一、重組DNA技術(shù)的基本工具
1．下列有關(guān)重組DNA技術(shù)的基本工具的敘述，正確的是（ ）
A．限制酶能夠識(shí)別RNA分子的特定核苷酸序列
B．?dāng)y帶外源DNA片段的質(zhì)粒可在受體細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制
C．DNA連接酶不能連接雙鏈DNA片段的平末端
D．DNA連接酶能連接DNA分子雙鏈堿基對(duì)之間的氫鍵
二、DNA粗提取與鑒定
2．關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ）
A．過(guò)濾液沉淀過(guò)程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解
B．離心研磨液是為了加速DNA的沉淀
C．在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色
D．粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)
三、基因工程的基本操作程序
3．CRISPR/Cas9是一種高效的基因編輯技術(shù)，Cas9基因表達(dá)的Cas9蛋白像一把“分子剪刀”，在單鏈向?qū)NA（SgRNA）引導(dǎo)下，切割DNA雙鏈以敲除目標(biāo)基因或插入新的基因。CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的工作原理如圖所示，下列分析正確的是（ ）
A．構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，SgRNA編碼序列需要插入到質(zhì)粒的啟動(dòng)子上游
B．SgRNA和Cas9蛋白形成復(fù)合體后，其功能類(lèi)似于DNA聚合酶
C．根據(jù)目標(biāo)DNA設(shè)計(jì)相應(yīng)的SgRNA，可實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)DNA的定點(diǎn)切割
D．CRISPR/Cas9識(shí)別目標(biāo)DNA序列主要與Cas9蛋白的特異性相關(guān)
四、DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定
4．PCR技術(shù)可用于遺傳多樣性的研究。下圖是對(duì)兩個(gè)跳蟲(chóng)（A和B）DNA分析的實(shí)驗(yàn)過(guò)程，有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．蛋白酶可以分解組織中的蛋白質(zhì)，在提取DNA時(shí)加入蛋白酶有助于釋放出DNA
B．Taq酶能夠耐高溫，高溫下不會(huì)變性，常在PCR中用于DNA鏈的合成
C．將已知長(zhǎng)度的DNA片段裝到凝膠上作參照，可用于估測(cè)樣本DNA片段的大小
D．陰性對(duì)照是已知DNA模板及PCR擴(kuò)增過(guò)程所需的物質(zhì)，以監(jiān)測(cè)試劑是否污染
五、基因工程的應(yīng)用
5．1965年9月，我國(guó)科學(xué)家首次成功合成了結(jié)晶牛胰島素，由此開(kāi)辟了人工合成蛋白質(zhì)的新時(shí)代。從生物組織中直接提取到化學(xué)合成再到利用基因工程菌生產(chǎn)胰島素，生命科學(xué)的發(fā)展不斷造福人類(lèi)社會(huì)。下列有關(guān)胰島素的推測(cè)不合理的是（ ）
A．可以利用放射性同位素標(biāo)記法來(lái)研究胰島素的合成和運(yùn)輸過(guò)程
B．人體細(xì)胞合成胰島素的原料來(lái)源于自身合成和其生活的內(nèi)環(huán)境
C．治療糖尿病的胰島素要注意低溫保存，不可直接口服
D．選擇大腸桿菌作工程菌產(chǎn)生的胰島素與天然胰島素的結(jié)構(gòu)相同
六、蛋白質(zhì)工程
6．水蛭是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥材，主要藥理成分水蛭素是具有抗凝血作用的蛋白質(zhì)。通過(guò)蛋白質(zhì)工程操作用賴(lài)氨酸替代水蛭素第47位的天冬酰胺，可提高其抗凝血活性，相關(guān)流程如下圖，據(jù)圖分析，下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）

A．上述研究中目前直接的操作對(duì)象是水蛭素基因
B．蛋白質(zhì)工程進(jìn)行中難度最大的操作是改造水蛭素基因
C．指導(dǎo)c形成的新水蛭素基因的堿基序列可能不同
D．改造后的水蛭素需要與天然水蛭素進(jìn)行抗凝血活性比較
七、生物技術(shù)的安全性與倫理問(wèn)題
