2025年生物高考高三八省聯(lián)考真題匯編專題一現(xiàn)代生物技術(shù)-2025年1月“八省聯(lián)考”生物真題分類匯編-試卷下載-教習網(wǎng)

A. 蝸牛提取液具有纖維素酶和果膠酶活性，可去除細胞壁獲得原生質(zhì)體
B. 利用PEG處理可提高細胞膜的流動性，從而促進兩種原生質(zhì)體的融合
C. 用較高濃度的細胞分裂素處理雜種細胞產(chǎn)生的愈傷組織，有利于根的分化
D. 雜種細胞誘導形成具有雙親部分性狀的再生植株是基因選擇性表達的結(jié)果
【答案】C
【解析】
【分析】植物體細胞雜交：來自兩個不同植物的體細胞融合成一個雜種細胞（植物體細胞雜交技術(shù)），把雜種細胞培育成植株（植物組織培養(yǎng)技術(shù)）。
【詳解】A、植物細胞壁的主要成分是纖維素和果膠，根據(jù)酶的專一性原理，要分解植物細胞壁應該用纖維素酶和果膠酶，分析題意，科學家用蝸牛提取液處理煙草葉片和擬南芥根得到原生質(zhì)體，由此可知，蝸牛提取液具有纖維素酶和果膠酶活性，可去除細胞壁獲得原生質(zhì)體，A正確；
B、PEG是一種常用的細胞融合劑，其作用機制主要是通過增加細胞膜的流動性和破壞細胞膜的完整性來促進細胞融合，通過使用PEG，可以使得細胞膜之間的接觸面積增大，由此可知，利用PEG處理可提高細胞膜的流動性，從而促進兩種原生質(zhì)體的融合，B正確；
C、由愈傷組織到雜種植株培養(yǎng)過程中，需調(diào)整生長素與細胞分裂素比例以誘導根、芽分化，其中誘導生根時生長素與細胞分裂素的比例較高，而誘導芽分化時兩者比例較低，因此用生長素與細胞分裂素的比例較高處理雜種細胞產(chǎn)生的愈傷組織，有利于根的分化，C錯誤；
D、雜種細胞誘導形成具有雙親部分性狀的再生植株（發(fā)生了細胞分化過程等）是基因選擇性表達的結(jié)果，D正確。
故選C。
（2025普通高校招生適應性測試內(nèi)蒙古生物卷（八省聯(lián)考））2. 下列關(guān)于植物細胞工程敘述，正確的是（）
A. 誘導愈傷組織形成和后續(xù)培養(yǎng)過程中均需提供適宜的溫度和光照
B. 誘導愈傷組織再分化需改變激素的濃度和比例
C. 獲得的試管苗通常直接移栽大田
D. 獲得的脫毒苗具有抗病毒能力
【答案】B
【解析】
【分析】植物組織培養(yǎng)的過程為：離體的植物組織，器官或細胞經(jīng)過脫分化（避光）形成愈傷組織；愈傷組織經(jīng)過再分化（需光）過程形成胚狀體，進一步發(fā)育形成植株。決定植物脫分化和再分化的關(guān)鍵因素是植物激素的種類和比例，特別是生長素和細胞分裂素的協(xié)同作用在組織培養(yǎng)過程中非常重要。
【詳解】A、誘導愈傷組織形成過程中不需要光照，A錯誤；
B、生長素與細胞分裂素比值高時有利于促進分化形成根，細胞分裂素與生長素比值高時，有利于促進分化形成芽，生長素和細胞分裂素的濃度、比例都會影響植物細胞的發(fā)育方向，因此誘導愈傷組織再分化需改變激素的濃度和比例，B正確；
C、獲得的幼苗需要先移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中，待其長狀后再移栽到大田中，C錯誤；
D、莖尖等分裂旺盛部位無病毒感染，利用莖尖分生組織能培養(yǎng)出無病毒且保持優(yōu)良性狀的幼苗，即脫毒苗，脫毒苗不等于抗毒苗，即獲得的脫毒苗不具備抗病毒能力，D錯誤。
故選B。
（2025普通高校招生適應性測試內(nèi)蒙古生物卷（八省聯(lián)考））3. 動物細胞培養(yǎng)時操作不當會造成“黑膠蟲”細菌的污染，該菌對氯霉素敏感。下列敘述正確的是（）
A. 配制細胞培養(yǎng)基時，加血清（含細胞生長必需的蛋白）和氯霉素后濕熱滅菌
B. 在加入氯霉素防治“黑膠蟲”污染過程中，需要考慮細胞和細菌生長雙重因素
C. 考察“黑膠蟲”污染程度時，應取細胞培養(yǎng)液，直接涂布在平板上培養(yǎng)后計數(shù)
D. 采用更換培養(yǎng)基、胰蛋白酶處理和分瓶培養(yǎng)等操作可清除“黑膠蟲”污染
【答案】B
【解析】
【分析】微生物培養(yǎng)過程中要進行無菌操作，關(guān)鍵就在于防止外來雜菌的入侵，其中消毒和滅菌是常用的防止雜菌入侵的方法。
微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。
【詳解】A、配制細胞培養(yǎng)基時，濕熱滅菌后通過過濾滅菌加入血清（含細胞生長必需的蛋白）和氯霉素，A錯誤；
B、在加入氯霉素防治“黑膠蟲”污染過程中，需要考慮細胞和細菌生長雙重因素，保證動物細胞的正常生長，同時抑制細菌的生長，B正確；
C、考察“黑膠蟲”污染程度時，應取細胞培養(yǎng)液，稀釋后涂布在平板上培養(yǎng)，待菌落數(shù)目穩(wěn)定后計數(shù)，C錯誤；
D、采用更換培養(yǎng)基、胰蛋白酶處理和分瓶培養(yǎng)等操作都不能清除“黑膠蟲”污染，D錯誤。
故選B。
（2025普通高校招生適應性測試內(nèi)蒙古生物卷（八省聯(lián)考））4. 下列有關(guān)牛體外受精的敘述錯誤的是（）
A. 精子需經(jīng)過獲能步驟，才可用于體外受精
B. 卵母細胞需培養(yǎng)至MⅡ期，與精子結(jié)合完成受精
C. 體外受精需加入聚乙二醇等誘導精卵結(jié)合
D. 精子入卵后卵細胞膜發(fā)生生理反應，阻止其他精子進入
【答案】C
【解析】
【分析】哺乳動物的體外受精主要包括卵母細胞的采集和培養(yǎng)、精子的采集和獲能和受精等幾個主要步驟。
【詳解】A、體外受精時，采集到的成熟精子經(jīng)獲能處理后才具有受精能力，A正確；
B、動物排出的可能是初級卵母細胞也可能是次級卵母細胞，都要在輸卵管內(nèi)進一步成熟，達到減數(shù)第二次分裂中期時，才具備與精子受精的能力，B正確；
