基因工程
細(xì)胞工程
發(fā)酵工程
選擇題訓(xùn)練：
1．現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展越來(lái)越快，越來(lái)越貼近人們的生活。如轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物、胚胎干細(xì)胞的利用、單克隆抗體、試管嬰兒技術(shù)、生態(tài)工程等。根據(jù)所學(xué)知識(shí)，完成下列問(wèn)題：
(1)在基因工程中，為了減少隨花粉傳播而造成的基因污染，可以將 基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中，該基因的遺傳方式 （填“遵循”或“不遵循”）孟德?tīng)栠z傳定律。
(2)科研人員利用經(jīng)過(guò)埃博拉病毒免疫后的小鼠B淋巴細(xì)胞與小鼠的骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合形成雜交瘤細(xì)胞，對(duì)上述雜交瘤細(xì)胞還需進(jìn)行 和 。經(jīng)篩選后就可以獲得純凈的單一品種抗體，可以用此抗體與藥物制成“生物導(dǎo)彈”抗擊埃博拉病毒。
(3)農(nóng)桿菌能在自然狀態(tài)下感染雙子葉植物和裸子植物，當(dāng)植物受到損傷時(shí)，其受傷部位的細(xì)胞會(huì)分泌大量的 ，從而使農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞。農(nóng)桿菌進(jìn)入細(xì)胞后，可將Ti質(zhì)粒上的 轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞中，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。
(4)胚胎干細(xì)胞是由早期的胚胎或原始性腺中分離出來(lái)的一類細(xì)胞，所以胚胎干細(xì)胞應(yīng)該來(lái)源于囊胚的 ，胚胎干細(xì)胞在功能上的特點(diǎn)是 。
2．科學(xué)家通過(guò)誘導(dǎo)黑鼠體細(xì)胞去分化獲得誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞（iPS），繼而利用iPS細(xì)胞培育出與黑鼠遺傳特性相同的克隆鼠，流程如下圖所示。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）iPS細(xì)胞與小鼠內(nèi)細(xì)胞團(tuán)一樣，都具有 。在飼養(yǎng)層細(xì)胞上培養(yǎng)，iPS細(xì)胞可以保持 的狀態(tài)，在培養(yǎng)液中加入 ，iPS細(xì)胞可以被誘導(dǎo)定向分化。
（2）克隆鼠的體色為 ，上述技術(shù)流程中與克隆鼠的性別一定相同的是 。
（3）圖示過(guò)程中為達(dá)到無(wú)菌、無(wú)毒的培養(yǎng)條件，除了要對(duì)培養(yǎng)液和培養(yǎng)器具進(jìn)行消毒外，還要 和 。
3．轉(zhuǎn)基因動(dòng)物是指將特定的外源基因?qū)雱?dòng)物受精卵或胚胎，使之穩(wěn)定整合于動(dòng)物的染色體基因組并能遺傳給后代的一類動(dòng)物。目前培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的方法主要有顯微注射法、反轉(zhuǎn)錄病毒感染法等。請(qǐng)回答：
（1）通過(guò)顯微注射法培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物是目前最常用且成功率較高的方法，大致過(guò)程包括超數(shù)排卵、受精、顯微注射、胚胎移植和目的基因的表達(dá)與檢測(cè)。超數(shù)排卵階段常用促性腺激素對(duì) 進(jìn)行處理以獲得 ；顯微注射前要進(jìn)行沖卵，沖卵是將早期胚胎從 沖出的操作，沖卵的生理基礎(chǔ)是 。
（2）培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)，通常選擇 作為受體細(xì)胞，胚胎移植前，要對(duì)母畜進(jìn)行同期發(fā)情處理，其目的是 。
