第3章檢測(cè)卷 第Ⅰ卷　選擇題（共55分） 一、單項(xiàng)選擇題（每小題2分，共40分） 1．[2023·陜西咸陽(yáng)高二統(tǒng)考期中]下列關(guān)于基因工程的敘述中，不正確的是（　?。?A．一種限制酶一般只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列 B．基因工程依據(jù)的原理主要是基因突變 C．基因工程是在DNA上進(jìn)行的分子水平的設(shè)計(jì)施工 D．基因工程能夠定向地改變生物的性狀 2．[2023·河北保定高二統(tǒng)考期中]重組質(zhì)?？梢詳y帶目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞，則下列不一定能說(shuō)明目的基因成功導(dǎo)入受體細(xì)胞的是（　?。?A．大腸桿菌中檢測(cè)到人胰島素基因的mRNAB．水稻細(xì)胞中檢測(cè)到氨芐青霉素抗性基因 C．棉花細(xì)胞中檢測(cè)到抗棉鈴蟲基因D．鯉魚細(xì)胞中檢測(cè)到人的生長(zhǎng)激素 3．基于聚合酶制造的PCR儀實(shí)際上是一個(gè)溫控設(shè)備，能在變性溫度、復(fù)性溫度、延伸溫度之間很好地進(jìn)行切換，主要過(guò)程如圖所示。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（　?。? A．實(shí)施上述過(guò)程的前提是已知目的基因的一段核苷酸序列 B．圖中a、b、c過(guò)程控制的溫度由高到低依次是過(guò)程a、c、b C．耐高溫的DNA聚合酶沿著5′→3′的方向合成互補(bǔ)子鏈 D．c延伸過(guò)程中需要緩沖液、ATP和四種核糖核苷酸 4．基因工程與蛋白質(zhì)工程的區(qū)別是（　?。?A．基因工程需對(duì)基因進(jìn)行分子水平操作，蛋白質(zhì)工程不對(duì)基因進(jìn)行操作 B．基因工程合成的是天然存在的蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)工程合成的不一定是天然存在的蛋白質(zhì) C．基因工程是分子水平操作，蛋白質(zhì)工程是細(xì)胞水平（或性狀水平）操作 D．基因工程完全不同于蛋白質(zhì)工程 5．[2023·浙江杭州高二校考期中]從目標(biāo)生物提取分離DNA是基因工程操作的基礎(chǔ)。下列關(guān)于“DNA粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是（　?。?A．研磨前對(duì)植物材料進(jìn)行冷凍處理，可提高DNA獲得率 B．常溫條件下香蕉勻漿中有些酶會(huì)影響DNA的提取 C．DNA不溶于酒精，但能溶于2mol/L的NaCl溶液中 D．用藍(lán)色的二苯胺可對(duì)DNA進(jìn)行鑒定 6．下列技術(shù)依據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原理的是（　?。?①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因　②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA?、蹤z測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)?、芡ㄟ^(guò)觀察害蟲吃棉葉是否死亡判斷棉花是否被賦予了抗蟲特性 A．①②③④B．①②C．①②④D．①②③ 7．[2023·天津?qū)氎嬉恢行？糫用X酶切割DNA分子后，得到黏性末端①，用Y酶切割DNA分子后，得到黏性末端②，如下圖所示。以下說(shuō)法不正確的是（　?。? A．X與Y通常是不同的限制酶 B．限制酶與DNA水解酶破壞的化學(xué)鍵相同 C．具有①②的兩個(gè)DNA片段可連接成重組分子，重組后可以被X或Y切割 D．使用X和Y同時(shí)切割目的基因和載體，不可以防止目的基因反向連接 8．[2023·湖北荊門龍泉中學(xué)校聯(lián)考]下列關(guān)于DNA的粗提取和DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定的敘述，正確的是（　?。?A．利用DNA和蛋白質(zhì)在冷酒精中溶解性的差異可初步分離DNA B．在提取白色絲狀物時(shí)雙向攪拌比單向攪拌更有利于獲得結(jié)構(gòu)完整的DNA C．PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭、蒸餾水和移液器等在使用前都必須進(jìn)行高壓滅菌處理 D．PCR的產(chǎn)物一般通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳來(lái)鑒定，電泳時(shí)電泳緩沖液不能沒(méi)過(guò)凝膠 9．[2023·陜西漢中高二校聯(lián)考期中]科研人員通過(guò)PCR技術(shù)獲得肝細(xì)胞特異性啟動(dòng)子——白蛋白啟動(dòng)子，將該啟動(dòng)子與Cre重組酶基因結(jié)合構(gòu)建表達(dá)載體，培育出在肝細(xì)胞特異性表達(dá)Cre重組酶的轉(zhuǎn)基因小鼠。下列敘述正確的是（　　） A．將該表達(dá)載體導(dǎo)入肝細(xì)胞以獲得轉(zhuǎn)基因小鼠 B．利用PCR技術(shù)獲得白蛋白啟動(dòng)子需設(shè)計(jì)特異性的引物 C．構(gòu)建該表達(dá)載體需要限制酶和DNA聚合酶 D．通過(guò)PCR等技術(shù)檢測(cè)目的基因是否完成表達(dá) 10．某人利用如圖所示的表達(dá)載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組表達(dá)載體。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（　?。?　　　　 A．這三種重組表達(dá)載體中，不能在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因產(chǎn)物的是甲、丙 B．啟動(dòng)子是DNA片段，是RNA連接酶識(shí)別和結(jié)合的部位 C．基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建 D．復(fù)制原點(diǎn)可以讓重組表達(dá)載體擁有自主復(fù)制的能力，不會(huì)隨細(xì)胞分裂被稀釋而最終消失 11．[2023·黑龍江齊齊哈爾二模]基因工程和蛋白質(zhì)工程技術(shù)有很大的應(yīng)用價(jià)值，可用于醫(yī)藥及其他工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。下列關(guān)于基因工程和蛋白質(zhì)工程的敘述，正確的是（　?。?A．蛋白質(zhì)工程操作對(duì)象是蛋白質(zhì)，不需要以酶和載體為工具 B．目的基因的檢測(cè)與鑒定是培育轉(zhuǎn)基因生物的核心環(huán)節(jié) C．基因工程操作中所用質(zhì)粒都是來(lái)自于細(xì)菌細(xì)胞中天然的質(zhì)粒 D．