7．轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品是指利用基因工程技術(shù)獲得的生物制品，其安全性問(wèn)題一直是大眾關(guān)注和爭(zhēng)論的熱點(diǎn)。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．通過(guò)轉(zhuǎn)基因育種可增加或消除原有生物品種的某些性狀
B．轉(zhuǎn)基因食品風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估時(shí)還需考慮標(biāo)記基因的安全性問(wèn)題
C．嚴(yán)格選擇種植區(qū)域可減少轉(zhuǎn)基因作物發(fā)生外源基因擴(kuò)散的可能性
D．轉(zhuǎn)基因作物的長(zhǎng)期、大規(guī)模種植不利于侵染力更強(qiáng)的害蟲(chóng)的出現(xiàn)
專(zhuān)題18 基因工程——回歸課本——23版高考生物復(fù)習(xí)
專(zhuān)題18 基因工程
一、重組DNA技術(shù)的基本工具
1．下列有關(guān)重組DNA技術(shù)的基本工具的敘述，正確的是（ ）
A．限制酶能夠識(shí)別RNA分子的特定核苷酸序列
B．?dāng)y帶外源DNA片段的質(zhì)?？稍谑荏w細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制
C．DNA連接酶不能連接雙鏈DNA片段的平末端
D．DNA連接酶能連接DNA分子雙鏈堿基對(duì)之間的氫鍵
二、DNA粗提取與鑒定
2．關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ）
A．過(guò)濾液沉淀過(guò)程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解
B．離心研磨液是為了加速DNA的沉淀
C．在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色
D．粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)
三、基因工程的基本操作程序
3．CRISPR/Cas9是一種高效的基因編輯技術(shù)，Cas9基因表達(dá)的Cas9蛋白像一把“分子剪刀”，在單鏈向?qū)NA（SgRNA）引導(dǎo)下，切割DNA雙鏈以敲除目標(biāo)基因或插入新的基因。CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的工作原理如圖所示，下列分析正確的是（ ）
A．構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，SgRNA編碼序列需要插入到質(zhì)粒的啟動(dòng)子上游
B．SgRNA和Cas9蛋白形成復(fù)合體后，其功能類(lèi)似于DNA聚合酶
C．根據(jù)目標(biāo)DNA設(shè)計(jì)相應(yīng)的SgRNA，可實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)DNA的定點(diǎn)切割
D．CRISPR/Cas9識(shí)別目標(biāo)DNA序列主要與Cas9蛋白的特異性相關(guān)
四、DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定
4．PCR技術(shù)可用于遺傳多樣性的研究。下圖是對(duì)兩個(gè)跳蟲(chóng)（A和B）DNA分析的實(shí)驗(yàn)過(guò)程，有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．蛋白酶可以分解組織中的蛋白質(zhì)，在提取DNA時(shí)加入蛋白酶有助于釋放出DNA
B．Taq酶能夠耐高溫，高溫下不會(huì)變性，常在PCR中用于DNA鏈的合成
C．將已知長(zhǎng)度的DNA片段裝到凝膠上作參照，可用于估測(cè)樣本DNA片段的大小
D．陰性對(duì)照是已知DNA模板及PCR擴(kuò)增過(guò)程所需的物質(zhì)，以監(jiān)測(cè)試劑是否污染
五、基因工程的應(yīng)用
5．1965年9月，我國(guó)科學(xué)家首次成功合成了結(jié)晶牛胰島素，由此開(kāi)辟了人工合成蛋白質(zhì)的新時(shí)代。從生物組織中直接提取到化學(xué)合成再到利用基因工程菌生產(chǎn)胰島素，生命科學(xué)的發(fā)展不斷造福人類(lèi)社會(huì)。下列有關(guān)胰島素的推測(cè)不合理的是（ ）
A．可以利用放射性同位素標(biāo)記法來(lái)研究胰島素的合成和運(yùn)輸過(guò)程
B．人體細(xì)胞合成胰島素的原料來(lái)源于自身合成和其生活的內(nèi)環(huán)境
C．治療糖尿病的胰島素要注意低溫保存，不可直接口服
D．選擇大腸桿菌作工程菌產(chǎn)生的胰島素與天然胰島素的結(jié)構(gòu)相同
六、蛋白質(zhì)工程
