[基礎(chǔ)鞏固練]
1.下列關(guān)于基因工程的敘述,錯(cuò)誤的是( )
A.目的基因和受體細(xì)胞均可來(lái)自動(dòng)、植物或微生物
B.限制性?xún)?nèi)切核酸酶和DNA連接酶是兩類(lèi)常用的工具酶
C.人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無(wú)生物活性
D.載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)
2.[2024·九省聯(lián)考·安徽]依據(jù)《中華人民共和國(guó)生物安全法》,生物安全是指國(guó)家有效防范和應(yīng)對(duì)危險(xiǎn)生物因子及相關(guān)因素威脅,生物技術(shù)能夠穩(wěn)定健康發(fā)展,人民生命健康和生態(tài)系統(tǒng)相對(duì)處于沒(méi)有危險(xiǎn)和不受威脅的狀態(tài),生物領(lǐng)域具備維護(hù)國(guó)家安全和持續(xù)發(fā)展的能力。下列敘述錯(cuò)誤的是( )
A.高致病性微生物須在高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室中開(kāi)展實(shí)驗(yàn)活動(dòng)
B.生物技術(shù)可廣泛應(yīng)用在人類(lèi)自身基因組改造和新物種創(chuàng)造中
C.外來(lái)入侵物種可能增加本土食物來(lái)源卻給自然生態(tài)造成破壞
D.動(dòng)物飼料中的抗生素會(huì)通過(guò)食物鏈?zhǔn)谷梭w微生物耐藥性增強(qiáng)
3.下列有關(guān)生物技術(shù)安全性和倫理問(wèn)題的觀(guān)點(diǎn),不合理的是( )
A.對(duì)于轉(zhuǎn)基因技術(shù),我們應(yīng)該趨利避害,理性看待
B.我國(guó)禁止生殖性克隆和治療性克隆
C.我國(guó)不發(fā)展、不生產(chǎn)、不儲(chǔ)存生物武器,并反對(duì)其擴(kuò)散
D.對(duì)于基因檢測(cè)應(yīng)該保護(hù)個(gè)人遺傳信息隱私權(quán)
[提能強(qiáng)化練]
4.[2024·九省聯(lián)考·江西]螢火蟲(chóng)的熒光素酶能催化ATP激活的熒光素氧化發(fā)光,這一現(xiàn)象在生物檢測(cè)和成像方面有重要的應(yīng)用價(jià)值。為了解決天然熒光素酶不能高效催化人工合成的熒光素DTZ發(fā)光的問(wèn)題,研究人員采用蛋白質(zhì)工程(又稱(chēng)為第二代基因工程)對(duì)它進(jìn)行了改造。下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程改造天然熒光素酶的敘述,正確的是( )
A.通過(guò)化學(xué)誘變劑可定向改造天然熒光素酶的基因序列
B.改造天然熒光素酶所用的基因表達(dá)載體不需要啟動(dòng)子和終止子
C.可用PCR方法檢測(cè)突變的熒光素酶基因是否翻譯成蛋白質(zhì)
D.改造后的熒光素酶在一定條件下催化DTZ發(fā)光是將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能
5.[2024·九省聯(lián)考·甘肅]胰島素可用于治療糖尿病,我國(guó)科學(xué)家打破國(guó)外技術(shù)壟斷,研發(fā)了擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的重組人胰島素藥物,下列敘述錯(cuò)誤的是( )
A.用PCR技術(shù)擴(kuò)增人胰島素基因時(shí),每次循環(huán)包括變性、復(fù)性、延伸三步
B.構(gòu)建人胰島素基因表達(dá)載體時(shí),需使用限制性?xún)?nèi)切核酸酶和DNA連接酶
C.大腸桿菌細(xì)胞經(jīng)Ca2+處理后,更容易吸收重組的人胰島素基因表達(dá)載體
D.抗原—抗體雜交法能檢測(cè)人胰島素基因表達(dá)載體是否導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞
6.(不定項(xiàng))人染色體DNA中存在串聯(lián)重復(fù)序列,對(duì)這些序列進(jìn)行體外擴(kuò)增、電泳分離后可得到個(gè)體的DNA指紋圖譜。該技術(shù)可用于親子鑒定和法醫(yī)學(xué)分析。下列敘述錯(cuò)誤的是( )
A.DNA分子的多樣性、特異性及穩(wěn)定性是DNA鑒定技術(shù)的基礎(chǔ)
B.串聯(lián)重復(fù)序列在父母與子女之間的遺傳不遵循孟德?tīng)栠z傳定律
C.指紋圖譜顯示的DNA片段屬于人體基礎(chǔ)代謝功能蛋白的編碼序列
