考點規(guī)范練39　微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 　考點規(guī)范練+高頻考向練第86頁　 1.(河南鶴壁期末,31)金黃色葡萄球菌是一種具有高度耐鹽性的微生物,可引起人類肺炎、腸炎等疾病。金黃色葡萄球菌在血平板(培養(yǎng)基中添加適量人的血液)上生長時,可破壞菌落周圍的紅細胞,使其褪色。下圖為定性檢測鮮牛奶中是否存在金黃色葡萄球菌的操作流程,請回答相關(guān)問題。(1)按細胞結(jié)構(gòu)分類,金黃色葡萄球菌屬于　　　　生物,從培養(yǎng)過程分析,金黃色葡萄球菌可進行　　　　呼吸。 (2)質(zhì)量分數(shù)為7.5%的NaCl肉湯培養(yǎng)基為微生物提供的營養(yǎng)成分包括　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　,用質(zhì)量分數(shù)為7.5%的NaCl肉湯培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)的主要目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (3)操作中在血平板上的接種方法是　　　　　　　　,接種操作前后需要對接種工具進行　　　　　　滅菌。 (4)在制備血平板時需將pH調(diào)節(jié)至　　　　　(填“微酸性”或“微堿性”)后滅菌,待培養(yǎng)基　　　　后,再加入適量血液。按培養(yǎng)基功能分類,血平板屬于　　　　培養(yǎng)基。 (5)經(jīng)多次規(guī)范操作、重復(fù)實驗,血平板上均出現(xiàn)　　　　　　　　　　　　　　　的菌落,初步證明鮮牛奶中存在金黃色葡萄球菌,但鮮牛奶供應(yīng)商仍認為此菌并非鮮牛奶所攜帶,因此,要對本操作進行完善,完善的方案是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 答案(1)原核　有氧(2)碳源、氮源、水和無機鹽　增加金黃色葡萄球菌的數(shù)量(3)平板劃線法　灼燒(4)微堿性　冷卻　鑒別(5)周圍存在透明圈　設(shè)置不加鮮牛奶,其他操作均相同的對照組解析(1)金黃色葡萄球菌是一種細菌,屬于原核生物。培養(yǎng)過程無密閉處理,故它進行有氧呼吸。(2)質(zhì)量分數(shù)為7.5%的NaCl肉湯培養(yǎng)基可為微生物提供生長所需要的碳源、氮源、水和無機鹽。用質(zhì)量分數(shù)為7.5%的NaCl肉湯培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)是為了增加高度耐鹽性的金黃色葡萄球菌的數(shù)量。(3)圖示用的接種工具是接種環(huán),說明在血平板上接種的方法是平板劃線法。接種工具在接種前后都要進行灼燒滅菌處理。(4)金黃色葡萄球菌能在血平板(培養(yǎng)基中添加適量人的血液)生長,人的血漿pH為7.35~7.45,為微堿性,所以金黃色葡萄球菌的生長環(huán)境為弱堿性。培養(yǎng)基在滅菌前要先調(diào)節(jié)pH,因金黃色葡萄球菌能破壞紅細胞,使其褪色,血平板上出現(xiàn)周圍存在透明圈的菌落,說明有金黃色葡萄球菌,故血平板是鑒別培養(yǎng)基。(5)為增強實驗結(jié)論的嚴謹性,應(yīng)增加空白對照組。2.(全國丙卷,39)某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實驗材料分離純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明,乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；卮鹣铝袉栴}。(1)分離純化乳酸菌時,首先需要用　　　　　　對泡菜濾液進行梯度稀釋,進行梯度稀釋的理由是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (2)推測在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有　　　　　　　　　　和　　　　　　　　　　　　　　。分離純化時應(yīng)挑選出　　　　　　　　　　　　　的菌落作為候選菌。 (3)乳酸菌在-20 ℃長期保存時,菌液中常需要加入一定量的　　　　　　　　(填“蒸餾水”、“甘油”或“碳酸鈣”)。 答案(1)無菌水　泡菜濾液中菌的濃度高,直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落(2)鑒別乳酸菌　中和產(chǎn)生的乳酸(或酸)　具有透明圈(3)甘油解析本題考查微生物的培養(yǎng)及分離。(1)分離純化乳酸菌時,首先需要用無菌水對泡菜濾液進行梯度稀釋,原因是在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的乳酸菌被分散,培養(yǎng)后能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。(2)在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有鑒別乳酸菌和中和乳酸菌代謝過程中產(chǎn)生的乳酸;乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣,故分離純化時應(yīng)挑選出具有透明圈的菌落作為候選菌。(3)乳酸菌在-20 ℃長期保存時,菌液中常需要加入一定量的甘油。3.