PCR擴(kuò)增相關(guān)目的基因時(shí)，子鏈的合成方向是從5′端到3′端 12．[2023·遼寧錦州高二?？糫下列關(guān)于基因工程的敘述，錯(cuò)誤的是（　?。?A．起始密碼子和終止密碼子都不屬于基因表達(dá)載體的組成部分 B．限制性內(nèi)切核酸酶能識(shí)別特定的核苷酸序列，而DNA連接酶不能識(shí)別 C．人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原不具有生物活性 D．基因表達(dá)載體上的抗性基因有利于促進(jìn)目的基因在受體細(xì)胞中的表達(dá) 13．轉(zhuǎn)基因抗蟲植物含有Bt毒蛋白，對(duì)人體無(wú)毒，但是鱗翅目昆蟲幼蟲的腸道細(xì)胞含有Bt蛋白的受體，Bt蛋白與受體結(jié)合導(dǎo)致腸道壁穿孔，使幼蟲死亡。下列敘述錯(cuò)誤的是（　?。?A．促進(jìn)Bt蛋白的合成有助于提高植物的抗蟲效果 B．通過(guò)DNA分子雜交技術(shù)可以檢測(cè)Bt蛋白基因是否表達(dá) C．將Bt蛋白基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法可以使用花粉管通道法或農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 D．將植物材料和農(nóng)桿菌共同培養(yǎng)之前，需要對(duì)植物材料進(jìn)行消毒處理 14．如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列有關(guān)敘述正確的是（　　） A．一個(gè)基因表達(dá)載體的組成包括目的基因、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子等 B．?dāng)U增目的基因時(shí)，利用耐高溫的DNA連接酶從引物a和引物b起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成 C．接受人血清白蛋白基因的綿羊受體細(xì)胞是乳腺細(xì)胞 D．為了大量生產(chǎn)人血清白蛋白，還必須將含目的基因的植物受體細(xì)胞培養(yǎng)成完整植株 15．科學(xué)家以兩周大的整株玉米幼苗的cDNA為模板，設(shè)計(jì)全長(zhǎng)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后利用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)獲得了1個(gè)目的基因的片段，再將目的基因連接到pMD18－T載體，同時(shí)轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（　?。?A．cDNA是以mRNA為模板通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄的過(guò)程合成的 B．pMD18－T載體的化學(xué)本質(zhì)是DNA C.PCR技術(shù)需要解旋酶和DNA聚合酶 D．若以大腸桿菌作為受體細(xì)胞，需先用Ca2＋處理 16．2015年10月，我國(guó)科學(xué)家屠呦呦因發(fā)現(xiàn)青蒿素可以有效降低瘧疾患者的死亡率而獲得了諾貝爾生理學(xué)獎(jiǎng)。某課題組為得到青蒿素產(chǎn)量高的新品系，通過(guò)一定的技術(shù)，使青蒿素合成過(guò)程的某一關(guān)鍵酶基因fps在野生青蒿中得到了過(guò)量表達(dá)，其過(guò)程如圖所示。下列敘述正確的是（　?。? A．構(gòu)建重組質(zhì)粒過(guò)程中，目的基因需插入Ti質(zhì)粒的T－DNA上 B．基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止密碼子和標(biāo)記基因等 C．用熒光標(biāo)記的fps基因作為探針可以檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá) D．上圖中①為逆轉(zhuǎn)錄酶，②為限制酶，PCR過(guò)程中需要用到解旋酶、DNA聚合酶等 17．科學(xué)家利用PCR技術(shù)搭建了世界上第一個(gè)古DNA研究的超凈室，利用現(xiàn)代人的DNA序列設(shè)計(jì)并合成了一種類似磁鐵的“引子”，成功將極其微量的古人類DNA從土壤沉積物的多種生物的DNA中識(shí)別并分離出來(lái)，完成一種古人類——尼安德特人的全基因組測(cè)序。下列有關(guān)說(shuō)法正確的是（　　） A．設(shè)計(jì)“引子”的DNA序列信息只能來(lái)自現(xiàn)代人的核DNA B．尼安德特人的雙鏈DNA可直接與“引子”結(jié)合從而被識(shí)別 C．PCR檢測(cè)古人類DNA時(shí)需“引子”、解旋酶和耐高溫的DNA聚合酶 D．設(shè)計(jì)“引子”前不需要知道尼安德特人的DNA序列 18．[2023·遼寧鞍山高二統(tǒng)考]用DNA重組技術(shù)可以賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人類需要的生物產(chǎn)品。在此過(guò)程中需要使用多種工具和物質(zhì)。下列敘述正確的是（　　） A．E.coliDNA連接酶只能用來(lái)連接具有互補(bǔ)黏性末端的DNA片段 B．用于將目的基因轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞的常用載體質(zhì)粒只存在于原核細(xì)胞 C．構(gòu)建好的基因表達(dá)載體中必須在目的基因的下游包含啟動(dòng)子序列 D．用于PCR的引物是一小段能與模板鏈特異性結(jié)合的雙鏈DNA片段 19．轉(zhuǎn)座子是一段可移動(dòng)的DNA序列，可以從原位上單獨(dú)復(fù)制或斷裂下來(lái)，插入另一位點(diǎn)。轉(zhuǎn)座子可在真核細(xì)胞染色體內(nèi)部和染色體間轉(zhuǎn)移，在細(xì)菌的擬核DNA、質(zhì)?；蚴删w之間自行移動(dòng)。有的轉(zhuǎn)座子中含有抗生素抗性基因，可以很快地傳播到其他細(xì)菌細(xì)胞。下列推測(cè)不合理的是（　?。?A．轉(zhuǎn)座子不能造成基因重組 B．轉(zhuǎn)座子能獨(dú)立進(jìn)行DNA復(fù)制 C．轉(zhuǎn)座子可用于基因工程的研究 D．細(xì)菌的抗藥性可來(lái)自轉(zhuǎn)座子或者自身的基因突變 20．下列關(guān)于基因工程應(yīng)用的敘述錯(cuò)誤的是（　?。?A．在醫(yī)藥衛(wèi)生方面，運(yùn)用基因工程獲取重組人干擾素和抗凝血酶 B．在農(nóng)業(yè)上主要是培育高產(chǎn)、穩(wěn)定、品質(zhì)優(yōu)良和具有抗性的農(nóng)作物 C．在畜牧業(yè)上主要是培育體型巨大的動(dòng)物 D．在環(huán)境保護(hù)方面，可利用轉(zhuǎn)基因細(xì)菌降解有毒有害的化合物、處理工業(yè)廢水等 二、不定項(xiàng)選擇題（每小題3分，共15分） 21．轉(zhuǎn)基因抗蟲棉在世界范圍內(nèi)被廣泛種植。下列敘述錯(cuò)誤的是（　?。?A．