考點(diǎn)1 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和干細(xì)胞的應(yīng)用
學(xué)生用書(shū)P333
1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)
（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理、條件和過(guò)程
辨析 細(xì)胞貼壁和接觸抑制
（1）細(xì)胞貼壁是指體外培養(yǎng)的細(xì)胞貼附在培養(yǎng)瓶的瓶壁上生長(zhǎng)的現(xiàn)象；接觸抑制是指當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞通常會(huì)停止分裂增殖的現(xiàn)象。
（2）細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)對(duì)培養(yǎng)瓶的要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無(wú)毒、易于貼附。
（3）應(yīng)對(duì)接觸抑制現(xiàn)象的方法是將貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細(xì)胞繼續(xù)增殖。
（2）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)
2.干細(xì)胞的類型及其應(yīng)用
（1）干細(xì)胞的類型
（2）干細(xì)胞的應(yīng)用
基礎(chǔ)自測(cè)
1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)選用的培養(yǎng)材料大多為動(dòng)物的受精卵。（ × ）
2.多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，其培養(yǎng)液所需的適宜pH為6.8～7.0。（ × ）
3.幼齡動(dòng)物的細(xì)胞比老齡動(dòng)物的細(xì)胞更容易進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。（ √ ）
4.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的原理是動(dòng)物細(xì)胞的全能性。（ × ）
5.培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的第一代（即第一次細(xì)胞增殖）被稱為原代培養(yǎng)。（ × ）
6.肝細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中通常在培養(yǎng)液中通入5％的CO2刺激細(xì)胞呼吸。（ × ）
7.在一定條件下，胚胎干細(xì)胞能分化成成年動(dòng)物體內(nèi)任何一種類型的細(xì)胞。（ √ ）
8.干細(xì)胞存在于早期胚胎、骨髓和臍帶血等多種組織和器官中。（ √ ）
情境應(yīng)用
自身皮膚移植是治療創(chuàng)傷、燒傷及其他因素所致皮膚缺損的常用方法。這種治療方式，需要先取患者自身細(xì)胞，經(jīng)體外培養(yǎng)獲得自體健康皮膚，再移植到創(chuàng)面上。培養(yǎng)自身細(xì)胞時(shí)，需要進(jìn)行原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)，進(jìn)行傳代培養(yǎng)的原因是什么？
提示 貼壁細(xì)胞在生長(zhǎng)增殖時(shí)會(huì)發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象，因此需要進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
深度思考
1.在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，合成培養(yǎng)基中加入血清的原因是什么？用胰蛋白酶處理組織塊使其分散成單個(gè)細(xì)胞的目的是什么？
提示 加入血清的原因是血清中含有多種未知的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子以及其他活性物質(zhì)，可以補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)。用胰蛋白酶處理組織塊使其分散成單個(gè)細(xì)胞，可以使細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸，保證細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)，以及細(xì)胞內(nèi)代謝物及時(shí)排出。
2.傳代培養(yǎng)時(shí)為什么不選用胃蛋白酶分散細(xì)胞？
提示 多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2～7.4，此環(huán)境下胃蛋白酶失去活性。
3.為什么說(shuō)iPS細(xì)胞的應(yīng)用前景要優(yōu)于ES細(xì)胞？
提示 ES細(xì)胞必須從胚胎中獲取，涉及倫理問(wèn)題，限制了其在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用。iPS細(xì)胞的誘導(dǎo)過(guò)程無(wú)須破壞胚胎，而且iPS細(xì)胞可以來(lái)自病人自身的體細(xì)胞，將它移植回病人體內(nèi)后，理論上可以避免免疫排斥反應(yīng)。
4.科學(xué)家已嘗試采用多種方法來(lái)制備iPS細(xì)胞，嘗試說(shuō)出幾種獲取iPS細(xì)胞的方法。
提示 借助載體將特定基因?qū)爰?xì)胞中，直接將特定蛋白導(dǎo)入細(xì)胞中或者用小分子化合物等來(lái)誘導(dǎo)形成iPS細(xì)胞。iPS細(xì)胞最初是由成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來(lái)的，后來(lái)發(fā)現(xiàn)已分化的T細(xì)胞、B細(xì)胞等也能被誘導(dǎo)為iPS細(xì)胞。
學(xué)生用書(shū)P335
命題點(diǎn)1 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用
1.[2022湖北]某興趣小組開(kāi)展小鼠原代神經(jīng)元培養(yǎng)的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其培養(yǎng)的原代神經(jīng)元生長(zhǎng)緩慢，其原因不可能是（ A ）
A.實(shí)驗(yàn)材料取自小鼠胚胎的腦組織
B.為了防止污染將培養(yǎng)瓶瓶口密封
C.血清經(jīng)過(guò)高溫處理后加入培養(yǎng)基
D.所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性
解析 小鼠胚胎的腦組織中含有豐富的神經(jīng)元，這些神經(jīng)元增殖能力強(qiáng)，在體外培養(yǎng)的條件下一般不會(huì)生長(zhǎng)緩慢，A符合題意；將培養(yǎng)瓶瓶口密封會(huì)使培養(yǎng)液中缺氧，影響細(xì)胞進(jìn)行有氧呼吸，從而造成供能不足，可能會(huì)使原代神經(jīng)元生長(zhǎng)緩慢甚至死亡，B不符合題意；血清經(jīng)過(guò)高溫處理后，其活性成分會(huì)因變性而失去原有功能，因此，將血清經(jīng)過(guò)高溫處理后加入培養(yǎng)基，可能會(huì)使原代神經(jīng)元生長(zhǎng)緩慢，C不符合題意；小鼠內(nèi)環(huán)境呈弱堿性，若使用呈弱酸性的培養(yǎng)基培養(yǎng)小鼠原代神經(jīng)元，可能會(huì)導(dǎo)致原代神經(jīng)元生長(zhǎng)緩慢，D不符合題意。
2.[2021浙江1月改編]如圖為動(dòng)物成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程示意圖。下列敘述正確的是（ C ）
A.步驟①的操作不需要在無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行
B.步驟②中用鹽酸溶解細(xì)胞間物質(zhì)使細(xì)胞分離
C.步驟③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶處理
D.步驟④培養(yǎng)過(guò)程中遺傳物質(zhì)不會(huì)發(fā)生改變
解析 為避免雜菌污染，步驟①的切取組織操作需要在無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境條件下進(jìn)行，A錯(cuò)誤。步驟②需要用胰蛋白酶處理，使細(xì)胞分離，B錯(cuò)誤。步驟③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶處理貼壁細(xì)胞，使細(xì)胞分離，以便分瓶進(jìn)行傳代培養(yǎng)，C正確。步驟④為傳代培養(yǎng)過(guò)程，該過(guò)程中部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)會(huì)發(fā)生改變，D錯(cuò)誤。
