1.舉例說出蛋白質(zhì)工程崛起的緣由。
2.簡述蛋白質(zhì)工程的原理。
3.嘗試運用逆向思維分析和解決問題。
二、 教學(xué)重點和難點
1.教學(xué)重點
(1)為什么要開展蛋白質(zhì)工程的研究?
(2)蛋白質(zhì)工程的原理。
2.教學(xué)難點
蛋白質(zhì)工程的原理。
三、 教學(xué)過程
一、蛋白質(zhì)工程崛起的緣由(P26)
引言:要想讓一種生物的性狀在另一種生物中表達,在種內(nèi)可以用常規(guī)雜交育種的辦法實現(xiàn),但要使有生殖隔離的種間生物實現(xiàn)基因交流,就顯得力不從心了?;蚬こ痰恼Q生,為克服這一遠緣雜交的障礙問題,帶來了新的希望。于是取得了豐碩成果:大腸桿菌為人類生產(chǎn)出了胰島素,牛的乳腺生物反應(yīng)器為人類制造出了蛋白質(zhì)類藥物,煙草植物體內(nèi)含有了某種藥物蛋白……至此,人們也只是實現(xiàn)了世界上現(xiàn)有基因在轉(zhuǎn)基因生物中的表達。但一個新問題出現(xiàn)了,生物產(chǎn)生的天然蛋白質(zhì)是在長期進化過程中形成的,它的結(jié)構(gòu)、性能不能完全滿足人類生產(chǎn)和生活的需要。舉例:P26干擾素例子、工業(yè)用酶的例子
于是要對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進行改造,制造出目前從天然蛋白質(zhì)中找不到的蛋白質(zhì)。這樣人們又開始了新一輪的探索,蛋白質(zhì)工程應(yīng)運而生了。
二、蛋白質(zhì)工程的原理
回顧已學(xué)習(xí)過中心法則及蛋白質(zhì)具有復(fù)雜的空間結(jié)構(gòu)等知識。中心法則告訴我們遺傳信息的流動方向如圖1-4所示。
圖1-4 遺傳信息的流動方向
那么,既然蛋白質(zhì)的功能是由DNA決定的,那么要制造出新的蛋白質(zhì),就要改造DNA。所以蛋白質(zhì)工程的原理應(yīng)該是中心法則的逆推。(結(jié)合課本中插圖)
小結(jié):蛋白質(zhì)工程的概念(是研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)及結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,然后人為地設(shè)計一個新蛋白質(zhì),并按這個設(shè)計的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)去改變其基因結(jié)構(gòu),從而產(chǎn)生新的蛋白質(zhì)。或者從蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系出發(fā),定向地改造天然蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),特別是對功能基因的修飾,也可以制造新型的蛋白質(zhì)。)
思考:蛋白質(zhì)工程操作程序的基本思路與基因工程有什么不同?
答:基因工程是遵循中心法則,從DNA→mRNA→蛋白質(zhì)→折疊產(chǎn)生功能,基本上是生產(chǎn)出自然界已有的蛋白質(zhì)。
蛋白質(zhì)工程是按照以下思路進行的:確定蛋白質(zhì)的功能→蛋白質(zhì)應(yīng)有的高級結(jié)構(gòu)→蛋白質(zhì)應(yīng)具備的折疊狀態(tài)→應(yīng)有的氨基酸序列→應(yīng)有的堿基排列,可以創(chuàng)造自然界不存在的蛋白質(zhì)。
三、蛋白質(zhì)工程的進展和前景
1、蛋白質(zhì)工程的誕生是有其理論與技術(shù)條件的,它是隨著分子生物學(xué)、晶體學(xué)以及計算機技術(shù)的發(fā)展而誕生的,與基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、生物信息學(xué)的發(fā)展等因素有關(guān)
2、現(xiàn)狀:成功的例子不多,主要是因為蛋白質(zhì)發(fā)揮其功能需要依賴于正確的空間結(jié)構(gòu),而科學(xué)家目前對大多數(shù)蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)了解很少。
科學(xué)探索之路的漫長、艱辛和永無止境。
四、 答案和提示
(一)思考與探究 1.蛋白質(zhì)工程是應(yīng)怎樣的需求而崛起的?