我國(guó)科學(xué)家利用花粉管通道法將Bt基因?qū)朊藁?xì)胞，除此之外還可以利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 B．可利用PCR等技術(shù)來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因棉花中的抗蟲基因是否表達(dá) C．需將目的基因?qū)朊藁ǖ氖芫阎?，才能利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因棉花植株 D．利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因后，可采用瓊脂糖凝膠電泳來(lái)檢測(cè)PCR的產(chǎn)物 22．甜蛋白是一種高甜度的特殊蛋白質(zhì)，為了改善黃瓜的品質(zhì)，科學(xué)家采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將一種甜蛋白基因成功導(dǎo)入黃瓜細(xì)胞，得到了轉(zhuǎn)基因植株。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（　?。?A．利用PCR技術(shù)獲取甜蛋白基因的前提是掌握甜蛋白基因的全部核苷酸序列 B．基因表達(dá)載體的構(gòu)建是培育轉(zhuǎn)基因黃瓜的核心工作 C．用Ca2＋處理外植體有利于進(jìn)行農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化 D．可通過(guò)PCR等技術(shù)檢測(cè)該轉(zhuǎn)基因黃瓜內(nèi)是否合成了甜蛋白 23．[2023·山東青島第十九中學(xué)校考]第三代疫苗——DNA疫苗是指將編碼保護(hù)性抗原蛋白的基因（如圖甲）插入到適宜的質(zhì)粒（如圖乙）中得到的重組DNA分子，將其導(dǎo)入人體內(nèi)，在人體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的產(chǎn)物可直接誘導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答，且可持續(xù)一段時(shí)間。限制性內(nèi)切核酸酶的切點(diǎn)分別是BglⅡ、EcoRⅠ和Sau3AⅠ。下列分析錯(cuò)誤的是（　　） A．構(gòu)建DNA疫苗時(shí)，可用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和質(zhì)粒 B．圖乙中只用EcoRⅠ切割后的質(zhì)粒，含有1個(gè)游離的磷酸基團(tuán) C．用EcoRⅠ切割目的基因和質(zhì)粒，再用DNA連接酶連接，只產(chǎn)生1種連接產(chǎn)物 D．抗原基因在體內(nèi)表達(dá)時(shí)不需要解旋酶 24．[2023·遼寧遼陽(yáng)統(tǒng)考一模]凋亡誘導(dǎo)因子（AIF）位于線粒體膜間隙中，它既是對(duì)細(xì)胞凋亡起重要作用的蛋白質(zhì)，又具有氧化還原酶活性。有研究表明，AIF在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)量高于在正常胃細(xì)胞中的表達(dá)量。某醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室人員從胃癌患者的胃癌組織中提取AIF基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并進(jìn)行鑒定，相關(guān)過(guò)程如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（　　） 獲取胃癌組織中RNAeq \o(――→,\s\up7(逆轉(zhuǎn)錄))cDNAeq \o(――→,\s\up7(PCR))AIF基因―→鑒定 A.檢測(cè)AIF在胃細(xì)胞中的表達(dá)量，可能成為預(yù)防胃癌的手段 B．AIF引起的細(xì)胞凋亡是基因所決定的細(xì)胞死亡，不受環(huán)境條件的影響 C．圖中逆轉(zhuǎn)錄和PCR均可獲取DNA產(chǎn)物，兩個(gè)過(guò)程所需要的原料和酶是相同的 D．電泳鑒定AIF基因時(shí)，DNA分子的遷移速率與凝膠濃度和DNA分子的大小等有關(guān) 25．在基因工程中使用的載體有很多種類型，其中有一種穿梭載體，它不僅具有細(xì)菌質(zhì)粒的復(fù)制原點(diǎn)，還有真核細(xì)胞的自主復(fù)制序列，在細(xì)菌中主要用于克隆和擴(kuò)增目的基因，在酵母菌中主要用于基因表達(dá)分析。下列相關(guān)敘述正確的是（　?。?A．穿梭載體在細(xì)菌和酵母菌中都能夠復(fù)制 B．穿梭載體中通常插入抗生素合成基因，便于進(jìn)行目的基因的篩選 C．在細(xì)菌中進(jìn)行克隆利用了細(xì)菌生理結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、生長(zhǎng)繁殖快的優(yōu)點(diǎn) D．在酵母菌中的基因表達(dá)產(chǎn)物可被酵母菌中相應(yīng)的細(xì)胞器進(jìn)行修飾加工 第Ⅱ卷　非選擇題（共45分） 26．[2023·河北邢臺(tái)六校聯(lián)考]（9分）重疊延伸PCR技術(shù)是設(shè)計(jì)含突變點(diǎn)堿基的互補(bǔ)核苷酸片段的引物，在PCR過(guò)程中，互補(bǔ)的核苷酸片段形成重疊，重疊的部分互為模板，通過(guò)多次PCR擴(kuò)增，從而獲得突變基因的方法?？茖W(xué)家將枯草芽孢桿菌基因組上的甘油激酶編碼基因glpk的第270位氨基酸M突變?yōu)镮，構(gòu)建出了對(duì)甘油的利用水平大大提升的枯草芽孢桿菌，其原理如下圖。請(qǐng)回答下列問(wèn)題： （1）含突變位點(diǎn)堿基的互補(bǔ)核苷酸片段的引物是圖中的　　　　　　。通過(guò)PCR1獲得產(chǎn)物AB需要進(jìn)行　　　　次PCR擴(kuò)增。 （2）本實(shí)驗(yàn)獲得點(diǎn)突變的目的基因兩端為平末端，為便于構(gòu)建基因表達(dá)載體，需要將限制酶BamHⅠ和SalⅠ的識(shí)別序列分別引入誘變甘油激酶編碼基因的兩端，其操作思路是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 （3）獲取目的基因后，構(gòu)建質(zhì)粒載體，形成基因表達(dá)載體?；虮磉_(dá)載體上保證其能在宿主細(xì)胞中擴(kuò)增的結(jié)構(gòu)是　　　　　　　　，保證目的基因能正常轉(zhuǎn)錄的結(jié)構(gòu)是　　　　　　　　。 （4）對(duì)甘油激酶的改造屬于　　　　　工程的應(yīng)用，其第一步是　　　　　　　　　。 27．（10分）某一質(zhì)粒載體如圖所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活（Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Tetr表示四環(huán)素抗性基因）。