(新高考)2023年高考生物一輪復(fù)習(xí)講義第10單元第2課時微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用(含解析)

這是一份(新高考)2023年高考生物一輪復(fù)習(xí)講義第10單元第2課時微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用(含解析)，共22頁。試卷主要包含了7×107個/L，0 g等內(nèi)容，歡迎下載使用。
考點一 微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用
1．培養(yǎng)基的配制
(1)概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。
(2)用途：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。
(3)類型：按物理狀態(tài)分類
(4)成分
2．無菌技術(shù)
(1)目的：獲得純凈的培養(yǎng)物。
(2)關(guān)鍵：防止雜菌污染。
(3)區(qū)別：消毒與滅菌的比較
(4)其他操作
①做好消毒和滅菌工作后，要注意避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸。
②為了避免周圍環(huán)境中微生物的污染，接下來的許多操作都應(yīng)在超凈工作臺上并在酒精燈火焰附近進(jìn)行。
源于選擇性必修3 P10“相關(guān)信息”：生物消毒法是指利用生物或其代謝物除去環(huán)境中的部分微生物的方法。
3．微生物的純培養(yǎng)
(1)概念辨析
(2)酵母菌純培養(yǎng)的操作步驟
請思考以下問題：
①平板冷凝后，要將平板倒置的原因是什么？
提示 因為平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，平板倒置后，既可避免培養(yǎng)基表面的水分過快地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。
②在接種前隨機(jī)取若干個滅菌后的未接種的平板，先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格。
(3)平板劃線法操作步驟
據(jù)圖思考以下問題：
a．第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，這樣做的目的是什么？
提示 能使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。
b．操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要進(jìn)行火焰灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束時，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒的目的填寫下表：
c．平板劃線時最后一次劃線為何不能與第一次劃線相連？
提示 最后一次劃線已經(jīng)將酵母菌稀釋成單個細(xì)胞，如果與第一次劃線相連，則增加了酵母菌數(shù)目，得不到純化的效果。
考向一 培養(yǎng)基與無菌技術(shù)
1．無菌技術(shù)包括以下幾個方面的敘述，其中正確的是( )
A．紫外線照射前，適量噴灑石炭酸等消毒液，可以加強消毒效果
B．牛奶的消毒常用紫外線消毒法
C．為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落
D．在微生物接種的實驗中，用95%酒精對實驗者的雙手和超凈工作臺進(jìn)行消毒
答案 A
2．請回答下列與大腸桿菌有關(guān)的問題：
(1)下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方。
該培養(yǎng)基屬于________(填“固體”或“液體”)培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中的氮源是________________________________________________________________________。
(2)在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行________(填“消毒”或“滅菌”)；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和______________。
(3)將配制好的培養(yǎng)基分裝到試管中，加棉塞后若干支試管扎成一捆，包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入________________中滅菌，溫度為121 ℃，時間為15～30 min。滅菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力自然降到大氣壓時，將試管取出。
(4)從一支試管向另一支試管接種時應(yīng)注意，接種環(huán)要在酒精燈____________________(填“火焰的不充分燃燒層”或“火焰的充分燃燒層”)滅菌，并且待接種環(huán)________后蘸取菌種。
答案 (1)固體 蛋白胨 (2)滅菌 消毒 (3)高壓蒸汽滅菌鍋 (4)火焰的充分燃燒層 冷卻
考向二 微生物的純培養(yǎng)
3．如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序為1→2→3→4→5，下列說法正確的是( )
A．操作前要將接種環(huán)用酒精消毒
B．劃線操作須在酒精燈火焰附近進(jìn)行
C．只有在5區(qū)才可以得到所需菌落
D．在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都不需要對接種環(huán)滅菌
答案 B
解析 在每次劃線前后都要對接種環(huán)進(jìn)行滅菌，接種環(huán)的滅菌方法應(yīng)是在酒精燈火焰上灼燒，不能用酒精消毒；在5個區(qū)域中，只要有單個活細(xì)菌，通過培養(yǎng)即可獲得所需菌落；每次劃線前都要灼燒接種環(huán)，目的是殺死接種環(huán)上原有的微生物(第一次劃線前)和上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使每次劃線的菌種都來自上一次劃線的末端，劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)以防止污染環(huán)境和感染操作者。