C、聚乙二醇常用于細胞融合，而不是體外受精過程，C錯誤；
D、卵細胞膜反應是指精子外膜和卵黃膜融合，精子入卵后，卵黃膜會拒絕其他精子再進入卵內(nèi)過程，這是防止多精入卵的第二道屏障，D正確。
故選C。
(2025年普通高校招生選擇性考試適應性演練陜西生物)5. 基于我國傳統(tǒng)酸醋工藝，一種以果汁為原料進行液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)果醋的流程如圖。下列敘述錯誤的是（）
A. 制取果汁時添加果膠酶可提高果汁產(chǎn)量，處理①加糖可增加碳源
B. 醋酸發(fā)酵階段通入充足的氧氣有利于微生物將乙醇轉(zhuǎn)化為乙酸
C. 酒精發(fā)酵和醋酸發(fā)酵的微生物呼吸方式相同，最適生長溫度不同
D. 發(fā)酵生產(chǎn)結(jié)束后，處理②需根據(jù)果醋保存時間選擇消毒或滅菌方法
【答案】C
【解析】
【分析】1、酵母菌在有氧和無氧的條件下都能生活：在有氧時，酵母菌大量繁殖，但是不起到發(fā)酵效果；在無氧時，繁殖速度減慢，但是此時可以進行發(fā)酵。
2、醋酸菌好氧性細菌，當缺少糖源時和有氧條件下，可將乙醇（酒精）氧化成醋酸；當氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸。
【詳解】A、制取果汁時添加果膠酶可提高果汁產(chǎn)量，因為果膠酶能分解果膠，使不溶性的果膠變成可溶性的半乳糖醛酸，因而可以提高果汁產(chǎn)量，處理①中加糖可增加碳源，為酒精發(fā)酵提供充足的底物，A正確；
B、醋酸菌是好氧菌，醋酸發(fā)酵階段通入充足的氧氣有利于微生物將乙醇轉(zhuǎn)化為乙酸，B正確；
C、酒精發(fā)酵和醋酸發(fā)酵的微生物呼吸方式相同，前者涉及的微生物是酵母菌，利用的是酵母菌的無氧呼吸，后者涉及的微生物主要是醋酸菌，醋酸菌是好氧菌，二者最適生長溫度不同，醋酸菌適宜的溫度為30～35℃，酵母菌適宜的溫度范圍是18～30℃，C錯誤；
D、發(fā)酵生產(chǎn)結(jié)束后，處理②需根據(jù)果醋保存時間選擇消毒或滅菌方法，D正確。
故選C。
(2025年1月八省聯(lián)考·四川生物)6. 根據(jù)抗菌特性可將抗菌劑分為抑菌劑和殺菌劑，其中抑菌劑可抑制細菌生長，殺菌劑能殺死細菌。為分析抗菌劑的抗菌特性，有人將不同抗菌劑分別添加到培養(yǎng)的細菌懸液中，用稀釋涂布平板法或顯微鏡直接計數(shù)法測定細菌數(shù)量，評估細菌的生長情況，變化趨勢曲線如圖所示（不考慮抗菌劑殘留對計數(shù)的影響），其中曲線1為僅添加無菌水的實驗結(jié)果。下列敘述錯誤的是（）
A. 添加抑菌劑后，通過稀釋涂布平板法進行計數(shù)，統(tǒng)計的細菌數(shù)量會保持不變
B. 若添加某抗菌劑后兩種方法計數(shù)結(jié)果為曲線2和3，其差異是由于死菌被計數(shù)
C. 曲線2代表添加抑菌劑后的細菌數(shù)量，曲線3代表添加殺菌劑后的細菌數(shù)量
D. 若添加某抗菌劑后兩種方法統(tǒng)計的細菌數(shù)量均下降，推測細菌出現(xiàn)裂解而死亡
【答案】A
【解析】
【分析】據(jù)圖分析，曲線1為僅添加無菌水的實驗結(jié)果；曲線2表示添加抑菌劑的實驗結(jié)果；曲線3表示添加殺菌劑的實驗結(jié)果。
【詳解】A、添加抑菌劑后，抑菌劑會抑制細菌的生長，細菌的正常死亡仍會發(fā)生，且通過稀釋涂布平板法進行計數(shù)時會存在誤差等因素，統(tǒng)計的細菌數(shù)量不會保持不變，A錯誤；
B、稀釋涂布平板法計數(shù)的是活菌，而顯微鏡直接計數(shù)法統(tǒng)計的死菌和活菌的總數(shù)，若添加某抗菌劑后兩種方法計數(shù)結(jié)果為曲線2和3，其差異是由于死菌被計數(shù)，B正確。
C、添加抗菌劑后，曲線2細菌數(shù)量的對數(shù)值不變，曲線3細菌數(shù)量的對數(shù)值下降，說明曲線2代表添加抑菌劑后的細菌數(shù)量，曲線3代表添加殺菌劑后的細菌數(shù)量，C正確；
D、稀釋涂布平板法計數(shù)的是活菌，而顯微鏡直接計數(shù)法統(tǒng)計的死菌和活菌的總數(shù)，若細菌裂解死亡，則死細菌無法被計數(shù)，因此若添加某抗菌劑后兩種方法統(tǒng)計的細菌數(shù)量均下降，推測細菌出現(xiàn)裂解而死亡，D正確。
故選A。
（2025普通高校招生適應性測試內(nèi)蒙古生物卷（八省聯(lián)考））7. 谷氨酸棒狀桿菌生長的最適pH為7.0，通過以下代謝途徑發(fā)酵生產(chǎn)L-谷氨酰胺。下列敘述正確的是（）
A. 提高谷氨酸脫氫酶和谷氨酸合成酶的活性有利于提高L-谷氨酰胺產(chǎn)量
B. 發(fā)酵初期控制pH為7.0，后調(diào)為5.6，有利于提高L-谷氨酰胺產(chǎn)量
C. 通過顯微鏡觀察，可以判斷發(fā)酵過程中是否發(fā)生球狀細菌污染
D. 發(fā)酵結(jié)束后，采用過濾、沉淀的方法將菌體分離和干燥即可獲得產(chǎn)品
【答案】B
【解析】
【分析】1、發(fā)酵是利用微生物，在適宜的條件下，將原料經(jīng)過特定的代謝途徑轉(zhuǎn)化為人類所需要的產(chǎn)物的過程。發(fā)酵過程：菌種選育→菌種的擴大培養(yǎng)→培養(yǎng)基的配制→滅菌和接種→發(fā)酵條件的控制→分離和提純。2、發(fā)酵工程生產(chǎn)的產(chǎn)品主要包括微生物的代謝物、酶及菌體本身。
3、產(chǎn)品不同，分離提純的方法一般不同。（1）如果產(chǎn)品是菌體，可采用過濾，沉淀等方法將菌體從培養(yǎng)液中分離出來。（2）如果產(chǎn)品是代謝產(chǎn)物，可用萃取、蒸餾、離子交換等方法進行提取。
