一、選擇題（共20個(gè)小題，每小題2分，共40分。每小題只有一個(gè)選項(xiàng)符合題目要求）
1．[2023·遼寧模擬]“踏漿發(fā)酵釀酒法”是唐朝的一種主流紅酒釀造工藝。踏漿發(fā)酵即是碾碎葡萄，用葡萄汁單純發(fā)酵?！笆晡恫粩　闭f(shuō)明唐朝紅酒技術(shù)的優(yōu)良之處。下列相關(guān)說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ）
A．在葡萄酒釀制的整個(gè)過(guò)程中需要先通氣后密封
B．酒精生成過(guò)程合成ATP所需能量來(lái)自于葡萄糖中的化學(xué)能
C．“踏漿”有利于葡萄皮表面的酵母菌與葡萄汁液充分混合
D．“十年味不敗”主要與酵母菌發(fā)酵生成的酒精的消毒作用有關(guān)
2．[2023·福建漳州一模]唐代蘇敬的《新修本草》云：“凡作酒醴須曲，而蒲桃（即葡萄）、蜜等酒獨(dú)不用曲”。葡萄不僅可以釀造果酒，還可以釀造果醋，制作過(guò)程如下圖。下列分析正確的是（ ）
A．“蒲桃、蜜等酒獨(dú)不用曲”說(shuō)明葡萄釀制果酒不需要微生物
B．取新鮮葡萄制作果酒、果醋時(shí)應(yīng)先去梗再?zèng)_洗
C．制作果酒、果醋的后期都需要密閉處理
D．圖中①過(guò)程比②過(guò)程產(chǎn)生的氣體多
3．[2023·東北高三模擬]屠宰場(chǎng)廢棄血污不經(jīng)過(guò)處理直接排放，會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染。傳統(tǒng)的處理方法有填埋法和焚燒法等。填埋法易造成地表環(huán)境、地下水資源污染。焚燒法處理也會(huì)造成大氣污染，且廢棄物中所含的蛋白資源不能得到有效利用。研究人員以屠宰場(chǎng)血污堆積土壤為分離基質(zhì)，利用血平板培養(yǎng)基（添加了動(dòng)物血液），分離出了高效降解血紅蛋白的菌株，并初步用于降解廢棄血液、生產(chǎn)氨基酸液態(tài)肥料。下列敘述正確的是（ ）
A．上述菌株分離純化過(guò)程中用到了稀釋涂布平板法和平板劃線法
B．對(duì)分離純化得到的菌株培養(yǎng)后進(jìn)行計(jì)數(shù)，只能采用稀釋涂布平板法
C．血平板培養(yǎng)基上透明水解圈小的菌落分泌的蛋白酶的活性往往較高
D．實(shí)驗(yàn)中廢棄培養(yǎng)基因含有降解血污的微生物，可以直接填埋
4．[2023·湖北十堰市模擬]進(jìn)行垃圾分類收集可以減少垃圾處理時(shí)間，降低處理成本?？蒲行〗M欲分離及培養(yǎng)若干種微生物用于對(duì)濕垃圾（包括剩菜剩飯、骨頭、菜根菜葉、果皮等食品類廢物）的處理。下列有關(guān)敘述正確的是（ ）
A．在微生物培養(yǎng)操作過(guò)程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和操作者的雙手進(jìn)行滅菌
B．培養(yǎng)過(guò)程需要向培養(yǎng)基通入無(wú)菌空氣并進(jìn)行攪拌，目的是使菌體充分接觸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和溶解氧，促進(jìn)細(xì)菌繁殖
C．科研小組若從生活垃圾中分離分解尿素的微生物，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，如果有尿素分解菌存在，則培養(yǎng)基中該菌落的周圍會(huì)出現(xiàn)黑色
D．衛(wèi)生紙類垃圾可采用焚燒的方式處理，有效減少對(duì)環(huán)境的污染
5．[2023·浙江模擬]對(duì)酵母菌活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，下列做法可導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)的活菌數(shù)高于實(shí)際值的是（ ）
A．用同一只移液管配制一系列一定濃度梯度的稀釋液
B．用直接計(jì)數(shù)法對(duì)臺(tái)盼藍(lán)染色后的活酵母菌進(jìn)行計(jì)數(shù)
C．用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，酵母菌的培養(yǎng)時(shí)間不足
D．用倒平板接種酵母菌時(shí)，培養(yǎng)基的溫度過(guò)高
6．[2023·四川綿陽(yáng)鹽亭中學(xué)校考一模]利用微生物分解纖維素對(duì)廢棄物污染的減輕和作物秸稈再利用具有重要意義。某興趣小組從富含纖維素的土壤中取樣，加入選擇培養(yǎng)基中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，之后接種于鑒別培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，篩選出能夠分解纖維素的微生物。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．選擇培養(yǎng)的目的是促進(jìn)纖維素分解菌生長(zhǎng)，抑制其他微生物的生長(zhǎng)
B．振蕩培養(yǎng)可以增加溶氧量，促進(jìn)微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的充分接觸和利用
C．鑒別培養(yǎng)基上涂布接種時(shí)，將1 mL菌液滴到培養(yǎng)基表面再用涂布器涂布均勻
D．加入剛果紅的鑒別培養(yǎng)基上出現(xiàn)透明圈的菌落，可能是能夠分解纖維素的微生物
7．[2023·浙江模擬]下列關(guān)于植物細(xì)胞工程的說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ）
A．圖中的“馬鈴薯番茄”目前沒(méi)有什么生物技術(shù)可以成功獲得，是人們處理圖片偽造出來(lái)的
B．“馬鈴薯番茄”通過(guò)植物體細(xì)胞雜交技術(shù)獲得了成功，但沒(méi)有獲得人們預(yù)期的性狀
C．成功培養(yǎng)原生質(zhì)體是植物體細(xì)胞雜交技術(shù)的基礎(chǔ)
D．通過(guò)植物體細(xì)胞雜交技術(shù)，能克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，獲得新品種
8．[2023·湖南郴州一模]科學(xué)家利用馬鈴薯和西紅柿葉片分離原生質(zhì)體并進(jìn)行細(xì)胞雜交，最終獲得了雜種植株，相關(guān)過(guò)程如圖所示。有關(guān)分析正確的是（ ）
A．過(guò)程①應(yīng)將葉片上表皮向上，置于含纖維素酶和果膠酶的等滲或略高滲溶液中
B.過(guò)程②中的原生質(zhì)體由細(xì)胞膜、液泡膜及兩層膜之間的細(xì)胞質(zhì)構(gòu)成
C．④過(guò)程常用滅活病毒誘導(dǎo)法，目的是促進(jìn)原生質(zhì)體融合
D．⑤進(jìn)行脫分化和再分化過(guò)程，雜種植株一定具有馬鈴薯和西紅柿的優(yōu)良性狀
