課時(shí)驗(yàn)收評(píng)價(jià)（四十八） 微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用1．下列關(guān)于微生物培養(yǎng)的說法，錯(cuò)誤的是(　 )A．倒平板時(shí)，培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后要立即倒置放置B．實(shí)驗(yàn)中錐形瓶、培養(yǎng)皿常用干熱滅菌法滅菌C．用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)應(yīng)標(biāo)記在皿底D．純化培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)皿應(yīng)倒置培養(yǎng)在恒溫培養(yǎng)箱中解析：選A　倒平板時(shí)，培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后需要等培養(yǎng)基凝固后，才能倒置放置，A錯(cuò)誤。2．(2022·湖北高考)滅菌、消毒、無菌操作是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常見的操作。下列敘述正確的是(　 )A．動(dòng)、植物細(xì)胞DNA的提取必須在無菌條件下進(jìn)行B．微生物、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染C．為防止蛋白質(zhì)變性，不能用濕熱滅菌法對(duì)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌D．可用濕熱滅菌法對(duì)實(shí)驗(yàn)中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進(jìn)行滅菌解析：選D　動(dòng)、植物細(xì)胞DNA的提取不需要在無菌條件下進(jìn)行，A錯(cuò)誤；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染，保證無菌環(huán)境，而微生物的培養(yǎng)不能使用抗生素，B錯(cuò)誤；一般用濕熱滅菌法對(duì)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，以防止雜菌污染，C錯(cuò)誤；可用濕熱滅菌法對(duì)實(shí)驗(yàn)中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進(jìn)行滅菌，以防止雜菌污染，D正確。3．平板劃線法和稀釋涂布平板法是常用的獲取純培養(yǎng)物的方法。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　 )A．兩種純化方法的核心都是要防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度B．用稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí)，所得數(shù)據(jù)往往比實(shí)際值偏小C．獲取純培養(yǎng)物的過程中，應(yīng)根據(jù)微生物的種類調(diào)整培養(yǎng)基的pHD．對(duì)10 mL土樣樣液稀釋106倍后，取0.1 mL稀釋液涂布，測(cè)得的菌落數(shù)分別為218、266、305，則該10 mL土樣中目的菌數(shù)為2.63×1010個(gè)解析：選D　用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)微生物的數(shù)量時(shí)，一般選擇菌落數(shù)在30～300的至少3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，求出平均值，D錯(cuò)誤。4．在分離、純化大腸桿菌實(shí)驗(yàn)中，劃線接種(甲)、培養(yǎng)結(jié)果(乙)如圖。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　 )A．甲中a區(qū)域?yàn)閯澗€的起始位置B．接種前應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌C．連續(xù)劃線的目的是獲得單個(gè)細(xì)菌形成的菌落D．接種過程中至少需要對(duì)接種環(huán)灼燒5次解析：選A　每次劃線的菌種來自上一區(qū)域的末端，因此劃線的起始區(qū)域菌落最多。由圖乙可知，圖甲中的d區(qū)域菌落多，為劃線的起始位置，A錯(cuò)誤。5．牛奶消毒及細(xì)菌檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的過程如圖所示，下列相關(guān)敘述不正確的是(　 )A．