4、發(fā)酵過程中要嚴格控制溫度、pH、溶氧、通氣量與轉(zhuǎn)速等發(fā)酵條件。
5、發(fā)酵過程般來說都是在常溫常壓下進行，條件溫和、反應安全，原料簡單、污染小，反應專一性強，因而可以得到較為專一的產(chǎn)物。
【詳解】A、由圖可知，提高谷氨酸脫氫酶和谷氨酰胺合成酶的活性有利于提高L-谷氨酰胺產(chǎn)量，但谷氨酸合成酶會使L-谷氨酰胺再轉(zhuǎn)化為L-谷氨酸，反而降低L-谷氨酰胺產(chǎn)量，A錯誤；
B、谷氨酸棒狀桿菌生長的最適pH為7.0，谷氨酰胺合成酶最適pH為5.6，因此發(fā)酵初期控制pH為7.0，有利于增加谷氨酸棒狀桿菌的數(shù)量，后調(diào)為5.6，有利于提高谷氨酰胺合成酶的活性，進而提高L-谷氨酰胺產(chǎn)量，B正確；
C、通過顯微鏡觀察，不能判斷發(fā)酵過程中是否發(fā)生球狀細菌污染，可利用稀釋涂布平板法，通過觀察菌落特征，判斷是否發(fā)生球狀細菌污染，C錯誤；
D、L-谷氨酰胺是細胞代謝產(chǎn)物，對細胞代謝產(chǎn)物可通過提取、分離和純化措施來獲得產(chǎn)品，D錯誤。
故選B。
(2025年1月普通高校適應性測試河南生物)8. 中藥材懷菊含有多種活性物質(zhì)，具有清熱、明目等功效。植物組織培養(yǎng)技術(shù)可用于懷菊的脫毒和快速繁殖。下列敘述正確的是（）
A. 懷菊中含有的次生代謝物通常是懷菊基本生命活動所必需的
B. 懷菊快速繁殖過程中產(chǎn)生的體細胞突變可通過無性生殖遺傳
C. 利用懷菊的莖段作為外植體，通過植物組織培養(yǎng)可獲得脫毒苗
D. 生芽培養(yǎng)基中細胞分裂素與生長素的比值比生根培養(yǎng)基中的小
【答案】B
【解析】
【分析】植物組織培養(yǎng)過程是：離體的植物器官、組織或細胞脫分化形成愈傷組織，然后再分化生成根、芽，最終形成植物體。植物組織培養(yǎng)依據(jù)的原理是植物細胞的全能性。
【詳解】A、懷菊中含有初生代謝物通常是懷菊基本生命活動所必需的，而次生代謝物不是懷菊基本生命活動所必需的，A錯誤；
B、懷菊快速繁殖過程中產(chǎn)生的體細胞突變可通過無性生殖遺傳，該過程的原理是植物細胞的全能性，B正確；
C、利用懷菊的莖尖作為外植體，通過植物組織培養(yǎng)可獲得脫毒苗，因為莖尖中幾乎不帶毒，C錯誤；
D、生芽培養(yǎng)基中細胞分裂素與生長素的比值比生根培養(yǎng)基中的大，進而促進生芽，生長素偏多時有利于生根，D錯誤。
故選B。
(2025年1月普通高校適應性測試河南生物)9. 我國具有悠久的釀酒文化和歷史。《天工開物》中有“古來曲造酒，蘗造醴”的記載，“曲”指由谷物培養(yǎng)微生物所制成的發(fā)酵劑，“蘗”指發(fā)芽的谷物，“醴”指甜酒。古人在冬季釀酒時，常將谷物封存在陶器中并埋藏于地下進行保溫。下列敘述錯誤的是（）
A. 釀酒過程中密封的主要目的是避免雜菌污染，從而提高酒的品質(zhì)
B. “曲”中含有大量的酵母菌，溫度是影響酵母菌生長的重要因素
C. “造醴”時選擇“蘗”的原因是發(fā)芽的谷物會釋放更多的淀粉酶
D. “蘗造醴”時大部分糖的分解和代謝物的生成都在發(fā)酵階段完成
【答案】A
【解析】
【分析】1、果酒的制作離不開酵母菌，酵母菌是兼性厭氧型生物，在有氧條件下，酵母菌進行有氧呼吸，大量繁殖，在無氧條件下，酵母菌進行酒精發(fā)酵。溫度是酵母菌生長和發(fā)酵的重要條件，20℃左右，酒精發(fā)酵時，一般將溫度控制在18~30℃，在葡萄酒自然發(fā)酵過程當中，其主要作用的是附著在葡萄皮上的野生酵母菌。
2、參與果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陳代謝類型是異養(yǎng)需氧型。果醋制作的原理：當氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的果糖分解成醋酸。當缺少糖源時，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰賹⒁胰┳優(yōu)榇姿帷?br>【詳解】A、釀酒過程中密封的主要目的是為酵母菌無氧呼吸創(chuàng)造無氧環(huán)境，從而提高酒的品質(zhì)，A錯誤；
B、“曲”中含有大量的酵母菌，溫度是影響酵母菌生長的重要因素，因此發(fā)酵過程中溫度控制在25℃左右，B正確；
C、“造醴”時選擇“蘗”的原因是發(fā)芽的谷物會釋放更多的淀粉酶，有利于多糖的分解，C正確；
D、“蘗造醴”時大部分糖的分解和代謝物的生成都在發(fā)酵階段完成，此后需要在低溫、密閉的條件下保存一段時間繼續(xù)進行后續(xù)發(fā)酵，D正確。
故選A。
(2025年1月普通高考招生適應性測試云南生物)10. 人參皂苷具有重要的藥用價值，可通過植物細胞培養(yǎng)生產(chǎn)。下列說法錯誤的是（）
A. 外植體消毒需用酒精和次氯酸鈉溶液
B. 外植體脫分化形成愈傷組織需要光照和氧氣
C. 可通過液體培養(yǎng)獲得大量愈傷組織細胞
D. 人參皂苷屬于植物細胞的次生代謝物
【答案】B
【解析】
【分析】1、植物組織培養(yǎng)是一種無性繁殖技術(shù)，通過從植物體分離出所需的組織、器官或細胞，在無菌條件下接種在含有營養(yǎng)物質(zhì)及植物激素的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟價值的其他產(chǎn)品。該技術(shù)主要包括脫分化產(chǎn)生愈傷組織，再分化形成再生植物。
2、植物代謝會產(chǎn)生一些一般認為不是植物基本的生命活動所必需的產(chǎn)物—次生代謝物。