D.串聯(lián)重復(fù)序列突變可能會(huì)造成親子鑒定結(jié)論出現(xiàn)錯(cuò)誤
7.(不定項(xiàng))根據(jù)某基因上游和下游的堿基序列,設(shè)計(jì)合成了該基因的兩段引物(單鏈DNA)。引物與該基因變性DNA(單鏈DNA)結(jié)合為雙鏈DNA的過(guò)程稱(chēng)為復(fù)性。如圖是兩引物的Tm(引物熔解溫度,即50%的引物與其互補(bǔ)序列形成雙鏈DNA分子時(shí)的溫度)測(cè)定結(jié)果,下列敘述正確的是( )
A.通常引物1和引物2不能有堿基互補(bǔ)配對(duì)關(guān)系
B.兩引物分別是子鏈延伸的起點(diǎn),并可以反復(fù)利用
C.若兩引物的脫氧核苷酸數(shù)相同,則可推測(cè)引物2的GC含量較高
D.復(fù)性所需溫度與時(shí)間,取決于引物的長(zhǎng)度、堿基組成及其濃度等因素
[大題沖關(guān)練]
8.[2024·九省聯(lián)考·河南]水稻胚乳可作為生物反應(yīng)器用于開(kāi)發(fā)功能性產(chǎn)品。從豬瘟病毒抗原蛋白的預(yù)期功能出發(fā),研究小組設(shè)計(jì)其預(yù)期的結(jié)構(gòu),推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列,合成新的基因X。利用PCR技術(shù)對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增并連接啟動(dòng)子1,形成Z片段。把Z片段插入Ti質(zhì)粒的T-DNA中,將構(gòu)建好的基因表達(dá)載體導(dǎo)入水稻細(xì)胞完成轉(zhuǎn)化,在胚乳中獲得相應(yīng)蛋白,最終將蛋白進(jìn)一步加工為植物源豬瘟疫苗。相關(guān)信息如圖所示。
回答下列問(wèn)題。
(1)研究小組通過(guò)PCR擴(kuò)增Z片段,延伸過(guò)程中,4種脫氧核苷酸在 催化作用下合成新的DNA鏈。酶切時(shí),限制酶識(shí)別序列的重疊會(huì)降低切割效率。為構(gòu)建基因表達(dá)載體,選擇限制酶HindⅢ和 進(jìn)行切割。可使Z片段插入T-DNA的效率最高。為使基因能夠正常表達(dá),質(zhì)粒上的N和J應(yīng)都為 。
(2)為獲得含蛋白X的水稻材料,首先誘導(dǎo)水稻種子脫分化形成 ,然后通過(guò) 的侵染,使目的基因進(jìn)入水稻細(xì)胞并完成轉(zhuǎn)化,再將其轉(zhuǎn)接到含特定激素的培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)其 形成具有根、莖、葉的完整植株。
(3)為驗(yàn)證水稻中目的基因X是否表達(dá)(轉(zhuǎn)錄和翻譯),分子水平上的檢測(cè)方法有 (答出2點(diǎn)即可)。
(4)從豬瘟病毒抗原蛋白的預(yù)期功能出發(fā),合成基因X,進(jìn)而得到豬瘟疫苗的過(guò)程屬于 工程的范疇。相較于大腸桿菌,水稻胚乳作為生物反應(yīng)器制備疫苗的優(yōu)勢(shì)及理由有 (答出1點(diǎn)即可)。
9.[2024·九省聯(lián)考·貴州]風(fēng)肉一般是以鮮肉為原料,用食鹽腌制后,經(jīng)風(fēng)干和微生物后發(fā)酵而成。在后發(fā)酵期,風(fēng)肉含有耐鹽的微生物。某實(shí)驗(yàn)小組為研究耐鹽微生物的耐鹽基因,設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)如下?;卮鹣铝袉?wèn)題。
(1)實(shí)驗(yàn)小組為獲得耐鹽純培養(yǎng)物A,使用的培養(yǎng)基應(yīng)是 (選填“普通培養(yǎng)基”或“選擇培養(yǎng)基”),使用的接種方法是 。
(2)為獲得純培養(yǎng)物A的耐鹽基因X,實(shí)驗(yàn)小組應(yīng)用純培養(yǎng)物提取了DNA。在一定溫度下,用二苯胺試劑對(duì)DNA進(jìn)行檢測(cè),二苯胺檢測(cè)DNA的原理是 。獲得PCR產(chǎn)物后,用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行鑒定,影響DNA分子遷移速率的主要因素有 (答出兩點(diǎn)即可)。
(3)構(gòu)建成功的表達(dá)載體將運(yùn)用農(nóng)桿菌介導(dǎo)技術(shù)轉(zhuǎn)入某農(nóng)作物,可獲得耐鹽轉(zhuǎn)基因植株。與同種非轉(zhuǎn)基因植株的染色體DNA序列相比,轉(zhuǎn)基因植株的染色體DNA含有 。
(4)為驗(yàn)證已獲得的耐鹽轉(zhuǎn)基因植株具有耐鹽性,需設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