步驟①為巴氏消毒法，步驟②為系列梯度稀釋，步驟③中的牛肉膏蛋白胨均可提供碳源、氮源B．實(shí)驗(yàn)中對(duì)試管、培養(yǎng)皿的滅菌方法是干熱滅菌，適用這種方法的是能耐高溫且需要保持干燥的物品C．實(shí)驗(yàn)中的培養(yǎng)基適宜的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌D．實(shí)驗(yàn)中采用平板劃線法計(jì)數(shù)，最可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏低解析：選D　平板劃線法不能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤。6．如圖表示土壤中微生物為植物提供氮的過程，圖中①②③分別代表相關(guān)物質(zhì)，下列有關(guān)說法正確的是(　 )A．①是N2、③是NH3，X代表的細(xì)菌異化作用類型是需氧型B．①是NH3、②是NO，固氮菌在生態(tài)系統(tǒng)中屬于消費(fèi)者C．②是NH3、③是NO，X代表的細(xì)菌以有機(jī)物作為碳源D．在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)固氮菌可用二氧化碳為碳源的無氮培養(yǎng)基解析：選C　①是N2，②是NH3，③是NO，X代表土壤中的分解者，其異化作用方式可能是需氧型，以土壤中的有機(jī)物作為碳源，固氮菌在生態(tài)系統(tǒng)中屬于消費(fèi)者，A、B錯(cuò)誤，C正確；在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)固氮菌不能用二氧化碳為碳源的無氮培養(yǎng)基，D錯(cuò)誤。7．產(chǎn)脂肪酶的細(xì)菌可用于含油廢水處理。科研人員用射線照射從土壤中分離的菌株，反復(fù)篩選后獲得產(chǎn)酶能力提高的菌株，具體流程如圖。下列相關(guān)敘述正確的是(　 )A．步驟①取土壤樣品溶于無菌水中制成菌懸液B．步驟②的固體平板可以是以脂肪為唯一氮源的培養(yǎng)基C．步驟②射線照射可引起細(xì)菌基因突變或染色體變異D．步驟③透明圈越大的菌落，其脂肪酶活性一定越高解析：選A　步驟①取土壤樣品溶于無菌水中制成菌懸液，A正確；組成脂肪的化學(xué)元素有C、H、O，要篩選可以產(chǎn)生脂肪酶的細(xì)菌，需要用以脂肪作為唯一碳源的固體培養(yǎng)基，B錯(cuò)誤；細(xì)菌是原核生物，沒有成形的細(xì)胞核和染色體，不會(huì)發(fā)生染色體變異，C錯(cuò)誤；透明圈大的菌落，酶活性不一定高，因此需要對(duì)初篩選的菌株進(jìn)一步進(jìn)行酶活性檢測(cè)，D錯(cuò)誤。8．野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長，氨基酸營養(yǎng)缺陷型菌株由于發(fā)生基因突變而無法合成某種氨基酸只能在完全培養(yǎng)基上生長，如圖為純化某氨基酸營養(yǎng)缺陷型突變株的部分流程圖，數(shù)字代表培養(yǎng)基，a、b、c表示操作步驟。有關(guān)說法錯(cuò)誤的是(　 )A．①②④為完全培養(yǎng)基，③為基本培養(yǎng)基B．a操作的目的是提高突變菌株的濃度C．b操作可用涂布器蘸取菌液均勻的涂布在②表面D．經(jīng)c過程影印及培養(yǎng)后，可從④培養(yǎng)基中挑取D菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)解析：選C　結(jié)合題圖信息分析可知，①②④為完全培養(yǎng)基，③為基本培養(yǎng)基，A正確；紫外線可用于誘導(dǎo)突變，提高突變的頻率，故a操作的目的是提高突變菌株的濃度，B正確；b操作是先將菌液滴加到培養(yǎng)基表面，再用涂布器蘸取菌液均勻的涂布在②表面，C錯(cuò)誤；由圖可知，D菌落在基本培養(yǎng)基中無法生長，而在完全培養(yǎng)基上能夠生長，這說明D菌落是氨基酸營養(yǎng)缺陷型菌株，故經(jīng)c過程影印及培養(yǎng)后，可從④培養(yǎng)基中挑取D菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)，D正確。9．自生固氮菌是土壤中能獨(dú)立固定空氣中N2的細(xì)菌，將玉米種子用自生固氮菌拌種后播種，可顯著提高產(chǎn)量并降低化肥的使用量?？蒲腥藛T進(jìn)行了土壤中自生固氮菌的分離和固氮能力測(cè)定的研究，部分實(shí)驗(yàn)流程如圖1。回答下列問題：(1)步驟①土樣應(yīng)取自當(dāng)?shù)乇韺油寥赖脑蚴?