一、單項(xiàng)選擇題:本題共7小題,每小題6分,共42分。每題只有一個(gè)選項(xiàng)最符合題意。1.有關(guān)倒平板的操作錯(cuò)誤的是(　　)A.將已滅菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上B.使打開(kāi)的錐形瓶瓶口迅速通過(guò)火焰C.將培養(yǎng)皿打開(kāi),培養(yǎng)皿蓋倒放在桌面上D.等待平板冷卻凝固后需要倒過(guò)來(lái)放置
【解析】選C。將已滅菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上,防止培養(yǎng)皿被污染,A正確;使打開(kāi)的錐形瓶瓶口迅速通過(guò)火焰,對(duì)錐形瓶的口徑進(jìn)行灼燒滅菌,防止空氣中的雜菌污染,B正確;倒平板時(shí)不能把培養(yǎng)皿蓋完全打開(kāi)并放到桌面上,這樣會(huì)污染培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基,C錯(cuò)誤;固體平板培養(yǎng)基冷卻后需要倒過(guò)來(lái)放置,防止皿蓋上的水珠滴落到培養(yǎng)基上,D正確。
【解析】(1)果酒制作需要的菌種為酵母菌,所以要先在果汁中加入人工培養(yǎng)的純凈的酵母菌菌種,在無(wú)氧條件下發(fā)酵形成蘋(píng)果酒。酒精與(酸性)重鉻酸鉀溶液反應(yīng)出現(xiàn)灰綠色。(2)果醋制作需要的菌種為醋酸菌。以上發(fā)酵所用的培養(yǎng)基均屬于液體培養(yǎng)基,液體培養(yǎng)基更有利于菌種充分利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。(3)對(duì)于使用頻繁的菌種多采用臨時(shí)保藏的方法保存,但這種保存方法,菌種容易被污染或產(chǎn)生變異,故保存的時(shí)間不長(zhǎng)。對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種可采用甘油管藏的方法進(jìn)行保存。
2.(2021·南通模擬)在微生物培養(yǎng)的過(guò)程中,需要通過(guò)選擇培養(yǎng)或鑒別培養(yǎng)的方法來(lái)篩選出目標(biāo)菌種,下列與之相關(guān)的敘述中不正確的是(　　)A.纖維素分解菌能夠分解剛果紅染料,從而使菌落周圍出現(xiàn)透明圈B.尿素分解菌能夠?qū)⒛蛩胤纸鉃榘?從而使酚紅指示劑變紅C.在培養(yǎng)基中加入抗生素能夠篩選出具有相應(yīng)抗性的菌株D.在含有碳酸鈣的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的乳酸菌菌落周圍會(huì)出現(xiàn)“溶鈣圈”
【解析】選A。纖維素分解菌能夠分解纖維素,在培養(yǎng)基中加入剛果紅,可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物,當(dāng)纖維素被分解后,紅色復(fù)合物不能形成,培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈,A錯(cuò)誤;尿素分解菌能夠?qū)⒛蛩胤纸鉃榘?使培養(yǎng)基呈堿性,從而使酚紅指示劑變紅,B正確;在培養(yǎng)基中加入抗生素能夠篩選出具有相應(yīng)抗性的菌株,C正確;在含有碳酸鈣的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的乳酸菌菌落周圍會(huì)出現(xiàn)“溶鈣圈”,D正確。
3.有關(guān)純化大腸桿菌實(shí)驗(yàn)操作的敘述,錯(cuò)誤的是(　　)A.在第二區(qū)域內(nèi)劃線時(shí),接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于菌液B.第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物C.每次劃線前,灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種D.劃線結(jié)束后,灼燒接種環(huán)能及時(shí)殺死接種環(huán)上的菌種,避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者【解析】選A。在第二區(qū)域內(nèi)劃線時(shí),接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于第一區(qū)域的劃線末端,A錯(cuò)誤;為避免雜菌的污染,第一步操作時(shí)需要灼燒接種環(huán),B正確;每次劃線前,灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種,C正確;為避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者,劃線結(jié)束后,灼燒接種環(huán)能及時(shí)殺死接種環(huán)上的菌種,D正確。