（3）目前，科學(xué)家已通過(guò)顯微注射法培育出“批量生產(chǎn)藥用蛋白”的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，試寫出培育該轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的簡(jiǎn)要過(guò)程 。
4．目前，構(gòu)成蛋白質(zhì)的天然氨基酸都可以通過(guò)微生物發(fā)酵方法來(lái)生產(chǎn)，僅我國(guó)每年生產(chǎn)的谷氨酸（味精是谷氨酸鈉）就遠(yuǎn)超200萬(wàn)噸。生產(chǎn)谷氨酸所用菌種多是谷氨酸棒桿菌。回答下列問(wèn)題。
（1）各種天然氨基酸在結(jié)構(gòu)上的共性部分是 （用化學(xué)結(jié)構(gòu)式表示）。
（2）高產(chǎn)谷氨酸棒桿菌菌種來(lái)自土壤，為純化菌種常用接種環(huán)通過(guò) 法接種至固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，為防止雜菌污染，操作應(yīng)在 進(jìn)行。
（3）培養(yǎng)基中的碳源可為微生物的生命活動(dòng)提供 ，氮源可為微生物在體內(nèi) 提供氮元素。
（4）若需對(duì)培養(yǎng)過(guò)程中的微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)，常用的兩種方法是 。
5．請(qǐng)回答微生物的培養(yǎng)、分離、計(jì)數(shù)和鑒定等方面的問(wèn)題：
（1）培養(yǎng)不同微生物所用的培養(yǎng)基不同，配制培養(yǎng)基的原則是 ；調(diào)pH值應(yīng)在培養(yǎng)基滅菌前，其原因是 。
（2）在牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上純化大腸桿菌時(shí)，常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，二者依次通過(guò) 措施來(lái)實(shí)現(xiàn)分離純化的。
（3）對(duì)微生物的計(jì)數(shù)除用顯微鏡直接計(jì)數(shù)外，還可以用 方法統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)目，該方法每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，其好處是 。
（4）利用菌落特征能夠鑒別不同種類的微生物，其原理是 。
6．生活中常用的塑料袋，其主要成分是聚乙烯，不溶于水，被腐蝕會(huì)形成微塑料。為了減少微塑料的產(chǎn)生，科學(xué)家從嚙噬米袋的蠟蟲腸道內(nèi)分離出能降解聚乙烯的芽孢桿菌YP1，實(shí)驗(yàn)流程如下。回答下列問(wèn)題：
（1）將蠟蟲腸道液進(jìn)行選擇培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基應(yīng)以 為唯一的碳源。選擇培養(yǎng)基除可以篩選出目的菌外，還可以 。
（2）鑒別培養(yǎng)基中加入白色聚乙烯粉末后，所倒的平板渾濁不透明，培養(yǎng)一段時(shí)間后，應(yīng)該在培養(yǎng)基上具有 的菌落中挑選目的菌種。將挑選到的目的菌種接種到適宜的培養(yǎng)液中，通入無(wú)菌O2并在適宜條件培養(yǎng)10天后，檢測(cè)到聚乙烯的降解率幾乎為0，最可能的原因是 。
（3）芽孢桿菌YP1能降解聚乙烯，是因?yàn)閅P1能夠產(chǎn)生降解聚乙烯的漆酶、過(guò)氧化物酶和單加氧酶等，若要比較不同酶的活性大小，在相同條件下可通過(guò)比較 來(lái)衡量。若將獲得的聚乙烯降解酶固定化，就可以降低降解聚乙烯的生產(chǎn)成本，原因是 。
（4）若要利用微生物來(lái)處理塑料垃圾，在確定處理塑料垃圾的方案時(shí)，通常需要考慮的因素有 （答出3點(diǎn)）。
7．水稻（2n=24）為二倍體雌雄同株。生殖生長(zhǎng)期早衰嚴(yán)重影響水稻產(chǎn)品與質(zhì)量，挖掘早衰相關(guān)基因?qū)ζ贩N改良具有重要意義。研究人員利用甲基磺酸乙酯（EMS）對(duì)水稻進(jìn)行處理，得到由10號(hào)染色體一對(duì)隱性基因控制的早衰突變體甲。
