課后定時檢測案43 基因工程及生物技術(shù)的安全性與倫理問題 [基礎(chǔ)鞏固練]——學(xué)業(yè)水平一、二1.下列關(guān)于基因工程的敘述,錯誤的是( ?。?/span>A.目的基因和受體細(xì)胞均可來自動、植物或微生物B.限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接酶是兩類常用的工具酶C.人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無生物活性D.載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)2.下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程的說法,正確的是( ?。?/span>A.蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對蛋白質(zhì)分子直接進(jìn)行操作B.蛋白質(zhì)工程能生產(chǎn)出自然界中不曾存在過的新型蛋白質(zhì)分子C.對蛋白質(zhì)的改造是通過直接改造相應(yīng)的mRNA來實(shí)現(xiàn)的D.蛋白質(zhì)工程的流程和天然蛋白質(zhì)合成的過程是相同的3.下列有關(guān)生物技術(shù)安全性和倫理問題的觀點(diǎn),不合理的是( ?。?/span>A.對于轉(zhuǎn)基因技術(shù),我們應(yīng)該趨利避害,理性看待B.我國禁止生殖性克隆和治療性克隆C我國不發(fā)展、不生產(chǎn)、不儲存生物武器,并反對其擴(kuò)散D.對于基因檢測應(yīng)該保護(hù)個人遺傳信息隱私權(quán)[提能強(qiáng)化練]——學(xué)業(yè)水平三、四4.[經(jīng)典高考]北極比目魚中有抗凍基因,其編碼的抗凍蛋白具有11個氨基酸的重復(fù)序列,該序列重復(fù)次數(shù)越多,抗凍能力越強(qiáng),下圖是獲取轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的過程示意圖,有關(guān)敘述正確的是(  )A.過程①獲取的目的基因,可用于基因工程和比目魚基因組測序B.將多個抗凍基因編碼區(qū)依次相連形成能表達(dá)的新基因,不能得到抗凍性增強(qiáng)的抗凍蛋白C.過程②構(gòu)成的重組質(zhì)粒缺乏標(biāo)記基因,需要轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌才能進(jìn)行篩選D.應(yīng)用DNA探針技術(shù),可以檢測轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株中目的基因的存在及其完全表達(dá)5.[2023·天津一中高三月考]為提高大豆對磷元素的吸收能力,研究人員利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將水稻的耐低磷基因OsPTF轉(zhuǎn)移到大豆植株中,下圖為重組Ti質(zhì)粒上T-DNA的序列結(jié)構(gòu)示意圖。下列相關(guān)敘述不正確的是(  )A.以水稻RNA為模板通過逆轉(zhuǎn)錄及PCR擴(kuò)增可獲得大量OsPTF基因B.RNA聚合酶與啟動子1識別并結(jié)合后,啟動抗除草劑基因的轉(zhuǎn)錄C.可通過含除草劑的選擇培養(yǎng)基篩選含有目的基因的大豆愈傷組織D.用EcoRⅠ、BamHⅠ酶同時切重組Ti質(zhì)粒后,經(jīng)電泳分離至少得到兩條不同長度的帶6(不定項(xiàng))如圖為某種質(zhì)粒的簡圖,小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切核酸酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位點(diǎn),P為轉(zhuǎn)錄的啟動部位。已知目的基因的兩端有EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位點(diǎn),受體細(xì)胞為無任何抗藥性的原核細(xì)胞。下列有關(guān)敘述不正確的是( ?。?/span>A.將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒分別用EcoRⅠ酶切,在DNA連接酶作用下,生成由兩個DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有兩種B.DNA連接酶的作用是將酶切后得到的黏性末端連接起來,形成一個重組質(zhì)粒時形成兩個磷酸二酯鍵C.