命題點(diǎn)2 干細(xì)胞的培養(yǎng)和應(yīng)用分析
3.[2023海南]某團(tuán)隊(duì)通過(guò)多代細(xì)胞培養(yǎng)，將小鼠胚胎干細(xì)胞的Y染色體去除，獲得XO胚胎干細(xì)胞，再經(jīng)過(guò)一系列處理，使之轉(zhuǎn)變?yōu)橛泄δ艿穆涯讣?xì)胞。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（ A ）
A.營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)充足時(shí)，傳代培養(yǎng)的胚胎干細(xì)胞不會(huì)發(fā)生接觸抑制
B.獲得XO胚胎干細(xì)胞的過(guò)程發(fā)生了染色體數(shù)目變異
C.XO胚胎干細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)橛泄δ艿穆涯讣?xì)胞的過(guò)程發(fā)生了細(xì)胞分化
D.若某瀕危哺乳動(dòng)物僅存雄性個(gè)體，可用該法獲得有功能的卵母細(xì)胞用于繁育
解析 營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)充足時(shí)，傳代培養(yǎng)的胚胎干細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到一定程度時(shí)會(huì)發(fā)生接觸抑制，A錯(cuò)誤；據(jù)題干“將小鼠胚胎干細(xì)胞……XO胚胎干細(xì)胞”可知，獲得XO胚胎干細(xì)胞的過(guò)程發(fā)生了染色體數(shù)目變異，B正確；依據(jù)細(xì)胞分化的概念可知，XO胚胎干細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)橛泄δ艿穆涯讣?xì)胞的過(guò)程發(fā)生了細(xì)胞分化，C正確；若某瀕危哺乳動(dòng)物僅存雄性個(gè)體，可以通過(guò)一系列處理獲得有功能的卵母細(xì)胞，用于繁育，D正確。
4.[2024大慶質(zhì)檢]誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）在許多方面類似于胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞），科學(xué)家直接將特定蛋白導(dǎo)入成年體細(xì)胞誘導(dǎo)出iPS細(xì)胞，如圖所示。下列說(shuō)法正確的是（ B ）
A.人工誘導(dǎo)細(xì)胞核重編程過(guò)程中細(xì)胞中的遺傳物質(zhì)會(huì)發(fā)生改變
B.iPS細(xì)胞分化產(chǎn)生多種細(xì)胞的實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)
C.人體的骨髓造血干細(xì)胞屬于iPS細(xì)胞的一種
D.表皮細(xì)胞衰老時(shí)，其細(xì)胞核體積變小，呼吸速率減慢
解析 人工誘導(dǎo)細(xì)胞核重編程過(guò)程導(dǎo)致細(xì)胞分化，形成iPS細(xì)胞，細(xì)胞分化是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果，細(xì)胞中的遺傳物質(zhì)沒(méi)有發(fā)生改變，因此，人工誘導(dǎo)細(xì)胞核重編程過(guò)程中細(xì)胞中的遺傳物質(zhì)不會(huì)發(fā)生改變，A錯(cuò)誤；細(xì)胞分化是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果，iPS細(xì)胞分化產(chǎn)生多種細(xì)胞的實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)，B正確；人體的骨髓造血干細(xì)胞不是全能干細(xì)胞，其分裂和分化只能形成血細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等，而iPS細(xì)胞類似于胚胎干細(xì)胞，可以分化出各種細(xì)胞，故人體的骨髓造血干細(xì)胞不屬于iPS細(xì)胞的一種，C錯(cuò)誤；表皮細(xì)胞衰老時(shí)，其細(xì)胞核體積變大，D錯(cuò)誤。
考點(diǎn)2 動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)和單克隆抗體
學(xué)生用書(shū)P336
1.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)
（1）動(dòng)物細(xì)胞融合
（2）辨析動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交
2.單克隆抗體及其應(yīng)用
基礎(chǔ)自測(cè)
1.動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程中既有細(xì)胞膜融合也有核的融合。（ √ ）
2.動(dòng)物細(xì)胞融合的結(jié)果是形成單核的雜種細(xì)胞，植物體細(xì)胞雜交的結(jié)果是得到雜種植株。（ √ ）
3.用特定的抗原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫后，從小鼠脾臟中只能得到一種B淋巴細(xì)胞。（ × ）
4.單克隆抗體是單個(gè)B淋巴細(xì)胞增殖并產(chǎn)生的抗體。（ × ）
5.單克隆抗體制備過(guò)程中的兩次篩選目的相同。（ × ）
6.雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)培養(yǎng)，是為了獲得能產(chǎn)生單克隆抗體的胚胎。（ × ）
深度思考
1.為什么誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合時(shí)要用滅活的病毒，而不用活病毒？誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理是什么？
提示 活病毒可能會(huì)感染細(xì)胞，而滅活的病毒不會(huì)感染細(xì)胞。誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理是病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開(kāi)，細(xì)胞發(fā)生融合。
2.ADC在臨床應(yīng)用上的作用機(jī)理是什么？
提示 其作用機(jī)理是通過(guò)單克隆抗體的靶向作用特異性地識(shí)別并結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面的抗原，然后利用細(xì)胞本身具備的內(nèi)吞作用使化學(xué)藥物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用，從而達(dá)到殺死腫瘤細(xì)胞的目的。
學(xué)生用書(shū)P337
命題點(diǎn)1 動(dòng)物細(xì)胞融合的過(guò)程分析
1.細(xì)胞融合技術(shù)是研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫等的重要手段，如圖A、B表示兩種動(dòng)物細(xì)胞。下列有關(guān)說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ D ）
A.圖示過(guò)程與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同
B.仙臺(tái)病毒需要用紫外線等滅活使其失去感染能力
C.圖中C細(xì)胞進(jìn)行的細(xì)胞分裂方式為有絲分裂
D.將A、B細(xì)胞等量混合誘導(dǎo)得到的融合細(xì)胞即為雜交細(xì)胞
解析 圖示過(guò)程為動(dòng)物細(xì)胞的融合，該過(guò)程與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同，都依賴于細(xì)胞膜的流動(dòng)性，A正確；用來(lái)誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的病毒，需要用紫外線等滅活使其失去感染能力，B正確；圖中C細(xì)胞進(jìn)行的細(xì)胞分裂方式為有絲分裂，C正確；將A、B細(xì)胞等量混合誘導(dǎo)得到的融合細(xì)胞可能有三種類型：AA型、BB型、AB型（雜交細(xì)胞），D錯(cuò)誤。
2.[2022江蘇，多選]如圖表示利用細(xì)胞融合技術(shù)進(jìn)行基因定位的過(guò)程，在人—鼠雜種細(xì)胞中人的染色體會(huì)以隨機(jī)方式丟失，通過(guò)分析基因產(chǎn)物進(jìn)行基因定位?，F(xiàn)檢測(cè)細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中人的4種酶活性，只有Ⅱ具有芳烴羥化酶活性，只有Ⅲ具有胸苷激酶活性，Ⅰ、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脫氫酶活性。下列相關(guān)敘述正確的有（ ACD ）
