2024.04
(試卷滿分: 100分, 考試時間: 75分鐘)
注意事項(xiàng):
1.答卷前,考生務(wù)必將本人的學(xué)校、班級、姓名、考試號填在答題卡上。
2.將每題的答案或解答寫在答題卡上,在試卷上答題無效。
3.考試結(jié)束,只交答題卡。
一、單項(xiàng)選擇題:本部分包括14小題,每小題2分,共28分。每題只有一個選項(xiàng)最符合題意。
1. 下列有關(guān)微生物培養(yǎng)和發(fā)酵工程的敘述錯誤的是( )
A. 培養(yǎng)基的配制不需要在酒精燈火焰旁完成
B. 菌種選育和擴(kuò)大培養(yǎng)是發(fā)酵工程的核心環(huán)節(jié)
C. 乳酸菌和硝化細(xì)菌所利用的碳源物質(zhì)是不同的
D. 微生物接種在平板上后,需將培養(yǎng)皿倒置放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
2. 微生物接種在平板上后,需將培養(yǎng)皿倒置在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2.某生物小組為探究當(dāng)?shù)剞r(nóng)田土壤中分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量,進(jìn)行了取樣、系列梯度稀釋、涂布平板、培養(yǎng)、計(jì)數(shù)等步驟,實(shí)驗(yàn)操作如下,說法正確的是( )
A. 涂布接種時應(yīng)用涂布器從盛有菌液的試管中蘸取菌液均勻涂布于平板上
B. 圖中接種的培養(yǎng)基是以尿素為唯一氮源的固體培養(yǎng)基,能生長的微生物都能合成脲酶
C. 若每支試管稀釋10倍,則圖中a的數(shù)值應(yīng)為2.7,5號試管共稀釋了 106倍
D. 若僅以4號試管接種培養(yǎng)基計(jì)數(shù),5g該土壤中含分解尿素菌的估算數(shù)目是1.4×108
3. 紫花苜蓿(2n=32)是利用最廣泛的豆科牧草,但易造成家畜鼓脹病。百脈(2n=12)的根富含單寧,單寧可與植物蛋白質(zhì)結(jié)合,不引起家畜采食后鼓脹??蒲腥藛T利用野生型清水紫花苜蓿和里奧百脈的根為材料培育出抗鼓脹病的苜蓿新品種,流程如下圖,(注:IOA 可抑制植物細(xì)胞呼吸第一階段,R-6G可阻止線粒體的呼吸作用,二者有效抑制不同植物細(xì)胞正常代謝的臨界濃度不同)說法正確的是( )
A. 用纖維素酶和果膠酶處理獲得的原生質(zhì)體由細(xì)胞膜、液泡膜及兩膜之間的細(xì)胞質(zhì)組成
B. ①可以使用 PEG、滅活的病毒及電融合法,形成的雜種細(xì)胞團(tuán)因代謝互補(bǔ)可恢復(fù)生長
C. 與輻射處理芽或根相比,處理愈傷組織能提高獲得優(yōu)良變異株概率
D. ②得到的細(xì)胞是自養(yǎng)需氧型,其染色體數(shù)目最多88條,③產(chǎn)生的再生植株是可育多倍體
4. 鐵皮石斛是我國名貴中藥,生物堿是其有效成分之一,應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)鐵皮石斛擬原球莖(簡稱PLBs,類似愈傷組織)生產(chǎn)生物堿的實(shí)驗(yàn)流程如圖所示。下列相關(guān)敘述錯誤的是( )
A. 實(shí)驗(yàn)前需對外植體新生營養(yǎng)芽用流水沖洗后用酒精進(jìn)行消毒處理
B. 選用新生營養(yǎng)芽的原因是其分裂能力強(qiáng)、全能性高且?guī)缀醪缓《?br>C. 過程①為脫分化,PLBs細(xì)胞具有高度液泡化、呈無定形狀態(tài)的特點(diǎn)
D. 過程②為再分化,需將PLBs培養(yǎng)成完整植株后從中提取生物堿
5. 胚胎工程中各種操作技術(shù)如圖所示,下列分析正確的是( )
A. d可直接移植給受體,形成d的關(guān)鍵是要對a的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割
B. 胚胎干細(xì)胞在形態(tài)上的特點(diǎn)有細(xì)胞體積大,核小,核仁明顯
C. 早期囊胚a、b、c基因型相同,但發(fā)育得到的個體表型不一定相同
D. 代孕母牛應(yīng)用孕激素提前做好同期發(fā)情處理,避免移植胚胎發(fā)生免疫排斥
6. 科學(xué)家將c-Myc、KIf4、Sx2和Oct-3/4這四個關(guān)鍵基因轉(zhuǎn)入高度分化的小鼠成纖維細(xì)胞內(nèi),細(xì)胞在一定條件下轉(zhuǎn)變成iPS細(xì)胞(誘導(dǎo)多能干細(xì)胞)。在適當(dāng)條件誘導(dǎo)下,iPS細(xì)胞可以定向分化成各種細(xì)胞。下列敘述不正確的( )