為了防止目的基因反向連接和質(zhì)粒自行環(huán)化,酶切時可選用的酶是EcoRⅠ和BamHⅠD.受體細(xì)胞能在含青霉素的培養(yǎng)基中生長,表明該目的基因已成功導(dǎo)入該細(xì)胞7(不定項(xiàng))根據(jù)某基因上游和下游的堿基序列,設(shè)計合成了該基因的兩段引物(單鏈DNA)。引物與該基因變性DNA(單鏈DNA)結(jié)合為雙鏈DNA的過程稱為復(fù)性。如圖是兩引物的Tm(引物熔解溫度,即50%的引物與其互補(bǔ)序列形成雙鏈DNA分子時的溫度)測定結(jié)果,下列敘述正確的是( ?。?/span>A.通常引物1和引物2不能有堿基互補(bǔ)配對關(guān)系B.兩引物分別是子鏈延伸的起點(diǎn),并可以反復(fù)利用C.若兩引物的脫氧核苷酸數(shù)相同,則可推測引物2的GC含量較高D.復(fù)性所需溫度與時間,取決于引物的長度、堿基組成及其濃度等因素 [大題沖關(guān)練]——綜合創(chuàng)新·求突破8.[2023·廣東汕頭市高三二模]葉綠體基因工程是指向葉綠體基因組中引入外源目的基因,并使之表達(dá)。Rubisco酶(簡稱R酶)是光合作用中CO2固定的關(guān)鍵酶,深紅紅螺菌的R酶活性是一般植物的4倍??茖W(xué)家嘗試將該菌的Rubisco基因(簡稱R基因)導(dǎo)入玉米葉綠體,提高玉米R酶活性,進(jìn)而提高玉米光合能力。RbcL基因位于葉綠體DNA上,其產(chǎn)物參與光合作用過程。(1)在構(gòu)建基因表達(dá)載體中,使用了玉米葉綠體特異性基因RbcL基因的啟動子和終止子,其目的是                     。在構(gòu)建該表達(dá)載體時,需要使用的工具酶有        。(2)科學(xué)家試圖修改R基因中部分堿基,以改變R酶部分氨基酸序列,以進(jìn)一步提高R酶的活性,該操作屬于    工程。(3)獲得成功轉(zhuǎn)化R基因的玉米細(xì)胞,利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因植株,其中使用到三種培養(yǎng)基的主要激素配方如下(NAA是一種生長素類似物,6-BA是一種細(xì)胞分裂素)。其中培養(yǎng)基A主要作用是              ,誘導(dǎo)培養(yǎng)物生根的培養(yǎng)基編號為     培養(yǎng)基編號ABCNAA(mg/L)0.50.050.16-BA(mg/L)0.52.50.05(4)試從安全性和實(shí)用性的角度分析葉綠體基因工程的優(yōu)勢________________________________________________________________________________________________________________________________________________。9.[2023·天津高三二模]針對新冠病毒(SARS-CoV-2)的重組蛋白疫苗、核酸疫苗(包括DNA疫苗和RNA疫苗)等疫苗都在研發(fā)當(dāng)中。下圖為其中一種疫苗的研發(fā)思路,圖中①~⑦表示過程,箭頭表示NcoⅠ、SphⅠ、NheⅠ、BamHⅠ的酶切位點(diǎn)(四種酶的識別序列詳見表),標(biāo)記基因SUC2控制合成蔗糖酶,使P型酵母菌能利用培養(yǎng)基中的蔗糖生存。(1)圖中①過程需要使用    酶先得到cDNA,再使用    技術(shù)擴(kuò)增得到S基因。(2)為使③過程順利進(jìn)行,需先使用限制酶        切割質(zhì)粒B,選用兩種限制酶對新冠病毒的S基因進(jìn)行切割的目的是________________________________________________________________________________________________________________________________________________(答出一點(diǎn)即可)。(3)圖中表示篩選的過程是     (填編號),為達(dá)到利用標(biāo)記基因篩選的目的,普通的P型酵母菌應(yīng)該滿足的條件是           。(4)重組疫苗注入志愿者體內(nèi)后,S蛋白基因指導(dǎo)合成的S蛋白作為    ,刺激機(jī)體產(chǎn)生能與之相結(jié)合的抗體,抗體的分泌量可作為檢測疫苗對志愿者免疫效果的指標(biāo)。