10.[2024·山東棗莊統(tǒng)考模擬]宮頸癌的發(fā)生與人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染有關(guān),其中HPV16、18、31、45型是宮頸癌的高危型,E7蛋白是HPV16型重要的抗原標(biāo)志蛋白。我國(guó)研究人員以釀酒酵母菌為表達(dá)載體,成功構(gòu)建表達(dá)HPV16型E7蛋白的轉(zhuǎn)基因重組全釀酒酵母疫苗。如圖1表示擬轉(zhuǎn)入的質(zhì)粒上某片段及其上的酶切位點(diǎn)分布,圖2表示各限制酶識(shí)別序列和切割位點(diǎn)。
圖1
圖2
(1)研究人員首先需要利用PCR技術(shù)從HPV16型的基因組中獲取E7蛋白基因的DNA序列,以 為原料合成子鏈,擴(kuò)增6次需要引物B 個(gè)。
(2)為了將獲得的E7蛋白基因準(zhǔn)確連接至圖1中的質(zhì)粒上,需要在引物A和引物B的 (填“5′”或“3′”)端分別添加 限制酶的識(shí)別序列。若決定E7蛋白的mRNA的堿基序列為5′-AUGAGCTAC…(中間序列)…CAACGTAGA-3′,理論上應(yīng)設(shè)計(jì)引物A的前12個(gè)堿基序列為5′ 3′。
(3)控制表達(dá)載體大量擴(kuò)增的組成元件是 ,該結(jié)構(gòu)發(fā)揮作用時(shí)通常需要的酶是 。
(4)HPV16型E7蛋白疫苗注入人體后作為抗原,可以刺激機(jī)體的B淋巴細(xì)胞增殖分化成為 。在預(yù)防接種疫苗時(shí)通常需要多次注射,但是相鄰的兩次注射之間需要間隔一定的時(shí)期,原因是 。
11.[2024·九省聯(lián)考·黑吉遼]植物在高于胞內(nèi)Na+濃度的環(huán)境下,SOS3和SOS2激活位于質(zhì)膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SOS1,SOS1通過(guò)SOS信號(hào)通路與胞質(zhì)內(nèi)Na+結(jié)合并將其排出細(xì)胞外,維持其正常生命活動(dòng)?;卮鹣铝袉?wèn)題:
(1)植物利用SOS信號(hào)通路將Na+排出細(xì)胞外,這種運(yùn)輸方式的特點(diǎn)是 。
(2)通過(guò)基因工程在水稻中過(guò)量表達(dá)SOS1蛋白,以期增強(qiáng)水稻抗鹽能力。
①為獲得編碼SOS1蛋白的基因,可提取野生型水稻總RNA,通過(guò) 獲得模板DNA,再經(jīng)PCR獲得SOS1基因片段。
②測(cè)序表明,SOS1基因編碼序列含有3 444個(gè)核苷酸,其中A+T含量占53%,模板鏈中C含量為26%,那么SOS1基因雙鏈序列中G+C的含量為 %。
③構(gòu)建表達(dá)載體時(shí),在下圖所示載體含有的限制酶識(shí)別位點(diǎn)插入SOS1基因。序列分析發(fā)現(xiàn)SOS1基因內(nèi)部有XbaⅠ的識(shí)別序列,為使載體中SOS1基因和綠色熒光蛋白基因正確表達(dá),應(yīng)在SOS1基因兩端分別添加 兩種限制酶的識(shí)別序列,將SOS1基因插入載體前,應(yīng)選用 兩種限制酶對(duì)載體酶切。
(3)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化水稻后,選取可發(fā)綠色熒光的植株,鑒定其抗鹽能力是否增強(qiáng),采取的操作是 。
(4)若發(fā)現(xiàn)水稻中過(guò)量表達(dá)SOS1基因并不能明顯提高其抗鹽能力,從信號(hào)通路角度分析,可能的原因是 。
12.[2024·吉林白山統(tǒng)考一模]天山雪蓮S(chǎng)ikCDPK1基因(簡(jiǎn)稱(chēng)S基因)可提高轉(zhuǎn)基因煙草的抗低溫能力。在基因工程中常用35S啟動(dòng)子(通常條件下具有持續(xù)轉(zhuǎn)錄活性)來(lái)驅(qū)動(dòng)S基因表達(dá),但有時(shí)會(huì)使轉(zhuǎn)基因植物發(fā)育不良。為探究RD29A(一種低溫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子)調(diào)控S基因表達(dá)對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草的生長(zhǎng)發(fā)育和抗低溫能力的影響,科研人員開(kāi)展了相關(guān)研究。回答下列問(wèn)題:
(1)啟動(dòng)子是 識(shí)別和結(jié)合的部位。與35S啟動(dòng)子相比,RD29A啟動(dòng)子對(duì)植物正常生長(zhǎng)發(fā)育影響較小,從其調(diào)控基因表達(dá)特點(diǎn)的角度推測(cè)原因是 。