(1)獲得該突變體采用的育種方式為 ，用EMS處理后還需要多代 后才能獲得性狀能穩(wěn)定遺傳的甲。
(2)甲突變基因中從ATG開始第147位和第287位兩個(gè)堿基位點(diǎn)發(fā)生改變，但翻譯產(chǎn)物中氨基酸序列只有96位亮氨酸變?yōu)楣劝滨０?，可以確定該基因內(nèi)部非模板鏈發(fā)生的變化為 ，另一位點(diǎn)未發(fā)生氨基酸改變的原因可能是 。（密碼子：亮氨酸為CUA、CUG，谷氨酰胺為CAA、CAG，起始密碼子為AUG）
(3)吉林大學(xué)和吉林農(nóng)科院研究人員獲得另一早衰突變體乙，控制該性狀的基因也為常染色體隱性基因?，F(xiàn)欲通過(guò)雜交實(shí)驗(yàn)對(duì)乙突變體基因進(jìn)行定位（不考慮實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的基因突變、染色體變異和交叉互換），具體研究問(wèn)題如下：
①乙突變基因與甲突變基因是否互為等位基因？
②二者若為非等位基因，乙突變基因是否位于10號(hào)染色體上？
8．I.植物細(xì)胞工程技術(shù)被廣泛應(yīng)用于作物新品種的培育，常見(jiàn)的有單倍體育種和突變體的利用。
(1)單倍體育種是通過(guò) 獲得的單倍體植株。
(2)在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，由于細(xì)胞一直處于 狀態(tài)，因此容易受到培養(yǎng)條件和外界壓力的作用而產(chǎn)生突變，可以為培育新品種提供原材料，為了防止突變體后代發(fā)生性狀分離，通常選擇 的方式繁殖后代，若要生產(chǎn)人工種子，需在 上包上人工種皮。
II. 臍帶血是胎兒娩出、臍帶結(jié)扎并離斷后殘留在胎盤和臍帶中的血液，臍帶血中含有的造血干細(xì)胞，可以代替骨髓進(jìn)行移植，用人體自己的造血干細(xì)胞進(jìn)行移植可以避免，
(3) 體外培養(yǎng)造血干細(xì)胞的培養(yǎng)液成分中加入一定量的 來(lái)防止雜菌污染，保存造血干細(xì)胞需要在 的條件下，從而降低 。
9．泡菜是我國(guó)傳統(tǒng)食品之一，泡菜中的亞硝酸鹽積累是人們普遍關(guān)注的問(wèn)題，亞硝酸鹽的積累與硝酸鹽還原菌將蔬菜中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽有關(guān)。請(qǐng)回答下列相關(guān)問(wèn)題：
（1）在制作泡菜的過(guò)程中要加入煮沸并冷卻的鹽水，煮沸和冷卻的目的分別是 。
（2）泡菜制作時(shí)通常會(huì)往壇中加入“陳泡菜水”，目的是 。
（3）測(cè)定亞硝酸鹽的原理是：在鹽酸酸化的條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生 反應(yīng)，與 結(jié)合形成玫瑰紅色染料。將顯色反應(yīng)后的樣品與已知濃度的 進(jìn)行目測(cè)比較，可以大致估算出泡菜中亞硝酸鹽的含量。
（4）某研究小組在不同NaCl濃度條件下，發(fā)酵相同時(shí)間后，測(cè)定了泡菜中的亞硝酸鹽含量，發(fā)現(xiàn)隨NaCl濃度的增加，亞硝酸鹽含量逐漸下降，其下降的原因主要是 。根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果并結(jié)合日常生活中的具體情況，在泡菜制作過(guò)程中，NaCl的用量既要考慮 ，又要考慮 。
10．德陽(yáng)中江盛產(chǎn)蜜柚，汁多肉脆，口感香甜。但是近年各地大面積種植該類產(chǎn)品，導(dǎo)致大量果品積壓。為了解決果農(nóng)的燃眉之急，有一定生物學(xué)知識(shí)的村干部想到了多渠道開發(fā)產(chǎn)品的方法，幫助果農(nóng)辦起了加工廠。請(qǐng)回答下列相關(guān)問(wèn)題；
（1）利用蜜柚果肉可以生產(chǎn)果汁，為提高出汁率和澄清度，可向蜜柚汁中加入果膠酶將果膠分解為 ；生產(chǎn)果汁剩下的柚皮可用 法提取精油，作為工業(yè)原料。