參加臨床試驗(yàn)的志愿者需要滿足的條件之一是      (選填“有”或“無”)SARS-CoV-2感染史,理由是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。10.[2023·遼寧沈陽市高三二模]絞股藍(lán)細(xì)胞中含有抗煙草花葉病毒(TMV)基因,能合成抗TMV蛋白,使絞股藍(lán)葉片能抗TMV感染。科研人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將絞股藍(lán)細(xì)胞中的抗TMV基因轉(zhuǎn)入煙草細(xì)胞,培育出了抗TMV的煙草,主要流程如圖所示。請分析下圖并回答問題:(1)從絞股藍(lán)細(xì)胞中提取抗TMV基因轉(zhuǎn)錄的RNA,合成目的基因。過程①需要的酶是            。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時,反應(yīng)體系中除有緩沖液、原料(dNTP)、目的基因外,還應(yīng)含有        。(2)由①獲得的目的基因在構(gòu)建表達(dá)載體時,應(yīng)在目的基因的首端和尾端分別添加        ,同時為了與表達(dá)載體連接,通常在兩端插入不同的限制性酶切位點(diǎn),主要原因是                    。由圖可知,在過程③中應(yīng)將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上,同時該片段中還應(yīng)有    抗性基因。(3)將含抗TMV基因的煙草細(xì)胞經(jīng)⑤獲得再生植株的生物技術(shù)是      。這項(xiàng)技術(shù)不僅能實(shí)現(xiàn)快速繁殖作物還能保持優(yōu)良品種的        。(4)過程⑥在個體生物學(xué)水平鑒定,需要做    實(shí)驗(yàn),可檢測植株是否具有抗性以及抗性的強(qiáng)度。11.超量表達(dá)P蛋白轉(zhuǎn)基因玉米的獲得與鑒定。在超量表達(dá)P基因載體的構(gòu)建中,所用DNA片段和Ti質(zhì)粒的酶切位點(diǎn)如圖1所示,P蛋白在玉米株系的表達(dá)量如圖2所示。回答下列問題:1)強(qiáng)啟動子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段,能被    識別并結(jié)合,驅(qū)動基因的持續(xù)轉(zhuǎn)錄。為使P基因在玉米植株中超量表達(dá),應(yīng)優(yōu)先選用    酶組合,將片段和Ti質(zhì)粒切開后構(gòu)建重組表達(dá)載體。T-DNA在該實(shí)驗(yàn)中的作用是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)將農(nóng)桿菌浸泡過的玉米愈傷組織進(jìn)行植物組織培養(yǎng),培養(yǎng)基中需加入    進(jìn)行篩選,篩選出的愈傷組織    形成叢芽,最終獲得多個轉(zhuǎn)基因玉米株系。(3)據(jù)圖2分析,選擇a1、a2、a3玉米株系,作為超量表達(dá)P蛋白轉(zhuǎn)基因玉米的生理特性研究的實(shí)驗(yàn)材料,理由是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。12.[2023·江蘇省常熟市高三階段抽測]新冠病毒是一種單鏈RNA病毒,常用“熒光RT—PCR技術(shù)”進(jìn)行檢測,方法是取檢測者的mRNA逆轉(zhuǎn)錄出cDNA,并大量擴(kuò)增,用熒光標(biāo)記的新冠病毒核酸探針來檢測PCR產(chǎn)物中是否含有新冠病毒的cDNA。請回答下列問題:(1)“熒光RT—PCR技術(shù)”所用的試劑盒中通常都應(yīng)該含有      、          、熒光標(biāo)記的核酸探針、引物、dNTP、緩沖體系。(2)如果要同時擴(kuò)增兩種基因,則試劑盒中的引物應(yīng)該有    種。下圖為新冠病毒的“ORFlab基因”對應(yīng)的cDNA片段結(jié)構(gòu)示意圖,則與之對應(yīng)的引物結(jié)合的部位應(yīng)該是圖中的    (子鏈延伸方向?yàn)槠渥陨淼?′→3′,用圖中數(shù)字作答)。若已知該基因的引物Ⅰ,能否依據(jù)其堿基序列設(shè)計出另一種引物Ⅱ?    ,理由是________________________________________________________________________。