植物的克隆1.植物細(xì)胞的全能性和植物組織培養(yǎng)(1)全能性:植物體的每個(gè)生活細(xì)胞都具有　　　　上的全能性,因而都具有發(fā)育成　　　　　　　　的潛能。?(2)植物細(xì)胞全能性表達(dá)的條件①離體、　　　　。?②一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),如水、無(wú)機(jī)鹽、蔗糖、維生素等。③　　　　　　　　　　　　　。?(3)植物組織培養(yǎng)程序配制培養(yǎng)基:配制含有適當(dāng)　　　　　　　　和　　　　　　　　　　　　的半固體培養(yǎng)基?切取　　　　的組織塊?
獲得愈傷組織:由相對(duì)沒(méi)有分化的活的薄壁細(xì)胞團(tuán)組成的新生組織
2.細(xì)胞培養(yǎng)和器官培養(yǎng)(1)方法:主要是通過(guò)平衡的　　　　　　　　配比進(jìn)行調(diào)控,以實(shí)現(xiàn)器官的發(fā)生和形態(tài)建成。?①適量的　　　　　　和　　　　　　　　　　配比,可誘導(dǎo)芽的分化。?②適量的　　　　　　及適當(dāng)減除其他某些激素,可誘導(dǎo)生根。(2)意義①可以在實(shí)驗(yàn)室、試管等器皿中進(jìn)行植物　　　　過(guò)程和自受精卵進(jìn)行的植物　　　　　　　　過(guò)程,以及調(diào)節(jié)控制這些過(guò)程的環(huán)境因素、遺傳基礎(chǔ)和分子及生理生化機(jī)理研究。?②可以進(jìn)行　　　　　　　　的操作,完成與植物　　　　　　　　有關(guān)的重要基因或影響因素的研究。?③可以方便地通過(guò)　　　　　　　　培育植物新品種。?
3.原生質(zhì)體培養(yǎng)與植物細(xì)胞工程(1)原生質(zhì)體培養(yǎng)
(2)植物細(xì)胞工程的操作過(guò)程
4.多途徑的植物克隆實(shí)踐(1)培育抗逆、高產(chǎn)及優(yōu)質(zhì)的　　　　　　　　　　。?(2)通過(guò)培養(yǎng)特定細(xì)胞系,實(shí)現(xiàn)能產(chǎn)生重要　　　　　　　　　的細(xì)胞的大量克隆和產(chǎn)物的工業(yè)化生產(chǎn)。?(3)　　　　　　育種。?(4)誘發(fā)、篩選突變體。
(1)圖中基因工程的載體是　　　　　　　　　,目的基因是　　　　。甲→乙過(guò)程需要的工具酶是　　　　　　　　。?(2)基因工程的核心是　　　。?A.乙的構(gòu)建　　　B.丙的形成C.丁的篩選D.戊的培育
考向一　植物細(xì)胞全能性和組織培養(yǎng)方法【典例1-1】 利用生物工程培育抗蟲(chóng)植物的過(guò)程如圖所示。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題。
(3)丁→戊過(guò)程說(shuō)明植物細(xì)胞具有　　　　　　。在這個(gè)過(guò)程中,丁細(xì)胞在特定的刺激下發(fā)生　　　　　　成為具有分裂能力的細(xì)胞,并且不斷地分裂增殖形成愈傷組織。通過(guò)調(diào)節(jié)營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的配比,從愈傷組織誘導(dǎo)出　　　　　　,并由此再生出新植株。?(4)丁→戊過(guò)程中形成的愈傷組織,可通過(guò)液體懸浮培養(yǎng)分散成單細(xì)胞。下列特征中,這種細(xì)胞不具有的是　　　?！?A.細(xì)胞質(zhì)豐富B.液泡大C.可發(fā)育成胚狀體D.細(xì)胞核大