4．(2022·山西高三適應(yīng)考試)自然界里有多種微生物，將其進(jìn)行合理的篩選、培養(yǎng)和應(yīng)用，能給醫(yī)藥和化工等生產(chǎn)領(lǐng)域帶來巨大經(jīng)濟(jì)效益?；卮鹣铝袉栴}：
(1)對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時，多采取____________法，而對接種環(huán)或涂布器滅菌時則用________法，若要將微生物采用平板劃線法進(jìn)行分離操作，在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)進(jìn)行了5次劃線，則需要對接種環(huán)灼燒________次。平板劃線在做第二次及其以后的劃線操作時，要從上次劃線的________開始劃線，最后一次劃的線不能與第一次劃的線________。
(2)將接種后的固體培養(yǎng)基和一個未接種的固體培養(yǎng)基放入恒溫箱中________培養(yǎng)，以減少培養(yǎng)基中水分的揮發(fā)。其中，培養(yǎng)未接種的固體培養(yǎng)基是為了__________________________
________________________________________________________________________。
答案 (1)高壓蒸汽滅菌(濕熱滅菌) 灼燒滅菌 6 末端 相連 (2)倒置 作為對照組，檢驗培養(yǎng)基是否被雜菌污染
考點二 微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)
1．區(qū)分選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基
2．微生物的選擇培養(yǎng)和數(shù)量測定
(1)稀釋涂布平板法步驟
①系列稀釋操作：該操作常用在將細(xì)胞接種到培養(yǎng)基之前，通過液體稀釋的方法分散細(xì)胞，隨著稀釋程度的增大，單位體積中的微生物細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞得以分散。
操作步驟：
②涂布平板操作步驟
(2)微生物的數(shù)量測定方法
①顯微鏡直接計數(shù)法
②間接計數(shù)法——活菌計數(shù)法(即稀釋涂布平板法)
原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。
根據(jù)圖示問答以下問題：
Ⅰ.為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)。
Ⅱ.為什么用此種方法統(tǒng)計的菌落數(shù)目往往比活菌的實際數(shù)目低？
提示 因為當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。
Ⅲ.某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為234個(涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1 mL)，那么稀釋倍數(shù)為106的試管中細(xì)菌的濃度是2.34×103個/mL，稀釋倍數(shù)為10的錐形瓶中細(xì)菌的濃度為2.34×108個/mL，所以每克樣品中的細(xì)菌數(shù)是2.34×109個。
3．土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)的實驗操作
(1)實驗原理
(2)實驗流程
(3)實驗結(jié)果分析與評價
選擇性必修3 P19“探究·實踐”：本活動初步篩選了能分解尿素的細(xì)菌，請進(jìn)一步借助于生物化學(xué)的方法來鑒定所分離的菌種：分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶可以將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強，在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該細(xì)菌能夠分解尿素。
考向一 微生物的選擇培養(yǎng)
5．(2021·江蘇1月適應(yīng)性考試，14)稀釋涂布平板法是分離菌種常用的方法，下列相關(guān)敘述不恰當(dāng)?shù)氖? )
A．固體培養(yǎng)基滅菌后，應(yīng)冷卻至50 ℃左右時倒平板
B．倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影響菌的生長
C．稀釋涂布平板分離到的單菌落需進(jìn)一步劃線純化
D．稀釋涂布平板法既可用于微生物的分離，也可用于微生物的計數(shù)
答案 B
解析 培養(yǎng)基滅菌后需要冷卻至50°C左右時才能用來倒平板，避免溫度過高，A正確；倒好的平板需要放置一段時間，用以觀察培養(yǎng)基是否被雜菌污染，B錯誤；稀釋涂布平板法分離的單菌落需要用平板劃線法進(jìn)行純化培養(yǎng)，C正確；稀釋涂布平板法可以計數(shù)，也可觀察菌落特征進(jìn)行菌種分離，D正確。
6．營養(yǎng)缺陷型菌株是野生型菌株經(jīng)過人工誘變或自發(fā)突變失去合成某種成長因子的能力，只能在補充了相應(yīng)的生長因子的基本培養(yǎng)基中才能正常生長的變異菌株。某研究小組對酵母菌用紫外線照射后將其接種到甲培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基上，一段時間后將甲培養(yǎng)皿的菌落影印接種(不改變菌落位置)到乙、丙兩培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基中，進(jìn)一步培養(yǎng)得到如下圖所示結(jié)果。
下列分析正確的是( )
A．接種到甲培養(yǎng)皿采用的是平板劃線法
B．甲、丙兩培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基
C．甲培養(yǎng)皿中菌落數(shù)有可能比接種的酵母菌數(shù)少
D．甲、乙、丙三個培養(yǎng)皿都可能存在營養(yǎng)缺陷型菌落
答案 C
