1.基因工程在農(nóng)牧業(yè)方面的應(yīng)用
從某些生物中分離出具有抗蟲功能的基因，將它導(dǎo)入作物中培育出具有抗蟲性的作物
轉(zhuǎn)基因抗蟲棉花、玉米、大豆、水稻和馬鈴薯等
科學(xué)家將來源于某些病毒、真菌等的抗病基因?qū)胫参镏?，培育出了轉(zhuǎn)基因抗病植物
轉(zhuǎn)基因抗病毒甜椒、番木瓜和煙草等
將降解或抵抗某種除草劑的基因?qū)胱魑?，可以培育出抗除草劑的作物品種
轉(zhuǎn)基因抗除草劑玉米、大豆、油菜和甜菜等
(2)改良植物的品質(zhì)：
我國科學(xué)家成功地將與植物花青素代謝相關(guān)的基因?qū)氚珷颗?，呈現(xiàn)出自然界中沒有的顏色變異，大大提高了觀賞價值。
將必需氨基酸含量多的蛋白質(zhì)編碼基因?qū)酥参镏?可以提高這種氨基酸的含量
優(yōu)良性狀的基因?qū)胫参?br/>(4)改善畜產(chǎn)品的品質(zhì)：
將腸乳糖酶基因?qū)肽膛；蚪M
轉(zhuǎn)基因牛分泌的乳汁中，乳糖的含量大大降低，而其他營養(yǎng)成分不受影響
(3)提高動物的生長速率：
將外源生長激素基因?qū)雱游矬w內(nèi)， 以提高動物的生長速率。
2.基因工程在醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域的應(yīng)用
我國生產(chǎn)的重組人干擾素、血小板生成素、促紅細胞生成素和粒細胞集落刺激因子等基因工程藥物均已投放市場。
細胞因子、抗體、疫苗和激素等
(1)對微生物或動植物的細胞進行基因改造生產(chǎn)藥物
可大量生產(chǎn)干擾素的大腸桿菌或酵母菌
乳腺生物反應(yīng)器或乳房生物反應(yīng)器
乳腺中特異表達的基因的啟動子等調(diào)控元件
(2)讓轉(zhuǎn)基因哺乳動物批量生產(chǎn)藥物
獲得乳腺生物反應(yīng)器的步驟與培育普通轉(zhuǎn)基因動物的步驟有什么區(qū)別？
培育乳腺生 反應(yīng)器時要選用乳腺中特異表達的基因的啟動子等調(diào)控元件與藥用蛋白基因重組在一起，目的是讓藥用蛋白基因只在乳腺細胞中表達。
4.用轉(zhuǎn)基因動物作為器官移植的供體
培育無免疫排斥的轉(zhuǎn)基因克隆豬器官
抑制抗原決定基因表達或除去抗原決定基因
在器官供體基因組中導(dǎo)入某種調(diào)節(jié)因子
用基因工程的方法，使外源基因得到高效表達的菌類。
基因工程構(gòu)建基因工程菌
生產(chǎn)食品工業(yè)用酶、氨基酸和維生素等。
3.基因工程在食品工業(yè)方面的應(yīng)用
將編碼牛凝乳酶的基因?qū)氪竽c桿菌、黑曲霉、酵母菌的基因組中，再通過工業(yè)發(fā)酵批量生產(chǎn)凝乳酶。
加工轉(zhuǎn)化糖漿需要的淀粉酶，加工烘烤食品用到的脂酶等也都可以通過構(gòu)建基因工程菌，然后用發(fā)酵技術(shù)大量生產(chǎn)。
乳腺生物反應(yīng)器與基因工程菌的比較
胰島素對治療糖尿病有積極的作用，為了批量生產(chǎn)人工胰島素，可以采用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將人胰島素基因轉(zhuǎn)移到微生物細胞中，隨后該胰島素基因指導(dǎo)微生物細胞產(chǎn)生人胰島素，可提取并收集胰島素，用于治療糖尿病病人
不同生物DNA分子的基本結(jié)構(gòu)相似，所有生物共用一套密碼子
利用基因工程批量生產(chǎn)人工胰島素得以實現(xiàn)的遺傳學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)是？
人的胰島素基因不能直接在大腸桿菌中正確表達出胰島素，其原因是？
真核細胞的基因結(jié)構(gòu)不同于原核細胞，其轉(zhuǎn)錄出的mRNA需加工后才能作為翻譯的模板，細菌中不存在此機制
1.(2023·廣東湛江二模)紅細胞生成素(EPO)是人體內(nèi)促進紅細胞生成的一種糖蛋白，可用于治療腎衰性貧血等疾病。由于天然EPO來源極為有限，某科研團隊采用基因工程培育轉(zhuǎn)基因羊作為乳腺生物反應(yīng)器，使其能合成EPO。下列有關(guān)敘述錯誤的是(　　)A．構(gòu)建表達載體時需將EPO基因插入乳腺蛋白基因的啟動子的上游B．一般情況下，該轉(zhuǎn)基因羊中的EPO基因只在羊的乳腺細胞中表達C．可用顯微注射技術(shù)將含有EPO基因的表達載體導(dǎo)入羊的受精卵中D．用PCR擴增人EPO基因，需要一段已知的EPO基因核苷酸序列