【詳解】A、外植體在接種于培養(yǎng)基培養(yǎng)時，需先后用酒精和次氯酸鈉溶液進行消毒，消毒流程為：先用流水充分沖洗后的外植體用酒精消毒30s，然后立即用無菌水清洗2?3次，再用次氯酸鈉溶液處理30min后，立即用無菌水清洗2?3次，A正確；
B、脫分化形成愈傷組織過程中，需要遮光處理，不需要光照，B錯誤；
C、植物細胞的培養(yǎng)一般使用液體培養(yǎng)基，因此可通過液體培養(yǎng)獲得大量愈傷組織細胞，C正確；
D、次生代謝物是指植物代謝產(chǎn)生的一些一般認為不是植物基本的生命活動所必需的產(chǎn)物，因此，人參皂苷屬于植物細胞的次生代謝物，D正確。
故選B。
(2025年1月普通高考招生適應性測試云南生物)11. Hv-Lv肽鏈是抗體與抗原識別并結(jié)合的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)。為篩選特異性高、結(jié)合能力強的Hv-Lv肽鏈，將編碼Hv-Lv肽鏈的DNA片段與絲狀噬菌體固有外殼蛋白pⅧ的基因連接并一起表達，最后用固定化抗原篩選（過程如圖）。
下列說法錯誤的是（）
A. Hv-LvDNA片段上游需要設計并連接啟動子
B. Hv-LvDNA片段上無需連接標記基因
C. 目標是獲得能耐受多次沖洗的噬菌體
D. 實驗過程須嚴格遵循生物防護措施
【答案】C
【解析】
【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測與鑒定。
【詳解】A、啟動子位于基因的上游，是RNA聚合酶識別與結(jié)合的位點，可用于驅(qū)動基因的轉(zhuǎn)錄，故Hv-LvDNA片段上游需要設計并連接啟動子，A正確；
B、Hv-Lv肽鏈是抗體與抗原識別并結(jié)合的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)，而Hv-LvDNA可表達出Hv-Lv肽鏈，該技術(shù)中Hv-LvDNA屬于目的基因，無需連接標記基因，B正確；
C、結(jié)合題意可知，該過程目的是篩選特異性高、結(jié)合能力強的Hv-Lv肽鏈，C錯誤；
D、實驗過程須嚴格遵循生物防護措施，盡可能避免可能會帶來的安全問題，D正確。
故選C。
(2025年1月八省聯(lián)考·四川生物)12. 細菌中的蛋白激酶Y感受外界刺激后，利用ATP將特異性底物A蛋白磷酸化，改變A蛋白的活性從而應答外界刺激，調(diào)控細菌的生長。研究者將Y基因（編碼蛋白激酶Y）與GFP基因（編碼綠色熒光蛋白）拼接成Y-GFP融合基因（Y-GFP基因），導入載體，并表達出融合蛋白（Y-GFP蛋白），以分析蛋白激酶Y的功能，實驗過程如圖所示。回答下列問題。
（1）Y基因含有735個堿基對（bp），其編碼的肽鏈含有__________個氨基酸。通過PCR分別擴增Y基因與GFP基因，配制的兩個反應體系中不同的有__________（填標號）。
a．模板 b．引物 c．DNA聚合酶 d．反應緩沖液
（2）構(gòu)建Y基因與GFP基因的融合基因時，應將Y基因中編碼終止密碼子的序列刪除，理由是__________。
（3）據(jù)圖步驟一分析，為確保Y-GFP基因插入載體后完整表達，在構(gòu)建重組基因表達載體時不能選擇EcRI限制酶，理由是__________。
（4）為檢測Y-GFP蛋白的激酶活性，用Y-GFP蛋白、A蛋白和ATP組合實驗，四組實驗的條件及電泳結(jié)果如圖步驟二所示。磷酸化的A蛋白可被磷酸化抗體特異性識別。若Y-GFP蛋白有激酶活性，則后續(xù)實驗用磷酸化抗體檢測，能從電泳條帶檢測到信號的是__________泳道（從泳道①-④中選填序號），從Y-GFP蛋白功能角度分析，理由是_________________，利用表達的具有綠色熒光的Y-GFP蛋白還可開展的實驗有__________（答出1個即可）。
【答案】（1） ①. 245 ②. a、b
（2）核糖體移動到終止密碼子多肽鏈就斷開，蛋白GFP就不能翻譯出來
（3）Y基因結(jié)構(gòu)內(nèi)部含有EcRI限制酶的酶切位點，Y基因結(jié)構(gòu)會被EcRI限制酶破壞
（4） ①. ④ ②. 磷酸化的A蛋白可被磷酸化抗體特異性識別，A蛋白的磷酸化需要蛋白激酶Y和ATP同時存在 ③. 分析A蛋白被磷酸化的水平
【解析】
【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。
（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。
（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ㄊ歉惺軕B(tài)細胞法。
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。
【小問1詳解】
基因片段上的堿基數(shù)目與轉(zhuǎn)錄出的mRNA上的堿基與轉(zhuǎn)錄出的氨基酸數(shù)目比例為6:3:1，不考慮終止密碼子，則該蛋白質(zhì)最多由735÷3=245個氨基酸組成。PCR反應進行的條件：引物、酶、dNTP、模板和緩沖液。進行PCR擴增目的基因時，配制的兩個反應體系中不同的有模板（待擴增的DNA片段）、引物。
故選ab。
【小問2詳解】
從構(gòu)建好的重組質(zhì)粒上看，GFP基因位于目的基因下游，若構(gòu)建Y基因與GFP基因的融合基因時設計Y基因中編碼終止密碼子，核糖體移動到終止密碼子多肽鏈就斷開，蛋白GFP就不能被翻譯出來。
【小問3詳解】
據(jù)圖步驟一中的Y基因信息可知Y基因結(jié)構(gòu)內(nèi)部含有EcRI限制酶的酶切位點，所以在構(gòu)建重組基因表達載體時不能選擇EcRI限制酶，否則Y基因結(jié)構(gòu)會被破壞。
【小問4詳解】
