?專題11 生物技術實踐
【2021年】
1．（2021·1月浙江選考）用白蘿卜制作泡菜的過程中，采用適當方法可縮短腌制時間。下列方法中錯誤的是（　　）
A．將白蘿卜切成小塊
B．向容器中通入無菌空氣
C．添加已經(jīng)腌制過的泡菜汁
D．用沸水短時處理白蘿卜塊
2．（2021·湖南高考真題）大熊貓是我國特有的珍稀野生動物，每只成年大熊貓每日進食竹子量可達12~38kg。大熊貓可利用竹子中8%的纖維素和27%的半纖維素。研究人員從大熊貓糞便和土壤中篩選纖維素分解菌?；卮鹣铝袉栴}：
（1）纖維素酶是一種復合酶，一般認為它至少包括三種組分，即_________。為篩選纖維素分解菌，將大熊貓新鮮糞便樣品稀釋液接種至以_________為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，該培養(yǎng)基從功能上分類屬于_________培養(yǎng)基。
（2）配制的培養(yǎng)基必須進行滅菌處理，目的是_________。檢測固體培養(yǎng)基滅菌效果的常用方法是_________。
（3）簡要寫出測定大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌活菌數(shù)的實驗思路_________。
（4）為高效降解農(nóng)業(yè)秸稈廢棄物，研究人員利用從土壤中篩選獲得的3株纖維素分解菌，在37℃條件下進行玉米秸稈降解實驗，結果如表所示。在該條件下纖維素酶活力最高的是菌株_________，理由是_________。
菌株
秸稈總重(g)
秸稈殘重(g)
秸稈失重（%）
纖維素降解率（%）
A
2.00
1.51
24.50
16.14
B
2.00
1.53
23.50
14.92
C
2.00
1.42
29.00
23.32

3．（2021·浙江高考真題）回答下列（一）、（二）小題：
（一）某環(huán)保公司從淤泥中分離到一種高效降解富營養(yǎng)化污水污染物的細菌菌株，制備了固定化菌株。
（1）從淤泥中分離細菌時常用劃線分離法或________法，兩種方法均能在固體培養(yǎng)基上形成________。對分離的菌株進行誘變、________和鑒定，從而獲得能高效降解富營養(yǎng)化污水污染物的菌株。該菌株只能在添加了特定成分X的培養(yǎng)基上繁殖。
（2）固定化菌株的制備流程如下；①將菌株與該公司研制的特定介質(zhì)結合；②用蒸餾水去除________；③檢驗固定化菌株的________。菌株與特定介質(zhì)的結合不宜直接采用交聯(lián)法和共價偶聯(lián)法，可以采用的2種方法是________。
（3）對外，只提供固定化菌株有利于保護該公司的知識產(chǎn)權，推測其原因是________。
（二）三葉青為蔓生的藤本植物，以根入藥。由于野生三葉青對生長環(huán)境要求非?？量蹋约吧鷳B(tài)環(huán)境的破壞和過度的采挖，目前我國野生三葉青已十分珍稀。
（1）為保護三葉青的________多樣性和保證藥材的品質(zhì)，科技工作者依據(jù)生態(tài)工程原理，利用________技術，實現(xiàn)了三葉青的林下種植。
（2）依據(jù)基因工程原理，利用發(fā)根農(nóng)桿菌侵染三葉青帶傷口的葉片，葉片產(chǎn)生酚類化合物，誘導發(fā)根農(nóng)桿菌質(zhì)粒上vir系列基因表達形成________和限制性核酸內(nèi)切酶等，進而從質(zhì)粒上復制并切割出一段可轉移的DNA片段（T-DNA）。T-DNA進入葉片細胞并整合到染色體上，T-DNA上rol系列基因表達，產(chǎn)生相應的植物激素，促使葉片細胞持續(xù)不斷地分裂形成________，再分化形成毛狀根。
（3）剪取毛狀根，轉入含頭孢類抗生素的固體培養(yǎng)基上進行多次________培養(yǎng)，培養(yǎng)基中添加抗生素的主要目的是________。最后取毛狀根轉入液體培養(yǎng)基、置于搖床上進行懸浮培養(yǎng)，通過控制搖床的________和溫度，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基成分中的________，獲得大量毛狀根，用于提取藥用成分。
4．（2021·全國乙卷高考真題）工業(yè)上所說的發(fā)酵是指微生物在有氧或無氧條件下通過分解與合成代謝將某些原料物質(zhì)轉化為特定產(chǎn)品的過程。利用微生物發(fā)酵制作醬油在我國具有悠久的歷史。某企業(yè)通過發(fā)酵制作醬油的流程示意圖如下。

回答下列問題：
（1）米曲霉發(fā)酵過程中，加入大豆、小麥和麥麩可以為米曲霉的生長提供營養(yǎng)物質(zhì)，大豆中的___________可為米曲霉的生長提供氮源，小麥中的淀粉可為米曲霉的生長提供___________。
（2）米曲霉發(fā)酵過程的主要目的是使米曲霉充分生長繁殖，大量分泌制作醬油過程所需的酶類，這些酶中的_____、______能分別將發(fā)酵池中的蛋白質(zhì)和脂肪分解成易于吸收、風味獨特的成分，如將蛋白質(zhì)分解為小分子的肽和__________。米曲霉發(fā)酵過程需要提供營養(yǎng)物質(zhì)、通入空氣并攪拌，由此可以判斷米曲霉屬于___________（填“自養(yǎng)厭氧”“異養(yǎng)厭氧”或“異養(yǎng)好氧”）微生物。
（3）在發(fā)酵池發(fā)酵階段添加的乳酸菌屬于___________（填“真核生物”或“原核生物”）；添加的酵母菌在無氧條件下分解葡萄糖的產(chǎn)物是___________。在該階段抑制雜菌污染和繁殖是保證醬油質(zhì)量的重要因素，據(jù)圖分析該階段中可以抑制雜菌生長的物質(zhì)是___________（答出1點即可）。
5．（2021·廣東高考真題）中國科學家運用合成生物學方法構建了一株嗜鹽單胞菌H，以糖蜜（甘蔗榨糖后的廢棄液，含較多蔗糖）為原料，在實驗室發(fā)酵生產(chǎn)PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整體利用價值。工藝流程如圖。