4.在分離、純化大腸桿菌實(shí)驗(yàn)中,劃線接種(甲)、培養(yǎng)結(jié)果(乙)如圖。有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　)A.接種前應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B.連續(xù)劃線的目的是獲得單個(gè)細(xì)菌形成的菌落C.接種過(guò)程中至少需要對(duì)接種環(huán)灼燒5次D.甲中a區(qū)域?yàn)閯澗€的起始位置【解析】選D。在分離、純化大腸桿菌實(shí)驗(yàn)中,接種前應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌;連續(xù)劃線的目的是獲得單個(gè)細(xì)菌形成的菌落;接種過(guò)程中,接種前要灼燒,每次劃線后均需灼燒,故至少需要對(duì)接種環(huán)灼燒5次;據(jù)甲和乙對(duì)比,甲中d區(qū)域?yàn)閯澗€的起始位置。
5.(2021年江蘇適應(yīng)性測(cè)試)平板涂布是分離菌種常用的方法,下列相關(guān)敘述不恰當(dāng)?shù)氖?　　)A.固體培養(yǎng)基滅菌后,應(yīng)冷卻至50 ℃左右時(shí)倒平板B.倒好的平板需立即使用,以免表面干燥,影響菌的生長(zhǎng)C.平板涂布分離到的單菌落需進(jìn)一步劃線純化D.平板涂布法既可用于微生物的分離,也可用于微生物的計(jì)數(shù)
【解析】選B。本題考查微生物分離及純化技術(shù)。固體培養(yǎng)基滅菌后,應(yīng)冷卻至50 ℃左右時(shí)倒平板,A正確;倒好的平板溫度仍然比較高,不能立即使用,B錯(cuò)誤;平板涂布分離到的單菌落可能不是單一菌體增殖形成的,可用劃線法再進(jìn)一步分離純化,C正確;稀釋涂布平板法既可以對(duì)微生物分離純化也可以計(jì)數(shù),D正確。
6.下列檢測(cè)某熟制食品中大腸桿菌是否超標(biāo)的實(shí)驗(yàn)操作,不合理的是(　　)A.待檢測(cè)食品需要經(jīng)過(guò)滅菌操作后取樣檢測(cè)B.應(yīng)設(shè)置未接種的培養(yǎng)基,作為實(shí)驗(yàn)的對(duì)照C.用稀釋涂布平板法接種計(jì)數(shù)大腸桿菌的活菌數(shù)D.接種后將培養(yǎng)皿倒置并在適宜溫度下培養(yǎng)【解析】選A。待檢測(cè)食品滅菌后會(huì)將大腸桿菌殺死,所以不能檢測(cè)大腸桿菌是否超標(biāo),A錯(cuò)誤;應(yīng)設(shè)置未接種的培養(yǎng)基作為實(shí)驗(yàn)的對(duì)照,B正確;用稀釋涂布平板法接種計(jì)數(shù)大腸桿菌的活菌數(shù),C正確;接種后應(yīng)該將培養(yǎng)皿倒置,并在適宜溫度下培養(yǎng),D正確。
7.(2020·江蘇七市調(diào)研)我國(guó)規(guī)定1 L自來(lái)水中大腸桿菌數(shù)不得超過(guò)3個(gè)。某興趣小組利用濾膜法(如圖所示)對(duì)校內(nèi)自來(lái)水中大腸桿菌數(shù)量進(jìn)行檢測(cè)。有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　)A.取樣水龍頭應(yīng)用火焰灼燒,打開(kāi)水龍頭一段時(shí)間后再取樣B.濾膜的孔徑應(yīng)小于大腸桿菌,過(guò)濾水樣應(yīng)足量C.伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中含有瓊脂D.進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)的同時(shí)需進(jìn)行未接種培養(yǎng)基的培養(yǎng)