解析 甲培養(yǎng)皿的菌落均勻分布，接種方法應(yīng)為稀釋涂布平板法，A項錯誤；甲、丙培養(yǎng)基菌落數(shù)目多，包括野生型酵母菌菌株和某種營養(yǎng)缺陷型酵母菌菌株，乙培養(yǎng)皿沒有生長的菌株是某種營養(yǎng)缺陷型酵母菌菌株，故乙培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基，甲和丙生長了同樣的菌株，則甲和丙是加入了同種生長因子的培養(yǎng)基，B項錯誤；由于基因突變具有不定向性，接種到甲培養(yǎng)皿的酵母菌可能還有其他營養(yǎng)缺陷型菌株，且有些菌落不一定由一個酵母菌形成，所以，甲培養(yǎng)皿中菌落數(shù)有可能比接種的酵母菌數(shù)少，C項正確；乙培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基，形成的菌落只可能是野生型菌落，D項錯誤。
歸納總結(jié) 兩種純化方法的比較
考向二 微生物的分離和計數(shù)
7．(2020·全國Ⅰ，37)某種物質(zhì)S(一種含有C、H、N的有機(jī)物)難以降解，會對環(huán)境造成污染，只有某些細(xì)菌能降解S。研究人員按照下圖所示流程從淤泥中分離得到能高效降解S的細(xì)菌菌株。實驗過程中需要甲、乙兩種培養(yǎng)基，甲的組分為無機(jī)鹽、水和S，乙的組分為無機(jī)鹽、水、S和Y。
回答下列問題：
(1)實驗時，盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶通常采用__________________的方法進(jìn)行滅菌。乙培養(yǎng)基中的Y物質(zhì)是________。甲、乙培養(yǎng)基均屬于________培養(yǎng)基。
(2)實驗中初步估測搖瓶M中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為2×107個/mL，若要在每個平板上涂布100 μL稀釋后的菌液，且保證每個平板上長出的菌落數(shù)不超過200個，則至少應(yīng)將搖瓶M中的菌液稀釋________倍。
(3)在步驟⑤的篩選過程中，發(fā)現(xiàn)當(dāng)培養(yǎng)基中的S超過某一濃度時，某菌株對S的降解量反而下降，其原因可能是______________________________________________________________
______________________________________________________________(答出1點即可)。
(4)若要測定淤泥中能降解S的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)，請寫出主要實驗步驟：_____________________
________________________________________________________________________。
(5)上述實驗中，甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同，但都能為細(xì)菌的生長提供4類營養(yǎng)物質(zhì)，即________________________________________________________________。
答案 (1)高壓蒸汽滅菌(濕熱滅菌) 瓊脂 選擇 (2)104 (3)S的濃度超過某一值時會抑制菌株的生長 (4)取淤泥加入無菌水中，涂布(或稀釋涂布)到乙培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后計數(shù) (5)水、碳源、氮源和無機(jī)鹽
解析 (1)乙培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基中加入的是可使液體培養(yǎng)基凝固的瓊脂。甲、乙兩種培養(yǎng)基都是為了分離出可降解S的細(xì)菌，因此是選擇培養(yǎng)基。(2)設(shè)稀釋倍數(shù)為A,1 mL＝1 000 μL，套用計算式：A×eq \f(200個,0.1 mL)＝2×107(個/mL)，計算出A＝104。(3)在篩選降解S物質(zhì)的細(xì)菌的過程中，如果培養(yǎng)基中的S濃度過高，會導(dǎo)致細(xì)菌培養(yǎng)基的滲透壓增大，細(xì)菌失水而代謝活性降低，對S的降解量反而下降(或者S改變了培養(yǎng)基的pH，導(dǎo)致細(xì)菌代謝活性降低)。(4)測定淤泥中能降解S的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)的主要步驟是①淤泥取樣，即取少量的淤泥加入無菌水中；②用稀釋涂布平板法涂布到乙培養(yǎng)基上；③微生物培養(yǎng)與觀察計數(shù)。
重溫高考 真題演練
1．(2021·山東，14)解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸會使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色。將不能直接吸收脂肪的甲、乙兩種菌分別等量接種在醇溶青瓊脂平板上培養(yǎng)。甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色，乙菌菌落周圍不變色，下列說法錯誤的是( )
A．甲菌屬于解脂菌
B．實驗中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源
C．可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對比
D．該平板可用來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力
答案 B
解析 根據(jù)題干信息“甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色”，說明甲可以分泌脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸會使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色，因此甲菌屬于解脂菌，A項正確；乙菌菌落周圍沒有出現(xiàn)深藍(lán)色，說明乙菌不能產(chǎn)生脂肪酶，不能利用脂肪為其供能，但乙菌也可以在培養(yǎng)基上生存，說明該培養(yǎng)基不是以脂肪為唯一碳源，B項錯誤；可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對比，更加直觀，C項正確；可以利用該平板來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力，觀察指標(biāo)可以是菌落周圍深藍(lán)色圈的大小，D項正確。