(河南鄭州、長葛質(zhì)檢三,39)下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方,請根據(jù)表格和所學(xué)知識回答下列相關(guān)問題。成　　分含量成分含量蛋白胨10.0 g 乳糖5.0 g蔗糖5.0 g K2HPO22.0 g 顯色劑(伊紅美藍)0.2 g 瓊脂12.0 g 將上述物質(zhì)溶解后,用蒸餾水定容到1 000 mL  (1)大腸桿菌的同化類型為　　　　　,大腸桿菌能在培養(yǎng)基上生長繁殖,從生態(tài)系統(tǒng)的成分上看,大腸桿菌屬于　　　　　。 (2)在微生物的實驗室培養(yǎng)中,獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　,因此需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進行　　　　(填“消毒”或“滅菌”),操作者的雙手需要進行清洗和　　　　?？諝庵械募毦捎米贤饩€殺滅,其原因是紫外線能使　　　　　　　　　　　,還能破壞DNA的結(jié)構(gòu)。 (3)根據(jù)用途劃分,該培養(yǎng)基屬于　　　　(填“選擇”或“鑒別”)培養(yǎng)基,若要分離能分解尿素的細菌需將培養(yǎng)基中　　　　　　　換成　　　　,若要鑒定分解尿素的細菌還需將伊紅美藍換成　　　　　　　　　　。 (4)培養(yǎng)大腸桿菌時,常用的接種方法是　　　　　　　　　　和　　　　　　　　　　　　。通過上述方法可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體,稱為　　　　。 (5)使用以下微生物發(fā)酵生產(chǎn)特定產(chǎn)物時,所利用的主要微生物的細胞結(jié)構(gòu)與大腸桿菌相同的是　　　　　。 A.制作果酒 　　　　　　　　B.由果酒制作果醋C.制作泡菜 　　 D.制作腐乳答案(1)異養(yǎng)型　分解者(2)防止外來雜菌的入侵　滅菌　消毒　蛋白質(zhì)變性(3)鑒別　蛋白胨　尿素　酚紅指示劑(4)平板劃線法　稀釋涂布平板法　菌落(5)B、C解析該培養(yǎng)基含有顯色劑(伊紅美藍),可使大腸桿菌菌落呈現(xiàn)金屬光澤,因此屬于鑒別培養(yǎng)基。若要分離能分解尿素的細菌,應(yīng)以尿素為唯一氮源,因此應(yīng)將蛋白胨換成尿素。若要鑒別尿素分解菌,應(yīng)在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。制作果酒、果醋、泡菜和腐乳利用的微生物分別是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌和毛霉,其中醋酸菌、乳酸菌與大腸桿菌都屬于原核生物,酵母菌和毛霉都屬于真核生物。4.(吉林省實驗中學(xué)八模,39)有機化工原料氯苯不易降解,會污染環(huán)境,現(xiàn)欲從土壤中分離高效降解氯苯的微生物。回答下列問題。(1)為了獲得能降解氯苯的微生物菌種,可在被氯苯污染的土壤中取樣,并應(yīng)選用以　　　　為碳源的培養(yǎng)液進行選擇培養(yǎng)。除含有碳源外,培養(yǎng)液還應(yīng)含有　　　　、無機鹽和水等。 (2)將獲得的3種待選微生物甲、乙、丙分別接種在1 L含20 mg氯苯的相同培養(yǎng)液中培養(yǎng)(培養(yǎng)液中其他營養(yǎng)物質(zhì)充裕、條件適宜),觀測從實驗開始到微生物停止生長所用的時間,甲、乙、丙分別為33小時、15小時、46小時,則應(yīng)選擇微生物　　　　作為菌種進行后續(xù)培養(yǎng)。 (3)若要測定培養(yǎng)液中選定菌種的菌體數(shù),既可用　　　　　直接計數(shù),也可選用　　　　　　　　　　　法統(tǒng)計活菌數(shù)目,一般前者得到的結(jié)果　　　(填“>”“=”或“<”)后者。 (4)對選定的菌種進行細胞學(xué)檢測,發(fā)現(xiàn)它沒有具膜細胞器如線粒體等,則該菌種屬于　　　　生物,其產(chǎn)生的降解氯苯的酶蛋白在　　　　　上合成。 答案(1)氯苯　氮源　(2)乙　(3)顯微鏡　稀釋涂布平板　>(4)原核　核糖體解析(1)為了獲得能降解氯苯的微生物菌種應(yīng)選用以氯苯為碳源的培養(yǎng)液進行選擇培養(yǎng),在該培養(yǎng)液中,只有能降解氯苯的微生物才能生長,而其他微生物則不能生長。培養(yǎng)液中除含有碳源外,還應(yīng)含有氮源、無機鹽和水等。(2)微生物乙在含有氯苯的培養(yǎng)液中從實驗開始到停止生長所用的時間較微生物甲、丙短,說明微生物分解氯苯的能力比甲、丙更強,所以應(yīng)選擇微生物乙作為菌種進行后續(xù)培養(yǎng)。(3)若要測定培養(yǎng)液中選定菌種的菌體數(shù),既可在顯微鏡下用血細胞計數(shù)板直接計數(shù),也可選用稀釋涂布平板法統(tǒng)計活菌數(shù)目。當兩個或多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落,所以一般前者得到的結(jié)果大于后者。(4)選定的菌種沒有具膜細胞器如線粒體等,則該菌種屬于原核生物。組成原核生物的原核細胞有核糖體,而核糖體是蛋白質(zhì)合成的場所,所以該菌種產(chǎn)生的降解氯苯的蛋白酶在核糖體上合成。5.(河北石家莊期末調(diào)研,4)請回答以下有關(guān)微生物培養(yǎng)和分離的問題。(1)微生物培養(yǎng)基的配方中,一般都含有水、　　　　　、氮源和無機鹽。