(2)為了發(fā)揮RD29A的優(yōu)勢(shì), 科研人員將實(shí)驗(yàn)室已有的質(zhì)粒甲中的35S替換為RD29A(如圖所示)。
將質(zhì)粒甲、乙分別導(dǎo)入兩組農(nóng)桿菌細(xì)胞,用添加 的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選,然后將煙草葉片細(xì)胞與農(nóng)桿菌共同培養(yǎng),再篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞,經(jīng) 技術(shù)培育成幼苗。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞除了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,還有我國(guó)獨(dú)創(chuàng)的 法。
(3)取長(zhǎng)勢(shì)相同的上述兩種轉(zhuǎn)基因煙草(甲、乙)和非轉(zhuǎn)基因煙草(WT),在44℃條件下處理48h,然后測(cè)定各組煙草的葉綠素含量和MDA含量,結(jié)果如下圖:
據(jù)圖分析推測(cè)三組煙草的生長(zhǎng)狀況及抗低溫能力 。依據(jù)是 。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:在低溫條件下,RD29A啟動(dòng)子能 (填“激活”或“抑制”)S 基因的表達(dá),且比35S啟動(dòng)子調(diào)控作用更優(yōu)。
13.“綠水逶迤去,青山相向開(kāi)”大力發(fā)展低碳經(jīng)濟(jì)已成為全社會(huì)的共識(shí)?;谀承┧缶奶厥獯x能力,有研究者以某些工業(yè)廢氣(含CO2等一碳溫室氣體,多來(lái)自高污染排放企業(yè))為原料,通過(guò)厭氧發(fā)酵生產(chǎn)丙酮,構(gòu)建一種生產(chǎn)高附加值化工產(chǎn)品的新技術(shù)。
回答下列問(wèn)題:
(1)研究者針對(duì)每個(gè)需要擴(kuò)增的酶基因(如圖)設(shè)計(jì)一對(duì) ,利用PCR技術(shù),在優(yōu)化反應(yīng)條件后擴(kuò)增得到目標(biāo)酶基因。
(2)研究者構(gòu)建了一種表達(dá)載體pMTL80k,用于在梭菌中建立多基因組合表達(dá)庫(kù),經(jīng)篩選后提高丙酮的合成量。該載體包括了啟動(dòng)子、終止子及抗生素抗性基因等,其中抗生素抗性基因的作用是 ,終止子的作用是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)重組梭菌大量表達(dá)上述酶蛋白時(shí),出現(xiàn)了生長(zhǎng)遲緩的現(xiàn)象,推測(cè)其原因可能是 ,此外丙酮的積累會(huì)傷害細(xì)胞,需要進(jìn)一步優(yōu)化菌株和工藝才能擴(kuò)大應(yīng)用規(guī)模。
(4)這種生產(chǎn)高附加值化工產(chǎn)品的新技術(shù),實(shí)現(xiàn)了 ,體現(xiàn)了循環(huán)經(jīng)濟(jì)特點(diǎn)。從“碳中和”的角度看,該技術(shù)的優(yōu)勢(shì)在于________________________________________________________________________,
具有廣泛的應(yīng)用前景和良好的社會(huì)效益。
14.[2024·九省聯(lián)考·安徽]蘿卜是百姓喜愛(ài)的一種蔬菜,篩選優(yōu)良性狀,開(kāi)展種質(zhì)創(chuàng)新,對(duì)落實(shí)國(guó)家“種業(yè)振興行動(dòng)”計(jì)劃,豐富“菜籃子工程”有重大應(yīng)用價(jià)值。
(1)采用常規(guī)雜交育種,可培育出不同根形的品種。蘿卜的根形由A、a和R、r兩對(duì)等位基因控制,且獨(dú)立遺傳?,F(xiàn)將兩種穩(wěn)定遺傳的圓形蘿卜進(jìn)行雜交,F(xiàn)1全為扁形;F1自交,F(xiàn)2有扁形、圓形和長(zhǎng)形三種表型,比例為9∶6∶1。由題意可知,F(xiàn)2中,長(zhǎng)形蘿卜的基因型為 ,扁形蘿卜中雜合子比例為 。
(2)利用返回式航天器搭載蘿卜種子可使細(xì)胞產(chǎn)生基因突變。假設(shè)突變發(fā)生在某基因的內(nèi)部,若編碼區(qū)缺失一個(gè)核苷酸,則會(huì)引起編碼的肽鏈 改變;若突變是一個(gè)核苷酸的替換,但沒(méi)有引起編碼的蛋白質(zhì)功能改變,其原因可能是 (答出2點(diǎn)即可)。