2．(2021·山東，20)含硫蛋白質(zhì)在某些微生物的作用下產(chǎn)生硫化氫導(dǎo)致生活污水發(fā)臭。硫化氫可以與硫酸亞鐵銨結(jié)合形成黑色沉淀。為探究發(fā)臭水體中甲、乙菌是否產(chǎn)生硫化氫及兩種菌的運動能力，用穿刺接種的方法，分別將兩種菌接種在含有硫酸亞鐵銨的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，如圖所示。若兩種菌繁殖速度相等，下列說法錯誤的是( )
A．乙菌的運動能力比甲菌強
B．為不影響菌的運動需選用液體培養(yǎng)基
C．該實驗不能比較出兩種菌產(chǎn)生硫化氫的量
D．穿刺接種等接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染
答案 B
解析 從圖中可以看出甲菌在試管中分布范圍小于乙菌，說明了乙菌的運動能力比甲菌強，A正確；為不影響菌的運動需選用半固體培養(yǎng)基，B錯誤；該實驗可以根據(jù)黑色沉淀的多少初步比較細(xì)菌產(chǎn)生硫化氫的能力，但不能測定產(chǎn)生硫化氫的量，C正確；微生物接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染，D正確。
3．(2020·江蘇，19)為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是( )
A．倒平板后需間歇晃動，以保證表面平整
B．圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落
C．該實驗結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的
D．菌落周圍的纖維素被降解后，可被剛果紅染成紅色
答案 B
解析 溫度降低后，培養(yǎng)基易凝固，因此倒平板后要及時輕輕晃動，以保持均一性，A項錯誤；由題圖可見，隨著劃線次數(shù)增多，細(xì)菌密度減小，Ⅲ區(qū)開始出現(xiàn)單菌落，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，B項正確；菌落是由單個微生物細(xì)胞或多個同種細(xì)胞繁殖到一定程度后形成的，能得到單菌落即可以達(dá)到菌種純化的目的，C項錯誤；剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，菌落周圍的纖維素被降解后紅色消失，出現(xiàn)透明圈，D項錯誤。
4．(2020·江蘇，31)產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，科研人員開展了相關(guān)研究。請回答下列問題：
(1)常規(guī)微生物實驗中，下列物品及其滅菌方法錯誤的是________(填編號)。
(2)稱取1.0 g某土壤樣品，轉(zhuǎn)入99 mL無菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)________________后，獲得細(xì)胞密度不同的菌懸液。分別取0.1 mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上，其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后平均長出了46個酵母菌落，則該樣本中每克土壤約含酵母菌____________個。
(3)為了進(jìn)一步提高酵母菌產(chǎn)酶能力，對分離所得的菌株，采用射線輻照進(jìn)行________育種。將輻照處理后的酵母菌涂布在以________為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，按照菌落直徑大小進(jìn)行初篩，選擇直徑________的菌落，純化后獲得A、B兩突變菌株。
(4)在處理含油廢水的同時，可獲得單細(xì)胞蛋白，實現(xiàn)污染物資源化。為評價A、B兩菌株的相關(guān)性能，進(jìn)行了培養(yǎng)研究，結(jié)果如圖。據(jù)圖分析，應(yīng)選擇菌株____________進(jìn)行后續(xù)相關(guān)研究，理由是________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
答案 (1)④ (2)梯度稀釋 4.6×105(或460 000) (3)誘變 脂肪 較大 (4)B 該菌株增殖速度快，單細(xì)胞蛋白產(chǎn)量高；降解脂肪能力強，凈化效果好
解析 (2)利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計活菌數(shù)目時，需要將制備的菌懸液進(jìn)行梯度稀釋，以獲得細(xì)胞密度不同的菌懸液，一般來說，菌落數(shù)在30～300個的平板最適于計數(shù)。0.1 mL菌懸液中含有46個酵母菌落，則1 mL菌懸液中含有460個酵母菌落；1.0 g土壤樣品首先稀釋100倍，然后稀釋10倍，共稀釋了1 000倍，因此樣本中每克土壤約含酵母菌460×1 000＝4.6×105(個)。(3)采用射線輻照引起酵母菌基因突變，此種方法屬于誘變育種。檢查誘變酵母菌產(chǎn)脂肪酶的能力，需要把酵母菌接種到以脂肪為唯一碳源的培養(yǎng)基上，按照產(chǎn)生菌落直徑大小進(jìn)行初步篩選，直徑大的說明產(chǎn)酶能力強，利用的脂肪(碳源)多，直徑小的說明產(chǎn)酶能力弱，利用的脂肪(碳源)少。(4)通過分析題圖可知，相同時間內(nèi)，菌株B細(xì)胞密度大，說明該菌株增殖速度快，單細(xì)胞蛋白產(chǎn)量高；相同時間內(nèi)，菌株B利用的脂肪多，脂肪剩余量少，說明該菌株降解脂肪的能力強，凈化效果好。
一、易錯辨析
1．消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對細(xì)胞的傷害( √ )
2．倒平板就是等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒過來放置( × )
3．倒平板時，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上( × )
4．為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落( × )
