模塊一 細(xì)菌(bacteria) 細(xì)菌:一種具有細(xì)胞壁的單細(xì)胞原核型微生物。原核微生物細(xì)菌的主要特點(diǎn)是:①細(xì)胞內(nèi)沒有核膜和核仁,故叫核區(qū)或核體;核區(qū)內(nèi)含有一條雙鏈DNA構(gòu)成的細(xì)菌染色體;②無線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng),能量代謝和氧化還原反應(yīng)均在細(xì)胞膜上進(jìn)行;③核糖核酸蛋白體分布在細(xì)胞質(zhì)中;④二分裂法繁殖。
工作任務(wù)1 細(xì)菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)
細(xì)菌的形態(tài)與排列細(xì)菌的大小細(xì)菌的結(jié)構(gòu)觀察細(xì)菌的方法
細(xì)菌的繁殖方式是簡(jiǎn)單的二分裂法裂殖。有的細(xì)菌分裂后彼此分離,單個(gè)存在;另一些細(xì)菌則分裂后彼此仍有原漿帶相連,形成一定的排列。各種細(xì)菌的個(gè)體外形和排列方式,在正常情況下是相對(duì)穩(wěn)定而有特征的,可以作為細(xì)菌分類和鑒定的依據(jù)。 細(xì)菌的外形有球形,桿形和螺旋形,分別被稱為: ①球菌(Cccus) ②桿菌(Bacillus) ③螺旋菌(Spirlla)
1.球菌(cccus)按球菌分裂的方向,及分裂后的排列,分為6種球菌
單球菌 雙球菌 四聯(lián)球菌 八疊球菌 葡萄球菌 鏈球菌
球菌的分裂方向及分裂后的排列
單球菌(顯微鏡下示意圖)
單球菌(single cccus)
雙球菌(顯微鏡下示意圖)
雙球菌(duble cccus)
向一個(gè)平面分裂,分裂后兩兩相連存在,菌體為腎狀或矛頭狀。
肺炎雙球菌,瓜子狀,尖端向外,背端相連
四聯(lián)球菌
先后向兩個(gè)互相垂直的平面分裂,分裂后四個(gè)球菌連在一起,排列成方形。
先后向三個(gè)互相垂直的平面分裂,分裂后八個(gè)球菌立體的疊在一起,似包裹狀。
八疊球菌(Sarcina )
八疊球菌(顯微鏡下示意圖)
顯微鏡下的金黃色葡萄球菌
葡萄球菌(Staphylcccus aureus)
向多個(gè)平面分裂,分裂后若干球菌不規(guī)則的堆在一起,形成葡萄串狀。
葡萄球菌(streptcccus)
電鏡下的葡萄球菌很像新疆的馬奶葡萄
鏈球菌(顯微鏡下示意圖)
向一個(gè)平面連續(xù)分裂,分裂后連成三個(gè)以上的長(zhǎng)或短鏈。
鏈球菌(肉湯培養(yǎng)物,革藍(lán)氏染色)
2.桿菌(bacillus)桿菌只有一個(gè)分裂方向,即與菌體長(zhǎng)軸垂直分裂,分裂后有不同的排列:
單桿菌:大多數(shù)桿菌 雙桿菌:肺炎雙桿菌   鏈桿菌:炭疽桿菌  球桿菌:布氏桿菌 大腸桿菌  分枝桿菌:結(jié)核分枝桿菌  棒狀桿菌:化膿棒狀桿菌
不同桿菌的大小、長(zhǎng)短、粗細(xì)很不一致。
菌體呈彎曲或螺旋狀的細(xì)菌統(tǒng)稱螺旋菌或螺菌。根據(jù)彎曲螺旋的程度不同,可再分為弧菌與螺菌兩種狀態(tài)?;【?:菌體只有一個(gè)彎曲,其程度不足一圈,猶如“C”字(霍亂弧菌)。螺菌: 菌體有兩個(gè)以上的彎曲,捻轉(zhuǎn)呈螺旋狀(鼠咬熱螺菌)。
3.螺旋菌(Spirlla)
衰老型和多形性 在正常情況下,細(xì)菌的個(gè)體形狀和排列是規(guī)則和一致的,在不適宜的培養(yǎng)條件下(老齡培養(yǎng)物中),形態(tài)會(huì)發(fā)生一些不規(guī)則的變化甚至?xí)霈F(xiàn)細(xì)胞壁缺少的現(xiàn)象,這就是衰老型或退化型。當(dāng)這些衰老型的培養(yǎng)物,重新處于正常的培養(yǎng)環(huán)境中,可恢復(fù)正常形狀(慢性豬丹毒桿菌)。但有些細(xì)菌,即使在正常環(huán)境中生長(zhǎng),其形狀也很不一致,這種現(xiàn)象稱多形性(溶血巴氏桿菌,支原體,L型細(xì)菌)。
