一、基礎(chǔ)練
1.下列關(guān)于培養(yǎng)基的說法,正確的是( )
A.培養(yǎng)基是為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)的基質(zhì)
B.培養(yǎng)基只有兩類:液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基
C.除水以外的無機(jī)物只能提供無機(jī)鹽
D.無機(jī)氮源不可能提供能量
2.下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述,不正確的是( )
A.倒平板時(shí)需在酒精燈火焰旁進(jìn)行
B.溶化牛肉膏時(shí),稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯
C.平板劃線法接種時(shí),每次劃線操作之前都需對接種環(huán)進(jìn)行滅菌
D.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基時(shí),滅菌后加入瓊脂并用玻棒不斷攪拌,目的是促進(jìn)其溶化
3.在培養(yǎng)基的配制過程中,具有如下步驟,其正確順序?yàn)? )
①溶化 ②調(diào)pH ③加棉塞 ④包扎 ⑤分裝 ⑥稱量
A.①②⑥⑤③④B.⑥①②⑤③④
C.⑥①②⑤④③D.①②⑤④⑥③
4.漆酶屬于木質(zhì)降解酶類,在環(huán)境修復(fù)、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域有著廣泛用途。下圖是分離、純化和保存漆酶菌株的過程,相關(guān)敘述正確的是( )
A.飲用水中含有大量微生物,是分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品
B.選擇培養(yǎng)基中需要加入漆酶的底物作為唯一碳源
C.在已涂布的平板上直接劃線可以進(jìn)一步純化獲得單菌落
D.斜面培養(yǎng)基中含有大量營養(yǎng)物,可在常溫下長期保存菌株
5.(2020山東二模)化學(xué)需氧量(COD)是衡量污水中有機(jī)污染物含量的重要指標(biāo)。從某污水處理系統(tǒng)中分離出多種細(xì)菌,經(jīng)分離篩選獲得具有高效降低COD能力的菌株,過程如圖所示。下列相關(guān)說法正確的是( )
A.可用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)菌液中的細(xì)菌數(shù)目來確定接種時(shí)菌液的最佳稀釋倍數(shù)
B.制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基時(shí),需在倒平板后進(jìn)行滅菌操作
C.由菌落分布情況可知,在該固體培養(yǎng)基上接種的方法是平板劃線法
D.挑取單菌落后接種到液體培養(yǎng)基中培養(yǎng),目的是純化菌株
6.下圖表示培養(yǎng)和純化酵母菌的部分操作步驟,下列相關(guān)敘述正確的是( )
A.對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行滅菌處理
B.步驟①倒平板操作時(shí),倒好后應(yīng)立即將其倒過來放置
C.步驟②應(yīng)多個(gè)方向劃線,使接種物逐漸稀釋,培養(yǎng)后出現(xiàn)單個(gè)菌落
D.步驟③劃線結(jié)束后在皿蓋上做好標(biāo)注
7.下列有關(guān)土壤中微生物的分離與計(jì)數(shù)的說法,錯(cuò)誤的是( )
A.因?yàn)橥寥乐懈黝愇⑸锏臄?shù)量不同,所以,為獲得不同類型的微生物要按不同的稀釋倍數(shù)進(jìn)行分離
B.測定土壤中細(xì)菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量,選用的稀釋范圍不同
C.如果得到了3個(gè)或3個(gè)以上菌落數(shù)目在30~300的平板,則說明稀釋操作比較成功,并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)
D.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯小于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目,說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些細(xì)菌菌落
8.將馬鈴薯去皮切塊,加水煮沸一定時(shí)間,過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入一定量的蔗糖和瓊脂,用水定容后滅菌,得到M培養(yǎng)基。回答下列問題。
(1)M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選,則培養(yǎng)基中應(yīng)加入鏈霉素抑制 的生長,加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基允許 生長, 其他種類微生物生長。
(2)M培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長提供了多種營養(yǎng)物質(zhì),營養(yǎng)物質(zhì)類型除氮源外還有 (答出兩點(diǎn)即可)。氮源進(jìn)入細(xì)菌后,可參與合成的生物大分子有 (答出兩點(diǎn)即可)。
(3)若在M培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖,接種土壤濾液并培養(yǎng),平板上長出菌落后可通過加入顯色劑篩選出能產(chǎn)生淀粉酶的微生物,加入的顯色劑是 。