回答下列問題：
（1）為提高菌株H對蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液體培養(yǎng)基中將蔗糖作為___________，并不斷提高其濃度，經(jīng)多次傳代培養(yǎng)（指培養(yǎng)一段時間后，將部分培養(yǎng)物轉入新配的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)）以獲得目標菌株。培養(yǎng)過程中定期取樣并用___________的方法進行菌落計數(shù)，評估菌株增殖狀況。此外，選育優(yōu)良菌株的方法還有___________等。（答出兩種方法即可）
（2）基于菌株H嗜鹽、酸堿耐受能力強等特性，研究人員設計了一種不需要滅菌的發(fā)酵系統(tǒng)，其培養(yǎng)基鹽濃度設為60g/L，pH為10，菌株H可正常持續(xù)發(fā)酵60d以上。該系統(tǒng)不需要滅菌的原因是___________。（答出兩點即可）
（3）研究人員在工廠進行擴大培養(yǎng)，在適宜的營養(yǎng)物濃度、溫度、pH條件下發(fā)酵，結果發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液中菌株H細胞增殖和PHA產(chǎn)量均未達到預期，并產(chǎn)生了少量乙醇等物質(zhì)，說明發(fā)酵條件中___________可能是高密度培養(yǎng)的限制因素。
（4）菌株H還能通過分解餐廚垃圾（主要含蛋白質(zhì)、淀粉、油脂等）來生產(chǎn)PHA，說明其能分泌___________。
6．（2021·全國甲卷高考真題）加酶洗衣粉是指含有酶制劑的洗衣粉。某同學通過實驗比較了幾種洗衣粉的去漬效果（“+”越多表示去漬效果越好），實驗結果見下表。

加酶洗衣粉A
加酶洗衣粉B
加酶洗衣粉C
無酶洗衣粉(對照)
血漬
+++
+
+++
+
油漬
+
+++
+++
+
根據(jù)實驗結果回答下列問題：
（1）加酶洗衣粉A中添加的酶是__________；加酶洗衣粉B中添加的酶是__________；加酶洗衣粉C中添加的酶是__________。
（2）表中不宜用于洗滌蠶絲織物的洗衣粉有__________，原因是___________。
（3）相對于無酶洗衣粉，加酶洗衣粉去漬效果好的原因是___________。
（4）關于酶的應用，除上面提到的加酶洗衣粉外，固定化酶也在生產(chǎn)實踐中得到應用，如固定化葡萄糖異構酶已經(jīng)用于高果糖漿生產(chǎn)。固定化酶技術是指___________。固定化酶在生產(chǎn)實踐中應用的優(yōu)點是_________（答出1點即可）。
7．（2021·河北高考真題）葡萄酒生產(chǎn)過程中會產(chǎn)生大量的釀酒殘渣（皮渣）。目前這些皮渣主要用作飼料或肥料，同時研究者也采取多種措施拓展其利用價值。
回答下列問題：
（1）皮渣中含有較多的天然食用色素花色苷，可用萃取法提取。萃取前將原料干燥、粉碎的目的分別是__________，萃取效率主要取決于萃取劑的__________。萃取過程需要在適宜溫度下進行，溫度過高會導致花色苷__________。研究發(fā)現(xiàn)，萃取時輔以纖維素酶、果膠酶處理可提高花色苷的提取率，原因是____________________。
（2）為了解皮渣中微生物的數(shù)量，取10g皮渣加入90mL無菌水，混勻、靜置后取上清液，用稀釋涂布平板法將0．1mL稀釋液接種于培養(yǎng)基上。104倍稀釋對應的三個平板中菌落數(shù)量分別為78、91和95，則每克皮渣中微生物數(shù)量為__________個。
（3）皮渣堆積會積累醋酸菌，可從中篩選優(yōu)良菌株。制備醋酸菌初篩平板時，需要將培養(yǎng)基的pH調(diào)至__________性，滅菌后須在未凝固的培養(yǎng)基中加入無菌碳酸鈣粉末、充分混勻后倒平板，加入碳酸鈣的目的是______________________________。培養(yǎng)篩選得到的醋酸菌時，在缺少糖源的液體培養(yǎng)基中可加入乙醇作為__________。
（4）皮渣堆積過程中也會積累某些兼性厭氧型乳酸菌。初篩醋酸菌時，乳酸菌有可能混入其中，且兩者菌落形態(tài)相似。請設計一個簡單實驗，區(qū)分篩選平板上的醋酸菌和乳酸菌_________。（簡要寫出實驗步驟和預期結果）
【2020年】
1.（2020·山東卷）野生型大腸桿菌可以在基本培養(yǎng)基上生長，發(fā)生基因突變產(chǎn)生的氨基酸依賴型菌株需要在基本培養(yǎng)基上補充相應氨基酸才能生長。將甲硫氨酸依賴型菌株M和蘇氨酸依賴型菌株N單獨接種在基本培養(yǎng)基上時，均不會產(chǎn)生菌落。某同學實驗過程中發(fā)現(xiàn)，將M、N菌株混合培養(yǎng)一段時間，充分稀釋后再涂布到基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后出現(xiàn)許多由單個細菌形成的菌落，將這些菌落分別接種到基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后均有菌落出現(xiàn)。該同學對這些菌落出現(xiàn)原因的分析，不合理的是（ ）
A. 操作過程中出現(xiàn)雜菌污染
B. M、N菌株互為對方提供所缺失的氨基酸
C. 混合培養(yǎng)過程中，菌株獲得了對方的遺傳物質(zhì)
D. 混合培養(yǎng)過程中，菌株中已突變的基因再次發(fā)生突變
2.（2020·天津卷）閱讀下列材料，回答下列小題。
甜瓣子是豆瓣醬的重要成分，風味受蠶豆蛋白分解產(chǎn)生的氨基酸影響，也受發(fā)酵過程中不同微生物的多種代謝產(chǎn)物影響。其生產(chǎn)工藝如下圖所示。

某研究團隊對加鹽水后的發(fā)酵階段的傳統(tǒng)工藝（鹽度15%，溫度37 ℃，發(fā)酵30天）進行了改良，改良后甜瓣子風味得以提升。新工藝參數(shù)如下表所示。
時期
時段（天）
鹽度（%）
溫度（℃）
前期
0~12
6
12
中期
12~16
6
37
后期
16~30
15
37
兩種工藝的結果比較見下圖。