5．分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低( × )
二、填空默寫
1．(選擇性必修3 P10)培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括水、無機(jī)鹽、碳源、氮源等。
2．(選擇性必修3 P10)獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染，無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還能有效避免操作者自身被微生物感染。
3．(選擇性必修3 P12)菌落是指分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體。采用平板劃線法和稀釋涂布平板法能將單個微生物分散在固體培養(yǎng)基上，之后經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由單個微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。
4．(選擇性必修3 P16)選擇培養(yǎng)基是指在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。
5．(選擇性必修3 P12)平板冷凝后，要將平板倒置的原因是平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以減少培養(yǎng)基中的水分過快地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。
6．(選擇性必修3 P13)操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。
7．(選擇性必修3 P13)在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線的原因是以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。
8．(選擇性必修3 P13)在第二次以及其后的劃線操作時，總是從上一次劃線的末端開始劃線的原因是劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。
9．(選擇性必修3 P18)當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目少。
10．(選擇性必修3 P19)檢測培養(yǎng)物中是否有雜菌污染的方法是同時培養(yǎng)滅菌后的未接種的培養(yǎng)基，觀察是否有菌落產(chǎn)生。判斷選擇培養(yǎng)基是否起到篩選作用的方法是配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照，觀察選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)是否遠(yuǎn)少于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目。
課時精練
一、選擇題
1．(2022·河北高三聯(lián)考)下表為某培養(yǎng)基的配方，下列敘述正確的是( )
A.從物理性質(zhì)看該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，從用途看該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基
B．該培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨
C．該培養(yǎng)基缺少提供無機(jī)鹽的物質(zhì)
D．該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的pH后就可以接種使用
答案 B
2．在生產(chǎn)、生活和科研實踐中，經(jīng)常通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染。下列關(guān)于消毒和滅菌的敘述，錯誤的是( )
A．牛奶的消毒常用巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法
B．水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過高錳酸鉀消毒的
C．用紫外燈對密閉教室消毒前，適量噴灑消毒液可強化消毒效果
D．培養(yǎng)基不能放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌
答案 B
解析 高錳酸鉀是強氧化劑，不宜用于自來水消毒，B項錯誤。
3．下列與微生物培養(yǎng)相關(guān)的說法錯誤的是( )
A．平板上的一個菌落一般是由一個細(xì)胞繁殖而來的
B．稀釋涂布平板法對微生物計數(shù)時，欲將1 mL樣品稀釋10倍，應(yīng)加入10 mL無菌水
C．平板劃線法接種微生物后，將平板倒置放入培養(yǎng)箱中，防止冷凝水倒流污染培養(yǎng)基
D．制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基時，應(yīng)將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯中再加水去紙
答案 B
解析 稀釋涂布平板法對微生物計數(shù)時，欲將1 mL樣品稀釋10倍，只需加入9 mL無菌水，B錯誤。
4．養(yǎng)殖池中存在的有毒物質(zhì)主要是氨和亞硝酸，這兩種物質(zhì)可由硝化細(xì)菌吸收利用。研究人員從養(yǎng)殖池池泥中分離出硝化細(xì)菌并進(jìn)行了計數(shù)。下列有關(guān)敘述正確的是( )
A．需配制一定濃度含氨鹽的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基以分離硝化細(xì)菌
B．配制的培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽滅菌后通常還需要調(diào)節(jié)pH才能使用
C．涂布時，用涂布器蘸取少量菌液并均勻地涂布在培養(yǎng)基的表面
D．使用稀釋涂布平板法統(tǒng)計得到的菌落數(shù)目往往比活菌的實際數(shù)目少
答案 D