(4)甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量,在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果:
甲同學(xué)涂布了3個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是110、140和149,取平均值133。
乙同學(xué)涂布了3個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是27、169和176,取平均值124。
有人認(rèn)為這兩位同學(xué)的結(jié)果中,乙同學(xué)的結(jié)果可信度低,其原因是 。
二、提升練
1.(2020山東一模)生長圖形法是一種測定微生物營養(yǎng)需求的簡便方法。為探究某嗜熱菌所需生長因子的種類,研究小組把該菌的懸浮液與不含任何生長因子但含有其他必需營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基混合后倒成平板,然后在平板上劃分?jǐn)?shù)區(qū),將甲、乙、丙三種生長因子分別添加到不同區(qū)域,培養(yǎng)結(jié)果如圖所示,下列說法正確的是( )
A.培養(yǎng)基倒成平板后直接培養(yǎng)可判斷有無污染
B.培養(yǎng)基倒成平板后需要進(jìn)行滅菌處理
C.圖示結(jié)果表明該菌需要生長因子乙或丙
D.生長圖形法還可用于某些菌種的篩選
2.(2020山東青島二模)將沒有吃完的西瓜,蓋上保鮮膜后放入冰箱,是很多人日常儲藏西瓜的辦法。有這樣一種說法:蓋上保鮮膜儲藏的西瓜中細(xì)菌種類和數(shù)目反而比沒用保鮮膜的多。某生物研究小組針對上述說法進(jìn)行探究,他們用保鮮膜保存了三天的西瓜表面的瓜瓤制備浸出液,研究細(xì)菌的種類和數(shù)量。下列說法正確的是( )
A.應(yīng)該采用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種
B.瓜瓤浸出液是液體,因此培養(yǎng)時(shí)平板不用倒置
C.僅需要設(shè)置盛有培養(yǎng)基的空白平板作對照
D.可通過平板上菌落的特征初步判斷細(xì)菌的種類
3.做“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)時(shí),下列敘述錯(cuò)誤的是( )
A.高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí),打開放氣閥使壓力表指針回到零后,開啟鍋蓋
B.倒平板時(shí),應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊,以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上
C.為了防止污染,接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落
D.用記號筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí),應(yīng)標(biāo)記在皿底上
4.(2020山東青島二中期末)篩選淀粉分解菌需使用以淀粉為唯一碳源的培養(yǎng)基。接種培養(yǎng)后,若細(xì)菌能分解淀粉,培養(yǎng)平板經(jīng)稀碘液處理,會出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈(如圖),實(shí)驗(yàn)結(jié)果見下表。
有關(guān)本實(shí)驗(yàn)的敘述,正確的是( )
A.培養(yǎng)基除淀粉外還含有氮源等其他營養(yǎng)物質(zhì)
B.篩選分解淀粉的細(xì)菌時(shí),菌液應(yīng)稀釋后涂布
C.以上兩種細(xì)菌均不能將淀粉酶分泌至細(xì)胞外
D.H/C值反映了兩種細(xì)菌分解淀粉能力的差異
5.(2020山東臨沂期中)為分離和培養(yǎng)土壤中能分解尿素的細(xì)菌,實(shí)驗(yàn)小組使用了下列培養(yǎng)基配方,將各種物質(zhì)溶解后,用蒸餾水定容到1 000 mL,再經(jīng)高溫滅菌,制成固體培養(yǎng)基;經(jīng)接種、培養(yǎng)后統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中的活菌數(shù)目。回答下列問題。
(1)根據(jù)培養(yǎng)基的成分判斷,該同學(xué)能否分離出土壤中分解尿素的細(xì)菌? (填“能”或“不能”),原因是

。
(2)培養(yǎng)基常用 方法滅菌,培養(yǎng)皿常用 方法滅菌。待培養(yǎng)基冷卻到50 ℃左右時(shí),在酒精燈火焰附近倒平板,等平板冷卻凝固后,將平板倒過來放置,可以防止
,以免造成污染。
(3)要統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中的活菌數(shù)目,宜采用 法接種,根據(jù)土壤樣品的稀釋倍數(shù)和接種稀釋液的體積,統(tǒng)計(jì)平板上的 ,
就能大約推測出樣品中的活菌數(shù)。
(4)培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌時(shí),在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是

。
(5)某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為234個(gè),那么每克樣品中的菌落數(shù)是(涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1 mL) 。