9．[2023·浙江一模]用愈傷組織中的胚性細(xì)胞獲得轉(zhuǎn)基因植株的流程如下圖所示，其中①、②、③表示過(guò)程。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）
eq \a\vs4\al(胚性,細(xì)胞) eq \(――→,\s\up7(①)) eq \a\vs4\al(原生,質(zhì)體) eq \(――→,\s\up7(②)) eq \a\vs4\al(含目的,基因的,原生質(zhì)體) eq \(――→,\s\up7(③)) eq \a\vs4\al(轉(zhuǎn)基因,植株)
A．①過(guò)程去除細(xì)胞壁可提高②過(guò)程中目的基因?qū)氲某晒β?br>B．相比①過(guò)程，③過(guò)程需降低培養(yǎng)基的滲透壓
C．除了上圖所示途徑，植物體細(xì)胞雜交也可打破遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙
D．原生質(zhì)體無(wú)細(xì)胞壁呈球形，③過(guò)程中胞質(zhì)分裂的方式與動(dòng)物細(xì)胞相同
10．[2023·山東泰安模擬]馬鈴薯塊莖含有大量的淀粉，能為人體提供豐富的熱量，且富含蛋白質(zhì)、氨基酸及多種維生素、礦物質(zhì)，尤其是其維生素含量是所有糧食作物中最全的，因此成為全球第四大重要糧食作物。馬鈴薯普通栽培種是同源四倍體，這使得馬鈴薯的雜交育種變得十分困難。若要通過(guò)二倍體馬鈴薯雜交來(lái)改良品種，則必須破解馬鈴薯單倍體、二倍體和四倍體的基因組，實(shí)現(xiàn)難度同樣很大。但植物細(xì)胞工程技術(shù)為馬鈴薯育種提供了可行的育種方案。下列相關(guān)植物細(xì)胞工程的說(shuō)法，不合理的是（ ）
A．利用植物組織培養(yǎng)可以高效、快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖
B．利用莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒苗，使植株具備抗病毒的能力，產(chǎn)品質(zhì)量得到提高
C．利用原生質(zhì)體融合實(shí)現(xiàn)體細(xì)胞雜交，可以克服雜交不親和的障礙，充分利用遺傳資源
D．利用培養(yǎng)的愈傷組織進(jìn)行誘變育種，可以顯著提高變異頻率，獲得有用的突變體
11．[2022·湖北卷]某興趣小組開(kāi)展小鼠原代神經(jīng)元培養(yǎng)的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其培養(yǎng)的原代神經(jīng)元生長(zhǎng)緩慢，其原因不可能的是（ ）
A.實(shí)驗(yàn)材料取自小鼠胚胎的腦組織
B．為了防止污染將培養(yǎng)瓶瓶口密封
C．血清經(jīng)過(guò)高溫處理后加入培養(yǎng)基
D．所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性
12．[2022·山東卷]如圖所示，將由2種不同的抗原分別制備的單克隆抗體分子，在體外解偶聯(lián)后重新偶聯(lián)可制備雙特異性抗體，簡(jiǎn)稱雙抗。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ）
A．雙抗可同時(shí)與2種抗原結(jié)合
B．利用雙抗可以將蛋白類藥物運(yùn)送至靶細(xì)胞
C．篩選雙抗時(shí)需使用制備單克隆抗體時(shí)所使用的2種抗原
D．同時(shí)注射2種抗原可刺激B細(xì)胞分化為產(chǎn)雙抗的漿細(xì)胞
13．[2023·山東煙臺(tái)市模擬]單基因遺傳病可以通過(guò)核酸雜交技術(shù)進(jìn)行早期診斷。有一對(duì)夫婦被檢測(cè)出均為鐮狀細(xì)胞貧血基因的攜帶者，為了能生下健康的孩子，每次妊娠早期都進(jìn)行產(chǎn)前診斷。下圖為其產(chǎn)前核酸分子雜交診斷和結(jié)果示意圖，有關(guān)敘述不正確的是（ ）
A．根據(jù)凝膠電泳帶譜分析，這對(duì)夫婦4次妊娠的胎兒中需要停止妊娠的是Ⅱ1和Ⅱ4
B．將正常的血紅蛋白基因?qū)牖颊叩墓撬柙煅杉?xì)胞中，可以達(dá)到治療的目的
C．檢測(cè)突變基因的RNA分子探針的核糖核苷酸序列為—UGCACAA—
D．正常人群中鐮狀細(xì)胞貧血基因攜帶者占1/10 000，Ⅰ2若與一正常女性再婚，生出患病兒子的概率為1/80 000
14．[2023·山東青島一模]我國(guó)大陸首例由試管嬰兒分娩的“試管嬰兒二代寶寶”在北京大學(xué)第三醫(yī)院誕生，他的母親是我國(guó)大陸首例試管嬰兒。試管嬰兒技術(shù)的不斷進(jìn)步，為許多不孕不育患者實(shí)現(xiàn)了做父母的心愿。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．試管嬰兒技術(shù)所獲得的胚胎必須通過(guò)胚胎移植給受體才能獲得后代
B．胚胎移植實(shí)質(zhì)上是早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移
C．精子接觸透明帶時(shí)，卵細(xì)胞膜會(huì)發(fā)生反應(yīng)阻止多精子入卵細(xì)胞
D．采集的卵母細(xì)胞和精子都要進(jìn)行相應(yīng)的處理才能完成體外受精過(guò)程
15．[2023·江蘇揚(yáng)州?？寄M]胚胎工程中各種胚胎操作技術(shù)如圖所示。下列分析正確的是（ ）
A．從良種公牛體內(nèi)獲得的精子可以直接與獲能的卵細(xì)胞結(jié)合受精
B．早期囊胚a、b、c基因型相同，但發(fā)育得到的個(gè)體表型不一定相同
C．d可直接移植給受體，得到小牛的途徑屬于有性生殖
D．胚胎移植時(shí)因代孕牛幾乎對(duì)胚胎無(wú)免疫排斥，因此無(wú)需使用免疫抑制劑
16．[2023·河北廊坊市第一中學(xué)?？家荒大多數(shù)哺乳動(dòng)物的早期胚胎具有調(diào)節(jié)發(fā)育的功能，去掉早期胚胎的一半，仍可以發(fā)育成一個(gè)完整的胎兒，調(diào)節(jié)能力隨發(fā)育進(jìn)程逐漸減弱甚至消失。晚期桑葚胚分割后分離的卵裂球仍具有調(diào)整發(fā)育的能力，重新致密化使卵裂球重新分布而發(fā)育至囊胚。下列說(shuō)法不正確的是（ ）
A．桑葚胚前的每一個(gè)細(xì)胞都具有發(fā)育成完整胚胎的潛能
B．囊胚期不同部位的細(xì)胞致密化程度不同
C．胚胎分割屬于無(wú)性繁殖或克隆的范疇
D．胚胎發(fā)育到原腸胚階段，可將其取出向受體移植
17．[2023·江蘇無(wú)錫一模]基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，以便于重組和篩選。已知限制酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是 eq \a\vs4\al( ↓,,－GATC－) ，限制酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是 eq \a\vs4\al( ↓,,－GGATCC－) 。根據(jù)圖示判斷下列操作正確的是（ ）