光學(xué)顯微鏡下用目鏡測(cè)微尺測(cè)細(xì)菌大小
細(xì)菌個(gè)體很小,一般需用顯微鏡放大幾百倍乃至上千倍才能看到。 通常以微米(um)作為測(cè)量單位,1微米(um)=1/1000毫米(mm) ;1微米=1000納米(nm),nm為病毒的測(cè)量單位。 球菌平均直徑為1um,小桿菌0、2~0、4um×0、7~1、5um;大桿菌為1~1、25um×3~8um;螺形菌一般為0、4~2um×2~20um 。
細(xì)胞的大小是細(xì)菌分類特征
同一細(xì)菌的不同菌齡細(xì)胞大小不同
細(xì)菌細(xì)胞大小還與營(yíng)養(yǎng)等因素相關(guān)
掌握細(xì)菌大小的特點(diǎn),便于去鑒定它們
基本結(jié)構(gòu): 細(xì)胞壁 細(xì)胞膜 細(xì)胞質(zhì) 擬核特殊結(jié)構(gòu): 莢膜 鞭毛 芽胞 菌毛
① 細(xì)胞壁(cell wall) 是在細(xì)菌細(xì)胞膜的外面一層無色透明、堅(jiān)韌而有彈性的膜;細(xì)胞壁折光性強(qiáng)、對(duì)染料親和力低,故在顯微鏡下很難看到。
A、細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)B、細(xì)胞壁的化學(xué)組成C、細(xì)胞壁與革蘭氏染色D、細(xì)胞壁的功能E、無壁細(xì)胞與原生質(zhì)體
細(xì)胞壁剖面結(jié)構(gòu)電鏡觀察和化學(xué)分析,G+菌和G— 菌細(xì)胞壁不同。
B、細(xì)菌細(xì)胞壁的化學(xué)組成
N-乙酰葡萄糖胺N-乙酰胞壁酸短肽
G+` G-細(xì)胞壁成分的區(qū)別
含量很高(30-95)
含量較高(10-20)
G+的肽聚糖是由N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸以β-1、4糖苷鍵相連,然后再與四肽側(cè)鏈和五肽交聯(lián)橋連接成三維空間網(wǎng)格結(jié)構(gòu),故細(xì)胞壁堅(jiān)韌。
G-性菌:聚糖骨架、四肽側(cè)鏈, 二維平面結(jié)構(gòu),疏松。 1~2層
革蘭陽(yáng)性菌細(xì)胞壁特殊組分
革蘭陰性菌細(xì)胞壁特殊組分
G+與G-細(xì)胞壁的比較
草酸銨結(jié)晶紫初染 碘液媒染 乙醇脫色 沙黃復(fù)染
C、細(xì)胞壁與革蘭氏染色
革蘭氏染色及G+菌和G-菌
革蘭氏染色反應(yīng)的原理和意義
原理:G+菌細(xì)胞壁較厚,肽聚糖含量較高,網(wǎng)格結(jié)構(gòu)緊密,含脂量低,當(dāng)它被酒精脫色時(shí),引起了細(xì)胞壁肽聚糖層網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的孔徑縮小以至關(guān)閉,從而阻止了不溶性結(jié)晶紫-碘復(fù)合物的逸出,還是原來的顏色;Gˉ細(xì)菌的細(xì)胞壁肽聚糖層較薄,含量較少,而脂類含量高,當(dāng)酒精脫色時(shí),脂類物質(zhì)溶解,細(xì)胞壁透性增大,結(jié)晶紫-碘復(fù)合物也隨之被抽提出來,故Gˉ細(xì)菌細(xì)菌菌體呈復(fù)染液的紅色。染色關(guān)鍵步驟-酒精脫色時(shí)間長(zhǎng)短。其次,染色結(jié)果與菌齡也有關(guān)系,老齡G+菌易被染成Gˉ細(xì)菌的顏色。意義:縮小了鑒別細(xì)菌的范圍。
