第13講生物技術(shù)與工程（講練）-新高考生物二輪復(fù)習(xí)講練測（新教材專用）-試卷下載-教習(xí)網(wǎng)

易錯辨析
發(fā)酵工程
某同學(xué)在家用帶蓋玻璃瓶制作果酒和果醋時，將玻璃瓶用酒精消毒后，裝滿葡萄汁，待酒精發(fā)酵后去除瓶蓋，蓋一層紗布，再進(jìn)行醋酸發(fā)酵。( )
利用乳酸菌制作酸奶過程中，先通氣培養(yǎng)，后密封發(fā)酵。( )
果醋制作過程中發(fā)酵液pH逐漸降低，果酒制作過程中情況相反。( )
利用發(fā)酵罐進(jìn)行葡萄酒主發(fā)酵過程中可以通過檢測發(fā)酵過程中殘余糖的濃度來決定何時終止發(fā)酵。( )
配置培養(yǎng)基時應(yīng)根據(jù)微生物的種類調(diào)整培養(yǎng)基的pH。( )
可使用平板劃線法統(tǒng)計(jì)活細(xì)菌總數(shù)。( )
接種后的培養(yǎng)皿要倒置，以防培養(yǎng)基污染。( )
細(xì)胞工程
動物細(xì)胞培養(yǎng)時剪碎動物組織的操作不需要在無菌環(huán)境中進(jìn)行。( )
單克隆抗體制備過程中通常將分離出的漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合。( )
從雄性奶牛中采集到的成熟精子遇到卵子即可進(jìn)入卵子內(nèi)。( )
采用胚胎分割技術(shù)產(chǎn)生同卵多胎的數(shù)量是有限的。( )
胚胎移植時需使用免疫抑制劑以避免代孕牛對植入胚胎的排斥反應(yīng)。( )
規(guī)范表述
在培養(yǎng)乳酸桿菌時，需要在培養(yǎng)基中添加；在培養(yǎng)霉菌時，一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至；在培養(yǎng)細(xì)菌時，一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至；在培養(yǎng)厭氧微生物時，需要提供的條件。
獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是。
采用和能將單個微生物分散在固體培養(yǎng)基上。
利用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少，這是因?yàn)?
。
單克隆抗體制備過程中涉及兩次篩選，第一次是利用特定的，篩選出雜交瘤細(xì)胞；第二次是進(jìn)行，目的是篩選出足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞。
在實(shí)際胚胎工程操作中，常以觀察到或者作為受精的標(biāo)志。
胚胎移植實(shí)質(zhì)上是。
構(gòu)建乳腺生物反應(yīng)器時需要將藥用蛋白基因與等調(diào)控元件重組在一起。
考點(diǎn)1 發(fā)酵工程
理清“3”中傳統(tǒng)食品的制作技術(shù)
培養(yǎng)基制備與微生物純化技術(shù)
為了確定培養(yǎng)基的滅菌是否合格，微生物實(shí)驗(yàn)一般會設(shè)置空白對照：隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板培養(yǎng)基在適宜條件下培養(yǎng)一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落生成。
觀察菌落需用固體培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基要添加凝固劑，如瓊脂。
倒平板的溫度一般為50℃左右較為適宜，溫度過高會燙手，溫度過低培養(yǎng)基又會凝固。
微生物分離與計(jì)數(shù)的實(shí)例——能分解尿素的細(xì)菌
考法1 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用
（2022?鹽城二模）下列關(guān)于泡菜、面包、酸奶等發(fā)酵食品的敘述，正確的是（）
A．泡菜壇內(nèi)的白色菌膜與果酒表面的菌膜中所含菌種相同
B．制作面包和饅頭都用到酵母菌，酵母菌產(chǎn)生的酒精與食品松軟有關(guān)
C．若出現(xiàn)泡菜發(fā)酸、面包長霉、酸奶脹袋等情況，則都不能再食用
D．若制作的泡菜咸而不酸，可能的原因是加入食鹽過多，抑制了乳酸菌發(fā)酵
（2022?泰州模擬）米酒、酸奶、泡菜等都屬于傳統(tǒng)發(fā)酵制品，相關(guān)敘述正確的是（）
A．制作米酒時添加“酵頭”的目的是接種釀酒酵母
B．米酒發(fā)酵液中冒出的“氣泡”都來源于酵母菌無氧呼吸
C．酸奶和泡菜制作中均需要及時通氧，保證乳酸菌的有氧呼吸
D．為降低雜菌污染，發(fā)酵前需要對器具、原料等進(jìn)行滅菌
考法2 微生物的培養(yǎng)、分離與計(jì)數(shù)
（2023?白山一模）如圖是研究人員從落葉地的土壤中篩選高效分解纖維素的細(xì)菌的過程示意圖。下列有關(guān)敘述錯誤的是（）
A．在配制步驟②③的培養(yǎng)基時，高壓蒸汽滅菌后將pH調(diào)至中性或弱堿性
B．步驟③篩選、純化的原理是將聚集的細(xì)菌分散，可以獲得單細(xì)胞菌落
C．步驟③采用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種，并需要加入纖維素作為唯一的碳源
D．步驟④加入的是剛果紅染液，可根據(jù)菌落與透明圈的直徑比來挑選優(yōu)質(zhì)菌落
（2022?鹽城二模）為了解病原微生物對四種抗生素的敏感程度，某研究小組進(jìn)行了相關(guān)藥敏實(shí)驗(yàn)，圖1為部分實(shí)驗(yàn)器材。將含有相同濃度的抗生素Ⅰ～Ⅳ四個大小相同的紙片分別貼在長滿測試菌的平板上，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2。下列相關(guān)敘述正確的是（）