解析 硝化細(xì)菌屬于自養(yǎng)型生物，因此培養(yǎng)硝化細(xì)菌的培養(yǎng)基中不需要加入有機(jī)碳源，則培養(yǎng)基中不能加入牛肉膏蛋白胨，A錯誤；培養(yǎng)基制備過程中應(yīng)先調(diào)節(jié)pH，再經(jīng)過高壓蒸汽滅菌，B錯誤；用滴管或移液管取少量菌液滴到培養(yǎng)皿上，然后用經(jīng)過滅菌的涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面，C錯誤；用稀釋涂布平板法統(tǒng)計菌落數(shù)目時，由于當(dāng)兩個或多個細(xì)菌連在一起時形成一個菌落，這樣統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目少，D正確。
5．培養(yǎng)基可為微生物的生長、繁殖提供必需的營養(yǎng)物質(zhì)。根據(jù)某些微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某理化因素抗性的原理設(shè)計培養(yǎng)基，可使其具有只允許特定的微生物生長，同時抑制或阻止其他微生物生長的功能。下列關(guān)于選擇培養(yǎng)基的說法，錯誤的是( )
A．培養(yǎng)基中添加伊紅—亞甲藍(lán)，統(tǒng)計飲用水中大腸桿菌的數(shù)量
B．以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，可將土壤中的尿素分解菌篩選出來
C．培養(yǎng)基中添加青霉素從而將真菌從混有細(xì)菌的培養(yǎng)基上選擇出來
D．用以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基分離出分解纖維素的微生物
答案 A
解析 大腸桿菌的代謝產(chǎn)物能與伊紅—亞甲藍(lán)發(fā)生特定的顏色反應(yīng)，使菌落呈深紫色，但該方法不能統(tǒng)計大腸桿菌數(shù)目，只能鑒別大腸桿菌的有無，A項錯誤。
6．尿酸氧化酶能分解尿酸(C5H4N4O3)，為獲取尿酸氧化酶高產(chǎn)菌株用以研制治療高尿酸血癥的酶類藥物，科研人員從海洋泥土中取樣后富集培養(yǎng)，3天后吸取培養(yǎng)液梯度稀釋到10－6，然后接種到固體培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)。挑取單菌落檢測尿酸氧化酶的酶活力(用每分鐘轉(zhuǎn)化1 μml尿酸所需要的酶量表示)，結(jié)果如下表所示。下列分析錯誤的是( )
A．從海洋泥土中取的樣品需在無菌條件下富集培養(yǎng)
B．需要在以尿酸為唯一氮源的固體培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)
C．菌株3的酶活力最高，可作為實驗所需的目的菌
D．分離培養(yǎng)時利用了平板劃線法進(jìn)行接種
答案 D
解析 為獲得純凈培養(yǎng)物，避免雜菌污染，應(yīng)進(jìn)行無菌操作，A項正確；實驗?zāi)康氖菫楂@取尿酸氧化酶高產(chǎn)菌株，故需要在以尿酸為唯一氮源的固體培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)，B項正確；酶活力用每分鐘轉(zhuǎn)化1 μml尿酸所需要的酶量表示，故所需酶量越少，說明酶活力越高，可知菌株3的酶活力最高，可作為實驗所需的目的菌，C項正確；根據(jù)題意可知，分離培養(yǎng)時利用了稀釋涂布平板法進(jìn)行接種，D項錯誤。
7．(2022·寧波市高三適應(yīng)性考試)下圖為分離以尿素為氮源的微生物的實驗結(jié)果，下列敘述正確的是( )
A．圖中采用平板劃線法接種
B．圖中①和②表示尿素培養(yǎng)基長出的菌落
C．圖中③④培養(yǎng)基中菌落生長代謝時，會釋放CO2
D．實驗結(jié)果表明，自然界中能合成脲酶的微生物比例較高
答案 C
解析 根據(jù)實驗結(jié)果可知，圖中采用的接種方法為稀釋涂布平板法，A項錯誤；由圖中①和②的菌落的特征可知，①稀釋度為10－6的菌落數(shù)明顯多于②稀釋度為10－7時的菌落數(shù)，很可能是由于雜菌污染導(dǎo)致的結(jié)果，而不是分離出以尿素為氮源的微生物，B項錯誤；③④已經(jīng)分離出單個細(xì)菌繁殖而來的尿素分解菌的菌落，尿素分解菌含有脲酶，能夠催化尿素分解成氨、二氧化碳和水，C項正確；根據(jù)實驗結(jié)果，無法判斷自然界中能合成脲酶的微生物比例，D項錯誤。
8．某同學(xué)將1 mL土壤樣液稀釋100倍，在3個平板上用稀釋涂布平板法分別接入0.1 mL稀釋液，經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為56、57和58。下列敘述錯誤的是( )
A．可得出土壤樣液中活菌數(shù)大約為5.7×107個/L
B．此方法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比實際的活菌數(shù)目低
C．一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)
D．顯微鏡直接計數(shù)法統(tǒng)計的都是稀釋液中活菌數(shù)
答案 D
解析 根據(jù)分析可知，每升樣品中的活菌數(shù)為(56＋58＋57)÷3÷0.1×1 000×100＝5.7×107(個)，A項正確；由于兩個或多個細(xì)菌形成一個菌落，所以此方法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比實際的活菌數(shù)目低，B項正確；顯微鏡直接計數(shù)法統(tǒng)計的是稀釋液中所有個體的數(shù)目，包括死菌，D項錯誤。
9．某生物興趣小組完成了“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計數(shù)”的實驗，具體操作流程如圖所示。下列相關(guān)敘述不正確的是( )
A．在酒精燈火焰附近稱取土壤并將其倒入錐形瓶中
B．梯度稀釋時可用移液管或微量移液器進(jìn)行操作
C．振蕩的目的是為了增加尿素分解菌的濃度
D．由圖示菌落計數(shù)結(jié)果可知10克土樣中的菌株數(shù)約為1.6×107個
答案 C
解析 酒精燈火焰附近存在一個無菌區(qū)，在酒精燈火焰附近稱取土壤并將其倒入錐形瓶中，可以防止稱取的土壤在倒入錐形瓶過程中，土樣被污染，A項正確；只用移液管，分度太低，而只用微量移液器，容量又太小，所以梯度稀釋時可用移液管或微量移液器進(jìn)行操作，B項正確；振蕩培養(yǎng)的目的是提高培養(yǎng)液的溶解氧的含量，使菌體充分接觸培養(yǎng)液，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，C項錯誤；由分析可知，每克土壤中的菌株數(shù)為1.6×106，即10克土樣中的菌株數(shù)約為1.6×107個，D項正確。
