?解密23 微生物的培養(yǎng)與利用

高考考點
考查內(nèi)容
三年高考探源
考查頻率
培養(yǎng)基及微生物的純化培養(yǎng)技術(shù)
1．掌握培養(yǎng)基及微生物的純化培養(yǎng)技術(shù)；
2．掌握微生物的計數(shù)方法；
3．掌握微生物的篩選與鑒別的步驟和所用試劑；
4．理解微生物的利用；
2020·全國Ⅲ卷·11
2020·江蘇卷·24
2018·全國Ⅰ卷·37
2018·全國Ⅱ卷·37
2018·全國Ⅲ卷·37
2018·海南卷·30
2018·江蘇卷·31
2018江蘇卷·16

★★★★☆
微生物的計數(shù)方法
★★★★☆
微生物的篩選與鑒別
★★★★☆
微生物的利用
★★★★★


核心考點一 培養(yǎng)基及微生物的純化培養(yǎng)技術(shù)
一、微生物的培養(yǎng)基
1．微生物的培養(yǎng)基
營養(yǎng)要素
來源
功能
碳源
無機(jī)碳源
CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳無機(jī)物
①構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物
②既是碳源又是能源（有機(jī)碳源）
有機(jī)碳源
糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、石油、花生粉餅等
氮源
無機(jī)氮源
無機(jī)氮：NH3、銨鹽、硝酸鹽、N2等
合成含氮的代謝產(chǎn)物
有機(jī)氮源
牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸
合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮的代謝產(chǎn)物
生長因子
維生素、氨基酸、堿基
①酶和核酸的組成成分
②參與代謝過程中的酶促反應(yīng)
2．按物理狀態(tài)分類
培養(yǎng)基種類
特點
用途
液體培養(yǎng)基
不加凝固劑
工業(yè)生產(chǎn)
固體培養(yǎng)基
加凝固劑（如瓊脂）
微生物分離、鑒定，活菌計數(shù)，菌種保藏
半固體培養(yǎng)基
觀察微生物的運動、分類、鑒定
3．按功能分類
種類
制備方法
原理
用途
舉例
選擇培養(yǎng)基
培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì)
依據(jù)某些微生物對某些物質(zhì)的特殊需求或抗性而設(shè)計
從眾多微生物中分離所需的微生物
加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基
培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品
產(chǎn)生特定的顏色或其他變化
鑒別不同種類的微生物
用伊紅—美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌
二、消毒與滅菌

條件
結(jié)果
常用方法
應(yīng)用范圍
消毒
較為溫和的物理或化學(xué)方法
僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分對人體有害的微生物
煮沸消毒法
日常用品
巴氏消毒法
不耐高溫的液體
化學(xué)藥劑消毒法
用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源
滅菌
強(qiáng)烈的理化因素
殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子
燃燒滅菌法
接種工具
干熱滅菌法
玻璃器皿、金屬工具
高壓蒸汽滅菌法
培養(yǎng)基及容器
三、大腸桿菌的純化
1．原理：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個細(xì)胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是純化的細(xì)菌菌落。
2．純化微生物的接種方法
比較項目
平板劃線法
稀釋涂布平板法
關(guān)鍵操作
接種環(huán)在固體平板培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線
①一系列的梯度稀釋；
②涂布平板法操作
注意事項
每次劃線前后均需灼燒接種環(huán)
稀釋度要足夠高，為確保實驗成功可以增加稀釋度
菌體獲取
在具有顯著的菌落特征的菌落中挑取菌體
從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體
優(yōu)點
可以根據(jù)菌落的特點獲得某種微生物的單細(xì)胞菌落
既可以獲得單細(xì)胞菌落，又能對微生物計數(shù)
缺點
不能對微生物計數(shù)
操作復(fù)雜，需要涂布多個平板
3．平板劃線操作的注意事項
（1）操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要對接種環(huán)進(jìn)行火焰灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束時，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的如下表：

第一次操作
每次劃線之間
劃線結(jié)束
目的
殺死接種環(huán)上原有的微生物
殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少
殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者
（2）灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。
（3）第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。
（4）劃線時最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。
（5）劃線用力大小要適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。

考法一
（2017·上海高考真題）硝化細(xì)菌廣泛存在于通氣性較好的土壤中，其部分代謝反應(yīng)如圖所示，下列關(guān)于硝化細(xì)菌的培養(yǎng)條件的描述正確的是（　?。?br />
A．碳源為葡萄糖 B．培養(yǎng)時需隔絕空氣
C．氮源是氨氣 D．培養(yǎng)時需冷藏
【答案】C
【分析】
培養(yǎng)基中需要具備碳源、氮源、無機(jī)鹽、水等，另外在考慮溫度、PH等條件。土壤中的硝化細(xì)菌能進(jìn)行化能合成作用，硝化細(xì)菌能利用氨氣氧化釋放的能量把二氧化碳和水合成有機(jī)物，屬于自養(yǎng)生物，因此選擇提供無機(jī)碳源、無機(jī)氮源。
【詳解】
A、土壤中的硝化細(xì)菌能進(jìn)行化能合成作用，培養(yǎng)基中不需要有機(jī)碳源，其碳源為二氧化碳，A錯誤；
B、硝化細(xì)菌能利用NH3氧化釋放的能量把二氧化碳和水合成有機(jī)物，所以培養(yǎng)時不能隔絕空氣，B錯誤；
C、硝化細(xì)菌的培養(yǎng)過程中氮源是氨氣，C正確；
D、硝化細(xì)菌能利用NH3氧化釋放的能量把二氧化碳和水合成有機(jī)物，需要酶的催化作用，所以培養(yǎng)時需要適宜的溫度，D錯誤。
故選C。