【解析】選C。為避免雜菌的污染,在取樣時(shí)水龍頭應(yīng)用火焰灼燒殺滅雜菌,打開(kāi)水龍頭一段時(shí)間后再取樣是避免溫度過(guò)高殺死目的菌,A正確;實(shí)驗(yàn)將待測(cè)水樣進(jìn)行過(guò)濾,得到的濾膜進(jìn)行微生物培養(yǎng),因此水中的大腸桿菌應(yīng)留在濾膜上,故濾膜的孔徑應(yīng)小于大腸桿菌,B正確;加入伊紅美藍(lán)能夠鑒別大腸桿菌,該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基,C錯(cuò)誤;為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性與準(zhǔn)確性,實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)置對(duì)照,即進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)的同時(shí)需進(jìn)行未接種培養(yǎng)基的培養(yǎng),D正確。
二、多項(xiàng)選擇題:本題共1小題,每小題6分,共6分。每題有不止一個(gè)選項(xiàng)符合題意。8.下列有關(guān)微生物培養(yǎng)、純化及篩選的敘述,正確的是(　　)A.為了防止污染,接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)立即快速挑取菌落B.平板劃線操作中第二次及其后的劃線應(yīng)從上一次劃線的末端開(kāi)始C.篩選分解尿素的細(xì)菌應(yīng)以尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源D.在纖維素-剛果紅培養(yǎng)基上,能產(chǎn)生透明圈的為纖維素分解菌
【解析】選B、C、D。為了防止污染,接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后需要冷卻后再挑取菌落,否則會(huì)因高溫使菌種死亡,A錯(cuò)誤;平板劃線操作中第二次及其后的劃線應(yīng)從上一次劃線的末端開(kāi)始,B正確;篩選分解尿素的細(xì)菌應(yīng)以尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源,C正確;在纖維素-剛果紅培養(yǎng)基上,能產(chǎn)生透明圈的為纖維素分解菌,D正確。
三、非選擇題:本題共4小題,共52分。9.(10分)(2020·龍巖模擬)大腸桿菌是國(guó)際上公認(rèn)的衛(wèi)生監(jiān)測(cè)指示菌,用于指示食品、飲用水等是否直接或間接受到了糞便的污染。少數(shù)微生物能分解乳糖,有些只產(chǎn)酸(酸性物質(zhì)),有些只產(chǎn)氣(氣體),而大腸桿菌既能產(chǎn)酸又能產(chǎn)氣,且產(chǎn)生的酸性物質(zhì)能與伊紅美藍(lán)反應(yīng)而呈現(xiàn)黑色。某小組為檢測(cè)某水體中大腸桿菌的污染狀況,選用了如下兩種培養(yǎng)基。
回答下列問(wèn)題:(1)從物理性質(zhì)上看,兩種培養(yǎng)基的類型　　　　　(填“相同”或“不同”)。在乳糖蛋白胨培養(yǎng)基中,為微生物的生長(zhǎng)提供氮源的物質(zhì)有　　　　　;NaCl除了提供無(wú)機(jī)鹽外,還具有　　　　　　　　的作用。?(2)乳糖蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí),不選用121 ℃高壓滅菌15 min的方法,而是選用115 ℃滅菌20 min,推測(cè)可能的原因是　。?(3)某小組取兩支含乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的試管A和B,A管中加入1 mL待測(cè)水樣,B管不作處理,然后都放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。已知溴甲酚紫在酸性時(shí)呈黃色,堿性時(shí)(pH高于6.8)呈紫色。若出現(xiàn)　　　　　時(shí),則提示水樣可能被大腸桿菌污染。?
(4)該小組為計(jì)數(shù)大腸桿菌的數(shù)目,同時(shí)還各取0.1 mL水樣直接涂布到三個(gè)伊紅美藍(lán)平板培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),分別統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)為34、36、38,估算出每毫升水樣中含360個(gè)大腸桿菌。有同學(xué)指出,估算的大腸桿菌數(shù)目不可信,其原因有　　　　　、　　　　　。?