2.利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)羧酸酯酶(CarE)制劑的流程如下圖所示，下列敘述正確的是(　　)A．過程①需使用耐高溫的DNA聚合酶B．過程②需使用解旋酶和PCR獲取目的基因C．過程③使用的大腸桿菌細胞可用Na＋處理D．過程④可利用PCR技術(shù)檢測目的基因是否已導(dǎo)入受體細胞
3.(2024·廣東高三測試)近年來，我國在創(chuàng)新藥和高端醫(yī)療器械等方面取得長足發(fā)展，重組人干擾素α-1b是我國批準生產(chǎn)的第一個基因工程藥物。下圖為其生產(chǎn)原理示意圖?；卮鹣铝袉栴}：
(1)從淋巴細胞中能提取到干擾素mRNA，而肝臟細胞或肌肉細胞不能，造成這些細胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上存在差異的根本原因是________________。(2)PCR過程每次循環(huán)分為3步，其中發(fā)生引物與單鏈DNA結(jié)合的步驟稱為________，得到的產(chǎn)物一般通過________________的方法來鑒定。
(3)在構(gòu)建重組質(zhì)粒過程中，需用到的工具酶有____________________。要將成功轉(zhuǎn)入干擾素基因的工程菌篩選出來，所用的方法是_____________________。為保證工程菌不受其他雜菌的影響，培養(yǎng)前需用_____________________方法對培養(yǎng)基進行嚴格的滅菌。(4)若將干擾素分子上的一個半胱氨酸替換為絲氨酸，則這種改造的干擾素可在一定條件下延長保存時間，這屬于________工程應(yīng)用的領(lǐng)域。
濕熱(或高壓蒸汽)滅菌
1.蛋白質(zhì)工程崛起緣由
(1)基因工程的實質(zhì)及不足：
基因工程是將一種生物的基因轉(zhuǎn)移到另一種生物體內(nèi)，使后者可以產(chǎn)生它原本不能產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，進而表現(xiàn)出新性狀。
(2)基因工程的不足：
基因工程原則上只能生產(chǎn)自然界中已存在（天然）的蛋白質(zhì)。
天然蛋白質(zhì)是生物長期進化過程中形成的，它們的結(jié)構(gòu)和功能符合特定物種生存的需要，卻不一定完全符合人類生產(chǎn)和生活的需要。
[易錯提醒]　基因工程不會導(dǎo)致受體細胞或生物產(chǎn)生“新基因”或“新蛋白質(zhì)”。
蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系
改造現(xiàn)有蛋白質(zhì)，或制造一種新的蛋白質(zhì)
獲得滿足人類生產(chǎn)和生活需求的蛋白質(zhì)
蛋白質(zhì)發(fā)揮功能必須依賴正確的高級結(jié)構(gòu)，而蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜。
蛋白質(zhì)工程是在基因工程的基礎(chǔ)上，延伸出來的第二代基因工程，是涉及多學(xué)科的綜合科技工程。
是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過改造或合成基因，來改造現(xiàn)有蛋白質(zhì)，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類生產(chǎn)和生活的需求。
(3)蛋白質(zhì)工程的基本思路：
從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到并改變相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→獲得所需要的蛋白質(zhì)。
逆中心法則，與天然蛋白質(zhì)合成的過程相反
①利用蛋白質(zhì)工程研發(fā) 。②實例：如果將干擾素分子上的一個半胱氨酸變成 ，在一定條件下，可以延長保存時間。
①蛋白質(zhì)工程被廣泛用于改進 或開發(fā)新的工業(yè)用酶。②實例：枯草桿菌蛋白酶具有水解蛋白質(zhì)的作用，因此常被用于洗滌劑工業(yè)、絲綢工業(yè)等。
科學(xué)家正在嘗試改造某些參與調(diào)控光合作用的酶，以提高植物_________的效率，增加糧食的產(chǎn)量。
若要獲得抗鹽能力更強的抗鹽基因，可以對基因H進行改造，最終得到相應(yīng)的蛋白質(zhì)，該過程可以通過蛋白質(zhì)工程完成，該過程的基本思路是?
