一、單項選擇題:本題共6小題,每小題6分,共36分。每題只有一個選項最符合題意。1.下列有關(guān)基因工程技術(shù)的敘述,正確的是(  )A.不同的限制酶切割形成的黏性末端一定不同B.PCR反應(yīng)中周期性的溫度設(shè)置是特定的,與擴增的目的基因和引物無關(guān)C.在構(gòu)建基因表達載體時通常需要大量的目的基因和載體D.質(zhì)粒上的目的基因都必須整合到受體細胞的DNA上并表達
【解析】選C。不同的限制酶切割形成的黏性末端可能相同,也可能不同,A錯誤;PCR反應(yīng)中周期性的溫度設(shè)置與擴增的目的基因和引物有關(guān),不同的目的基因和引物需要的溫度有所不同,B錯誤;在構(gòu)建基因表達載體時通常需要大量的目的基因和載體,這樣獲得基因表達載體的概率更高,C正確;質(zhì)粒本身也是DNA,也能自我復(fù)制,所以進入受體細胞以后,既可以自己進行表達,也可以整合到受體細胞的DNA上表達,D錯誤。
2.下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程的說法,正確的是(  )A.蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對蛋白質(zhì)分子直接進行操作B.蛋白質(zhì)工程能生產(chǎn)出自然界中不曾存在過的新型蛋白質(zhì)分子C.對蛋白質(zhì)的改造是通過直接改造相應(yīng)的mRNA來實現(xiàn)的D.蛋白質(zhì)工程的流程和天然蛋白質(zhì)合成的過程是相同的【解析】選B。蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對基因進行改造,A、C錯誤;蛋白質(zhì)工程的流程和天然蛋白質(zhì)合成的過程是不同的,是中心法則的逆推過程,D錯誤。
3.微生物常被用于基因工程中。下列相關(guān)敘述正確的是(  )A.從耐熱的細菌中獲取PCR所需的DNA連接酶B.大腸桿菌、酵母菌等是基因工程常用的載體C.作為載體的DNA分子需具有合成抗生素的基因D.常利用土壤農(nóng)桿菌將目的基因?qū)胫参锛毎窘馕觥窟xD。從耐熱的細菌中獲取PCR所需的DNA聚合酶,A錯誤;基因工程中常用的載體是質(zhì)粒、動植物病毒、λ噬菌體的衍生物,B錯誤;作為載體的DNA分子需要有抗生素抗性基因,便于后期的篩選,C錯誤;常利用土壤農(nóng)桿菌將目的基因?qū)胫参锛毎?D正確。
4.(2021·無錫模擬)利用外源基因在受體細胞中表達可生產(chǎn)人類所需要的產(chǎn)品。下列敘述中能說明外源基因在受體細胞中成功表達的是(  )A.棉花體細胞中檢測到蘇云金芽孢桿菌的Bt毒蛋白B.大腸桿菌中檢測到人胰島素基因及其mRNAC.山羊乳腺細胞中檢測到人生長激素DNA序列D.酵母菌細胞中檢測到重組載體上的標記基因
【解析】選A。棉花體細胞中檢測到蘇云金芽孢桿菌的Bt毒蛋白,說明外源基因已經(jīng)完成表達,A正確;大腸桿菌中檢測到人的胰島素基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA,說明外源基因已經(jīng)成功轉(zhuǎn)錄,但不能說明外源基因已經(jīng)完成表達,B錯誤;山羊乳腺細胞中檢測到人生長激素DNA序列,說明外源基因已經(jīng)導(dǎo)入受體細胞,但不能說明外源基因已經(jīng)完成表達,C錯誤;檢測到標記基因只能說明重組DNA導(dǎo)入受體細胞,不能說明外源基因已表達,D錯誤。
5.(2020·鹽城三模)長春花中的長春堿具有良好的抗腫瘤作用??蒲腥藛T利用TMS基因構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒,對愈傷組織進行遺傳改造,從其細胞分泌物中提取長春堿,解決長春堿供不應(yīng)求的問題,操作流程如圖。下列說法錯誤的是(  )A.過程②多采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法B.Ti質(zhì)粒是TMS基因的運載工具C.外植體通過①脫分化過程形成愈傷組織D.愈傷組織通過③再分化過程產(chǎn)生長春堿