A. 圖示過程運(yùn)用了轉(zhuǎn)基因技術(shù)和動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
B. iPS細(xì)胞分化成各種組織細(xì)胞的過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生了變化
C. iPS細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞過程中發(fā)生了基因的選擇性表達(dá)
D. 小鼠成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變成iPS細(xì)胞后分化潛能提高
7. 近些年,在我國干燥、缺水的戈壁無人區(qū),科學(xué)家發(fā)現(xiàn)了小規(guī)模野化單峰駱駝群??茖W(xué)家期望通過胚胎移植等方法拯救野化單峰駱駝,其過程如下圖。以下說法正確的是( )
A. 精子的頭部是細(xì)胞核,頭部的頂體由中心體發(fā)育而來
B. 若過程①表示體外受精過程,則E 后代的發(fā)育是在體外完成的
C. 過程②表示通過顯微操作法去除核膜包被的細(xì)胞核
D. 過程③表示早期胚胎培養(yǎng),獲得的F后代是克隆動物
8. 右圖為人胰島素基因結(jié)構(gòu)模式圖,敘述正確的是( )
A. 啟動子位于基因的上游,基本單位是脫氧核苷酸
B. cDNA文庫和基因組文庫的基因中均含有內(nèi)含子
C. 人胰島A細(xì)胞的cDNA 文庫中可找到該基因
D. 細(xì)胞內(nèi) DNA 復(fù)制時,只對編碼區(qū)進(jìn)行復(fù)制
9. 研究發(fā)現(xiàn),人溶菌酶(hLZ)是天然抗生素替代品。科學(xué)家將該蛋白基因?qū)肷窖蝮w內(nèi)使其能夠在山羊乳腺細(xì)胞中表達(dá),從而從山羊乳汁中提取人溶菌酶。圖1表示被限制酶切割后的該蛋白基因,圖2表示培育流程。下列敘述正確的是( )
A. 切割該蛋白基因的限制酶有2種,識別的序列可分別為GATCCAT和AGCTTCC
B. ①過程是基因工程的核心步驟,需要的工具酶有限制酶、DNA連接酶和質(zhì)粒
C. ②過程常采用顯微注射的方法,受體細(xì)胞應(yīng)選擇受精卵而一般不選擇體細(xì)胞
D. ③過程應(yīng)將山羊受精卵培育到原腸胚進(jìn)行移植,移植后需進(jìn)行是否妊娠的檢測
10. 限制性內(nèi)切核酸酶可以在特異的位點(diǎn)將DNA分子剪切開。如圖為不同種限制酶識別的序列,箭頭所指的是酶切位點(diǎn),下列敘述錯誤的是( )
A. 能被BamHI識別的序列也一定能被Sau3AI識別
B. 一個DNA分子被EcRI切成兩個片段時會發(fā)生8個氫鍵的斷裂
C. 質(zhì)粒作為基因工程的常用載體,通常會有多種限制性內(nèi)切核酸酶切割位點(diǎn)
D. 用BamHI切割目的基因和用Sau3AI切割的質(zhì)粒無法連接
11. 在進(jìn)行微生物數(shù)量測定時,下列情況會造成結(jié)果偏多的是( )
A. 利用顯微鏡計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)時,滴加菌液時產(chǎn)生了氣泡
B. 利用顯微鏡計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)時,滴加菌液后再蓋蓋玻片
C. 使用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時,涂布器經(jīng)火焰灼燒后直接進(jìn)行涂布
D. 使用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時,平板上有不少菌落是兩個細(xì)菌連在一起形成的
12. 某實(shí)驗(yàn)室將番茄的pTOMS 基因通過特殊的農(nóng)桿菌反向?qū)敕鸭?xì)胞中,結(jié)果發(fā)現(xiàn)番茄果實(shí)呈黃色,原因是一類胡蘿卜素的合成受阻,其技術(shù)原理如圖所示。已知小分子 RNA 可引導(dǎo)mRNA 切割酶與靶基因(pTOMS基因)mRNA 的結(jié)合。下列說法錯誤的是( )
A. 將TRV2 導(dǎo)入農(nóng)桿菌前可用 Ca2?對農(nóng)桿菌進(jìn)行處理
B. TRV2導(dǎo)入特殊農(nóng)桿菌后不需要將目的基因整合到T-DNA上
