[高中生物一輪復(fù)習(xí)講義   選修1]第31講 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用考點(diǎn)一 培養(yǎng)基及微生物的純化培養(yǎng)技術(shù)1．培養(yǎng)基：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。(1)營(yíng)養(yǎng)組成：一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽。此外，還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、氧氣以及特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求。(2)種類(lèi)①按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。②按照成分的來(lái)源可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。③按照功能用途可分為選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等。④下表為某微生物培養(yǎng)基的成分舉例KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素瓊脂H2O1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g15.0 g1 000 mL該培養(yǎng)基中可以為微生物提供碳源的是葡萄糖，此培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基中加入了瓊脂。2．無(wú)菌技術(shù)：在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。常用方法如下圖：3．大腸桿菌的純化培養(yǎng)(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基①計(jì)算②稱量③溶化④滅菌⑤倒平板
(2)純化大腸桿菌①純化培養(yǎng)原理：想方設(shè)法在培養(yǎng)基上得到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的菌落，即可獲得較純的菌種。②純化大腸桿菌的關(guān)鍵步驟：接種。③常用的微生物接種方法有兩種a．平板劃線法：通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體，即菌落。b．稀釋涂布平板法：是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。微生物的接種方法(1)平板劃線法：幾種劃線方法示意圖(2)稀釋涂布平板法：10倍系列稀釋操作。①將分別盛有9 mL水的6支試管滅菌，并按101～106的順序編號(hào)。②進(jìn)行梯度稀釋時(shí)，從菌液開(kāi)始，每次從前一試管中取1 mL 溶液注入到下一試管中混勻。(如圖丙)③進(jìn)行涂布平板操作。(如圖丁)④純化微生物的接種方法的比較項(xiàng)目平板劃線法稀釋涂布平板法優(yōu)點(diǎn)可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征缺點(diǎn)不能計(jì)數(shù)操作較麻煩，平板干燥效果不好，容易蔓延適用范圍適用于好氧菌適用于厭氧菌和兼性厭氧菌 4．菌種的保存方法(1)對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法。(2)對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。
 1．培養(yǎng)基的配制原則(1)目的要明確：配制時(shí)應(yīng)根據(jù)微生物的種類(lèi)、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類(lèi)。(2)營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。(3)pH要適宜：細(xì)菌為6.5～7.5，放線菌為7.5～8.5，真菌為5.0～6.0，培養(yǎng)不同微生物所需pH不同。(4)認(rèn)清不同生物需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不同①微生物需要的營(yíng)養(yǎng)成分有水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源，有些微生物還需要特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如生長(zhǎng)因子。②在人和動(dòng)物中，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括水、無(wú)機(jī)鹽、糖類(lèi)、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類(lèi)。③在植物中，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括礦質(zhì)元素、水、二氧化碳三類(lèi)。2．培養(yǎng)基的成分3．培養(yǎng)基的分類(lèi)4．平板劃線操作的注意事項(xiàng)(1)操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行火焰灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束時(shí)，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的不同：①第一次操作目的是殺死接種環(huán)上原有的微生物。②每次劃線之間操作目的是殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少。③劃線結(jié)束操作目的是殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。(2)灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。(3)