(3)在檢測過程中,隨著PCR的進(jìn)行,反應(yīng)產(chǎn)物不斷累積,“雜交雙鏈”熒光信號的強(qiáng)度也等比例增加??赏ㄟ^熒光強(qiáng)度的變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖(如下圖)。①“平臺期”出現(xiàn)的最可能的原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。②理論上,在檢測過程中,有熒光標(biāo)記的“雜交雙鏈”出現(xiàn),則說明檢測結(jié)果呈    (填“陰”或“陽”)性,但為了保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性,一般要達(dá)到或超過閾值時才確診?,F(xiàn)有兩個待檢樣本,檢測時都出現(xiàn)了上述形態(tài)的曲線,但甲的a點(diǎn)比乙的a點(diǎn)明顯左移。請給這種結(jié)果做出科學(xué)合理的解釋(試劑盒合格且正常,操作過程規(guī)范且準(zhǔn)確):________________________________________________________________________________________________________________________________________________。13.[2023·汾湖高級中學(xué)教學(xué)反饋測試]枯草芽孢桿菌可分泌纖維素酶。研究者篩選到一株降解纖維素能力較強(qiáng)的枯草芽孢桿菌菌株(B菌),從中克隆得到了一種纖維素酶(C1酶)基因。將獲得的C1酶基因與高效表達(dá)載體(HT質(zhì)粒)連接,再導(dǎo)入B菌,以期獲得降解纖維素能力更強(qiáng)的工程菌。(1)纖維素屬于    糖,因此經(jīng)過一系列酶催化最終可降解成單糖,該單糖是        (2)對克隆得到的C1酶基因測序,與數(shù)據(jù)庫中的C1酶基因編碼序列相比有兩個堿基對不同,但兩者編碼出的蛋白的氨基酸序列相同,這是因?yàn)開_______________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)C1酶基因以B鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈,轉(zhuǎn)錄時mRNA自身的延伸方向?yàn)?′→3′。為了使C1酶基因按照正確的方向與已被酶切的HT質(zhì)粒連接,克隆C1酶基因時在其兩端添加了SmaⅠ和BamHⅠ的酶切位點(diǎn)。該基因內(nèi)部沒有這兩種酶切位點(diǎn)。圖1中酶切位點(diǎn)1和2所對應(yīng)的酶分別是      。(4)將纖維素含量為20%的培養(yǎng)基分為三組,一組接種工程菌,對照組1不進(jìn)行處理,對照組2進(jìn)行相應(yīng)處理。在相同條件下培養(yǎng)96小時,檢測培養(yǎng)基中纖維素的含量。結(jié)果(圖2)說明工程菌降解纖維素的能力最強(qiáng)。對照組2的處理應(yīng)為________________________________________________________________________。(5)預(yù)期該工程菌在處理廢棄物來保護(hù)環(huán)境方面可能的應(yīng)用________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(舉一例)14.[2023·廣州市高三年級階段訓(xùn)練]蟲草中的超氧化物歧化酶(PSSOD)具有抗衰老作用。研究人員培育了能合成PSSOD的轉(zhuǎn)基因酵母菌。結(jié)合下圖回答下列問題。(注:HindⅢ和ApaLⅠ是兩種限制酶,箭頭表示酶的切割位置。)(1)將圖中的重組DNA分子用HindⅢ和ApaLⅠ完全酶切后,可得到    種DNA片段。(2)作為受體細(xì)胞的酵母菌缺失URA3基因,必須在含有尿嘧啶的培養(yǎng)基中才能存活,為了篩選出成功導(dǎo)入表達(dá)載體的酵母菌,所使用的培養(yǎng)基    (填“需要”或“不需要”)添加尿嘧啶,理由是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程,稱為    。