6．水蛭是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥材，主要藥理成分水蛭素是具有抗凝血作用的蛋白質(zhì)。通過(guò)蛋白質(zhì)工程操作用賴(lài)氨酸替代水蛭素第47位的天冬酰胺，可提高其抗凝血活性，相關(guān)流程如下圖，據(jù)圖分析，下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）

A．上述研究中目前直接的操作對(duì)象是水蛭素基因
B．蛋白質(zhì)工程進(jìn)行中難度最大的操作是改造水蛭素基因
C．指導(dǎo)c形成的新水蛭素基因的堿基序列可能不同
D．改造后的水蛭素需要與天然水蛭素進(jìn)行抗凝血活性比較
七、生物技術(shù)的安全性與倫理問(wèn)題
7．轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品是指利用基因工程技術(shù)獲得的生物制品，其安全性問(wèn)題一直是大眾關(guān)注和爭(zhēng)論的熱點(diǎn)。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．通過(guò)轉(zhuǎn)基因育種可增加或消除原有生物品種的某些性狀
B．轉(zhuǎn)基因食品風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估時(shí)還需考慮標(biāo)記基因的安全性問(wèn)題
C．嚴(yán)格選擇種植區(qū)域可減少轉(zhuǎn)基因作物發(fā)生外源基因擴(kuò)散的可能性
D．轉(zhuǎn)基因作物的長(zhǎng)期、大規(guī)模種植不利于侵染力更強(qiáng)的害蟲(chóng)的出現(xiàn)
參考答案：
1．B
【分析】基因工程中的操作工具及其作用：①分子手術(shù)刀——限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶），能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開(kāi)，因此具有專(zhuān)一性。②分子縫合針——DNA連接酶，E·cliDNA連接酶，只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來(lái)；而T4DNA連接酶能縫合黏性末端和平末端。③分子運(yùn)輸車(chē)——載體。
【詳解】A、限制酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列，并在特定的堿基之間切開(kāi)磷酸二酯鍵，A錯(cuò)誤；
B、攜帶外源DNA片段的質(zhì)粒可在受體細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制 ，質(zhì)粒可以作為目的基因的運(yùn)載體，B正確；
C、T4DNA連接酶能連接雙鏈DNA片段的平末端，C錯(cuò)誤；
D、DNA連接酶能夠連接雙鏈DNA片段，形成磷酸二酯鍵，D錯(cuò)誤。
故選B。
2．B
【分析】DNA的粗提取與鑒定的實(shí)驗(yàn)原理是：①DNA的溶解性，DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的氯化鈉溶液中的溶解度不同，利用這一特點(diǎn)可以選擇適當(dāng)濃度的鹽溶液可以將DNA溶解或析出，從而達(dá)到分離的目的；②DNA不容易酒精溶液，細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)可以溶解于酒精，利用這一原理可以將蛋白質(zhì)和DNA進(jìn)一步分離；③在沸水浴的條件下DNA遇二苯胺會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色。
【詳解】A、低溫時(shí)DNA酶的活性較低，過(guò)濾液沉淀過(guò)程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解，A正確；
B、離心研磨液是為了使細(xì)胞碎片沉淀，B錯(cuò)誤；
C、在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色，C正確；
D、細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)可以溶解于酒精，可能有蛋白質(zhì)不溶于酒精，在95%的冷酒精中與DNA一塊兒析出，故粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)，D正確。
故選B。
3．C