維持細(xì)菌外形調(diào)節(jié)胞內(nèi)外物質(zhì)交換影響細(xì)菌的染色特性對(duì)抗生素藥物的敏感性不一樣是菌體抗原成分,稱O抗原決定G-菌的內(nèi)毒素(脂多糖)參與細(xì)菌的分裂
原生質(zhì)體:完全失去了細(xì)胞壁,只剩下細(xì)胞膜包圍原生質(zhì)的球狀或近似于球狀的個(gè)體。一般由G+產(chǎn)生。球狀體或圓質(zhì)體:除去了細(xì)胞壁的硬質(zhì)的肽聚糖成分而仍然保留細(xì)胞壁的其他成分形成的疏松的有外套的球狀或近似于球狀的個(gè)體。一般由G-產(chǎn)生。L型細(xì)菌:通過自發(fā)突變而形成的遺傳性穩(wěn)定的細(xì)胞壁缺損的菌種,在固體培養(yǎng)基中形成油煎蛋樣菌落。
左側(cè)為大腸桿菌的球狀體, 右側(cè)為有胞壁的大腸桿菌
油煎蛋樣菌落(典型L型菌落)
細(xì)菌L型的形態(tài)和染色性
細(xì)菌L型呈高度多形性,大小不一。著色不勻,無論其原為革蘭陽(yáng)性或陰性菌,形成L型大多染成革蘭陰性。
細(xì)胞壁的內(nèi)層,緊緊包圍在細(xì)胞漿的外面,厚度5-10納米,富于彈性,化學(xué)組成為磷脂和蛋白質(zhì)。
核質(zhì)(nuclear regin)質(zhì)粒(circular cvalently clsed DNA)核糖體(ribsme) granule)內(nèi)含物(inclusin bdy)(異染顆 粒 氣泡等)
是細(xì)胞膜內(nèi)的無色透明均勻一致的由許多微粒所組成的粘稠的膠凍樣物質(zhì)。主要成分是水、蛋白質(zhì)、核酸、脂類,糖、無機(jī)鹽。與細(xì)菌的分解、合成代謝有密切關(guān)系。
原核細(xì)胞型微生物所特有的無核膜的結(jié)構(gòu),是一個(gè)大型環(huán)狀DNA分子。長(zhǎng)度為0.25-3.00mm,每個(gè)細(xì)胞所含的核質(zhì)數(shù)一般1—4個(gè),細(xì)菌的遺傳物質(zhì)基礎(chǔ)在核質(zhì)上。
質(zhì)粒在胞漿內(nèi)細(xì)胞染色體以外的游離的一段雙股環(huán)狀DNA分子,大小不等,帶有一些遺傳信息,可以自行復(fù)制,控制細(xì)菌某些特定的遺傳性狀。附加體:當(dāng)質(zhì)粒暫時(shí)插入到染色體上成為細(xì)菌染色體的一部分,這時(shí)的質(zhì)粒叫附加體。
R質(zhì)粒:與抗藥性有關(guān)COL因子:大腸桿菌素因子
F質(zhì)粒:與有性接合有關(guān)
其他質(zhì)粒:與抗生素,色素合成有關(guān)
基因工程中作為目的基因載體
C、核糖體(Ribsme)
核糖體(ribsme):細(xì)菌合成蛋白質(zhì)的場(chǎng)所,游離存在于細(xì)胞質(zhì)中。由70%核糖核酸和30%蛋白質(zhì)組成。
D、內(nèi)含物(inclusin bdy)
糖顆粒、脂肪顆粒、異染顆粒、空泡。。。。。。
異染顆粒:某些細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的一種酸性小顆粒,為多聚偏磷酸鹽,對(duì)堿性染料的親和力特別強(qiáng)。用美藍(lán)染色時(shí),兩極濃染,兩端紅紫色,菌體是藍(lán)色。
異染顆粒聚集在菌體兩端,呈兩極濃染,具有診斷價(jià)值
氣泡(gas vcules)
在成熟或老齡細(xì)菌細(xì)胞漿內(nèi),可見有空泡,內(nèi)有液體的叫液泡,可以溶解營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),調(diào)節(jié)滲透壓;有的細(xì)菌有氣泡,可使細(xì)菌浮于培養(yǎng)基的表面,獲取氧氣和光能.