A.加入滅活仙臺(tái)病毒的作用是促進(jìn)細(xì)胞融合
B.細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分別為人—人、人—鼠、鼠—鼠融合細(xì)胞
C.芳烴羥化酶基因位于2號(hào)染色體上，乳酸脫氫酶基因位于11號(hào)染色體上
D.胸苷激酶基因位于17號(hào)染色體上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色體上
解析 加入滅活仙臺(tái)病毒的作用是促進(jìn)細(xì)胞融合，A正確。細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均是在選擇培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選過(guò)的細(xì)胞，所以均是人—鼠雜交細(xì)胞，B錯(cuò)誤。由題意可知，只有Ⅱ具有芳烴羥化酶活性，分析題圖可知，相關(guān)基因位于2號(hào)染色體上；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脫氫酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均含有11號(hào)染色體，故乳酸脫氫酶基因位于11號(hào)染色體上，C正確。只有Ⅲ具有胸苷激酶活性，Ⅲ含有17號(hào)染色體，而Ⅰ、Ⅱ不含有17號(hào)染色體，故相關(guān)基因位于17號(hào)染色體上；Ⅰ、Ⅲ都有X染色體和11號(hào)染色體，都有磷酸甘油酸激酶活性，而Ⅱ不具有磷酸甘油酸激酶活性，故磷酸甘油酸激酶基因位于X染色體上，D正確。
命題點(diǎn)2 單克隆抗體的制備和應(yīng)用分析
3.[2023北京]甲狀旁腺激素（PTH）水平是人類多種疾病的重要診斷指標(biāo)。研究者制備單克隆抗體用于快速檢測(cè)PTH，有關(guān)制備過(guò)程的敘述不正確的是（ D ）
A.需要使用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
B.需要制備用PTH免疫的小鼠
C.利用抗原—抗體結(jié)合的原理篩選雜交瘤細(xì)胞
D.篩選能分泌多種抗體的單個(gè)雜交瘤細(xì)胞
解析 在單克隆抗體制備過(guò)程中需要用到動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，還需要制備用PTH 免疫的小鼠，A、B正確；若要篩選能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，需要利用抗原—抗體結(jié)合的原理進(jìn)行篩選，C正確；一般來(lái)說(shuō)，單個(gè)雜交瘤細(xì)胞只能分泌一種抗體，D錯(cuò)誤。
4.[2023湖北節(jié)選，11分]某病毒對(duì)動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)危害十分嚴(yán)重。我國(guó)學(xué)者擬以該病毒外殼蛋白A為抗原來(lái)制備單克隆抗體，以期快速檢測(cè)該病毒，其主要技術(shù)路線如圖所示。
回答下列問(wèn)題：
（1）添加脂溶性物質(zhì)PEG可促進(jìn)細(xì)胞融合，該過(guò)程中PEG對(duì)細(xì)胞膜的作用是 改變細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)（使兩個(gè)細(xì)胞接觸處質(zhì)膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組） 。
（2）在雜交瘤細(xì)胞篩選過(guò)程中，常使用特定的選擇培養(yǎng)基（如HAT培養(yǎng)基），該培養(yǎng)基對(duì) 未融合的（親本）細(xì)胞 和 融合的具有同種核的細(xì)胞 生長(zhǎng)具有抑制作用。
（3）單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進(jìn)行雜交，其目的是 篩選能分泌與該病毒外殼蛋白A特異性結(jié)合的抗體的雜交瘤細(xì)胞 。
解析 （1）聚乙二醇（PEG）分子能改變膜結(jié)構(gòu)，使兩個(gè)細(xì)胞接觸處質(zhì)膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組，從而導(dǎo)致質(zhì)膜相互親和、融合。（2）淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞混合后，有的細(xì)胞未融合，有的細(xì)胞已融合；融合細(xì)胞中有的是具有同種核的細(xì)胞，有的是具有不同種核的細(xì)胞（雜交瘤細(xì)胞）。使用選擇培養(yǎng)基的目的是篩選出能分泌特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞的生長(zhǎng)受到抑制，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長(zhǎng)。（3）將抗體與該病毒外殼蛋白進(jìn)行雜交的目的是從雜交瘤細(xì)胞中篩選出能分泌特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。
考點(diǎn)3 動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物
學(xué)生用書(shū)P338
1.動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)
（1）[選必3 P52“相關(guān)信息”]減數(shù)分裂Ⅱ中期（MⅡ期）卵母細(xì)胞中的“核”其實(shí)是紡錘體—染色體復(fù)合物。文中所說(shuō)的“去核”是去除該復(fù)合物。
（2）[選必3 P54“相關(guān)信息”]目前動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是顯微操作法。也有人采用梯度離心、紫外線短時(shí)間照射和化學(xué)物質(zhì)處理等方法。這些方法是在沒(méi)有穿透卵母細(xì)胞透明帶的情況下去核或使其中的DNA變性。
2.應(yīng)用前景及存在的問(wèn)題
基礎(chǔ)自測(cè)
1.動(dòng)物細(xì)胞核移植的受體細(xì)胞必須是卵母細(xì)胞。（ × ）
2.經(jīng)體細(xì)胞核移植培育出的新個(gè)體只有一個(gè)親本的遺傳性狀。（ × ）
3.克隆動(dòng)物的產(chǎn)生體現(xiàn)了動(dòng)物體細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性。（ √ ）
4.重構(gòu)胚的激活可用Ca2＋載體、蛋白酶合成抑制劑等方法。（ √ ）
5.克隆特定疾病模型的動(dòng)物可用于疾病的研究和藥物開(kāi)發(fā)。（ √ ）
6.動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是顯微操作法。（ √ ）
7.克隆牛技術(shù)涉及體細(xì)胞核移植、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、胚胎移植等過(guò)程[2022江蘇，T4C]。（ √ ）
深度思考
1.動(dòng)物體細(xì)胞核移植過(guò)程中為什么選擇MⅡ期的卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞？
提示 ①細(xì)胞大，易于操作；②卵黃多，營(yíng)養(yǎng)豐富，為胚胎發(fā)育提供充足的營(yíng)養(yǎng)；③此時(shí)具備受精能力，細(xì)胞質(zhì)中含有促使細(xì)胞核表現(xiàn)全能性的物質(zhì)。
2.通過(guò)核移植技術(shù)獲得的克隆動(dòng)物為什么與供核動(dòng)物的性狀不完全相同？
提示 ①克隆動(dòng)物絕大部分DNA來(lái)自供核細(xì)胞的細(xì)胞核，但其細(xì)胞質(zhì)中的DNA主要來(lái)自去核的卵母細(xì)胞。②性狀是基因與環(huán)境共同作用的結(jié)果，供核動(dòng)物生活的環(huán)境與克隆動(dòng)物生活的環(huán)境不完全相同，其性狀也可能和供核動(dòng)物不完全相同。③克隆動(dòng)物在個(gè)體發(fā)育過(guò)程中有可能發(fā)生基因突變，產(chǎn)生供核動(dòng)物沒(méi)有的性狀。
學(xué)生用書(shū)P338
命題點(diǎn)1 動(dòng)物體細(xì)胞核移植的原理和過(guò)程分析
1.[2023天津]根據(jù)圖分析，下列說(shuō)法正確的是（ D ）
A.子代動(dòng)物遺傳性狀和受體動(dòng)物完全一致
B.過(guò)程1需要MⅡ期去核卵母細(xì)胞
C.過(guò)程2可以大幅改良動(dòng)物性狀
D.過(guò)程2為過(guò)程3提供了量產(chǎn)方式，過(guò)程3為過(guò)程1、2提供了改良性狀的方式