第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。(4)劃線時(shí)最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。(5)劃線用力大小要適當(dāng)，防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破。 考點(diǎn)二 微生物的篩選和計(jì)數(shù)1．土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)(1)分離原理：土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣?/span>脲酶，這種物質(zhì)在把尿素分解成無(wú)機(jī)物的過(guò)程中起到催化作用。(2)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目一般用稀釋涂布平板法。①統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的1個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中1個(gè)活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。②從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的菌落數(shù)的計(jì)算方法是(平均菌落數(shù)÷涂布的稀釋液體積)×稀釋倍數(shù)。③利用稀釋涂布平板法成功統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)南♂?/span>度。用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低 ，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。(3)實(shí)驗(yàn)流程：
用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法①結(jié)構(gòu)：常用的是1 mm×1 mm×0.1 mm方格的計(jì)數(shù)板(如圖)。每個(gè)計(jì)數(shù)板上有兩個(gè)計(jì)數(shù)室，每個(gè)計(jì)數(shù)室上刻有9個(gè)大方格，其中只有中間的大方格為計(jì)數(shù)室，大方格的長(zhǎng)和寬各為1 mm，深度為0.1 mm，其容積為0.1 mm3；大方格內(nèi)分為25中格，每一中格又分為16小格，即大方格是由400個(gè)小方格組成。②操作：將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室上加蓋專用的蓋玻片，用吸管吸取稀釋后的菌液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行緩緩滲入，充滿計(jì)數(shù)室。③計(jì)數(shù)：在顯微鏡下計(jì)數(shù)4～5個(gè)中方格內(nèi)的菌體數(shù)，求出每個(gè)小方格所含有的細(xì)菌的平均數(shù)，按照以下公式計(jì)算：每毫升原液含有的菌數(shù)＝每小格平均細(xì)菌數(shù)×400×104×原液被稀釋倍數(shù)。2．分解纖維素的微生物的分離(1)纖維素酶①組成：纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。②作用(2)纖維素分解菌的篩選①原理
②篩選方法：剛果紅染色法，即通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。③培養(yǎng)基：以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。④實(shí)驗(yàn)流程3．篩選微生物的兩個(gè)實(shí)例比較比較項(xiàng)目土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離分解纖維素的微生物的分離方法利用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)利用富含纖維素的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)原理只有分解尿素的細(xì)菌能夠合成脲酶，才能在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)因?yàn)榕囵B(yǎng)基中含有豐富的纖維素，因此能夠分解纖維素的微生物具有更多的生存機(jī)會(huì)而大量繁殖鑒定在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，指示劑變紅說(shuō)明菌落中的菌體為分解尿素的細(xì)菌剛果紅染色法，菌落周?chē)霈F(xiàn)不變紅的透明圈的菌落為分解纖維素的微生物的菌落4．