C. 合成圖中小分子 RNA的模板與靶基因mRNA 的模板為同一條鏈
D. pTOMS基因合成的產(chǎn)物可能是控制類胡蘿卜素合成的酶
13. 下列有關(guān)敘述,錯誤的是( )
A. 利用人體的胚胎干細(xì)胞治療阿爾茨海默癥不涉及生物技術(shù)安全性與倫理問題
B. 對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品進(jìn)行標(biāo)識管理并標(biāo)注其危害,讓消費(fèi)者有知情權(quán)和選擇權(quán)
C. 大力發(fā)展生物技術(shù),提升應(yīng)對未知病原體的能力
D. 任何情況下,不發(fā)展、不生產(chǎn)、不儲存生物武器
14. 已知生物體內(nèi)有一種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Y,如果將蛋白Y中某一個氨基酸替換,改變后的蛋白質(zhì)Y1不但保留了蛋白Y原有的功能,而且具備了酶的催化功能。下列說法正確的是( )
A. 蛋白質(zhì)工程和基因工程的根本區(qū)別是操作對象的差異
B. 可以通過對Y蛋白基因改造或人工合成獲得Y1蛋白基因
C. 蛋白質(zhì)工程操作過程中,不需要酶和載體
D. 細(xì)胞內(nèi)合成Y1蛋白與Y蛋白的過程中,遺傳信息的流向是相反的
二、多項(xiàng)選擇題:本部分包括4小題,每小題3分,共計(jì)12分。每題有不止一個選項(xiàng)符合題意。每題全選對的得3分,選對但不全的得1分,錯選或不答的得0分。
15. 下列有關(guān)實(shí)驗(yàn)的敘述中,錯誤的是( )
A. DNA粗提取到絲狀物與二苯胺溶液充分混勻后,沸水浴可出現(xiàn)藍(lán)色
B. 瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭、緩沖液等需先進(jìn)行高壓蒸汽滅菌
C. 將PCR 產(chǎn)物和溫?zé)岬沫傊侨芤夯旌虾髮?dǎo)入電泳槽,待凝固后接通電源
D. 凝膠載樣緩沖液中加入的核酸染料能與DNA 分子結(jié)合,便于在紫外燈下觀察
16. 植物細(xì)胞工程在農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥工業(yè)方面有著廣泛的應(yīng)用,有關(guān)敘述正確的是( )
A. 采用莖尖組織培養(yǎng)技術(shù)得到脫毒苗過程中需要多次更換培養(yǎng)基
B. 細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)提高了單個細(xì)胞中次生代謝物的含量
C. 植物組織培養(yǎng)技術(shù)得到的胚狀體包裹上人工種皮后即人工種子
D. 利用微型繁殖技術(shù)可以保持優(yōu)良品種遺傳特性
17. 基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速,如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是( )

A. 若某基因是從人的細(xì)胞內(nèi)提取 RNA 經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成的,則該基因中不含啟動子序列
B. 擴(kuò)增目的基因時,利用耐高溫的DNA連接酶從引物a、b的3'端進(jìn)行子鏈合成
C. 利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法可將含有目的基因的重組質(zhì)粒整合到植物受體細(xì)胞的染色體DNA上
D. 為了讓目的基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá),需用綿羊的乳腺細(xì)胞作為受體細(xì)胞
18. 雙脫氧核苷三磷酸(圖甲)在人工合成 DNA 體系中,可脫去兩個磷酸基團(tuán)形成焦磷酸和雙脫氧核苷酸并釋放能量, ddNTP 類似于dNTP,但因其3’端無—OH不能連接下一個核苷酸而使DNA子鏈的延伸立即終止,它能隨機(jī)滲入合成的DNA 鏈,一旦滲入,合成立即終止,于是得到各種不同大小的片段。在人工合成DNA體系中,有適量某單鏈模板、某1種ddNTP和4種dNTP,反應(yīng)終止時對合成的不同長度子鏈進(jìn)行電泳(結(jié)果如圖乙)。下列說法錯誤的是( )

A. ddNTP 和 dNTP 的區(qū)別是 ddNTP 的五碳糖上無氧原子
B. 雙脫氧核苷酸無法與模板鏈發(fā)生堿基互補(bǔ)配對,導(dǎo)致子鏈延伸終止