A．目的基因和質(zhì)粒均用限制酶Ⅱ切割
B．目的基因和質(zhì)粒均用限制酶Ⅰ切割
C．質(zhì)粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割
D．質(zhì)粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割
18．SOD是一種廣泛分布于各種細(xì)胞中的抗氧化酶，它能催化超氧陰離子自由基形成H2O2，增強(qiáng)植物的抗逆性。下圖為培育能夠產(chǎn)生SOD農(nóng)作物新品種的一種方式，有關(guān)敘述正確的是（ ）
eq \(\s\up7(植物細(xì)胞),\s\d5(（二倍體）)) eq \(――→,\s\up7(\(\s\up7(SOD基因)),\s\d5(\s\d5(↓)),①)) 新細(xì)胞 eq \(――→,\s\up7( ),\s\d5(②)) eq \(\s\up7(愈傷),\s\d5(組織)) eq \(――→,\s\up7( ),\s\d5(③)) 胚狀體―→新品種
A．①過(guò)程中最常用的方法是采用顯微注射技術(shù)將SOD基因?qū)胫参锛?xì)胞
B．②、③分別表示脫分化、再分化過(guò)程，無(wú)需嚴(yán)格的無(wú)菌操作
C．該育種方式利用了細(xì)胞工程和基因工程，能體現(xiàn)細(xì)胞的全能性
D．利用植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)SOD時(shí)，需要將外植體培養(yǎng)到胚狀體
19．[2023·浙江模擬]蛋白質(zhì)工程是當(dāng)前的新興分子生物學(xué)技術(shù)，通過(guò)改造或合成基因，來(lái)改造現(xiàn)有的蛋白質(zhì)或制造新的蛋白質(zhì)，以滿足人類生產(chǎn)、生活的需求。下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程的說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ）
A．蛋白質(zhì)工程技術(shù)會(huì)改變組成蛋白質(zhì)的氨基酸的種類、數(shù)目和排列順序
B．蛋白質(zhì)工程獲得的蛋白質(zhì)都是自然界已存在的蛋白質(zhì)（天然蛋白質(zhì)）
C．蛋白質(zhì)工程不直接改造蛋白質(zhì)的原因是改造基因易于操作且改造后可遺傳
D．蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)出來(lái)的蛋白質(zhì)的活性與天然蛋白質(zhì)相似，而且穩(wěn)定性更高
20．基因工程是一種DNA操作技術(shù)，其表達(dá)載體的構(gòu)建和檢測(cè)篩選是兩個(gè)重要步驟。下圖1為某種質(zhì)粒簡(jiǎn)圖，箭頭所指分別為限制酶EcRⅠ、BamHⅠ的酶切位點(diǎn)。已知目的基因X的兩端分別有包括EcRⅠ、BamHⅠ在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。圖2表示運(yùn)用影印培養(yǎng)法（指在一系列平板培養(yǎng)基的相同位置上接種并培養(yǎng)出相同菌落的一種微生物培養(yǎng)方法）檢測(cè)表達(dá)載體是否導(dǎo)入大腸桿菌。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．同時(shí)使用EcRⅠ和BamHⅠ 切割質(zhì)粒，可避免酶切后質(zhì)粒的自身環(huán)化
B．轉(zhuǎn)化方法是將質(zhì)粒表達(dá)載體溶于緩沖液后與經(jīng) Ca2＋處理的大腸桿菌混合
C．培養(yǎng)基 A 和培養(yǎng)基 B分別含有四環(huán)素和青霉素
D．從篩選結(jié)果分析，含目的基因X的菌落是4、6
二、非選擇題（共5小題，共60分）
21．（12分）葡萄酒是葡萄汁經(jīng)酵母菌發(fā)酵而成的。釀制葡萄酒的兩個(gè)簡(jiǎn)易裝置如圖所示。
回答下列問(wèn)題：
（1）試管中的X溶液有助于維持甲裝置的瓶中氣壓相對(duì)穩(wěn)定，與乙裝置相比，用甲裝置釀制葡萄酒的優(yōu)點(diǎn)是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________（答出兩點(diǎn)即可）。
（2）葡萄汁裝入甲裝置時(shí)，要留有約1/3的空間，這種做法的目的是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
（答出兩點(diǎn)即可）。
（3）某同學(xué)若用乙裝置進(jìn)行發(fā)酵，并設(shè)置兩個(gè)不同處理組（乙A和乙B），乙A裝置中保留一定量的氧氣，乙B裝置中沒(méi)有氧氣。在其他條件相同且適宜的情況下，測(cè)得一段時(shí)間內(nèi)乙A和乙B中酒精含量的變化趨勢(shì)及乙A中氧氣含量的變化趨勢(shì)如曲線圖所示。圖中曲線①、②、③依次表示 、 、 含量的變化趨勢(shì)。
（4）從異化作用的類型看，酵母菌屬于 生物；從同化作用的類型看，酵母菌屬于 （填“自養(yǎng)型”或“異養(yǎng)型”）生物。
22．（12分）[2023·天津市高三三模]綠水青山就是金山銀山，污水治理是生態(tài)文明建設(shè)的一項(xiàng)重要任務(wù)，利用微生物降解是水污染治理的有效手段之一。聚乙烯醇（PVA）是存在于化工污水中的一種難以降解的大分子有機(jī)物，PVA分解菌能產(chǎn)生PVA酶分解PVA，PVA與碘作用時(shí)能產(chǎn)生藍(lán)綠色復(fù)合物，當(dāng)PVA被分解時(shí)藍(lán)綠色復(fù)合物消失，形成白色透明斑。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）表中是篩選出能高效分解PVA的細(xì)菌的培養(yǎng)基配方，表中X物質(zhì)最可能為 。
（2）若圖中污水取樣是從聚乙烯醇（PVA）污染的水體中采集，通過(guò)圖示過(guò)程分離出分解聚乙烯醇（PVA）的菌落，則進(jìn)行過(guò)程1的作用是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
（3）若將100 mL含有PVA分解菌的土壤樣品溶液稀釋104倍后，取0.1 mL稀釋液均勻涂布在選擇培養(yǎng)基表面，測(cè)得菌落數(shù)的平均值為160個(gè)，空白對(duì)照組平板上未出現(xiàn)菌落，則100 mL原菌液中有PVA分解菌 個(gè)，該接種方法是 ，通過(guò)該方法測(cè)量的菌落數(shù)值與實(shí)際值相比一般會(huì) （填“偏大”“偏小”或“相等”）。