答案:(1)Ti質(zhì)粒(甲)　抗蟲(chóng)基因　限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶　(2)A　(3)全能性　脫分化　芽和根　(4)B解析:(1)圖示為轉(zhuǎn)基因植物的培育過(guò)程,在圖示中,基因工程的載體是農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒,目的基因是抗蟲(chóng)基因。甲到乙表示形成重組DNA分子的過(guò)程,需要用到限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶。(2)基因工程的核心是構(gòu)建重組DNA分子,分析圖示,乙表示重組DNA分子的構(gòu)建。(3)丁到戊表示植物細(xì)胞發(fā)育成完整植株的過(guò)程,體現(xiàn)了植物細(xì)胞具有全能性。由植物細(xì)胞發(fā)育成完整植株,一般會(huì)經(jīng)歷脫分化形成愈傷組織,然后愈傷組織再分化形成芽和根,最終發(fā)育成植株的過(guò)程。(4)愈傷組織細(xì)胞具有細(xì)胞核大,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富,液泡小等特征,并保留發(fā)育成胚狀體的能力。
歸類(lèi)提升植物克隆有關(guān)的幾種技術(shù)的比較
(1)據(jù)此煙草葉片原生質(zhì)體分離和培養(yǎng)的流程圖,下列分析錯(cuò)誤的是(　　)A.可用紅墨水染色的方法檢測(cè)原生質(zhì)體有無(wú)活性B.①過(guò)程需在一定濃度的甘露醇溶液中用纖維素酶和果膠酶處理C.④過(guò)程要求生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的比例合適D.上述過(guò)程中可發(fā)生染色體畸變、基因突變和基因重組
考向二　原生質(zhì)體培養(yǎng)與植物細(xì)胞工程【典例1-2】 下面是煙草葉片原生質(zhì)體分離和培養(yǎng)的流程圖,請(qǐng)回答下列問(wèn)題。
(2)將原生質(zhì)體制成懸浮液培養(yǎng)分散的單細(xì)胞,這種單細(xì)胞具有　　　　　細(xì)胞的特性,在適宜的培養(yǎng)基中,可以發(fā)育成　　　　　　,繼續(xù)培養(yǎng)發(fā)育可以形成植株。?(3)若要用顯微鏡觀察并計(jì)數(shù)懸浮液培養(yǎng)分散的單細(xì)胞,則需要把懸浮液滴加在　　　上,假如還要判定原生質(zhì)體是否已形成細(xì)胞壁,可用　　　　　　　　方法鑒別。?(4)欲通過(guò)原生質(zhì)體培養(yǎng)得到愈傷組織,從培養(yǎng)基的成分考慮,配制培養(yǎng)基時(shí)需要注意的主要方面有　　　　　　　　的適當(dāng)配比和　　　　　　　　　　　　的適當(dāng)配比。?
(5)下列有關(guān)高等植物原生質(zhì)體制備和培養(yǎng)的敘述,正確的是(　　)A.由于植物細(xì)胞壁的存在,植物的組織培養(yǎng)和克隆有一定的難度B.加入0.6 ml/L甘露醇的目的是保護(hù)纖維素酶和果膠酶C.從不同植物組織分離得到的原生質(zhì)體亞顯微結(jié)構(gòu)相同D.原生質(zhì)體是除細(xì)胞膜以外的細(xì)胞中有代謝活性的原生質(zhì)部分
答案:(1)D　(2)胚性　胚狀體　(3)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板　質(zhì)壁分離　(4)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)　植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑　(5)A