為了確定受體細(xì)胞中PSSOD基因是否轉(zhuǎn)錄,可用標(biāo)記的        作探針與從受體細(xì)胞中提取的RNA進(jìn)行分子雜交檢測,分子雜交的原理是        4)利用蛋白質(zhì)工程獲得活性更高的PSSOD時,需根據(jù)所設(shè)計蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)推測其氨基酸序列,最終確定相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列并經(jīng)          獲得所需的基因。   課后定時檢測案431解析:目的基因和受體細(xì)胞均可來自動、植物或微生物,A正確;限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接酶是兩類常用的工具酶,B正確;胰島素具有生物活性,胰島素原不具有生物活性,所以人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無生物活性,C正確;載體上的抗性基因可用于篩選含重組DNA的細(xì)胞,但不能促進(jìn)目的基因的表達(dá),D錯誤。答案:D2.解析:蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對現(xiàn)有蛋白質(zhì)的基因分子進(jìn)行操作,改造基因即改造蛋白質(zhì),而且可以遺傳,A錯誤;蛋白質(zhì)工程能生產(chǎn)出自然界中不曾存在過的新型蛋白質(zhì)分子,B正確;對蛋白質(zhì)的改造是通過直接改造決定蛋白質(zhì)的基因來實(shí)現(xiàn)的,C錯誤;蛋白質(zhì)工程的流程和天然蛋白質(zhì)合成的過程是不完全相同的,D錯誤。答案:B3.答案:B4.解析:過程①獲得的目的基因已不含非編碼區(qū)和內(nèi)含子,因此不能用于比目魚基因組測序,A錯誤;多個抗凍基因編碼區(qū)依次相連形成的新基因表達(dá)的是多個抗凍蛋白的重復(fù)序列,而不是抗凍蛋白中11個氨基酸的重復(fù)序列,因此不能得到抗凍性增強(qiáng)的抗凍蛋白,B正確;導(dǎo)入農(nóng)桿菌是為了擴(kuò)增和更易導(dǎo)入番茄細(xì)胞,C錯誤;DNA探針技術(shù)不能檢測基因是否完全表達(dá),目的基因的完全表達(dá)應(yīng)該用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì),D錯誤。答案:B5.解析:以水稻RNA為模板通過逆轉(zhuǎn)錄可以合成cDNA,然后再以cDNA為模板利用PCR技術(shù)可獲得大量OsPTF基因,A正確;識圖分析可知,抗除草劑基因位于啟動子2的后面,因此RNA聚合酶與啟動子2識別并結(jié)合后,啟動抗除草劑基因的轉(zhuǎn)錄,B錯誤;由于圖中T-DNA的序列中含有目的基因和抗除草劑基因,故可通過含除草劑的選擇培養(yǎng)基篩選含有目的基因的大豆愈傷組織,C正確;用EcoRⅠ、BamHⅠ酶同時切重組Ti質(zhì)粒后,會得到三種片段:含有耐低磷基因OsPTF的片段、含有除草劑基因的片段和只含啟動子1的片段,因此經(jīng)電泳分離至少得到兩條帶,即含耐低磷基因OsPTF的片段和含除草劑基因的片段,D正確。答案:B6.解析:DNA連接酶只能將具有相同黏性末端的DNA片段連接起來,因此將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒分別用EcoRⅠ酶切,在DNA連接酶作用下,由兩個DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物共有3種,即質(zhì)粒與質(zhì)粒的連接、目的基因與目的基因的連接、目的基因與質(zhì)粒的連接,A錯誤;DNA連接酶的作用是將酶切后得到的具有相同黏性末端的DNA片段連接起來,形成一個重組質(zhì)粒時可形成4個磷酸二酯鍵,B錯誤;EcoRⅠ和BamHⅠ切割形成的黏性末端不同,而DNA連接酶只能將具有相同黏性末端的DNA片段連接起來,因此為了防止目的基因反向連接和質(zhì)粒自行環(huán)化,酶切時可選用的酶是EcoRⅠ和BamHⅠ,C正確;題圖顯示,在構(gòu)建基因表達(dá)載體的過程中質(zhì)粒中的青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因都不會被破壞,導(dǎo)入普通質(zhì)粒的大腸桿菌和導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌都能在含青霉素的培養(yǎng)基中生長,因此能在含青霉素的培養(yǎng)基中生長的受體細(xì)胞不一定含有目的基因,D錯誤。答案:ABD7.