微生物兩種計(jì)數(shù)方法的比較比較項(xiàng)目間接計(jì)數(shù)法(稀釋涂布平板法)直接計(jì)數(shù)法(顯微計(jì)數(shù)法)原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量公式每克樣品中的菌落數(shù)：(C÷V)×M C：某稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)；V：涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)；M：稀釋倍數(shù)每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)：每小格平均細(xì)菌數(shù)×400×10 000×稀釋倍數(shù)缺點(diǎn)當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)菌體連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落不能區(qū)分細(xì)胞死活結(jié)果比實(shí)際值偏小比實(shí)際值偏大 稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)微生物的注意問(wèn)題用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)微生物時(shí)，要求選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。解題時(shí)易出現(xiàn)以下誤解：(1)只得到1個(gè)菌落數(shù)在30～300的平板①是錯(cuò)誤的。錯(cuò)誤的原因是不符合實(shí)驗(yàn)的重復(fù)原則，易受到偶發(fā)因素的影響。
(2)得到3個(gè)或3個(gè)以上菌落數(shù)在30～300的平板，也不一定正確，這可能有兩種情況：①不同平板間差異較大，如得到3個(gè)平板，菌落數(shù)分別為230、34、240，雖然菌落數(shù)均在“30～300”之間，這也是不正確的，因?yàn)?/span>“34”與“230”“240”差異太大，應(yīng)重新實(shí)驗(yàn)找出原因。②不同平板之間差異不大，是符合要求的，用其平均值作為估算的最終結(jié)果。可見(jiàn)，并不是只要得到3個(gè)“菌落數(shù)在30～300的平板”即可，而應(yīng)該是涂布的同一稀釋度的平板均符合“菌落數(shù)在30～300的平板”且無(wú)較大差異，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作合格，才能按照計(jì)算公式進(jìn)行計(jì)算。 考點(diǎn)三　微生物的篩選與鑒別1．纖維素酶(1)組成：纖維素酶是一種復(fù)合酶，它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。(2)作用2．菌種篩選(1)方法：剛果紅染色法。(2)原理即：使用以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，根據(jù)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。3．篩選流程4．微生物的鑒別方法(1)菌落特征鑒別法：根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進(jìn)行鑒別。(2)指示劑鑒別法：如以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種微生物后，培養(yǎng)基變紅說(shuō)明該種微生物能夠分解尿素。(3)染色鑒別法：如利用剛果紅染色法，根據(jù)培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈來(lái)篩選分解纖維素的微生物。
5．篩選微生物的三種方法(1)單菌落挑取法：利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養(yǎng)基表面，直接根據(jù)微生物菌落的特征利用單菌落挑取的方法獲得目的微生物。(2)選擇培養(yǎng)法：利用選擇培養(yǎng)基對(duì)微生物進(jìn)行選擇培養(yǎng)，直接獲得目的微生物。(3)鑒定培養(yǎng)法：利用鑒別培養(yǎng)基使目的微生物菌落呈現(xiàn)特有的特征，然后篩選目的微生物。6．選擇培養(yǎng)基四種常見(jiàn)制備方法或?qū)嵗?/span>
1．如圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法，請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題：(1)圖甲是利用________法進(jìn)行微生物接種，圖乙是利用________法進(jìn)行微生物接種。這兩種方法所用的接種工具分別是________和________；對(duì)這兩種接種工具進(jìn)行滅菌和消毒的方法依次是________和酒精消毒。(2)接種操作為什么一定要在酒精燈火焰附近進(jìn)行？________________________________________________________________________________________________________。(3)接種后，在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)為什么進(jìn)行倒置培養(yǎng)？___________________________。(4)如圖是采用上述接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解，其接種方法是________(填“圖甲”或“圖乙”)。[答案](1)平板劃線　稀釋涂布平板　接種環(huán)　涂布器　灼燒滅菌(2)火焰附近存在著無(wú)菌區(qū)域(3)避免培養(yǎng)過(guò)程產(chǎn)生的水分影響微生物的生長(zhǎng)(4)圖乙[解析]圖甲和圖乙分別是平板劃線法和稀釋涂布平板法，這兩種方法所用的接種工具分別是接種環(huán)和涂布器。由于在酒精燈火焰附近存在著無(wú)菌區(qū)域，因此接種常在火焰附近進(jìn)行。在微生物培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生水，對(duì)微生物的生長(zhǎng)造成影響，故需要倒置培養(yǎng)。