若Y-GFP蛋白有激酶活性，則A蛋白會被磷酸化，而磷酸化的A蛋白可被磷酸化抗體特異性識別，所以可以用磷酸化抗體檢測是否存在磷酸化的A蛋白。根據(jù)電泳結(jié)果可知若后續(xù)實驗用磷酸化抗體檢測，能從電泳條帶檢測到信號的是④泳道。Y-GFP蛋白具有使A蛋白被磷酸化的功能，利用這一特性，還可用表達具有綠色熒光的Y-GFP蛋白來分析A蛋白被磷酸化的水平。
（2025普通高校招生適應性測試內(nèi)蒙古生物卷（八省聯(lián)考））13. 在人胰島素A鏈基因前端加入甲硫氨酸編碼序列，置于β-半乳糖苷酶基因（不含終止編碼序列）末端，插入到質(zhì)粒中，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌（缺失內(nèi)源性β-半乳糖苷酶基因），經(jīng)培養(yǎng)、切割和純化等得到成熟胰島素A鏈，回答下列問題：
（1）使用限制酶______和______對質(zhì)粒和插入DNA片段進行切割。
（2）在轉(zhuǎn)化大腸桿菌前，一般先用______處理大腸桿菌細胞，使其處于容易吸收重組DNA分子的生理狀態(tài)。
（3）重組DNA分子在大腸桿菌中開始轉(zhuǎn)錄時，RNA聚合酶首先結(jié)合的位點是______。
（4）將經(jīng)過轉(zhuǎn)化的大腸桿菌涂布在含氨芐青霉素和X-gal的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，若觀察到______色菌落，可以確定大腸桿菌成功表達胰島素A鏈，原因是______。另一種顏色的菌落中可能不含重組DNA分子，在不考慮突變的情況下，這些菌落不含重組DNA分子的原因是______。
（5）溴化氰可以在甲硫氨酸殘基C端切割肽鏈，成熟的人胰島素A鏈不含甲硫氨酸殘基。使用溴化氰在甲硫氨酸殘基C端切割的目的是______。
【答案】（1） ①. HindIII ②. BamHI
（2）Ca2＋（3）啟動子
（4） ①. 藍 ②. 大腸桿菌缺失內(nèi)源性β-半乳糖苷酶基因，而導入成功后含有內(nèi)源性β-半乳糖苷酶基因，表達出的β-半乳糖苷酶分解X-gal產(chǎn)生藍色 ③. z目的基導入不成功因
（5）保證目的基因與質(zhì)粒的連接
【解析】
【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測與鑒定。
【小問1詳解】
據(jù)圖分析，EcRI和EcRV都會破壞目的基因，故不能選擇，且SacI會破壞復制原點，也不能選擇，則目的基因左側(cè)只能選擇BamHI，右側(cè)應選擇與質(zhì)粒共同的酶，即HindIII，故使用限制酶BamHI和HindIII對質(zhì)粒和插入DNA片段進行切割。
【小問2詳解】
在轉(zhuǎn)化大腸桿菌前，一般先用Ca2＋處理大腸桿菌細胞，使其處于容易吸收重組DNA分子的生理狀態(tài)。
【小問3詳解】
啟動子是RNA聚合酶識別與結(jié)合的位點，可用于驅(qū)動基因的轉(zhuǎn)錄，故重組DNA分子在大腸桿菌中開始轉(zhuǎn)錄時，RNA聚合酶首先結(jié)合的位點是啟動子。
【小問4詳解】
分析題意，大腸桿菌缺失內(nèi)源性β-半乳糖苷酶基因，若導入成功，則重組質(zhì)粒中含有β-半乳糖苷酶基因，表達出的β-半乳糖苷酶分解X-gal產(chǎn)生藍色；另一種顏色（白色）的菌落中可能不含重組DNA分子，在不考慮突變的情況下，這些菌落不含重組DNA分子的原因是導入率并非100%，故可能是因為導入不成功。
【小問5詳解】
分析題意，溴化氰可以在甲硫氨酸殘基C端切割肽鏈，成熟的人胰島素A鏈不含甲硫氨酸殘基。使用溴化氰在甲硫氨酸殘基C端切割的目的是保證目的基因與質(zhì)粒的正確連接。
(2025年普通高校招生選擇性考試適應性演練陜西生物)11. 我國科學家利用體細胞核移植技術(shù)成功克隆了瀕臨滅絕的某地方牛種。下列敘述錯誤的是（）
A. 從該牛種耳上取的體細胞培養(yǎng)室需在合成培養(yǎng)基中加入血清
B. 從牛卵巢中采集的卵母細胞需要在體外培養(yǎng)至MⅡ期
C. 代孕母牛為重構(gòu)胚發(fā)育提供空間和營養(yǎng)，不會影響犢牛的遺傳物質(zhì)
D. 胚胎移植前需要對供體牛與受體牛進行同期發(fā)情處理
【答案】D
【解析】
【分析】動物細胞核移植是指將動物的一個細胞的細胞核移入一個去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，繼而發(fā)育成動物個體的技術(shù)。
【詳解】A、由于人們對細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)尚未全部研究清楚，因此在使用合成培養(yǎng)基時，通常需要加入血清等一些天然成分，A正確；
B、從牛卵巢中采集的卵母細胞需要在體外培養(yǎng)至MⅡ期才具備與精子受精的能力，B正確；
C、代孕母牛為重構(gòu)胚發(fā)育提供空間和營養(yǎng)，沒有為犢牛提供遺傳物質(zhì)，不會影響犢牛的遺傳物質(zhì)，C正確；
D、體細胞核移植技術(shù)中，通常不需要對供體進行同期發(fā)處理，D錯誤。
故選D。
(2025年普通高校招生選擇性考試適應性演練陜西生物)14. 科研人員基于合成生物學遠離在大腸桿菌中構(gòu)建了合成產(chǎn)物Z的完整途徑，其基因表達載體如圖（a），基因1、2和3為該途徑的必須基因，基因大小分別為2650 bp、1240 bp和3476 bp?；卮鹣铝袉栴}。

（1）圖（a）中，構(gòu)建基因表達載體時用到的酶是_____，片段X是_____。