有人將此質(zhì)粒載體用BamHⅠ酶切后，與用BamHⅠ酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌，結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化，有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種，分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌?；卮鹣铝袉?wèn)題： （1）質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　?。ù鸪鰞牲c(diǎn)即可）。而作為基因表達(dá)載體，除滿足上述基本條件外，還需具有啟動(dòng)子和終止子。 （2）如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在上述四種大腸桿菌細(xì)胞中，未被轉(zhuǎn)化的和僅含有環(huán)狀目的基因的細(xì)胞是不能區(qū)分的，其原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。并且　　　　　　　　和　　　　　　　　　　　　的細(xì)胞也是不能區(qū)分的，其原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。在上述篩選的基礎(chǔ)上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌的單菌落，還需使用含有　　　　的固體培養(yǎng)基，此時(shí)　　　　（填“能”或“不能”）生長(zhǎng)的為目的菌落。 （3）基因工程中，某些噬菌體經(jīng)改造后可以作為載體，其DNA復(fù)制所需的原料來(lái)自________________________________________________________________________。 28．（15分）基因工程是新品種花卉培育中的一種重要技術(shù)手段。研究發(fā)現(xiàn)普通矮牽牛花因缺乏藍(lán)色色素合成所需的轉(zhuǎn)座酶而不能開(kāi)藍(lán)色花，因此研究人員嘗試將從薔薇花瓣細(xì)胞中分離提取的轉(zhuǎn)座酶F35H基因轉(zhuǎn)入普通的矮牽牛中，以期獲得藍(lán)色矮牽牛新品種，該過(guò)程所用的質(zhì)粒與含轉(zhuǎn)座酶F35H基因的DNA片段上相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)分別如圖1、圖2所示。限制性內(nèi)切核酸酶BamHⅠ、Sau3AⅠ、HindⅢ識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為eq \o(GG,\s\up6(↓))ATCC、eq \o(G,\s\up6(↓　))ATC、eq \o(AA,\s\up6(↓))GCTT。 請(qǐng)回答下列問(wèn)題： （1）圖1質(zhì)粒中沒(méi)有顯示的結(jié)構(gòu)是　　　　，啟動(dòng)子的功能是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 （2）基因工程中除質(zhì)粒外，　　　　　　　　　　　　　　也可以作為載體。若用圖中質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座F35H基因構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，最好選用　　　　　　　　　　　兩種限制酶來(lái)切割質(zhì)粒和含目的基因的DNA片段，理由是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 （3）將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入土壤農(nóng)桿菌，最終成功導(dǎo)入藍(lán)色素基因的農(nóng)桿菌，在含氨芐青霉素培養(yǎng)基、含四環(huán)素培養(yǎng)基、同時(shí)含氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基上的生存狀況應(yīng)該是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 （4）檢測(cè)轉(zhuǎn)座酶F35H基因是否成功在普通矮牽牛細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，常采用的檢測(cè)技術(shù)是　　　　。 （5）通過(guò)基因工程，將轉(zhuǎn)座酶F35H基因?qū)肫胀ò珷颗Ｖ校@得藍(lán)色矮牽?；ㄐ缕贩N的育種原理是　　　　　　　　。相比傳統(tǒng)的花卉育種方法，利用基因工程育種的優(yōu)點(diǎn)是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（答出2點(diǎn)即可）。 29．（11分）動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)傳代比較困難，為長(zhǎng)期保存動(dòng)物的基因組，一般利用大腸桿菌構(gòu)建基因組文庫(kù)，具體流程如下圖所示?；卮鹣铝袉?wèn)題： （1）為保證載體和基因組DNA片段能夠連接，載體要先用　　　?。福┨幚?。將基因組DNA導(dǎo)入大腸桿菌菌群前，大腸桿菌需要提前用　　　　處理，使其處于感受態(tài)。 （2）研究者需要從基因組文庫(kù)中獲取動(dòng)物細(xì)胞的Y基因進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA時(shí)，需要在反應(yīng)體系中添加的有機(jī)物質(zhì)有　　　　　　　　　　　　　和4種脫氧核苷酸，該技術(shù)依據(jù)的生物學(xué)原理是　　　　　　　　。 （3）甲鏈為Y基因的轉(zhuǎn)錄模板鏈，乙鏈為甲鏈的互補(bǔ)鏈。轉(zhuǎn)化之后，為了判斷Y基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞，可以用　　　　　鏈片段作為探針；為判斷目的基因是否成功轉(zhuǎn)錄，可以用　　　　鏈片段作為探針。 第3章檢測(cè)卷 1．答案：B 解析：一種限制酶只能特異性識(shí)別一種特定的核苷酸序列，并在特定兩個(gè)核苷酸之間切割，A正確；基因工程又叫基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)，依據(jù)的原理是基因重組，B錯(cuò)誤；基因工程要對(duì)基因進(jìn)行切割和連接，屬于DNA分子水平的操作，C正確；基因工程將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，使之表現(xiàn)出目的性狀，能定向改變生物的性狀，培育出新品種，D正確。 2．