解析:(1)活細(xì)胞的細(xì)胞膜有選擇透性,紅墨水不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi);死細(xì)胞的細(xì)胞膜失去選擇透性,紅墨水可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),所以可用紅墨水染色的方法檢測(cè)原生質(zhì)體有無(wú)活性,A項(xiàng)正確。①表示獲得原生質(zhì)體,需要在較高濃度的甘露醇溶液中,用纖維素酶和果膠酶混合液處理,B項(xiàng)正確。獲得愈傷組織的過(guò)程需要生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比例合適,C項(xiàng)正確?；蛑亟M發(fā)生在有性生殖過(guò)程中,圖示過(guò)程中不會(huì)發(fā)生基因重組,D項(xiàng)錯(cuò)誤。(2)將原生質(zhì)體制成懸浮液培養(yǎng)分散的單細(xì)胞,這種單細(xì)胞具有胚性細(xì)胞的特性,液泡小而細(xì)胞核大,在適宜的培養(yǎng)基中可以發(fā)育成胚狀體,繼續(xù)培養(yǎng)發(fā)育可以形成植株。(3)可用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。要判定原生質(zhì)體是否已形成細(xì)胞壁,可用質(zhì)壁分離的方法鑒別。
(4)欲通過(guò)原生質(zhì)體培養(yǎng)得到愈傷組織,從培養(yǎng)基的成分考慮,配制培養(yǎng)基時(shí)需要注意的主要方面是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的適當(dāng)配比。(5)由于植物細(xì)胞壁的存在,使植物組織培養(yǎng)和克隆有一定的難度,A項(xiàng)正確。制備原生質(zhì)體時(shí),加入0.6 ml/L甘露醇的目的是防止原生質(zhì)體吸水脹破,B項(xiàng)錯(cuò)誤。不同植物組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能不同,故從不同植物組織分離得到的原生質(zhì)體亞顯微結(jié)構(gòu)可能不同,C項(xiàng)錯(cuò)誤。原生質(zhì)體是指植物細(xì)胞去掉細(xì)胞壁后剩下的部分,包括細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核,D項(xiàng)錯(cuò)誤。
考向三　植物克隆的綜合應(yīng)用【典例1-3】 (2018浙江寧波九校期末聯(lián)考)苦蕎富含黃酮類(lèi)化合物等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),在降血糖、降血脂等方面功效顯著。查爾酮合成酶(CHS)是黃酮類(lèi)化合物合成的關(guān)鍵酶,如圖為將CHS基因?qū)肟嗍w,培育高產(chǎn)黃酮苦蕎品系示意圖。據(jù)圖回答下列問(wèn)題。
(1)基因工程的核心是　　　　　　　　　　。?(2)可利用　　　　　　、　　　　方法獲取CHS基因。?(3)過(guò)程①中切開(kāi)質(zhì)粒的酶是　　　　　　　　　　。它能在質(zhì)粒特定的部位切割的原因是　?　。?(4)過(guò)程②③分別是　　　　　　　　　　。苦蕎細(xì)胞能培養(yǎng)成植株的根本原因是　　　　　　　　　　　　。?(5)為培育轉(zhuǎn)基因苦蕎植物,還可將該植物幼葉消毒后,用　　　　　　　　　　　　酶混合液處理,獲得原生質(zhì)體。酶混合液中含有適宜濃度的甘露醇,其作用是　　　　　　　　　　　　。將目的基因?qū)氲皆|(zhì)體,經(jīng)培養(yǎng)形成愈傷組織,再通過(guò)　　　　　　　　　　　　得到分散的胚性細(xì)胞,發(fā)育成　　　　　　　　　　　　,生長(zhǎng)發(fā)育后獲得該轉(zhuǎn)基因植株。?