解析:通常引物1和引物2不能有堿基互補(bǔ)配對關(guān)系,否則引物之間會相互結(jié)合,A正確;兩引物參與子鏈的形成,不能反復(fù)利用,B錯誤;若兩引物的脫氧核苷酸數(shù)相同,引物2的熔解溫度較高,推測G—C含量較高,C正確;結(jié)合以上分析可知,復(fù)性所需溫度與時間,取決于引物的長度、堿基組成及其濃度等因素,D正確。答案:ACD8.解析:(1)啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點(diǎn),用于啟動基因的轉(zhuǎn)錄,而終止子是基因轉(zhuǎn)錄的結(jié)束信號,故在構(gòu)建基因表達(dá)載體中,使用了玉米葉綠體特異性基因RbcL基因的啟動子和終止子,其目的是保證R基因可以在葉綠體中正常表達(dá);表達(dá)載體構(gòu)建需用到的工具酶有限制酶(切割目的基因和載體)和DNA連接酶(連接切割過的目的基因和載體)。(2)“修改R基因中部分堿基,以改變R酶部分氨基酸序列,以進(jìn)一步提高R酶的活性”的目的是改造蛋白質(zhì),故屬于蛋白質(zhì)工程,該工程是在基因水平進(jìn)行的操作。(3)在植物組織培養(yǎng)過程中,生長素和細(xì)胞分裂素的比例影響細(xì)胞的分化:當(dāng)生長素與細(xì)胞分裂素的比例適中時,可誘導(dǎo)形成愈傷組織,故培養(yǎng)基A的主要作用是誘導(dǎo)脫分化形成愈傷組織;當(dāng)生長素的比例大于細(xì)胞分裂素比例時,可誘導(dǎo)生根,故誘導(dǎo)培養(yǎng)物生根的培養(yǎng)基編號C。(4)葉綠體基因工程還可以避免如花粉等的基因污染,其原因是葉綠體的基因不會進(jìn)入花粉,從而避免了重組基因的擴(kuò)散,具有安全性;此外由于目的基因?qū)氲氖侨~綠體,有性生殖時后代不會發(fā)生性狀分離,故具有一定的實(shí)用性。答案:(1)保證R基因可以在葉綠體中正常表達(dá) 限制酶和DNA連接酶 (2)蛋白質(zhì) (3)誘導(dǎo)脫分化形成愈傷組織 C (4)安全性:外源基因不會隨花粉擴(kuò)散;實(shí)用性:其有性生殖時后代不會發(fā)生性狀分離9.解析:(1)利RNA得到相應(yīng)DNA的方法為逆轉(zhuǎn)錄,起作用的酶為逆轉(zhuǎn)錄酶,在體外將DNA擴(kuò)增的技術(shù)是PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))。(2)NcoⅠ的識別切割位點(diǎn)為,NheⅠ的識別切割位點(diǎn)為,C分子的兩端分別有-GATC和GTAC-序列,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則,可知需要用限制酶NcoⅠ、NheⅠ切割質(zhì)粒B。由于同種限制酶切割得到的DNA片段兩端黏性末端相同,用DNA連接酶連接時可出現(xiàn)S基因或載體的自身環(huán)化以及S基因與載體反向連接的現(xiàn)象,所以常選用兩種限制酶對新冠病毒的S基因進(jìn)行切割,目的是防止S基因自身環(huán)化、防止S基因與載體反向連接、防止載體自身環(huán)化。(3)圖中表示篩選的過程是⑤(篩選含重組質(zhì)粒的P型酵母菌),其質(zhì)粒上的標(biāo)記基因SUC2能控制合成蔗糖酶,使P型酵母菌能利用培養(yǎng)基中的蔗糖生存,篩選時應(yīng)使用以蔗糖為唯一碳源的培養(yǎng)基。為達(dá)到利用標(biāo)記基因篩選的目的,普通的P型酵母菌應(yīng)該滿足的條件是自身不能合成蔗糖酶(普通的P型酵母菌不能利用培養(yǎng)基中的蔗糖生存)。(4)重組疫苗注入志愿者體內(nèi)后,S蛋白基因指導(dǎo)合成的S蛋白作為抗原,刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫過程,機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生能與之相結(jié)合的抗體,抗體的分泌量可作為檢測疫苗對志愿者免疫效果的指標(biāo)。參加臨床試驗(yàn)的志愿者需要滿足無SARS-CoV-2感染史,即未感染過新冠病毒,因?yàn)橛蠸ARS-CoV-2感染史的志愿者血清中會存在一定量的相應(yīng)抗體,對試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生干擾。答案:(1)逆轉(zhuǎn)錄 PCR (2)NcoⅠ NheⅠ 防止S基因自身環(huán)化、防止載體自身環(huán)化、防止S基因與載體反向連接 (3)⑤ 不能合成蔗糖酶 (4)抗原 無 有SARS-CoV-2感染史的志愿者血清中會存在一定量的相應(yīng)抗體,對試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生干擾10.