A．為獲得長滿測試菌的平板，需要使用圖1中器材①②
B．圖2中Ⅱ形成的抑菌圈較小，可能是病原微生物對藥物較敏感
C．圖2抑菌圈中的菌落可能是在抗生素Ⅳ作用下產(chǎn)生了突變株
D．不同抗生素在平板上的擴(kuò)散速度不同會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果
（多選）（2021?濱州二模）一次性口罩的主要成分為聚丙烯纖維（PP），某科研團(tuán)隊(duì)準(zhǔn)備從土壤中篩選出高效降解一次性口罩的細(xì)菌。圖甲表示PP分解菌分離與計(jì)數(shù)的過程，6號試管涂布的三個平板的菌落數(shù)為550、601、688；7號試管涂布的三個平板的菌落數(shù)為58、73、97；8號試管涂布的三個平板的菌落數(shù)為8、15、28。圖乙表示在培養(yǎng)基中加入能與PP結(jié)合而顯色的染色劑，目的菌落周圍出現(xiàn)透明圈的情況。下列說法正確的是（）
A．圖甲、圖乙所用培養(yǎng)基分別為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基，都以PP作為唯一碳源
B．圖甲、圖乙所用接種方法分別為稀釋涂布平板法和平板劃線法，都需在酒精燈火焰旁進(jìn)行
C．1g土壤樣品中含有PP分解菌的估算數(shù)目是7.6×1010個，此數(shù)值一般偏小
D．可選擇圖乙培養(yǎng)基中比值大的PP分解菌作為目的菌種推廣使用
考點(diǎn)2 細(xì)胞工程和胚胎工程
植物組織培養(yǎng)的過程
原理：
過程
①植物組織培養(yǎng)中添加蔗糖的目的是和
② 階段不需要光，階段需要光
③生長素與細(xì)胞分裂素的比值時，促進(jìn)根的分化、抑制芽的形成；比值時，促進(jìn)芽的分化、抑制根的形成。
④體內(nèi)細(xì)胞未表現(xiàn)全能性的原因：基因的表達(dá)具有。
植物體細(xì)胞雜交技術(shù)
（1）原理：、
（2）過程
①去除細(xì)胞壁的方法：，用和處理。
②誘導(dǎo)融合的方法：
物理法：、電融合法
化學(xué)法：（PEG）融合法、融合法
③融合完成的標(biāo)志：
④變異類型：；形成的雜種植株是異源多倍體。
⑤意義：打破，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種
針對二類目標(biāo)（試管苗、細(xì)胞產(chǎn)物）的培養(yǎng)流程
動物細(xì)胞培養(yǎng)
（1）原理：
（2）動物細(xì)胞培養(yǎng)過程
①動物細(xì)胞培養(yǎng)中兩次使用的作用不同：第1次——處理剪碎的組織，使其分散成單個細(xì)胞；
第2次——使貼壁生長的細(xì)胞從瓶壁上脫落下來分散成單個細(xì)胞。
②保障無菌、無毒的措施：對培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具進(jìn)行滅菌處理及在無菌條件下進(jìn)行操作，。
③區(qū)分原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的關(guān)鍵：是否分瓶培養(yǎng)。
（3）干細(xì)胞
單克隆抗體的制備
（1）原理：細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞的增殖
（2）過程
①3種細(xì)胞特點(diǎn)不同
B淋巴細(xì)胞：能產(chǎn)生抗體，不能大量增殖。
骨髓瘤細(xì)胞：能迅速大量增殖，不能產(chǎn)生抗體。
雜交瘤細(xì)胞：既能產(chǎn)生，又能迅速。
②兩次篩選目的不同
第1次：獲得
第2次：獲得
動物體細(xì)胞核移植技術(shù)
（1）原理：
（2）過程
①核移植獲得的克隆動物與提供細(xì)胞核的親本性狀可能不同的三個原因
a.克隆動物遺傳物質(zhì)來自兩個親本。
b.發(fā)育過程中可能發(fā)生基因突變或染色體變異。
c.外界環(huán)境可能引起不可遺傳的變異。
②克隆動物的產(chǎn)生是，而試管動物則是在體外受精形成受精卵，由受精卵發(fā)育成的個體，因此屬于。
準(zhǔn)確記憶哺乳動物的早期胚胎發(fā)育過程
受精過程中的兩個標(biāo)志
①受精的標(biāo)志是觀察到或
②受精完成的標(biāo)志是。
（2）桑葚胚是由受精卵分裂形成的，沒有分化；而囊胚期雖然已經(jīng)進(jìn)行細(xì)胞分化，但囊胚的仍具有全能性。
胚胎抑制的操作流程
（1）胚胎移植過程中的兩次檢查：第一次對進(jìn)行檢查；第二次對是否妊娠進(jìn)行檢查。
（2）胚胎移植產(chǎn)生的后代是有性生殖還是無性生殖，取決于胚胎發(fā)育的起點(diǎn)。若后代是由受精卵形成的，則為；若后代是由核移植技術(shù)形成的重組細(xì)胞或胚胎分割形成的胚胎發(fā)育而成，則為。
（3）用于移植的胚胎來源：體內(nèi)正常受精的胚胎、核移植的胚胎和體內(nèi)受精獲得的胚胎、轉(zhuǎn)基因獲得的胚胎、胚胎分割獲得的胚胎等。
（4）胚胎存活的基礎(chǔ)：受體不會對來自供體的胚胎發(fā)生。
胚胎分割
考法1 植物細(xì)胞工程
下列有關(guān)細(xì)胞工程的敘述中，正確的是（）
A．植物細(xì)胞工程中，融合葉肉細(xì)胞時，應(yīng)先去掉細(xì)胞膜，制備原生質(zhì)體
B．植物體細(xì)胞雜交培育出的新品種一定不是單倍體
C．植物細(xì)胞工程中，葉肉細(xì)胞經(jīng)再分化過程可形成愈傷組織
D．單克隆抗體制備過程，采用不經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合從而獲得雜交瘤細(xì)胞