考法二
（2019·江蘇高考真題）下列關(guān)于微生物實驗操作的敘述，錯誤的是
A．培養(yǎng)微生物的試劑和器具都要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌
B．接種前后，接種環(huán)都要在酒精燈火焰上進(jìn)行灼燒
C．接種后的培養(yǎng)皿要倒置，以防培養(yǎng)污染
D．菌種分離和菌落計數(shù)都可以使用固體培養(yǎng)基
【答案】A
【分析】
無菌技術(shù)指通過一定的物理、化學(xué)的手段，防止實驗室培養(yǎng)物被外來微生物污染，保持微生物的純培養(yǎng)的技術(shù)，其中包括在微生物的分離、轉(zhuǎn)接、保存等過程中防止其他微生物污染的手段。常見的方法：消毒和滅菌。
【詳解】
接種室、接種箱等常用紫外線消毒法處理，接種環(huán)等常用灼燒滅菌法處理，吸管、培養(yǎng)皿等常用干熱滅菌法處理，培養(yǎng)基及多種器材用高壓蒸汽滅菌法處理，A錯誤；為了防止雜菌污染，每次接種前后，接種環(huán)都要進(jìn)行灼燒滅菌，B正確；接種后，培養(yǎng)皿需要倒置，以防皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基造成污染，C正確；分離菌種可以用平板劃線法和稀釋涂布平板法，后者還可以用于微生物的計數(shù)，所用培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，D正確。故選A。


1．關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述錯誤的是
①將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯溶解
②等培養(yǎng)基冷卻40℃左右時進(jìn)行倒平板
③待平板冷卻凝固5?10分鐘后將平板倒過來放置
④操作順序為計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌
⑤牛肉膏和蛋白胨都能提供碳源、氮源、磷酸鹽、維生素
A．①④⑤ B．②③④ C．①②③ D．②④⑤
【答案】D
【詳解】
①將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯，加入少量的水，加熱，①正確；
②待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板，②錯誤；
③待平板冷卻凝固約5～10min后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿低在上，③正確；
④制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的操作順序為計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板，④錯誤；
⑤蛋白胨只能提供碳源、氮源、維生素，⑤錯誤。
故選D。
2．下圖表示小方同學(xué)在實驗室培養(yǎng)大腸桿菌過程中的部分操作，下列說法錯誤的是:

A．①②③步驟需要在酒精燈火焰旁操作
B．培養(yǎng)基中必須含碳源、氮源、無機(jī)鹽和水
C．③步驟接種環(huán)多方向劃線是為了便于細(xì)菌計數(shù)
D．接種結(jié)束后，將④倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
【答案】C
【分析】
本題以“在實驗室培養(yǎng)大腸桿菌過程中的部分操作示意圖”為情境，考查學(xué)生對微生物純化培養(yǎng)的相關(guān)知識的識記和理解能力。
【詳解】
①②③步驟依次表示倒平板、用接種環(huán)沾取菌液、進(jìn)行平板劃線，為了防止被雜菌污染，操作時都需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，A正確；不同的微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需求存在差異，但水、碳源、氮源和無機(jī)鹽都是各種微生物所需的基本營養(yǎng)，所以培養(yǎng)基中必須含碳源、氮源、無機(jī)鹽和水，B正確；③步驟接種環(huán)多方向劃線是為了分離菌種，C錯誤；④是培養(yǎng)，劃線接種結(jié)束后，將平板倒置后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，防止冷凝水污染培養(yǎng)基，D正確。
3．已知某種細(xì)菌以CO2為唯一碳源，下列相關(guān)敘述正確的是
A．可推測該細(xì)菌的代謝類型為自養(yǎng)型
B．在該細(xì)菌的培養(yǎng)基中可不必添加無機(jī)鹽
C．培養(yǎng)過程中碳源同時充當(dāng)該細(xì)菌的能源物質(zhì)
D．培養(yǎng)該細(xì)菌的培養(yǎng)基中無需添加氮源
【答案】A
【解析】
【分析】
能利用二氧化碳合成有機(jī)物的生物為自養(yǎng)型生物。培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。
【詳解】
某種細(xì)菌以CO2為唯一碳源，可推測該細(xì)菌的代謝類型為自養(yǎng)型，A正確；微生物的培養(yǎng)一般需要水、碳源、氮源和無機(jī)鹽等營養(yǎng)物質(zhì)，B錯誤；該細(xì)菌以CO2為唯一碳源，但CO2不能為微生物提供能量，C錯誤；氮源是微生物生長必需的營養(yǎng)物質(zhì)，培養(yǎng)該細(xì)菌的培養(yǎng)基中需添加氮源，D錯誤。
故選A。
4．空氣中的微生物在重力等作用下會有一定程度沉降。某生物興趣小組欲利用平板培養(yǎng)基測定教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。下列關(guān)于實驗的敘述不正確的是
A．在配制培養(yǎng)基時必須添加瓊脂等凝固劑成分
B．將平板培養(yǎng)基放置在教室相同地點的不同高度
C．本實驗需要設(shè)置不開蓋的平板培養(yǎng)基作為對照
D．菌落數(shù)在30-300之間的平板才可以用于計數(shù)
【答案】D
【分析】
依題文可知，本實驗需用固體培養(yǎng)基，實驗自變量是教室相同地點的不同高度，以此相關(guān)知識做出判斷。
【詳解】
A、平板為固體培養(yǎng)基，故需要加入瓊脂等凝固劑成分，A正確；
B、根據(jù)實驗?zāi)康目芍?，自變量是教室相同地點的不同高度，所以需將平板培養(yǎng)基放置在教室相同地點的不同高度，B正確；
C、本實驗需要設(shè)置不開蓋的平板培養(yǎng)基作為對照，不同高度下放置開蓋平板培養(yǎng)基進(jìn)行實驗，C正確；
D、為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)，D錯誤。
故選D。
5．下列關(guān)于微生物分離和培養(yǎng)的敘述，不正確的是
A．微生物培養(yǎng)基中加入牛肉膏和蛋白胨可以同時提供碳源和氮源
B．測定土壤樣品中的活菌數(shù)目，常用平板劃線法
C．培養(yǎng)基不一定都使用高壓蒸汽滅菌法滅菌
D．以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基可以分離得到能分解尿素的細(xì)菌
【答案】B
【分析】
本題考查微生物培養(yǎng)，考查對培養(yǎng)基成分、類型、滅菌方法、接種方法的理解和識記?？稍谑煊浵嚓P(guān)知識的基礎(chǔ)上分析各選項是否正確。
【詳解】
牛肉膏和蛋白胨的主要成分是蛋白質(zhì)，含有碳、氮元素，可以為微生物同時提供碳源和氮源，A項正確；測定土壤樣品中的活菌數(shù)目，常用稀釋涂布平板法，B項錯誤；培養(yǎng)基一般使用高壓蒸汽滅菌法滅菌，也可以采用微孔濾膜過濾除菌，C項正確；以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基，只有能分解尿素的細(xì)菌才能在該培養(yǎng)基上生長繁殖，D項正確。