莢膜(capsule)鞭毛 (flage,復(fù)flaglla)菌毛(fimbria,復(fù)fimbriae )
芽胞(endspre/spre)
(一)莢膜(capsule)
有些細(xì)菌在細(xì)胞壁的外面產(chǎn)生一種粘液樣的物質(zhì)包圍整個(gè)菌體,用理化方法除去后并不影響菌體的生長(zhǎng)代謝。莢膜≥ 0.2μm,微莢膜< 0.2μm粘液層(多糖)形成:是種的特征;營(yíng)養(yǎng)豐富化學(xué)組成:多糖(多數(shù))/多肽染色:不易著色
G+菌(肺炎球菌)
炭疽桿菌的莢膜(光鏡)
由菌落判斷光滑型(S)或粘液型(M)菌落→有莢膜粗糙型(R)菌落→丟失莢膜
抗吞噬具有抗原性(K抗原)抗有害物質(zhì)的損傷抗干燥營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的儲(chǔ)存及廢物排出場(chǎng)所
(二)鞭毛(flagellum)
概念:在菌體表面附有細(xì)長(zhǎng)并呈波狀彎曲的絲狀物?;瘜W(xué)組成:鞭毛蛋白 H抗原
結(jié)構(gòu):從細(xì)胞膜長(zhǎng)出,游離于胞外?;w鞭毛鉤鞭毛絲 L-P環(huán)(G+無)S-M環(huán)
按生長(zhǎng)情況可分為:?jiǎn)蚊?mntrichate)雙毛菌(amphitrichate) 叢毛菌(lptrichate)周毛菌(Peritrichate)
梅毒密螺旋體的近端多鞭毛
潰蝕密螺旋體的兩端多鞭毛
洋蔥假單胞菌一端多鞭毛
電鏡下的大腸桿菌(示鞭毛)
①運(yùn)動(dòng)器官②有些細(xì)菌的鞭毛與致病性有關(guān)
(三)菌毛(柔毛/纖毛)pilus
概念:許多G-菌和少數(shù)G+菌菌體表面存在著一種比鞭毛數(shù)量更多、更細(xì)、更短且直硬的毛發(fā)狀細(xì)絲。種類及功能:普通菌毛:多,短而細(xì);粘附,致病性菌毛(F菌毛):由F質(zhì)粒編碼; 少,粗、長(zhǎng)、中空。遺傳物質(zhì)傳遞
普通菌毛:細(xì)菌的粘附結(jié)構(gòu),與宿主細(xì)胞表面特異性受體結(jié)合,與致病性密切相關(guān)。
性菌毛:接合,毒力、耐藥性等性狀的遺傳物質(zhì)傳遞。
性菌毛----細(xì)菌接合
F+ E. cli(male)F- E. cli(female)
F (fertility) factr
某些細(xì)菌(G+菌)在一定條件下,能在菌體內(nèi)形成的一個(gè)圓形或卵圓形小體。
(四)芽胞 (spre)
1個(gè)細(xì)菌→1個(gè)芽胞→1個(gè)細(xì)菌細(xì)菌—繁殖體 /營(yíng)養(yǎng)體芽胞—芽胞體/休眠體不是細(xì)菌的繁殖方式只在動(dòng)物體外才能形成
破傷風(fēng)梭菌的芽孢 透射電鏡 X21000
類型:中央/ 偏端/末端/游離芽孢
芽孢的大小、形狀、位置等隨菌種而異,有重要的鑒別意義。
比其繁殖體有堅(jiān)強(qiáng)得多的抵抗力 特別能耐高溫、干燥、輻射、化學(xué)消毒劑和滲透壓的作用。 100℃數(shù)小時(shí)消毒滅菌是否徹底的標(biāo)準(zhǔn)最可靠方法為高壓蒸汽滅菌/干熱滅菌
不直接引起疾病,發(fā)芽后形成繁殖體后致病鑒別意義 根據(jù)芽孢大小、形狀、位置等
 普通的染色方法不能使芽孢著色,因本身折光性強(qiáng),在光學(xué)顯微鏡下,呈現(xiàn)為無色的空洞狀。應(yīng)用特別強(qiáng)化的染色方法,可使芽孢著色,一經(jīng)著色卻又不易脫色。
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Figure. Gram stain f Bacillus anthracis, the cause f anthrax
四、細(xì)菌形態(tài)和結(jié)構(gòu)的觀察方法
普通光學(xué)顯微鏡(light micrscpe) 電子顯微鏡(electrn micrscpe) 暗視野顯微鏡(darkfield micrscpe)相差顯微鏡(phase cntrast micrscpe)熒光顯微鏡(flurescence micrscpe)同焦點(diǎn)顯微鏡(cfcal micrscpe)