（2022春?雙鴨山期末）獼猴桃因貌似獼猴而得名，是一種品質(zhì)鮮嫩、營養(yǎng)豐富的美味水果。我國研究人員利用“中華獼猴桃”和“美味獼猴桃”兩個不同種培育出了更加優(yōu)良的品種，其過程如圖所示。請分析并回答下列問題：
（1）用酶解法制備原生質(zhì)體時，需先用較（填“高”、“低”）滲透壓的溶液處理植物細(xì)胞，使細(xì)胞處于微弱的質(zhì)壁分離狀態(tài)，然后用酶消化去除細(xì)胞壁，獲得原生質(zhì)體。
（2）過程③使用的化學(xué)法包括：聚乙二醇融合法和融合法等。
（3）已知用X射線處理會使染色體受影響而導(dǎo)致細(xì)胞失去分裂能力；用碘乙酰胺處理會使細(xì)胞內(nèi)的酶失活而抑制生長。為了能篩選到雜種細(xì)胞F，若在①過程對“中華獼猴桃”用X射線處理，需對“美味獼猴桃”用
處理，以便最終能獲得優(yōu)良雜種植株H。
（4）若兩種獼猴桃都是二倍體，則雜種植株為倍體。
考法2 動物細(xì)胞工程
（2017春?未央?yún)^(qū)校級期末）現(xiàn)在有一個嬰兒在出生后醫(yī)院為他保留了臍帶血，在以后他生長發(fā)育過程中如果出現(xiàn)了某種難治療的疾病，就可以通過血液中的干細(xì)胞來為其治病，關(guān)于這個實(shí)例說法正確的是（）
A．用臍帶血中的干細(xì)胞能夠治療這個孩子所有的疾病
B．如果要移植用他的干細(xì)胞培育出的器官，需要用到細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
C．如果要移植用他的干細(xì)胞培育出的器官，應(yīng)該長期給他使用免疫抑制藥物
D．用干細(xì)胞培育出人體需要的器官用來移植治病，需要激發(fā)細(xì)胞的所有全能性
（多選）（2021秋?海門市校級期末）亨廷頓舞蹈病是一種由于亨廷頓蛋白（HTT）基因突變所導(dǎo)致的疾病。我國科學(xué)家利用基因編輯技術(shù)（CRISPR/Cas9），成功培育出世界首例亨廷頓舞蹈病的基因“敲入”豬模型，操作過程如圖所示。下列說法正確的是（）
A．上述操作過程的原理有基因重組、動物細(xì)胞核全能性等
B．過程②為動物細(xì)胞融合技術(shù)，通常采用滅活病毒誘導(dǎo)
C．過程④為胚胎分割，該技術(shù)關(guān)鍵是將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割
D．基因“敲入”豬模型所攜帶的人突變HTT基因可遺傳給后代
（2022?丹東一模）靶向治療是目前治療腫瘤的有效方法之一，其原理是利用抗體等特異性物質(zhì)作為載體，將藥物送到腫瘤部位，對腫瘤進(jìn)行特異性殺傷，其作用原理如圖1所示。為了生產(chǎn)能同時與藥物和腫瘤細(xì)胞抗原結(jié)合的抗體，科學(xué)家創(chuàng)造了制備雙特異性抗體的方法，過程如圖2所示。請據(jù)圖分析回答下列問題：
（1）由圖1可以看出，抗體是由條肽鏈構(gòu)成的蛋白質(zhì)，細(xì)胞內(nèi)合成抗體時，其空間結(jié)構(gòu)形成的場所主要是。
（2）圖2中①過程是給小鼠注射，從而獲得B淋巴細(xì)胞。
（3）為選出能產(chǎn)生專一抗體的細(xì)胞，要將從HAT培養(yǎng)基上篩選出雜交瘤細(xì)胞，然后稀釋滴入多孔培養(yǎng)板中，使多孔培養(yǎng)板每孔中有個細(xì)胞，然后篩選出抗體檢測呈（填“陽性”或“陰性”）的細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)；該克隆化培養(yǎng)細(xì)胞具有的特點(diǎn)為。
（4）圖中⑤過程給小鼠注射抗腫瘤藥物的目的是獲取。圖2方框內(nèi)的主要操作是。
（5）與直接使用抗腫瘤藥物相比，將抗腫瘤藥物與雙特異性單克隆抗體結(jié)合后給藥，對人體的副作用更小，原因是雙特異性單克隆抗體能。
考法3 胚胎工程
（2022春?工農(nóng)區(qū)校級月考）在體細(xì)胞克隆猴培育過程中，為調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，提高胚胎的發(fā)育率和妊娠率，研究人員將組蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重構(gòu)胚，同時用組蛋白脫乙酰酶抑制劑（TSA）處理，具體培育流程如圖所示。下列說法不正確的是（）
A．去核時使用的梯度離心、紫外光照射和化學(xué)物質(zhì)處理等方法都沒有刺破透明帶或卵母細(xì)胞質(zhì)膜
B．卵母細(xì)胞在去核環(huán)節(jié)實(shí)際操作中被去除的不是核膜包被的細(xì)胞核，而是紡錘體﹣染色體復(fù)合物
C．組蛋白甲基化和乙酰化的表觀遺傳修飾都不利于重構(gòu)胚的分裂和發(fā)育
D．為得到遺傳背景相同的克隆猴用于科研，可用機(jī)械方法將早期胚胎切割成2份或4份后再進(jìn)行胚胎移植
（2022?海門市校級開學(xué)）小鼠胚胎干細(xì)胞經(jīng)定向誘導(dǎo)可獲得多種具有不同功能的細(xì)胞，制備流程如圖所示。下列相關(guān)敘述錯誤的是（）
A．用胰蛋白酶處理a處的細(xì)胞后可獲得分散的胚胎干細(xì)胞
B．欲提高胚胎的利用率，可用胚胎分割技術(shù)將a處細(xì)胞團(tuán)均等分割
C．為獲得更多的囊胚，采用促性腺激素注射促進(jìn)雄鼠產(chǎn)生更多的精子
D．a(chǎn)處的細(xì)胞與b處的細(xì)胞的核基因相同，但mRNA有差異
考點(diǎn)3 基因工程及生物技術(shù)的安全性與倫理問題
基因工程的理論基礎(chǔ)
外源基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的理論基礎(chǔ)