（4）要鑒定分離出的細(xì)菌是否為PVA分解菌，培養(yǎng)PVA分解菌的培養(yǎng)基中除了加入必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外還需要加入 用于鑒別PVA分解菌，若菌落周圍 ，則該菌為PVA分解菌。
23．（12分）W是一種具有特定功能的人體蛋白質(zhì)。某研究小組擬仿照制備乳腺生物反應(yīng)器的研究思路，制備一種膀胱生物反應(yīng)器來(lái)獲得W，基本過(guò)程如圖所示。
回答下列問(wèn)題：
（1）步驟①中需要使用的工具酶有 。步驟②和③所代表的操作分別是 和 。步驟④稱為_(kāi)_______________________________________________________________________。
（2）與乳腺生物反應(yīng)器相比，用膀胱生物反應(yīng)器生產(chǎn)W的優(yōu)勢(shì)在于不受轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的 （答出2點(diǎn)即可）的限制。
（3）一般來(lái)說(shuō)，在同一動(dòng)物個(gè)體中，乳腺上皮細(xì)胞與膀胱上皮細(xì)胞的細(xì)胞核中染色體DNA所含的遺傳信息 （填“相同”或“不同”），原因是 。
（4）從上述流程可知，制備生物反應(yīng)器涉及胚胎工程，胚胎工程中所用到的主要技術(shù)有 （答出2點(diǎn)即可）。
24．（12分）[2022·遼寧卷]某抗膜蛋白治療性抗體藥物研發(fā)過(guò)程中，需要表達(dá)N蛋白胞外段，制備相應(yīng)的單克隆抗體，增加其對(duì)N蛋白胞外段特異性結(jié)合的能力。
Ⅰ.N蛋白胞外段抗原制備，流程如圖1
eq \x(\a\al(N蛋白胞外,段基因重組,慢病毒質(zhì)粒)) eq \(――→,\s\up7(脂質(zhì)體),\s\d5(導(dǎo)入)) eq \x(\a\al(病毒包,裝細(xì)胞)) eq \(――→,\s\up7(組裝),\s\d5(釋放)) eq \x(\a\al(收集,病毒)) eq \(――→,\s\up7(\a\vs4\al(感染海,拉細(xì)胞)),\s\d5( )) eq \x(\a\al(N蛋白胞外,段表達(dá)、純化))
圖1
（1）構(gòu)建重組慢病毒質(zhì)粒時(shí)，選用氨芐青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因，目的是 。用脂質(zhì)體將重組慢病毒質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒導(dǎo)入病毒包裝細(xì)胞，質(zhì)粒被包在脂質(zhì)體 （填“雙分子層中”或“兩層磷脂分子之間”）。
（2）質(zhì)粒在包裝細(xì)胞內(nèi)組裝出由 組成的慢病毒，用慢病毒感染海拉細(xì)胞進(jìn)而表達(dá)并分離、純化N蛋白胞外段。
Ⅱ.N蛋白胞外段單克隆抗體制備，流程如圖2
eq \x(\a\al(N蛋白,胞外段)) eq \(――→,\s\up7(免疫小鼠),\s\d5(取脾組織)) eq \x(\a\al(B淋巴細(xì),胞懸液)) eq \(――→,\s\up7(骨髓瘤細(xì)胞),\s\d5(融合)) eq \x(多種雜交細(xì)胞)
選擇性培養(yǎng)基
eq \x(\a\al(N蛋白胞,外段抗體)) eq \(――→,\s\up7(擴(kuò)大培養(yǎng))) eq \x(\a\al(單克隆雜交,瘤細(xì)胞株)) eq \(――→,\s\up7(96孔板)) eq \x(雜交瘤細(xì)胞)
圖2
（3）用N蛋白胞外段作為抗原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫后，取小鼠脾組織用 酶處理，制成細(xì)胞懸液，置于含有混合氣體的 中培養(yǎng)，離心收集小鼠的B淋巴細(xì)胞，與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。
（4）用選擇性培養(yǎng)基對(duì)融合后的細(xì)胞進(jìn)行篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，將其接種到96孔板，進(jìn)行 培養(yǎng)。用 技術(shù)檢測(cè)每孔中的抗體，篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，經(jīng)體外擴(kuò)大培養(yǎng)，收集 ，提取單克隆抗體。
（5）利用N蛋白胞外段抗體與藥物結(jié)合，形成 ，實(shí)現(xiàn)特異性治療。
25．（12分）[2023·湖北黃岡市模擬]丙肝病毒（HCV）是一種 RNA 病毒，人們將得到的 HCV 的多個(gè)抗原基因首尾相連，連接在同一調(diào)控元件下，可構(gòu)成融合基因。對(duì) HCV 感染的診斷步驟是：首先進(jìn)行抗 HCV 抗體檢測(cè)，若檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性則還需要進(jìn)行 HCV 核酸檢測(cè)。HCV 融合抗原可用于制作第三代 HCV 抗體檢測(cè)試劑。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）首先需要獲得融合基因。即通過(guò)相關(guān)的 RNA 合成 cDNA 然后拼接起來(lái)，這個(gè)過(guò)程主要需要 酶和 DNA 連接酶等。其次要利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增融合基因。即先根據(jù)融合基因的核苷酸序列，設(shè)計(jì)并合成引物，若該融合基因的序列為（虛線處省略了部分核苷酸序列），則 PCR 設(shè)計(jì)應(yīng)選用的兩種引物（部分）序列應(yīng)分別為：①5′－AACTAT－3′，② 。引物能與變性的融合基因單鏈結(jié)合，在 催化作用下延伸，如此循環(huán)多次。
（2）構(gòu)建融合基因表達(dá)載體。如圖所示，表達(dá)載體上除了標(biāo)注的 DNA 片段外，在融合基因上游還必須擁有的 DNA 片段（箭頭所示）是 ，其作用是
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（3）用融合基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞。用含硫酸卡那霉素的培養(yǎng)基篩選出能生長(zhǎng)的菌落，從而得到能產(chǎn)生HCV融合抗原的工程菌，原非感受態(tài)受體大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)應(yīng) （填“含有”或“不含有”）硫酸卡那霉素抗性基因。