(6)愈傷組織繼代次數(shù)過(guò)多會(huì)喪失細(xì)胞全能性的表達(dá)能力,下列原因錯(cuò)誤的是　　　　　　　　　。?A.愈傷組織發(fā)生遺傳變異B.愈傷組織不能分散成單細(xì)胞C.愈傷組織中激素平衡發(fā)生改變D.愈傷組織對(duì)外源激素敏感性發(fā)生改變
答案:(1)構(gòu)建重組DNA分子　(2)從基因文庫(kù)中獲取　化學(xué)方法合成或PCR擴(kuò)增　(3)限制性核酸內(nèi)切酶　能識(shí)別特定的核苷酸序列并在特定的位點(diǎn)切割DNA分子　(4)脫分化、再分化　植物細(xì)胞的全能性(或細(xì)胞中含有發(fā)育成完整個(gè)體所必需的全部基因)　(5)纖維素酶和果膠(寫(xiě)全才可)　維持滲透壓　液體懸浮培養(yǎng)　胚狀體　(6)B
解析:(1)基因工程的核心是構(gòu)建重組DNA分子。(2)CHS基因?yàn)槟康幕?其獲取方法有從基因文庫(kù)中獲取、化學(xué)方法合成或PCR擴(kuò)增。(3)質(zhì)粒的化學(xué)本質(zhì)是DNA,切開(kāi)質(zhì)粒的酶是限制性核酸內(nèi)切酶;由于限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別特定的核苷酸序列并在特定的切點(diǎn)上切割DNA分子,所以它能在質(zhì)粒特定的部位切割。(4)過(guò)程②③為植物的組織培養(yǎng)過(guò)程,分別是脫分化、再分化;由于植物細(xì)胞具有全能性,所以苦蕎細(xì)胞能培養(yǎng)成植株。(5)植物細(xì)胞用纖維素酶和果膠酶處理,去除細(xì)胞壁,獲得原生質(zhì)體;制備原生質(zhì)體時(shí),酶混合液中含有適宜濃度的甘露醇,有利于維持滲透壓;將目的基因?qū)氲皆|(zhì)體,經(jīng)培養(yǎng)形成愈傷組織,再通過(guò)液體懸浮培養(yǎng)得到分散的胚性細(xì)胞,發(fā)育成胚狀體,生長(zhǎng)發(fā)育后獲得該轉(zhuǎn)基因植株。(6)愈傷組織繼代次數(shù)過(guò)多會(huì)發(fā)生遺傳變異、激素平衡的改變、對(duì)外源激素敏感性的改變,使得愈傷組織喪失細(xì)胞全能性的表達(dá)能力。
(2018浙江4月選考,32節(jié)選)回答與基因工程和植物克隆有關(guān)的問(wèn)題。(1)將含某抗蟲(chóng)基因的載體和含卡那霉素抗性基因的載體pBI121均用限制性核酸內(nèi)切酶EcRⅠ酶切,在切口處形成　　　　　　　　　。選取含抗蟲(chóng)基因的DNA片段與切割后的pBI121用DNA連接酶連接,在兩個(gè)片段相鄰處形成　　　　　　　　　　,獲得重組質(zhì)粒。?(2)已知用CaCl2處理細(xì)菌,會(huì)改變其某些生理狀態(tài)。取CaCl2處理過(guò)的農(nóng)桿菌與重組質(zhì)粒在離心管內(nèi)進(jìn)行混合等操作,使重組質(zhì)粒進(jìn)入農(nóng)桿菌,完成　　　　　實(shí)驗(yàn)。在離心管中加入液體培養(yǎng)基,置于搖床慢速培養(yǎng)一段時(shí)間,其目的是　　　　　　　　　　　　,從而表達(dá)卡那霉素抗性基因,并大量增殖。?
(3)取田間不同品種水稻的幼胚,先進(jìn)行　　　　　,然后接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng),幼胚發(fā)生　　　　　　　形成愈傷組織,并進(jìn)行繼代培養(yǎng)。用含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌侵染愈傷組織,再培養(yǎng)愈傷組織,以便獲得抗蟲(chóng)的轉(zhuǎn)基因水稻。影響愈傷組織能否成功再生出植株的因素有:培養(yǎng)條件如光溫、培養(yǎng)基配方如植物激素配比、以及　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　(答出2點(diǎn)即可)。?