解析 子代動(dòng)物的遺傳性狀與受體動(dòng)物（只提供子宮）基本無(wú)關(guān)，A錯(cuò)誤。過(guò)程1是培育試管動(dòng)物，該過(guò)程需要將獲能的精子與培養(yǎng)至MⅡ期的卵母細(xì)胞（不去核）進(jìn)行體外受精，B錯(cuò)誤。通過(guò)過(guò)程2得到克隆動(dòng)物的過(guò)程屬于無(wú)性生殖，無(wú)性生殖不能大幅改良動(dòng)物性狀，C錯(cuò)誤。通過(guò)過(guò)程2可得到大量同種個(gè)體，為過(guò)程3提供了量產(chǎn)方式；過(guò)程3運(yùn)用了轉(zhuǎn)基因技術(shù)，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)可以改變動(dòng)物性狀，培育新品種，故過(guò)程3為過(guò)程1、2提供了改良性狀的方式，D正確。
2.[2021遼寧]如圖是利用體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆優(yōu)質(zhì)奶牛的簡(jiǎn)易流程圖。有關(guān)敘述正確的是（ B ）
A.后代丁的遺傳性狀由甲和丙的遺傳物質(zhì)共同決定
B.過(guò)程①需要提供95％空氣和5％CO2的混合氣體
C.過(guò)程②常使用顯微操作去核法對(duì)受精卵進(jìn)行處理
D.過(guò)程③將激活后的重組細(xì)胞培養(yǎng)至原腸胚后移植
解析 據(jù)圖可知，后代丁的遺傳物質(zhì)來(lái)自甲牛和乙牛，丙牛只提供了胚胎發(fā)育的場(chǎng)所，并未提供遺傳物質(zhì)，故后代丁的遺傳性狀由甲和乙的遺傳物質(zhì)共同決定，A錯(cuò)誤；進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通常采用培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶，將其置于含有95％空氣和5％CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，B正確；過(guò)程②常使用顯微操作去核法對(duì)處于MⅡ期的卵母細(xì)胞進(jìn)行處理，C錯(cuò)誤；通常情況下，過(guò)程③將激活后的重組細(xì)胞培養(yǎng)至桑葚胚或囊胚階段后移植，D錯(cuò)誤。
命題變式
[設(shè)問(wèn)拓展型]（1）必須先對(duì)卵母細(xì)胞進(jìn)行去核操作，其目的是 使核移植后得到的胚胎或動(dòng)物的遺傳物質(zhì)絕大部分來(lái)自有重要利用價(jià)值的動(dòng)物提供的細(xì)胞核 。
（2）哺乳動(dòng)物的核移植可以分為胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植，通過(guò)胚胎細(xì)胞核移植獲得克隆動(dòng)物的難度 小于 （填“大于”或“小于”）體細(xì)胞核移植，其原因是 胚胎細(xì)胞分化程度相對(duì)較低，恢復(fù)全能性相對(duì)容易 。
（3）核移植過(guò)程中用物理或化學(xué)方法（如電刺激、乙醇和蛋白酶合成抑制劑等）激活重構(gòu)胚，其目的是 使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程 。
命題點(diǎn)2 克隆動(dòng)物的培育和應(yīng)用分析
3.[2024南京調(diào)研]世界上首個(gè)體細(xì)胞克隆猴“中中”在中國(guó)誕生。如圖是克隆“中中”的相關(guān)示意圖。下列敘述錯(cuò)誤的是（ C ）
A.動(dòng)物細(xì)胞核的全能性是通過(guò)體細(xì)胞核移植獲得克隆動(dòng)物成功的基礎(chǔ)
B.去核卵子可以為重組細(xì)胞全能性的表達(dá)提供所需的物質(zhì)條件
C.代孕猴對(duì)早期胚胎不發(fā)生免疫排斥，為胚胎收集提供了可能
D.克隆猴比鼠更適合作為人類疾病研究和藥物實(shí)驗(yàn)的模型動(dòng)物
解析 通過(guò)體細(xì)胞核移植技術(shù)得到克隆動(dòng)物的原理是動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性，A正確；去核卵子含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，可以為重組細(xì)胞全能性的表達(dá)提供所需的物質(zhì)條件，B正確；受體對(duì)外來(lái)胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為胚胎在受體內(nèi)的存活提供了可能，C錯(cuò)誤；猴與人在進(jìn)化上親緣關(guān)系比鼠與人近，因此，與鼠相比，克隆猴比鼠更適合作為人類疾病研究和藥物實(shí)驗(yàn)的模型動(dòng)物，D正確。
4.根據(jù)體細(xì)胞核移植技術(shù)的特點(diǎn)進(jìn)行推斷，體細(xì)胞核移植技術(shù)可以用來(lái)（ D ）
①擴(kuò)大瀕危動(dòng)物種群數(shù)量，有效提高生物多樣性
②提高某些良種家畜自然繁殖率 ③解決人體器官移植供體來(lái)源短缺的問(wèn)題 ④為科學(xué)研究提供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ⑤構(gòu)建轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物，作為生物反應(yīng)器，大規(guī)模生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白
A.①②④⑤B.①②③
C.②③④⑤D.③④⑤
解析 利用體細(xì)胞核移植技術(shù)，只能增加動(dòng)物的個(gè)體數(shù)量，不能提高生物多樣性，①錯(cuò)誤；核移植技術(shù)不能提高良種家畜自然繁殖率，自然繁殖率主要是由生物的基因決定的，②錯(cuò)誤。故選D。
1.[2022江蘇]航天員葉光富和王亞平在天宮課堂上展示了培養(yǎng)的心肌細(xì)胞跳動(dòng)的視頻。下列相關(guān)敘述正確的是（ B ）
A.培養(yǎng)心肌細(xì)胞的器具和試劑都要先進(jìn)行高壓蒸汽滅菌
B.培養(yǎng)心肌細(xì)胞的時(shí)候既需要氧氣也需要二氧化碳
C.心肌細(xì)胞在培養(yǎng)容器中通過(guò)有絲分裂不斷增殖
D.心肌細(xì)胞在神經(jīng)細(xì)胞發(fā)出的神經(jīng)沖動(dòng)的支配下跳動(dòng)
解析 培養(yǎng)心肌細(xì)胞的器具需要用高壓蒸汽滅菌法滅菌，但是部分培養(yǎng)心肌細(xì)胞所用試劑（如動(dòng)物血清）不能用高壓蒸汽滅菌法滅菌，A錯(cuò)誤；培養(yǎng)心肌細(xì)胞的時(shí)候既需要氧氣（有助于心肌細(xì)胞進(jìn)行有氧呼吸）也需要二氧化碳（有助于維持培養(yǎng)液的pH），B正確；在體外培養(yǎng)條件下，心肌細(xì)胞通過(guò)有絲分裂進(jìn)行增殖，但細(xì)胞增殖一段時(shí)間后會(huì)出現(xiàn)接觸抑制等現(xiàn)象，因此不會(huì)不斷增殖，C錯(cuò)誤；心肌細(xì)胞在神經(jīng)細(xì)胞釋放的神經(jīng)遞質(zhì)的支配下跳動(dòng)，D錯(cuò)誤。
2.[2021山東]一個(gè)抗原往往有多個(gè)不同的抗原決定簇，一個(gè)抗原決定簇只能刺激機(jī)體產(chǎn)生一種抗體，由同一抗原刺激產(chǎn)生的不同抗體統(tǒng)稱為多抗。將非洲豬瘟病毒衣殼蛋白p72注入小鼠體內(nèi)，可利用該小鼠的免疫細(xì)胞制備抗p72的單抗，也可以從該小鼠的血清中直接分離出多抗。下列說(shuō)法正確的是（ D ）
A.注入小鼠體內(nèi)的抗原純度對(duì)單抗純度的影響比對(duì)多抗純度的影響大
B.單抗制備過(guò)程中通常將分離出的漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合
C.利用該小鼠只能制備出一種抗p72的單抗
D.p72部分結(jié)構(gòu)改變后會(huì)出現(xiàn)原單抗失效而多抗仍有效的情況
解析 由題中信息“一個(gè)抗原往往有多個(gè)不同的抗原決定簇，一個(gè)抗原決定簇只能刺激機(jī)體產(chǎn)生一種抗體”可知，由同一抗原刺激機(jī)體可以產(chǎn)生多抗，說(shuō)明多抗與一個(gè)抗原的多個(gè)不同的抗原決定簇有關(guān)，抗原純度對(duì)多抗純度的影響大，單抗理論上與抗原純度無(wú)關(guān)，A錯(cuò)誤；單抗制備過(guò)程中，通常將分離出的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，B錯(cuò)誤；一個(gè)抗原往往有多個(gè)不同的抗原決定簇，一個(gè)抗原決定簇只能刺激機(jī)體產(chǎn)生一種抗體，由同一抗原刺激可產(chǎn)生多種不同的抗體，因此利用該小鼠能制備出多種抗p72的單抗，C錯(cuò)誤；p72部分結(jié)構(gòu)改變會(huì)導(dǎo)致部分抗原決定簇改變，原單抗會(huì)失效，而多抗仍有效，D正確。
3.[2022海南，13分]以我國(guó)科學(xué)家為主的科研團(tuán)隊(duì)將OSNL（即4個(gè)基因Oct4/Sx2/Nang/Lin28A的縮寫(xiě)）導(dǎo)入黑羽雞胚成纖維細(xì)胞（CEFs），誘導(dǎo)其重編程為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS），再誘導(dǎo)iPS分化為誘導(dǎo)原始生殖細(xì)胞（iPGCs），然后將iPGCs注射到孵化2.5天的白羽雞胚血管中，最終獲得具有黑羽雞遺傳特性的后代，實(shí)驗(yàn)流程如圖?；卮鹣铝袉?wèn)題。