（4）某人體內(nèi) HCV 抗體檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性，但進(jìn)行 HCV 核酸檢測(cè)時(shí)結(jié)果呈陰性，最可能的原因是________________________________________________________________________
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模塊清通關(guān)卷 模塊四 生物技術(shù)與工程
1．D 在利用酵母菌發(fā)酵時(shí)最好是先通入足夠的無(wú)菌空氣，在有氧環(huán)境下使其繁殖，再隔絕氧氣進(jìn)行發(fā)酵，A正確；酒精生成過(guò)程只在第一階段能合成ATP，故合成ATP所需能量來(lái)自葡萄糖中的化學(xué)能，B正確；踏漿發(fā)酵即是碾碎葡萄，有利于酵母菌與葡萄汁液充分混合，充分發(fā)酵，C正確；發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的酒精對(duì)其他微生物的生長(zhǎng)有一定抑制作用，但主要在于葡萄酒制成后，在缺氧、呈酸性的發(fā)酵液中，絕大多數(shù)微生物無(wú)法適應(yīng)這一環(huán)境而受到抑制，故“十年味不敗”，D錯(cuò)誤。
2．D 葡萄釀制果酒需要葡萄果皮上的野生酵母菌，A錯(cuò)誤；沖洗葡萄時(shí)，果皮難免會(huì)有破損，果肉會(huì)被水中的微生物污染，增加發(fā)酵失敗可能。因此取新鮮葡萄制作果酒、果醋時(shí)應(yīng)先沖洗再去梗，B錯(cuò)誤；制作果酒是利用酵母菌發(fā)酵，后期密閉處理、利于酵母菌無(wú)氧呼吸產(chǎn)生酒精；制作果醋是利用醋酸菌發(fā)酵，醋酸菌是好氧菌，不需要密閉處理，C錯(cuò)誤；圖中①過(guò)程表示酒精發(fā)酵，酵母菌無(wú)氧呼吸產(chǎn)生CO2，圖中②過(guò)程表示醋酸菌利用乙醇轉(zhuǎn)化為乙醛，再將乙醛轉(zhuǎn)化為醋酸和水，不產(chǎn)生氣體，D正確。
3．A 由圖中兩個(gè)培養(yǎng)基中菌落的分布可知，上述菌株分離純化過(guò)程中用到了稀釋涂布平板法和平板劃線法，A正確；對(duì)分離純化得到的菌株培養(yǎng)后進(jìn)行計(jì)數(shù)，可以采用稀釋涂布平板法，也可以采用顯微鏡計(jì)數(shù)法，B錯(cuò)誤；血平板培養(yǎng)基上透明水解圈大的菌落分泌的蛋白酶的活性往往較高，C錯(cuò)誤；實(shí)驗(yàn)中廢棄培養(yǎng)基因含有降解血污的微生物，需要進(jìn)行滅菌處理后再填埋，避免污染環(huán)境，D錯(cuò)誤。
4．B 在微生物培養(yǎng)操作過(guò)程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和消毒，避免操作者受到傷害，A錯(cuò)誤；進(jìn)行培養(yǎng)的微生物大多為需氧型，在培養(yǎng)過(guò)程中向培養(yǎng)基通入無(wú)菌空氣并攪拌，可以增加溶氧量并使菌體充分接觸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以促進(jìn)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖，B正確；鑒別尿素分解菌時(shí)，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素分解菌代謝會(huì)產(chǎn)生氨，使pH升高，菌落周圍會(huì)出現(xiàn)紅色，C錯(cuò)誤；衛(wèi)生紙類垃圾不可回收且富含纖維素，可采用衛(wèi)生填埋的方法，利用環(huán)境中的纖維素分解菌將其降解，可有效減少對(duì)環(huán)境的污染，D錯(cuò)誤。
5．A 若用同一只移液管配制一系列一定濃度梯度的稀釋液，由于每次吸液后移液管中都有菌液殘留，這種做法會(huì)導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)的活菌數(shù)高于實(shí)際值，A符合題意；直接計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)酵母菌活菌數(shù)量時(shí)，可用臺(tái)盼藍(lán)對(duì)酵母菌進(jìn)行染色，能被染色的是死酵母菌，不能被染色的是活酵母菌，不會(huì)導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)結(jié)果高于實(shí)際值，B不符合題意；用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，通常計(jì)數(shù)的結(jié)果都會(huì)比實(shí)際值低，若酵母菌的培養(yǎng)時(shí)間不足，統(tǒng)計(jì)的活菌數(shù)會(huì)比實(shí)際值更低，C不符合題意；用倒平板接種酵母菌時(shí)，酵母菌最適宜生長(zhǎng)繁殖的溫度約為28 ℃，若培養(yǎng)基的溫度過(guò)高，會(huì)殺死酵母菌，導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)的活菌數(shù)低于實(shí)際值，D不符合題意。
6．C 選擇培養(yǎng)的原理是人為提供有利于目的菌生長(zhǎng)的條件，同時(shí)抑制或阻止其他微生物的生長(zhǎng)，因此選擇培養(yǎng)的目的是促進(jìn)纖維素分解菌生長(zhǎng)，抑制其他微生物的生長(zhǎng)，A正確；振蕩培養(yǎng)可以增加溶氧量，促進(jìn)微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的充分接觸和利用，B正確；鑒別培養(yǎng)基上涂布接種時(shí)，將0.1 mL菌液滴到培養(yǎng)基表面再用涂布器涂布均勻，C錯(cuò)誤；加入剛果紅的培養(yǎng)基上所出現(xiàn)的有透明圈的菌落，可能是分解纖維素的細(xì)菌或依賴剛果紅而生存的真菌繁殖而成，D正確。
7．A 圖中的“馬鈴薯番茄”目前可以通過(guò)無(wú)性繁殖嫁接技術(shù)獲得成功，A錯(cuò)誤；“馬鈴薯番茄”通過(guò)植物體細(xì)胞雜交技術(shù)獲得了成功，但沒(méi)有獲得人們預(yù)期的性狀，這與基因的相互作用及雜交細(xì)胞容易丟失染色體有關(guān)，B正確；細(xì)胞融合需要去除細(xì)胞壁，因此成功培養(yǎng)原生質(zhì)體是植物體細(xì)胞雜交技術(shù)的基礎(chǔ)，C正確；植物體細(xì)胞雜交能克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，獲得新品種，D正確。