（2）在利用蜜柚汁制作果酒的過(guò)程中，為了提高酵母菌的發(fā)酵效率，工作人員對(duì)酵母菌進(jìn)行了固定化，過(guò)程如下：酵母細(xì)胞活化→①→配制海藻酸鈉溶液→海藻酸鈉溶液與酵母細(xì)胞混合→固定化酵母細(xì)胞。
上述流程中，①為配制 溶液；溶化海藻酸鈉時(shí)，要用 加熱，直至其完全溶化。
（3）上述固定酵母細(xì)胞的方法稱為法 ，而制備固定化淀粉酶則不用此法進(jìn)行固定，原因是
（4）在利用蜜抽果酒制作果醋的過(guò)程中，一工作人員又向發(fā)酵裝置中添加一定量的蜜柚汁（不影響菌種的活性），檢測(cè)發(fā)現(xiàn)乙醇的利用速率迅速下降，原因是 。
11．通過(guò)胚胎工程培育良種奶牛，對(duì)增強(qiáng)我國(guó)畜牧產(chǎn)業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力十分重要。下圖是利用不同技術(shù)培育良種奶牛的過(guò)程。回答下列問(wèn)題：
(1)自然條件下，公牛的精子必須在母牛的生殖道發(fā)生相應(yīng)的生理變化后，才能獲得受精能力，這一生理現(xiàn)象稱為 。經(jīng)過(guò)a過(guò)程形成受精卵，經(jīng)歷的兩個(gè)階段是 。
(2)受精卵經(jīng)過(guò)b過(guò)程后，若采用c技術(shù)培育，則一般選用發(fā)育到 階段的胚胎進(jìn)行處理，處理時(shí)應(yīng)注意將[③] 均等分割，以免影響 。
(3)d過(guò)程稱為 ，此過(guò)程胚胎在母牛子宮內(nèi)存活的生理基礎(chǔ)是 。
(4)圖示不同操作流程培育出的良種奶牛中，屬于“試管?！钡氖? 牛（選填“A、B”或“C”）。
12．植物乳桿菌屬于乳酸菌的一種，在繁殖過(guò)程中可分泌一類具有抑菌活性的蛋白質(zhì)，此種蛋白質(zhì)稱為細(xì)菌素，可作為良好的食品防腐劑?，F(xiàn)有兩種較高產(chǎn)細(xì)菌素的菌株，菌株A產(chǎn)細(xì)菌素能力強(qiáng)于菌株B，但菌株A細(xì)胞中的細(xì)菌素合成途徑中缺少兩個(gè)重要的調(diào)控基因plnC和plnD，而菌株B細(xì)胞中具有這兩個(gè)基因。研究人員按下圖所示流程對(duì)菌株A和B進(jìn)行改良，獲得了更高產(chǎn)細(xì)菌素的新型菌株C。
（1）從細(xì)胞結(jié)構(gòu)的角度分析，植物乳桿菌屬于 生物，其進(jìn)行合成細(xì)菌素等生命活動(dòng)所需的能量由 （有氧/無(wú)氧）呼吸提供。在進(jìn)行融合前，需分別用溶菌酶去除A、B兩種菌株的 ，制備成原生質(zhì)體，再利用PEG進(jìn)行誘導(dǎo)融合。
（2）為鑒定融合菌株是否為A、B融合菌株，需要進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)。以下檢測(cè)方法和結(jié)果中，最能說(shuō)明融合菌株是A、B融合菌株的是
A．在電子顯微鏡下觀察并測(cè)量菌體長(zhǎng)度，發(fā)現(xiàn)融合菌株明顯長(zhǎng)于菌株A或菌株B
B．提取融合菌株的基因組DNA進(jìn)行PCR檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其中已含有基因plnC和plnD
C．提取融合菌株的mRNA進(jìn)行核酸分子雜交，發(fā)現(xiàn)其已轉(zhuǎn)錄基因plnC和plnD的mRNA
D．提取融合菌株的蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原-抗體檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其中含有菌株A、B的特征蛋白
（3）實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌對(duì)檸檬色葡萄球菌的抑菌效果最好，研究人員選擇檸檬色葡萄球菌作為指示菌進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，來(lái)比較菌株A、B、C的產(chǎn)細(xì)菌素能力。實(shí)驗(yàn)步驟如下：
①在平板培養(yǎng)基中涂布檸檬色葡萄球菌菌液；
②分別在平板的不同位置接種蘸取A、B、C菌液的濾紙片作為實(shí)驗(yàn)組：對(duì)照組的處理是 ；