答案:(1)粘性末端　磷酸二酯鍵　(2)轉(zhuǎn)化　使CaCl2處理過(guò)的農(nóng)桿菌恢復(fù)細(xì)胞的正常狀態(tài)　(3)消毒　脫分化　水稻的基因型、愈傷組織繼代的次數(shù)
解析:(1)構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)限制性核酸內(nèi)切酶剪切得到的是粘性末端,DNA連接酶連接兩個(gè)DNA片段之間形成的是磷酸二酯鍵。(2)目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。Ca2+處理方法增加細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性,讓其處于感受態(tài)細(xì)胞,以利于重組質(zhì)粒導(dǎo)入。故細(xì)胞要正常表達(dá)相關(guān)基因,應(yīng)讓其恢復(fù)為正常狀態(tài)。(3)因不同種類(lèi)植物或同種植物的不同基因型個(gè)體之間遺傳的差異,細(xì)胞全能性的表達(dá)程度大小不同,小麥水稻等作物在多次繼代培養(yǎng)后,會(huì)喪失細(xì)胞全能性的表達(dá)能力。
動(dòng)物的克隆1.動(dòng)物細(xì)胞、組織培養(yǎng)(1)動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是　　　　　　　　　　　　　　　。?(2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程:動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)包括　　　　　　　　　　　、　　　　　　　　　　　　及　　　　　　　　三個(gè)階段。分散組織細(xì)胞常用的方法有　　　　　　　　　和　　　　　　　　　　。?(3)原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)①原代培養(yǎng):從　　　　取出后立即進(jìn)行的細(xì)胞、組織培養(yǎng)的過(guò)程。?②傳代培養(yǎng):將　　　　　　　　　　　　分成若干份,接種到若干份培養(yǎng)基中,使其繼續(xù)生長(zhǎng)、增殖。?
動(dòng)物的細(xì)胞和組織培養(yǎng)
(2)細(xì)胞株:通過(guò)一定的選擇或純化方法,從　　 　　　　　中獲得的具有　　　　　　　　的細(xì)胞,可分為　　　　細(xì)胞株和　　　　細(xì)胞株。?
3.動(dòng)物的克隆培養(yǎng)法(1)概念:把一個(gè)單細(xì)胞從群體中分離出來(lái)　　　　培養(yǎng),使之繁衍成一個(gè)　　　　　　　　　　　的技術(shù)叫做克隆培養(yǎng)法或細(xì)胞克隆。?(2)基本要求:必須保證分離出來(lái)的細(xì)胞是　　　　而不是多個(gè),即必須肯定所建成的克隆來(lái)源于　　　　細(xì)胞。?(3)克隆對(duì)象的選擇:選擇對(duì)培養(yǎng)環(huán)境具有較大　　　　　　和具有較強(qiáng)　　　　　　　　　　　的細(xì)胞。單細(xì)胞通常不如　　　　細(xì)胞;　　　　細(xì)胞和　　　　細(xì)胞系通常不如無(wú)限細(xì)胞系、轉(zhuǎn)化或　　　　細(xì)胞。?
(5)細(xì)胞克隆的最主要用途:細(xì)胞克隆的最主要用途之一,就是從　　　　細(xì)胞系中分離出　　　　　　　　　　　的突變細(xì)胞系。例如,研究缺少某種特殊蛋白的細(xì)胞,可以發(fā)現(xiàn)正常細(xì)胞中這種蛋白質(zhì)的功能。?
4.動(dòng)物的細(xì)胞融合技術(shù)及其應(yīng)用(1)細(xì)胞融合①概念:細(xì)胞融合是指　　個(gè)或　　個(gè)細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞的現(xiàn)象。?②原理:細(xì)胞膜的　　　　　　。?③誘導(dǎo)融合的方法:聚乙二醇、　　　　　　　　　　病毒、電融合技術(shù)等。?④應(yīng)用:基因在染色體上的　　　　;制備　　　　　　抗體。?(2)單克隆抗體的制備①原理:B淋巴細(xì)胞可以合成　　　　,但壽命有限,它與具有無(wú)限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合后產(chǎn)生的雜種細(xì)胞,既能產(chǎn)生特殊的　　　　,又能在組織培養(yǎng)條件下進(jìn)行　　　　　　　　。?