① 是控制生物性狀的遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能單位
②遺傳信息的傳遞都遵循
③生物界共用一套
（2）基因拼接的理論基礎(chǔ)
①DNA的基本組成單位都是四種
②DNA分子都遵循原則
③雙鏈DNA分子的空間結(jié)構(gòu)都是結(jié)構(gòu)
基因工程的3種基本工具
熟記基因工程的四個操作步驟
圖解記憶蛋白質(zhì)工程
操作手段：改造或合成
結(jié)果：改造蛋白質(zhì)，或制造出蛋白質(zhì)
設(shè)計(jì)流程
從出發(fā)→設(shè)計(jì) →推測應(yīng)有的 →找到并改變相對應(yīng)的（基因）或 →獲得所需要的蛋白質(zhì)
PCR技術(shù)原理與條件
PCR技術(shù)的過程
DNA的粗提取與鑒定
DNA片段的電泳鑒定
治療性克隆與生殖性克隆的關(guān)系
區(qū)分試管嬰兒和設(shè)計(jì)試管嬰兒
設(shè)計(jì)試管嬰兒比試管嬰兒多出的是。
試管嬰兒主要解決不孕夫婦的生育問題，設(shè)計(jì)試管嬰兒用于白血病、貧血癥等疾病的治療。
兩者都是體外受精，并進(jìn)行體外早期胚胎培養(yǎng)，都要經(jīng)過胚胎移植，都是有性生殖。
考法1 基因工程
（2021秋?如皋市月考）如圖1中的三個DNA片段上依次表示出了EcRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三種限制性內(nèi)切酶的識別序列與切割位點(diǎn)，圖2為某種基因表達(dá)載體的示意圖（載體上的EcRⅠ、Sau3AⅠ的切點(diǎn)是唯一的）。請回答下列問題：
（1）經(jīng)BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以與上述表達(dá)載體被酶切后的產(chǎn)物連接，理由是
。
（2）圖2中啟動子的作用是，終止子的作用是，抗生素抗性基因的作用是。
（3）構(gòu)建基因表達(dá)載體時，還需要用到DNA連接酶。常見的DNA連接酶有 DNA連接酶和
DNA連接酶，其中能連接平末端的是 DNA連接酶。
（4）若某人利用圖2所示的表達(dá)載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子（如圖3）。這三種重組子中，不能在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因產(chǎn)物的有，原因是
。
（2022春?海安市校級期中）抗體分子含有兩條短肽和兩條長肽鏈，科研人員將小鼠編碼抗體（抗禽流感病毒HA抗原）可變區(qū)的基因片段與人編碼抗體恒定區(qū)的基因片段整合，構(gòu)建圖1所示表達(dá)載體（HindⅢ等表示不同限制酶的切割位點(diǎn)，EcRⅤ識別序列和切割位點(diǎn)是GAT↓ATC），導(dǎo)入中國倉鼠卵巢細(xì)胞后，篩選能夠穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株，成功獲得大量嵌合抗體（圖2）。請根據(jù)資料回答下列問題：
（1）為構(gòu)建人鼠嵌合抗體基因表達(dá)載體，需要對編碼抗體不同片段的基因進(jìn)行重組，為此需從分泌鼠源單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞中提取，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄得到用于PCR擴(kuò)增，并分別與人抗體的恒定區(qū)DNA序列拼接。
（2）在PCR反應(yīng)體系中需加入模板、、Taq酶、引物、緩沖液等，擴(kuò)增過程中高溫處理的目的是。若利用PCR技術(shù)擴(kuò)增某基因片段時消耗了126個引物分子，則該過程擴(kuò)增了次。
（3）圖1所示表達(dá)載體中除標(biāo)注出的結(jié)構(gòu)外還必須有，圖中①是識別和結(jié)合的部位。構(gòu)建該基因表達(dá)載體時，先將人抗體的長鏈、短鏈基因部分序列分別與相應(yīng)鼠抗體的可變區(qū)序列整合后插入到兩個啟動子的下游，這過程需要用到多種限制酶，如獲得鼠抗體長鏈可變區(qū)基因用
酶切；圖中⑤和⑥用（填“T4DNA”或“E?cliDNA”）連接酶連接。
（4）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入中國倉鼠卵巢細(xì)胞后，可采用技術(shù)檢驗(yàn)基因是否成功轉(zhuǎn)錄。通過基因工程技術(shù)成功表達(dá)并組裝出有生物學(xué)活性的嵌合抗體，該嵌合抗體的優(yōu)點(diǎn)是。
考法2 DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定
（2022?遼寧開學(xué)）染色質(zhì)是由一定長度的核小體為基本單位構(gòu)成的。將大鼠肝細(xì)胞中分離出的染色質(zhì)用非特異性核酸酶水解后去除染色質(zhì)蛋白，對得到的DNA片段進(jìn)行凝膠電泳，結(jié)果如圖所示。若先將染色質(zhì)中的蛋白質(zhì)去掉后用同樣的非特異性核酸酶處理，則得到隨機(jī)長度的DNA片段。據(jù)此分析，下列有關(guān)敘述錯誤的是（）
A．凝膠中的DNA分子通過染色，可以在波長為300nm的紫外燈下被檢測出來
B．染色質(zhì)中的蛋白質(zhì)可能對DNA具有保護(hù)作用
C．構(gòu)成核小體的基本單位是脫氧核糖核苷酸
D．在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)