分辨率為0.25um。一般細(xì)菌都大于0.25um,故可用光學(xué)顯微鏡觀察。
普通光學(xué)顯微鏡(light micrscpe)
分辨率為1nm。不僅能看清細(xì)菌的外形,內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)可一覽無余。
電子顯微鏡(electrn micrscpe)
最常用最重要的染色法 革蘭氏染色法(Gram stain)
Gram Psitive
Gram Negative
革蘭氏染色主要步驟及呈色原理
革蘭氏染色與細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的關(guān)系
G+菌細(xì)胞壁所含脂類少,肽聚糖多,經(jīng)95%酒精脫色時(shí)其細(xì)胞壁孔隙縮小到不易讓結(jié)晶紫與碘形成的復(fù)合物洗出細(xì)胞壁外,而被染為紫色。 G-菌細(xì)胞壁,其脂類含量較多,而肽聚糖較少,以95%酒精脫色時(shí),脂類被溶解,使得細(xì)胞壁孔隙變大;肽聚糖因95%酒精處理而使之孔隙縮小,但肽聚糖含量較少,細(xì)胞壁孔隙縮小有限,故能讓結(jié)晶紫與碘形成的復(fù)合物被酒精洗脫,而后來為紅色的復(fù)染劑著色成為紅色。
2.用顯微鏡觀察細(xì)菌的方法
活菌: 用美藍(lán)或TTC(氯化三苯基四氮唑)等 作活菌染色
工作任務(wù)2 細(xì)菌的生理
細(xì)菌的化學(xué)組成細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)類型細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)細(xì)菌攝取營(yíng)養(yǎng)的方式
1、水分:占菌體重量的80%;自由水+結(jié)合水2、無機(jī)鹽:鉀、鈉、鈣、鎂、硫、磷、鐵等3、氮源:參與合成菌體成分,主要來自于氨基酸、蛋白胨等;4、碳源:糖類(單、多糖)5、生長(zhǎng)因子:VB、嘧啶類、嘌呤類、X因子、V因子
1.根據(jù)碳素營(yíng)養(yǎng)區(qū)分:自養(yǎng)菌:只能從無機(jī)物取得碳源。異養(yǎng)菌:只能從有機(jī)物中取得碳源。2.根據(jù)能源區(qū)分:光能營(yíng)養(yǎng)菌:能將光能轉(zhuǎn)變?yōu)榛瘜W(xué)能的細(xì)菌?;軤I(yíng)養(yǎng)菌:從無機(jī)和有機(jī)化合物中取得能量的細(xì)菌。
光能自養(yǎng)菌:以光能作為能源,分解無機(jī)物進(jìn)行生物合成的細(xì)菌。如紅硫菌科的一些細(xì)菌?;茏责B(yǎng)菌:利用某些無機(jī)化合物(如NH3、H2S、氧化亞鐵等)取得能量,以CO2作為碳源,合成所需要的有機(jī)物。如硝化細(xì)菌科的細(xì)菌。
光能異養(yǎng)菌:光能營(yíng)養(yǎng)菌中能同化有機(jī)碳者,均屬于光能異養(yǎng)菌?;墚愷B(yǎng)菌:化能營(yíng)養(yǎng)菌中,要求有機(jī)物作為碳源和能源者,均屬于化能異養(yǎng)菌。此種營(yíng)養(yǎng)的類型是生物界中最常見的一種。
微生物的營(yíng)養(yǎng)類型區(qū)別 
(三) 細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)需要
水分碳源(含碳化合物):供能 氮源:合成菌體的成分 無機(jī)鹽類:P,S(酶,輔酶的必需基團(tuán);調(diào)節(jié)滲透壓) 。 生長(zhǎng)因子:Vit B族化合物
單純擴(kuò)散(simple diffusin)促進(jìn)擴(kuò)散(facilitated diffusin)主動(dòng)運(yùn)輸(active transprt)基團(tuán)移位(grup translcatin)
(四)細(xì)菌攝取營(yíng)養(yǎng)的方式
物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的動(dòng)力是細(xì)胞內(nèi)外的濃度差。 這種運(yùn)輸方式不消耗能量。沒有特異性,被運(yùn)輸物質(zhì)不與膜上物質(zhì)發(fā)生任何反應(yīng),物質(zhì)不發(fā)生化學(xué)變化。