④優(yōu)點(diǎn):　　　　　　　　、　　　　　　　　,可大量制備。?⑤用途:用于治療疾病;作為特異　　　,研究相應(yīng)　　 　　的結(jié)構(gòu)、細(xì)胞學(xué)分布及其　　　　。?
5.動(dòng)物的克隆繁殖(1)動(dòng)物難以克隆的根本原因在動(dòng)物的個(gè)體發(fā)育過(guò)程中,分化的結(jié)果使得細(xì)胞在形態(tài)和功能上　　　　　　　　,這是由于細(xì)胞內(nèi)伴隨著它們?cè)诎l(fā)育過(guò)程中時(shí)間、空間的變化,　　　　　　　　的調(diào)控使得細(xì)胞中合成了專(zhuān)一的　　　　　　。?(2)核移植①核移植:利用一個(gè)細(xì)胞的　　　　　　　　　　　來(lái)取代另一細(xì)胞中的細(xì)胞核,形成一個(gè)重建的“　　　　”。?②動(dòng)物的克隆繁殖
考向一　動(dòng)物細(xì)胞和組織培養(yǎng)【典例2-1】 下圖為動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過(guò)程示意圖,請(qǐng)回答下列問(wèn)題。
(1)容器A中放入的一般是幼齡動(dòng)物的器官或組織,原因是其細(xì)胞　　　　　　　　　　　、易于培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)先要剪碎,然后用　　　　　　　　　分散細(xì)胞,制成B瓶中的細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入C瓶中進(jìn)行的初次培養(yǎng)稱(chēng)為　　　　　　　　。?
(3)為保證無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境,B、C、D瓶中的培養(yǎng)基中需要添加一定量的　　　　　　　;還需要提供O2和CO2等氣體環(huán)境,CO2的作用主要是　　　　　　　　　　　　　　　　。?(4)動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí),通常要在培養(yǎng)基中補(bǔ)充一定濃度的某些物質(zhì)。下圖表示血清對(duì)正常細(xì)胞和癌細(xì)胞培養(yǎng)影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。據(jù)圖可知,培養(yǎng)　　　　　細(xì)胞一定需要添加血清。?
答案:(1)分裂能力強(qiáng)　胰蛋白酶　原代培養(yǎng)　(2)連續(xù)細(xì)胞系　異倍體　(3)抗生素　維持培養(yǎng)液的pH　(4)正常解析:(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是利用細(xì)胞增殖能力以獲取大量動(dòng)物細(xì)胞的技術(shù)。幼齡動(dòng)物的器官或組織中的細(xì)胞分裂能力強(qiáng),適宜培養(yǎng);胰蛋白酶處理可去除細(xì)胞粘連蛋白,使細(xì)胞分散開(kāi)來(lái);從機(jī)體中取出的細(xì)胞經(jīng)分散處理后立即進(jìn)行的培養(yǎng)稱(chēng)為原代培養(yǎng)。(2)能夠連續(xù)培養(yǎng)下去的細(xì)胞系稱(chēng)為連續(xù)細(xì)胞系,題中明確說(shuō)明這些細(xì)胞可無(wú)限增殖,故屬于連續(xù)細(xì)胞系;連續(xù)細(xì)胞系被認(rèn)為是發(fā)生了轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系,大多具有異倍體核型。(3)加入一定量的抗生素可殺滅病菌,防止對(duì)動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖造成影響;CO2的作用主要是維持動(dòng)物細(xì)胞正常生長(zhǎng)所需的pH。(4)據(jù)圖中實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,是否添加血清對(duì)癌細(xì)胞的數(shù)量影響不大,但明顯影響正常細(xì)胞的數(shù)量,故正常細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程一定要添加血清。
易混辨析比較動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、核移植與動(dòng)物細(xì)胞融合
考向二　動(dòng)物細(xì)胞融合及單克隆抗體制備【典例2-2】 請(qǐng)回答雜交瘤技術(shù)和單克隆抗體制備的有關(guān)問(wèn)題。(1)雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體時(shí),利用一定的物質(zhì),如生物誘導(dǎo)劑　　　　　　　　　　　　作介導(dǎo),使經(jīng)免疫的小鼠B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,篩選出融合的細(xì)胞再進(jìn)行細(xì)胞的　　　　　　　　培養(yǎng),獲得純系細(xì)胞,同時(shí)還要進(jìn)行　　　　　檢驗(yàn),以保證獲得的是所需的特定雜交瘤細(xì)胞。?(2)獲得雜交瘤細(xì)胞后,在體外培養(yǎng)時(shí)需要特別加入的天然成分是　　　　　　　　　　。?