答案：B 解析：大腸桿菌中檢測(cè)到人胰島素基因的mRNA，說(shuō)明目的基因已經(jīng)成功導(dǎo)入受體細(xì)胞并轉(zhuǎn)錄，能說(shuō)明目的基因成功導(dǎo)入受體細(xì)胞，A不符合題意；氨芐青霉素抗性基因?qū)儆跇?biāo)記基因，水稻細(xì)胞中檢測(cè)到氨芐青霉素抗性基因不一定能說(shuō)明目的基因成功導(dǎo)入受體細(xì)胞，B符合題意；抗棉鈴蟲基因?qū)儆谀康幕?，棉花?xì)胞是受體細(xì)胞，棉花細(xì)胞中檢測(cè)到抗棉鈴蟲基因，說(shuō)明目的基因成功導(dǎo)入受體細(xì)胞，C不符合題意；鯉魚細(xì)胞中檢測(cè)到人的生長(zhǎng)激素，即目的基因在受體細(xì)胞中翻譯出了蛋白質(zhì)，說(shuō)明目的基因已經(jīng)在受體細(xì)胞中完成了表達(dá)，D不符合題意。 3．答案：D 解析：實(shí)施上述過(guò)程(PCR)的前提是已知目的基因的一段核苷酸序列，并以此設(shè)計(jì)引物進(jìn)行擴(kuò)增，A正確；PCR的基本環(huán)節(jié)包括變性a、復(fù)性b和延伸c，其中高溫變性使DNA雙鏈解聚，溫度超過(guò)90℃；復(fù)性使氫鍵形成，溫度為50℃左右；延伸合成子代DNA時(shí)溫度為72℃左右，故圖中a、b、c過(guò)程控制的溫度由高到低依次是a、c、b，B正確；引物與模板的3′端結(jié)合，耐高溫的DNA聚合酶進(jìn)行DNA復(fù)制時(shí)會(huì)沿著子鏈的5′→3′方向延伸，C正確；PCR反應(yīng)的產(chǎn)物是DNA，因此原料是四種游離的脫氧核苷酸，不是核糖核苷酸，且該過(guò)程不需要額外添加ATP，D錯(cuò)誤。 4．答案：B 解析：基因工程和蛋白質(zhì)工程都需要對(duì)基因進(jìn)行分子水平操作，基因工程合成的是天然的蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)工程合成的不一定是天然存在的蛋白質(zhì)，A、C錯(cuò)誤，B正確；蛋白質(zhì)工程改造基因后還要通過(guò)基因工程實(shí)現(xiàn)，基因工程是蛋白質(zhì)工程的關(guān)鍵技術(shù)，故蛋白質(zhì)工程又被稱為第二代基因工程，D錯(cuò)誤。 5．答案：D 解析：由于冷凍后的細(xì)胞易破碎，釋放DNA，所以研磨前對(duì)植物材料進(jìn)行冷凍處理，可提高DNA獲得率，A正確；常溫條件下香蕉勻漿中有些酶可能會(huì)破壞DNA，故會(huì)影響DNA的提取，B正確；DNA不溶于95%的冷酒精，而可溶于2mol/L的NaCl溶液，利用該原理可實(shí)現(xiàn)DNA的粗提取，C正確；沸水浴條件下用二苯胺試劑對(duì)DNA進(jìn)行鑒定，可觀察到DNA被染成藍(lán)色，二苯胺本身并非藍(lán)色，D錯(cuò)誤。 6．答案：B 解析：檢測(cè)受體細(xì)胞中是否存在目的基因，采用DNA分子雜交技術(shù)，其原理是堿基互補(bǔ)配對(duì)，①符合題意；檢測(cè)受體細(xì)胞中目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，采用分子雜交技術(shù)，其原理是堿基互補(bǔ)配對(duì)，②符合題意；檢測(cè)受體細(xì)胞中目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)，采用抗原—抗體雜交技術(shù)，其原理不是堿基互補(bǔ)配對(duì)，③不符合題意；通過(guò)觀察害蟲吃棉葉是否死亡判斷棉花是否被賦予了抗蟲特性，屬于個(gè)體水平檢測(cè)，④不符合題意；B正確。 7．答案：C 解析：由圖可知，X與Y識(shí)別的核苷酸序列不同，因此X與Y是不同的限制酶，A正確；限制酶與DNA水解酶破壞的化學(xué)鍵相同，都是磷酸二酯鍵，B正確；具有①②的兩個(gè)DNA片段可連接成重組分子，核苷酸序列發(fā)生了改變，先前能識(shí)別的核苷酸序列發(fā)生了改變，所以重組后不可以被X或Y切割，C錯(cuò)誤；使用X和Y同時(shí)切割目的基因和載體可以防止自身環(huán)化，但不可以防止目的基因反向連接(因?yàn)閮煞N酶切割形成的黏性末端的堿基序列能互補(bǔ))，D正確。 8．答案：A 解析：利用DNA不溶于冷酒精而蛋白質(zhì)溶于冷酒精的特點(diǎn)，可將DNA和蛋白質(zhì)分開(kāi)，A正確；在提取白色絲狀物時(shí)用玻璃棒輕輕單向攪拌更有利于獲得結(jié)構(gòu)完整的DNA，B錯(cuò)誤；PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭、蒸餾水在使用前都必須進(jìn)行高壓滅菌處理，移液器不需要進(jìn)行高壓滅菌處理，C錯(cuò)誤；通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳來(lái)鑒定PCR的產(chǎn)物時(shí)，電泳緩沖液沒(méi)過(guò)凝膠1mm為宜，D錯(cuò)誤。 9．答案：B 解析：因?yàn)槭芫芽梢园l(fā)育成一個(gè)完整的個(gè)體，所以，通常將該表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠的受精卵以獲得轉(zhuǎn)基因小鼠，A錯(cuò)誤；因?yàn)镈NA聚合酶只能將游離的脫氧核苷酸連接在核苷酸鏈的3′端，所以在利用PCR技術(shù)獲得白蛋白啟動(dòng)子時(shí)，需要設(shè)計(jì)特異性的引物，讓引物結(jié)合DNA母鏈，提供3′端，DNA聚合酶才能將游離的脫氧核苷酸加在引物的3′端，使得子鏈從5′端向3′端延伸，B正確；構(gòu)建該表達(dá)載體需要限制酶和DNA連接酶，C錯(cuò)誤；通過(guò)PCR等技術(shù)可以檢測(cè)目的基因是否存在，要知道目的基因是否完成表達(dá)，可以用相應(yīng)抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交，檢測(cè)有沒(méi)有Cre重組酶，D錯(cuò)誤。 10．答案：B 解析：在基因表達(dá)載體中，啟動(dòng)子位于目的基因的首端，終止子應(yīng)位于目的基因的尾端，這樣的基因才能表達(dá)。圖中甲和丙均不符合，所以不能在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因產(chǎn)物，A正確；啟動(dòng)子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，B錯(cuò)誤；將載體與目的基因構(gòu)建基因表達(dá)載體的過(guò)程是基因工程的核心步驟，是成功的關(guān)鍵，C正確；復(fù)制原點(diǎn)是DNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，可以讓重組表達(dá)載體擁有自主復(fù)制的能力，不會(huì)隨細(xì)胞分裂被稀釋而最終消失，D正確。 11．答案：D 解析：蛋白質(zhì)工程操作對(duì)象是基因，需要以酶和載體為工具，A錯(cuò)誤；基因表達(dá)載體的構(gòu)建是培育轉(zhuǎn)基因生物過(guò)程中的核心環(huán)節(jié)，B錯(cuò)誤；基因工程操作中所用質(zhì)粒是改造后的質(zhì)粒，C錯(cuò)誤；擴(kuò)增目的基因時(shí)，合成DNA的方向是從子鏈的5′端到3′端，D正確。 