(3)蘿卜硫素具有抗炎、抗癌等生理功能,由黑芥子酶(Myr)水解前體物質(zhì)形成。研究人員提取總RNA、逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA,然后設(shè)計(jì)Myr基因特異引物,采用PCR方法擴(kuò)增目的基因,經(jīng)凝膠電泳后,發(fā)現(xiàn)有多條擴(kuò)增帶(其中也包含目的基因片段)。在不改變引物、PCR擴(kuò)增體系和模板量的情況下、可采用 的方法,特異擴(kuò)增目的片段。研究人員對(duì)擴(kuò)增出的DNA片段進(jìn)行了序列測(cè)定,序列信息見(jiàn)下圖,推測(cè)其最多可以編碼 個(gè)氨基酸的多肽(終止密碼子為UAA/UAG/UGA)。在多肽合成過(guò)程中,tRNA“搬運(yùn)”氨基酸到核糖體上,氨基酸結(jié)合部位在tRNA的 端。
(4)研究人員希望采用Ti質(zhì)粒上的T-DNA轉(zhuǎn)移Myr基因,以便獲得蘿卜新品種。圖中A、B、C、D、E為5種限制酶及其酶切位點(diǎn),選用 (填字母)進(jìn)行酶切,以使插入T-DNA中的目的基因正確表達(dá);將轉(zhuǎn)入目的基因的體細(xì)胞培養(yǎng)形成 ,分化成植株,用于生產(chǎn)。
檢測(cè)案43
1.解析:目的基因和受體細(xì)胞均可來(lái)自動(dòng)、植物或微生物,A正確;限制性?xún)?nèi)切核酸酶和DNA連接酶是兩類(lèi)常用的工具酶,B正確;胰島素具有生物活性,胰島素原不具有生物活性,所以人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無(wú)生物活性,C正確;載體上的抗性基因可用于篩選含重組DNA的細(xì)胞,但不能促進(jìn)目的基因的表達(dá),D錯(cuò)誤。
答案:D
2.解析:高致病性微生物須在高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室中開(kāi)展實(shí)驗(yàn)活動(dòng),防止造成致病性微生物外泄,造成污染,危害生物健康,A正確;生物技術(shù)可應(yīng)用在新物種創(chuàng)造中,但對(duì)人類(lèi)自身基因組改造到目前還存在相應(yīng)的問(wèn)題,難以實(shí)現(xiàn),B錯(cuò)誤;外來(lái)入侵物種可能增加本土食物來(lái)源,但如果缺乏天敵會(huì)造成自然生態(tài)破壞,C正確;長(zhǎng)期使用抗生素,必然產(chǎn)生殘留,而其殘留在動(dòng)物飼料中的抗生素,會(huì)隨著食物鏈進(jìn)入人體引發(fā)微生物的耐藥性,D正確。
答案:B
3.答案:B
4.解析:通過(guò)化學(xué)誘變劑可以讓天然熒光素酶的基因序列進(jìn)行隨機(jī)突變,但化學(xué)誘變通常是不定向的,A錯(cuò)誤;改造天然熒光素酶所用的基因表達(dá)載體必須包含啟動(dòng)子和終止子,啟動(dòng)子是驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄的元件,而終止子是指示轉(zhuǎn)錄終止的位置,B錯(cuò)誤;PCR 方法主要用于檢測(cè) DNA 的存在或者染色體 DNA 上是否插入目的基因,檢測(cè)目的基因是否翻譯為蛋白質(zhì)的方法為抗原—抗體雜交,C錯(cuò)誤;改造后的熒光素酶在一定條件下催化DTZ發(fā)光是將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能,D正確。
答案:D
5.解析:用PCR技術(shù)擴(kuò)增人胰島素基因時(shí),擴(kuò)增的過(guò)程是:目的基因DNA受熱變性后解為單鏈,引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合;然后以單鏈DNA為模板,在DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸,即將4種脫氧核苷酸加到引物的3′端,如此重復(fù)循環(huán)多次。每次循環(huán)一般可以分為變性、復(fù)性和延伸三步,A正確;在構(gòu)建人胰島素基因表達(dá)載體時(shí),首先用一定的限制性?xún)?nèi)切核酸酶切割含有目的基因的DNA片段和載體,再利用DNA連接酶將目的基因片段拼接到載體的切口處,這樣就形成了一個(gè)重組DNA分子,B正確;大腸桿菌細(xì)胞經(jīng)Ca2+處理后,細(xì)胞處于一種能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),更容易吸收重組的人胰島素基因表達(dá)載體,C正確;抗原—抗體雜交法可以檢測(cè)人胰島素基因是否在大腸桿菌中翻譯成胰島素,若抗原—抗體雜交結(jié)果為陽(yáng)性,說(shuō)明人胰島素基因在大腸桿菌中表達(dá),則可以說(shuō)明人胰島素基因表達(dá)載體導(dǎo)入了大腸桿菌細(xì)胞中,但陰性并不能排除目的基因?qū)氲目赡苄裕珼錯(cuò)誤。