下列關于本研究的實驗方法與原理的描述，錯誤的是（ ）
A. 發(fā)酵開始階段的微生物主要來源于制曲過程的積累
B. 蠶豆瓣可提供微生物生長繁殖所需的碳源和氮源
C. 溫度與鹽度都影響微生物的生長繁殖
D. 定期取樣，使用平板劃線法統(tǒng)計活細菌總數(shù)
3.（2020·浙江卷）下列關于微生物培養(yǎng)及利用的敘述，錯誤的是（ ）
A. 利用尿素固體培養(yǎng)基可迅速殺死其他微生物，而保留利用尿素的微生物
B. 配制培養(yǎng)基時應根據(jù)微生物的種類調(diào)整培養(yǎng)基的pH
C. 酵母菌不能直接利用糯米淀粉發(fā)酵得到糯米酒
D. 適宜濃度的酒精可使醋化醋桿菌活化
4.（2020·江蘇卷）甲、乙兩個實驗小組分別進行了“酵母細胞固定化技術”的實驗，結果如下圖所示。出現(xiàn)乙組實驗結果的原因可能為（ ）

A. CaCl2溶液濃度過高 B. 海藻酸鈉溶液濃度過高
C. 注射器滴加速度過慢 D. 滴加時注射器出口浸入到CaCl2溶液中
5.（2020·江蘇卷）某同學在線提交了在家用帶蓋玻璃瓶制作果酒和果醋的實驗報告，他的做法錯誤的是（ ）
A. 選擇新鮮的葡萄略泇沖洗，除去枝梗后榨汁
B. 將玻璃瓶用酒精消毒后，裝滿葡萄汁
C. 酒精發(fā)酵期間，根據(jù)發(fā)酵進程適時擰松瓶蓋放氣
D. 酒精發(fā)酵后去除瓶蓋，蓋一層紗布，再進行醋酸發(fā)酵
6.（2020·江蘇卷）為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細菌，培養(yǎng)結果如圖所示。下列敘述正確的是（ ）

A. 倒平板后需間歇晃動，以保證表面平整
B. 圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細菌數(shù)量均太多，應從Ⅲ區(qū)挑取單菌落
C. 該實驗結果因單菌落太多，不能達到菌種純化的目的
D. 菌落周圍的纖維素被降解后，可被剛果紅染成紅色
7.（2020·課標Ⅰ）某種物質(zhì)S（一種含有C、H、N的有機物）難以降解，會對環(huán)境造成污染，只有某些細菌能降解S。研究人員按照下圖所示流程從淤泥中分離得到能高效降解S的細菌菌株。實驗過程中需要甲、乙兩種培養(yǎng)基，甲的組分為無機鹽、水和S，乙的組分為無機鹽、水、S和Y。

回答下列問題：
（1）實驗時，盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶通常采用_______________的方法進行滅菌。乙培養(yǎng)基中的Y物質(zhì)是_______________。甲、乙培養(yǎng)基均屬于______________培養(yǎng)基。
（2）實驗中初步估測搖瓶M中細菌細胞數(shù)為2×107 個/mL，若要在每個平板上涂布100μL稀釋后的菌液，且保證每個平板上長出的菌落數(shù)不超過200個，則至少應將搖瓶M中的菌液稀釋________________倍。
（3）在步驟⑤的篩選過程中，發(fā)現(xiàn)當培養(yǎng)基中的S超過某一濃度時，某菌株對S的降解量反而下降，其原因可能是________________（答出1點即可）。
（4）若要測定淤泥中能降解S的細菌細胞數(shù)，請寫出主要實驗步驟________________。
（5）上述實驗中，甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同，但都能為細菌的生長提供4類營養(yǎng)物質(zhì)，即________________。
8.（2020·課標Ⅱ）研究人員從海底微生物中分離到一種在低溫下有催化活性的α-淀粉酶A3，并對其進行了研究?；卮鹣铝袉栴}：
（1）在以淀粉為底物測定A3酶活性時，既可檢測淀粉的減少，檢測應采用的試劑是_________，也可采用斐林試劑檢測________的增加。
（2）在A3的分離過程中可采用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測其純度，通常會在凝膠中添加SDS，SDS的作用是___________________和___________________。
（3）本實驗中，研究人員在確定A3的最適pH時使用了三種組分不同的緩沖系統(tǒng)，結果如圖所示。某同學據(jù)圖判斷，緩沖系統(tǒng)的組分對酶活性有影響，其判斷依據(jù)是______________。

（4）在制備A3的固定化酶時，一般不宜采用包埋法，原因是___________________________ （答出1 點即可）。
9.（2020·新課標Ⅲ）水果可以用來加工制作果汁、果酒和果醋等?；卮鹣铝袉栴}：
（1）制作果汁時，可以使用果膠酶、纖維素酶等提高水果的出汁率和澄清度。果膠酶是分解果膠的一類酶的總稱，包括多聚半乳糖醛酸酶、________（答出2種即可）。纖維素酶可以分解植物______________（填細胞膜或細胞壁）中的纖維素。
（2）用果膠酶處理果泥時，為了提高出汁率，需要控制反應的溫度，原因是__________________。
（3）現(xiàn)有甲乙丙三種不同來源的果膠酶，某同學擬在果泥用量、溫度、pH等所有條件都相同的前提下比較這三種酶的活性。通常，酶活性的高低可用_____________來表示。
（4）獲得的果汁（如蘋果汁）可以用來制作果酒或者果醋，制作果酒需要__________________菌，這一過程中也需要O2，O2的作用是__________________。制作果醋需要醋酸菌，醋酸菌屬于_____________（填好氧或厭氧）細菌。
10.（2020·天津卷）某植物有A、B兩品種。科研人員在設計品種A組織培養(yǎng)實驗時，參照品種B的最佳激素配比（見下表）進行預實驗。
品種B組織培養(yǎng)階段
細胞分裂素濃度（μmol/L）
生長素濃度（μmol/L）
Ⅰ誘導形成愈傷組織
m1
n1
Ⅱ誘導形成幼芽
m2
n2
Ⅲ誘導生根
m3
n3
據(jù)表回答：
（1）Ⅰ階段時通常選擇莖尖、幼葉等作為外植體，原因是________________。
（2）在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ階段中發(fā)生基因選擇性表達的是________________階段。
（3）為確定品種A的Ⅰ階段的最適細胞分裂素濃度，參照品種B的激素配比（m1>2．0），以0．5 μmol/L為梯度，設計5個濃度水平的實驗，細胞分裂素最高濃度應設為________μmol/L。
（4）Ⅲ階段時，科研人員分別選用濃度低于或高于n3 μmol/L的生長素處理品種A幼芽都能達到最佳生根效果，原因是處理幼芽時，選用低濃度生長素時的處理方法為________，選用高濃度生長素時的處理方法為________。
（5）在________階段用秋水仙素對材料進行處理，最易獲得由單個細胞形成的多倍體。
11.（2020·江蘇卷）產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，科研人員開展了相關研究。請回答下列問題：
（1）常規(guī)微生物實驗中，下列物品及其滅菌方法錯誤的是__________（填編號）。
編號
①
②
③
④
物品
培養(yǎng)基
接種環(huán)
培養(yǎng)皿
涂布器
滅菌方法
高壓蒸汽
火焰灼燒
干熱
臭氧
（2）稱取1．0g某土壤樣品，轉入99mL無菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)__________后，獲得細胞密度不同的菌懸液。分別取0．1mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上，其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后平均長出了46個酵母菌落，則該樣本中每克土壤約含酵母菌__________個。
（3）為了進一步提高酵母菌產(chǎn)酶能力，對分離所得的菌株，采用射線輻照進行__________育種。將輻照處理后的酵母菌涂布在以__________為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，按照菌落直徑大小進行初篩，選擇直徑__________的菌落，純化后獲得A、B兩突變菌株。
（4）在處理含油廢水的同時，可獲得單細胞蛋白，實現(xiàn)污染物資源化。為評價A、B兩菌株的相關性能，進行了培養(yǎng)研究，結果如圖。據(jù)圖分析，應選擇菌株__________進行后續(xù)相關研究，理由是__________。