12．答案：D 解析：起始密碼子和終止密碼子位于mRNA上，都不屬于基因表達(dá)載體的組成部分，啟動(dòng)子和終止子才屬于基因表達(dá)載體的組成部分，A正確；限制性內(nèi)切核酸酶能識(shí)別DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開(kāi)，DNA連接酶的作用部位是磷酸二酯鍵，是恢復(fù)被限制性內(nèi)切核酸酶切開(kāi)的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵，B正確；胰島素原只是一段多肽，沒(méi)有任何生物學(xué)活性和功能。這段多肽必須經(jīng)過(guò)加工(如切除中間的一段等)才能形成成熟的胰島素，這些加工是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體中進(jìn)行的。但是大腸桿菌是原核細(xì)胞，缺乏這些細(xì)胞器，所以不能加工成有活性的胰島素，只能以無(wú)活性的胰島素原的形式存在，C正確；基因表達(dá)載體上的抗性基因有利于重組DNA分子的篩選，D錯(cuò)誤。 13．答案：B 解析：Bt蛋白與受體結(jié)合導(dǎo)致腸道壁穿孔，使幼蟲死亡，因此促進(jìn)Bt蛋白的合成有助于提高植物的抗蟲效果，A正確；可通過(guò)DNA分子雜交技術(shù)檢測(cè)Bt蛋白基因是否插入受體細(xì)胞染色體DNA上，而檢測(cè)目的基因是否表達(dá)應(yīng)該采用抗原—抗體雜交技術(shù)，B錯(cuò)誤；將Bt蛋白基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法可使用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法或花粉管通道法，C正確；將植物材料和農(nóng)桿菌共同培養(yǎng)之前，植物材料需要消毒處理，D正確。 14．答案：A 解析：基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等，A正確；若利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，利用耐高溫的DNA聚合酶從引物a和引物b的3′端進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成，B錯(cuò)誤；接受人血清白蛋白基因的綿羊受體細(xì)胞是受精卵，C錯(cuò)誤；為了大量生產(chǎn)人血清白蛋白，可從愈傷組織獲得，無(wú)需培養(yǎng)為完整植株，D錯(cuò)誤。 15．答案：C 解析：以mRNA為模板合成cDNA的過(guò)程，屬于逆轉(zhuǎn)錄，需要逆轉(zhuǎn)錄酶，A正確；pMD18－T載體一般是環(huán)狀質(zhì)粒分子，其化學(xué)本質(zhì)是DNA，B正確；PCR技術(shù)需要耐高溫的DNA聚合酶，不需要解旋酶，在高溫下DNA分子可自動(dòng)解開(kāi)雙螺旋，C錯(cuò)誤；大腸桿菌作為受體細(xì)胞，通常先用Ca2＋處理，使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中的DNA分子的生理狀態(tài)，再將重組的基因表達(dá)載體導(dǎo)入其中，D正確。 16．答案：A 解析：Ti質(zhì)粒的T－DNA可以轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞的染色體上，因此目的基因需插入Ti質(zhì)粒的T－DNA上，A正確；基因表達(dá)載體包括的是終止子，不是終止密碼子，B錯(cuò)誤；檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá)一般選擇抗原—抗體雜交法，而用fps基因作為探針檢測(cè)的是目的基因是否插入Ti質(zhì)粒的T－DNA中，C錯(cuò)誤；PCR過(guò)程中需要用到耐高溫的DNA聚合酶，不需要解旋酶，D錯(cuò)誤。 17．答案：D 解析：由于線粒體中也含有DNA，因此設(shè)計(jì)“引子”的DNA序列信息還可以來(lái)自線粒體DNA，A錯(cuò)誤；土壤沉積物中的古人類雙鏈DNA需要經(jīng)過(guò)提取，且在體外經(jīng)過(guò)加熱解聚后，才能與“引子”結(jié)合，而不能直接與引子結(jié)合，B錯(cuò)誤；PCR擴(kuò)增過(guò)程需使用“引子”、耐高溫DNA聚合酶，但不需要使用解旋酶，該技術(shù)是通過(guò)高溫使DNA雙鏈打開(kāi)的，C錯(cuò)誤；根據(jù)題干信息“利用現(xiàn)代人的DNA序列設(shè)計(jì)并合成了引子”，說(shuō)明設(shè)計(jì)“引子”前不需要知道古人類的DNA序列，D正確。 18．答案：A 解析：DNA連接酶根據(jù)功能可以分為E.coliDNA連接酶和T4DNA連接酶，E.coliDNA連接酶只能用來(lái)連接具有互補(bǔ)黏性末端的DNA片段，A正確；質(zhì)粒主要存在于細(xì)菌、酵母菌等生物體內(nèi)，酵母菌屬于真核生物，B錯(cuò)誤；構(gòu)建好的基因表達(dá)載體中必須在目的基因的上游包含啟動(dòng)子序列，便于啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄，C錯(cuò)誤；用于PCR的引物是一小段能與模板鏈特異性結(jié)合的單鏈DNA片段，D錯(cuò)誤。 19．答案：A 解析：據(jù)題意可知，“轉(zhuǎn)座子可在真核細(xì)胞染色體內(nèi)部和染色體間轉(zhuǎn)移”，說(shuō)明轉(zhuǎn)座子可造成染色體變異或基因重組，A錯(cuò)誤；“轉(zhuǎn)座子是一段可移動(dòng)的DNA序列，這段DNA序列可以從原位上單獨(dú)復(fù)制或斷裂下來(lái)”，說(shuō)明轉(zhuǎn)座子可以獨(dú)立進(jìn)行DNA復(fù)制，B正確；“轉(zhuǎn)座子可在細(xì)菌的擬核DNA、質(zhì)?；蚴删w之間自行移動(dòng)”，質(zhì)?；蚴删w可作為基因工程中的載體，因此轉(zhuǎn)座子可用于基因工程的研究，C正確；“有的轉(zhuǎn)座子中含有抗生素抗性基因，可以很快地傳播到其他細(xì)菌細(xì)胞”，說(shuō)明細(xì)菌的抗藥性可來(lái)自轉(zhuǎn)座子或者自身的基因突變，D正確。 20．答案：C 解析：在醫(yī)藥衛(wèi)生方面，運(yùn)用基因工程主要用于生產(chǎn)藥物，如獲取重組人干擾素和抗凝血酶，A正確；基因工程在農(nóng)業(yè)上主要用于培育高產(chǎn)、穩(wěn)定、品質(zhì)優(yōu)良和具有抗逆性的農(nóng)作物，B正確；基因工程技術(shù)在畜牧業(yè)上的應(yīng)用主要是能產(chǎn)生人們所需要的各種優(yōu)良品質(zhì)動(dòng)物，如具有抗病能力、高產(chǎn)仔率、高產(chǎn)奶率和高質(zhì)量皮毛等品質(zhì)的動(dòng)物，而不是要求動(dòng)物的體型巨大，C錯(cuò)誤；可利用轉(zhuǎn)基因細(xì)菌降解有毒有害的化合物，處理工業(yè)廢水等，保護(hù)環(huán)境，D正確。 