提示(供教師在教學(xué)中參考):蛋白質(zhì)工程的崛起主要是工業(yè)生產(chǎn)和基礎(chǔ)理論研究的需要。而結(jié)構(gòu)生物學(xué)對大量蛋白質(zhì)分子的精確立體結(jié)構(gòu)及其復(fù)雜的生物功能的分析結(jié)果,為設(shè)計改造天然蛋白質(zhì)提供了藍圖。分子遺傳學(xué)的以定點突變?yōu)橹行牡幕虿僮骷夹g(shù)為蛋白質(zhì)工程提供了手段。
在已研究過的幾千種酶中,只有極少數(shù)可以應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn),絕大多數(shù)酶都不能應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn),這些酶雖然在自然狀態(tài)下有活性,但在工業(yè)生產(chǎn)中沒有活性或活性很低。這是因為工業(yè)生產(chǎn)中每一步的反應(yīng)體系中常常會有酸、堿或有機溶劑存在,反應(yīng)溫度較高,在這種條件下,大多數(shù)酶會很快變性失活。提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性是工業(yè)生產(chǎn)中一個非常重要的課題。一般來說,提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性包括:延長酶的半衰期,提高酶的熱穩(wěn)定性,延長藥用蛋白的保存期,抵御由于重要氨基酸氧化引起的活性喪失等。
下面舉一個如何通過蛋白質(zhì)工程來提高重組β-干擾素專一活性和穩(wěn)定性的例子。干擾素是一種抗病毒、抗腫瘤的藥物。將人的干擾素的cDNA在大腸桿菌中進行表達,產(chǎn)生的干擾素的抗病毒活性為106 U/mg,只相當(dāng)于天然產(chǎn)品的十分之一,雖然在大腸桿菌中合成的β-干擾素量很多,但多數(shù)是以無活性的二聚體形式存在。為什么會這樣?如何改變這種狀況?研究發(fā)現(xiàn),β-干擾素蛋白質(zhì)中有3個半胱氨酸(第17位、31位和141位),推測可能是有一個或幾個半胱氨酸形成了不正確的二硫鍵。研究人員將第17位的半胱氨酸,通過基因定點突變改變成絲氨酸,結(jié)果使大腸桿菌中生產(chǎn)的β-干擾素的抗病性活性提高到108 U/mg,并且比天然β-干擾素的貯存穩(wěn)定性高很多。
在基礎(chǔ)理論研究方面,蛋白質(zhì)工程是研究多種蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能、蛋白質(zhì)折疊、蛋白質(zhì)分子設(shè)計等一系列分子生物學(xué)基本問題的一種新型的、強有力的手段。通過對蛋白質(zhì)工程的研究,可以深入地揭示生命現(xiàn)象的本質(zhì)和生命活動的規(guī)律。
2.蛋白質(zhì)工程操作程序的基本思路與基因工程有什么不同?
答:基因工程是遵循中心法則,從DNA→mRNA→蛋白質(zhì)→折疊產(chǎn)生功能,基本上是生產(chǎn)出自然界已有的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)工程是按照以下思路進行的:確定蛋白質(zhì)的功能→蛋白質(zhì)應(yīng)有的高級結(jié)構(gòu)→蛋白質(zhì)應(yīng)具備的折疊狀態(tài)→應(yīng)有的氨基酸序列→應(yīng)有的堿基排列,可以創(chuàng)造自然界不存在的蛋白質(zhì)。
3.你知道酶工程嗎?絕大多數(shù)酶都是蛋白質(zhì),酶工程與蛋白質(zhì)工程有什么區(qū)別?