/span>____________________________________；步驟②需充分振蕩的主要目的是____________________________________。(2)下表為兩種培養(yǎng)基的配方，步驟④應(yīng)選其中的________培養(yǎng)基，原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。培養(yǎng)基類型培養(yǎng)基組分Ashby培養(yǎng)基甘露醇(C6H14O6)、KH2PO4、MgSO4·7H2O、NaCl、K2SO4、CaCO3、蒸餾水、瓊脂LB培養(yǎng)基蛋白胨、酵母提取物、NaCl、蒸餾水、瓊脂 (3)步驟④所用的接種工具是__________，若在④的平板上統(tǒng)計(jì)的菌落平均數(shù)量為126個(gè)，則每克土壤中含有的固氮菌為____________個(gè)。(4)將純化的固氮菌置于完全培養(yǎng)液中擴(kuò)大培養(yǎng)48小時(shí)，經(jīng)離心后收集下層細(xì)胞并轉(zhuǎn)移至特定培養(yǎng)基中進(jìn)行固氮能力的測(cè)定，篩選出固氮能力最強(qiáng)的菌種CM12，為進(jìn)一步鑒定其固氮能力，科研人員選用發(fā)芽一致的玉米種子進(jìn)行3組盆栽實(shí)驗(yàn)，30天后測(cè)定土壤微生物有機(jī)氮含量，結(jié)果如圖2。注：CK為對(duì)照處理組；N為尿素處理組(每盆土壤中50 mL有氮全營養(yǎng)液，成分為在1 000 mL無氮植物營養(yǎng)液中加入0.12 g尿素)；CM12為自生固氮菌CM12處理組(每盆土壤澆50 mL接種自身固氮菌的無氮植物營養(yǎng)液)。①對(duì)照組(CK)的處理為_____________________________________________________。②實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：施用尿素處理和接種固氮菌CM12處理均能顯著增加土壤微生物有機(jī)氮含量。與尿素處理組相比，CM12處理組土壤微生物有機(jī)氮含量增加了約__________%(保留1位小數(shù))。③自生固氮菌較共生固氮菌(如根瘤菌)的應(yīng)用范圍更廣，原因是________________________________________________________________________。解析：(1)步驟①土樣應(yīng)取自當(dāng)?shù)乇韺油寥赖脑蚴窃诟缓袡C(jī)質(zhì)的土壤表層，有更多的固氮菌生長；步驟②需充分振蕩的主要目的是使土壤中的微生物充分釋放到無菌水中。(2)由表格中培養(yǎng)基配方分析可知，步驟④應(yīng)選其中的Ashby培養(yǎng)基，這是因?yàn)樵撆囵B(yǎng)基不含氮源具有選擇作用，自生固氮菌可以利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈?，?/span>LB培養(yǎng)基中的蛋白胨可以提供氮源，不具有選擇作用。(3)由圖1觀察可知，步驟④平板中的菌落分布均勻，故所用的接種工具是涂布器，若在④的平板上統(tǒng)計(jì)的菌落的平均數(shù)量為126個(gè)，則每克土壤中含有的固氮菌為126÷0.1×104＝1.26×107(個(gè))。(4)①設(shè)置對(duì)照組時(shí)需要排除無關(guān)變量對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，故對(duì)照組(CK)的處理為每盆土壤澆50 mL無氮植物營養(yǎng)液。②由柱形圖分析可知，空白對(duì)照組中土壤微生物有機(jī)氮含量為10 mg·kg－1，尿素處理組的土壤微生物有機(jī)氮含量為12 mg·kg－1，而CM12處理組土壤微生物有機(jī)氮含量為22 mg·kg－1，故與尿素處理組相比，CM12處理組土壤微生物有機(jī)氮含量增加了(22－12)÷12×100%≈83.3%。③自生固氮菌較共生固氮菌(如根瘤菌)的應(yīng)用范圍更廣，這是因?yàn)樽陨痰茉谕寥乐歇?dú)立固氮，不受宿主的限制。答案：(1)在富含有機(jī)質(zhì)的土壤表層，有更多的固氮菌生長　使土壤中的微生物充分釋放到無菌水中　(2)Ashby　該培養(yǎng)基不含氮源具有選擇作用，自生固氮菌可以利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈矗?/span>LB培養(yǎng)基中的蛋白胨可以提供氮源，不具有選擇作用　(3)涂布器　1.26×107　(4)①每盆土壤澆50 mL無氮植物營養(yǎng)液　②83.3　③自生固氮菌能在土壤中獨(dú)立固氮，不受宿主的限制

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