12.（2020·江蘇卷）如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，簡捷地分析出已知序列兩側的序列，具體流程如下圖（以EcoR I酶切為例）：

請據(jù)圖回答問題：
（1）步驟I用的EcoR I是一種__________酶，它通過識別特定的__________切割特定位點。
（2）步驟Ⅱ用的DNA連接酶催化相鄰核苷酸之間的3′-羥基與5′-磷酸間形成__________；PCR循環(huán)中，升溫到95℃是為了獲得__________；TaqDNA聚合酶的作用是催化__________。
（3）若下表所列為已知的DNA序列和設計的一些PCR引物，步驟Ⅲ選用的PCR引物必須是__________（從引物①②③④中選擇，填編號）。

DNA序列（虛線處省略了部分核苷酸序列）
已知序列

PCR引物
①5′- AACTATGCGCTCATGA-3′
②5′- GCAATGCGTAGCCTCT-3′
③5′- AGAGGCTACGCATTGC-3′
④5′- TCATGAGCGCATAGTT-3′
（4）對PCR產(chǎn)物測序，經(jīng)分析得到了片段F的完整序列。下列DNA單鏈序列中（虛線處省略了部分核苷酸序列），結果正確的是_________________。
A． 5′- AACTATGCG-----------AGCCCTT-3′
B． 5′- AATTCCATG-----------CTGAATT-3′
C． 5′- GCAATGCGT----------TCGGGAA-3′
D． 5′- TTGATACGO----------CGAGTAC-3′
【2019年】
1．（2019北京卷·3）篩選淀粉分解菌需使用以淀粉為唯一碳源的培養(yǎng)基。接種培養(yǎng)后，若細菌能分解淀粉，培養(yǎng)平板經(jīng)稀碘液處理，會出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈（如圖），實驗結果見下表。

菌種
菌落直徑：C（mm）
透明圈直徑：H（mm）
H/C
細菌Ⅰ
5.1
11.2
2.2
細菌Ⅱ
8.1
13.0
1.6
有關本實驗的敘述，錯誤的是
A．培養(yǎng)基除淀粉外還含有氮源等其他營養(yǎng)物質(zhì)
B．篩選分解淀粉的細菌時，菌液應稀釋后涂布
C．以上兩種細菌均不能將淀粉酶分泌至細胞外
D．H/C值反映了兩種細菌分解淀粉能力的差異
2．（2019江蘇卷·9）下列關于傳統(tǒng)發(fā)酵技術應用的敘述，正確的是
A．利用乳酸菌制作酸奶過程中，先通氣培養(yǎng)，后密封發(fā)酵
B．家庭制作果酒、果醋和腐乳通常都不是純種發(fā)酵
C．果醋制作過程中發(fā)酵液pH逐漸降低，果酒制作過程中情況相反
D．毛霉主要通過產(chǎn)生脂肪酶、蛋白酶和纖維素酶參與腐乳發(fā)酵
3．（2019江蘇卷·10）下列關于DNA粗提取與鑒定的敘述，錯誤的是
A．用同樣方法從等體積兔血和雞血中提取的DNA量相近
B．DNA析出過程中，攪拌操作要輕柔以防DNA斷裂
C．預冷的乙醇可用來進一步純化粗提的DNA
D．用二苯胺試劑鑒定DNA需要進行水浴加熱
4．（2019江蘇卷·13）下列關于加酶洗滌劑的敘述，錯誤的是
A．加酶洗衣粉中一般都含有酸性脂肪酶
B．用加酶洗滌劑能減少洗滌時間并節(jié)約用水
C．含纖維素酶洗滌劑可以洗滌印花棉織物
D．加酶洗衣粉中的蛋白酶是相對耐高溫的
5．（2019江蘇卷·19）下列關于產(chǎn)纖維素酶菌分離及運用的敘述，不合理的是
A．篩選培養(yǎng)基中應含有大量的葡萄糖或蔗糖提供生長營養(yǎng)
B．可從富含腐殖質(zhì)的林下土壤中篩選產(chǎn)纖維素酶菌
C．在分離平板上長出的菌落需進一步確定其產(chǎn)纖維素酶的能力
D．用產(chǎn)纖維素酶菌發(fā)酵處理農(nóng)作物秸稈可提高其飼用價值
6．（2019江蘇卷·20）為探究矮牽牛原生質(zhì)體的培養(yǎng)條件和植株再生能力，某研究小組的實驗過程如下圖。下列敘述正確的是