(6)若在培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌的過程中,發(fā)現(xiàn)了另一種B細(xì)菌,在B細(xì)菌周圍分解尿素的細(xì)菌的生長繁殖受到抑制,甲同學(xué)提出的觀點(diǎn)是B細(xì)菌產(chǎn)生了不利于(抑制)分解尿素的細(xì)菌生存的物質(zhì)。請你在以下實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,繼續(xù)完成驗(yàn)證甲同學(xué)所提觀點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)過程:

(用文字和箭頭表示)。
課時(shí)規(guī)范練38 微生物的
培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用
一、基礎(chǔ)練
1.A 根據(jù)培養(yǎng)基的物理性質(zhì),可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基,在液體培養(yǎng)基中加入不同量的凝固劑如瓊脂可形成半固體或固體培養(yǎng)基;除水以外的無機(jī)物如NH4HCO3,既可以是碳源,也可以是氮源,不僅僅提供無機(jī)鹽;無機(jī)氮源有時(shí)也能提供能量,如NH3可以為硝化細(xì)菌提供能量。
2.D 倒平板時(shí)需在酒精燈火焰旁進(jìn)行,A項(xiàng)正確;溶化牛肉膏時(shí),稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯,B項(xiàng)正確;平板劃線法接種時(shí),每次劃線操作之前都需對接種環(huán)進(jìn)行滅菌,C項(xiàng)正確;制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基時(shí),滅菌前向牛肉膏蛋白胨溶液中加2%瓊脂,加熱并使其溶解,D項(xiàng)錯(cuò)誤。
3.B 在培養(yǎng)基的配制過程中,根據(jù)微生物的生長需要,稱量不同的營養(yǎng)物質(zhì),然后溶化、調(diào)整pH、培養(yǎng)基的分裝、加棉塞、包扎等,所以正確的順序是⑥①②⑤③④。
4.B 飲用水中含有微生物較少,不一定含有產(chǎn)漆酶的菌株,分離產(chǎn)漆酶菌株的取樣應(yīng)該到對應(yīng)富含木質(zhì)素的環(huán)境中,A項(xiàng)錯(cuò)誤;選擇培養(yǎng)基中加入漆酶的底物作為唯一碳源,只有能夠產(chǎn)生漆酶的菌株才能在該培養(yǎng)基上生長,其他微生物因缺少碳源不能生長,培養(yǎng)后可通過菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落,B項(xiàng)正確;在涂布平板上長出的菌落可以通過平板劃線法或稀釋涂布平板法進(jìn)一步純化,C項(xiàng)錯(cuò)誤;斜面培養(yǎng)基能增大接種面積,可在低溫下保存菌株,但不能長期保存,D項(xiàng)錯(cuò)誤。
5.A 利用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)是一種常用的細(xì)胞計(jì)數(shù)法,這種方法可以直接測定樣品中全部的細(xì)胞數(shù)目,因此可用來確定接種時(shí)菌液的最佳稀釋倍數(shù),A項(xiàng)正確;制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基時(shí),需在滅菌操作后進(jìn)行倒平板,B項(xiàng)錯(cuò)誤;由菌落分布情況可知,在該固體培養(yǎng)基上接種的方法是稀釋涂布平板法,C項(xiàng)錯(cuò)誤;挑取單菌落后接種到液體培養(yǎng)基中培養(yǎng),目的是增大菌株的數(shù)量(擴(kuò)大培養(yǎng)),D項(xiàng)錯(cuò)誤。
6.C 對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手需要進(jìn)行消毒處理,A項(xiàng)錯(cuò)誤;倒完平板后立即蓋上培養(yǎng)皿,冷卻后將平板倒過來放置,B項(xiàng)錯(cuò)誤;步驟②多個(gè)方向劃線,使接種物逐漸稀釋,培養(yǎng)后出現(xiàn)單個(gè)菌落,C項(xiàng)正確;圖中操作結(jié)束后需在培養(yǎng)皿皿底標(biāo)注菌種及接種日期等信息,而不是在皿蓋上做標(biāo)注,D項(xiàng)錯(cuò)誤。
7.D 土壤是微生物的天然培養(yǎng)基,土壤中各類微生物的數(shù)量不同,獲得不同類型的微生物要按不同的稀釋倍數(shù)進(jìn)行分離,A項(xiàng)正確;土壤中細(xì)菌總量高于土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量,所以選用的稀釋范圍不同,B項(xiàng)正確;采用稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí),得到了3個(gè)或3個(gè)以上菌落數(shù)目在30~300的平板,則說明稀釋操作比較成功,并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù),C項(xiàng)正確;選擇培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯小于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)目,說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些細(xì)菌菌落,D項(xiàng)錯(cuò)誤。