（1）CEFs是從孵化9天的黑羽雞胚中分離獲得的，為了獲得單細(xì)胞懸液，雞胚組織剪碎后需用 胰蛋白酶、膠原蛋白酶等 處理。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)通常需要在合成培養(yǎng)基中添加 血清 等天然成分，以滿足細(xì)胞對(duì)某些細(xì)胞因子的需求。
（2）體外獲取OSNL的方法有 基因文庫(kù)法、PCR、人工合成法 （答出1種即可）。若要在CEFs中表達(dá)外源基因的蛋白，需構(gòu)建基因表達(dá)載體，載體中除含有目的基因和標(biāo)記基因外，還須有啟動(dòng)子和 終止子 等。啟動(dòng)子是 RNA聚合酶 識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng) 目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終表達(dá)出所需要的蛋白質(zhì) 。
（3）iPS細(xì)胞和iPGCs細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能不同的根本原因是 基因的選擇性表達(dá) 。
（4）誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)與體細(xì)胞核移植技術(shù)的主要區(qū)別是 誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)是將已分化的細(xì)胞誘導(dǎo)為類似胚胎干細(xì)胞的一種細(xì)胞（iPS），再誘導(dǎo)iPS分化為誘導(dǎo)原始生殖細(xì)胞（iPGCs）的技術(shù)；體細(xì)胞核移植技術(shù)是將動(dòng)物一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中，使這個(gè)重新組合的細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的技術(shù) 。
（5）該實(shí)驗(yàn)流程中用到的生物技術(shù)有 基因工程、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) （答出2點(diǎn)即可）。
解析 （1）進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，動(dòng)物組織剪碎后需要用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理，以獲得單細(xì)胞懸液。使用合成培養(yǎng)基培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，通常需要添加血清等天然成分，以滿足細(xì)胞對(duì)某些細(xì)胞因子的需求。（2）體外獲取目的基因的方法有多種，如基因文庫(kù)法、PCR、人工合成法等?；虮磉_(dá)載體的組成包括目的基因、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子等結(jié)構(gòu)，啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了啟動(dòng)子才能驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終表達(dá)出所需要的蛋白質(zhì)。（3）iPGCs細(xì)胞是由iPS細(xì)胞分化而來(lái)的，兩者的遺傳物質(zhì)相同，兩者的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能不同的根本原因是基因的選擇性表達(dá)。（4）誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)與體細(xì)胞核移植技術(shù)存在明顯的區(qū)別，主要表現(xiàn)在誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)是將已分化的細(xì)胞誘導(dǎo)為類似胚胎干細(xì)胞的一種細(xì)胞（iPS），再誘導(dǎo)iPS分化為誘導(dǎo)原始生殖細(xì)胞（iPGCs）的技術(shù)；而體細(xì)胞核移植技術(shù)是將動(dòng)物一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中，使這個(gè)重新組合的細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的技術(shù)。（5）分析題意可知，該實(shí)驗(yàn)流程中用到的生物技術(shù)有基因工程、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)等。
4.[2022遼寧節(jié)選，6分]某抗膜蛋白治療性抗體藥物研發(fā)過(guò)程中，需要表達(dá)N蛋白胞外段，制備相應(yīng)的單克隆抗體，增加其對(duì)N蛋白胞外段特異性結(jié)合的能力。Ⅱ.N蛋白胞外段單克隆抗體制備，流程如圖。
（3）用N蛋白胞外段作為抗原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫后，取小鼠脾組織用 胰蛋白酶或膠原蛋白 酶處理，制成細(xì)胞懸液，置于含有混合氣體的 CO2培養(yǎng)箱 中培養(yǎng)，離心收集小鼠的B淋巴細(xì)胞，與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。
（4）用選擇性培養(yǎng)基對(duì)融合后的細(xì)胞進(jìn)行篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，將其接種到96孔板，進(jìn)行 克隆化 培養(yǎng)。用 抗原—抗體雜交 技術(shù)檢測(cè)每孔中的抗體，篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，經(jīng)體外擴(kuò)大培養(yǎng)，收集 細(xì)胞培養(yǎng)液 ，提取單克隆抗體。
（5）利用N蛋白胞外段抗體與藥物結(jié)合，形成 抗體—藥物偶聯(lián)物（ADC） ，實(shí)現(xiàn)特異性治療。
解析 （3）用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理小鼠脾組織，可使組織分散成單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液，可將細(xì)胞懸液置于含有95％空氣和5％CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。（4）使用選擇性培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞后，將其接種到96孔板，進(jìn)行克隆化培養(yǎng)。用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測(cè)每孔中的抗體，最終獲得既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)可獲得大量的單克隆抗體。擴(kuò)大培養(yǎng)的方式有兩種：體外培養(yǎng)和注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，前者可以從細(xì)胞培養(yǎng)液中獲取單克隆抗體，后者可以從小鼠腹水中獲取單克隆抗體。（5）利用N蛋白胞外段抗體（可特異性識(shí)別N蛋白胞外段）與藥物結(jié)合，形成抗體—藥物偶聯(lián)物（ADC），可實(shí)現(xiàn)特異性治療。
學(xué)生用書(shū)·練習(xí)幫P525
一、選擇題
1.[2023遼寧]大量懸浮培養(yǎng)產(chǎn)流感病毒的單克隆細(xì)胞，可用于流感疫苗的生產(chǎn)。下列敘述錯(cuò)誤的是（ D ）
A.懸浮培養(yǎng)單克隆細(xì)胞可有效避免接觸抑制
B.用于培養(yǎng)單克隆細(xì)胞的培養(yǎng)基通常需加血清
C.當(dāng)病毒達(dá)到一定數(shù)量時(shí)會(huì)影響細(xì)胞的增殖
D.培養(yǎng)基pH不會(huì)影響單克隆細(xì)胞的病毒產(chǎn)量
解析 懸浮培養(yǎng)單克隆細(xì)胞，可以保證足夠的氣體交換，通過(guò)振蕩或轉(zhuǎn)動(dòng)裝置使細(xì)胞始終處于分散狀態(tài)懸浮于培養(yǎng)液內(nèi)，可有效避免接觸抑制，A正確；由于細(xì)胞的生長(zhǎng)是比較復(fù)雜的過(guò)程，血清中含有一些細(xì)胞生存的必要成分，用于培養(yǎng)單克隆細(xì)胞的培養(yǎng)基通常需加血清，B正確；病毒借助于細(xì)胞進(jìn)行繁殖，利用了宿主細(xì)胞的物質(zhì)、能量等，當(dāng)病毒達(dá)到一定數(shù)量時(shí)細(xì)胞的生命活動(dòng)會(huì)受到影響，進(jìn)而影響細(xì)胞的增殖，C正確；細(xì)胞的正常生命活動(dòng)需要適宜的pH，培養(yǎng)基的pH會(huì)影響細(xì)胞代謝，進(jìn)而影響單克隆細(xì)胞的病毒產(chǎn)量，D錯(cuò)誤。