解析:(1)過程①為逆轉(zhuǎn)錄出單鏈的DNA,在合成雙鏈的DNA,需要的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶。利用PCR技術(shù)可以擴(kuò)增目的基因,PCR反應(yīng)體系中除含緩沖液、模板DNA、四種脫氧核苷酸外,還應(yīng)有引物和耐高溫的DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)。(2)為了使目的基因能正常表達(dá),構(gòu)建基因表達(dá)載體時需要在目的基因的兩端添加啟動子和終止子。為了使目的基因能定向插入表達(dá)載體,避免自身環(huán)化,常常在目的基因的兩端插入不同的限制性酶切位點(diǎn)。圖中過程在含有卡那霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng),說明構(gòu)建的重組質(zhì)粒上含有的標(biāo)記基因是卡那霉素抗性基因。(3)將離體的細(xì)胞培育成一個完整的植株采用的技術(shù)是植物組織培養(yǎng)技術(shù)。這種技術(shù)的繁殖方式為無性繁殖,能夠保持優(yōu)良品種的遺傳特性。(4)若從個體水平鑒定,可通過接種煙草花葉病毒(TMV)的方法來確定植株是否具有抗性以及抗性的強(qiáng)度。答案:(1)逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶 引物和TaqDNA聚合酶 (2)啟動子和終止子 使目的基因能定向插入表達(dá)載體,避免自身環(huán)化 卡那霉素 (3)植物組織培養(yǎng) 遺傳特性 (4)TMV接種11.解析:(1)強(qiáng)啟動子能驅(qū)動基因的持續(xù)轉(zhuǎn)錄,說明強(qiáng)啟動子能被RNA聚合酶識別并結(jié)合。為使P基因在玉米植株中超量表達(dá),同時確保強(qiáng)啟動子和P基因不被破壞,故應(yīng)優(yōu)先選用BamHⅠ和SacⅠ酶組合,將片段和Ti質(zhì)粒切開后,利用DNA連接酶構(gòu)建重組表達(dá)載體。T-DNA在該實(shí)驗(yàn)中的作用是將強(qiáng)啟動子和P基因帶入玉米細(xì)胞并整合到玉米細(xì)胞的染色體DNA上。(2)由圖1可知,潮霉素抗性基因位于Ti質(zhì)粒的T-DNA,隨T-DNA整合到玉米細(xì)胞的染色體上,故將農(nóng)桿菌浸泡過的玉米愈傷組織進(jìn)行植物組織培養(yǎng),培養(yǎng)基中可加入潮霉素進(jìn)行篩選,培養(yǎng)基中生長出的轉(zhuǎn)基因玉米株系,就是所需的轉(zhuǎn)基因玉米株系。(3)由圖2可知,a1、a2、a3玉米株系的P蛋白表達(dá)量顯著高于野生型玉米,所以可以選擇a1、a2、a3玉米株系,作為超量表達(dá)P蛋白轉(zhuǎn)基因玉米的生理特性研究的實(shí)驗(yàn)材料。答案:(1)RNA聚合酶 BamHⅠ和SacⅠ 將強(qiáng)啟動子和P基因帶入玉米細(xì)胞并整合到玉米細(xì)胞染色體DNA上(2)潮霉素 (再)分化 (3)a1、a2、a3玉米株系的P蛋白表達(dá)量顯著高于野生型玉米12.解析:(1)根據(jù)題目信息可知,熒光RT-PCR技術(shù)所用的試劑盒中通常都應(yīng)該含有:逆轉(zhuǎn)錄酶、耐高溫的DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)、引物、四種脫氧核苷酸、緩沖體系。(2)根據(jù)PCR技術(shù)的原理,在擴(kuò)增DNA分子時每一條鏈均需與相應(yīng)的引物結(jié)合才能進(jìn)行擴(kuò)增,因此如果要成功將上述兩個獨(dú)立基因分別擴(kuò)增出來,則在試劑盒中的引物應(yīng)該4種;在利用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA分子過程中,DNA聚合酶只能從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸,又由于DNA的兩條鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械?,所以引物與DNA分子單鏈的3′端(—OH)相結(jié)合即圖示中的1和4所示部位。由于兩段引物的堿基序列沒有相關(guān)性,既不相同,也不互補(bǔ),因此不能根據(jù)該基因的引物Ⅰ的堿基序列設(shè)計出另一種引物Ⅱ。