煙草是我國重要的經(jīng)濟作物，其栽培容易受到氣候、土壤等諸多生態(tài)因子的強烈制約，因而煙草的栽培區(qū)域受到限制。土壤中的鹽分是制約煙草生長的重要因素，它不僅造成煙草產(chǎn)量和品質(zhì)降低，同時還使土壤板結(jié)。
①預(yù)期耐鹽蛋白質(zhì)的功能；②設(shè)計耐鹽蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)；③推測應(yīng)有的氨基酸序列；④找到并改變相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因→獲得耐鹽能力更強的蛋白質(zhì))序列
1.釀酒酵母(一種酵母菌)在無氧條件下可以將木糖轉(zhuǎn)化為乙醇。首先，木糖還原酶利用NADPH(還原型輔酶Ⅱ)轉(zhuǎn)化木糖為木糖醇，然后木糖醇脫氫酶利用NAD＋(氧化型輔酶Ⅰ)轉(zhuǎn)化木糖醇為木酮糖，后者進一步在其他條件下轉(zhuǎn)化為乙醇?？茖W(xué)家利用蛋白質(zhì)工程對相關(guān)酶進行改造，顯著提高了乙醇的產(chǎn)量。下列相關(guān)說法錯誤的是(　　)A．NADPH供氫給木糖后不會轉(zhuǎn)化為NAD＋B．若兩種酶的比例不平衡，可能會造成木糖醇積累C．釀酒酵母的線粒體在無氧條件下基本不發(fā)揮作用D．科學(xué)家對相關(guān)酶改造的過程中，需要合成全新的基因
2.已知生物體內(nèi)有一種蛋白質(zhì)(P)，該蛋白質(zhì)是一種轉(zhuǎn)運蛋白，由305個氨基酸組成。如果將P分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸，240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸，改變后的蛋白質(zhì)(P1)不但保留P的功能，而且具有了酶的催化活性?；卮鹣铝袉栴}：(1)從上述資料可知，若要改變蛋白質(zhì)的功能，可以考慮對蛋白質(zhì)的_____________________進行改造。
(2)以P基因序列為基礎(chǔ)，獲得P1基因的途徑有改造____基因或合成______基因。所獲得的基因表達時是遵循中心法則的，中心法則的全部內(nèi)容包括_______________________的復(fù)制，以及遺傳信息在不同分子之間的流動，即_______________________________________________________________。(3)蛋白質(zhì)工程也被稱為第二代基因工程，其基本途徑是從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)，通過_____________________和______________________，進而確定相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列，據(jù)此獲得基因，再經(jīng)表達、純化獲得蛋白質(zhì)，之后還需要對蛋白質(zhì)的生物________進行鑒定。
DNA和RNA(或遺傳物質(zhì))　
DNA→RNA、RNA→DNA、RNA→蛋白質(zhì)(或轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄、翻譯)
設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)　
3.(2021·廣東選擇考)非細胞合成技術(shù)是一種運用合成生物學(xué)方法，在細胞外構(gòu)建多酶催化體系，獲得目標產(chǎn)物的新技術(shù)，其核心是各種酶基因的挖掘、表達等。我國科學(xué)家設(shè)計了4步酶促反應(yīng)的非細胞合成路線(如下圖)，可直接用淀粉生產(chǎn)肌醇(重要的醫(yī)藥食品原料)，以期解決高溫強酸水解方法造成的嚴重污染問題，并可以提高產(chǎn)率。
回答下列問題：(1)研究人員采用PCR技術(shù)從土壤微生物基因組中擴增得到目標酶基因。此外，獲得酶基因的方法還有___________________________ (答出兩種即可)。
從基因文庫中獲取、人工合成
(2)高質(zhì)量的DNA模板是成功擴增出目的基因的前提條件之一。在制備高質(zhì)量DNA模板時必須除去蛋白，方法有________________________________ _________(答出兩種即可)。