對微生物培養(yǎng)基進行滅菌的常用方法是　　　　　　　　　　　。 (2)純化微生物培養(yǎng)的接種方法主要有　　　　　　　　　　和　　　　　　　　　　　　兩種。如圖所示,該接種方法統(tǒng)計的菌落數(shù)常比實際活菌數(shù)量　　　　。 (3)在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入　　　　　　,即可初步鑒定所培養(yǎng)的細菌是否可以分解尿素。 (4)從土壤中篩選纖維素分解菌,需配制加入特殊染料的鑒別培養(yǎng)基。當形成菌落以后可以根據(jù)菌落周圍是否產(chǎn)生　　　　　　來篩選纖維素分解菌,這種篩選方法被稱為　　　　　　　　　　法。 答案(1)碳源(C源)　高壓蒸汽(滅菌法)(2)平板劃線(法)　稀釋涂布平板(法)(順序可顛倒)　少(3)酚紅(指示劑)(4)透明圈　剛果紅染色解析(1)微生物培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源和無機鹽。微生物培養(yǎng)基進行滅菌的常用方法是高壓蒸汽滅菌法。(2)純化微生物培養(yǎng)的接種方法主要有平板劃線法和稀釋涂布平板法,圖中所示方法為稀釋涂布平板法,統(tǒng)計的菌落數(shù)常比實際活菌數(shù)量少。因為兩個或多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落。(3)初步鑒定所培養(yǎng)的細菌是否可以分解尿素,在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。(4)當形成菌落以后可以根據(jù)菌落周圍是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌,這種方法為剛果紅染色法。6.要從土壤中篩選出相應(yīng)的分解菌,其實驗流程如下,請回答下列問題。配制土
壤溶液系列稀釋涂布平板與培養(yǎng)菌落計數(shù)(1)采用　　　　　　　　　　　　法時需要將樣液進行一系列梯度稀釋,然后接種培養(yǎng),計數(shù)菌落。通常統(tǒng)計的菌落數(shù)比活菌的實際數(shù)目　　　　。在稀釋土壤的過程中,每一步都要在　　　　　　　　　　　旁操作。 (2)對培養(yǎng)基滅菌常用的方法是　　　　　　　　　　　　　。在接種前需要檢測使用的培養(yǎng)基是否被污染。方法是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (3)若要篩選出尿素分解菌,配制土壤溶液的土樣應(yīng)從　　　　　　　　　　的土壤　　　　層取樣,培養(yǎng)用的培養(yǎng)基應(yīng)為以　　　　為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。 (4)向培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,若培養(yǎng)基中存在分解尿素的細菌,其菌落周圍會出現(xiàn)　　　　,這是尿素被分解生成的　　　　　　使酚紅指示劑顯色的結(jié)果。 答案(1)稀釋涂布平板　少　酒精燈火焰(2)高壓蒸汽滅菌法　將未接種的培養(yǎng)基在適宜溫度恒溫箱中倒置培養(yǎng)一段時間,觀察是否有菌落生成(3)有機物豐富　表　尿素(4)紅色　氨(或NH3)解析(1)將樣液進行一系列梯度稀釋后進行的接種方法是涂布平板法,該方法可以對微生物進行計數(shù),由于當兩個或多個細菌連在一起時,培養(yǎng)基上觀察到的只是一個菌落,因此通常統(tǒng)計的菌落數(shù)比活菌的實際數(shù)目少。稀釋涂布平板法的各步操作均應(yīng)在酒精燈的火焰旁進行。(2)對培養(yǎng)基的滅菌通常采用高壓蒸汽滅菌法,若要檢測使用的培養(yǎng)基是否被污染,通常需要設(shè)置空白對照,即將未接種的培養(yǎng)基在適宜溫度恒溫箱中倒置培養(yǎng)一段時間,觀察是否有菌落生成,若無菌落生成,則說明培養(yǎng)基制作是合格的。(3)土壤中分解尿素的細菌生活在有機物豐富的土壤表層中,因此若要篩選出尿素分解菌,配制土壤溶液的土樣應(yīng)從有機物豐富的土壤表層取樣,培養(yǎng)用的培養(yǎng)基應(yīng)為以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。(4)分解尿素的細菌的鑒定法是在培養(yǎng)基中添加酚紅指示劑,由于分解尿素的細菌能夠合成脲酶,脲酶能將培養(yǎng)基中的尿素分解產(chǎn)生氨(NH3),使pH升高,酚紅指示劑變紅色。7.(全國Ⅰ卷,39)已知微生物A可以產(chǎn)生油脂,微生物B可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)?；卮鹩嘘P(guān)問題。(1)顯微觀察時,微生物A菌體中的油脂通?？捎?/span>　　　　　　染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā),可選用　　　　　　　　　(填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”)從菌體中提取。 (2)為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落,可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣,并應(yīng)選用以　　　　　　　為碳源的固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。 (3)若要測定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù),可在顯微鏡下用　　　　　　　　　　　直接計數(shù);若要測定其活菌數(shù)量,可選用　　　　　　　　　　法進行計數(shù)。 (4)為了確定微生物B產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度,某同學(xué)測得相同時間內(nèi),在35 ℃、40 ℃、45 ℃溫度下降解10 g 油脂所需酶量依次為4 mg、1 mg、6 mg,則上述三個溫度中,　　　　 ℃條件下該酶活力最小。為了進一步確定該酶的最適溫度,應(yīng)圍繞　　　　℃設(shè)計后續(xù)實驗。????????????? ?導(dǎo)學(xué)號93420255? 答案(1)蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ)　萃取法(2)油脂(3)血細胞計數(shù)板　稀釋涂布平板(4)45　40解析本題通過微生物的培養(yǎng)與計數(shù)、生物體內(nèi)有效成分的提取、酶的活性等知識考查實驗與探究能力。(1)顯微觀察時,用蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ)可將微生物A菌體中的油脂染成橘黃色(或紅色),易于觀察。微生物A菌體中的油脂不易揮發(fā),宜選用萃取法提取。(2)微生物B可產(chǎn)生脂肪酶,故應(yīng)選用以油脂為碳源的固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng),以獲得該菌的單菌落。(3)若要測定微生物B的菌體數(shù),可在顯微鏡下用血細胞計數(shù)板直接計數(shù);若要測定其活菌數(shù)量,可選用稀釋涂布平板法進行計數(shù)。(4)三種不同溫度下分解相同的油脂所需酶量45 ℃最多,40 ℃最少,說明三個溫度中45 ℃條件下該酶活力最小,40 ℃條件下該酶活力最大。為了進一步確定該酶的最適溫度,應(yīng)圍繞40 ℃設(shè)計后續(xù)實驗。8.(2014全國Ⅱ卷,39)為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況,某研究小組測定了該河流水樣中的細菌含量,并進行了細菌分離等工作?；卮鹣铝袉栴}。(1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細菌含量。在涂布接種前,隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間,這樣做的目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　;然后,將1 mL水樣稀釋100倍,在3個平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液;經(jīng)適當培養(yǎng)后,3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為　　　　　　　。 (2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌。操作時,接種環(huán)通過　　　　滅菌,在第二次及以后的劃線時,總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (3)示意圖A和B中,　　　表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。 (4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻,一部分進行靜置培養(yǎng),另一部分進行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn):振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。分析其原因是:振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中　　　　　　　　的含量,同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸,提高　　　　　　　　的利用率。 答案(1)檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格　3.8×107(2)灼燒　將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落(3)B(4)溶解氧　營養(yǎng)物質(zhì)解析為了檢測培養(yǎng)基滅菌平板是否合格,應(yīng)對空白平板先行培養(yǎng)一段時間。每升水樣中的活菌數(shù)為(39+38+37)÷3÷0.1×100×1 000=3.8×107(個)。對接種環(huán)應(yīng)進行灼燒滅菌。為了將聚集的菌體逐步稀釋以獲得單個菌落,在第二次及以后的劃線時,總是從上一次劃線的末端開始劃線。A表示的是平板劃線法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果,B表示的是用稀釋涂布平板法接種后得到的結(jié)果。  

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