壤取樣→樣品的稀釋→將稀釋液涂布到以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上→挑選能生長的菌落→鑒定，當(dāng)培養(yǎng)基上產(chǎn)生菌落后，該菌落還需要借助生物化學(xué)的方法進一步鑒定，才能確定其能夠分解尿素，D錯誤。
4．下列說法錯誤的是( )
A．因為土壤中各類微生物的數(shù)量不同，所以為獲得不同類型的微生物，要按不同的稀釋倍數(shù)進行分離
B．測定土壤中細(xì)菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍不同
C．只有得到了3個或3個以上菌落數(shù)目在30～300的平板，才說明系列稀釋操作成功
D．牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些細(xì)菌菌落
解析：選C 土壤是微生物的天然培養(yǎng)基，土壤中各類微生物的數(shù)量不同，獲得不同類型的微生物要按不同的稀釋倍數(shù)進行分離，A正確；土壤中細(xì)菌總量高于土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，所以測定土壤中細(xì)菌總量和能分解尿素的細(xì)菌數(shù)量，選用的稀釋范圍不同，B正確；稀釋涂布平板法進行計數(shù)時，得到了2個以上菌落數(shù)目在30～300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數(shù)，C錯誤；選擇培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯小于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些細(xì)菌菌落，D正確。
5．下列培養(yǎng)基能鑒定分解尿素細(xì)菌的是( )
A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、瓊脂、水、酚紅指示劑
B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、水、酚紅指示劑
C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂、水、酚紅指示劑
D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、水、酚紅指示劑
解析：選C A項的培養(yǎng)基中沒有碳源；B項的培養(yǎng)基中沒有瓊脂，為液體培養(yǎng)基，而鑒定分解尿素的細(xì)菌應(yīng)該用固體培養(yǎng)基；C項的培養(yǎng)基中有瓊脂，以尿素為唯一氮源，且含有碳源、無機鹽、水和酚紅指示劑，可以鑒定分解尿素的細(xì)菌；D項的培養(yǎng)基沒有尿素，不能鑒定分解尿素細(xì)菌。
6．下列是關(guān)于檢測土壤中細(xì)菌總數(shù)實驗操作的敘述，錯誤的是( )
A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板
B．取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1 mL，分別涂布于各組平板上
C．將實驗組和對照組平板倒置，37 ℃恒溫培養(yǎng)24～48 h
D．確定對照組無菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實驗組平板進行計數(shù)
解析：選D 對土壤微生物計數(shù)，使用的培養(yǎng)基應(yīng)該是標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基，并要經(jīng)過高壓蒸汽滅菌處理；涂布時要對樣本的溶液進行稀釋，一般選取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各取0.1 mL進行涂布，為了檢查平板培養(yǎng)基是否制備合格，同時把一培養(yǎng)基接種等量無菌水，作為空白對照；培養(yǎng)一段時間后，如果某一稀釋倍數(shù)的平板上菌落個數(shù)在30～300之間，即可把該組所有平板的菌落計數(shù)，然后取其平均值，計算出土壤細(xì)菌的總數(shù)。
7．下列關(guān)于土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)的敘述，正確的是( )