酶解法(使用蛋白酶進行水解)、高溫處理
(3)研究人員使用大腸桿菌BL21作為受體細胞、pET20b為表達載體分別進行4種酶的表達。表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時，首先應(yīng)制備________細胞。為了檢測目的基因是否成功表達出酶蛋白，需要采用的方法有_________________。
(4)依上圖所示流程，在一定的溫度、pH等條件下，將4種酶與可溶性淀粉溶液混合組成一個反應(yīng)體系。若這些酶最適反應(yīng)條件不同，可能導(dǎo)致的結(jié)果是__________________________。在分子水平上，可以通過改變____________________，從而改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，實現(xiàn)對酶特性的改造和優(yōu)化。
可溶性淀粉的分解效率降低
1.(2023·海南等級考)基因遞送是植物遺傳改良的重要技術(shù)之一，我國多個實驗室合作開發(fā)了一種新型基因遞送系統(tǒng)(切—浸—生芽Cut-Dip-Budding，簡稱CDB法)。圖1與圖2分別是利用常規(guī)轉(zhuǎn)化法和CDB法在某植物中遞送基因的示意圖。
回答下列問題。(1)圖1中，從外植體轉(zhuǎn)變成愈傷組織的過程屬于________；從愈傷組織到幼苗的培養(yǎng)過程需要的激素有生長素和____________，該過程還需要光照，其作用是_________________________________________________________。
誘導(dǎo)葉綠素形成，使幼苗能夠進行光合作用　
(2)圖1中的愈傷組織，若不經(jīng)過共培養(yǎng)環(huán)節(jié)，直接誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的植株可以保持植株A的___________。圖1中，含有外源基因的轉(zhuǎn)化植株A若用于生產(chǎn)種子，其包裝需標注_______________________。
(3)圖1與圖2中，農(nóng)桿菌侵染植物細胞時，可將外源基因遞送到植物細胞中的原因是______________________________________________________________________________________________________________。
農(nóng)桿菌細胞內(nèi)含Ti質(zhì)粒，當它侵染植物細胞后，能將Ti質(zhì)粒上的T-DNA轉(zhuǎn)移并整合到受體細胞染色體DNA上　
(4)與常規(guī)轉(zhuǎn)化法相比，采用CDB法進行基因遞送的優(yōu)點是______________________________________________________________(答出2點即可)。
不需要無菌操作、不需要進行植物組織培養(yǎng)、操作簡便(答出2點即可)
(4)已知某酶(PDS)缺失會導(dǎo)致植株白化。某團隊構(gòu)建了用于敲除PDS基因的CRISPR/Cas9基因編輯載體(含有綠色熒光蛋白標記基因)，利用圖2中的CDB法將該重組載體導(dǎo)入植株B，長出毛狀根，成功獲得轉(zhuǎn)化植株B。據(jù)此分析，從毛狀根中獲得陽性毛狀根段的方法是_______________________________，圖2中，鑒定導(dǎo)入幼苗中的基因編輯載體是否成功發(fā)揮作用的方法是_______________________________________________________________，依據(jù)是__________________________________________________________ _________________________________________________________________。
檢測毛狀根段是否有綠色熒光　
植物PDS中靶區(qū)域測序(或根據(jù)PDS基因的堿基序列設(shè)計引物進行PCR擴增)　
若導(dǎo)入幼苗的基因編輯載體成功發(fā)揮作用，則PDS基因被敲除,靶區(qū)域的測序就會出現(xiàn)序列缺失(或PCR無法擴增出條帶)　