A．過程①獲得的原生質(zhì)體需懸浮在30%蔗糖溶液中
B．過程②需提高生長素的比例以促進芽的分化
C．過程③需用秋水仙素處理誘導細胞壁再生
D．原生質(zhì)體雖無細胞壁但仍保持細胞的全能性
7．（2019湖北部分重點中學聯(lián)考）下列有關加酶洗衣粉中酶的說法，不正確的是
A．通過基因工程生產(chǎn)出的特殊酶，不易失活
B．目前常用的酶制劑不包括脂肪酶
C．用特殊化學物質(zhì)將酶包裹，使其與其他成分隔離
D．加酶洗衣粉的酶能耐酸、耐堿、忍受表面活性劑和較高溫度
8．（2019江蘇無錫四校聯(lián)考）下列關于“探究加酶洗衣粉和普通洗衣粉的洗滌效果”的敘述，正確的是
A．先用熱水溶解洗衣粉，再將水溫調(diào)節(jié)到最適溫度
B．實驗的觀察指標可以是相同洗滌時間內(nèi)污漬的殘留程度
C．相同pH時加酶洗衣粉洗滌效果好于普通洗衣粉
D．衣物質(zhì)地和洗衣粉用量不會影響實驗結果
9．（2019全國卷Ⅰ·37）
已知一種有機物X（僅含有C、H兩種元素）不易降解，會造成環(huán)境污染。某小組用三種培養(yǎng)基篩選土壤中能高效降解X的細菌（目標菌）。
Ⅰ號培養(yǎng)基：在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入X（5 g/L）。
Ⅱ號培養(yǎng)基：氯化鈉（5 g/L），硝酸銨（3 g/L），其他無機鹽（適量），X（15 g/L）。
Ⅲ號培養(yǎng)基：氯化鈉（5 g/L），硝酸銨（3 g/L），其他無機鹽（適量）。X（45 g/L）。
回答下列問題。
（1）在Ⅰ號培養(yǎng)基中，為微生物提供氮源的是___________。Ⅱ、Ⅲ號培養(yǎng)基中為微生物提供碳源的有機物是_________。
（2）若將土壤懸浮液接種在Ⅱ號液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時間后，不能降解X的細菌比例會_________，其原因是_________。
（3）Ⅱ號培養(yǎng)基加入瓊脂后可以制成固體培養(yǎng)基，若要以該固體培養(yǎng)基培養(yǎng)目標菌并對菌落進行計數(shù)，接種時，應采用的方法是______________。
（4）假設從Ⅲ號培養(yǎng)基中得到了能高效降解X的細菌，且該菌能將X代謝為丙酮酸，則在有氧條件下，丙酮酸可為該菌的生長提供_________和_________。
10．（2019全國卷II·37）物質(zhì)W是一種含氮有機物，會污染土壤。W在培養(yǎng)基中達到一定量時培養(yǎng)基表現(xiàn)為不透明。某研究小組欲從土壤中篩選出能降解W的細菌（目標菌）?；卮鹣铝袉栴}。
（1）要從土壤中分離目標菌，所用選擇培養(yǎng)基中的氮源應該是_________。
（2）在從土壤中分離目標菌的過程中，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上甲、乙兩種細菌都能生長并形成菌落（如圖所示）。如果要得到目標菌，應該選擇________菌落進一步純化，選擇的依據(jù)是________。

（3）土壤中的某些微生物可以利用空氣中的氮氣作為氮源。若要設計實驗進一步確定甲、乙菌能否利用空氣中的氮氣作為氮源，請簡要寫出實驗思路、預期結果和結論，即_______。
（4）該小組將人工合成的一段DNA轉入大腸桿菌，使大腸桿菌產(chǎn)生能降解W的酶（酶E）。為了比較酶E與天然酶降解W能力的差異，該小組擬進行如下實驗，請完善相關內(nèi)容。
①在含有一定濃度W的固體培養(yǎng)基上，A處滴加酶E的緩沖液，B處滴加含有相同濃度天然酶的緩沖液，C處滴加_________，三處滴加量相同。
②一段時間后，測量透明圈的直徑。若C處沒有出現(xiàn)透明圈，說明___________；若A、B處形成的透明圈直徑大小相近，說明___________。
11．（2019全國卷III·37）回答下列與細菌培養(yǎng)相關的問題。
（1）在細菌培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中能同時提供碳源、氮源的成分是______________________（填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”）。通常，制備培養(yǎng)基時要根據(jù)所培養(yǎng)細菌的不同來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH，其原因是________。硝化細菌在沒有碳源的培養(yǎng)基上______（填“能夠”或“不能”）生長，原因是______________________________。
（2）用平板培養(yǎng)細菌時一般需要將平板____________（填“倒置”或“正置”）。
（3）單個細菌在平板上會形成菌落，研究人員通?？筛鶕?jù)菌落的形狀、大小、顏色等特征來初步區(qū)分不同種的微生物，原因是________________________________________。
（4）有些使用后的培養(yǎng)基在丟棄前需要經(jīng)過___________________處理，這種處理可以殺死丟棄物中所有的微生物。
12．（2019浙江4月選考·32）回答下列（一）小題：
（一）回答與果膠和果膠酶有關的問題：
（1）通常從腐爛的水果上分離產(chǎn)果膠酶的微生物，其原因除水果中果膠含量較高外，還因為______。
（2）為了獲得高產(chǎn)果膠酶微生物的單菌落，通常對分離或誘變后的微生物懸液進行______。
（3）在某種果汁生產(chǎn)中，用果膠酶處理顯著增加了產(chǎn)量，其主要原因是果膠酶水解果膠使______。果汁生產(chǎn)中的殘渣果皮等用于果膠生產(chǎn)，通常將其提取液濃縮后再加入______。使之形成絮狀物，然后通過離心、真空干燥等步驟獲得果膠制品。
（4）常用固定化果膠酶處理含果膠的污水，其主要優(yōu)點有______和可連續(xù)處理等。在建立和優(yōu)化固定化果膠酶處理工藝時，除考慮果膠酶的活性和用量、酶反應的溫度、pH、作用時間等環(huán)境因素外，還需考慮的主要有______和______。
【2018年】
1．（2018北京卷，4）以下高中生物學實驗中，操作不正確的是（　　）
A．在制作果酒的實驗中，將葡萄汁液裝滿整個發(fā)酵裝置
B．鑒定DNA時，將粗提產(chǎn)物與二苯胺混合后進行沸水浴
C．用蘇丹Ⅲ染液染色，觀察花生子葉細胞中的脂肪滴（顆粒）
D．用龍膽紫染液染色，觀察洋蔥根尖分生區(qū)細胞中的染色體
2．（2018江蘇卷，8）花藥離體培養(yǎng)是重要的育種手段。下圖是某二倍體植物花藥育種過程的示意圖，下列敘述正確的是（　?。?br />
A．為了防止微生物污染，過程①所用的花藥需在70%乙醇中浸泡30min
B．過程②的培養(yǎng)基中需添加較高濃度的細胞分裂素以利于根的分化
C．過程③逐步分化的植株中可篩選獲得純合的二倍體
D．過程④應將煉苗后的植株移栽到含有蔗糖和多種植物激素的基質(zhì)上
3．（2018江蘇卷，14）下列關于酵母細胞固定化實驗的敘述，正確的是（　?。?br /> A．用溫水使海藻酸鈉迅速溶解，待其冷卻到室溫后用于包埋細胞
B．進行包埋時，用于懸浮細胞的CaCl2溶液濃度要適宜
C．注射器（或滴管）出口應盡量貼近液面以保證凝膠珠成為球狀
D．包埋酵母細胞的凝膠珠為淡黃色半透明狀，并具有一定的彈性
4．（2018江蘇卷，16）某高校采用如圖所示的發(fā)酵罐進行葡萄酒主發(fā)酵過程的研究，下列敘述錯誤的是（　?。?br />
A．夏季生產(chǎn)果酒時，常需對罐體進行降溫處理
B．乙醇為揮發(fā)性物質(zhì)，故發(fā)酵過程中空氣的進氣量不宜太大
C．正常發(fā)酵過程中罐內(nèi)的壓力不會低于大氣壓
D．可以通過監(jiān)測發(fā)酵過程中殘余糖的濃度來決定何時終止發(fā)酵
5．（2018江蘇卷，17）關于還原糖、蛋白質(zhì)和DNA的鑒定實驗，下列敘述正確的是（　?。?br /> A．在甘蔗莖的組織樣液中加入雙縮脲試劑，溫水浴后液體由藍色變成磚紅色
B．在大豆種子勻漿液中加入斐林試劑，液體由藍色變成紫色
C．提取DNA時，在切碎的洋蔥中加入適量洗滌劑和食鹽，充分研磨，過濾并棄去濾液
D．將DNA粗提物溶解在2mol/LNaCl溶液中，加入二苯胺試劑，沸水浴后液體由無色變成藍色

