圖1
圖2
A.引物1和引物4
B.引物2和引物6
C.引物2和引物4
D.引物3和引物5
答案B
解析由題圖可知,利用重疊延伸PCR技術(shù)對DNA分子進行定點突變的過程中,通過PCR2獲得產(chǎn)物CD時所用的引物組合為引物c、d。引物d與轉(zhuǎn)錄模板鏈的3'端結(jié)合,因此引物d的序列為5'-GTCACGTG,引物2符合該序列?,F(xiàn)要利用重疊延伸PCR技術(shù)對抗菌肽基因進行改造以獲得抑菌性更強的抗菌肽,則需要將第52位的脯氨酸替換成蘇氨酸。根據(jù)兩種氨基酸的密碼子可知,需要將mRNA上的第154號堿基由C替換為A,則需要將DNA非轉(zhuǎn)錄模板鏈上對應部分的堿基由C替換為A。因此引物c的堿基序列為5'-CCTGTTAT,引物6符合該序列。綜上所述,B項符合題意。
2.(2024·福建廈門二模)不對稱PCR是利用不等量的一對引物來產(chǎn)生大量單鏈DNA(ssDNA)的方法。加入的一對引物中含量較少的被稱為限制性引物,含量較多的被稱為非限制性引物。PCR最初的若干次循環(huán)中,其擴增產(chǎn)物主要是雙鏈DNA(dsDNA),但當限制性引物消耗完后,就會產(chǎn)生大量的ssDNA。不對稱PCR的簡單過程如圖所示。假設模板DNA分子初始數(shù)量為a個,6次循環(huán)后開始擴增產(chǎn)生ssDNA。下列敘述錯誤的是( )
A.限制性引物和非限制性引物均需要依據(jù)模板DNA的堿基序列來設計
B.據(jù)圖可知,最后大量獲得的ssDNA與圖中甲鏈的堿基序列相同
C.上述過程中子鏈分別沿限制性引物的5'端、非限制性引物的3'端延伸
D.該不對稱PCR過程中需要(26-1)×a個限制性引物
答案C
解析PCR擴增時需要根據(jù)已知目的基因兩側(cè)的堿基序列來設計引物,因此限制性引物和非限制性引物均需要依據(jù)模板DNA的堿基序列來設計,A項正確;當限制性引物的濃度降低,甚至基本耗盡,雙鏈DNA的合成速率顯著下降,此時非限制性引物將繼續(xù)引導單鏈DNA的合成,非限制性引物與乙鏈結(jié)合,故反應的最后階段只產(chǎn)生初始DNA中一條鏈的拷貝(非限制性引物引導合成的單鏈),最后大量獲得的ssDNA與圖中甲鏈的堿基序列一致,B項正確;擴增時耐高溫的DNA聚合酶將4種脫氧核苷酸連接至引物的3'端,C項錯誤;PCR擴增時引物是新子鏈的一部分,假設模板DNA分子初始數(shù)量為a個,6次循環(huán)后產(chǎn)生26個DNA分子,因此該不對稱PCR過程中需要(26-1)×a個限制性引物,D項正確。

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