核心考點二 微生物的計數(shù)方法
1．兩種計數(shù)方法的比較
比較項目
間接計數(shù)法（稀釋涂布平板法）
直接計數(shù)法（顯微計數(shù)法）
原理
當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌
利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量
公式
每克樣品中的菌落數(shù)＝（C÷V）×M
C：某稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)；
V：涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL）；
M：稀釋倍數(shù)
每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)：每小格平均細(xì)菌數(shù)×400×104×稀釋倍數(shù)
缺點
當(dāng)兩個或多個菌體連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落
不能區(qū)分細(xì)胞死活
結(jié)果
比實際值偏小
比實際值偏大
2．設(shè)置對照和重復(fù)
比較項目
對照
重復(fù)
目的
排除非測試因素對實驗結(jié)果的影響
排除偶然因素對實驗結(jié)果的影響
實例
空白對照：確定培養(yǎng)基制作是否合格
同一稀釋度涂布至少3個平板
【易混易錯】
“選擇菌落數(shù)在30～300的平板”的兩個提醒
用稀釋涂布平板法計數(shù)微生物時，要求選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)。解題時易出現(xiàn)以下誤解：
（1）只得到1個菌落數(shù)在30～300的平板是錯誤的。錯誤的原因是不符合實驗的重復(fù)原則，易受到偶然因素的影響。
（2）得到3個或3個以上菌落數(shù)在30～300的平板，也不一定正確，這可能有兩種情況：
①不同平板間差異較大，如得到3個平板，菌落數(shù)分別為230、34、240，雖然菌落數(shù)均在“30～300”，這也是不正確的，因為“34”與“230”“240”差異太大，應(yīng)重新實驗找出原因。
②不同平板之間差異不大，是符合要求的，用其平均值作為估算的最終結(jié)果?？梢姡⒉皇侵灰玫?個“菌落數(shù)在30～300的平板”即可，而應(yīng)該是涂布的同一稀釋度的平板均符合“菌落數(shù)在30～300的平板”且無較大差異，說明實驗操作合格，才能按照計算公式進(jìn)行計算。


考法一
（2009·安徽高考真題）下列是關(guān)于“檢測土壤中細(xì)菌總數(shù)”實驗操作的敘述，其中錯誤的是
A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白膝培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板 B．取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1ml，分別涂布于各組平板上 C．將實驗組和對照組平板倒置，370C恒溫培養(yǎng)24-48小時 D．確定對照組無菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實驗組平板進(jìn)行計數(shù)
【答案】D
【解析】
檢測土壤中細(xì)菌總數(shù)，用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板，取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1ml，分別涂布于各組平板上，將實驗組和對照組平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)24-48小時，在確定對照組無菌后，選擇菌落數(shù)在30-300的一組平板為代表進(jìn)行計數(shù)。所以D不對。

6．統(tǒng)計細(xì)菌數(shù)目的方法有（ ）
①涂布平板法 ②直接計數(shù)法 ③濾膜法
A．①②③ B．①③ C．②③ D．①②
【答案】A
【分析】
微生物計數(shù)的方法是稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計數(shù)法等。
【詳解】
①稀釋涂布平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細(xì)胞，①正確；
②顯微鏡直接計數(shù)法是利用血球計數(shù)板進(jìn)行微生物的計數(shù)，缺點是無法區(qū)分死菌和活菌，②正確；
③濾膜法可計數(shù)水樣中的大腸桿菌，③正確。
故選A。
7．下列有關(guān)微生物分離、純化及計數(shù)的敘述中，錯誤的是（ ）
A．平板劃線法通過連續(xù)劃線將聚集的菌種分散并計數(shù)
B．用富含尿素的培養(yǎng)基富集培養(yǎng)尿素分解菌
C．稀釋涂布平板法通過系列梯度稀釋可將微生物分散
D．用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)微生物時，實驗結(jié)果往往偏大
【答案】A
【分析】
微生物的分離純化方法主要有稀釋涂布平板法和平板劃線法。技術(shù)方法主要有活菌計數(shù)法和顯微鏡直接計數(shù)法。
【詳解】
A、平板劃線法通過連續(xù)劃線將聚集的菌種分散，但無法計數(shù)，A錯誤；
B、用富含尿素的培養(yǎng)基富集培養(yǎng)尿素分解菌，B正確；
C、稀釋涂布平板法通過系列梯度稀釋可將微生物分散，C正確；
D、用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)微生物時，實驗結(jié)果往往偏大，因為有些死菌也被計入其中，D正確。
故選A。
8．下列有關(guān)微生物計數(shù)的描述不正確的是（ ）
A．統(tǒng)計某一稀釋度下的菌落數(shù)，最好能計數(shù)3個平板并求平均值
B．活菌計數(shù)法因為觀察的是菌落，所以統(tǒng)計值往往比活菌的實際數(shù)目高
C．顯微鏡直接計數(shù)法在計數(shù)的同時能觀察到所研究微生物的形態(tài)特征
D．當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時，一般選取菌落在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)
【答案】B
【分析】
統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法：
（1）顯微鏡直接計數(shù)法
?①原理：利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計數(shù)板計數(shù)； ③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。
（2）間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）
?①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。
②操作
a、設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實驗的說服力與準(zhǔn)確性。
b、為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)。
③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。
【詳解】
A、為減小誤差，統(tǒng)計某一稀釋度下的菌落數(shù)，最好能計數(shù)3個平板并求平均值，A正確；
B、由于當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上顯示的只是一個菌落，故活菌計數(shù)法的統(tǒng)計值往往比活菌的實際數(shù)目低，B錯誤；
C、顯微鏡直接計數(shù)法在計數(shù)的同時能觀察到所研究微生物的形態(tài)特征，C正確；
D、當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時，一般選取菌落在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)，D正確。
故選B。
9．下列有關(guān)微生物培養(yǎng)和保藏的敘述，正確的是（ ）
A．配制微生物培養(yǎng)基時，一定要加入瓊脂
B．將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，可長期保藏
C．分離計數(shù)時，可用平板劃線法對需計數(shù)的微生物進(jìn)行分離
D．劃線操作時，不能將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連
【答案】D
【分析】
1.微生物接種常用的兩種方法：
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過足夠稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后，可形成單菌落，該方法不僅可以分離，而且可以計數(shù)。
2.菌種保藏：臨時保藏的方法。首先，將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上,在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長成后，將試管放入4℃的冰箱中保藏。以后每3~ 6個月，都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。但是，這種方法保存的時間不長，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。在3 mL的甘油瓶中，裝入1 mL甘油后滅菌。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在20℃的冷凍箱中保存。
【詳解】
A、配制微生物液體培養(yǎng)基時不需要加入瓊脂，A錯誤；
B、由分析可知，將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，可臨時保藏，B錯誤；
C、分離計數(shù)時，可用稀釋涂布平板法對需計數(shù)的微生物進(jìn)行分離，平板劃線法不能計數(shù)，C錯誤；
D、劃線操作時，注意不能將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連，否則達(dá)不到逐步分離的目的，無法得到單菌落，D正確。
故選D。
10．篩選淀粉分解菌需使用以淀粉為唯一碳源的培養(yǎng)基。接種培養(yǎng)后，若細(xì)菌能分解淀粉，培養(yǎng)平板經(jīng)稀碘液處理，會出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈（如圖），實驗結(jié)果見下表。