【解析】(1)從物理性質(zhì)上看,兩種培養(yǎng)基的類型不同,乳糖蛋白胨培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基,伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基。在乳糖蛋白胨培養(yǎng)基中,蛋白胨、牛肉膏含有豐富的蛋白質(zhì),為微生物的生長(zhǎng)提供氮源;NaCl除了提供無(wú)機(jī)鹽外,Na+還具有維持細(xì)胞滲透壓穩(wěn)定的作用。(2)乳糖蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí),不選用121 ℃高壓滅菌15 min的方法,而是選用115 ℃滅菌20 min,推測(cè)可能的原因是培養(yǎng)基中有不耐高溫(121 ℃)的物質(zhì),如乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的成分中含有乳糖,121 ℃滅菌會(huì)使乳糖降解,碳化。(3)某小組取兩支含乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的試管A和B,A管中加入1 mL待測(cè)水樣,B管不作處理,然后都放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。已知溴甲酚紫在酸性時(shí)呈黃色,堿性時(shí)(pH高于6.8)呈紫色,大腸桿菌既能產(chǎn)酸又能產(chǎn)氣,若出現(xiàn)A管呈黃色并產(chǎn)氣,B管呈紫色不產(chǎn)氣,則提示水樣可能被大腸桿菌污染。
(4)該小組為計(jì)數(shù)大腸桿菌的數(shù)目,同時(shí)還各取0.1 mL水樣直接涂布到三個(gè)伊紅美藍(lán)平板培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),分別統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)為34、36、38,估算出每毫升水樣中含360個(gè)大腸桿菌。有同學(xué)指出,估算的大腸桿菌數(shù)目不可信,其原因有:大腸桿菌產(chǎn)生的酸性物質(zhì)能與伊紅美藍(lán)反應(yīng)而呈現(xiàn)黑色,故應(yīng)統(tǒng)計(jì)平板上呈現(xiàn)黑色的菌落,缺少不接種的空白對(duì)照,未排除其他因素的干擾。
答案:(1)不同　蛋白胨、牛肉膏　維持細(xì)胞滲透壓穩(wěn)定(2)培養(yǎng)基中有不耐高溫(121 ℃)的物質(zhì)(3)A管呈黃色并產(chǎn)氣,B管呈紫色不產(chǎn)氣(4)應(yīng)統(tǒng)計(jì)平板上呈現(xiàn)黑色的菌落　缺少不接種的空白對(duì)照
【易錯(cuò)警示】不是所有微生物培養(yǎng)基中均需加入特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)碳源、氮源、水分、無(wú)機(jī)鹽是微生物生長(zhǎng)必需的四大營(yíng)養(yǎng)成分,有些微生物可自行合成特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),而對(duì)那些合成能力有限或不能合成特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的微生物(如乳酸菌),則需在培養(yǎng)基中添加諸如維生素等物質(zhì)。
10.(12分)(創(chuàng)新性·高效分解油脂的微生物篩選)(2021·黃岡模擬)隨著人們生活質(zhì)量的提高,餐飲含油脂廢水的排放量大量增加,合理處置油脂廢水也成為新的課題。已知芽孢桿菌中有多種分解油脂產(chǎn)酸的菌種,科研人員欲采用下列流程篩選出能高效分解油脂的微生物。菌種取樣→分離培養(yǎng)→菌株的篩選→形態(tài)特征觀察和生理生化反應(yīng)鑒定?；卮鹣铝袉?wèn)題:
(1)選取飯店附近排污渠的含油脂廢水作為樣本,采樣約10 g,立即裝于試管內(nèi),此試管使用前需要經(jīng)過(guò)　　　　　處理。?(2)樣品分離培養(yǎng)前,一般需要將菌液進(jìn)行　　　　　處理,然后吸取0.2 mL菌液涂布到營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上,置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h,記錄菌落總數(shù)。將分離出的菌株按照菌落的　　　　　　　　　　　　等表觀特征初步分類。?
(3)上述步驟篩選出的菌株分別接種到含“花生油”的瓊脂培養(yǎng)基平板上,37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,篩選出油脂降解菌,培養(yǎng)基中“花生油”為菌種繁殖提供　　　　　。該培養(yǎng)基還需要加入中性紅染料(中性紅為脂溶性染料,遇酸為紅色,遇堿為黃色),挑選菌株要挑選顯　　　　　降解圈的菌株,并且選顏色較　　　　　(填“深”或“淺”)的為宜。?(4)實(shí)際操作中,由于油脂易聚集成液滴,常在培養(yǎng)基中加入2～3滴乳化劑使油脂分散均勻,鑒定效果更好,試分析原因　。?