③培養(yǎng)一段時(shí)間后，觀察并比較抑菌圈大小。預(yù)期結(jié)果為： 。
（4）抗生素是由微生物產(chǎn)生的具有較強(qiáng)抑菌殺菌效果的小分子有機(jī)物。請(qǐng)結(jié)合所學(xué)知識(shí)及相關(guān)信息，分析將細(xì)菌素而非抗生素用作食品防腐劑的優(yōu)勢(shì) 。
13．腸道微生物對(duì)宿主健康具有重要影響，但目前缺乏對(duì)特定菌株進(jìn)行基因編輯的有效手段。科研人員嘗試使用M13噬菌體作為載體，對(duì)大腸桿菌進(jìn)行基因編輯。
(1)M13噬菌體與T2噬菌體相似、能夠侵染大腸桿菌，其蛋白質(zhì)外殼留在菌體外，頭部的 注入菌體內(nèi)，指導(dǎo)子代噬菌體的復(fù)制增殖。與T2噬菌體不同，被M13噬菌體侵染的大腸桿菌不發(fā)生裂解。
(2)科研人員將綠色熒光蛋白基因特異性序列（sgfp）、Cas酶基因與利用特定方法得到的M13噬菌體的環(huán)狀DNA進(jìn)行重組，構(gòu)建重組基因編輯質(zhì)粒（pCG）、如圖1。
①構(gòu)建PCG需要用到的工具酶有 。
②以PCG的綠色熒光蛋白基因特異性序列（sgfp）經(jīng) 過(guò)程形成的RNA，會(huì)靶向結(jié)合綠色熒光蛋白基因，從而使Cas酶能夠切割綠色熒光蛋白基因。
(3)科研人員將綠色熒光蛋白基因和紅色熒光蛋白基因?qū)氪竽c桿菌，獲得GS菌株。先用添加GS菌株的飼料喂養(yǎng)小鼠，一段時(shí)間后，將小鼠分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。其中，實(shí)驗(yàn)組小鼠用添加含 的M13噬菌體和 的飼料喂養(yǎng)，以篩選獲得腸道微生物被基因編輯的小鼠。本實(shí)驗(yàn)對(duì)照組使用的質(zhì)粒應(yīng)當(dāng)包括圖1中的 。
a、Cm+ b、sgfp c、Ori d、Cas
(4)為確認(rèn)M13噬菌體作為載體對(duì)大腸桿菌進(jìn)行基因編輯的可行性和特異性，科研人員檢測(cè)腸道微生物的變化，結(jié)果如圖2。
①圖2中，標(biāo)號(hào)為a、c的區(qū)域分代表含有紅色熒光的微生物和無(wú)熒光的微生物，b區(qū)域代表含有 熒光的微生物。
②圖3-1為實(shí)驗(yàn)組第0天小鼠腸道微生物的熒光情況。請(qǐng)?jiān)诖痤}紙的圖3-2中標(biāo)注該組小鼠第14天時(shí)腸道微生物的熒光區(qū)域編號(hào)。
③圖2表明，實(shí)驗(yàn)中M13噬菌體能 。
14．特異性重組的Cre/lxP敲除系統(tǒng)是首先利用同源重組將基因組上的靶基因替換為兩端帶有重組位點(diǎn)lxP的karR基因，然后由重組酶Cre識(shí)別lxP位點(diǎn)并發(fā)生重組反應(yīng)，去除基因組上的karR基因，進(jìn)一步利用質(zhì)粒的溫敏特性將其消除，從而實(shí)現(xiàn)靶基因的敲除。下圖是研究人員利用Cre/lxP敲除系統(tǒng)敲除谷氨酸棒狀桿菌argR基因（精氨酸代謝的調(diào)控因子），獲得高產(chǎn)精氨酸菌株的過(guò)程，其中kanR是卡那霉素抗性基因，cat是氯霉素抗性基因，HindⅢ、BanHⅠ是限制酶。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：
(1)①過(guò)程的原料是 ，所需的酶是 。
(2)下列引物1、引物2用于擴(kuò)增argR基因上游序列，引物3、引物4用于擴(kuò)增argR基因下游序列，下劃線序列是相關(guān)限制酶識(shí)別序列，則HindⅢ、BamHⅠ的識(shí)別序列分別是 、 。
引物1：5'-GTCGACGGTATCGATAAGCTTAGGACTCAAACTTATGACTTCACAACCA-3'
引物2：5-CGCCCTATAGTGAGTCGTATTGGGATTTAAGTTTTCCGGTGTTGACG-3'
引物3：5'-CTTTAGTGAGGGTTAATTGCGCGTTAATCGCTTGTTAATGCAGGCA-3'
引物4：5'-CGCTCTAGAACTAGTGGATCCCAAAGCCTCGTGAGCCTTAATC-3'