菌種
菌落直徑：C（mm）
透明圈直徑：H（mm）
H/C
細(xì)菌Ⅰ
5.1
11.2
2.2
細(xì)菌Ⅱ
8.1
13.0
1.6


有關(guān)本實驗的敘述，錯誤的是
A．培養(yǎng)基除淀粉外還含有氮源等其他營養(yǎng)物質(zhì)
B．篩選分解淀粉的細(xì)菌時，菌液應(yīng)稀釋后涂布
C．以上兩種細(xì)菌均不能將淀粉酶分泌至細(xì)胞外
D．H/C值反映了兩種細(xì)菌分解淀粉能力的差異
【答案】C
【分析】
該選擇培養(yǎng)基上的唯一碳源是淀粉，只有能利用淀粉的微生物才能存活，微生物分解淀粉后，會產(chǎn)生透明圈。
【詳解】
培養(yǎng)基一般含有碳源、氮源、水、無機(jī)鹽和生長因子等成分，A正確；篩選淀粉分解菌時，需要對菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，再將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，B正確；由題意可知，以上兩種菌均會產(chǎn)生透明圈，說明兩種菌均可以產(chǎn)生淀粉酶并分泌到細(xì)胞外分解淀粉，C錯誤；淀粉分解菌的H/C越大，說明其產(chǎn)生的淀粉酶分解的淀粉相對越多，可說明該淀粉分解菌分解淀粉的能力越強(qiáng)，D正確。因此，本題答案選C。

核心考點三 微生物的篩選與鑒別
1．微生物的鑒別方法
（1）菌落特征鑒別法：根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進(jìn)行鑒別。
（2）指示劑鑒別法：如以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種微生物后，培養(yǎng)基變紅說明該種微生物能夠分解尿素。
（3）染色鑒別法：如利用剛果紅染色法，根據(jù)培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈來篩選分解纖維素的微生物。
2．篩選微生物的三種方法
（1）單菌落挑取法：利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養(yǎng)基表面，直接根據(jù)微生物菌落的特征利用單菌落挑取的方法獲得目的微生物。
（2）選擇培養(yǎng)法：利用選擇培養(yǎng)基對微生物進(jìn)行選擇培養(yǎng)，直接獲得目的微生物。
（3）鑒定培養(yǎng)法：利用鑒別培養(yǎng)基使目的微生物菌落呈現(xiàn)特有的特征，然后篩選目的微生物。
3．篩選微生物的兩個實例比較
比較項目
土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離
分解纖維素的微生物的分離
方法
利用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)
利用富含纖維素的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)
原理
只有分解尿素的細(xì)菌能夠合成脲酶，才能在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上生長
因為培養(yǎng)基中含有豐富的纖維素，因此能夠分解纖維素的微生物具有更多的生存機(jī)會而大量繁殖
鑒別
在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，指示劑變紅說明菌落中的菌體為分解尿素的細(xì)菌
剛果紅染色法，周圍出現(xiàn)透明圈的菌落為分解纖維素的微生物的菌落


考法一
（2020·江蘇高考真題）為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是（ ）

A．倒平板后需間歇晃動，以保證表面平整
B．圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落
C．該實驗結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的
D．菌落周圍的纖維素被降解后，可被剛果紅染成紅色
【答案】B
【分析】
分析平板結(jié)果可知，采用的接種方法為平板劃線法，且劃線順序是Ⅰ區(qū)、Ⅱ區(qū)、Ⅲ區(qū)，可以看到Ⅲ區(qū)中出現(xiàn)了單菌落。
【詳解】
A、倒平板后無需晃動，A錯誤；
B、Ⅰ區(qū)、Ⅱ區(qū)沒有出現(xiàn)單菌落，說明細(xì)菌數(shù)量太多，故應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，B正確；
C、出現(xiàn)單菌落即達(dá)到了菌種純化的目的，C錯誤；
D、剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解
后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)，D錯誤。
故選B。