【分析】基因工程的操作步驟：（1）目的基因的獲??；方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟?；虮磉_(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等；（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣，將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法；（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因-DNA分子雜交技術(shù)②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA-分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)：抗原-抗體雜交技術(shù)；個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。
【詳解】A、構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，SgRNA編碼序列需要插入到質(zhì)粒的啟動(dòng)子下游，便于轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生SgRNA，A錯(cuò)誤。
B、SgRNA和Cas9蛋白形成復(fù)合體后，可切割DNA雙鏈以敲除目標(biāo)基因或插入新的基因，其功能類(lèi)似于限制酶，B錯(cuò)誤；
C、SgRNA可以特異性切割DNA位點(diǎn)，根據(jù)目標(biāo)DNA設(shè)計(jì)相應(yīng)的SgRNA，可實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)DNA的定點(diǎn)切割，C正確；
D、CRISPR/Cas9識(shí)別目標(biāo)DNA序列主要與SgRNA編碼序列有關(guān)，D錯(cuò)誤；
故選C。
4．D
【分析】PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈，低溫（經(jīng)常是60°C左右）時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈。PCR反應(yīng)的最大特點(diǎn)是具有較大擴(kuò)增能力與極高的靈敏性，但容易污染，因此要時(shí)刻注意污染的監(jiān)測(cè)，陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照等。
【詳解】A、蛋白酶是水解蛋白質(zhì)肽鍵一類(lèi)酶的總稱(chēng)，跳蟲(chóng)細(xì)胞中大量DNA和蛋白質(zhì)構(gòu)成染色體，所以在提取DNA時(shí)加入蛋白酶有助于釋放出DNA，A正確；
B、Taq酶是從水生棲熱菌 Thermus Aquaticus （ Taq ）中分離出的具有熱穩(wěn)定性的DNA聚合酶，耐高溫，B正確；
C、雙鏈DNA分子通過(guò)凝膠的速率與其分子量的常用對(duì)數(shù)成反比。據(jù)此用已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和待測(cè)分子量的DNA片段同時(shí)電泳，比較其電泳速率，即可求出待測(cè)片段的分子大小，C正確；
D、PCR污染的監(jiān)測(cè)方法中陽(yáng)性對(duì)照:它是PCR反應(yīng)是否成功、產(chǎn)物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個(gè)重要的參考標(biāo)志。陽(yáng)性對(duì)照要選擇擴(kuò)增度中等、重復(fù)性好，經(jīng)各種鑒定是該產(chǎn)物的標(biāo)本，如以重組質(zhì)粒為陽(yáng)性對(duì)照，其含量宜低不宜高(100個(gè)拷貝以下)，但陽(yáng)性對(duì)照尤其是重組質(zhì)粒及高濃度陽(yáng)性標(biāo)本，其對(duì)檢測(cè)或擴(kuò)增樣品污染的可能性很大；陰性對(duì)照:每次PCR實(shí)驗(yàn)務(wù)必做陰性對(duì)照。它包括①標(biāo)本對(duì)照:被檢的標(biāo)本是血清就用鑒定后的正常血清作對(duì)照;被檢的標(biāo)本是組織細(xì)胞就用相應(yīng)的組織細(xì)胞作對(duì)照。②試劑對(duì)照:在PCR試劑中不加模板DNA或RNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以監(jiān)測(cè)試劑是否污染，D錯(cuò)誤。
故選D。
5．D