C. 據(jù)圖乙推測, 模板鏈的堿基序列為3'-ATGATGCGAT-5'
D 人工合成DNA 體系中不需要加入 ATP 供能
三、非選擇題:本部分包括5小題,共計(jì)60分。
19. I、紫杉醇紅豆杉細(xì)胞產(chǎn)生的一種高效抗癌物質(zhì),在植物體中含量極低,可通過植物細(xì)胞工程相關(guān)技術(shù)來獲取,請分析回答下列問題:
(1)首先要獲取外植體,然后培養(yǎng)出愈傷組織,該培養(yǎng)基中含有一定量的蔗糖,其作用是________。下表為四種不同外植體在相同培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)愈傷組織的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,由表中結(jié)果可知誘導(dǎo)愈傷組織較適宜的兩種外植體分別是________。
注:誘導(dǎo)率 (%)=形成的愈傷組織數(shù)量/接種的外植體數(shù)量×100%。
注:生長速率=每天每升培養(yǎng)基中增加的細(xì)胞干重克數(shù)。
(2)將愈傷組織接種到適宜培養(yǎng)液中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),該過程________(填“體現(xiàn)”或“未體現(xiàn)”)細(xì)胞的全能性。據(jù)圖(右上方)分析2,4-D 對細(xì)胞生長和紫杉醇合成的作用分別是________,為獲得最大紫杉醇總產(chǎn)量, 最適合的2,4-D濃度應(yīng)為________(填“0.5”“1.0”或“2.0”) mg·L?1。
(3)與從天然植株中提取相比,利用上述技術(shù)生產(chǎn)紫杉醇的重要意義是________(答出兩點(diǎn))。
Ⅱ、請根據(jù)下列兩個資料回答相關(guān)問題:
資料 1:用化學(xué)方法激活小鼠成熟的卵母細(xì)胞得到 phESC(孤雌單倍體干細(xì)胞),然后通過基因編輯技術(shù)使 phESC中的3個基因沉默, phESC 的細(xì)胞核狀態(tài)便可接近精子細(xì)胞核的狀態(tài),如圖1。
資料2:用化學(xué)方法激活小鼠的精子得到ahESC(孤雄單倍體干細(xì)胞),然后對ahESC 中的8個基因進(jìn)行編輯,ahESC 的細(xì)胞核便具有卵細(xì)胞核的特點(diǎn),如圖2。
(4)體內(nèi)受精時,在精子觸及卵細(xì)胞膜的瞬間,________會迅速產(chǎn)生生理反應(yīng)阻止后來的精子進(jìn)入。
(5)用促性腺激素對雌性小鼠進(jìn)行________處理可得到大量卵母細(xì)胞,這些卵母細(xì)胞轉(zhuǎn)化為 phESC的過程相當(dāng)于植物組織培養(yǎng)中的________過程。
(6)ahESC 與精子和去核卵母細(xì)胞融合后,得到的融合細(xì)胞的性染色體組成可能是________。
(7)據(jù)圖分析只依賴雄性小鼠________(填“能”或“不能”)得到孤雄小鼠,請寫出理由支持你的判斷________。
20. 阿爾茨海默?。ˋD)的典型病理表現(xiàn)為β淀粉樣蛋白(Aβ)在腦內(nèi)沉積造成突觸功能損害。研究發(fā)現(xiàn), Aβ的聚集體——Aβ寡聚體、纖維體是AD 患者腦內(nèi)的重要毒性物質(zhì)。Aβ肽(AβpE3)是所有 Aβ的重要組成部分,由于其更易聚集和不易降解,表現(xiàn)出更強(qiáng)的毒性。為篩選一種靶向 Aβ的單克隆抗體,研究人員做了以下實(shí)驗(yàn)。
(1)將Aβ3-10短肽疫苗作為抗原注射到小鼠體內(nèi),激活小鼠特異性免疫中的________免疫,并取小鼠________細(xì)胞融合,通過________培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞,加入動物細(xì)胞培養(yǎng)液并置于________中培養(yǎng),再通過抗體陽性檢測技術(shù)(用96孔板)獲得產(chǎn)單克隆抗體7B8的雜交瘤細(xì)胞。該過程中涉及到的技術(shù)________,涉及到的原理________。單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)是________。
(2)研究人員將不同種的Aβ肽用包被液稀釋并固定在多孔板上,以________作為空白對照組,通過洗滌、加入單克隆抗體、再洗滌、加入酶標(biāo)二抗等環(huán)節(jié),檢測相對結(jié)合量,結(jié)果如圖1。