考法二
（2019·江蘇高考真題）下列關(guān)于產(chǎn)纖維素酶菌分離及運用的敘述，不合理的是
A．篩選培養(yǎng)基中應(yīng)含有大量的葡萄糖或蔗糖提供生長營養(yǎng)
B．可從富含腐殖質(zhì)的林下土壤中篩選產(chǎn)纖維素酶菌
C．在分離平板上長出的菌落需進(jìn)一步確定其產(chǎn)纖維素酶的能力
D．用產(chǎn)纖維素酶菌發(fā)酵處理農(nóng)作物秸稈可提高其飼用價值
【答案】A
【分析】
纖維素酶是一種復(fù)合酶，包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。
【詳解】
應(yīng)該用以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基篩選纖維素分解菌，只有纖維素分解菌能夠存活，A錯誤；木材、秸稈中富含纖維素，故可以從富含腐殖質(zhì)的林下土壤中篩選產(chǎn)纖維素酶菌，B正確；用以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基篩選纖維素分解菌后，為了確定得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實驗，C正確；用產(chǎn)纖維素酶菌發(fā)酵處理農(nóng)作物秸稈，可以把纖維素分解成葡萄糖，提高飼用價值，D正確。故選A。


11．將相等數(shù)量的硝化細(xì)菌和大腸桿菌分別接種到含銨鹽的無機(jī)鹽培養(yǎng)液中，在適宜溫度下振蕩培養(yǎng)。若用虛線表示大腸桿菌的生長趨勢，實線表示硝化細(xì)菌的生長趨勢，則下圖中能正確表示兩種菌體生長趨勢的是（　　）
A． B．
C． D．
【答案】C
【分析】
本題考查微生物同化作用的方式，硝化細(xì)菌是自養(yǎng)生物，通過化能合成作用合成有機(jī)物以維持生命活動；大腸桿菌屬于異養(yǎng)生物，必須消耗現(xiàn)成的有機(jī)物才能維持正常的生命活動。
【詳解】
硝化細(xì)菌是自養(yǎng)生物，可以利用培養(yǎng)液中的無機(jī)鹽、水及大氣中的CO2，通過化能合成作用合成有機(jī)物以維持生命活動，由于空間、營養(yǎng)等條件是有限的，其種群數(shù)量呈“S”型增長；大腸桿菌屬于異養(yǎng)生物，必須消耗現(xiàn)成的有機(jī)物才能維持正常的生命活動，故在只含無機(jī)鹽的培養(yǎng)液中不能生存，其數(shù)量是逐漸減少的，C表示的大腸桿菌和硝化細(xì)菌的生長曲線符合實際情況，A、B、D不符合。 故選C。
12．下列有關(guān)“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)實驗”的敘述，正確的是
A．分離土壤中的尿素分解菌實驗中，采集的土樣經(jīng)高溫滅菌后，可以用于制取土壤稀釋液
B．測定土壤中細(xì)菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋度范圍不同
C．測定土壤樣品中的活菌數(shù)目，常用顯微鏡直接計數(shù)法
D．接種土壤微生物稀釋液時，平板劃線法可以采取連續(xù)劃線的方法使微生物均勻分布
【答案】B
【分析】
據(jù)題文和選項的描述可知：本題考查學(xué)生對微生物的純化培養(yǎng)與分離的相關(guān)知識的識記和理解能力。
【詳解】
分離土壤中的尿素分解菌實驗中，采集的土樣經(jīng)高溫滅菌后，其中的微生物全部死亡，不能得到尿素分解菌，A錯誤；土壤中各類微生物的數(shù)量不同，為了獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進(jìn)行分離，可見，測定土壤中細(xì)菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋度范圍也不同，B正確；測定土壤樣品中的活菌數(shù)目，常用菌落計數(shù)法，一般不常用顯微鏡直接計數(shù)法，C錯誤；接種土壤微生物稀釋液時，可借助平板劃線法，通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面，但并不是使微生物均勻分布，D錯誤。
13．高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實用性。研究者從熱泉中篩選出了高效產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如圖所示。下列說法錯誤的是（ ）

A．①過程的目的是稀釋
B．②過程所使用的接種方法是稀釋涂布平板法
C．I號、Ⅱ號培養(yǎng)基都屬于固體培養(yǎng)基，先滅菌后調(diào)節(jié)pH
D．從Ⅰ號培養(yǎng)基挑出透明圈大的菌落，接種到Ⅱ號培養(yǎng)基上
【答案】C
【詳解】
圖中①過程是稀釋嗜熱菌培養(yǎng)液的過程，A正確；接種嗜熱菌即②過程所使用的接種方法是稀釋涂布平板法，B正確；分析圖示信息可知，Ⅰ號、Ⅱ號培養(yǎng)基都屬于固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配制和滅菌過程中，應(yīng)注意先調(diào)節(jié)pH后滅菌，C錯誤；部分嗜熱菌在Ⅰ培養(yǎng)基上生長時可產(chǎn)生淀粉酶，分解培養(yǎng)基中的淀粉后會在菌落周圍形成透明圈，透明圈越大，說明產(chǎn)生的淀粉酶越多，因此應(yīng)挑選透明圈大的菌落接種在Ⅱ號培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，D正確。
14．下列說法錯誤的是(　　)
A．因為土壤中各類微生物的數(shù)量不同，所以為獲得不同類型的微生物，要按不同的稀釋倍數(shù)進(jìn)行分離
B．測定土壤中細(xì)菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍不同
C．在統(tǒng)計菌落數(shù)目時，為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般采用密度較大的平板進(jìn)行計數(shù)
D．牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些細(xì)菌菌落
【答案】C
【分析】
樣品的稀釋度直接影響平板上生長的菌落數(shù)目。實際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得菌落在30～300之間、適于計數(shù)的平板。測定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用104、105和106倍的稀釋液；測定放線菌的數(shù)量一般選用103、104和105倍的稀釋液；測定真菌的數(shù)量，一般選用102、103和104倍的稀釋液。將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，從而說明選擇培養(yǎng)基具有篩選作用。
【詳解】
土壤中各種微生物數(shù)量不同，細(xì)菌大約為70%～90%，其次是放線菌，真菌最少，故不同類型微生物，要按不同稀釋倍數(shù)進(jìn)行，A正確；根據(jù)選項A可知，測定土壤中細(xì)菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，需要選用的稀釋范圍不同，B正確；為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選取菌落數(shù)在30-300之間的平板進(jìn)行計數(shù)，C錯誤；驗證選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用，需設(shè)立牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照，若后者上的菌落數(shù)明顯大于前者，說明前者具有篩選作用，D正確。故選C。
15．豆豉是大豆經(jīng)過發(fā)酵制成的一種食品。為了研究影響豆豉發(fā)酵效果的因素，某小組將等量的甲、乙兩菌種分別接入等量的A、B兩桶煮熟大豆中并混勻，再將兩者置于適宜條件下進(jìn)行發(fā)酵，并定期取樣觀測發(fā)酵效果。以下推測不合理的是
A．該實驗的自變量是菌種，溫度屬于無關(guān)變量
B．大豆發(fā)酵過程中部分蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)槎嚯?，形成豆豉的獨特風(fēng)味
C．若容器內(nèi)上層大豆發(fā)酵效果優(yōu)于底層，則發(fā)酵菌為厭氧菌
D．煮熟大豆使蛋白質(zhì)變性，有利于菌體分泌酶作用于蛋白質(zhì)
【答案】C
【解析】
根據(jù)題干信息分析，該實驗的自變量是菌種的種類（甲乙兩種菌種），而溫度屬于無關(guān)變量，A正確；大豆發(fā)酵過程中部分蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)槎嚯模纬啥刽莫毺仫L(fēng)味，B正確；若容器內(nèi)上層大豆發(fā)酵效果優(yōu)于底層，說明發(fā)酵菌為需氧型，C錯誤；煮熟大豆使蛋白質(zhì)變性，有利于菌體分泌酶作用于蛋白質(zhì)，D正確。