A．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素
B．篩選分解尿素的細(xì)菌時應(yīng)以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的營養(yǎng)物質(zhì)
C．統(tǒng)計樣品中的活菌數(shù)目一般用平板劃線法
D．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變藍，則表明篩選到了分解尿素的細(xì)菌
解析：選A 只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素；篩選分解尿素的細(xì)菌的實驗中，利用的是以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基；統(tǒng)計樣品中的活菌數(shù)目一般用稀釋涂布平板法；在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果pH升高，指示劑將變紅，就能初步判定該種細(xì)菌能夠分解尿素。
8．下列關(guān)于微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用的敘述，正確的是( )
A．配制培養(yǎng)基時應(yīng)先調(diào)pH后滅菌
B．在培養(yǎng)基中加入青霉素可抑制真菌而促進細(xì)菌生長
C．培養(yǎng)基中加入伊紅—亞甲藍試劑，長出的菌落為大腸桿菌菌落
D．向液體培養(yǎng)基中通入氧氣能促進破傷風(fēng)桿菌的生長
解析：選A 配制培養(yǎng)基時應(yīng)先調(diào)pH后滅菌，A正確；青霉素能夠干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，所以在培養(yǎng)基中加入青霉素可抑制細(xì)菌生長而促進真菌生長，B錯誤；伊紅美藍試劑屬于鑒別培養(yǎng)基，而不是選擇培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基中加入伊紅美藍試劑，長出的菌落不都是大腸桿菌菌落，其中黑色的菌落為大腸桿菌菌落，C錯誤；破傷風(fēng)桿菌為厭氧菌，因此向液體培養(yǎng)基中通入氧氣會抑制破傷風(fēng)桿菌的生長，D錯誤。
9．產(chǎn)脂肪酶細(xì)菌可用于含油廢水處理?？蒲腥藛T用射線照射從土壤中分離的菌株，反復(fù)篩選后獲得產(chǎn)酶能力提高的菌株，具體流程如圖。下列相關(guān)敘述正確的是( )
A．步驟①取土壤樣品溶于無菌水中制成菌懸液
B．步驟②中的固體平板可以是以脂肪作為唯一氮源的培養(yǎng)基
C．步驟②中射線照射可以引起細(xì)菌基因突變或染色體變異
D．步驟③透明圈越大的菌落，其脂肪酶的活性一定越高
解析：選A 土壤樣品中包含目的菌株，可取土壤樣品溶于無菌水中制成菌懸液，再通過平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固定培養(yǎng)基上進行篩選，A正確；組成脂肪的化學(xué)元素有C、H、O，要篩選可以產(chǎn)生脂肪酶的細(xì)菌，需要用以脂肪作為唯一碳源的固體培養(yǎng)基，B錯誤；細(xì)菌是原核生物，沒有成形的細(xì)胞核和染色體，不會發(fā)生染色體變異，C錯誤；透明圈大的菌落，酶活性不一定大，因此對初篩選的透明圈大的菌落要進行發(fā)酵培養(yǎng)，進一步對發(fā)酵液進行酶活性檢測，D錯誤。
10．為檢測大腸桿菌對某種抗生素的敏感性進行實驗，圖示培養(yǎng)兩天后所見結(jié)果(①②③為加有不同濃度抗生素的圓紙片)。下列相關(guān)敘述正確的是( )
A．接種用的方法是平板劃線法
B．實驗表明不同種的大腸桿菌對同一種抗生素敏感性不同
C．①②③周圍透明圈的大小差異可能與培養(yǎng)基的氮源不同有關(guān)
D．浸有無菌水的圓紙片在本實驗中作為空白對照
解析：選D 該接種方法是稀釋涂布平板法，A錯誤；據(jù)題意可知，培養(yǎng)基上抑菌圈的大小與該抗生素的濃度有關(guān)，根據(jù)單一變量原則，該實驗無法說明不同種大腸桿菌對同種抗生素的敏感性不同，B錯誤；大腸桿菌為異養(yǎng)生物，同一平板的培養(yǎng)基中的含氮量是相同的，C錯誤；圖中浸有無菌水的圓紙片在本實驗中作為空白對照，D正確。