6．（2018江蘇卷，21）下列關于加酶洗衣粉的敘述，錯誤的是（　?。?br /> A．洗衣粉中添加的酶通常是由微生物發(fā)酵生產(chǎn)而來
B．洗衣粉中的蛋白酶通常會將添加的其他酶迅速分解
C．在50℃熱水中用加酶洗衣粉洗衣時，其中的酶會迅速失活
D．加酶洗衣粉受潮后重新晾干保存，不會影響其中酶的活性
【2017年】
1．（2017年江蘇卷，10）下列關于“腐乳的制作”的實驗，敘述正確的是（　?。?br /> A．控制發(fā)酵溫度的主要目的是腐乳調(diào)味
B．腐乳制作后期加入香辛料和料酒有防腐作用
C．毛霉的主要作用是分解脂肪和淀粉
D．成品腐乳表面的粘性物質(zhì)主要由細菌產(chǎn)生
2．（2017年江蘇卷，12）固定化單寧酶應用于茶飲料加工，可消除其中的苦澀味。下列有關敘述正確的是（　?。?br /> A．在單寧酶純化時可采用透析法去除雜蛋白
B．化學結合法比吸附法對單寧酶活性影響更小
C．溫度、pH 和重金屬離子都可能影響固定化單寧酶活性
D．酶的高效性決定固定化單寧酶不會降解茶飲料中的有益成分
3．（2017年江蘇卷，17）為了探究一種新型堿性纖維素酶的去污效能，研究性學習小組進行了相關實驗，結果如下圖。由圖中實驗結果能直接得出的結論是（　?。?br /> 　　　　　　　　　　　　
A．堿性纖維素酶對污布類型2的去污力最強
B．不同類型洗衣粉影響堿性纖維素酶的去污力
C．堿性纖維素酶對污布類型2、3的去污力不同
D．加大酶用量可以顯著提高洗衣粉的去污力
4．（2017年江蘇卷，20）下列關于“酵母細胞的固定化技術”實驗的敘述，正確的是（　　）
A．活化酵母時，將適量干酵母與蒸餾水混合并攪拌成糊狀
B．配制CaCl2溶液時，需要邊小火加熱邊攪拌
C．將海藻酸鈉溶液滴加到CaCl2溶液時，凝膠珠成形后應即刻取出
D．海藻酸鈉溶液濃度過高時凝膠珠呈白色，過低時凝膠珠易呈蝌蚪狀
5．（2017年江蘇卷，25）下圖是探究果酒與果醋發(fā)酵的裝置示意圖。下列相關敘述正確的是（　　）
　　　　　　　　　　　　　
A．改變通入氣體種類，可以研究呼吸作用類型對發(fā)酵的影響
B．果酒發(fā)酵中期通入氮氣，酵母菌將從有氧呼吸轉變?yōu)闊o氧呼吸
C．果醋的發(fā)酵周期與實驗設定的溫度密切相關
D．氣體入口與氣體出口可以交換使用
6．（2017年新課標Ⅰ卷，37）某些土壤細菌可將尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用?；卮鹣铝袉栴}：
（1）有些細菌能分解尿素，有些細菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生________________________。能分解尿素的細菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源，原因是________________________，但可用葡萄糖作為碳源，進入細菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是________________________（答出兩點即可）。
（2）為了篩選可分解尿素的細菌，在配制培養(yǎng)基時，應選擇____________________（填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”）作為氮源，不選擇其他兩組的原因是________________________。
（3）用來篩選分解尿素細菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有________________________（答出兩點即可）。
7．（2017年新課標Ⅲ卷，37）綠色植物甲含有物質(zhì)W，該物質(zhì)為無色針狀晶體，易溶于極性有機溶劑，難溶于水，且受熱、受潮易分解。其提取流程為：植物甲→粉碎→加溶劑→振蕩→收集提取液→活性炭處理→過濾去除活性炭→蒸餾（含回收溶劑）→重結晶→成品?；卮鹣铝袉栴}：
（1）在提取物質(zhì)W時，最好應選用的一種原料是___________________（填“高溫烘干”“晾干”或“新鮮”）的植物甲，不宜選用其他兩種的原因是___________________________________。
（2）提取物質(zhì)W時，振蕩的作用是______________________。
（3）活性炭具有很強的吸附能力，在提取過程中，用活性炭處理提取液的目的是________________。
（4）現(xiàn)有丙酮（沸點56 ℃）、乙醇（沸點約78 ℃）兩種溶劑，在提取物質(zhì)W時，應選用丙酮作為提取劑，理由是__________________________________。
（5）該實驗操作過程中應注意的事項是_________________（答出兩點即可）。
8．（2017年海南卷，30）綠藻A是某種單細胞綠藻，能夠合成物質(zhì)W。某小組為探究氮營養(yǎng)缺乏對綠藻A增殖及物質(zhì)W累計的影響，將等量的綠藻A分別接種在氮營養(yǎng)缺乏（實驗組）和氮營養(yǎng)正常（對照組）的兩瓶培養(yǎng)液中，并在適宜溫度和一定光強下培養(yǎng)。定時取樣并檢測細胞濃度和物質(zhì)W的含量，結果如圖。