【解析】選D。 過程②是把目的基因?qū)胫参锛毎?多采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,A正確;TMS基因和Ti質(zhì)粒通過酶切、連接,構(gòu)建成重組Ti質(zhì)粒,Ti質(zhì)粒是TMS基因的運載工具,B正確;外植體通過①脫分化過程形成愈傷組織,脫分化是將已分化的細胞經(jīng)過誘導(dǎo)后失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細胞的過程,C正確;已經(jīng)脫分化的愈傷組織在一定條件下,再分化出各種組織器官,或進一步形成完整植株,這一過程叫作再分化,③過程產(chǎn)生長春堿不需要進行再分化,D錯誤。
6.(2021·南京模擬)L天冬酰胺酶對于治療小兒白血病特別有效,但在臨床應(yīng)用中經(jīng)常出現(xiàn)過敏反應(yīng)??蒲腥藛T預(yù)期在L天冬酰胺酶的基礎(chǔ)上研發(fā)藥效性強但免疫性弱的蛋白質(zhì)藥物,下一步要做的是(  )A.合成編碼L天冬酰胺酶的DNA片段B.構(gòu)建含L天冬酰胺酶基因片段的表達載體C.設(shè)計出藥效性強但免疫性弱的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)D.利用DNA分子雜交的方法對表達產(chǎn)物進行檢測
【解析】選C?!昂铣删幋aL天冬酰胺酶的DNA片段”的上一步驟應(yīng)該是“根據(jù)蛋白質(zhì)氨基酸序列推斷編碼蛋白質(zhì)的DNA序列”,A錯誤;“構(gòu)建含L天冬酰胺酶基因片段的表達載體”的上一步驟應(yīng)該是“合成編碼L天冬酰胺酶的DNA片段”,B錯誤;“設(shè)計出藥效性強但免疫性弱的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)”的上一步驟是“確定預(yù)期蛋白質(zhì)功能”,C正確;“利用DNA分子雜交的方法對表達產(chǎn)物進行檢測”是已經(jīng)表達出相應(yīng)產(chǎn)物以后的操作,D錯誤。
二、多項選擇題:本題共1小題,每小題6分,共6分。每題有不止一個選項符合題意。7.(2021·江蘇七市調(diào)研)利用雞血進行DNA的粗提取與鑒定,有關(guān)敘述正確的是(  )A.將雞血離心后取上清液進行實驗B.DNA在0.14 ml·L-1 NaCl溶液中溶解度最大C.可用95 %的冷酒精進行DNA的純化D.在沸水浴條件下,DNA與二苯胺試劑反應(yīng)呈藍色
【解析】選C、D。在新鮮雞血中加入適量的檸檬酸鈉防止血液凝固,混合均勻后離心,取血細胞的沉淀物進行實驗,A錯誤;DNA在0.14 ml/LNaCl溶液中溶解度最小,故可使DNA析出從而去除雜質(zhì),B錯誤;DNA不溶于體積分數(shù)為95 %的冷酒精,因此在溶有DNA的濾液中加入體積分數(shù)為95 %的冷酒精后,用玻璃棒輕緩攪拌,這樣可以進一步純化DNA,C正確;DNA與二苯胺在沸水浴加熱的條件下呈現(xiàn)藍色,D正確。
三、非選擇題:本題共4小題,共58分。8.(12分)PCR技術(shù)是分子生物學(xué)實驗室里的一種常規(guī)手段,其原理是利用DNA的半保留復(fù)制,在試管中進行DNA的人工復(fù)制(如圖所示),在很短的時間內(nèi),將DNA擴增幾百萬倍甚至幾十億倍,使實驗室所需要的遺傳物質(zhì)不再受限于活的生物體。
(1)PCR的全稱是         ,94 ℃高溫使DNA雙鏈打開,這一步是打開   鍵,稱為    。而這一過程在細胞內(nèi)是通過     酶實現(xiàn)的。?(2)當溫度降低時,引物與模板      端結(jié)合,在耐高溫的      的作用下,引物沿模板延伸,此過程中原料是           ,遵循的原則是         。?(3)PCR技術(shù)的必要條件除模板、原料、ATP、酶以外,至少還需要三個條件,即液體環(huán)境、適宜的       和         ,前者由PCR儀自動調(diào)控,后者則靠       來維持。?
(4)DNA的復(fù)制需要引物,其主要原因是              。引物的實質(zhì)是           ,若將1個DNA分子拷貝10次,則需要在緩沖溶液中至少加入         個引物。?