2．牛奶是微生物生長(zhǎng)的良好培養(yǎng)基。牛奶在飲用前都要經(jīng)過(guò)巴氏消毒，以殺死有害微生物。為檢測(cè)消毒前后牛奶中細(xì)菌含量變化情況，做如圖所示操作。用無(wú)菌吸管從錐形瓶中吸取1 mL生牛奶稀釋液至盛有9 mL無(wú)菌水的試管中，混合均勻，如此再重復(fù)2次。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題：(1)巴氏消毒的方法是_____________________________________________________，使用這種方法對(duì)生鮮牛奶進(jìn)行消毒的好處是________。(2)取最終的牛奶稀釋液0.1 mL滴在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布，應(yīng)選擇的涂布工具是下圖中的________。
(3)圖中所示方法為稀釋培養(yǎng)法，理想情況下，培養(yǎng)一段時(shí)間后可在培養(yǎng)基表面形成菌落。若用該方法培養(yǎng)設(shè)置了3個(gè)培養(yǎng)皿，菌落數(shù)分別為35個(gè)、33個(gè)、34個(gè)，則可以推測(cè)生牛奶中每毫升含細(xì)菌數(shù)為________個(gè)，運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往較實(shí)際值________(填“偏大”或“偏小”)，原因是_______________________________________________________________________。(4)從生牛奶取樣培養(yǎng)得到的菌落中，混有各種雜菌，從中檢測(cè)大腸桿菌的方法是在培養(yǎng)基中加入________，菌落具有______________________特征的可以認(rèn)定為大腸桿菌。[答案](1)70～75 ℃煮30分鐘(或80 ℃煮15分鐘)　牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞　(2)B　(3)3.4×106　偏小　個(gè)別菌落可能是由2個(gè)或多個(gè)細(xì)菌形成的　(4)伊紅—美藍(lán)　(金屬光澤的紫)黑色3．莠去津是一種含氮農(nóng)藥，在土壤中不易降解，為修復(fù)被其污染的土壤，可按下面程序選育能降解莠去津的細(xì)菌(目的菌)。請(qǐng)據(jù)圖回答：(已知莠去津在水中溶解度低，含過(guò)量莠去津的固體培養(yǎng)基不透明)(1)由圖推斷，從A瓶到C瓶液體培養(yǎng)的過(guò)程稱為________，目的是______________。(2)在將C瓶菌種接種到固體培養(yǎng)基之前通常要進(jìn)行________，將菌種接種到固體培養(yǎng)基的方法有平板劃線法和________法，從圖中看本實(shí)驗(yàn)采用的是________(填“前者”或“后者”)。(3)一段時(shí)間后，培養(yǎng)基出現(xiàn)無(wú)透明圈和有透明圈兩種菌落，我們篩選的目的菌是________菌落中的細(xì)菌，該菌落生長(zhǎng)所需的氮元素主要來(lái)源于________。(4)為弄清固體培養(yǎng)基中的非目的菌來(lái)自C瓶菌種還是培養(yǎng)基，應(yīng)如何設(shè)置對(duì)照組？____________。[答案](1)選擇培養(yǎng)　初步選擇能降解莠去津的細(xì)菌(目的菌)并增加其數(shù)量(2)梯度稀釋　稀釋涂布平板　后者(3)有透明圈　莠去津(4)配制的培養(yǎng)基滅菌后不接種菌種，與實(shí)驗(yàn)組放在相同條件下培養(yǎng)
[解析](1)圖中從A瓶到C瓶液體培養(yǎng)過(guò)程為選擇培養(yǎng)，目的是初步選擇能降解莠去津的細(xì)菌(目的菌)并增加其數(shù)量。(2)將菌種接種到固體培養(yǎng)基的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法兩種，由圖中固體培養(yǎng)基上的菌落分布比較均勻可知，該接種方法是稀釋涂布平板法，包括梯度稀釋操作和涂布平板操作。(3)根據(jù)題目信息“莠去津在水中溶解度低，含過(guò)量莠去津的固體培養(yǎng)基不透明”可知，能夠降解莠去津的目的菌分解莠去津，使菌落周?chē)霈F(xiàn)透明圈，因此可以選擇菌落周?chē)嬖谕该魅Φ募?xì)菌。由于培養(yǎng)基中只有莠去津一種氮源，因此分解莠去津的微生物所需的氮源主要由莠去津提供。(4)為弄清固體培養(yǎng)基中的非目的菌來(lái)自C瓶菌種還是培養(yǎng)基，應(yīng)設(shè)置滅菌后不接種菌種的空白培養(yǎng)基，與實(shí)驗(yàn)組放在相同條件下培養(yǎng)，若培養(yǎng)基上無(wú)菌落出現(xiàn)，則非目的菌一定來(lái)自C瓶菌種，若培養(yǎng)基上出現(xiàn)菌落，則說(shuō)明非目的菌可能來(lái)自培養(yǎng)基。4．高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中是極為重要的酶制劑。研究者從熱泉中篩選出了能高效產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌。其篩選過(guò)程如圖所示。(1)進(jìn)行①過(guò)程的目的是________嗜熱菌培養(yǎng)液；②過(guò)程所使用的接種方法是________。(2)Ⅰ、Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基配制和滅菌時(shí)，滅菌與調(diào)節(jié)pH的先后順序是________；對(duì)培養(yǎng)基常用________方法進(jìn)行滅菌。