（2022春?尖山區(qū)校級月考）如圖是將目的基因?qū)氪竽c桿菌內(nèi)制備“工程菌”的示意圖，其中引物1—4在含有目的基因的DNA上的結(jié)合位置如甲圖所示，限制酶BamHI、EcRI、HindDI在質(zhì)粒上的識別位點(diǎn)如乙圖所示。以下說法中錯誤的是（）
A．PCR過程完成4輪循環(huán)，理論上至少需加入引物30個
B．若已經(jīng)合成了甲圖所示4種引物，應(yīng)選擇引物2和3擴(kuò)增目的基因
C．過程①中應(yīng)使用限制酶BamHI切割質(zhì)粒
D．對于轉(zhuǎn)化失敗的大腸桿菌及其培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行滅菌處理，以防其污染環(huán)境
考法3 蛋白質(zhì)工程
（2022??？谀M）利用木聚糖酶進(jìn)行紙漿漂白，可以大幅度減少氯化物的用量，減輕造紙工業(yè)對環(huán)境的污染。紙漿漂白需要在高溫堿性條件下進(jìn)行，因此需要耐熱耐堿的木聚糖酶。根據(jù)生產(chǎn)需要，科學(xué)家對已知氨基酸序列的木聚糖酶進(jìn)行改造，獲得了耐高溫耐堿的新木聚糖酶，減少了紙漿漂白時木聚糖酶的用量，提高了生產(chǎn)效率?；卮鹣铝袉栴}：
（1）蛋白質(zhì)工程的目標(biāo)是根據(jù)人們對的特定需求，對蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行設(shè)計(jì)改造。與蛋白質(zhì)工程相比，基因工程原則上只能生產(chǎn) ，它們的結(jié)構(gòu)和功能符合特定物種生存的需要。
（2）在蛋白質(zhì)工程和基因工程中常用大腸桿菌作為受體細(xì)胞，原因是大腸桿菌
（答出兩點(diǎn)）。分離純化大腸桿菌時，可使用接種環(huán)采用法將聚集的菌種逐步分離并培養(yǎng)成單菌落；實(shí)驗(yàn)室中利用選擇培養(yǎng)基篩選微生物的原理是
。
（3）人工合成的新木聚糖酶的基因在導(dǎo)入受體細(xì)胞前要先構(gòu)建，以使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。若要將重組大腸桿菌分泌的耐熱耐堿木聚糖酶應(yīng)用于造紙工業(yè)生產(chǎn)，除了需要研究木聚糖酶的產(chǎn)量外，還需要檢測木聚糖酶的。
（4）有研究表明，在木聚糖酶中特定部位引入精氨酸可以增加木聚糖酶中的離子鍵數(shù)目，從而增加該酶在堿性環(huán)境中的穩(wěn)定性。利用蛋白質(zhì)工程技術(shù)改造木聚糖酶，其基本思路是
。根據(jù)新木聚糖酶的氨基酸序列設(shè)計(jì)新木聚糖酶的基因，會設(shè)計(jì)出多種脫氧核并酸序列，原因是
。
考法4 生物技術(shù)的安全性和倫理問題
（2013?上海模擬）根據(jù)下列2份材料回答有關(guān)生物技術(shù)的問題．
2012年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎獲獎?wù)叻謩e是來自日本的科學(xué)家山中伸彌和來自英國的科學(xué) 家約翰?格登．約翰?格登（Jhn B．Gurdn）去除一只爪蟾卵細(xì)胞的細(xì)胞核，代之以取自蝌蚪的一個特殊細(xì)胞的細(xì)胞核．經(jīng)處理的卵細(xì)胞發(fā)育成一只正常的蝌蚪．?dāng)?shù)十年后其他學(xué)者后續(xù)進(jìn)行的核移植實(shí)驗(yàn)成功克隆出哺乳動物，因而約翰?格登被尊為“克隆教父”．
2001年11月25日，美國先進(jìn)細(xì)胞技術(shù)公司利用成人細(xì)胞首次克隆出人類早期胚胎，消息公布后，引起全世界的軒然大波；11月29日，中國衛(wèi)生部明確表示：中國不贊成、不支持、不接受任何克隆人實(shí)驗(yàn)，贊成以治療和預(yù)防疾病為目的人類胚胎干細(xì)胞研究，但研究必須是有序的，并要在有效監(jiān)控條件下進(jìn)行．
（1）動物的克隆方法一般是：供體（被克隆個體）的體細(xì)胞的核+去核卵細(xì)胞→重組細(xì)胞→早期胚胎→個體
“多利”的誕生采用了上述技術(shù)路線，一般認(rèn)為這種生殖（繁殖）方式是生殖．b過程在離體條件下進(jìn)行，除了營養(yǎng)和適宜電脈沖刺激之外，至少還需要等條件；c過程中應(yīng)用了技術(shù)．
（2）克隆技術(shù)的突破說明了．
（3）克隆人在全世界引起軒然大波，中國衛(wèi)生部反對克隆人，原因是（多選）．
A．克隆立法相對滯后
B．如果克隆人早期胚胎的試驗(yàn)不加控制地進(jìn)行下去，克隆人終將誕生
C．克隆人一旦出生，整個人倫方面觀念化的東西都被推翻，同時會帶來人種優(yōu)化、宗教混亂等社會政治問題
D．克隆技術(shù)并不絕對成熟，不能保證克隆出無缺陷的人
E．大力推廣克隆技術(shù)對保持生物多樣性具有重要意義
Ⅱ．2006 年山中伸彌首次利用逆轉(zhuǎn)錄病毒將四種轉(zhuǎn)錄因子“Oct4，Sx2，c﹣Myc，Klf4”導(dǎo)入已分化完全的小鼠纖維母細(xì)胞中，將其重新編排變成全能性的類胚胎細(xì)胞，這些重編排的細(xì)胞被命名為“誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞”，即iPS細(xì)胞．
（4）近些年的研究顯示，iPS細(xì)胞可以產(chǎn)生出機(jī)體內(nèi)所有種類的細(xì)胞，由iPS細(xì)胞產(chǎn)生其他種類細(xì)胞的過程稱為．
（5）目前iPS細(xì)胞在實(shí)際應(yīng)用中還存在許多問題．例如有研究發(fā)現(xiàn)iPS細(xì)胞的增殖難以控制，即iPS細(xì)胞具有細(xì)胞的特征．結(jié)合山中伸彌的研究過程分析，產(chǎn)生這種變化的最可能的原因：