核心考點四 微生物的利用
1．果酒和果醋制作步驟的比較

制果酒
制果醋
相同過程
（1）選材和材料處理：選擇新鮮的葡萄，先用清水沖洗葡萄1～2遍除去污物后，再去枝梗；
（2）制作發(fā)酵液，防止雜菌污染；
（3）發(fā)酵：將葡萄汁注入發(fā)酵瓶，注意液體量不要超過發(fā)酵瓶總體積的2/3
不同過程
（1）將溫度嚴(yán)格控制在18～25 ℃，時間控制在10～12 d左右。發(fā)酵旺盛期的CO2產(chǎn)量非常大，要及時排氣，防止發(fā)酵瓶爆裂；
（2）檢測指標(biāo)：7～10 d以后，可以開始進(jìn)行取樣檢驗工作。例如，可以嗅味和品嘗、用重鉻酸鉀檢驗酒精含量，進(jìn)行酵母菌的鏡檢，測定pH等工作
（1）將溫度嚴(yán)格控制在30～35 ℃，并注意適時通過充氣口充氣；
（2）檢測指標(biāo)：果醋的制作是否成功可以通過觀察菌膜的形成、嗅味和品嘗初步鑒定，再通過檢測和比較醋酸發(fā)酵前后的pH進(jìn)一步鑒定。還可以在顯微鏡下觀察發(fā)酵液中是否有醋酸菌，并統(tǒng)計其數(shù)量作進(jìn)一步鑒定
2．果酒和果醋的發(fā)酵裝置及各個部件的作用
裝置圖
結(jié)構(gòu)或操作
目的

充氣口
醋酸發(fā)酵時連接充氣泵，輸入無菌空氣；制酒時關(guān)閉充氣口
排氣口
用來排出CO2
長而彎曲的膠管
防止空氣中微生物的污染
出料口
便于取料，及時監(jiān)測發(fā)酵進(jìn)行的情況
3．發(fā)酵后酒精的檢驗及對照原則
（1）檢驗