8．A 過(guò)程①應(yīng)將葉片下表皮的一面朝下（能與溶液接觸），置于含有纖維素酶和果膠酶的溶液中去除細(xì)胞壁，原生質(zhì)體沒(méi)有細(xì)胞壁，為避免原生質(zhì)體吸水漲破，將葉片置于等滲或略高滲溶液中，A正確；原生質(zhì)層是由細(xì)胞膜、液泡膜以及這兩層膜之間的細(xì)胞質(zhì)組成，而原生質(zhì)體是指植物細(xì)胞去除細(xì)胞壁后的剩余部分，B錯(cuò)誤；誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的化學(xué)法包括聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2＋－高pH融合法等，滅活病毒是用于誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法，C錯(cuò)誤；由于基因的選擇性表達(dá)，獲得的雜種植株不一定能夠表現(xiàn)親本的優(yōu)良性狀，如番茄－馬鈴薯雜種植物，地上沒(méi)有結(jié)番茄，地下也沒(méi)有長(zhǎng)馬鈴薯，D錯(cuò)誤。
9．D 原生質(zhì)體沒(méi)有細(xì)胞壁，①過(guò)程去除細(xì)胞壁可提高②過(guò)程中目的基因?qū)氲某晒β?，A正確；由于①過(guò)程去除細(xì)胞壁，需提高培養(yǎng)基滲透壓，避免原生質(zhì)體吸水漲破，③過(guò)程已長(zhǎng)出細(xì)胞壁，可降低滲透壓，B正確；植物體細(xì)胞雜交是將不同種的植物體細(xì)胞原生質(zhì)體在一定條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種細(xì)胞培育成完整植物體的技術(shù)，可以打破遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，C正確；原生質(zhì)體無(wú)細(xì)胞壁而呈球形，融合后的原生質(zhì)體具有生物活性，但不具有細(xì)胞壁，無(wú)法表現(xiàn)優(yōu)良的性狀，需要再生出細(xì)胞壁后才能進(jìn)行分裂，因此③過(guò)程細(xì)胞分裂時(shí)會(huì)形成細(xì)胞板，進(jìn)而形成細(xì)胞壁，與動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞膜向內(nèi)凹陷的分裂方式不同，D錯(cuò)誤。
10．B 利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)之一是可以高效、快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖，A正確；利用莖尖分生組織培育脫毒苗是因?yàn)榍o尖分生組織細(xì)胞中不含病毒，而不是因?yàn)槠浜锌共《净?，所以，此方法不一定能使植株具備抗病毒的能力，B錯(cuò)誤；利用原生質(zhì)體融合實(shí)現(xiàn)體細(xì)胞雜交，可以克服遠(yuǎn)緣雜交不親和，擴(kuò)大親本范圍，充分利用遺傳資源，C正確；愈傷組織具有分裂旺盛的優(yōu)點(diǎn)，適于誘變育種的取材，能提高突變頻率，D正確。
11．A 小鼠胚胎腦組織中含有豐富的原代神經(jīng)元，細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，不會(huì)造成生長(zhǎng)緩慢，A符合題意；培養(yǎng)瓶瓶口密封會(huì)使培養(yǎng)液中缺氧，影響細(xì)胞有氧呼吸，造成供能不足，可能使細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，B不符合題意；血清經(jīng)過(guò)高溫處理后，其中活性成分變性，失去原有功能，細(xì)胞生存環(huán)境嚴(yán)重惡化，可能使細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，C不符合題意；小鼠內(nèi)環(huán)境為弱堿性，所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性，使細(xì)胞生存環(huán)境惡劣，可能造成細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，D不符合題意。
12．D 根據(jù)題意，雙抗具有雙特異性，即可同時(shí)與2種抗原發(fā)生特異性結(jié)合，A正確；根據(jù)抗體與抗原特異性結(jié)合的原理，利用雙抗可以將蛋白類藥物運(yùn)送至靶細(xì)胞，從而使藥物作用于特定的靶細(xì)胞，B正確；雙抗是由2種不同的抗原分別制備的單克隆抗體分子經(jīng)過(guò)解偶聯(lián)后重新偶聯(lián)形成的，故而篩選時(shí)需要使用制備單克隆抗體時(shí)所使用的2種抗原來(lái)進(jìn)行抗原—抗體檢測(cè)，從而篩選出具有雙特異性的抗體，C正確；同時(shí)注射2種抗原會(huì)刺激B細(xì)胞分化形成不同的漿細(xì)胞，進(jìn)而產(chǎn)生兩種抗體，一種漿細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體，并不能產(chǎn)生雙抗，D錯(cuò)誤。
13．A 根據(jù)電泳條帶分析，假設(shè)患病基因用b表示，則夫婦基因型均為Bb，四個(gè)胎兒基因型分別依次是BB、bb、Bb、BB，應(yīng)該終止妊娠的是2號(hào)胎兒，A錯(cuò)誤；鐮狀細(xì)胞貧血是由基因突變導(dǎo)致的，屬于遺傳病，將正常血紅蛋白的基因?qū)牖颊叩墓撬柙煅杉?xì)胞中可達(dá)到治療目的，B正確；據(jù)圖可知，突變基因的核苷酸序列－ACGTGTT－，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則，則作為探針的核糖核苷酸序列為－UGCACAA－，C正確；男性基因型為Bb，若與正常女子Bb（正常人群中鐮狀細(xì)胞貧血基因攜帶者占1/10 000）再婚，則生出患病兒子的概率為1/10 000×1/4×1/2＝1/80 000，D正確。
14．C 核移植、轉(zhuǎn)基因或體外受精等技術(shù)獲得的胚胎均需通過(guò)胚胎移植給受體才能獲得后代，A正確；胚胎移植實(shí)質(zhì)上是早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移，B正確；在精子觸及卵細(xì)胞膜的瞬間，會(huì)產(chǎn)生阻止后來(lái)的精子進(jìn)入透明帶的生理反應(yīng)，這個(gè)反應(yīng)稱作透明帶反應(yīng)，C錯(cuò)誤；體外受精之前，要對(duì)精子進(jìn)行獲能處理，采集的卵母細(xì)胞，都要在體外經(jīng)人工培養(yǎng)成熟后，才能與獲能的精子受精，D正確。
15．D 從良種公牛體內(nèi)獲得的精子在體外獲能后才可以與培養(yǎng)到MⅡ期的卵母細(xì)胞結(jié)合受精，A錯(cuò)誤；據(jù)圖可知，三種早期囊胚由不同受精卵發(fā)育而來(lái)，故a、b、c細(xì)胞核中的遺傳物質(zhì)不一定相同，B錯(cuò)誤；d是經(jīng)過(guò)胚胎分割形成的兩個(gè)健康的胚胎，可直接移植給受體，該過(guò)程屬于無(wú)性生殖，C錯(cuò)誤；受體對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，不需要注射免疫抑制劑，D正確。