．
（2022?重慶）植物體細(xì)胞通常被誘導(dǎo)為愈傷組織后才能表現(xiàn)全能性。研究發(fā)現(xiàn)，愈傷組織的中層細(xì)胞是根或芽再生的源頭干細(xì)胞，其在不同條件下，通過基因的特異性表達(dá)調(diào)控生長素、細(xì)胞分裂素的作用，表現(xiàn)出不同的效應(yīng)（見如表）。已知生長素的生理作用大于細(xì)胞分裂素時有利于根的再生；反之，有利于芽的再生。下列推論不合理的是（）
A．WOX5失活后，中層細(xì)胞會喪失干細(xì)胞特性
B．WOX5+PLT可能有利于愈傷組織中生長素的積累
C．ARR5促進(jìn)細(xì)胞分裂素積累或提高細(xì)胞對細(xì)胞分裂素的敏感性
D．體細(xì)胞中生長素和細(xì)胞分裂素的作用可能相互抑制
（2022?河北）《爾雅》《四民月令》和《齊民要術(shù)》中記載，麻為雌雄異株，黑、白種子萌發(fā)分別長成雌、雄植株，其莖稈經(jīng)剝皮、加工后生產(chǎn)的纖維可用于制作織物，雄麻纖維產(chǎn)量遠(yuǎn)高于雌麻，故“凡種麻，用白麻子”。依據(jù)上述信息推斷，下列敘述錯誤的是（）
A．可從雄麻植株上取部分組織，體外培養(yǎng)產(chǎn)生大量幼苗用于生產(chǎn)
B．對雄麻噴灑赤霉素可促進(jìn)細(xì)胞伸長，增加纖維產(chǎn)量
C．因?yàn)榇坡槔w維產(chǎn)量低，所以在生產(chǎn)中無需播種黑色種子
D．與雌雄同花植物相比，麻更便于雜交選育新品種
（2022?湖北）關(guān)于白酒、啤酒和果酒的生產(chǎn)，下列敘述錯誤的是（）
A．在白酒、啤酒和果酒的發(fā)酵初期需要提供一定的氧氣
B．白酒、啤酒和果酒釀制的過程也是微生物生長繁殖的過程
C．葡萄糖轉(zhuǎn)化為乙醇所需的酶既存在于細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)，也存在于線粒體
D．生產(chǎn)白酒、啤酒和果酒的原材料不同，但發(fā)酵過程中起主要作用的都是酵母菌
（2022?湖北）某興趣小組開展小鼠原代神經(jīng)元培養(yǎng)的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其培養(yǎng)的原代神經(jīng)元生長緩慢，其原因不可能的是（）
A．實(shí)驗(yàn)材料取自小鼠胚胎的腦組織
B．為了防止污染將培養(yǎng)瓶瓶口密封
C．血清經(jīng)過高溫處理后加入培養(yǎng)基
D．所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性
（2022?湖北）滅菌、消毒、無菌操作是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常見的操作。下列敘述正確的是（）
A．動、植物細(xì)胞DNA的提取必須在無菌條件下進(jìn)行
B．微生物、動物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染
C．為防止蛋白質(zhì)變性，不能用濕熱滅菌法對牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌
D．用濕熱滅菌法對實(shí)驗(yàn)中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進(jìn)行滅菌
（2022?山東）青霉菌處在葡萄糖濃度不足的環(huán)境中時，會通過分泌青霉素殺死細(xì)菌，以保證自身生存所需的能量供應(yīng)。目前已實(shí)現(xiàn)青霉素的工業(yè)化生產(chǎn)，關(guān)于該生產(chǎn)過程，下列說法錯誤的是（）
A．發(fā)酵液中的碳源不宜使用葡萄糖
B．可用深層通氣液體發(fā)酵技術(shù)提高產(chǎn)量
C．選育出的高產(chǎn)菌株經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后才可接種到發(fā)酵罐中
D．青霉素具有殺菌作用，因此發(fā)酵罐不需嚴(yán)格滅菌
（2022?山東）關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說法錯誤的是（）
A．過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解
B．離心研磨液是為了加速DNA的沉淀
C．在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色
D．粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)
（2022?山東）如圖所示，將由2種不同的抗原分別制備的單克隆抗體分子，在體外解偶聯(lián)后重新偶聯(lián)可制備雙特異性抗體，簡稱雙抗。下列說法錯誤的是（）
A．雙抗可同時與2種抗原結(jié)合
B．利用雙抗可以將蛋白類藥物運(yùn)送至靶細(xì)胞
C．篩選雙抗時需使用制備單克隆抗體時所使用的2種抗原
D．同時注射2種抗原可刺激B細(xì)胞分化為產(chǎn)雙抗的漿細(xì)胞
（多選）（2022?山東）啤酒的工業(yè)化生產(chǎn)中，大麥經(jīng)發(fā)芽、焙烤、碾磨、糖化、蒸煮、發(fā)酵、消毒等工序后，最終過濾、調(diào)節(jié)、分裝。下列說法正確的是（）
A．用赤霉素處理大麥，可使大麥種子無須發(fā)芽就能產(chǎn)生α﹣淀粉酶
B．焙烤是為了利用高溫殺死大麥種子胚并進(jìn)行滅菌
C．糖漿經(jīng)蒸煮、冷卻后需接種酵母菌進(jìn)行發(fā)酵