10．下圖為實驗室培養(yǎng)和純化酵母菌過程中的部分操作步驟，下列說法不正確的是( )
A．①步驟使用的培養(yǎng)基是已經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基
B．①②③步驟操作時需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行
C．③到④的過程中，接種環(huán)共灼燒了5次
D．④步驟操作時，不能將第1區(qū)和第5區(qū)的劃線相連
答案 C
解析 接種環(huán)在每次劃線前和接種結(jié)束后都要通過灼燒來滅菌，所以③到④的過程中5次劃線操作前都要灼燒滅菌，接種結(jié)束后還需灼燒滅菌1次，防止造成污染，由此可見，③到④的過程中共需灼燒接種環(huán)6次，C項錯誤。
11．如圖所示，自來水經(jīng)濾膜過濾后，轉(zhuǎn)移到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上，適宜條件下培養(yǎng)48 h，染色后統(tǒng)計變色菌落數(shù)目為165個。下列說法正確的是( )
A．若培養(yǎng)基含伊紅—亞甲藍(lán)，大腸桿菌菌落呈藍(lán)綠色
B．自來水中大腸桿菌濃度是33個·L－1，比真實值偏大
C．為了提高準(zhǔn)確度，需設(shè)重復(fù)實驗，但不用空白對照
D．若培養(yǎng)基菌落數(shù)目大于300，可適當(dāng)減少自來水量
答案 D
解析 若培養(yǎng)基含伊紅—亞甲藍(lán)，大腸桿菌菌落呈深紫色，有金屬光澤，A項錯誤；自來水中大腸桿菌濃度是165÷5＝33(個/L)，由于兩個或多個大腸桿菌可能長成一個菌落，因此比真實值偏小，B項錯誤；為了提高準(zhǔn)確度，需設(shè)重復(fù)實驗，同時需要設(shè)置空白對照，C項錯誤；若培養(yǎng)基菌落數(shù)目大于300，說明細(xì)菌數(shù)目較多，可適當(dāng)減少自來水量，D項正確。
二、非選擇題
12．(2022·廣東六校聯(lián)盟高三聯(lián)考)為了檢測牛奶中是否含有某種微生物，配制的培養(yǎng)基的配方如下，請分析回答下列問題(注：伊紅—亞甲藍(lán)是由兩種染色劑組成的細(xì)胞染料)：
(1)根據(jù)配方，該培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)______________(填“細(xì)菌”“霉菌”或“細(xì)菌與霉菌”)，其所含氮源的功能是__________________________________________________________。
(2)該微生物在同化作用上的代謝類型是____________________________________________
型，其在培養(yǎng)基上產(chǎn)生的單個菌落在生態(tài)學(xué)中被稱為__________________。
(3)接種好的培養(yǎng)皿在恒溫箱中培養(yǎng)時要倒置，目的是______________________________。
(4)有同學(xué)為統(tǒng)計消毒后的牛奶中該微生物的含量，取5 mL牛奶樣液進(jìn)行了下圖操作，每個平板中的統(tǒng)計結(jié)果為87、83、85，則經(jīng)過消毒后的牛奶中該微生物的含量大約是________個·mL－1。用該方法統(tǒng)計樣本菌落數(shù)時________(填“是”或“否”)需要設(shè)置空白對照組，目的是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
答案 (1)細(xì)菌 主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸
(2)異養(yǎng) 種群 (3)防止冷凝水滴落在培養(yǎng)基上；避免水分過快蒸發(fā) (4)85 000(8.5×104) 是 用于判斷培養(yǎng)基是否被污染
解析 (4)由圖可知，牛奶樣液稀釋了103倍，則消毒后牛奶中每毫升含細(xì)菌數(shù)為(87＋83＋85)÷3÷1×103＝8.5×104(個)。統(tǒng)計樣本菌落數(shù)的該方法叫稀釋涂布平板法，統(tǒng)計樣本菌落時，需要設(shè)置空白對照，目的是用于判斷培養(yǎng)基是否被污染。
13．苯酚(C6H5OH)是重要的化工原料，被廣泛應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)中，易形成污染，具有致癌、致畸和致突變作用。苯酚降解菌能分解工業(yè)廢水中的苯酚。自然界中能分解苯酚的微生物有幾百種，多為細(xì)菌、放線菌等。分離和純化高效降解苯酚的微生物的實驗流程如圖1所示：
請回答下列問題：
(1)在制作苯酚降解菌的富集培養(yǎng)基和平板分離培養(yǎng)基時，培養(yǎng)基中應(yīng)以________為唯一碳源，后者除基本營養(yǎng)成分外，還應(yīng)添加__________(物質(zhì))，然后用____________(方法)對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。
(2)用平板劃線法分離得到的單個菌落大小、顏色、隆起度等不完全一致的原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)對分離得到的某株苯酚降解菌進(jìn)行菌株生長及苯酚降解實驗，結(jié)果如圖2所示。實驗結(jié)果表明此菌株適于降解的苯酚濃度為________g/L，判斷依據(jù)是_________________________
________________________________________________________________________。
答案 (1)苯酚 瓊脂 高壓蒸汽滅菌法(濕熱滅菌法) (2)工業(yè)廢水中能降解苯酚的微生物有多種，不同種類的微生物在平板上形成的菌落特征不同 (3)1.0 此苯酚濃度下菌體繁殖快(或菌體數(shù)量最多)，且苯酚的降解率高