16．D 桑葚胚前的每一個(gè)細(xì)胞都具有發(fā)育成完整胚胎的潛能，因?yàn)槎己邢嗤囊惶走z傳物質(zhì)，A正確；囊胚期不同部位的細(xì)胞數(shù)目不同，其致密化程度不同，B正確；胚胎分割后形成的胚胎是相同的，屬于無(wú)性繁殖或克隆的范疇，C正確；胚胎發(fā)育到桑葚胚或囊胚階段，可將其取出向受體移植，D錯(cuò)誤。
17．C 限制酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是 eq \a\vs4\al( ↓,,－GATC－) ，限制酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是 eq \a\vs4\al( ↓,,－GGATCC－) ，可知限制酶Ⅰ能夠識(shí)別和切割限制酶Ⅱ切割后的黏性末端；目的基因的右端限制酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是 eq \a\vs4\al( ↓,,－GATC－) ，目的基因左端是限制酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是 eq \a\vs4\al( ↓,,－GGATCC－) ，只有用限制酶Ⅰ才能同時(shí)將目的基因切割下來(lái)；質(zhì)粒上有GeneⅠ和GeneⅡ兩種標(biāo)記基因，分別有限制酶Ⅰ的識(shí)別序列和限制酶Ⅱ的識(shí)別序列；如果用限制酶Ⅰ切割，則GeneⅠ和GeneⅡ都被破壞，造成重組質(zhì)粒無(wú)標(biāo)記基因；用限制酶Ⅱ切割，則破壞GeneⅡ，保留GeneⅠ，其黏性末端和切割目的基因所在DNA的黏性末端相同，可以連接形成重組DNA。
18．C ①過(guò)程中最常用的方法是采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將SOD基因?qū)胫参锛?xì)胞，A錯(cuò)誤；②、③分別表示脫分化、再分化過(guò)程，均需要在嚴(yán)格的無(wú)菌條件下完成，B錯(cuò)誤；該育種方式利用了細(xì)胞工程和基因工程，從植物細(xì)胞培育成植物個(gè)體，能體現(xiàn)細(xì)胞的全能性，C正確；利用植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)SOD時(shí)，只需要將外植體培養(yǎng)到愈傷組織即可，D錯(cuò)誤。
19．B 蛋白質(zhì)工程技術(shù)是根據(jù)人們對(duì)蛋白質(zhì)功能的特定需求，對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行設(shè)計(jì)改造，會(huì)改變組成蛋白質(zhì)的氨基酸的種類、數(shù)目和排列順序，A正確；基因工程獲得的蛋白質(zhì)都是自然界已存在的蛋白質(zhì)（天然蛋白質(zhì)），而蛋白質(zhì)工程是根據(jù)人們的需求獲得的蛋白質(zhì)，所以都是非天然的蛋白質(zhì)，B錯(cuò)誤；由于基因決定蛋白質(zhì)，因此要對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行設(shè)計(jì)改造，最終還必須通過(guò)改造或合成基因來(lái)完成，故蛋白質(zhì)工程不直接改造蛋白質(zhì)的原因是改造基因易于操作且改造后可遺傳，C正確；蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)出來(lái)的蛋白質(zhì)在天然蛋白質(zhì)的基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)改造，品質(zhì)更加優(yōu)良，活性與天然蛋白質(zhì)相似，而且穩(wěn)定性更高，D正確。
20．C 為避免酶切后質(zhì)粒的自身環(huán)化，可同時(shí)使用EcRⅠ和BamHⅠ切割質(zhì)粒，A正確；轉(zhuǎn)化方法是將質(zhì)粒表達(dá)載體溶于緩沖液后與經(jīng)Ca2＋處理的大腸桿菌混合，B正確；用EcRⅠ和BamHⅠ兩種限制酶對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行切割時(shí)，會(huì)破壞四環(huán)素抗性基因，但不會(huì)破壞青霉素抗性基因，因此導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌能在含有青霉素的培養(yǎng)基上生存，但不能在含有四環(huán)素培養(yǎng)基上生存，所以培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B分別含有青霉素、四環(huán)素，含目的基因X的菌落是4和6，C錯(cuò)誤、D正確。
21．答案：（1）不需要開(kāi)蓋放氣；避免了因開(kāi)蓋引起的雜菌污染 （2）為酵母菌大量繁殖提供適量的氧氣；防止發(fā)酵旺盛時(shí)汁液溢出 （3）乙A中的氧氣 乙B中的酒精 乙A中的酒精 （4）兼性厭氧型 異養(yǎng)
解析：（1）試管中的X溶液有助于維持甲裝置的瓶中氣壓相對(duì)穩(wěn)定，與乙裝置相比，用甲裝置釀制葡萄酒的優(yōu)點(diǎn)是不需要開(kāi)蓋放氣；避免了因開(kāi)蓋引起的雜菌污染。（2）葡萄汁裝入甲裝置時(shí)，要留有約1/3的空間，這種做法的目的是為酵母菌大量繁殖提供適量的氧氣；防止發(fā)酵旺盛時(shí)汁液溢出。（3）分析題意可知，圖中曲線①、②、③依次表示乙A中的氧氣、乙B中的酒精、乙A中的酒精含量的變化趨勢(shì)。（4）從異化作用的類型看，酵母菌屬于兼性厭氧型生物；從同化作用的類型看，酵母菌屬于異養(yǎng)型生物。
22．答案：（1）聚乙烯醇（或PVA） （2）通過(guò)選擇培養(yǎng)增加PVA分解菌的數(shù)量 （3）1.6×109 稀釋涂布平板法 偏小 （4）碘 出現(xiàn)白色透明斑