21．答案：BC 解析：將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和花粉管通道法。我國(guó)科學(xué)家利用花粉管通道法將Bt基因?qū)朊藁?xì)胞，除此之外還可以利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，A正確；基因表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯，檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA用PCR技術(shù)，是否翻譯成蛋白質(zhì)用抗原—抗體雜交技術(shù)，B錯(cuò)誤；植物細(xì)胞全能性很容易表達(dá)，因此目的基因?qū)胫参矬w內(nèi)，導(dǎo)入到體細(xì)胞就可以，C錯(cuò)誤；瓊脂糖凝膠電泳是常用的用于分離、鑒定DNA、RNA的方法，因此利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因后，可采用瓊脂糖凝膠電泳來(lái)檢測(cè)PCR的產(chǎn)物，D正確。 22．答案：ACD 解析：PCR獲取目的基因可以不用知道目的基因的全部核苷酸序列，A錯(cuò)誤；基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心工作，B正確；農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞不需要用Ca2＋處理外植體，C錯(cuò)誤；用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因黃瓜內(nèi)是否合成了甜蛋白，D錯(cuò)誤。 23．答案：BC 解析：如果用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因，目的基因兩端將形成不同的黏性末端，同樣用BglⅡ和Sau3AⅠ切割質(zhì)粒也形成這兩種相同的黏性末端，因此它們可構(gòu)成重組DNA，A正確；質(zhì)粒為環(huán)狀DNA，其上只含有一個(gè)EcoRⅠ的切點(diǎn)，因此用EcoRⅠ切割后，該環(huán)狀DNA分子變?yōu)榫€性雙鏈DNA分子，因每條鏈上含有一個(gè)游離的磷酸基團(tuán)，因此切割后含有兩個(gè)游離的磷酸基團(tuán)，B錯(cuò)誤；從圖甲看出，用EcoRⅠ切割目的基因后兩端各有一切口，與圖乙中EcoRⅠ切口對(duì)接時(shí)，可有兩種可能，即可產(chǎn)生兩種重組DNA，C錯(cuò)誤；基因表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯，轉(zhuǎn)錄時(shí)不需要解旋酶，在RNA聚合酶的作用下，DNA即可解旋，D正確。 24．答案：BC 解析：根據(jù)題干信息，AIF在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)量高于在正常胃細(xì)胞中的表達(dá)量，因此檢測(cè)AIF在胃細(xì)胞中的表達(dá)量，可能成為預(yù)防胃癌的手段，A正確；AIF引起的細(xì)胞凋亡是基因所決定的細(xì)胞死亡，受環(huán)境條件的影響，B錯(cuò)誤；逆轉(zhuǎn)錄和PCR均可獲取DNA產(chǎn)物，兩個(gè)過(guò)程所需要的原料均是脫氧核苷酸，但逆轉(zhuǎn)錄需要逆轉(zhuǎn)錄酶，而PCR需要耐高溫的DNA聚合酶，C錯(cuò)誤；電泳鑒定AIF基因時(shí)，DNA分子的遷移速率與凝膠濃度和DNA分子的大小等有關(guān)，分子越大，遷移速率越慢，D正確。 25．答案：ACD 解析：根據(jù)題意可知，穿梭載體不僅具有細(xì)菌質(zhì)粒的復(fù)制原點(diǎn)，還有真核細(xì)胞的自主復(fù)制序列，因此穿梭載體在細(xì)菌和酵母菌中都能夠復(fù)制，A正確；穿梭載體中通常插入抗生素抗性基因，作為標(biāo)記基因便于進(jìn)行目的基因的篩選，B錯(cuò)誤；細(xì)菌作為原核細(xì)胞，細(xì)胞結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，繁殖速度快，因此在細(xì)菌中進(jìn)行克隆和擴(kuò)增目的基因時(shí)，利用了細(xì)菌生理結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、生長(zhǎng)繁殖快的優(yōu)點(diǎn)，C正確；酵母菌屬于真核生物，具有多種細(xì)胞器，故在酵母菌中的基因表達(dá)產(chǎn)物可被酵母菌中相應(yīng)的細(xì)胞器進(jìn)行修飾加工，如分泌蛋白可以被內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體進(jìn)行加工，D正確。 26．答案：(1)b和c　3(三) (2)將帶有BamHⅠ和SalⅠ的識(shí)別序列的DNA片段用限制酶切出平末端，再使用T4DNA連接酶將其與突變產(chǎn)物的兩端相連接 (3)復(fù)制原點(diǎn)　啟動(dòng)子和終止子 (4)蛋白質(zhì)　預(yù)期蛋白質(zhì)的功能 解析：(1)根據(jù)題圖可知，含突變位點(diǎn)堿基的互補(bǔ)核苷酸片段的引物是圖中的b和c；PCR過(guò)程是核苷酸鏈從5′端向3′端的延伸過(guò)程，從目標(biāo)DNA鏈中PCR出產(chǎn)物AB需要進(jìn)行3次PCR循環(huán)(第一次循環(huán)擴(kuò)增出來(lái)的新片段很長(zhǎng)很長(zhǎng)；第二次循環(huán)以新的長(zhǎng)片段為模板進(jìn)行，但新片段的一端是引物開(kāi)頭的，所以第二個(gè)循環(huán)得到的片段就是我們需要的長(zhǎng)度，但只是一條鏈，所以還不能分離出目的基因；第三次循環(huán)，當(dāng)以第二次循環(huán)得到的新片段為模板時(shí)，因?yàn)檫@個(gè)片段的長(zhǎng)度就是需要擴(kuò)增的長(zhǎng)度，當(dāng)?shù)谌窝h(huán)完成時(shí)，這個(gè)片段是需要的長(zhǎng)度，且是雙鏈DNA，這就得到了需要的目的基因了)。(2)將帶有BamHⅠ和SalⅠ的識(shí)別序列的DNA片段用限制酶切出平末端，再使用T4DNA連接酶將其與突變產(chǎn)物的兩端相連接，可將限制酶BamHⅠ和SalⅠ的識(shí)別序列分別引入誘變甘油激酶編碼基因的兩端。(3)獲取目的基因后，可將其與質(zhì)粒重組。重組質(zhì)粒上保證其能在宿主細(xì)胞中擴(kuò)增的結(jié)構(gòu)是復(fù)制原點(diǎn)，保證目的基因能正常轉(zhuǎn)錄的結(jié)構(gòu)是啟動(dòng)子(RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA)和終止子(位于基因的下游，也是一段特殊的DNA片段，功能是終止mRNA的轉(zhuǎn)錄 )。