提示:酶工程就是指將酶所具有的生物催化作用,借助工程學(xué)的手段,應(yīng)用于生產(chǎn)、生活、醫(yī)療診斷和環(huán)境保護等方面的一門科學(xué)技術(shù)。概括地說,酶工程是由酶制劑的生產(chǎn)和應(yīng)用兩方面組成的。酶工程的應(yīng)用主要集中于食品工業(yè)、輕工業(yè)以及醫(yī)藥工業(yè)中。α-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和葡萄糖異構(gòu)酶這三個酶連續(xù)作用于淀粉,就可以代替蔗糖生產(chǎn)出高果糖漿;蛋白酶用于皮革脫毛膠以及洗滌劑工業(yè);固定化酶還可以治療先天性缺酶病或是器官缺損引起的某些功能的衰竭等。至于我們?nèi)粘I钪兴姷降募用赶匆路?、嫩肉粉等,就更是酶工程最直接的體現(xiàn)了。通常所說的酶工程是用工程菌生產(chǎn)酶制劑,而沒有經(jīng)過由酶的功能來設(shè)計酶的分子結(jié)構(gòu),然后由酶的分子結(jié)構(gòu)來確定相應(yīng)基因的堿基序列等步驟。因此,酶工程的重點在于對已存酶的合理充分利用,而蛋白質(zhì)工程的重點則在于對已存在的蛋白質(zhì)分子的改造。當(dāng)然,隨著蛋白質(zhì)工程的發(fā)展,其成果也會應(yīng)用到酶工程中,使酶工程成為蛋白質(zhì)工程的一部分。
(二)正文中討論題
答:(1)每種氨基酸都有對應(yīng)的三聯(lián)密碼子,只要查一下遺傳密碼子表,就可以將上述氨基酸序列的編碼序列查出來。但是由于上述氨基酸序列中有幾個氨基酸是由多個三聯(lián)密碼子編碼,因此其堿基排列組合起來就比較復(fù)雜,至少可以排列出16種,可以讓學(xué)生根據(jù)學(xué)過的排列組合知識自己排列一下。首先應(yīng)該根據(jù)三聯(lián)密碼子推出mRNA序列為GCU(或C或A或G)UGGAAA(或G)AUGUUU(或C),再根據(jù)堿基互補配對規(guī)律推出脫氧核苷酸序列:CGA(或G或T或C)ACCTTT(或C)TACAAA(或G)。
(2)確定目的基因的堿基序列后,就可以根據(jù)人類的需要改造它,通過人工合成的方法或從基因庫中獲取。
(三)異想天開 能不能根據(jù)人類需要的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),設(shè)計相應(yīng)的基因,導(dǎo)入合適的細菌中,讓細菌生產(chǎn)人類所需要的蛋白質(zhì)食品呢?
提示:理論上講可以,但目前還沒有真正成功的例子。一些報道利用細菌生產(chǎn)人類需要的蛋白質(zhì)往往都是自然界已經(jīng)存在的蛋白質(zhì),并非完全是人工設(shè)計出來而自然不存在的蛋白質(zhì)。主要原因是蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜,人類對蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)和在生物體內(nèi)如何行使功能知之甚少,很難設(shè)計出一個嶄新而又具有生命功能作用的蛋白質(zhì),而且一個嶄新的蛋白質(zhì)會帶來什么危害也是人們所擔(dān)心的。
(四)旁欄思考題 1.你知道人類蛋白質(zhì)組計劃嗎?它與蛋白質(zhì)工程有什么關(guān)系?我國科學(xué)家承擔(dān)了什么任務(wù)?
提示:人類蛋白質(zhì)組計劃是繼人類基因組計劃之后,生命科學(xué)乃至自然科學(xué)領(lǐng)域一項重大的科學(xué)命題。2001年,國際人類蛋白質(zhì)組組織宣告成立。之后,該組織正式提出啟動了兩項重大國際合作行動:一項是由中國科學(xué)家牽頭執(zhí)行的“人類肝臟蛋白質(zhì)組計劃”;另一項是以美國科學(xué)家牽頭執(zhí)行的“人類血漿蛋白質(zhì)組計劃”,由此拉開了人類蛋白質(zhì)組計劃的帷幕。
“人類肝臟蛋白質(zhì)組計劃”是國際上第一個人類組織/器官的蛋白質(zhì)組計劃,由我國賀福初院士牽頭,這是中國科學(xué)家第一次領(lǐng)銜的重大國際科研協(xié)作計劃,總部設(shè)在北京,目前有16個國家和地區(qū)的80多個實驗室報名參加。它的科學(xué)目標是揭示并確認肝臟的蛋白質(zhì),為重大肝病預(yù)防、診斷、治療和新藥研發(fā)的突破提供重要的科學(xué)基礎(chǔ)。
人類蛋白質(zhì)組計劃的深入研究將是對蛋白質(zhì)工程的有力推動和理論支持。
2.對天然蛋白質(zhì)進行改造,你認為應(yīng)該直接對蛋白質(zhì)分子進行操作,還是通過對基因的操作來實現(xiàn)?
答:毫無疑問應(yīng)該從對基因的操作來實現(xiàn)對天然蛋白質(zhì)改造,主要原因如下:
(1)任何一種天然蛋白質(zhì)都是由基因編碼的,改造了基因即對蛋白質(zhì)進行了改造,而且改造過的蛋白質(zhì)可以遺傳下去。如果對蛋白質(zhì)直接改造,即使改造成功,被改造過的蛋白質(zhì)分子還是無法遺傳的。
(2)對基因進行改造比對蛋白質(zhì)直接改造要容易操作,難度要小得多。

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1.4 蛋白質(zhì)工程的崛起

版本: 人教版 (新課標)

年級: 選修3《現(xiàn)代生物科技專題》

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