解析：（1）表格是篩選出能高效分解PVA的細(xì)菌的培養(yǎng)基配方，即該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的配制過(guò)程中應(yīng)該以PVA為唯一碳源，因此表中X物質(zhì)最可能為聚乙烯醇（或PVA）。（2）若圖中污水取樣是從聚乙烯醇（PVA）污染的水體中采集，通過(guò)圖示過(guò)程分離出分解聚乙烯醇（PVA）的菌落，則進(jìn)行的過(guò)程1為選擇培養(yǎng)，其作用是增加PVA分解菌的數(shù)量。（3）要測(cè)定土壤稀釋液中微生物的數(shù)目，可在顯微鏡下用血細(xì)胞（血球）計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)。若將100 mL含有PVA分解菌的土壤樣品溶液稀釋104倍后，取0.1 mL稀釋液均勻涂布在選擇培養(yǎng)基表面，測(cè)得菌落數(shù)的平均值為160個(gè)，空白對(duì)照組平板上未出現(xiàn)菌落（說(shuō)明制備的平板合格，且實(shí)驗(yàn)操作可靠），則100 mL原菌液中有PVA分解菌＝160÷0.1×104×100＝1.6×109個(gè)；這種接種方法為稀釋涂布平板法，由于在涂布過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌聚集在一起只能產(chǎn)生一個(gè)菌落的情況，則會(huì)導(dǎo)致該方法的測(cè)量值與實(shí)際值相比一般會(huì)偏小的情況。（4）根據(jù)題意可知，“PVA與碘作用時(shí)能產(chǎn)生藍(lán)綠色復(fù)合物，當(dāng)PVA被分解時(shí)藍(lán)綠色復(fù)合物消失，形成白色透明斑”，因此要鑒定分離出的細(xì)菌是否為PVA分解菌，培養(yǎng)PVA分解菌的培養(yǎng)基中還需要加入碘與PVA作用形成藍(lán)綠色復(fù)合物，用于鑒別PVA分解菌，隨著PVA被降解，白色透明斑出現(xiàn)，因此，若菌落周圍出現(xiàn)白色透明斑，則該菌為PVA分解菌。
23．答案：（1）限制性內(nèi)切核酸酶、DNA連接酶 顯微注射 體外培養(yǎng) 胚胎移植 （2）性別、年齡 （3）相同 兩種上皮細(xì)胞都是體細(xì)胞，且來(lái)源于同一個(gè)受精卵 （4）體外受精、胚胎移植
解析：（1）在基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程中需要使用限制性內(nèi)切核酸酶切割W基因和載體，同時(shí)需要DNA連接酶進(jìn)行連接。將重組表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵常用顯微注射法，從受精卵到早期胚胎需要進(jìn)行體外培養(yǎng)，將獲得的早期胚胎通過(guò)胚胎移植移至代孕母體體內(nèi)。（2）乳腺生物反應(yīng)器和膀胱生物反應(yīng)器都屬于動(dòng)物反應(yīng)器。前者受動(dòng)物性別（只能是雌性）和年齡（哺乳期）限制，后者不受動(dòng)物性別和年齡限制。（3）題述兩種上皮細(xì)胞都是體細(xì)胞，且來(lái)源于同一個(gè)受精卵，所以其細(xì)胞核中染色體DNA所含遺傳信息相同。（4）胚胎工程中所用到的技術(shù)主要有體外受精、胚胎移植。
24．答案：（1）檢測(cè)目的基因是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞 雙分子層中 （2）蛋白質(zhì)外殼和含N蛋白胞外段基因的核酸 （3）胰蛋白酶或膠原蛋白 CO2培養(yǎng)箱 （4）克隆化 抗原—抗體雜交 細(xì)胞培養(yǎng)液 （5）抗體—藥物偶聯(lián)物（ADC）
解析：（1）構(gòu)建重組慢病毒質(zhì)粒時(shí)，為檢測(cè)目的基因是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞，常選用氨芐青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因。重組慢病毒質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒導(dǎo)入病毒包裝細(xì)胞需要依賴膜融合，故質(zhì)粒被包在脂質(zhì)體雙分子層中（即磷脂雙分子層）。（2）由于目的基因?yàn)镹蛋白胞外段基因，在包裝細(xì)胞內(nèi)組裝出由蛋白質(zhì)外殼和含有N蛋白胞外段基因的核酸組成的慢病毒，用慢病毒感染海拉細(xì)胞進(jìn)而表達(dá)并分離、純化N蛋白胞外段。（3）進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，需要取小鼠脾組織用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，制成細(xì)胞懸液，置于含有95%空氣和5%的CO2混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（4）用選擇性培養(yǎng)基對(duì)融合后的細(xì)胞進(jìn)行篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，將其接種到96孔板，進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)。用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測(cè)每孔中的抗體，篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，經(jīng)體外擴(kuò)大培養(yǎng)，收集細(xì)胞培養(yǎng)液，提取單克隆抗體。（5）利用N蛋白胞外段抗體與藥物結(jié)合，形成抗體—藥物偶聯(lián)物ADC，實(shí)現(xiàn)特異性治療。
25．答案：（1）逆轉(zhuǎn)錄 3′－CGGAGA－5′ Taq 酶 （2）啟動(dòng)子 RNA 聚合酶的識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)融合基因轉(zhuǎn)錄出mRNA （3）不含有 （4）其感染HCV后通過(guò)免疫反應(yīng)已將HCV清除，但體內(nèi)存在抗HCV抗體
解析：（1） 以RNA為模板合成cDNA的過(guò)程需要逆轉(zhuǎn)錄酶，拼接需要DNA 連接酶；PCR過(guò)程中DNA合成的方向只能從5′到3′，根據(jù)融合基因的序列，兩種引物分別為5′－AACTAT－3′和3′－CGGAGA－5′，PCR過(guò)程中需要的酶為T(mén)aq 酶。（2）基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。其中箭頭所示為啟動(dòng)子，其作用是RNA 聚合酶的識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)融合基因轉(zhuǎn)錄出 mRNA。（3）感受態(tài)細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，非感受態(tài)受體大腸桿菌不能吸收周圍環(huán)境中DNA分子，因此細(xì)胞內(nèi)不含有融合基因表達(dá)載體，即不含有硫酸卡那霉素抗性基因。（4）某人體內(nèi)HCV抗體檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性，但進(jìn)行HCV核酸檢測(cè)時(shí)結(jié)果呈陰性，原因是其感染HCV后通過(guò)免疫反應(yīng)已將HCV清除，但體內(nèi)存在抗HCV的抗體。
成分
MgSO4
蛋白質(zhì)
X物質(zhì)
水
瓊脂
用量
5 g
10 g
7 g
1 000 mL
20 g

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