（2）對照
兩種對照方式都必須遵循單一變量原則：前者是標(biāo)準(zhǔn)對照，后者是自身對照。
4．果酒、果醋制作的注意事項
（1）材料的選擇與處理
選擇新鮮的葡萄，榨汁前先沖洗后除去枝梗，以避免去除枝梗時引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機(jī)會。
（2）防止發(fā)酵液被污染
需要從發(fā)酵制作的過程進(jìn)行全面的考慮，因為操作的每一步都可能混入雜菌。為避免雜菌污染，榨汁機(jī)要洗凈并晾干；發(fā)酵裝置要洗凈并用70%的酒精消毒；封閉充氣口；若用簡易的發(fā)酵裝置；每隔一定時間排氣時只需擰松瓶蓋，不要完全揭開瓶蓋等。
（3）控制好發(fā)酵時間與溫度、果醋制作時適時充氣。
【特別提醒】
氧氣供應(yīng)狀況對酒精發(fā)酵結(jié)果影響的分析方法
（1）酒精發(fā)酵所需的氧氣供應(yīng)條件
①發(fā)酵前期：需要通入空氣或在發(fā)酵瓶中留有一定的空間，可以給酵母菌提供氧氣以利于酵母菌通過有氧呼吸大量增殖。②發(fā)酵后期：要通過密封嚴(yán)格控制無氧環(huán)境，以利于酵母菌通過無氧呼吸產(chǎn)生酒精。
（2）酒精發(fā)酵異常的情況
①酒精發(fā)酵的前期如果供氧不足，酵母菌數(shù)量少，產(chǎn)生的酒精少。②酒精發(fā)酵后期如果密封不嚴(yán)，則酵母菌數(shù)量充足，但是不能產(chǎn)生酒精。
5．腐乳的制作
（1）豆腐的選?。憾垢恳?0%為宜，若含水量過高，豆腐塊不易成形；若含水量過低，則不利于毛霉的生長。
（2）控制好材料的用量
①鹽的用量：豆腐毛坯∶鹽＝5∶1，鹽的濃度過低，不足以抑制微生物生長，可能導(dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì)；鹽的濃度過高，會影響腐乳的口味。
②酒的用量：鹵湯中酒的含量控制在12%左右為宜。酒精含量的高低與腐乳后期發(fā)酵時間的長短有很大關(guān)系：酒精含量越高，對蛋白酶的抑制作用也越大，會使腐乳成熟時間延長；酒精含量過低，蛋白酶的活性高，加快蛋白質(zhì)的水解，但雜菌繁殖快，豆腐易腐敗，難以成塊。
（3）防止雜菌的污染
①用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。
②裝瓶腌制時，操作要迅速小心，且要逐層加鹽，離瓶口表面的鹽要鋪厚一些。
③加入鹵湯后，要用膠條將瓶口密封。封瓶時，最好將瓶口通過酒精燈的火焰，防止瓶口被污染。
（4）發(fā)酵溫度：前期發(fā)酵溫度應(yīng)保持在15～18 ℃，如溫度過低，則菌絲生長緩慢，不能進(jìn)入豆腐塊的深層；溫度過高，菌絲易老化和死亡，影響腐乳的品質(zhì)。
（5）發(fā)酵時間：發(fā)酵時間影響生化反應(yīng)速度及生化產(chǎn)物的量。
6．泡菜的制作
a．泡菜制作成功的關(guān)鍵點
（1）材料的選擇及用量
①蔬菜應(yīng)新鮮，若放置時間過長，蔬菜中的硝酸鹽易被還原成亞硝酸鹽。
②清水和鹽的質(zhì)量比為4∶1，鹽水要煮沸后冷卻。煮沸有兩大作用，一是除去水中氧氣，二是殺滅鹽水中其他細(xì)菌。
（2）防止雜菌污染：每次取樣用具要洗凈，要迅速封口。
（3）氧氣需求
①泡菜壇要選擇透氣性差的容器，以創(chuàng)造無氧環(huán)境，有利于乳酸菌發(fā)酵，防止蔬菜腐爛。
②泡菜壇壇蓋邊沿的水槽內(nèi)要注滿水，以保證乳酸菌發(fā)酵所需要的無氧環(huán)境，并注意在發(fā)酵過程中經(jīng)常補(bǔ)水。
（4）溫度：發(fā)酵溫度控制在室溫即可，最好在26～36 ℃。溫度過高，則易滋生雜菌，溫度過低則發(fā)酵時間延長。
b．泡菜腌制過程中乳酸菌、乳酸和亞硝酸鹽的變化
發(fā)酵時期
乳酸菌
乳酸
亞硝酸鹽
發(fā)酵初期
少（有O2，乳酸菌活動受抑制）
少
增加（硝酸鹽還原菌的作用）
發(fā)酵中期
最多（乳酸抑制其他菌活動）
積累、增多、pH下降
下降（硝酸鹽還原菌受抑制，部分亞硝酸鹽被分解）
發(fā)酵
后期
減少（乳酸繼續(xù)積累，pH繼續(xù)下降，抑制其活動）
繼續(xù)增多，pH繼續(xù)下降
下降至相對穩(wěn)定（硝酸鹽還原菌被完全抑制）
含量變化曲線



時期
乳酸菌
乳酸
亞硝酸鹽
注意
亞硝酸鹽是硝酸鹽還原菌促進(jìn)硝酸鹽還原形成的，而不是硝化細(xì)菌氧化氨形成的


考法一
（2020·山東高考真題）野生型大腸桿菌可以在基本培養(yǎng)基上生長，發(fā)生基因突變產(chǎn)生的氨基酸依賴型菌株需要在基本培養(yǎng)基上補(bǔ)充相應(yīng)氨基酸才能生長。將甲硫氨酸依賴型菌株M和蘇氨酸依賴型菌株N單獨接種在基本培養(yǎng)基上時，均不會產(chǎn)生菌落。某同學(xué)實驗過程中發(fā)現(xiàn)，將M、N菌株混合培養(yǎng)一段時間，充分稀釋后再涂布到基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后出現(xiàn)許多由單個細(xì)菌形成的菌落，將這些菌落分別接種到基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后均有菌落出現(xiàn)。該同學(xué)對這些菌落出現(xiàn)原因的分析，不合理的是（ ）
A．操作過程中出現(xiàn)雜菌污染
B．M、N菌株互為對方提供所缺失的氨基酸
C．混合培養(yǎng)過程中，菌株獲得了對方的遺傳物質(zhì)
D．混合培養(yǎng)過程中，菌株中已突變的基因再次發(fā)生突變
【答案】B
【分析】
本題以大腸桿菌營養(yǎng)缺陷型為材料進(jìn)行相關(guān)實驗探究為情境，考查考生綜合運用所學(xué)知識分析實驗結(jié)果的能力。
【詳解】
A.操作過程當(dāng)中出現(xiàn)雜菌污染，基本培養(yǎng)基上生長的為雜菌，A合理；
B.若M、N菌株互為對方提供所缺失的氨基酸形成的菌落，需要MN混合在一起才能生存，而該菌落來自于單個細(xì)菌形成的菌落，單個細(xì)菌不可能混合培養(yǎng)的細(xì)菌。B項不合理。
C.M、N菌株混合培養(yǎng)后在基本培養(yǎng)基上可以生存。推測可能是混合培養(yǎng)過程當(dāng)中，菌株間發(fā)生了基因交流，獲得了對方的遺傳物質(zhì)，C合理；
D.基因突變是不定向的，在混合培養(yǎng)過程中，菌株當(dāng)中已突變的基因也可能再次發(fā)生突變得到可在基本培養(yǎng)基上生存的野生型大腸桿菌，D合理。
故選B。