2.[2024牡丹江一模]實(shí)驗(yàn)小鼠皮膚細(xì)胞進(jìn)行貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)的基本過(guò)程如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（ D ）
A.甲過(guò)程需要在無(wú)菌條件下進(jìn)行
B.乙過(guò)程需要用機(jī)械的方法或用胰蛋白酶等處理皮膚組織
C.丙過(guò)程是原代培養(yǎng)，可能出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象
D.丁過(guò)程可以直接離心來(lái)進(jìn)行傳代培養(yǎng)
解析 甲過(guò)程表示取實(shí)驗(yàn)小鼠的組織細(xì)胞，離體動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境，因此甲過(guò)程需要在無(wú)菌條件下進(jìn)行，A正確；乙過(guò)程表示用機(jī)械的方法或用胰蛋白酶等處理皮膚組織，使其分散成單個(gè)皮膚細(xì)胞，B正確；丙過(guò)程表示原代培養(yǎng)，會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象，C正確；丁過(guò)程表示傳代培養(yǎng)，該過(guò)程也需要用胰蛋白酶等處理細(xì)胞，使貼壁細(xì)胞分散成單個(gè)皮膚細(xì)胞，再進(jìn)行離心，D錯(cuò)誤。
3.[2023湖南九校聯(lián)考]使用細(xì)胞核移植技術(shù)培育“三親嬰兒”過(guò)程可選用如下技術(shù)路線。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（ D ）
A.“三親嬰兒”的遺傳物質(zhì)來(lái)自捐獻(xiàn)者、母親及提供精子的男子
B.圖中的精子在參與受精前需要進(jìn)行獲能處理
C.該項(xiàng)技術(shù)的細(xì)胞學(xué)原理是動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性
D.圖中捐獻(xiàn)者和母親的卵母細(xì)胞取自卵巢或輸卵管
解析 由題圖分析可知，“三親嬰兒”的遺傳物質(zhì)來(lái)自捐獻(xiàn)者、母親及提供精子的男子，A正確；圖中的精子參與受精前需經(jīng)過(guò)獲能處理才具有受精能力，B正確；題圖所示為動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)，其細(xì)胞學(xué)原理是動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性，C正確；從題圖可以看出，重組后的卵母細(xì)胞需要在體外培養(yǎng)至MⅡ期，說(shuō)明卵母細(xì)胞不是來(lái)自輸卵管，因?yàn)閬?lái)自輸卵管的卵母細(xì)胞已經(jīng)進(jìn)入了MⅡ期，D錯(cuò)誤。
4.[2024浙江聯(lián)考]抗原決定簇是決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)，大多存在于抗原物質(zhì)的表面，一個(gè)天然抗原可以有多種和多個(gè)抗原決定簇。如圖是某種RNA病毒的結(jié)構(gòu)蛋白M表面的兩種抗原決定簇及這兩種抗原決定簇與相應(yīng)抗體結(jié)合的示意圖，將蛋白M注入小鼠體內(nèi)一段時(shí)間后，提取該小鼠的血清和免疫細(xì)胞，并利用免疫細(xì)胞制備單克隆抗體。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（ B ）
A.抗體與抗原的結(jié)合實(shí)質(zhì)是抗體與抗原決定簇的結(jié)合
B.制備單克隆抗體時(shí)需要先將分離出的免疫細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)
C.利用該小鼠能制備不止一種抗蛋白M的單克隆抗體
D.該蛋白M可用于制備針對(duì)該RNA病毒的疫苗
解析 單克隆抗體制備過(guò)程中需要先將分離出的免疫細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，不需要先將免疫細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，B錯(cuò)誤。
二、非選擇題
5.[2023長(zhǎng)沙模擬，10分]隨著基因工程等現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，動(dòng)物細(xì)胞工程的理論和應(yīng)用均獲得了突破性的進(jìn)展。如圖為動(dòng)物細(xì)胞工程涉及的主要技術(shù)領(lǐng)域。
回答下列問(wèn)題：
（1）在進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，將成塊的組織中的細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞的方法是 用機(jī)械的方法或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理 。
在培養(yǎng)過(guò)程中，要向培養(yǎng)液中加入一定量的 抗生素 ，以防止微生物的污染；還需要向培養(yǎng)液中加入 血清 等一些天然成分，以保證細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)。
（2）與植物細(xì)胞不同，動(dòng)物細(xì)胞的全能性會(huì)隨著 細(xì)胞分化程度的提高 而逐漸受到限制，因此，到目前為止，用動(dòng)物體細(xì)胞克隆的動(dòng)物，實(shí)際是通過(guò)圖中所示的 核移植 技術(shù)實(shí)現(xiàn)的。采用圖中的 細(xì)胞融合 技術(shù)，可使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè) 單核 （填“單核”或“多核”）的雜交細(xì)胞。
解析 （1）在進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，需用機(jī)械的方法或用胰蛋白酶或膠原蛋白酶等處理組織塊，使其分散成單個(gè)細(xì)胞。在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，要向培養(yǎng)液中加入一定量的抗生素，以防止微生物的污染；需要向培養(yǎng)液中加入血清等一些天然成分，以保證細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)。（2）動(dòng)物細(xì)胞的全能性會(huì)隨著細(xì)胞分化程度的提高而逐漸受到限制，因此，用動(dòng)物體細(xì)胞克隆的動(dòng)物，實(shí)際是通過(guò)核移植技術(shù)實(shí)現(xiàn)的。細(xì)胞融合技術(shù)可使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)單核的雜交細(xì)胞。
一、選擇題
6.[2024山西聯(lián)考]我國(guó)科學(xué)家成功用iPS細(xì)胞克隆出了活體小鼠，部分流程如圖所示，其中Kdm4d為組蛋白去甲基化酶，TSA為組蛋白脫乙酰酶抑制劑。下列說(shuō)法正確的是（ A ）
A.推測(cè)組蛋白乙?；腿ゼ谆欣谥貥?gòu)胚后續(xù)的胚胎發(fā)育過(guò)程
B.①過(guò)程的小分子化合物可誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞突變?yōu)閕PS細(xì)胞
C.③過(guò)程中使用有活性的病毒處理的目的是誘導(dǎo)細(xì)胞融合
D.圖示流程未運(yùn)用胚胎移植等技術(shù)
解析 結(jié)合題圖可知，在重構(gòu)胚中注入Kdm4d的mRNA，并用TSA處理后，重構(gòu)胚發(fā)育成克隆鼠，而Kdm4d的mRNA的翻譯產(chǎn)物為組蛋白去甲基化酶，可以使組蛋白去甲基化，TSA為組蛋白脫乙酰酶抑制劑，可抑制組蛋白脫乙酰酶的作用，組蛋白可發(fā)生正常的乙?；揎?，故推測(cè)組蛋白乙?；腿ゼ谆欣谥貥?gòu)胚后續(xù)的胚胎發(fā)育過(guò)程，A正確；①過(guò)程的小分子化合物可誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞形成iPS細(xì)胞，而不是突變?yōu)閕PS細(xì)胞，B錯(cuò)誤；③為動(dòng)物細(xì)胞融合的過(guò)程，誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合所用的病毒是滅活的病毒，C錯(cuò)誤；圖示流程運(yùn)用了體細(xì)胞核移植、胚胎移植等技術(shù)，D錯(cuò)誤。