（1）從圖甲可知，在氮營養(yǎng)正常培養(yǎng)液的瓶中，綠藻A的種群增長曲線呈___________型。
（2）綜合圖甲和圖乙的信息可知，在生產(chǎn)上，若要用少量的綠藻A獲得盡可能多的物質(zhì)W，可以采取的措施是________。
（3）若物質(zhì)W是類胡蘿卜素，根據(jù)類胡蘿卜素不易揮發(fā)和易于溶于有機溶劑的特點，應選擇的提取方法是_________。用紙層析法可以將類胡蘿卜素與葉綠素分開，紙層析法分離的原理是__________________。
（4）在以上研究的基礎上，某人擬設計實驗進一步研究氮營養(yǎng)缺乏程度對物質(zhì)W積累的影響，則該實驗的自變量是_____________。
（5）與在光照條件下相比，若要使綠藻A在黑暗條件下增殖，需要為其提供_________________（填“葡萄糖”或“纖維素”）作為營養(yǎng)物質(zhì)，原因是___________________。
9．（2017年新課標Ⅱ卷，37）豆豉是大豆經(jīng)過發(fā)酵制成的一種食品。為了研究影響豆豉發(fā)酵效果的因素，某小組將等量的甲、乙兩菌種分別接入等量的A、B兩桶煮熟大豆中并混勻，再將兩者置于適宜條件下進行發(fā)酵，并在32 h內(nèi)定期取樣觀測發(fā)酵效果?；卮鹣铝袉栴}：
（1）該實驗的自變量是____________________、__________________________。
（2）如果發(fā)現(xiàn)發(fā)酵容器內(nèi)上層大豆的發(fā)酵效果比底層的好，說明該發(fā)酵菌是______________________。
（3）如果在實驗后，發(fā)現(xiàn)32 h內(nèi)的發(fā)酵效果越來越好，且隨發(fā)酵時間呈直線上升關系，則無法確定發(fā)酵的最佳時間；若要確定最佳發(fā)酵時間，還需要做的事情是__________________________。
（4）從大豆到豆豉，大豆中的成分會發(fā)生一定的變化，其中，蛋白質(zhì)轉變?yōu)開_________________________，脂肪轉變?yōu)開_________________________。
【2016年】
1.（2016天津卷.10）（12分）天津獨流老醋歷史悠久、獨具風味，其生產(chǎn)工藝流程如下圖。

（1）在糖化階段添加酶制劑需要控制反應溫度，這是因為酶_____________________。
（2）在酒精發(fā)酵階段，需添加酵母菌。在操作過程中,發(fā)酵罐先通氣，后密閉。通氣能提高____________的數(shù)量，有利于密閉時獲得更多的酒精產(chǎn)物。
（3）在醋酸發(fā)酵階段，獨流老醋采用獨特的分層固體發(fā)酵法，發(fā)酵30天。工藝如下。

①發(fā)酵過程中,定期取樣測定醋酸桿菌密度變化,趨勢如右圖。據(jù)圖分析，與顛倒前相比，B層醋酸桿菌密度變化的主要環(huán)境因素是____________________。

②乳酸含量高是獨流老醋風味獨特的重要成因。發(fā)酵過程中，發(fā)酵缸中____________層醋醅有利于乳酸菌繁殖，積累乳酸。
③成熟醋醅中乳酸菌的種類明顯減少，主要原因是發(fā)酵后期營養(yǎng)物質(zhì)消耗等環(huán)境因素的變化，加劇了不同種類乳酸菌的____________，淘汰了部分乳酸菌種類。
2.（2016課標1卷.39）（15分）
空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實驗步驟如下：
①配置培養(yǎng)基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O）;
②制作無菌平板；
③設置空白對照組和若干實驗組，進行相關操作；
④將各組平板置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時間，統(tǒng)計各組平板上菌落的平均數(shù)。
回答下列問題:
（1）該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來源于_________________。若要完成步驟②，該培養(yǎng)基中的成分X通常是_________________。
（2）步驟③中，實驗組的操作是_________________。
（3）若在某次調(diào)查中，某一實驗組平板上菌落平均數(shù)為36個/平板，而空白對照組的一個平板上出現(xiàn)了6個菌落，這種結果說明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了_________________現(xiàn)象。若將30（即36-6）個/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法_______________（填“正確”或“不正確”）。
3.（2016四川卷.10）（12分）圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細菌的過程，圖乙是脲酶基因轉錄的mRNA部分序列。

（1）圖中選擇培養(yǎng)基應以 為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加 作指示劑，產(chǎn)脲酶細菌在該培養(yǎng)基上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成 色。
（2）在5個細菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105 的土壤樣品液0.1mL，培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的細菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。
該過程采取的接種方法是 ，每克土壤樣品中的細菌數(shù)量為 ×108
個；與血細胞計數(shù)板計數(shù)法相比，此計數(shù)方法測得的細菌數(shù)較 。
（3）現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼（終止密碼有UAG、UGA和UAA）。突變基因轉錄的mRNA中，終止密碼為 ，突變基因表達的蛋白質(zhì)含 個氨基酸。
4.（2016新課標2卷.39)（15分）
蘋果醋是以蘋果汁為原料經(jīng)發(fā)酵而成的，回答下列為題：

（1）酵母菌的呼吸代謝途徑如圖所示。圖中過程①和②是蘋果醋生產(chǎn)的第一階段，在酵母菌細胞的_________________中進行，其產(chǎn)物乙醇與_________________試劑反應呈現(xiàn)灰綠色，這一反應可用于乙醇的檢驗；過程③在酵母菌細胞的________________中進行，與無氧條件相比，在有氧條件下，酵母菌的增值速度________________。
（2）第二階段是在醋酸桿菌的作用下將第一階段產(chǎn)生的乙醇轉變?yōu)榇姿岬倪^程，根據(jù)醋酸桿菌的呼吸作用類型，該過程需要在________________條件下才能完成。
（3）在生產(chǎn)過程中，第一階段和第二階段的發(fā)酵溫度不同，第一階段的溫度____________（填“低于”或“高于”）第二階段。
（4）醋酸桿菌屬于___________核生物，其細胞結構中（填“含有”或“不含有”）線粒體。