2.(2023·湖南選擇考)某些植物根際促生菌具有生物固氮、分解淀粉和抑制病原菌等作用?；卮鹣铝袉栴}：(1)若從植物根際土壤中篩選分解淀粉的固氮細菌，培養(yǎng)基的主要營養(yǎng)物質(zhì)包括水和______________________。
(2)研究人員利用解淀粉芽孢桿菌H的淀粉酶編碼基因M構(gòu)建高效表達質(zhì)粒載體，轉(zhuǎn)入大腸桿菌成功構(gòu)建基因工程菌A。在利用A菌株發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶M過程中，傳代多次后，生產(chǎn)條件未變，但某子代菌株不再產(chǎn)生淀粉酶M。分析可能的原因是______________________________________________________________(答出兩點即可)。
淀粉酶編碼基因M發(fā)生突變；重組質(zhì)粒在大腸桿菌分裂過程中丟失
(2)現(xiàn)從植物根際土壤中篩選出一株解淀粉芽孢桿菌H，其產(chǎn)生的抗菌肽抑菌效果見下表。據(jù)表推測該抗菌肽對______________________________的抑制效果較好，若要確定其有抑菌效果的最低濃度，需在__________ μg·mL－1濃度區(qū)間進一步實驗。
金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌　
(4)研究人員通過肺上皮干細胞誘導(dǎo)生成肺類器官，可自組裝或與成熟細胞組裝成肺類裝配體，如下圖所示。肺類裝配體培養(yǎng)需要滿足適宜的營養(yǎng)、溫度、滲透壓、pH以及_________________________________________________________(答出兩點即可)等基本條件。肺類裝配體形成過程中是否運用了動物細胞融合技術(shù)？________(填“是”或“否”)。
無菌、無毒的環(huán)境，含95%空氣和5%CO2的氣體環(huán)境　
(5)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)是一種耐藥菌，嚴重危害人類健康。科研人員擬用MRSA感染肺類裝配體建立感染模型，來探究解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽是否對MRSA引起的肺炎有治療潛力。以下實驗材料中必備的是__________。①金黃色葡萄球菌感染的肺類裝配體②MRSA感染的肺類裝配體③解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽④生理鹽水⑤青霉素(抗金黃色葡萄球菌的藥物)⑥萬古霉素(抗MRSA的藥物)
3.(2022·湖南選擇考)水蛭是我國的傳統(tǒng)中藥材，主要藥理成分水蛭素為水蛭蛋白中重要成分之一，具有良好的抗凝血作用。擬通過蛋白質(zhì)工程改造水蛭素結(jié)構(gòu)，提高其抗凝血活性?；卮鹣铝袉栴}：(1)蛋白質(zhì)工程流程如下圖所示，物質(zhì)a是________，物質(zhì)b是________。在生產(chǎn)過程中，物質(zhì)b可能不同，合成的蛋白質(zhì)空間構(gòu)象卻相同，原因是________________________________________________。
mRNA上決定氨基酸的密碼子具有簡并性　
(2)蛋白質(zhì)工程是基因工程的延伸，基因工程中獲取目的基因的常用方法有____________________、____________和利用PCR技術(shù)擴增。PCR技術(shù)遵循的基本原理是_________________。(3)將提取的水蛭蛋白經(jīng)甲、乙兩種蛋白酶水解后，分析水解產(chǎn)物中的肽含量及其抗凝血活性，結(jié)果如下圖所示。推測兩種處理后酶解產(chǎn)物的抗凝血活性差異主要與肽的________(填“種類”或“含量”)有關(guān)，導(dǎo)致其活性不同的原因是___________________________________________________。
酶處理后形成的肽中氨基酸的種類、數(shù)目和排列順序不同　

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