11.生長圖形法是一種測定微生物營養(yǎng)需求的簡便方法。為探究某嗜熱菌所需生長因子的種類，研究小組將該菌的懸浮液在不含任何生長因子但含有其他必需營養(yǎng)物質(zhì)的平板培養(yǎng)基上涂布均勻，然后在平板上劃分?jǐn)?shù)區(qū)，將甲、乙、丙三種生長因子分別添加到不同區(qū)域，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列說法錯誤的是( )
A．倒平板后不接種，直接培養(yǎng)可判斷培養(yǎng)基是否被污染
B．倒平板后需要進行滅菌處理
C．圖示結(jié)果表明該菌需要生長因子乙和丙
D．生長圖形法還可用于某些菌種的篩選
解析：選B 可通過培養(yǎng)空白培養(yǎng)基判斷培養(yǎng)基是否被污染，A正確；應(yīng)該先將培養(yǎng)基滅菌后再倒平板，B錯誤；圖中菌落生活在乙、丙區(qū)域之間，說明需要生長因子乙和丙，C正確；不同菌種所需生長因子不同，可利用生長圖形法篩選某些菌種，D正確。
12．某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機化合物X。研究人員用化合物X、磷酸鹽、鎂鹽以及一些微量元素配制成培養(yǎng)基，成功篩選到能高效降解化合物X的細(xì)菌(目的菌)，實驗的主要步驟如圖所示。下列有關(guān)敘述錯誤的是( )
A．該培養(yǎng)基中化合物X可能既作碳源又作氮源
B．實驗培養(yǎng)過程中進行振蕩培養(yǎng)的主要目的是增大目的菌的濃度
C．實驗操作過程中，要注意防止外來雜菌污染
D．將固體培養(yǎng)基得到的目的菌重復(fù)多次上述實驗的目的是對菌種進行“純化”
解析：選B 磷酸鹽、鎂鹽以及一些微量元素中不含C、N元素，由此可推測該培養(yǎng)基中化合物X可能既作碳源又作氮源，A正確；實驗培養(yǎng)過程中進行振蕩培養(yǎng)的主要目的是增加培養(yǎng)液中的溶氧量，滿足微生物對氧氣的需求，B錯誤；篩選微生物的過程中應(yīng)注意防止外來雜菌污染，C正確；在以化合物X為唯一碳源的培養(yǎng)基中只有能降解化合物X的微生物才能生長繁殖，不能利用化合物X的微生物因缺乏碳源和氮源，無法生長繁殖，將固體培養(yǎng)基得到的目的菌重復(fù)多次上述實驗的目的是對菌種進行“純化”，D正確。
二、非選擇題
13．濾膜法是利用微孔濾膜截留液體樣本中的微生物，并直接將濾膜置于培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)的微生物計數(shù)方法。其大致流程為：先用濾膜過濾待測水樣，水樣中的細(xì)菌留在濾膜上，其他雜質(zhì)則濾出，再將濾膜轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基上培養(yǎng)并統(tǒng)計菌落數(shù)目。濾膜法常被用于飲料中微生物的檢測?；卮鹣铝袉栴}：
(1)用于培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基需通過__________法進行滅菌；若要用來檢測酸奶中乳酸桿菌的含量，培養(yǎng)基中還需要加入的特殊營養(yǎng)物質(zhì)是__________。為檢測制備的培養(yǎng)基是否受雜菌污染，可采取的方法是______________________________________________________。
(2)用于過濾的菌液樣本若濃度過大，要進行稀釋處理，其原因是____________________
______________________________________________________________。現(xiàn)有某待測飲料，實驗小組取10 mL飲料，稀釋103倍后取10 mL進行過濾處理，將濾膜置于培養(yǎng)基上培養(yǎng)，獲得了42個目的菌落，則原樣液中每毫升含有目的菌為________個。
(3)大多數(shù)飲料中含有抑菌物質(zhì)，能抑制細(xì)菌的繁殖，對于飲料中的細(xì)菌，用濾膜法測定的數(shù)量比直接用稀釋涂布平板法測定的數(shù)量偏______(填“大”或“小”)，其原因是_______________________________________________________________________________。