【解析】(1)PCR全稱是多聚酶鏈式反應(yīng),94 ℃高溫使DNA雙鏈打開,這一步是打開氫鍵,稱為變性。這一過程在細胞內(nèi)是通過解旋酶實現(xiàn)的。(2)當溫度降至55 ℃時,引物與模板鏈3'端結(jié)合。加熱至72 ℃,在耐高溫的TaqDNA聚合酶的作用下,引物沿模板鏈延伸,此過程中原料是4種脫氧核苷酸,遵循的原則是堿基互補配對。(3)PCR技術(shù)必要條件除模板、原料、酶、ATP外,至少還需要液體環(huán)境,適宜的溫度和pH,前者由PCR儀自動調(diào)控,后者靠緩沖液來維持。(4)DNA復(fù)制需要引物的主要原因是DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA,只能從3'端延伸DNA鏈。引物的實質(zhì)是單鏈RNA或單鏈DNA分子。在DNA分子擴增時,需要2種引物,由于新合成的鏈都需要引物作為復(fù)制的起點,故所需的引物數(shù)目等于新合成的DNA鏈的數(shù)目,即2×210-2=211-2。
答案:(1)多聚酶鏈式反應(yīng) 氫 變性 解旋(2)3' Taq DNA聚合酶 4種脫氧核苷酸堿基互補配對(3)溫度 pH 緩沖液(4)DNA的復(fù)制不能從頭開始,DNA聚合酶只能從引物的3'端延伸DNA鏈 單鏈RNA或者單鏈DNA分子 211-2
9.(15分)(2021·蘇錫常鎮(zhèn)模擬)錦鯉皰疹病毒是一種雙鏈DNA病毒。如圖為TaqMan熒光探針技術(shù)的原理示意圖,探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時該探針被Taq酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增1個DNA分子,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。請回答下列問題:
(1)在基因工程中,目前獲取目的基因的常用方法除了利用PCR技術(shù)擴增外,還有      和       兩種類型。?(2)引物的化學(xué)本質(zhì)是    ,其與模板DNA的結(jié)合具有     性。?(3)通常情況下,探針中的GC含量比引物中的略高,這有利于保證退火時       與模板DNA結(jié)合。?(4)用TaqMan熒光探針技術(shù)檢測錦鯉皰疹病毒時,在反應(yīng)體系中要加相應(yīng)的病毒遺傳物質(zhì)、引物、探針和       、        酶等,其中酶發(fā)揮的具體作用是延伸DNA鏈和       。?(5)若最初該反應(yīng)體系中只有一個病毒DNA分子,經(jīng)n次循環(huán)后,需要消耗TaqMan熒光探針       個。?
【解析】(1)在基因工程中,目前獲取目的基因的常用方法有:利用PCR技術(shù)擴增、從基因文庫中獲取、人工合成。(2)引物的化學(xué)本質(zhì)是DNA單鏈,其與模板DNA的結(jié)合具有特異性。(3)通常情況下,探針中的GC含量比引物中的略高,這有利于保證退火時探針先于引物與模板DNA結(jié)合。(4)PCR擴增所需的條件包括:模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶),結(jié)合圖中信息可知,用TaqMan熒光探針技術(shù)檢測錦鯉皰疹病毒時,在反應(yīng)體系中要加相應(yīng)的病毒遺傳物質(zhì)、引物、探針和4種脫氧核苷酸、Taq酶等;由題圖可知,酶發(fā)揮的具體作用是延伸DNA鏈和將探針水解。
(5)根據(jù)題干信息可知,熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物數(shù)量完全同步,因此計算時需要去除原來親代的DNA分子,因此若最初該反應(yīng)體系中只有一個病毒DNA分子,經(jīng)n次循環(huán)后,需要消耗TaqMan熒光探針2n-1個。答案:(1)從基因文庫中獲取 人工合成 (2)DNA單鏈 特異 (3)探針先于引物 (4)4種脫氧核苷酸 Taq 將探針水解 (5)2n-1 
10.(16分)(2021·衡水模擬)我國一科研團隊將小麥液泡膜Na+/K+逆向轉(zhuǎn)運蛋白基因(TaNHX2基因)轉(zhuǎn)移到水稻細胞內(nèi),獲得了轉(zhuǎn)基因耐鹽水稻新品種?;卮鹣铝杏嘘P(guān)問題:
(1)獲取目的基因的方法很多。若已知TaNHX2基因序列,可以用     擴增該基因。首先根據(jù)序列設(shè)計、合成    并投入反應(yīng)體系,同時,還需要放入dNTP、目的基因、Taq酶等。還可以人工合成TaNHX2基因。如圖1表示人工合成的兩條若干個堿基的DNA單鏈,兩條鏈通過18個堿基對形成部分雙鏈DNA片段,再利用Klenw酶補平,獲得雙鏈DNA。從功能看,Klenw酶是一種     酶。?(2)圖2是3種限制酶的識別與酶切位點示意圖,構(gòu)建基因表達載體時,經(jīng)BamH Ⅰ酶切割得到的目的基因可以與圖3所示質(zhì)粒被    酶切后的產(chǎn)物連接,理由是                        。連接后的重組質(zhì)?!    ?填“能”“不能”或“不一定能”)被BamH Ⅰ切割。?