8.答案:(1)細(xì)菌 選擇 特定種類的微生物 抑制或阻止 (2)碳源、無機(jī)鹽 蛋白質(zhì)、DNA (3)碘液 (4)乙同學(xué)的結(jié)果中,第1個(gè)平板的計(jì)數(shù)與另2個(gè)相差懸殊,結(jié)果的重復(fù)性差
解析:(1)鏈霉素是常用的抗生素,能夠抑制細(xì)菌生長,加入鏈霉素的培養(yǎng)基從功能上來說是選擇培養(yǎng)基,選擇培養(yǎng)基只允許特定種類的微生物生長,抑制或阻止其他種類微生物生長。(2)M培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長提供了多種營養(yǎng)物質(zhì),營養(yǎng)物質(zhì)類型除氮源外還有碳源、無機(jī)鹽等。氮源進(jìn)入細(xì)菌后,可參與合成蛋白質(zhì)、DNA、RNA等生物大分子。(3)淀粉遇碘變藍(lán)色,若在M培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖,接種土壤濾液并培養(yǎng),平板上長出菌落后可通過加入顯色劑篩選出能產(chǎn)生淀粉酶的微生物,則加入的顯色劑是碘液。(4)乙同學(xué)結(jié)果不合理,因?yàn)榈?個(gè)計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個(gè)相差太遠(yuǎn),不能簡單地用其平均數(shù),結(jié)果的重復(fù)性差。
二、提升練
1.AD 平板上不含任何生長因子,若倒成平板后直接培養(yǎng),出現(xiàn)菌落說明已被雜菌感染,A項(xiàng)正確;制備平板時(shí),先滅菌再倒平板,B項(xiàng)錯(cuò)誤;圖中菌落生活在乙、丙區(qū)域之間,說明同時(shí)需要乙和丙,C項(xiàng)錯(cuò)誤;不同菌種所需的生長因子不同,根據(jù)某些菌種需要特殊的生長因子的原理,可利用生長圖形法篩選菌種,D項(xiàng)正確。
2.AD 研究細(xì)菌的種類和數(shù)量,需要采用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種才能計(jì)數(shù),A項(xiàng)正確;接種時(shí)需要將菌液接種在固體培養(yǎng)基上,培養(yǎng)時(shí)平板需要倒置,這樣可以防止培養(yǎng)皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)皿造成污染,還可防止培養(yǎng)基表面的水分揮發(fā),B項(xiàng)錯(cuò)誤;該實(shí)驗(yàn)是比較兩種不同處理方式下西瓜上菌體的種類和數(shù)量,所以除需要設(shè)置盛有培養(yǎng)基的空白平板作對照外,還需要設(shè)置不蓋保鮮膜同樣條件下保存三天的西瓜表面的瓜瓤制備浸出液后接種的平板做對照,C項(xiàng)錯(cuò)誤;不同菌體的菌落特征不同,所以可通過平板上菌落的特征初步判斷細(xì)菌的種類,D項(xiàng)正確。
3.ABC 高壓滅菌加熱結(jié)束后,自然冷卻至壓力表指針回到零后再慢慢打開排氣閥以排除余氣,然后才能開蓋取物,A項(xiàng)錯(cuò)誤;倒平板時(shí)左手拿培養(yǎng)皿,右手拿錐形瓶,左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙,倒入培養(yǎng)基后立即蓋上培養(yǎng)皿皿蓋,B項(xiàng)錯(cuò)誤;灼燒接種環(huán)之后,要冷卻后才能伸入菌液,以免溫度太高殺死菌種,C項(xiàng)錯(cuò)誤;在微生物的培養(yǎng)中,一般將培養(yǎng)皿倒置,應(yīng)在皿底上用記號筆做標(biāo)記,D項(xiàng)正確。
4.ABD 培養(yǎng)基一般含有碳源、氮源、水、無機(jī)鹽和生長因子等成分,A項(xiàng)正確;篩選淀粉分解菌時(shí),需要對菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,再將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),B項(xiàng)正確;由題意可知,以上兩種菌均會產(chǎn)生透明圈,說明兩種菌均可以產(chǎn)生淀粉酶并分泌到細(xì)胞外分解淀粉,C項(xiàng)錯(cuò)誤;淀粉分解菌的H/C越大,說明其產(chǎn)生的淀粉酶分解的淀粉相對越多,可說明該淀粉分解菌分解淀粉的能力越強(qiáng),D項(xiàng)正確。
5.答案:(1)不能 培養(yǎng)基含蛋白胨,尿素不是唯一氮源,不能選擇出只以尿素為氮源的微生物 (2)高壓蒸汽滅菌 干熱滅菌 培養(yǎng)皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基 (3)(稀釋)涂布平板 菌落數(shù)目 (4)將未接種的培養(yǎng)基在適宜溫度下放置適宜的時(shí)間,觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生 (5)2.34×109 (6)去除③中的B細(xì)菌保留培養(yǎng)基→再接種A細(xì)菌→培養(yǎng)一段時(shí)間→觀察A細(xì)菌的生長情況菌種
菌落直徑(C)/mm
透明圈直徑(H)/mm
H/C
細(xì)菌Ⅰ
5.1
11.2
2.2
細(xì)菌Ⅱ
8.1
13.0
1.6
KH2PO4
Na2HPO4
MgSO4·7H2O
蛋白胨
葡萄糖
尿素
瓊脂
1.4 g
2.1 g
0.2 g
1.0 g
10.0 g
1.0 g
15.0 g

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