(3)有關(guān)雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)的敘述,正確的是　　　。?A.用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)B.用滋養(yǎng)層細(xì)胞支持生長(zhǎng)C.能進(jìn)行傳代培養(yǎng)D.需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行研磨破碎獲得產(chǎn)物(4)現(xiàn)在欲利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)單克隆抗體,科研小組將與抗體形成有關(guān)的關(guān)鍵基因通過(guò)噬菌體導(dǎo)入到受體細(xì)胞,該技術(shù)的核心步驟是　　　　　　　　　　　　　　,噬菌體是這些關(guān)鍵基因的　　　　　。?
答案:(1)滅活的(仙臺(tái))病毒　克隆化　抗體　(2)動(dòng)物血清　(3)C　(4)構(gòu)建重組DNA分子　載體
解析:(1)雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體時(shí),利用一定的物質(zhì),如生物誘導(dǎo)劑滅活的(仙臺(tái))病毒作介導(dǎo),使經(jīng)免疫的小鼠B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,篩選出融合的細(xì)胞再進(jìn)行細(xì)胞的克隆化培養(yǎng),獲得純系細(xì)胞,同時(shí)還要進(jìn)行抗體檢驗(yàn),以保證獲得的是所需的特定雜交瘤細(xì)胞。(2)獲得雜交瘤細(xì)胞后,在體外培養(yǎng)時(shí)需要特別加入的天然成分是動(dòng)物血清。(3)雜交瘤細(xì)胞體外用液體培養(yǎng)基培養(yǎng),A項(xiàng)錯(cuò)誤;用滋養(yǎng)細(xì)胞支持生長(zhǎng),不是用滋養(yǎng)層細(xì)胞支持生長(zhǎng),B項(xiàng)錯(cuò)誤;雜交瘤細(xì)胞能進(jìn)行傳代培養(yǎng),C項(xiàng)正確;抗體為分泌蛋白,不需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行研磨破碎獲得產(chǎn)物,D項(xiàng)錯(cuò)誤。(4)現(xiàn)在欲利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)單克隆抗體,科研小組將與抗體形成有關(guān)的關(guān)鍵基因通過(guò)噬菌體導(dǎo)入受體細(xì)胞,該技術(shù)的核心步驟是形成重組DNA分子,噬菌體是這些關(guān)鍵基因的載體。
易錯(cuò)提醒(1)細(xì)胞融合完成的標(biāo)志是細(xì)胞核融合成一個(gè)核。(2)雜交瘤細(xì)胞的特性是既能無(wú)限增殖,又能產(chǎn)生大量特異抗體。(3)獲取單克隆抗體的兩個(gè)場(chǎng)所:若在培養(yǎng)基中進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng),則從培養(yǎng)液中提取;若在小鼠或其他動(dòng)物腹腔中培養(yǎng),則從腹水中提取。(4)在單克隆抗體制備過(guò)程中,一般認(rèn)為有兩次篩選過(guò)程,第一次是篩選出雜交瘤細(xì)胞(用選擇培養(yǎng)基),第二次是進(jìn)一步篩選出能產(chǎn)生人們所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。(5)用特定的選擇培養(yǎng)基篩選:未融合的細(xì)胞和同種細(xì)胞融合后形成的細(xì)胞(“BB”細(xì)胞、“瘤瘤”細(xì)胞)都會(huì)死亡,只有融合的雜交瘤細(xì)胞(“B瘤”細(xì)胞)才能生長(zhǎng)。(6)單克隆抗體優(yōu)點(diǎn):特異性強(qiáng)、靈敏度高,可大量制備。