【解析】(1)微生物實(shí)驗(yàn)需要無(wú)菌操作,所以試管使用前需要經(jīng)過(guò)滅菌處理。(2)菌液一般需要先經(jīng)過(guò)稀釋處理,再進(jìn)行涂布。不同微生物菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色不同,所以可以根據(jù)菌落的特征初步分類。(3)花生油的主要成分是脂肪,所以為菌種提供碳源和能源。脂肪可以被分解為甘油和脂肪酸,使培養(yǎng)基呈酸性,所以選擇紅色降解圈的菌株,顏色較深的脂肪酸含量越高,說(shuō)明分解能力越強(qiáng)。(4)油脂乳化后均勻分散在培養(yǎng)基表面,分解油脂的微生物產(chǎn)生的降解圈更為明顯,便于快速分離和鑒定。
答案:(1)滅菌　(2)稀釋　形狀、大小、隆起程度和顏色　(3)碳源和能源　紅色　深　(4)油脂乳化后均勻分散在培養(yǎng)基表面,分解油脂的微生物產(chǎn)生的降解圈更為明顯,便于快速分離和鑒定
11.(16分)(創(chuàng)新性·鎮(zhèn)江香醋的制備)(2021·蘇州模擬)鎮(zhèn)江香醋是我國(guó)傳統(tǒng)固態(tài)釀造食醋的典型代表,具有醇香濃厚、回味悠長(zhǎng)的特點(diǎn)。由于發(fā)酵過(guò)程的半開(kāi)放模式,來(lái)源于釀造原料、生產(chǎn)過(guò)程和操作器械的大量微生物會(huì)進(jìn)入發(fā)酵液中,與釀醋功能微生物構(gòu)成競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng)?？蒲腥藛T研究釀醋主要功能微生物的發(fā)酵上清液對(duì)雜菌生長(zhǎng)的抑制效果,并初步研究了抑菌活性物質(zhì)的種類和特性,如圖為部分研究結(jié)果。請(qǐng)分析回答:
(1)鎮(zhèn)江香醋釀制的主要功能微生物除乳酸桿菌外,還有　　　　　等,整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所需培養(yǎng)皿、接種用具均需　　　　　處理。?(2)科研人員先將10 mL含2%瓊脂的肉湯培養(yǎng)基傾注平板,待凝固后將無(wú)菌牛津杯(一種不銹鋼管)嵌于培養(yǎng)基中。接著將冷卻至50 ℃,含0.75%瓊脂糖的肉湯培養(yǎng)基與大腸桿菌混合后傾注于牛津杯中,以制備含菌培養(yǎng)皿。待培養(yǎng)基冷卻后取出牛津杯,每孔注入150 μL待測(cè)樣品,置于37 ℃下過(guò)夜培養(yǎng),測(cè)定抑菌圈大小,得到如圖1所示結(jié)果。①上述制備含大腸桿菌的培養(yǎng)皿所采用的接種方法是　　　　　(填“稀釋涂布平板法”或“平板劃線法”)。?
②每孔分別注入的是滅菌的超純水和發(fā)酵2天、4天、10天、20天后提取的發(fā)酵上清液,得到了圖1中0～4的抑菌圈,說(shuō)明　。?(3)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),發(fā)酵微生物上清液如果加熱處理,抑菌圈會(huì)減小,由此可見(jiàn),該上清液含有　　　　　(填“熱敏感”“耐熱的”或“熱敏感和耐熱的”)抑菌活性物質(zhì)。?(4)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,如使用不同的蛋白酶處理發(fā)酵微生物上清液,得到如圖2所示結(jié)果,由此可以推測(cè),部分抑菌物質(zhì)的化學(xué)本質(zhì)是　　　　　,另一部分具有抑菌效果的化學(xué)物質(zhì)主要是　　　　　。?(5)結(jié)合上述研究結(jié)果,試分析釀醋主要微生物的生長(zhǎng)和代謝對(duì)環(huán)境微生物的這種抑制作用的意義是　　　　　　　　　　。?