促進(jìn)擴(kuò)散(facilitated diffusin)
促進(jìn)擴(kuò)散的過程: 膜載體在膜外與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)親合力強(qiáng),與這種物質(zhì)結(jié)合進(jìn)入細(xì)胞后親合力降低釋放營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。像渡船一樣,膜外裝貨,膜內(nèi)卸貨,這種擴(kuò)散方式比單純擴(kuò)散速度快。膜內(nèi)外親合力的改變與載體分子構(gòu)型改變有關(guān)。
促進(jìn)擴(kuò)散特點(diǎn)物質(zhì)運(yùn)輸動(dòng)力是細(xì)胞內(nèi)外的濃度差。運(yùn)輸過程不消耗能量。有膜載體參加,膜載體(滲透酶)有特異性。運(yùn)輸葡萄糖的載體只運(yùn)輸葡萄糖。這種運(yùn)輸方式多發(fā)生在真核微生物,原核生物少見。
主動(dòng)運(yùn)輸(active transprt)
1、被運(yùn)送的物質(zhì)可逆濃度梯度進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。2、要消耗能量,必需有能量參加。 3、有膜載體參加,膜載體發(fā)生構(gòu)型變化,被運(yùn)送物質(zhì)不發(fā)生任何變化。
是在研究糖的運(yùn)輸時(shí)發(fā)現(xiàn)的一種主動(dòng)運(yùn)輸方式。逆濃度差的擴(kuò)散,借助于細(xì)胞膜上的磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng),將一些物質(zhì)通過磷酸化作用轉(zhuǎn)移到細(xì)胞內(nèi)。 有特異性,需要能量。
基團(tuán)移位(grup translcatin)
(一)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的條件(二)細(xì)菌的繁殖方式和速度(三)細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線
(一)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的條件
1.營(yíng)養(yǎng)物質(zhì):水、碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子等2.溫度: 嗜冷菌(10-20℃)、嗜溫菌(20-40℃)和嗜熱菌(40-60℃)。一般37 ℃3.pH:病原菌,7.2-7.6;霉菌,3.0-6.0。4.滲透壓:等滲。金黃色葡萄球菌耐高滲。5.氣體:O2,CO2
(二)細(xì)菌的繁殖方式和速度
二等分分裂法代時(shí):多數(shù)為20~30 min ,人工培養(yǎng)基上18-24小時(shí)。
細(xì)菌對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)過程。體積增大代謝活躍但不分裂主要進(jìn)行酶和輔酶的合成,為下一步繁殖做準(zhǔn)備。以大腸桿菌為例,一般2-6小時(shí)。
活菌數(shù)呈對(duì)數(shù)增加細(xì)菌分裂和新陳代謝最旺盛的時(shí)期細(xì)菌的各種特性最為典型時(shí)期致病力和抗藥性最強(qiáng)時(shí)期一般6-10小時(shí)
活菌數(shù)基本不變,總菌數(shù)達(dá)到最高水平細(xì)菌代謝物積累達(dá)到最高峰細(xì)菌各種形態(tài)開始不典型,可形成芽孢一般8小時(shí)
細(xì)菌死亡數(shù)大于增殖數(shù),活菌數(shù)明顯減少,群體衰落細(xì)胞出現(xiàn)多形態(tài),大小不等的 畸形,變成衰退型細(xì)胞死亡,出現(xiàn)自溶現(xiàn)象
(一).細(xì)菌的酶胞外酶:水解酶胞內(nèi)酶:呼吸酶固有酶:脫氫酶誘導(dǎo)酶:半乳糖酶限制酶:修飾酶
(二).細(xì)菌的呼吸類型1、專性需氧菌:如結(jié)核分枝桿菌2、微需氧菌: 如牛布氏桿菌3、兼性厭氧菌: 如大腸桿菌和葡萄球菌4、專性厭氧菌: 如破傷風(fēng)梭菌