7.[2024安徽六校聯(lián)考]研究人員利用CD14蛋白制備抗CD14單克隆抗體的流程如圖所示，下列選項(xiàng)錯(cuò)誤的是（ A ）
A.步驟②可直接將從小鼠脾臟中分離出的能分泌抗CD14抗體的漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合
B.步驟③中的特定培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基
C.步驟⑤除圖中所示途徑外還可以將篩選出的雜交瘤細(xì)胞置于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)
D.圖中步驟⑥能從小鼠的腹水中提取與CD14蛋白特異性結(jié)合的抗CD14單克隆抗體
解析 步驟②無(wú)法將能分泌抗CD14抗體的漿細(xì)胞與其他B淋巴細(xì)胞分離開(kāi)，因此應(yīng)先將從小鼠脾臟中分離出的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合，之后再進(jìn)行篩選，A錯(cuò)誤；步驟③為用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，以篩選出雜交瘤細(xì)胞，步驟④為通過(guò)克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測(cè)進(jìn)行進(jìn)一步篩選，以篩選出既能大量增殖，又能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞，B正確；篩選出的雜交瘤細(xì)胞既可以注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，也可以在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)，其中注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖時(shí)，可從小鼠腹水中提取相應(yīng)單克隆抗體，C、D正確。
8.[2023宿遷檢測(cè)]6－磷酸葡萄糖脫氫酶（G-6PD）有F和S兩種類型，分別由一對(duì)等位基因XF和XS編碼?；蛐蜑閄FXS的女性體細(xì)胞中的兩條X染色體會(huì)有一條隨機(jī)失活，且這個(gè)細(xì)胞的后代相應(yīng)的X染色體均會(huì)發(fā)生同樣的變化。將基因型為XFXS的女性皮膚組織用胰蛋白酶處理后先進(jìn)行細(xì)胞的原代培養(yǎng)，再對(duì)不同的單細(xì)胞分別進(jìn)行單克隆培養(yǎng)。分別對(duì)原代培養(yǎng)和單克隆培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行G-6PD蛋白電泳檢測(cè)，結(jié)果如圖所示。有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（ D ）
A.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)
B.用胰蛋白酶處理皮膚組織可使其分散成單個(gè)細(xì)胞
C.原代培養(yǎng)的細(xì)胞電泳圖有2個(gè)條帶是因?yàn)橥瑫r(shí)檢測(cè)了不止一個(gè)細(xì)胞
D.單克隆培養(yǎng)的細(xì)胞1、2、4、5、8、9與3、6、7所含基因不同
解析 動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)、單克隆抗體的制備等都需要用到動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，故動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)，A正確；用胰蛋白酶或膠原蛋白酶等處理皮膚組織，可使其分散成單個(gè)細(xì)胞，B正確；由題干信息可知，基因型為XFXS的女性體細(xì)胞中的兩條X染色體會(huì)有一條隨機(jī)失活，且這個(gè)細(xì)胞的后代相應(yīng)的X染色體均會(huì)發(fā)生同樣的變化，故對(duì)一個(gè)細(xì)胞進(jìn)行G-6PD蛋白電泳檢測(cè)后只顯示1個(gè)條帶，原代培養(yǎng)的細(xì)胞電泳圖有2個(gè)條帶是因?yàn)橥瑫r(shí)檢測(cè)了不止一個(gè)細(xì)胞，C正確；單克隆培養(yǎng)的細(xì)胞，是通過(guò)有絲分裂增殖得到的細(xì)胞，故單克隆培養(yǎng)的細(xì)胞1、2、4、5、8、9與3、6、7所含基因相同，表達(dá)的基因不一定相同，D錯(cuò)誤。
二、非選擇題
9.[2023西安檢測(cè)，15分]非洲豬瘟是由ASFV（一種雙鏈DNA病毒）感染豬引起的烈性傳染病。某研究小組將ASFV外殼蛋白基因?qū)胴i體細(xì)胞中，利用核移植技術(shù)培育轉(zhuǎn)基因豬，從而得到自動(dòng)產(chǎn)生ASFV抗體的個(gè)體，其過(guò)程如圖所示?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）圖中步驟①采用的技術(shù)手段是 細(xì)胞核移植 ，結(jié)構(gòu)乙處于胚胎發(fā)育過(guò)程的 囊胚 期。進(jìn)行步驟③時(shí)，受體C豬子宮對(duì)外來(lái)胚胎基本上 不發(fā)生免疫排斥反應(yīng) ，從而為來(lái)自供體的胚胎在受體內(nèi)的存活提供了可能。
（2）B豬體細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)時(shí)，除必須保證環(huán)境是無(wú)菌、無(wú)毒的之外，還必須定期 更換培養(yǎng)液 ，以防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。培養(yǎng)到一定程度后，需要分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，分瓶后的培養(yǎng)過(guò)程稱為 傳代培養(yǎng) 。
（3）若要將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，需要構(gòu)建 基因表達(dá)載體 ，該過(guò)程采用雙酶切法處理含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒，其優(yōu)點(diǎn)是 保證目的基因和載體定向連接 。
（4）利用抗原—抗體雜交技術(shù)判斷D豬是否產(chǎn)生ASFV抗體時(shí)，使用的抗原物質(zhì)最好是 ASFV外殼蛋白 。該抗體也可以使用雜交瘤技術(shù)來(lái)制備，利用雜交瘤技術(shù)制備該抗體時(shí)，雜交瘤細(xì)胞是由骨髓瘤細(xì)胞和 經(jīng)ASFV外殼蛋白免疫后的B淋巴 細(xì)胞融合獲得的。
解析 （1）步驟③表示胚胎移植，進(jìn)行胚胎移植時(shí)，要對(duì)受體進(jìn)行同期發(fā)情處理，受體子宮對(duì)外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為來(lái)自供體的胚胎在受體內(nèi)的存活提供了可能。（2）進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，必須保證環(huán)境是無(wú)菌、無(wú)毒的，此外，還要定期更換培養(yǎng)液，以防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。培養(yǎng)到一定程度后，需要分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，分瓶后的培養(yǎng)過(guò)程稱為傳代培養(yǎng)。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞需要構(gòu)建基因表達(dá)載體。（4）ASFV抗體可以和ASFV外殼蛋白特異性結(jié)合，因此利用抗原—抗體雜交技術(shù)判斷D豬是否產(chǎn)生ASFV抗體時(shí)，使用的抗原物質(zhì)最好是ASFV外殼蛋白。若要使用雜交瘤技術(shù)制備ASFV抗體，需要將骨髓瘤細(xì)胞和經(jīng)ASFV外殼蛋白免疫后的B淋巴細(xì)胞融合，以獲得雜交瘤細(xì)胞。課標(biāo)要求
核心考點(diǎn)
五年考情
核心素養(yǎng)對(duì)接
1.闡明動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是從動(dòng)物體獲得相關(guān)組織，分散成單個(gè)細(xì)胞后，在適宜的培養(yǎng)條件下讓細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的過(guò)程。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)；
2.闡明動(dòng)物細(xì)胞核移植一般是將體細(xì)胞核移入一個(gè)去核的卵母細(xì)胞中，并使重組細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的過(guò)程；
3.闡明動(dòng)物細(xì)胞融合是指通過(guò)物理、化學(xué)或生物學(xué)等手段，使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程；