考法二
（2007·全國高考真題）通過發(fā)酵罐發(fā)酵可大規(guī)模生產(chǎn)谷氨酸，生產(chǎn)中常用的菌種是好氧的谷氨酸棒狀桿菌。下面有關(guān)谷氨酸發(fā)酵過程的敘述，正確的是
A．溶氧充足時，發(fā)酵液中有乳酸的積累
B．發(fā)酵液中碳源和氮源比例的變化不影響谷氨酸的產(chǎn)量
C．菌體中谷氨酸的排出，有利于谷氨酸的合成和產(chǎn)量的提高
D．發(fā)酵液PH值呈堿性時，有利于谷氨酸棒狀桿菌生成乙酰谷氨酰胺
【答案】C
【詳解】
A、谷氨酸棒狀桿菌是好氧型細(xì)菌，在氧氣充足時，不會有乳酸的積累，A錯誤；
B、碳源與氮源之比影響谷氨酸的產(chǎn)量，當(dāng)培養(yǎng)基中碳源與氮源之比為4：1時，菌體大量繁殖而產(chǎn)生的谷氨酸少，而當(dāng)培養(yǎng)基中碳源與氮源之比為3：1時，菌體繁殖受到抑制，谷氨酸的合成量增加，B錯誤；
C、谷氨酸合成過多時，會抑制谷氨酸脫氫酶的活性，從而使谷氨酸的合成過程中斷，因此需要及時排出谷氨酸，才可以解除抑制作用，C正確；
D、當(dāng)發(fā)酵液的pH為酸性時，谷氨酸棒狀桿菌會產(chǎn)生乙酰谷氨酰胺，D錯誤。
故選C。


16．下列有關(guān)微生物實驗室培養(yǎng)的說法正確的有
A．制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的操作順序為計算、稱量、溶化、消毒、倒平板
B．分離能分解纖維素的細(xì)菌時要以纖維素作為培養(yǎng)基中唯一的碳源
C．培養(yǎng)不同微生物的培養(yǎng)基時都要將pH調(diào)至中性或微堿性
D．稀釋涂布平板法和平板劃線法均可以統(tǒng)計待測菌液中的活菌數(shù)目
【答案】B
【分析】
閱讀題干可知，本題是與微生物實驗室培養(yǎng)與應(yīng)用有關(guān)的題目，根據(jù)選項涉及的具體內(nèi)容回憶相關(guān)知識點進(jìn)行判斷．
【詳解】
制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的操作順序為計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板，A錯誤；分離能分解纖維素的細(xì)菌時要以纖維素作為培養(yǎng)基中唯一的碳源，B正確；培養(yǎng)霉菌時，需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，C錯誤；平板劃線法不能用于統(tǒng)計待測菌液中活菌的數(shù)目，D錯誤。
17．下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述，正確的是 ( )
A．平板劃線法接種時，只需在每次劃線操作之前對接種環(huán)進(jìn)行滅菌即可
B．溶化牛肉膏時，稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯
C．純化培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿應(yīng)倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)的搖床上培養(yǎng)
D．觀察菌落時，應(yīng)將培養(yǎng)皿蓋拿掉后在顯微鏡下進(jìn)行觀察計數(shù)
【答案】B
【分析】
1、微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。2、平板劃線操作的注意事項：①第一次劃線及每次劃線之前都需要灼燒接種環(huán)滅菌；②灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種；③劃線時最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連；④劃線用力大小要適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。
【詳解】
用平板劃線法接種微生物時，每次劃線前后都要對接種環(huán)進(jìn)行滅菌，A錯誤；將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯，加入少量的水，加熱，B正確；純化培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿應(yīng)倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)靜止培養(yǎng)，不需要在搖床上培養(yǎng)，C錯誤；為防止空氣中雜菌污染培養(yǎng)物，觀察菌落時，不能打開培養(yǎng)皿的蓋子，D錯誤。
18．下列有關(guān)培養(yǎng)基和菌種鑒定的敘述不正確的是（ ）
A．菌落的大小、顏色、有無莢膜、隆起程度等特征都可作為菌種鑒定的依據(jù)
B．可利用固體培養(yǎng)基上菌落的特征來判斷和鑒別細(xì)菌的類型
C．利用剛果紅培養(yǎng)基上是否形成透明圈來篩選纖維素分解菌
D．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑鑒定尿素分解菌
【答案】A
【解析】
菌落的大小、顏色、隆起程度等特征都可作為菌種鑒定的依據(jù)，但是有無莢膜通過肉眼無法觀察，A錯誤； 鑒別培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，可利用固體培養(yǎng)基上菌落的特征來判斷和鑒別細(xì)菌的類型，B正確； 當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅-纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，可通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌，C正確； 在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑鑒定尿素分解菌，D正確。
19．下列關(guān)于微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用的敘述正確的是
A．配制培養(yǎng)基時應(yīng)先調(diào)PH后滅菌
B．在培養(yǎng)基中加入青霉素可抑制真菌而促進(jìn)細(xì)菌生長
C．培養(yǎng)基中加入伊紅—美藍(lán)試劑，長出的菌落為大腸桿菌菌落
D．向液體培養(yǎng)基中通入氧氣能促進(jìn)破傷風(fēng)桿菌的生長
【答案】A
【解析】
【分析】
本題考查培養(yǎng)基配置的步驟，選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基的區(qū)別等。制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，其基本過程為計算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板六個步驟。選擇培養(yǎng)基：培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需要的微生物的生長，培養(yǎng)、分離出特定微生物（如培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素；培養(yǎng)金黃色葡萄球菌，可在培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽）。鑒別培養(yǎng)基：是加入一些化學(xué)物質(zhì)，微生物的代謝產(chǎn)物等可以和這種物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的變化，以便鑒別和篩選某種微生物。
【詳解】
配制培養(yǎng)基應(yīng)先調(diào)pH再進(jìn)行滅菌，否則會被再次污染，A正確；青霉素能夠干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，在培養(yǎng)基中加入青霉素可抑制細(xì)菌而促進(jìn)真菌生長，B錯誤；伊紅美藍(lán)是專一鑒定大腸桿菌的指示劑，利用伊紅—美藍(lán)固體培養(yǎng)基可以鑒定大腸桿菌是否存在，C錯誤；破傷風(fēng)桿菌的代謝類型屬于異養(yǎng)厭氧型，向其培養(yǎng)基中通入氧氣會抑制其生長，D錯誤；故選A。


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