(三).細(xì)菌的新陳代謝產(chǎn)物1、分解代謝產(chǎn)物 糖的分解產(chǎn)物:丙酮酸-酸,醇,酮及CO2等蛋白質(zhì)和氨基酸的分解產(chǎn)物: 脂類的分解產(chǎn)物:甘油和脂肪酸-醛,酮等依此設(shè)計(jì)特定的生化反應(yīng),對(duì)細(xì)菌進(jìn)行鑒定。
2.合成代謝產(chǎn)物①熱原質(zhì):注入人體或動(dòng)物體能引起發(fā)熱反應(yīng),耐高壓滅菌。②毒素:外毒素(蛋白質(zhì))內(nèi)毒素(脂多糖)③抗生素:由某些微生物在代謝過程中產(chǎn)生的一類抗菌物質(zhì),能抑制或殺死某些病原微生物和腫瘤細(xì)胞。
2.合成代謝產(chǎn)物④細(xì)菌素(蛋白質(zhì)):僅對(duì)與產(chǎn)生菌有近緣關(guān)系的細(xì)菌有殺傷作用。 ⑤維生素:在腸道內(nèi)能合成VitB族和VitK。⑥色素水溶性:能彌散。綠膿桿菌的綠膿色素。脂溶性:只存在于菌體,不擴(kuò)散。葡萄球菌的色素。⑦侵襲性酶類
工作任務(wù)3 細(xì)菌的人工培養(yǎng)
一、培養(yǎng)基的概念二 、培養(yǎng)基的類型三、制備培養(yǎng)基的基本要求和程序四、細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況
把細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需要的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)合理的配合在一起,制成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)成為培養(yǎng)基。
(一)根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分類液體培養(yǎng)基:增菌固體培養(yǎng)基:2%~3%瓊脂。純化,增菌,保種半固體培養(yǎng)基:0.5%瓊脂。動(dòng)力檢測(cè),保種
(二)根據(jù)培養(yǎng)基的用途分類
基礎(chǔ)培養(yǎng)基:肉湯、普通瓊脂培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基:鮮血瓊脂培養(yǎng)基、血清瓊脂培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基:ss瓊脂培養(yǎng)基。鑒別培養(yǎng)基:在培養(yǎng)基中加入特定作用底物及指示劑,即可憑肉眼根據(jù)顏色識(shí)別。伊紅美蘭、麥康凱培養(yǎng)基
在實(shí)際使用中,鑒別與選擇兩種功能往往結(jié)合在一種培養(yǎng)基之中
厭氧培養(yǎng)基:肝片肉湯培養(yǎng)基、庖肉培養(yǎng)基
三、制備培養(yǎng)基的基本要求和程序
(一)基本要求選擇所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)調(diào)整PH值培養(yǎng)基應(yīng)均質(zhì)透明不含抑菌物質(zhì)滅菌處理
(二)基本程序配料溶化測(cè)定及矯正PH值過濾分裝滅菌無菌檢驗(yàn)備用
四、細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況
液體培養(yǎng)基:表面生長(zhǎng) 均勻混濁生長(zhǎng) 沉淀生長(zhǎng)
細(xì)菌在肉湯培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)特征
固體培養(yǎng)基:菌落,菌苔
純培養(yǎng):在細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)中,對(duì)單純的一種細(xì)菌進(jìn)行的培養(yǎng)。菌落:接種一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞或者是一部分同種細(xì)菌細(xì)胞于固體培養(yǎng)基上,在適宜的培養(yǎng)條件下細(xì)菌細(xì)胞迅速地生長(zhǎng)繁殖形成一堆肉眼可見的有一定形態(tài)的子細(xì)胞集團(tuán)。菌苔:在培養(yǎng)基表面,多個(gè)菌落融合成一片叫菌苔。