(3)②過(guò)程（融合PCR）是采用具有互補(bǔ)末端引物，形成具有重疊鏈的PCR引物，通過(guò)PCR引物重疊鏈的延伸，從而將不同來(lái)源的DNA片段連接起來(lái)。下列引物5、引物6用于擴(kuò)增兩端含lxP的karR片段，引物5、引物6可分別與 、 （引物1、引物2、引物3、引物4）重疊從而實(shí)現(xiàn)不同DNA片段的連接。
引物5：5'-CGTCAACACCGGAAAACTTAAATCCCAATACGACTCACTATAGGGCG-3'
引物6：5-TGCCTGCATTAACAAGCGATTAACGCGCAATTAACCCTCACTAAAG-3'
(4)④過(guò)程將質(zhì)粒3導(dǎo)入 態(tài)谷氨酸棒狀桿菌，⑤過(guò)程在同源重組的作用下谷氨酸棒狀桿菌株的argR基因被替換為 片段。
(5)⑥過(guò)程導(dǎo)入質(zhì)粒4的目的是 。
(6)由于質(zhì)粒4的溫敏特性，⑦過(guò)程先在37℃條件下培養(yǎng)消除質(zhì)粒4，然后用影印接種（A、B、C三個(gè)培養(yǎng)基中接種菌種的位置相同）培養(yǎng)驗(yàn)證其抗性，其結(jié)果如下圖，則 是目的基因被敲除的目的菌株。
15．回答下列有關(guān)基因表達(dá)和基因工程問(wèn)題。
（1）圖1表示含有目的基因D的DNA片段長(zhǎng)度（bp即堿基對(duì)）和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列?，F(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MbⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。下列分析中正確的是
A．若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，能產(chǎn)生2個(gè)平滑末端
B．若用限制酶MspⅠ酶切含目的基因的DNA片段，則獲得的最長(zhǎng)的DNA片段長(zhǎng)度為788bp
C．若需將目的基因D導(dǎo)入圖2中的質(zhì)粒，應(yīng)選擇限制酶是BamHⅠ
D．為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，培養(yǎng)基上需分別添加抗生素B和抗生素A
（2）假設(shè)某基因的右側(cè)序列是AAGCTTGAC∥TTCGAACTG，應(yīng)選擇下表中的 酶（填數(shù)字序號(hào)）作為內(nèi)切酶。
（3）請(qǐng)?jiān)趫D3方框內(nèi)畫出上題酶切割后產(chǎn)生的兩個(gè)末端的堿基序列。
圖4甲是某目的基因（4.0kb，1kb=1000對(duì)堿基）與大腸桿菌pUC18質(zhì)粒（2.7kb）重組的示意圖。圖中Ap′是抗氨芐青霉素基因，lacZ是顯色基因，其上的EcRI識(shí)別位點(diǎn)位于目的基因插入位點(diǎn)的右側(cè)，其控制合成的物質(zhì)能使菌落呈現(xiàn)藍(lán)色。（圖乙中深色圓點(diǎn)即為藍(lán)色菌落）
（4）圖乙的培養(yǎng)基中含有氨芐青霉素，請(qǐng)判斷圖乙中所出現(xiàn)的白色和藍(lán)色兩種菌落中，何種會(huì)含有重組質(zhì)粒？ 。
（5）現(xiàn)用EcRI酶切質(zhì)粒，酶切后進(jìn)行電泳觀察。有人說(shuō)，只有出現(xiàn)長(zhǎng)度為3.0kb和3.7kb的片段，才可以判斷該質(zhì)粒已與目的基因重組成功（重組質(zhì)粒上目的基因的插入位點(diǎn)與EcRI的識(shí)別位之間的堿基對(duì)忽略不計(jì)）。你如何評(píng)價(jià)之？ 。
實(shí)驗(yàn)思路
預(yù)測(cè)結(jié)果
結(jié)論
將突變體甲和突變體乙雜交，觀察F1的表現(xiàn)型
若F1
甲乙突變基因互為等位基因
若F1
甲乙突變基因是非等位基因
實(shí)驗(yàn)思路
預(yù)測(cè)結(jié)果
結(jié)論
將上述F1自交,統(tǒng)計(jì)F2的表現(xiàn)型及比例
若F2
乙突變基因位于10號(hào)染色體上
若F2
乙突變基因不位于10號(hào)染色體上

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