對(duì)于空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能________，如果要檢測(cè)滅菌是否徹底，可以采用的方法是：將滅菌過(guò)的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置一段時(shí)間，________________。(3)部分嗜熱菌在Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)可釋放________分解培養(yǎng)基中的淀粉，在菌落周?chē)纬赏该魅?；?yīng)挑出透明圈________(填“大”或“小”)的菌落，接種到Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基。[答案](1)稀釋　稀釋涂布平板法　(2)先調(diào)節(jié)pH，后滅菌　高壓蒸汽滅菌　損傷DNA的結(jié)構(gòu)　觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生　(3)淀粉酶　大[解析](1)分析題圖可知，①過(guò)程是梯度稀釋，目的是對(duì)樣品進(jìn)行稀釋；②過(guò)程是用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種。(2)培養(yǎng)基配制和滅菌時(shí)應(yīng)先調(diào)節(jié)pH，然后再進(jìn)行滅菌，如果先滅菌再調(diào)節(jié)pH時(shí)，又會(huì)污染培養(yǎng)基；紫外線對(duì)DNA分子有損傷作用，且能使蛋白質(zhì)變性，所以常用來(lái)作為對(duì)空氣滅菌的方法；檢測(cè)滅菌效果的方法就是將滅菌過(guò)的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。(3)能分解淀粉的嗜熱菌在Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)可釋放淀粉酶，分解培養(yǎng)基中的淀粉，在菌落周?chē)纬赏该魅?，透明圈越大淀粉酶的活性越?qiáng)，所以要從中挑出透明圈大的菌落，接種到Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基上。5．欲從土壤中篩選出能產(chǎn)生脲酶的微生物并予以純化計(jì)數(shù)，采用了如圖所示的基本操作流程。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)取得土樣后應(yīng)先用________(填試劑)對(duì)土壤進(jìn)行梯度稀釋，然后將稀釋液涂布在平面培養(yǎng)基上，這種選擇培養(yǎng)基在營(yíng)養(yǎng)組成上的重要特點(diǎn)是__________________。在這樣的培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的細(xì)菌________(填“一定”或“不一定”)都能產(chǎn)生脲酶。若在平板中加入酚紅，目的菌落出現(xiàn)的變化是__________________。(2)若要對(duì)相應(yīng)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)，一個(gè)稀釋度應(yīng)涂布2到3個(gè)平板，并計(jì)算________。若稀釋度不夠高，所得的數(shù)據(jù)與實(shí)際值比較應(yīng)________(填“偏大”“偏小”或“相等”)。經(jīng)涂布獲得的菌落可以采用平板劃線法進(jìn)一步純化，每次劃線后接種環(huán)必須________，才能再次用于劃線。獲得的純化菌種可以保存在試管中，塞上棉塞或蓋上封口膜，不能密封，原因是______________________。
[答案](1)無(wú)菌水　氮源只有尿素　不一定　菌落周?chē)霈F(xiàn)紅圈　(2)平均值　偏小　灼燒　細(xì)菌有氧呼吸需要?dú)怏w流通6．苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)②中培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入________作為碳源，②中不同濃度碳源的培養(yǎng)基________(A.影響；B.不影響)細(xì)菌的數(shù)量，如果要測(cè)定②中活細(xì)菌數(shù)量，常采用________________法。(2)④為對(duì)照，微生物在④中不生長(zhǎng)，在⑤中生長(zhǎng)，④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于________________________________________________________________________；使用法可以在⑥上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)進(jìn)行倒置培養(yǎng)的原因是________________________________________________________________________。(3)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如何防止其他微生物的污染？________________________________________________________________________。[答案](1)苯酚　A　稀釋涂布平板(2)④的培養(yǎng)基沒(méi)有加入苯酚作為碳源，⑤的培養(yǎng)基加入苯酚作為碳源　稀釋涂布平板法或平板劃線　防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基(3)培養(yǎng)基滅菌，接種環(huán)境滅菌，接種過(guò)程無(wú)菌操作 

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