【解析】(1)工業(yè)發(fā)酵在保證無(wú)菌操作的前提下,一般都是涉及多種微生物的,釀醋需要醋酸菌,所以鎮(zhèn)江香醋釀制的主要功能微生物除乳酸桿菌外,還有醋酸桿菌等,整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所需培養(yǎng)皿、接種用具均需滅菌處理。(2)①由題干可知,上述制備含大腸桿菌的培養(yǎng)皿所采用的接種方法是稀釋涂布平板法。②每孔分別注入的是超純水和發(fā)酵2天、4天、10天、20天后提取的發(fā)酵上清液,得到了圖1中0～4的抑菌圈,說(shuō)明發(fā)酵初期抑菌物質(zhì)較少,隨著發(fā)酵時(shí)間延長(zhǎng),微生物的代謝產(chǎn)物增多,抑菌效果逐漸增強(qiáng)。(3)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),發(fā)酵微生物上清液如果加熱處理,抑菌圈會(huì)減小,由此可見(jiàn),加熱并沒(méi)有完全去除滅菌物質(zhì),則該上清液含有熱敏感和耐熱的抑菌活性物質(zhì)。
(4)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,如使用不同的蛋白酶處理發(fā)酵微生物上清液,得到如圖2所示結(jié)果,由此可以推測(cè),部分抑菌物質(zhì)的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)(可被高溫阻斷的),另一部分具有抑菌效果的化學(xué)物質(zhì)主要是發(fā)酵產(chǎn)生的有機(jī)酸。(5)結(jié)合上述研究結(jié)果,釀醋主要微生物的生長(zhǎng)和代謝對(duì)環(huán)境微生物的這種抑制作用的意義是維持自身功能和結(jié)構(gòu)的相對(duì)穩(wěn)定,保證醋酸發(fā)酵的正常進(jìn)行。答案:(1)醋酸桿菌　滅菌　(2)稀釋涂布平板法　發(fā)酵初期抑菌物質(zhì)較少,隨著發(fā)酵時(shí)間延長(zhǎng),微生物的代謝產(chǎn)物增多,抑菌效果逐漸增強(qiáng)　(3)熱敏感和耐熱的　(4)蛋白質(zhì)　有機(jī)酸(醋酸、乳酸等)　(5)維持自身功能和結(jié)構(gòu)的相對(duì)穩(wěn)定,保證醋酸發(fā)酵的正常進(jìn)行
12.(14分)(2021·江西模擬)新冠病毒疫情過(guò)后,復(fù)工復(fù)學(xué)面臨的問(wèn)題有許多。全體師生需要做好自我防護(hù),戴口罩屬于切斷傳播途徑,還有一條重要的切斷傳播途徑就是消毒。關(guān)于對(duì)微生物的培養(yǎng)、消毒、滅菌,回答下列問(wèn)題:(1)常用的消毒方法有　　　　　　　　　　　　　　　　　(列舉三點(diǎn)),消毒能殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物,不包括　　　　　。?(2)某興趣小組欲研究校園土壤微生物的種類,過(guò)程中要進(jìn)行規(guī)范的無(wú)菌操作,除了防止雜菌污染,還有什么目的?　。?(3)興趣小組想要分離純化土壤中的類地青霉,應(yīng)選用“查氏”培養(yǎng)基。培養(yǎng)基除了滿足營(yíng)養(yǎng)需求外,還需將pH調(diào)至　　　　　。?
(4)興趣小組可用　　　法純化并統(tǒng)計(jì)土壤中的大腸桿菌。測(cè)定微生物數(shù)量還可用　　　　　　　　和　　　　　。若要臨時(shí)保藏該細(xì)菌,先將菌種接種到試管中的　　　　　培養(yǎng)基中,在4 ℃的冰箱中保藏。?