【分析】分泌蛋白的合成并分泌過(guò)程：首先通過(guò)細(xì)胞內(nèi)的核糖體形成氨基酸肽鏈，然后在糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)，肽鏈盤(pán)曲折疊構(gòu)成蛋白質(zhì)接著糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜會(huì)形成一些小泡，里面包裹著蛋白質(zhì)，小泡運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)到高爾基體，蛋白質(zhì)進(jìn)入高爾基體后，進(jìn)行進(jìn)一步的加工，之后，高爾基體膜形成一些小泡，包裹著蛋白質(zhì)，運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞膜處，小泡與細(xì)胞膜接觸，蛋白質(zhì)就分泌到細(xì)胞外了。
【詳解】 A、胰島素屬于分泌蛋白，可利用放射性同位素標(biāo)記法研究胰島素的合成與分泌過(guò)程，A正確；
B、人體細(xì)胞合成胰島素的原料是氨基酸，氨基酸來(lái)源于自身合成和其生活的內(nèi)環(huán)境，B正確；
C、治療糖尿病的胰島素要注意低溫保存，胰島素的蛋白質(zhì)不可直接口服，C正確；
D、選擇大腸桿菌是原核細(xì)胞，沒(méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，不能對(duì)胰島素的前體物質(zhì)進(jìn)行加工，所以大腸桿菌作工程菌產(chǎn)生的胰島素與天然胰島素的結(jié)構(gòu)不相同，D錯(cuò)誤。
故選D。
6．B
【分析】蛋白質(zhì)工程是以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過(guò)基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類(lèi)的生產(chǎn)和生活的需求。蛋白質(zhì)工程是在基因工程的基礎(chǔ)上，延伸出來(lái)的第二代基因工程，是包含多學(xué)科的綜合科技工程領(lǐng)域。蛋白質(zhì)工程的基本途徑是：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列。
【詳解】A、圖示為蛋白質(zhì)工程，蛋白質(zhì)工程直接的操作對(duì)象是水蛭素基因，A正確；
B、蛋白質(zhì)工程進(jìn)行中難度最大的操作是根據(jù)蛋白質(zhì)的功能設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，B錯(cuò)誤；
C、由于新水蛭素經(jīng)過(guò)了重新設(shè)計(jì)，因而指導(dǎo)c形成的新水蛭素基因的堿基序列可能發(fā)生改變，C正確；
D、題意顯示，通過(guò)蛋白質(zhì)工程操作用賴(lài)氨酸替代水蛭素第47位的天冬酰胺，可提高其抗凝血活性，因此需要進(jìn)行改造后的水蛭素需要與天然水蛭素進(jìn)行抗凝血活性比較，從而做出鑒定，D正確。
故選B。
7．D
【分析】基因工程是指按照人們的愿望，通過(guò)轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類(lèi)型和產(chǎn)品。從技術(shù)操作層面來(lái)看，由于基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，因此又叫做重組DNA技術(shù)；轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品是指利用基因工程技術(shù)而獲得的生物制品。
【詳解】A、基因工程是指按照人們的愿望，通過(guò)轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類(lèi)型和產(chǎn)品；轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品是指利用基因工程技術(shù)而獲得的生物制品，故通過(guò)轉(zhuǎn)基因育種，按照人們的需要，可增加或消除原有生物品種的某些性狀，A正確；
B、在基因表達(dá)載體上，除了有目的基因、啟動(dòng)子、終止子等外，還需要標(biāo)記基因，故轉(zhuǎn)基因食品風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估時(shí)還需考慮標(biāo)記基因的安全性問(wèn)題，B正確；
C、轉(zhuǎn)基因作物所攜帶的外源基因在使得作物高產(chǎn)的同時(shí)，也可能會(huì)向自然界擴(kuò)散，從而打破自然界原有的物種平衡，嚴(yán)格選擇種植區(qū)域可減少轉(zhuǎn)基因作物發(fā)生外源基因擴(kuò)散的可能性，C正確；
D、轉(zhuǎn)基因作物的長(zhǎng)期、大規(guī)模種植，可能使目標(biāo)害蟲(chóng)或非目標(biāo)害蟲(chóng)對(duì)轉(zhuǎn)基因作物的適應(yīng)在群體水平上產(chǎn)生抗性，有可能產(chǎn)生侵染力更強(qiáng)的“超級(jí)害蟲(chóng)”，造成更大的危害，D錯(cuò)誤。
故選D。

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