D．通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)可減少啤酒酵母雙乙酰的生成，縮短啤酒的發(fā)酵周期
（2022?重慶）改良水稻的株高和產(chǎn)量性狀是實(shí)現(xiàn)袁隆平先生“禾下乘涼夢”的一種可能途徑。研究人員克隆了可顯著增高和增產(chǎn)的eui基因，并開展了相關(guān)探索。
（1）花藥培養(yǎng)能縮短育種年限，原因是
。在步驟Ⅰ的花藥培養(yǎng)過程中，可產(chǎn)生單倍體愈傷組織，將其培養(yǎng)于含的培養(yǎng)基上，可促進(jìn)產(chǎn)生二倍體愈傷組織。Ⅰ中能用于制造人工種子的材料是。
（2）步驟Ⅱ中，eui基因克隆于cDNA文庫而不是基因組文庫，原因是
；在構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時使用的工具酶有。為篩選含重組Ti質(zhì)粒的菌株，需在培養(yǎng)基中添加。獲得的農(nóng)桿菌菌株經(jīng)鑒定后，應(yīng)侵染Ⅰ中的，以獲得轉(zhuǎn)基因再生植株。再生植株是否含有eui基因的鑒定方法是
，移栽后若發(fā)育為更高且豐產(chǎn)的稻株，則可望“禾下乘涼”。
（2022?河北）[選修1：生物技術(shù)實(shí)踐]
番茄灰霉病菌嚴(yán)重影響番茄生產(chǎn)，枯草芽孢桿菌可以產(chǎn)生對多種病原菌具有抑制作用的蛋白質(zhì)。為探究枯草芽孢桿菌能否用于番茄灰霉病的生物防治，研究者設(shè)計(jì)了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
回答下列問題：
（1）檢測枯草芽孢桿菌對番茄灰霉病菌的抑制作用時，取適量菌液涂布于固體培養(yǎng)基上，將無菌濾紙片（直徑5mm）在菌液中浸泡后覆蓋于固體培養(yǎng)基中心，數(shù)秒后取出濾紙片，培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)后測量大小以判定抑菌效果。
（2）枯草芽孢桿菌為好氧微生物，液體培養(yǎng)時應(yīng)采用（填“靜置”或“搖床震蕩”）培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中抽樣檢測活菌數(shù)量時，應(yīng)采用（填“稀釋涂布平板法”或“顯微鏡直接計(jì)數(shù)法”），其原因是
。
（3）電泳分離蛋白質(zhì)混合樣品的原理是
。利用SDS﹣聚丙烯酰胺凝膠電泳測定枯草芽孢桿菌的抗菌蛋白分子量時，SDS的作用是。
（4）枯草芽孢桿菌長期保藏時，常以其作為保藏對象。
（2022?乙卷）化合物S被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品和化工工業(yè)。用菌株C可生產(chǎn)S，S的產(chǎn)量與菌株C培養(yǎng)所利用的碳源關(guān)系密切。為此，某小組通過實(shí)驗(yàn)比較不同碳源對菌體生長和S產(chǎn)量的影響，結(jié)果見表。
回答下列問題。
（1）通常在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物時，需要對所用的玻璃器皿進(jìn)行滅菌，滅菌的方法有（答出2點(diǎn)即可）。
（2）由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，菌株C生長的最適碳源是；用菌株C生產(chǎn)S的最適碳源是。菌株C的生長除需要碳源外，還需要（答出2點(diǎn)即可）等營養(yǎng)物質(zhì)。
（3）由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，碳源為淀粉時菌株C不能生長，其原因是。
（4）若以制糖廢液作為碳源，為進(jìn)一步確定生產(chǎn)S的最適碳源濃度，某同學(xué)進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。請簡要寫出實(shí)驗(yàn)思路：
。
（5）利用制糖廢液生產(chǎn)S可以實(shí)現(xiàn)廢物利用，其意義是（答出1點(diǎn)即可）。
果酒
果醋
泡菜
菌種

原理
酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生酒精
醋酸菌有氧呼吸產(chǎn)生乙酸
乳酸菌無氧呼吸產(chǎn)生乳酸
控制條件
前期，后期無氧，
有氧，
無氧，常溫
實(shí)驗(yàn)流程
制備固體培養(yǎng)基
過程：配置培養(yǎng)基→滅菌→倒平板
純化培養(yǎng)
（只能純化，不能計(jì)數(shù)）
通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面
（既能純化，也能計(jì)數(shù)）
將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基的表面，聚集在一起的微生物將被分散成單個細(xì)胞，從而在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。
篩選
以“ ”為唯一氮源的培養(yǎng)基
鑒別
上述培養(yǎng)基中加入，指示劑變紅則初步鑒定該細(xì)菌能分解尿素
計(jì)數(shù)方法
（不能直接區(qū)分死菌和活菌，所得數(shù)值可能“偏高”）
間接計(jì)數(shù)法（）（活菌計(jì)數(shù)法，所得數(shù)值一般偏低）
比較項(xiàng)目
胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）
成體干細(xì)胞
誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）
來源
.