答案:D
6.解析:DNA分子的多樣性、特異性及穩(wěn)定性是DNA鑒定技術(shù)的基礎(chǔ),A正確;串聯(lián)重復(fù)序列在染色體上,屬于核基因,在父母與子女之間的遺傳遵循孟德?tīng)栠z傳定律,B錯(cuò)誤;指紋圖譜由串聯(lián)重復(fù)序列擴(kuò)增獲得,串聯(lián)重復(fù)序列是廣泛分布于真核生物核基因組中的簡(jiǎn)單重復(fù)非編碼序列,C錯(cuò)誤;串聯(lián)重復(fù)序列突變后,分離得到的指紋圖譜可能會(huì)發(fā)生改變,可能會(huì)造成親子鑒定結(jié)論出現(xiàn)錯(cuò)誤,D正確。
答案:BC
7.解析:通常引物1和引物2不能有堿基互補(bǔ)配對(duì)關(guān)系,否則引物之間會(huì)相互結(jié)合,A正確;兩引物參與子鏈的形成,不能反復(fù)利用,B錯(cuò)誤;若兩引物的脫氧核苷酸數(shù)相同,引物2的熔解溫度較高,推測(cè)G—C含量較高,C正確;結(jié)合以上分析可知,復(fù)性所需溫度與時(shí)間,取決于引物的長(zhǎng)度、堿基組成及其濃度等因素,D正確。
答案:ACD
8.解析:(1)PCR是根據(jù)DNA半保留復(fù)制的原理在體外進(jìn)行DNA復(fù)制的技術(shù),體外DNA復(fù)制過(guò)程中用超過(guò)90 ℃的溫度處理DNA使其解旋,因此,在子鏈延伸過(guò)程中,4種脫氧核苷酸要在耐高溫的DNA聚合酶催化合成新的DNA鏈。依題意,酶切時(shí),限制酶識(shí)別序列的重疊會(huì)降低切割效率。XbaⅠ與HindⅢ識(shí)別序列有重疊,不符合題目要求。EcRⅤ所切末端為平末端,連接效率低,不符合題目要求。EcRⅠ識(shí)別序列與Hind Ⅲ識(shí)別序列無(wú)重疊,目的基因插入的DNA左右分別有HindⅢ和EcRⅠ的識(shí)別序列和切點(diǎn),產(chǎn)生的切口是黏性末端,連接效率相對(duì)平末端高。為使基因能夠正常表達(dá),基因結(jié)構(gòu)的上游和下游各有啟動(dòng)子和終止子,因此,N和J應(yīng)都為終止子。
(2)為獲得含蛋白X的水稻材料,首先誘導(dǎo)水稻種子脫分化形成愈傷組織,然后通過(guò)農(nóng)桿菌的侵染,使目的基因進(jìn)入水稻細(xì)胞并完成轉(zhuǎn)化,再將其轉(zhuǎn)接到含特定激素的培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)其再分化形成具有根、莖、葉的完整植株。
(3)為驗(yàn)證水稻中目的基因X是否表達(dá)(轉(zhuǎn)錄和翻譯),可通過(guò)PCR技術(shù)檢測(cè)水稻細(xì)胞中目的基因X是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA;可從轉(zhuǎn)基因水稻中提取蛋白質(zhì),用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交檢測(cè)是否翻譯出了蛋白質(zhì)。
(4)蛋白質(zhì)工程是基因工程的延伸,是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ),通過(guò)改造或合成基因,來(lái)改造現(xiàn)有蛋白質(zhì),或制造一種新的蛋白質(zhì),以滿(mǎn)足人類(lèi)生產(chǎn)和生活的需求。因此,從豬瘟病毒抗原蛋白的預(yù)期功能出發(fā),合成基因X,進(jìn)而得到豬瘟疫苗的過(guò)程屬于蛋白質(zhì)工程的范疇。相較于大腸桿菌細(xì)胞,水稻胚乳細(xì)胞多了復(fù)雜的生物膜系統(tǒng),可對(duì)基因X的表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行正確地加工與折疊,產(chǎn)生具有生物活性的重組蛋白質(zhì)。
答案:(1)耐高溫的DNA聚合酶 EcRⅠ 終止子
(2)愈傷組織 農(nóng)桿菌 再分化
(3)通過(guò)PCR技術(shù)檢測(cè)水稻細(xì)胞中目的基因X是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA;從轉(zhuǎn)基因水稻中提取蛋白質(zhì),用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交檢測(cè)是否翻譯出了蛋白質(zhì)
(4)蛋白質(zhì) 水稻胚乳細(xì)胞比大腸桿菌多了復(fù)雜的生物膜系統(tǒng),可對(duì)基因X的表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行正確地加工與折疊,產(chǎn)生具有生物活性的重組蛋白質(zhì)