解析：(1)因培養(yǎng)基中含有水分，所以需通過高壓蒸汽滅菌法進行滅菌；若培養(yǎng)乳酸桿菌，培養(yǎng)基中還需要加入的特殊營養(yǎng)物質(zhì)是維生素。為檢測制備的培養(yǎng)基是否受雜菌污染，可采取的方法是將未接種微生物的培養(yǎng)基放在適宜條件下培養(yǎng)一段時間，觀察是否有菌落生長。(2)如果菌液濃度過大，會造成培養(yǎng)過程中多個菌落聚集在一起，導(dǎo)致統(tǒng)計結(jié)果偏小(或平板上長滿菌落，難以計數(shù))，所以用于過濾的菌液樣本若濃度過大，要進行稀釋處理。飲料稀釋103倍后取10 mL進行濾膜法培養(yǎng)，獲得了42個目的菌落，則原樣液中每毫升含有目的菌數(shù)為42×103÷10＝4 200(個)。(3)由題干可知“大多數(shù)飲料中含有抑菌物質(zhì)，能抑制細(xì)菌的繁殖”，濾膜法會將抑菌物質(zhì)過濾掉，而直接使用稀釋涂布平板法時抑菌物質(zhì)會抑制微生物繁殖，所以用濾膜法測定的數(shù)量比直接用稀釋涂布平板法測定的數(shù)量偏大。
答案：(1)高壓蒸汽滅菌 維生素 將未接種微生物的培養(yǎng)基放在適宜條件下培養(yǎng)一段時間，觀察是否有菌落生長 (2)菌液濃度過大，會造成培養(yǎng)過程中多個菌落聚集在一起，導(dǎo)致統(tǒng)計結(jié)果偏小(或平板上長滿菌落，難以計數(shù)) 4 200 (3)大 濾膜法會將抑菌物質(zhì)過濾掉，而直接用稀釋涂布平板法抑菌物質(zhì)會抑制微生物繁殖
14．研究深海獨特的生態(tài)環(huán)境對于開發(fā)海洋資源具有重要意義。近期在“科學(xué)號”考察船對中國南?？瓶贾?，中國科學(xué)家采集了某海域1 146米深海冷泉附近沉積物樣品，分離、鑒定得到新的微生物菌株并進一步研究了其生物學(xué)特性。
回答下列問題：
(1)研究者先制備富集培養(yǎng)基，然后采用______________法滅菌，冷卻后再接入沉積物樣品，28 ℃厭氧培養(yǎng)一段時間后，獲得了含擬桿菌的混合培養(yǎng)物，為了獲得純種培養(yǎng)物，除了稀釋涂布平板法，還可采用________________________法。據(jù)圖分析，擬桿菌新菌株在以________________為碳源時生長狀況最好。
(2)研究發(fā)現(xiàn)，將采集的樣品置于各種培養(yǎng)基中培養(yǎng)，仍有很多微生物不能被分離篩選出來，推測其原因可能是
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(答一點即可)
(3)藻類細(xì)胞解體后的難降解多糖物質(zhì)，通常會聚集形成碎屑沉降到深海底部。從生態(tài)系統(tǒng)組成成分的角度考慮，擬桿菌對深海生態(tài)系統(tǒng)碳循環(huán)的作用可能是________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(4)深海冷泉環(huán)境特殊，推測此環(huán)境下生存的擬桿菌所分泌的各種多糖降解酶，除具有酶的一般共性外，其特性可能還有__________________________________________________。
解析：(1)富集培養(yǎng)基通常采用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌。可以采用稀釋涂布平板法或平板劃線法對微生物進行分離純化。分析題圖可知，在以纖維素為碳源的培養(yǎng)基中細(xì)胞數(shù)最多，故擬桿菌新菌株在以纖維素為碳源時生長狀況最好。(2)深海冷泉中某些微生物只有利用深海冷泉中的特有物質(zhì)和在深海冷泉的特定環(huán)境中才能生存，故將采集的樣品置于各種培養(yǎng)基中培養(yǎng)，仍有很多微生物不能被分離篩選出來。(3)擬桿菌為異養(yǎng)生物，其作為深海生態(tài)系統(tǒng)中的分解者，能將沉降到深海底部的難降解多糖物質(zhì)分解為無機物，歸還到無機環(huán)境中，有利于碳循環(huán)的順利進行。(4)深海冷泉溫度較低，故生活在其中的擬桿菌所分泌的各種多糖降解酶應(yīng)具有耐低溫的特性，這樣才能高效降解多糖，以滿足擬桿菌正常的生命活動。
答案：(1)高壓蒸汽滅菌 平板劃線 纖維素 (2)某些微生物只有利用深海冷泉中的特有物質(zhì)才能生存(或某些微生物只有在深海冷泉的特定環(huán)境中才能存活) (3)擬桿菌作為分解者，將沉降到深海底部的難降解多糖物質(zhì)分解為無機物，歸還到無機環(huán)境中，有利于碳循環(huán)的順利進行 (4)耐低溫

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二 微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)

版本： 人教版 (2019)

年級： 選擇性必修3

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