細(xì)菌在固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況
無動(dòng)力 有動(dòng)力
細(xì)菌在半固體培養(yǎng)上的培養(yǎng)特征
細(xì)菌在半固體明膠中的生長(zhǎng)現(xiàn)象
細(xì)菌在斜面上的生長(zhǎng)現(xiàn)象
工作任務(wù)4 細(xì)菌病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法
病料的采集、保存及運(yùn)送細(xì)菌的形態(tài)檢查細(xì)菌的分離培養(yǎng)細(xì)菌的生化試驗(yàn)動(dòng)物接種試驗(yàn)細(xì)菌的血清學(xué)試驗(yàn)
一、病料的采集、保存及運(yùn)送
(一)病料的采集、保存及運(yùn)送1、采集病料的原則 無菌、適時(shí)、含病原多部位、適量
液體材料的采集方法實(shí)質(zhì)臟器的采集方法腸道及其內(nèi)容物的采集方法皮膚及羽毛的采集方法胎兒
(二)病料的保存與運(yùn)送低溫。有冰的保溫瓶或4-10℃冰箱滅菌液體石蠟或30%甘油鹽水緩沖保存液
直接采集病料做細(xì)菌涂片分離培養(yǎng)后做細(xì)菌涂片
分離出目的病原菌培養(yǎng)基的選擇菌落形態(tài)的觀察涂片
細(xì)菌學(xué)中常用的幾種酸堿指示劑
1、糖分解試驗(yàn)Eg:E.cli.能發(fā)酵乳糖和葡萄糖,而沙門氏菌、傷寒桿菌只能發(fā)酵葡萄糖。糖類?丙酮酸酶(E.cli)? CO2和H2O (產(chǎn)酸產(chǎn)氣)⊕: 產(chǎn)酸產(chǎn)氣 +:產(chǎn)酸不產(chǎn)氣 - :不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣
G E.cli ?丙酮酸(pH≤4.5)(+) (紅色)G產(chǎn)氣桿菌?2丙酮酸 ? 1乙酰甲基甲醇 ( pH>5.4 (-)(桔黃色)
②甲基紅試驗(yàn)(M.R.)
G產(chǎn)氣桿菌?丙酮酸?乙酰甲基甲醇 +O2 ?二乙酰 +胍基化合物 ?紅色化合物 VP(+) E.cli不生成乙酰甲基甲醇,故Vp(-)
③VP試驗(yàn): ( Vges和Prskauer)
產(chǎn)氣桿菌分解枸櫞酸鹽(唯一碳源)生成碳酸鹽,并分解培養(yǎng)基中的銨鹽生成NH3,使培養(yǎng)基由酸性變?yōu)閴A性,使培養(yǎng)基中的由淡綠色轉(zhuǎn)為深藍(lán)色,稱為“+”。
有些細(xì)菌(E.cli)能分解色氨酸生成吲哚,再與二甲基氨基苯甲醛結(jié)合,生成玫瑰吲哚(紅色),“+”。
⑤吲哚試驗(yàn)(Indle test)
Indle testMR testVP test (Vi)citrate utilizatin test
IMViC試驗(yàn)--鑒定腸道桿菌
來測(cè)定菌的生理生化特征的4個(gè)實(shí)驗(yàn)。
I M Vi C試驗(yàn) 大腸桿菌 + + - - 產(chǎn)氣桿菌 - - + +
有些細(xì)菌(變形桿菌)能分解含硫氨基酸,生成H2S,若與醋酸鉛或硫酸亞鐵反應(yīng),則生成硫化鉛或硫化亞鐵(黑色)。
變形桿菌能分解尿素(尿素酶)產(chǎn)氨,使培養(yǎng)基堿性增加(酚紅由黃色變?yōu)榧t色),“+”。而沙門氏菌為陰性。
氧化型細(xì)菌:必須有分子氧參加。 發(fā)酵型細(xì)菌(兼性厭氧菌):可以進(jìn)行無氧降解,但在有氧或無氧環(huán)境中都能分解葡萄糖。 O/F試驗(yàn)一般多用葡萄糖進(jìn)行。 產(chǎn)堿型細(xì)菌:不分解葡萄糖。 利用此試驗(yàn)可區(qū)別細(xì)菌代謝類型。
⑧氧化—發(fā)酵試驗(yàn)(O/F test)
高層斜面(0.1%葡萄糖、1%乳糖、1%蔗糖,酚紅)
⑨三糖鐵試驗(yàn)(TSI test)

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