9.解析:(1)實(shí)驗(yàn)小組為獲得耐鹽純培養(yǎng)物A,需要使用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選,使用的接種方法是稀釋涂布平板法。(2)為獲得純培養(yǎng)物A的耐鹽基因X,實(shí)驗(yàn)小組應(yīng)用純培養(yǎng)物提取了DNA。在一定溫度下,用二苯胺試劑對(duì)DNA進(jìn)行檢測(cè),二苯胺檢測(cè)DNA的原理是在酸性條件下DNA分子發(fā)生化學(xué)反應(yīng),與二苯胺試劑會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色的化合物。獲得PCR產(chǎn)物后,用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行鑒定,影響DNA分子遷移速率的主要因素有瓊脂糖溶液的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等。(3)與同種非轉(zhuǎn)基因植株的染色體DNA序列相比,轉(zhuǎn)基因植株的染色體DNA含有耐鹽純培養(yǎng)物中的耐鹽基因。(4)為驗(yàn)證已獲得的耐鹽轉(zhuǎn)基因植株具有耐鹽性,在個(gè)體水平上進(jìn)行檢測(cè),可用一定濃度的鹽水澆灌鑒定植株的耐鹽性。
答案:(1)選擇培養(yǎng)基 稀釋涂布平板法
(2)在酸性條件下DNA分子發(fā)生化學(xué)反應(yīng),與二苯胺試劑會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色的化合物 瓊脂糖溶液的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象
(3)耐鹽基因
(4)為驗(yàn)證已獲得的耐鹽轉(zhuǎn)基因植株具有耐鹽性,用非轉(zhuǎn)基因植株作對(duì)照,兩組都可用一定濃度的鹽水澆灌鑒定植株的耐鹽性
10.解析:(1)DNA是以4種脫氧核苷酸為原料合成,利用PCR技術(shù)(原理DNA復(fù)制)從HPV16型的基因組中獲取E7蛋白基因的DNA序列,以4種脫氧核苷酸為原料合成子鏈。若一個(gè)該目的基因循環(huán)擴(kuò)增6次,PCR技術(shù)大量擴(kuò)增目的基因時(shí),擴(kuò)增n次需要引物2n+1-2個(gè),緩沖液中需要加入的引物B個(gè)數(shù)計(jì)算公式為2n-1,因此擴(kuò)增6次需要引物B有2n-1=26-1=63個(gè)。(2)引物是從子鏈的5′端往3′端方向延伸,為了能讓擴(kuò)增出的目的基因與表達(dá)載體正確連接,則需要在引物的5′端分別添加相應(yīng)限制酶的識(shí)別序列。由于限制酶EcRⅠ會(huì)切割啟動(dòng)子,限制酶BamHⅠ會(huì)切割終止子,因此選擇的限制酶是MfeⅠ和KpnⅠ。設(shè)計(jì)引物A時(shí)其左邊需要添加Mfe Ⅰ識(shí)別序列5′-CAATTG-3′,且引物需要與E7蛋白的DNA堿基序列3′-TACTCG-5′互補(bǔ)配對(duì),故設(shè)計(jì)引物A的前12個(gè)堿基序列為5′-CAATTGATGAGC-3′。(3)復(fù)制原點(diǎn)可以保證表達(dá)載體(質(zhì)粒)在受體細(xì)胞中能自我復(fù)制,因此,控制表達(dá)載體大量擴(kuò)增的組成元件是復(fù)制原點(diǎn),復(fù)制原點(diǎn)的作用是進(jìn)行目的基因的復(fù)制,DNA復(fù)制時(shí)需要解旋酶和DNA聚合酶。(4)HPV16型E7蛋白疫苗作為抗原,可以刺激機(jī)體的B淋巴細(xì)胞增殖分化成為記憶B細(xì)胞和漿細(xì)胞。若間隔時(shí)間太短,上次免疫產(chǎn)生的抗體會(huì)與疫苗結(jié)合,導(dǎo)致刺激產(chǎn)生的記憶細(xì)胞數(shù)量少,免疫效果下降,因此相鄰的兩次注射之間需要間隔一定的時(shí)期。
答案:(1)四種游離的脫氧核苷酸(或dNTP) 63
(2)5′ MfeⅠ和KpnⅠ CAATTGATGAGC
(3)復(fù)制原點(diǎn) 解旋酶和DNA聚合酶
(4)記憶B細(xì)胞和漿細(xì)胞 若間隔時(shí)間太短,上次免疫產(chǎn)生的抗體會(huì)與疫苗結(jié)合,導(dǎo)致二次免疫產(chǎn)生的記憶細(xì)胞數(shù)量少,免疫效果下降