(3)基因表達載體通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化作用,就可以使目的基因進入植物細胞,并將其           ,使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達。?(4)小麥與水稻差異很大,但通過基因重組后,水稻卻能夠合成小麥的蛋白質(zhì),這是因為                   。?
【解析】(1)擴增目的基因常采用PCR技術(shù);需要根據(jù)設(shè)計序列合成引物;從圖中看出Klenw酶的作用是以DNA分子的一條鏈為模板,以脫氧核苷酸為原料合成DNA分子,催化磷酸二酯鍵的形成,所以是一種DNA聚合酶。(2)由圖2可知,BamH Ⅰ酶和Sau3A Ⅰ酶兩種酶切割片段產(chǎn)生的黏性末端互補,故經(jīng)BamH Ⅰ酶切割得到的目的基因可以與圖3所示質(zhì)粒被Sau3A Ⅰ酶切割后的產(chǎn)物連接。連接后的重組質(zhì)??赡苄纬刹煌男蛄?所以不一定能再被BamH Ⅰ切割。
(3)基因表達載體通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化作用,就可以使目的基因進入某植物根細胞,并將其插入植物細胞的染色體DNA上,使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達。(4)小麥與水稻差異很大,但小麥和水稻共用一套遺傳密碼,故通過基因重組后,水稻能夠合成小麥的蛋白質(zhì)。答案:(1)PCR技術(shù) 引物 DNA聚合(2)Sau3AⅠ BamHⅠ和Sau3AⅠ兩種酶切割片段產(chǎn)生的黏性末端互補 不一定能(3)插入植物細胞的染色體DNA上 (4)水稻和小麥共用一套遺傳密碼
11.(15分)弓形蟲病是全球性分布和流行的人畜共患病,弓形蟲寄生在人和動物的有核細胞內(nèi),危害嚴重。近年來,隨著對弓形蟲相關(guān)基因和抗原結(jié)構(gòu)的研究的不斷深入,弓形蟲基因工程疫苗的研發(fā)取得了重大進展??茖W(xué)家發(fā)現(xiàn),弓形蟲DNA中有一段P30基因,該基因突變會使弓形蟲的侵染能力顯著下降。據(jù)此,他們構(gòu)建了弓形蟲P30基因的乳酸乳球菌表達質(zhì)粒L2Ps-P30-T (表達載體)。請回答有關(guān)基因工程疫苗的問題。(1)弓形蟲與乳酸乳球菌相比較,弓形蟲的DNA主要以       和        的形式存在。?
(2)基因工程中,檢測弓形蟲DNA或疫苗目的基因可采用的方法是         雜交技術(shù)。?(3)如果表達質(zhì)粒L2Ps-P30-T在乳酸乳球菌中的表達產(chǎn)物,能使小鼠對弓形蟲感染具有免疫力,該表達產(chǎn)物屬于    (填“抗原”或“抗體”)。該表達質(zhì)粒除了具有L2Ps-P30-T、抗生素基因外,還必須具有的結(jié)構(gòu)是                    。?(4)科學(xué)家還發(fā)現(xiàn),一類MIC2蛋白是弓形蟲感染的主要毒力物質(zhì),其毒力作用的關(guān)鍵位點是色氨酸。請完成該項研究的下列步驟。
①科學(xué)家采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)構(gòu)建MIC2缺陷株,以此開發(fā)有效的活弱毒疫苗。②該蛋白質(zhì)工程首先需要進行的是設(shè)計改變MIC2蛋白中的    ;?③需要推測經(jīng)蛋白質(zhì)工程改造后毒力減弱的MIC2蛋白中的         ;?④將獲得的新的MIC2蛋白感染免疫小鼠,檢驗其毒力;⑤根據(jù)新的MIC2蛋白的氨基酸序列,找到相應(yīng)的           。?
【解析】(1)弓形蟲是動物,其DNA主要在線粒體和細胞核中,即線粒體DNA和染色體DNA。(2)基因工程采用已知DNA序列(目的基因的堿基序列)為探針,通過分子雜交的方法,檢測DNA(目的基因)。(3)如果表達質(zhì)粒L2Ps-P30-T在乳酸乳球菌中的表達產(chǎn)物能使小鼠對弓形蟲感染具有免疫力,由于該物質(zhì)對小鼠來說是外來物質(zhì),故該表達產(chǎn)物屬于抗原。與一般表達載體相同,該表達質(zhì)粒除了具有L2Ps-P30-T (目的基因)、抗生素基因(標記基因),還必須具有的結(jié)構(gòu)是復(fù)制原點、啟動子、終止子。

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