成體組織或器官內(nèi)
誘導(dǎo)高度分化的組織細(xì)胞形成
特點(diǎn)
具有分化成為成年動物體內(nèi)的任何一種類型的細(xì)胞，并進(jìn)一步形成機(jī)體的所有組織和器官甚至個體的潛能
具有組織特異性，只能分化成特定的細(xì)胞或組織，不具有發(fā)育成完整個體的能力
類似胚胎干細(xì)胞；誘導(dǎo)過程無須破壞胚胎，應(yīng)用前景更廣泛
操作流程
備注
對供體、受體的選擇和處理
↓
選擇：遺傳性狀優(yōu)良、生產(chǎn)能力強(qiáng)的供體、有健康的體質(zhì)和正常繁殖能力的受體
處理：處理和對供體母畜進(jìn)行處理（注射）
配種或人工授精
↓
對胚胎的收集、檢查及對供體的處理
↓
收集：收集胚胎
檢查：對胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查，這時胚胎應(yīng)發(fā)育到或階段
處理：供體母畜正常繁殖或兩三個月后進(jìn)行另一次移植
胚胎移植
↓
胚胎移植后的檢查
↓
檢查受體是否
具有優(yōu)良性狀的后代
材料
發(fā)育良好、形態(tài)正常的或
實(shí)質(zhì)
胚胎分割可增加動物后代的數(shù)量，其實(shí)質(zhì)是動物的或
成功關(guān)鍵點(diǎn)
在分割囊胚階段的胚胎時，要注意將均等分割，否則會影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。對未知性別的胚胎可以取樣，做DNA分析進(jìn)行性別鑒定。
限制性內(nèi)切核酸酶（限制酶）
作用：識別 DNA分子的特定，并使每一條鏈中特定部位的斷開
使用方法：一般用同種限制酶切割載體和目的基因
DNA連接酶
E·cli DNA連接酶只能連接
T4DNA連接酶能連接和
載體
能在細(xì)胞中進(jìn)行，或整合到上，隨受體DNA同步復(fù)制
有一至多個限制酶
具有特殊的，便于重組DNA分子的篩選
目的基因的篩選與獲取
篩選方法：從相關(guān)的已知和清晰的基因中進(jìn)行篩選
獲取方法：常用特異性快速擴(kuò)增目的基因
基因表達(dá)載體的構(gòu)建
（核心步驟）
將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
植物：、花粉管通道法
動物：（導(dǎo)入受精卵）
微生物：處理法
目的基因的檢測與鑒定
分子水平：PCR等技術(shù)、抗原-抗體雜交
水平：抗性、耐性實(shí)驗(yàn)
含義
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫，是一種體外對目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制的技術(shù)
原理

條件
模板DNA、2種引物、4種脫氧核苷酸（dNTP）、耐高溫的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）
擴(kuò)增方向
DNA的合成方向總是從子鏈的延伸
引物
使DNA聚合酶能從引物的開始連接脫氧核苷酸，是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對的短單鏈核酸
目的
短時間內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因
原理
利用DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分
DNA性質(zhì)
DNA不溶于，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精；DNA能溶于2ml·L-1的
鑒定
在一定溫度下，DNA遇會呈現(xiàn)藍(lán)色
步驟
研磨→過濾（取上清液）→加入體積相等的、預(yù)冷的酒精（體積分?jǐn)?shù)為95%），靜置2~3min→攪拌（或離心）→取白色絲狀物（或沉淀物）→溶解→鑒定DNA
原理
在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的、分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)
鑒定
凝膠中的DNA分子通過染色，可以在波長為的紫外線下被檢測出來
注意
要避免外源DNA等因素的污染
治療性克隆
生殖性克隆
區(qū)別
目的
利用克隆技術(shù)產(chǎn)生特定的細(xì)胞、組織和器官，用于醫(yī)學(xué)研究和治療
利用克隆技術(shù)產(chǎn)生獨(dú)立生存的新個體，獲得人的復(fù)制品
水平
細(xì)胞水平
個體水平
聯(lián)系
都屬于生殖；產(chǎn)生的新細(xì)胞、組織、器官或新個體，遺傳信息相同
條件
基因表達(dá)產(chǎn)物和相互作用
效應(yīng)
①
WOX5
維持未分化狀態(tài)
②
WOX5+PLT
誘導(dǎo)出根
③
WOX5+ARR2，抑制ARR5
誘導(dǎo)出芽
碳源
細(xì)胞干重（g/L）
S產(chǎn)量（g/L）
葡萄糖
3.12
0.15
淀粉
0.01
0.00
制糖廢液
2.30
0.18

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