本實(shí)驗(yàn)的研究目的是:________。
(3)為評估單克隆抗體7B8對AD 的療效,研究人員取16月齡的若干小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn),組1、組2、組3的處理分別為 (用所給選項(xiàng)的字母表示)。檢測三組小鼠皮層中的突觸前蛋白(在突觸發(fā)揮正常功能中具有重要作用)水平,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2,推測單克隆抗體7B8在一定程度上能保護(hù)皮層突觸的正常功能,后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)單克隆抗體7B8可以提高小鼠的認(rèn)知功能。
A. 正常小鼠,腹腔注射無關(guān)抗體
B. AD 小鼠,腹腔注射無關(guān)抗體
C. AD 小鼠, 腹腔注射單克隆抗體 7B8
(4)你認(rèn)為7B8能否用于治療 AD, 并簡述理由:________。
21. 雌性哺乳動物在早期胚胎發(fā)育過程中1 條 X 染色體會發(fā)生整體范圍內(nèi)的沉默(基因轉(zhuǎn)錄活性被抑制),僅有少數(shù)“逃逸”基因仍能正常表達(dá),這一生理過程稱作X染色體失活(XCI)。XCI能保證雌、雄間X 染色體上基因表達(dá)水平的一致,也造成體外受精胎兒性別比例的失衡。
(1)為制備體外受精(IVF)的胚胎,研究人員采用超數(shù)排卵方法采集小鼠________期卵母細(xì)胞,另一方面,將成年健康公鼠的精子在體外條件下進(jìn)行________處理,將二者置于適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液中完成體外受精。收集早期胚胎,移植到經(jīng)過________處理的代孕母鼠中,獲得的胚胎含有________(單/雙/三)親的遺傳物質(zhì)。
(2)研究人員從囊胚的________取樣,對體外受精的早期胚胎進(jìn)行性別鑒定,下表中結(jié)果顯示胎兒性別比例(雄/雌)________自然生產(chǎn) (IVO)胎兒的性別比例。
(3)為進(jìn)一步揭示體外受精的胎兒性別比例失衡的原因,研究人員剖取第7.5天的小鼠胚胎進(jìn)行胎兒發(fā)育情況統(tǒng)計(jì),結(jié)果如圖1 (右上方)。
①結(jié)果顯示IVO組雌、雄胎兒形態(tài)異常比率________,而在IVF組中,________。
②研究人員收集不同組別的胚胎細(xì)胞,定量檢測具代表性的“非逃逸”基因,結(jié)果顯示這些基因的表達(dá)在IVF 雌性胚胎中顯著________ IVO雌性胚胎, 說明IVF 雌性胚胎XCI不足。
③已有研究表明,XCI 高度依賴激活因子 RNF12,研究人員利用免疫熒光技術(shù)檢測RNF12 蛋白的表達(dá)量如圖2。
注:均為鑒定性別后的雌性胚胎,DAPI標(biāo)記細(xì)胞核所在位置,標(biāo)尺:50μm
結(jié)果顯示________。
(4)綜上所述,XCI造成體外受精的胎兒性別比例失衡的可能原因是體外受精過程引發(fā)小鼠部分雌性胚胎________,引發(fā)________,導(dǎo)致雌性發(fā)育異常及雄/雌比例升高。
22. 基因工程在生產(chǎn)中有很多應(yīng)用。為給轉(zhuǎn)基因生物安全的監(jiān)管提供依據(jù),采用PCR 方法進(jìn)行目的基因監(jiān)測,反應(yīng)程序如圖所示。請回答下列問題:
(1)PCR 反應(yīng)體系中通常含有模板DNA、引物(引物A 和引物B)、4種dNTP、________、緩沖液(含Mg2+)等。其中 dNTP 的作用是________。根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物時,下列說法不正確的有________。
A.每種引物自身不能折疊后發(fā)生堿基互補(bǔ)配對
B.兩種引物中G+C 的含量相差不宜過大,否則復(fù)性溫度難于統(tǒng)一
C.引物的長度不宜過短,防止與模板鏈難以結(jié)合
D.兩種引物之間不能發(fā)生堿基互補(bǔ)配對
(2)PCR 一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán),在循環(huán)之前,常要進(jìn)行一次預(yù)變性,其目的是________。PCR 過程中斷開或形成的化學(xué)鍵有________。有若PCR 循環(huán)5次,共消耗引物________個,含引物B的DNA 占全部DNA 的比例為________。某基因一條鏈的兩端序列如下圖所示,采用PCR 技術(shù)擴(kuò)增該基因時,應(yīng)選用的引物組合為________(選填序號)。