(4)蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過(guò)改造或合成基因，來(lái)改造現(xiàn)有蛋白質(zhì)，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類生產(chǎn)和生活的需求。結(jié)合題意可知對(duì)甘油激酶的改造屬于蛋白質(zhì)工程的應(yīng)用，其第一步是預(yù)期蛋白質(zhì)的功能。 27．答案：(1)能夠自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、具有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn) (2)二者均不含氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上都不能生長(zhǎng)　含有質(zhì)粒載體　含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒(或答含有重組質(zhì)粒)　二者都含氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)　四環(huán)素　不能 (3)受體細(xì)胞 解析：(1)質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有具有標(biāo)記基因、具有一個(gè)或多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)、能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。而作為基因表達(dá)載體，除滿足上述基本條件外，還需具有啟動(dòng)子和終止子。(2)由于未被轉(zhuǎn)化的和僅含有環(huán)狀目的基因的大腸桿菌中不含有氨芐青霉素抗性基因，因此如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，未被轉(zhuǎn)化的和僅含有環(huán)狀目的基因的大腸桿菌均不能存活，因此兩者是不能區(qū)分的；含有質(zhì)粒的大腸桿菌和含重組質(zhì)粒的大腸桿菌的細(xì)胞，由于均含有氨芐青霉素抗性基因，在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上都能生長(zhǎng)，因此兩者也是不能區(qū)分的。在上述篩選的基礎(chǔ)上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌的單菌落，還需使用含有四環(huán)素的固體培養(yǎng)基，即含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌在其中不能生長(zhǎng)，而含有普通質(zhì)粒的大腸桿菌能生長(zhǎng)。(3)噬菌體屬于病毒，病毒沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，其DNA復(fù)制所需的原料來(lái)自于受體細(xì)胞。 28．答案：(1)復(fù)制原點(diǎn)　啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄，是RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合的部位 (2)噬菌體和動(dòng)植物病毒　HindⅢ、Sau3AⅠ　防止目的基因和質(zhì)粒的任意連接，并保留了一種標(biāo)記基因(氨芐青霉素抗性基因) (3)能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存，但是不能在含四環(huán)素培養(yǎng)基以及同時(shí)含氨芐青霉素、四環(huán)素的培養(yǎng)基上生存 (4)PCR (5)基因重組　能按照人們的意愿定向改造生物的性狀，能打破不同物種間的生殖隔離 解析：(1)基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體上包括：目的基因、啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)和標(biāo)記基因等，根據(jù)圖1所示，質(zhì)粒中含有目的基因、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子，沒(méi)有標(biāo)注出來(lái)的結(jié)構(gòu)是復(fù)制原點(diǎn)。啟動(dòng)子的作用是啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄，是RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合的部位。(2)基因工程中的載體包括質(zhì)粒、噬菌體和動(dòng)植物病毒。若選用BamHⅠ限制酶，會(huì)將兩種標(biāo)記基因都破壞。選用HindⅢ和Sau3AⅠ限制酶，既避免了目的基因和質(zhì)粒的任意連接，又保留了一種標(biāo)記基因(氨芐青霉素抗性基因)。(3)構(gòu)建好的重組質(zhì)粒上，含有氨芐青霉素抗性基因，但四環(huán)素抗性基因受損，因此能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，但不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。(4)目的基因是否成功在宿主細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，可采用PCR等技術(shù)檢測(cè)。(5)基因工程育種的原理是基因重組?；蚬こ痰膬?yōu)點(diǎn)主要有兩點(diǎn)：能按照人們的意愿定向改造生物的性狀、能打破不同物種間的生殖隔離。 29．答案：(1)EcoRⅠ　Ca2＋ (2)引物、模板DNA、TaqDNA聚合酶　DNA半保留復(fù)制 (3)標(biāo)記的Y基因的甲(或乙)　標(biāo)記的Y基因的甲 解析：(1)EcoRⅠ為限制酶，用于切割目的基因和載體。將基因組DNA導(dǎo)入大腸桿菌菌群前，用Ca2＋處理大腸桿菌使其處于感受態(tài)。(2)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA時(shí)，需要在反應(yīng)體系中添加的有機(jī)物質(zhì)有引物、模板DNA、TaqDNA聚合酶和4種脫氧核苷酸，該技術(shù)依據(jù)的生物學(xué)原理是DNA半保留復(fù)制。(3)探針檢測(cè)基因的有無(wú)或是否轉(zhuǎn)錄的原理是堿基互補(bǔ)配對(duì)。判斷Y基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞，用甲或乙鏈作為探針都可以檢測(cè)Y基因的有無(wú)。甲鏈作為模板鏈，轉(zhuǎn)錄的mRNA序列與甲鏈互補(bǔ)，與乙鏈相同，若用探針檢測(cè)有無(wú)mRNA需要與mRNA配對(duì)，則部分序列要與甲鏈相同，因此用標(biāo)記的Y基因的甲鏈片段作為探針。

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