11.解析:(1)由題干信息“在高于胞內(nèi)Na+濃度的環(huán)境下,SOS1通過(guò)SOS信號(hào)通路與胞質(zhì)內(nèi)Na+結(jié)合并將其排出細(xì)胞外”可知,植物利用SOS信號(hào)通路將Na+排出細(xì)胞外是逆濃度梯度的運(yùn)輸,因此運(yùn)輸方式為主動(dòng)運(yùn)輸,特點(diǎn)是需要載體蛋白,需要能量。(2)①為獲得編碼SOS1蛋白的基因,可提取野生型水稻總RNA,通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄獲得模板DNA,再經(jīng)PCR獲得SOS1基因片段。②SOS1基因編碼序列中A+T含量占53%,則G+C含量為47%。③由圖可知,熒光蛋白基因內(nèi)部存在Spe Ⅰ和BamHⅠ兩種限制酶切序列,因此對(duì)載體酶切時(shí)不能選擇這兩種酶,并且不能選擇限制酶SmaⅠ,否則會(huì)導(dǎo)致載體中SOS1基因和綠色熒光蛋白基因不能正確表達(dá),故選擇XbaⅠ和EcRⅠ兩種限制酶對(duì)載體酶切,由于SOS1基因內(nèi)部有XbaⅠ的識(shí)別序列,故不能選擇限制酶XbaⅠ對(duì)目的基因酶切,但需要目的基因有與載體相同的黏性末端,故可在SOS1基因兩端分別添加SpeⅠ和EcRⅠ兩種限制酶的識(shí)別序列。(3)鑒定水稻抗鹽能力是否增強(qiáng),采取的操作是將轉(zhuǎn)基因水稻和普通水稻種植于高于胞內(nèi)Na+濃度的環(huán)境下,觀(guān)察兩種水稻的生長(zhǎng)狀況。(4)過(guò)量表達(dá)SOS1基因使轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SOS1含量增多,SOS1通過(guò)SOS信號(hào)通路與胞質(zhì)內(nèi)的Na+過(guò)多地排出細(xì)胞外,影響細(xì)胞本身對(duì)Na+的利用。
答案:(1)需要能量、需要載體蛋白
(2)①逆轉(zhuǎn)錄 ②47 ③SpeⅠ、EcRⅠ XbaⅠ、EcRⅠ
(3)將轉(zhuǎn)基因水稻和普通水稻種植于高于胞內(nèi)Na+濃度的環(huán)境下,觀(guān)察兩種水稻的生長(zhǎng)狀況
(4)過(guò)量表達(dá)SOS1基因使轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SOS1含量增多,SOS1通過(guò)SOS信號(hào)通路將胞質(zhì)內(nèi)的Na+過(guò)多地排出細(xì)胞外,影響細(xì)胞本身對(duì)Na+的利用
12.解析:(1)啟動(dòng)子是一段有特殊序列結(jié)構(gòu)的DNA片段,位于基因的上游,緊挨轉(zhuǎn)錄的起始位點(diǎn),它是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位。題干信息可知,RD29A是一種低溫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子,可見(jiàn),與35S啟動(dòng)子相比,RD29A啟動(dòng)子對(duì)植物正常生長(zhǎng)發(fā)育影響較小,從其調(diào)控基因表達(dá)特點(diǎn)的角度推測(cè)原因是在低溫條件誘導(dǎo)下,才會(huì)調(diào)控S基因的轉(zhuǎn)錄。(2)植物組織培養(yǎng)是指將離體的植物器官、組織或細(xì)胞等,培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上,給予適宜的培養(yǎng)條件,誘導(dǎo)其形成完整植株的技術(shù);題圖可知,質(zhì)粒甲和質(zhì)粒乙均含有卡那霉素抗性基因,將質(zhì)粒甲、乙分別導(dǎo)入兩組農(nóng)桿菌細(xì)胞,可用添加卡那霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選,然后將煙草葉片細(xì)胞與農(nóng)桿菌共同培養(yǎng),再篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞,經(jīng)植物組織培養(yǎng)技術(shù)培育成幼苗。構(gòu)建好的基因表達(dá)載體需要通過(guò)一定的方式才能進(jìn)入受體細(xì)胞。我國(guó)科學(xué)家采用他們獨(dú)創(chuàng)的一種方法——花粉管通道法;除此之外,將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用的方法還有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。(3)題圖可知,未處理情況下轉(zhuǎn)基因煙草甲和乙中的葉綠素含量相等,但略低于WT組;低溫情況下,葉綠素含量為WT組<轉(zhuǎn)基因煙草甲

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