【解析】(1)消毒能殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物,不包括芽孢和孢子,常用的消毒方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法。(2)某興趣小組欲研究校園土壤微生物的種類,調(diào)查過(guò)程中需要進(jìn)行無(wú)菌操作,這樣不僅能防止雜菌污染培養(yǎng)物,還能有效保護(hù)操作者自身不被微生物感染。(3)查氏培養(yǎng)基主要用于真菌的培養(yǎng)。真菌適合在酸性條件下培養(yǎng),因此培養(yǎng)基除了滿足營(yíng)養(yǎng)需求外,還需將pH調(diào)至酸性。
(4)稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計(jì)數(shù)和濾膜法都可用于微生物計(jì)數(shù),但只有稀釋涂布平板法不僅能純化并且能統(tǒng)計(jì)微生物的數(shù)量,因此要純化和分離土壤中的大腸桿菌要用稀釋涂布平板法進(jìn)行。菌種臨時(shí)保藏的做法是先將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基中,然后在合適的溫度條件下培養(yǎng),當(dāng)菌落長(zhǎng)成后,將試管放在4 ℃的冰箱中保藏。答案:(1)煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法 　芽孢和孢子　(2)能有效避免操作者自身被微生物感染　(3)酸性(4)稀釋涂布平板 　顯微鏡直接計(jì)數(shù)　濾膜法　固體斜面
【加固訓(xùn)練】　　(2021·沈陽(yáng)三模)某生物興趣小組,進(jìn)行土壤中尿素分解菌的分離和計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:(1)實(shí)驗(yàn)原理:尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥,可是并不能直接被農(nóng)作物吸收,需要轉(zhuǎn)變成氨,才能被吸收,這個(gè)轉(zhuǎn)變依賴于土壤中能產(chǎn)生　　　　　的微生物的作用。?(2)實(shí)驗(yàn)步驟及結(jié)果分析:Ⅰ:配制培養(yǎng)基(成分:葡萄糖、Na2HPO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O、尿素、Y、H2O、瓊脂),并制作無(wú)菌平板;
Ⅱ:設(shè)置　　　　　組和若干實(shí)驗(yàn)組,進(jìn)行相關(guān)操作;?Ⅲ:將各組平板置于恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間,統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)。①為了更好地鑒別出此類微生物,在培養(yǎng)基配方中加入了Y,Y是　　　　　。?②為了對(duì)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步統(tǒng)計(jì),需要用　　　　法進(jìn)行接種。具體情況如圖:?
③恒溫培養(yǎng)48小時(shí)后,在稀釋倍數(shù)為105下,平板上的菌落數(shù)目在30～300之間,小組成員進(jìn)行統(tǒng)計(jì),應(yīng)注意統(tǒng)計(jì)周圍為　　　　　菌落進(jìn)行記數(shù)。統(tǒng)計(jì)三個(gè)平板的菌落數(shù)目,分別為68、73、87,則錐形瓶中每?　毫升稀釋液中,尿素分解菌的活菌數(shù)為　　　。Ⅳ:實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析:興趣小組的同學(xué)在統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí),除了上述統(tǒng)計(jì)的菌落外,還發(fā)現(xiàn)有些菌落周圍的培養(yǎng)基沒(méi)有變化,試分析這些菌落產(chǎn)生的可能原因(答出一點(diǎn)即可)?　。(3)欲將上述實(shí)驗(yàn)得到的尿素分解菌進(jìn)行長(zhǎng)期保存,可采用　　　　　的方法。
【解析】(1)尿素分解菌能產(chǎn)生脲酶將尿素分解成氨,土壤中的尿素只有被分解成氨后才能被植物吸收利用,因此可用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基來(lái)分離尿素分解菌。(2)Ⅱ:為檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否受到雜菌污染,需要設(shè)置空白對(duì)照組。Ⅲ:①細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成了氨,氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng),pH升高,因此可以通過(guò)檢查培養(yǎng)基的pH變化來(lái)鑒別尿素分解菌的存在,在培養(yǎng)基配方中加入的Y可以是酚紅指示劑。②分析圖示實(shí)驗(yàn)過(guò)程可知,采用了稀釋涂布平板法進(jìn)行接種,用于計(jì)數(shù)土壤稀釋液中尿素分解菌的數(shù)量。③當(dāng)尿素分解菌產(chǎn)生的脲酶將尿素分解為氨后,使pH升高,酚紅指示劑會(huì)變紅,因此應(yīng)注意統(tǒng)計(jì)周圍為紅色的菌落
進(jìn)行計(jì)數(shù)。在稀釋倍數(shù)為105下,三個(gè)平板的菌落數(shù)目分別為68、73、87,因此錐形瓶中每毫升稀釋液中尿素分解菌的活菌數(shù)為(68+73+87)÷3×105=7.6×106個(gè)。Ⅳ:有些菌落周圍的培養(yǎng)基沒(méi)有變化,說(shuō)明這些細(xì)菌不能產(chǎn)生脲酶進(jìn)而利用尿素作為氮源,而氮源為微生物生長(zhǎng)所必需的,因此可推測(cè)可能存在固氮微生物,它們能利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈?而不利用培養(yǎng)基中的尿素分解成氨(不與指示劑作用),所以看到有些菌落產(chǎn)生而菌落周圍的培養(yǎng)基沒(méi)有變化。(3)對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種,可以采用甘油管藏的方法。

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