(3)①分析熒光擴(kuò)增曲線圖,圖中曲線通過熒光強(qiáng)度變化反映產(chǎn)物量的變化,因此曲線中“平臺期”出現(xiàn)的最可能原因是試劑盒中的原料和探針數(shù)量一定,超出一定的循環(huán)數(shù)后,熒光標(biāo)記的雜交雙鏈不再增加。②理論上,在檢測過程中,有熒光標(biāo)記的雜交雙鏈出現(xiàn),則說明檢測結(jié)果呈陽性,為了保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性,一般要達(dá)到或超過閾值時才確診。檢測結(jié)果甲的a點(diǎn)比乙的a點(diǎn)明顯左移,說明甲樣本中的新冠病毒含量更高達(dá)到閾值所需的循環(huán)數(shù)更少。答案:(1)逆轉(zhuǎn)錄酶 耐高溫的DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶) (2)4 4、1 不能 兩段引物的堿基序列沒有相關(guān)性(既不相同,也不互補(bǔ)) (3)試劑盒中的原料、引物和探針數(shù)量一定,超出一定的循環(huán)數(shù)后,熒光標(biāo)記的“雜交雙鏈”不再增加 陽 甲樣本中的新冠病毒含量更高達(dá)到閾值所需的循環(huán)數(shù)更少13.解析:(1)纖維素是葡萄糖聚合形成的多糖,所以經(jīng)過酶的催化作用,最終降解為葡萄糖。(2)由于密碼子具有簡并性,所以即使克隆得到的C1酶基因測序,與數(shù)據(jù)庫中的C1酶基因編碼序列相比有兩個堿基對不同,仍然可以編碼相同的氨基酸。(3)根據(jù)題干信息“以B鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈,轉(zhuǎn)錄時mRNA自身的延伸方向?yàn)?′→3′”,所以B鏈的方向是從3′→5′,根據(jù)質(zhì)粒上啟動子的方向,所以B鏈3′應(yīng)該用BamHⅠ進(jìn)行切割,而其5′端應(yīng)該用SmaⅠ進(jìn)行切割。(4)本實(shí)驗(yàn)的目的是證明工程菌降解纖維素的能力最強(qiáng),所以對照組1不作處理,組3是添加工程菌,組2的處理是直接用纖維素酶進(jìn)行分解纖維素,即向培養(yǎng)基中接種纖維素酶(C1酶)。(5)該工程菌可以高效降解纖維素,所以可以降解秸稈,減少秸稈燃燒帶來的空氣污染。答案:(1)多 葡萄糖 (2)密碼子具有簡并性,發(fā)生堿基的改變?nèi)匀痪幋a同一種氨基酸 (3)BamHⅠ、SmaⅠ(順序不能調(diào)換) (4)向培養(yǎng)基中接種纖維素酶(C1酶) (5)降解秸稈,減少秸稈燃燒帶來的空氣污染14.解析:(1)圖中基因表達(dá)載體含有1個HindⅢ切割位點(diǎn)和2個ApaLⅠ切割位點(diǎn),因此將圖中的基因表達(dá)載體用HindⅢ和ApaLⅠ完全酶切后,可得到3種DNA片段。(2)作為受體細(xì)胞的酵母菌缺失URA3基因,必須在含有尿嘧啶的培養(yǎng)基中才能存活,因此,圖示表達(dá)載體上的URA3基因可作為標(biāo)記基因,供鑒定和選擇;因?yàn)橹挥泻兄亟M質(zhì)粒的酵母菌才能在該培養(yǎng)基上生存,因此為了篩選出成功導(dǎo)入表達(dá)載體的酵母菌,所使用的培養(yǎng)基不需要添加尿嘧啶。(3)目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為轉(zhuǎn)化。為了確定受體細(xì)胞中PSSOD基因是否轉(zhuǎn)錄,可用標(biāo)記的PSSOD基因作探針進(jìn)行分子雜交檢測,由于該檢測中是RNA與DNA單鏈進(jìn)行雜交,因此分子雜交的原理是堿基互補(bǔ)配對。(4)利用蛋白質(zhì)工程獲得活性更高的PSSOD時,需根據(jù)所設(shè)計蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)推測其氨基酸序列,最終確定相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列,確定下來之后需要在原基因基礎(chǔ)上進(jìn)行基因修飾或者基因改造,甚至直接人工合成獲得所需的基因。答案:(1)3 (2)不需要 成功導(dǎo)入表達(dá)載體的酵母菌具有URA3基因 (3)轉(zhuǎn)化 PSSOD基因的片段(“PSSOD基因”) 堿基互補(bǔ)配對 (4)基因修飾或基因合成(基因修飾或基因合成或人工合成)  

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