A. 5'-CTTGGATGAT-3'和 5'-TCTGTTGAAT-3'
B. 5'-CTTGGATGAT-3'和:5'-TAAGTTGTCT-3'
C. 5'-ATTCAACAGA-3'和 5'-ATCATCCAAG-3'
D. 5'-ATTCAACAGA-3'和。5'-GAACCTACTA-3'
(3)細(xì)胞核內(nèi) DNA 的復(fù)制時,有一條子鏈?zhǔn)窍群铣啥痰拿撗鹾塑账徭溒危ǚQ為岡崎片段)(如圖),再形成較長的分子,而在 PCR 過程中無岡崎片段形成的原因是________。
(4)PCR 產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定,在凝膠中DNA 分子的遷移速率與________有關(guān)。
(5)經(jīng)PCR 得到的目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后是否表達(dá)出相應(yīng)的蛋白質(zhì)還需要進(jìn)一步檢測,所用的方法是 ________。
23. 科研團(tuán)隊(duì)通過轉(zhuǎn)基因獲得了一種大腸桿菌工程菌,成為監(jiān)測殘留在生物組織或環(huán)境中的四環(huán)素水平的“報警器”,其監(jiān)測原理如圖1所示,天然大腸桿菌不具備圖1中所示基因。
(1)在上述研究中,需導(dǎo)入天然大腸桿菌的目的基因有________。(選填序號)(多選)
①四環(huán)素合成相關(guān)基因 ②GFP 基因 ③TetR基因 ④RNA 聚合酶基因
(2)基因工程中最核心的步驟是________,其目的是________。
(3)據(jù)圖1,當(dāng)環(huán)境中不含四環(huán)素時,該大腸桿菌工程菌________(選填“能發(fā)出”“不發(fā)出”)熒光;環(huán)境中四環(huán)素水平越高,該種大腸桿菌工程菌的熒光________(選填“增強(qiáng)”“減弱”“不變”)。試概述該種四環(huán)素檢測方法的原理:________。
(4)圖2是2個DNA片段、質(zhì)粒及其上的限制性內(nèi)切核酸酶的識別序列的分布情況;其中質(zhì)粒上的Ampr代表青霉素抗性基因。表為相關(guān)限制性內(nèi)切核酸酶的識別序列與切割位點(diǎn)。
則,BamHI酶切后產(chǎn)生的黏性末端為________。若要拼接DNA片段1和2,結(jié)合圖2和上表中信息,在特定工具酶作用下能成功拼接的位點(diǎn)處堿基序列為________。(選填下表中序號)
(5)研究人員設(shè)計(jì)了一個同時含DNA片段1和2的重組質(zhì)粒的拼接方案,結(jié)合圖表信息,你認(rèn)為最終建構(gòu)成功的重組質(zhì)粒示意圖最合理的是__________。
(6)下列操作能夠證明重組質(zhì)粒和大腸桿菌工程菌建構(gòu)成功的方法及現(xiàn)象有 。
A. 通過瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)證明重組質(zhì)粒的大小符合預(yù)期
B. 大腸桿菌工程菌不能在含有青霉素的培養(yǎng)基上生長
C. 用顯微鏡觀察重組質(zhì)粒上的外源 DNA 片段的堿基序列
D. 四環(huán)素濃度變化能引起大腸桿菌工程菌熒光強(qiáng)度的相應(yīng)改變
(7)為提高對環(huán)境中四環(huán)素水平監(jiān)測的有效性,研究人員將GFP的第65位絲氨酸突變成蘇氨酸后,增強(qiáng)了綠色熒光穩(wěn)定性和強(qiáng)度。該項(xiàng)技術(shù)屬于_________。
①細(xì)胞工程 ②蛋白質(zhì)工程 ③基因的定點(diǎn)突變外植體
愈傷組織體積
誘導(dǎo)率/%
不帶葉莖段
很大
99.5
帶葉莖段
很小
90
葉片
很小
20
成熟胚
較大
80
組別
胚胎數(shù)
活仔率(%)
雄/雌
IVO
81
56.25
1.08
IVF
82
45.58
1.48
限制酶
EcRI
XbaI
SpeI
BamHI
識別序列及切割位點(diǎn)
編號




拼接位點(diǎn)處的堿基序列

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