（2）基因表達載體導入大腸桿菌前，需要用Ca2+處理大腸桿菌使其處于一種_____的生理狀態(tài)，導入后在含卡那霉素的培養(yǎng)基上篩選到3個抗性菌落，分別對其所含DNA進行PCR和瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果如圖（b）。據(jù)圖可知，PCR時選用的引物是對圖（a）中的_____，選擇該引物對進行鑒定的原因是_____；菌落B中未檢測到目標條帶，其原因是_____。
（3）工程菌株合成產(chǎn)物Z的產(chǎn)量受到溫度、pH和溶解氧等發(fā)酵條件的影響，請針對其中任一因素，探究其對產(chǎn)物Z產(chǎn)量的影響，寫出簡要的實驗思路_____。
【答案】（1） ①. 限制酶、DNA連接酶 ②. 復制原點
（2） ①. 感受態(tài) ②. 引物2和引物5 ③. 兩種引物擴增的區(qū)段包含了完整的基因2、基因1和基因3的部分片段 ④. 菌落B中導入的是普通質(zhì)粒而非重組質(zhì)粒
（3）將工程菌株隨機分成若干份，分別培養(yǎng)在一系列不同溫度（或PH或溶解氧）的培養(yǎng)液中，其它環(huán)境條件相同且適宜，一段時間后測定產(chǎn)物Z的產(chǎn)量
【解析】
【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：目的基因的獲??；基因表達載體的構(gòu)建；將目的基因?qū)胧荏w細胞；目的基因的檢測與鑒定。
【小問1詳解】
構(gòu)建基因表達載體時用到的酶是限制酶、DNA連接酶，利用限制酶切割質(zhì)粒和目的基因所在的DNA片段獲得相同的黏性末端，然后利用DNA連接酶連接質(zhì)粒和目的基因獲得重組DNA分子。質(zhì)粒上一般包含啟動子、終止子、復制原點、標記基因（抗性基因），結(jié)合圖（a）分析，片段X是復制原點。
【小問2詳解】
基因表達載體導入大腸桿菌前，需要用Ca2+處理大腸桿菌使其處于一種感受態(tài)的生理狀態(tài)，這樣有利于重組DNA分子的導入。
導入后在含卡那霉素的培養(yǎng)基上篩選到3個抗性菌落，分別對其所含DNA進行PCR和瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果如圖（b）。電泳檢測的目的判斷3個抗性菌落是否都含有目的基因（基因1、2和3），電泳結(jié)果顯示，菌落A和C電泳條帶顯示基因大小介于2000~3000之間，結(jié)合目的基因上的引物分析，應該選擇引物2和引物5，兩種引物擴增了基因2（1240 bp）以及基因1和基因3的部分片段，片段大小應該在2000~3000之間，且兩種引物擴增的區(qū)段包含了完整的基因2、基因1和基因3的部分片段，這樣可以很好的判斷大腸桿菌中是否成功導入了目的基因。菌落B中未檢測到目標條帶，即不含目的基因但含抗性基因，其原因是菌落B中導入的是普通質(zhì)粒而非重組質(zhì)粒。
【小問3詳解】
本實驗的實驗目的是探究溫度、pH和溶解氧等發(fā)酵條件對產(chǎn)物Z產(chǎn)量的影響，實驗自變量是溫度或pH或溶解氧，檢測指標是產(chǎn)物Z產(chǎn)量。因此簡要的實驗思路是將工程菌株隨機分成若干份，分別培養(yǎng)在一系列不同溫度（或PH或溶解氧）的培養(yǎng)液中，其它環(huán)境條件相同且適宜，一段時間后測定產(chǎn)物Z的產(chǎn)量。
(2025年1月普通高校適應性測試河南生物)15. 核酮糖-1，5-二磷酸羧化/加氧酶（Rubisc）是植物固定CO2的關(guān)鍵酶。某研究小組通過導入相關(guān)基因在大腸桿菌中搭建圖1所示的代謝通路，以篩選結(jié)合CO2能力更強的Rubisc。
回答下列問題。
（1）為將Rubisc基因?qū)氪竽c桿菌，研究小組使用BamHⅠ和EcRⅠ雙酶切以構(gòu)建重組質(zhì)粒。圖2表達載體中，片段2為______（填“啟動子”或“終止子”），其作用是______。
（2）為檢測轉(zhuǎn)化的菌落是否攜帶含有Rubisc基因的重組質(zhì)粒，將P1、P2和P3引物（引物位置如圖2所示，→表示引物5'→3'方向）共同加入反應體系后，分別以3個菌落的DNA為模板進行PCR擴增。PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果如圖3所示，菌落______（填“1”或“2”或“3”）攜帶正確的重組質(zhì)粒。
（3）通過單獨或共同轉(zhuǎn)化prkA基因、Rubisc基因獲得三種大腸桿菌，涂布在同一平板的不同區(qū)域（區(qū)域①涂布未攜帶目的基因的大腸桿菌），一段時間后，菌落分布及生長狀況加圖4所示，推測區(qū)域②、④內(nèi)菌落攜帶的目的基因分別是______、______?，F(xiàn)有多種Rubisc突變基因，應用該共同轉(zhuǎn)化體系可篩選出高活性Rubisc的依據(jù)是______。
（4）Rubisc的活性與植物有機物的積累密切相關(guān)?，F(xiàn)已篩選出攜帶高活性Rubisc編碼基因的重組質(zhì)粒（無法轉(zhuǎn)化植物），研究小組擬使用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育高產(chǎn)量大豆品種，簡要寫出實驗思路______。
【答案】（1） ①. 啟動子 ②. RNA聚合酶識別和結(jié)合位點，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄（2）3
（3） ①. prkA基因 ②. prkA基因、Rubisc基因 ③. 攜帶高活性Rubisc基因菌落生長狀況更好
（4）將重組質(zhì)粒導入農(nóng)桿菌，用農(nóng)桿菌感染大豆愈傷組織，通過植物組織培養(yǎng)培育出大豆植株，篩選高產(chǎn)量大豆品種。
【解析】