解析 (1)本實驗的目的是篩選能降解苯酚的微生物，故在配制相應(yīng)的培養(yǎng)基時，應(yīng)該以苯酚為唯一碳源，制作成選擇培養(yǎng)基，才可達(dá)到篩選的目的。而平板分離培養(yǎng)基與富集培養(yǎng)基相比，平板分離培養(yǎng)基是在培養(yǎng)皿上分離微生物，得到單菌落，故應(yīng)制成固體培養(yǎng)基，應(yīng)再添加凝固劑瓊脂，制作好的培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌法(或濕熱滅菌法)滅菌。培養(yǎng)基種類
特點
用途
液體培養(yǎng)基
不含凝固劑，呈液體狀態(tài)
工業(yè)生產(chǎn)
固體培養(yǎng)基
含凝固劑(如瓊脂)，呈固體狀態(tài)
微生物的分離、鑒定，活菌計數(shù)，菌種保藏
成分
含義
作用
來源
碳源
提供碳元素的物質(zhì)
構(gòu)成生物體的細(xì)胞的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些也是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)
無機(jī)碳源：CO2、NaHCO3等；有機(jī)碳源：糖類、牛肉膏等
氮源
提供氮元素的物質(zhì)
合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)
無機(jī)氮源：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等；有機(jī)氮源：蛋白胨等
無機(jī)鹽
為微生物提供除碳、氮之外的各種重要元素，包括大量元素和微量元素
為微生物提供無機(jī)營養(yǎng)，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH等
無機(jī)化合物：KH2PO4、K2HPO4、NaCl等
水
生物體含量最高的無機(jī)化合物
良好的溶劑，參與化學(xué)反應(yīng)等
培養(yǎng)基、代謝產(chǎn)物
提醒 除了上述主要營養(yǎng)物質(zhì)外，還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的需求。例如，在培養(yǎng)乳酸桿菌時，需要在培養(yǎng)基中添加維生素；在培養(yǎng)霉菌時，一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至酸性；在培養(yǎng)細(xì)菌時，一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱堿性；在培養(yǎng)厭氧微生物時，需要提供無氧的條件。
比較項目
條件
結(jié)果
常用方法
應(yīng)用范圍
消毒
較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法
僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物
煮沸消毒法
日常用品
巴氏消毒法
不耐高溫的液體
化學(xué)藥物消毒法
操作空間、操作者的衣物和手等
紫外線消毒法
接種室、接種箱或超凈工作臺
滅菌
強烈的理化方法
殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子
濕熱滅菌法
培養(yǎng)基、容器等
干熱滅菌法
玻璃器皿、
金屬用具等
灼燒滅菌法
接種工具等
提醒 選擇無菌技術(shù)的原則：一要考慮無菌技術(shù)的效果，滅菌的效果比消毒要好；二要考慮操作對象的承受能力，活體生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能用滅菌。
項目
第一次操作
每次劃線之前
劃線結(jié)束
目的
殺死接種環(huán)上原有的微生物
殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少
殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免微生物污染環(huán)境和感染操作者
成分
蛋白胨
乳糖
蔗糖
K2HPO4
顯色劑
瓊脂
含量
10.0 g
5.0 g
5.0 g
2.0 g
0.2 g
12.0 g
將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL
種類
特點
用途
舉例
選擇培養(yǎng)基
允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長
從眾多微生物中分離所需的微生物
加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基
根據(jù)微生物的代謝特點在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品，進(jìn)而產(chǎn)生特定的顏色或其他變化
鑒別不同種類的微生物
用伊紅—亞甲藍(lán)培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌
提醒 常見選擇培養(yǎng)基舉例：①缺少氮源的培養(yǎng)基可以篩選能利用大氣中N2的微生物。②含青霉素的培養(yǎng)基可淘汰細(xì)菌，篩選出真菌。③無有機(jī)碳源的培養(yǎng)基可篩選出自養(yǎng)微生物。
項目
平板劃線法
稀釋涂布平板法
分離
結(jié)果
關(guān)鍵
操作
接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線
①一系列的梯度稀釋；②涂布平板操作
接種
用具
接種環(huán)
涂布器
優(yōu)點
可以觀察菌落特征，對混合菌進(jìn)行分離
可以計數(shù)，可以觀察菌落特征
缺點
不能計數(shù)
操作復(fù)雜，需要涂布多個平板
共同點
都要用到固體培養(yǎng)基；都需進(jìn)行無菌操作；都會在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落；都可用于觀察菌落特征
編號
①
②
③
④
物品
培養(yǎng)基
接種環(huán)
培養(yǎng)皿
涂布器
滅菌方法
高壓蒸汽
火焰灼燒
干熱
臭氧
成分
蛋白胨
葡萄糖
K2HPO4
伊紅
亞甲藍(lán)
蒸餾水
含量
10 g
10 g
2 g
0.4 g
0.065 g
1 000 mL
菌株
1
2
3
4
酶活力
100
50
14
20
蛋白胨
乳糖
蔗糖
K2HPO4
伊紅
亞甲藍(lán)
蒸餾水
10 g
5 g
5 g
2 g
0.4 g
0.065 g
1 000 mL
將培養(yǎng)基pH調(diào)至7.2