4.概述細(xì)胞融合技術(shù)是單克隆抗體制備的重要技術(shù)；
5.簡(jiǎn)述干細(xì)胞在生物醫(yī)學(xué)工程中有廣泛的應(yīng)用價(jià)值
動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和干細(xì)胞的應(yīng)用
2023：遼寧T7、海南T7、湖南T21（4）；
2022：海南T20（1）（3）（4）、湖北T7、江蘇T14；
2021：湖南T22（2）、重慶T5、浙江1月T18；
2020：江蘇T23
1.生命觀念——深入理解動(dòng)物細(xì)胞核移植和克隆技術(shù)，理解生命的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。
2.科學(xué)思維——分析動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件、細(xì)胞融合和單克隆抗體制備的原理，形成科學(xué)思維的習(xí)慣。
3.科學(xué)探究——通過(guò)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)操作，培養(yǎng)科學(xué)探究能力。
4.社會(huì)責(zé)任——了解生物工程技術(shù)在生產(chǎn)上的應(yīng)用，認(rèn)同生物技術(shù)對(duì)社會(huì)發(fā)展的影響，承擔(dān)應(yīng)有的社會(huì)責(zé)任
動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)和單克隆抗體
2023：北京T12、湖北T22（1）（2）（3）；
2022：浙江1月T29（二）（3）、遼寧T24Ⅱ、江蘇T19、山東T15；
2021：山東T15；
2020：江蘇T28（4）、全國(guó)ⅠT38；
2019：江蘇T23
動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物
2023：天津T7；
2021：遼寧T13、湖南T22（3）；
2020：天津T1
命題分析預(yù)測(cè)
1.高考對(duì)本部分的考查常以生產(chǎn)或科研實(shí)踐為情境，也可以圖為載體，主要考查動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)植物細(xì)胞融合的異同、單克隆抗體的制備等，既有選擇題，也有非選擇題。
2.預(yù)計(jì)2025年高考仍可能延續(xù)往年的考查形式及特點(diǎn)，與基因工程、胚胎工程等其他知識(shí)相結(jié)合進(jìn)行命題
比較項(xiàng)目
動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)
植物組織培養(yǎng)
理論基礎(chǔ)
細(xì)胞增殖
植物細(xì)胞的全能性
取材
新鮮的組織
植物的器官、組織或細(xì)胞
培養(yǎng)基狀態(tài)
[10] 液體
固體
培養(yǎng)基成分
糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清等
礦質(zhì)元素、蔗糖、維生素、植物激素等
過(guò)程
原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)
脫分化、再分化
細(xì)胞分裂、生長(zhǎng)、分化特點(diǎn)
貼壁生長(zhǎng)、接觸抑制
脫分化形成愈傷組織，再分化形成根、芽等
結(jié)果
[11] 子代細(xì)胞
產(chǎn)生新個(gè)體
相同點(diǎn)
①都需人工條件下的無(wú)菌操作；②都需要適宜的溫度、pH等條件；③都進(jìn)行有絲分裂，都不涉及減數(shù)分裂
類型
胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）
成體干細(xì)胞
誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）
分布或
來(lái)源
[12] 早期胚胎
成體組織或器官中，包括造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、精原干細(xì)胞等
最初通過(guò)體外誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞獲得，也可誘導(dǎo)已分化的B細(xì)胞、T細(xì)胞產(chǎn)生
特點(diǎn)
具有分化為成年動(dòng)物體內(nèi)的任何一種類型的細(xì)胞，并進(jìn)一步形成機(jī)體的所有組織和器官甚至[13] 個(gè)體 的潛能
具有組織特異性，只能分化為
[14] 特定的細(xì)胞或組織 ，不具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力
不涉及倫理問(wèn)題，可以避免免疫排斥反應(yīng)
分化程度
胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）＜成體干細(xì)胞＜誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）
類型
應(yīng)用
造血干細(xì)胞
治療白血病及一些惡性腫瘤放療或化療后引起的造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)功能障礙等疾病
神經(jīng)干細(xì)胞
治療神經(jīng)組織損傷和神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，如帕金森病、阿爾茨海默病等
誘導(dǎo)多能干細(xì)胞
治療小鼠的鐮狀細(xì)胞貧血，在治療阿爾茨海默病、心血管疾病等領(lǐng)域的研究也取得新進(jìn)展
項(xiàng)目
動(dòng)物細(xì)胞融合
植物體細(xì)胞雜交
原理
細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞增殖
細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的全能性
前處理
使細(xì)胞分散開(kāi)
除去細(xì)胞壁
相關(guān)酶
胰蛋白酶和膠原蛋白酶
纖維素酶和果膠酶
誘導(dǎo)方法
物理法：電融合法；化學(xué)法：PEG融合法；生物法：滅活病毒誘導(dǎo)法
物理法：電融合法、離心法等；化學(xué)法：PEG融合法、高Ca2＋—高pH融合法
目的
獲得雜交細(xì)胞
獲得雜種植株
意義和用途
制備單克隆抗體，診斷、治療、預(yù)防疾病
打破生殖隔離，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種，培育植物新品種
技術(shù)手段
動(dòng)物細(xì)胞融合和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)
原理
細(xì)胞膜的流動(dòng)性和細(xì)胞增殖
制備流程
篩選目的
第一次：獲得[6] 雜交瘤細(xì)胞 ；第二次：獲得能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞
特點(diǎn)
雜交瘤細(xì)胞：既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生[7] 特異性抗體
單克隆抗體：能準(zhǔn)確地識(shí)別抗原的細(xì)微差別，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以大量制備
應(yīng)用
①作為診斷試劑：利用同位素或熒光標(biāo)記的單克隆抗體可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病。②運(yùn)載藥物[如抗體—藥物偶聯(lián)物（ADC）]。③用于治療疾病
應(yīng)用前景
畜牧生產(chǎn)
加速家畜[6] 遺傳改良 進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育
醫(yī)藥衛(wèi)生
轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物可作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白
治療人類疾病
[7] 轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物 的細(xì)胞、組織、器官可作為異種移植的供體
科研
使人類更深入地了解胚胎發(fā)育及衰老過(guò)程；克隆動(dòng)物分析致病基因，為研究疾病的致病機(jī)制和開(kāi)發(fā)相應(yīng)藥物提供幫助
保護(hù)瀕危物種
有望增加瀕危物種的存活數(shù)量
存在的問(wèn)題
體細(xì)胞核移植成功率[8] 非常低 ；絕大多數(shù)克隆動(dòng)物存在[9] 健康 問(wèn)題，許多克隆動(dòng)物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷

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