考向三　動(dòng)物的克隆繁殖【典例2-3】 人的血清白蛋白在臨床上需求量很大,通常從人血中提取。由于艾滋病病毒(HIV)等人類(lèi)感染性病原體造成的威脅與日俱增,使人們對(duì)血液制品顧慮重重。如果將人的血清白蛋白基因?qū)肽膛＜?xì)胞中,那么利用牛的乳汁來(lái)生產(chǎn)血清白蛋白就成為可能。大致過(guò)程如下:a.將人的血清白蛋白基因?qū)氪菩阅膛Ｅ咛ゼ?xì)胞,形成重組細(xì)胞①;b.取出重組細(xì)胞①的細(xì)胞核,注入牛去核卵細(xì)胞中形成重組細(xì)胞②;c.電脈沖刺激重組細(xì)胞②,促使其形成早期胚胎;d.將胚胎移植到母牛的子宮中,最終發(fā)育成轉(zhuǎn)基因小牛。
請(qǐng)回答下列問(wèn)題。(1)重組細(xì)胞①的獲得是利用了　　　　　　　　技術(shù),它實(shí)現(xiàn)了奶牛胚胎細(xì)胞中的DNA與　　　　　　　　　　　　　的重組。?(2)重組細(xì)胞②的獲得是利用了克隆技術(shù)中的　　　　　　技術(shù),使重組細(xì)胞①的細(xì)胞核與牛的　　　　　　　　　　融合。?(3)由圖可知,動(dòng)物克隆技術(shù)的基礎(chǔ)是　　　。?A.動(dòng)物細(xì)胞融合B.動(dòng)物細(xì)胞的全能性C.動(dòng)物細(xì)胞和組織培養(yǎng)D.核移植(4)利用轉(zhuǎn)基因牛乳汁提取藥物工藝簡(jiǎn)單,甚至可直接飲用治病。如果將藥物蛋白基因移到動(dòng)物(如牛)的膀胱上皮細(xì)胞中,利用轉(zhuǎn)基因牛的尿液生產(chǎn)提取藥物比乳汁提取藥物的更大優(yōu)越性是:　　　　　　　　、　　　　　　　　　　　　　。?
(5)重組細(xì)胞②培養(yǎng)成早期胚胎利用了動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。下列與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)無(wú)密切關(guān)系的是　　　。?A.細(xì)胞全能性的揭示B.噬菌體的研究C.細(xì)胞周期調(diào)節(jié)控制機(jī)理的分析D.對(duì)癌變機(jī)理和衰老原因的研究
答案:(1)基因工程　人的血清白蛋白基因　(2)核移植　去核卵細(xì)胞　(3)C　(4)處于不同發(fā)育時(shí)期的動(dòng)物都可生產(chǎn)　雌性和雄性動(dòng)物都可生產(chǎn)　(5)B
解析:(1)基因工程可將目的基因——人的血清白蛋白基因與受體細(xì)胞牛胚胎細(xì)胞的DNA進(jìn)行重組。(2)克隆技術(shù)中的細(xì)胞核移植技術(shù)可將去核的牛卵細(xì)胞與含有目的基因的供體細(xì)胞核融合構(gòu)建重組細(xì)胞②。(4)建立膀胱生物反應(yīng)器的好處是可以不分動(dòng)物的性別及不同生長(zhǎng)發(fā)育期,均可產(chǎn)生所需藥物。(5)噬菌體是細(xì)菌病毒,無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu),A、C、D項(xiàng)所述的內(nèi)容都與細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)密不可分。

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