【分析】基因工程技術(shù)的步驟：①目的基因的獲取，主要有三種方法：基因文庫、PCR技術(shù)擴增、人工合成；②基因表達載體構(gòu)建，表達載體組成：啟動子+目的基因+終止子+標記基因；③目的基因?qū)胧荏w細胞，動物細胞（受體）采用顯微注射技術(shù)導入，植物細胞（受體）采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法或基因槍法或花粉管通道法導入，微生物細胞（受體）采用感受態(tài)細胞法導入；④目的基因檢測與鑒定，采用分子檢測、個體生物學水平鑒定。
【小問1詳解】
轉(zhuǎn)錄過程中，mRNA延伸的方向是5'→3'，因此根據(jù)模板鏈的位置可知Rubisc基因轉(zhuǎn)錄的方向是從右向左，即EcRⅠ連接啟動子，BamHⅠ連接終止子，即片段2為啟動子，片段1是終止子；啟動子的作用是RNA聚合酶識別和結(jié)合位點，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄。
【小問2詳解】
將P1、P2和P3引物共同加入反應體系，根據(jù)引物的位置可知，引物P1、P2可擴增普通質(zhì)粒和重組質(zhì)粒，擴增普通質(zhì)粒時擴增出的DNA片段較小，擴增重組質(zhì)粒時擴增出的DNA片段較大；引物P1、P3只能擴增重組質(zhì)粒，不能擴增普通質(zhì)粒，因此若未導入質(zhì)粒則無擴增DNA片段，若導入普通質(zhì)粒，則有一種DNA片段，若導入重組質(zhì)粒，則有兩種DNA片段。根據(jù)受體菌中的質(zhì)粒，可將受體菌分成三種，①未導入質(zhì)粒，則無法擴增，對應菌落2；②導入普通質(zhì)粒，能擴增出DNA片段，能擴增出1種片段，且片段較小，對應菌落1；③導入重組質(zhì)粒，引物P1、P2和引物P1、P3都能擴增出DNA片段，且最后擴增出兩種DNA片段，對應菌落3。
【小問3詳解】
未導入prkA基因、Rubisc基因時，大腸桿菌可正常代謝，若只導入prkA基因，則大腸桿菌產(chǎn)生的核酮糖-1，5-二磷酸會抑制大腸桿菌的生長，即②區(qū)域；若同時導入prkA基因、Rubisc基因，則在Rubisc的作用下，核酮糖-1，5-二磷酸和CO2結(jié)合形成3-磷酸甘油酸，參與大腸桿菌正常代謝，可緩解核酮糖-1，5-二磷酸對大腸桿菌的抑制作用，對應區(qū)域④；若只導入Rubisc基因，由于不含核酮糖-1，5-二磷酸，Rubisc無法起作用，與對照組相同，即③區(qū)域。Rubisc可緩解核酮糖-1，5-二磷酸對大腸桿菌的抑制作用，因此Rubisc越高，大腸桿菌菌落生長狀況越好，即攜帶高活性Rubisc基因的菌落生長狀況更好。
【小問4詳解】
農(nóng)桿菌細胞內(nèi)含有Ti質(zhì)粒，當它侵染植物細胞后，能將Ti質(zhì)粒上的T-DNA(可轉(zhuǎn)移的DNA)轉(zhuǎn)移到被侵染的細胞，并且將其整合到該細胞的染色體DNA上，根據(jù)受體植物的不同，所用的具體轉(zhuǎn)化方法有所區(qū)別。攜帶高活性Rubisc編碼基因的重組質(zhì)粒無法轉(zhuǎn)化植物，可將重組質(zhì)粒導入農(nóng)桿菌，用農(nóng)桿菌感染大豆愈傷組織，通過植物組織培養(yǎng)培育出大豆植株，篩選高產(chǎn)量大豆品種。
(2025年1月普通高考招生適應性測試云南生物)16. 中國名茶普洱茶的主要活性成分——茶褐素，具有降脂減肥、抗氧化和提高免疫力等功能，在功能食品領域具有廣闊的應用前景。研究人員在制作普洱熟茶的固體發(fā)酵過程中分離得到優(yōu)勢菌塔賓曲霉，其可在綠茶浸提液（富含茶多酚、可溶性糖、氨基酸、蛋白質(zhì)和咖啡堿等）中生長繁殖，之后分泌胞外氧化酶催化茶多酚生成茶褐素。不同發(fā)酵溫度下塔賓曲霉生成茶褐素的濃度如圖。
回答下列問題：
（1）綠茶浸提液中的氨基酸和蛋白質(zhì)可為塔賓曲霉生長提供的營養(yǎng)物質(zhì)為_________。
（2）塔賓曲霉為好氧微生物，用綠茶浸提液進行液體培養(yǎng)時應采用_________（填“靜置”或“搖床”）培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中茶褐素在發(fā)酵前兩天均無顯著增加的原因是_________。
（3）為檢測發(fā)酵1天時塔賓曲霉的數(shù)量，將發(fā)酵液稀釋1×103倍后，分別取0.1mL稀釋液均勻涂布于3個培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)后菌落數(shù)量分別為48、45和42個，則每毫升發(fā)酵液中活菌數(shù)量為_________個。
（4）從實際生產(chǎn)角度出發(fā)，由圖可知在第_________天結(jié)束發(fā)酵即可獲得較高濃度的茶褐素。為探索生產(chǎn)茶褐素的最適溫度，需設計下一步實驗，寫出實驗思路__________。
【答案】（1）碳源和氮源
（2） ①. 搖床 ②. 塔賓曲霉先進行生長繁殖，之后才分泌胞外氧化酶催化茶多酚生成茶褐素
（3）4.5×105 （4） ①. 6 ②. 在30℃~42℃之間設置一系列溫度梯度，用同樣的方式培養(yǎng)塔賓曲霉，并檢測不同發(fā)酵溫度下塔賓曲霉生成茶褐素的濃度，找到生成茶褐素的濃度的溫度即為生產(chǎn)茶褐素的最適溫度
【解析】
【分析】分析題圖，47℃下曲線不增長，可能是溫度過高，相關(guān)酶已經(jīng)失活；37℃和42℃的增長幾乎同步，最適溫度介于兩者之間。
【小問1詳解】
氨基酸和蛋白質(zhì)是組成元素為C、H、O、N的有機物，可以為為塔賓曲霉生長提供碳源和氮源。
【小問2詳解】
塔賓曲霉為好氧微生物，用綠茶浸提液進行液體培養(yǎng)時應采用搖床培養(yǎng)，可以為培養(yǎng)液增加溶氧量，有利于塔賓曲霉的繁殖。培養(yǎng)過程中前兩天塔賓曲霉進行生長繁殖，之后才分泌氧化酶催化茶多酚生成茶褐素。
【小問3詳解】
培養(yǎng)后菌落數(shù)量分別為48、45和42個，平均值為（48+45+42）÷3=45，發(fā)酵液稀釋1×103倍后，取0.1mL，因此每毫升發(fā)酵液中活菌數(shù)量為45×103×10=4.5×105個。
【小問4詳解】
分析題圖可知，發(fā)酵效率較高的是37℃和42℃，此時發(fā)酵至第6天，結(jié)束發(fā)酵即可獲得較高濃度的茶褐素。生產(chǎn)茶褐素的最適溫度在30℃~42℃范圍內(nèi)，進一步探究的思路為：在30℃~42℃之間設置一系列溫度梯度，用同樣的方式培養(yǎng)塔賓曲霉，并檢測不同發(fā)酵溫度下塔賓曲霉生成茶褐素的濃度，找到生成茶褐素的濃度的溫度即為生產(chǎn)茶褐素的最適溫度。
(2025年1月普通高考招生適應性測試云南生物)17. 嵌合抗原受體-T細胞（CAR-T細胞）療法在人類腫瘤治療中取得了重要突破。CAR-T細胞療法是將CAR基因?qū)隩細胞成為CAR-T細胞，通過CAR蛋白上的scFv肽鏈（小肽不足以發(fā)揮抗原作用，但能發(fā)揮抗體識別作用）特異性識別腫瘤細胞膜上的抗原，并通過CAR蛋白上的其它肽鏈結(jié)構(gòu)激活CAR-T細胞繼而殺傷腫瘤細胞?；卮鹣铝袉栴}：
（1）獲得含有scFv肽鏈的單克隆抗體，流程如圖。

①圖中通過驅(qū)動細胞和測試細胞反復免疫小鼠產(chǎn)生抗體的過程屬于_________（填“細胞”或“體液”）免疫，參與該過程的免疫細胞來源于小鼠骨髓_________。實驗小鼠機體產(chǎn)生免疫應答的過程中，輔助性T細胞的主要作用是_________。該實驗最適用于篩選_________（填標號）。
A．大鼠肝細胞區(qū)別于兔肝細胞特殊抗原的抗體
B．正常細胞區(qū)別于感染HIV細胞內(nèi)特殊抗原的抗體
C．衰老神經(jīng)細胞區(qū)別于正常神經(jīng)細胞抗原的抗體
②取第二組小鼠分離脾細胞，加入_________誘導脾細胞和骨髓瘤細胞的融合。
（2）CAR基因的構(gòu)建，流程如下圖。

在設計添加CAR基因兩端限制酶識別序列并與表達載體正確連接的過程中，必須考慮的有_________（填標號）。
A. PCR使用的上、下游引物需含限制酶識別序列
B. CAR基因內(nèi)可以含有引物所含限制酶識別序列
C. 限制酶識別序列需位于載體啟動子、復制原點和標記基因內(nèi)
D. 上、下游引物所含限制酶識別序列不同
E. CAR基因插入載體位點需位于啟動子下游
（3）從免疫學角度分析，如果用高特異性抗體DNA直接構(gòu)建CAR基因，再通過載體導入T細胞并穩(wěn)定表達，不但會使治療效果大幅降低，同時還會_________。
【答案】（1） ①. 體液 ②. 造血干細胞 ③. 分泌細胞因子，促進B細胞增殖分化，同時其受刺激后細胞表面的分子發(fā)生特異性變化后與B細胞接觸，參與B細胞的激活 ④. AB ⑤. 聚乙二醇（2）ADE
（3）導致CAR蛋白攻擊其他正常細胞，使機體受損
【解析】
【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：1、目的基因的獲取：方法有利用PCR技術(shù)擴增和人工合成等。2、基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。3、將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和花粉管通道法等；將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ㄊ歉惺軕B(tài)細胞法。4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。
【小問1詳解】
①產(chǎn)生抗體的過程屬體液免疫，參與該過程的免疫細胞由小鼠骨髓造血干細胞分化而來。實驗小鼠機體產(chǎn)生免疫應答的過程中，輔助性T細胞的主要作用是分泌細胞因子，促進B細胞增殖分化，同時其受刺激后細胞表面的分子發(fā)生特異性變化后與B細胞接觸，參與B細胞的激活。
單克隆抗體可識別不同的抗原，即可用于篩選大鼠肝細胞區(qū)別于兔肝細胞特殊抗原的抗體，正常細胞區(qū)別于感染HIV細胞內(nèi)特殊抗原的抗體，但衰老神經(jīng)細胞區(qū)別于正常神經(jīng)細胞抗原的抗體是相同的，不能進行篩選，AB正確，C錯誤。
故選AB。
②誘導動物細胞融合常采用滅活的仙臺病毒或聚乙二醇。
【小問2詳解】
A、PCR使用的上、下游引物需含限制酶識別序列，以保證擴增出的DNA可被限制酶識別，A正確；
B、CAR基因內(nèi)不能含有引物所含限制酶識別序列，以免在酶切時破壞目的基因，B錯誤；
C、限制酶識別序列需位于載體啟動子和終止子內(nèi)，以保證基因的正常轉(zhuǎn)錄，C錯誤；
D、上、下游引物所含限制酶識別序列不同，以避免目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化或反向連接，D正確；
E、CAR基因插入載體位點需位于啟動子下游，以保證基因的整張轉(zhuǎn)錄，E正確。
故選ADE。
【小問3詳解】
由題意可知，scFv肽鏈不足以發(fā)揮抗原作用，但能發(fā)揮抗體識別作用，如果用高特異性抗體DNA直接構(gòu)建CAR基因，再通過載體導入T細胞并穩(wěn)定表達，不但會使治療效果大幅降低，由于缺少scFv的識別作用，可能會導致CAR蛋白攻擊其他正常細胞，導致機體受損。

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