5.（2016新課標Ⅲ卷.39）某同學用新鮮的泡菜濾液為實驗材料純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；卮鹣铝袉栴}：
（1）分離純化乳酸菌時，首先需要用_________________對泡菜濾液進行梯度稀釋，進行梯度稀釋的理由是_________________。
（2）推測在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有_________________和_________________。分離純化時應挑選出_________________的菌落作為候選菌。
（3）乳酸菌在-20℃長期保存時，菌液中常需要加入一定量的_________________（填“蒸餾水”、“甘油”或“碳酸鈣”）。
6.（2016江蘇卷.29）（9分）為了探索海藻酸鈉固定化對綠球藻生長的影響，以及固定化藻對含Zn2+污水的凈化作用，科研人員用篩選到的一株綠球藻進行試驗，流程及結果如下。請回答下列問題：


（1）實驗中的海藻酸鈉作用是 ，CaC l2的作用是 。
（2）為洗去凝膠球上殘余的CaC l2和其他污染物，并保持綠球藻活性，宜采用 洗滌。圖1 中1. 0%海藻酸鈉組培養(yǎng)24 h 后,移去凝膠球,溶液呈綠色,原因是______________________。
（3）為探索固定化藻對含Zn2+污水的凈化作用，應選用濃度為 海藻酸鈉制備凝膠球。
（4）圖2中空白凝膠球組Zn2+濃度下降的原因是 。結合圖1和圖2分析，固定化藻的實驗組24~48h間Zn2+濃度下降速度較快的主要原因是 ；72~96h間Zn2+濃度下降速度較慢的原因有 。
7.（2016海南卷.30）回答下列問題：
（1）蛋白酶甲、乙、丙三者的活性隨pH的變化如圖所示。通常，用清水洗滌衣服上的新鮮血跡時，不應該使用開水，原因是_______________________。若要去除衣服上的血漬，應選擇含有_____________________（填“蛋白酶甲”、“蛋白酶乙”或“蛋白酶丙”）的堿性洗衣粉，理由是___________________。

（2）某同學為了洗去衣服上的油漬，洗衣時在市售的蛋白酶洗衣液中添加脂肪酶，該同學的做法___________________（填“合理”或“不合理”），理由是_________________________。
（3）已知溶液的pH可以影響酶的活性，請推測pH影響某種蛋白酶活性的原因可能是其影響了酶和底物分子中_________________（填“羧基和氨基”、“氨基和甲基”、“羧基和甲基”或“甲基和甲基”）等基團的解離狀態(tài)。
【2015年】
1.（2015·江蘇卷.11）下列關于固定化酶和固定化細胞的敘述,錯誤的是（ ）
A. 固定化酶的主要目的是實現(xiàn)酶的重復利用
B. 溶解氧交換受阻是固定化酶應用的重要限制因素
C. 固定化細胞用于生產(chǎn)能分泌到細胞外的產(chǎn)物
D. 凝膠與被包埋細胞之間不是通過共價鍵結合
2.（2015·江蘇卷.13）血細胞計數(shù)板是對細胞進行計數(shù)的重要工具,下列敘述正確的是（ ）
A. 每塊血細胞計數(shù)板的正中央有1 個計數(shù)室
B. 計數(shù)室的容積為1mm×1mm×0. 1mm
C. 蓋蓋玻片之前,應用吸管直接向計數(shù)室滴加樣液
D. 計數(shù)時,不應統(tǒng)計壓在小方格角上的細胞
3.（2015·江蘇卷.24）右圖為蘋果酒的發(fā)酵裝置示意圖,下列敘述錯誤的是（ ）

A. 發(fā)酵過程中酒精的產(chǎn)生速率越來越快
B. 集氣管中的氣體是酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生的 CO2
C. 發(fā)酵過程中酵母種群呈“J”型增長
D. 若發(fā)酵液表面出現(xiàn)菌膜,最可能原因是發(fā)酵瓶漏氣
4.（2015·江蘇卷.25） 圖1、2 分別為“DNA 的粗提取與鑒定”的實驗中部分操作步驟示意圖,下列敘述正確的是（ ）

A. 圖1、2 中加入蒸餾水稀釋的目的相同
B. 圖1 中完成過濾之后保留濾液
C. 圖2 中完成過濾之后棄去濾液
D. 在圖1 雞血細胞液中加入少許嫩肉粉有助于去除雜質(zhì)
5.（2015·江蘇卷.19）做“微生物的分離與培養(yǎng)”實驗時,下列敘述正確的是（ ）
A. 高壓滅菌加熱結束時,打開放氣閥使壓力表指針回到零后,開啟鍋蓋
B. 倒平板時,應將打開的皿蓋放到一邊,以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上
C. 為了防止污染,接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落
D. 用記號筆標記培養(yǎng)皿中菌落時,應標記在皿底上
6.（2015·江蘇卷.20）下圖為制備人工種子部分流程示意圖,下列敘述正確的是（ ）

A. 胚狀體是外植體在培養(yǎng)基上脫分化形成的一團愈傷組織
B. 該過程以海藻酸鈉作為營養(yǎng)成分,以 CaCl2 溶液作為凝固劑
C. 可在海藻酸鈉溶液中添加蔗糖,為胚狀體提供碳源
D. 包埋胚狀體的凝膠珠能夠隔絕空氣,有利于人工種子的儲藏
7.（2015·江蘇卷.17）關于“腐乳的制作”實驗,下列敘述錯誤的是（ ）
A. 將腐乳坯堆積起來會導致堆內(nèi)溫度升高,影響毛霉生長
B. 腐乳坯若被細菌污染,則腐乳坯表面會出現(xiàn)黏性物
C. 勤向腐乳坯表面噴水,有利于毛霉菌絲的生長
D. 裝壇階段加入料酒,可有效防止雜菌污染
8.（2015·廣東卷.3）關于DNA的實驗，敘述正確的是
A 用兔的成熟紅細胞可提取DNA B PCR的每個循環(huán)一般依次經(jīng)過變性-延伸-復性三步
C DNA溶液與二苯胺試劑混合，沸水浴后生成藍色產(chǎn)物
D 用甲基綠對人的口腔上皮細胞染色，細胞核呈綠色，細胞質(zhì)呈紅色
9.（2015·江蘇卷.31）(8 分)人工瘤胃模仿了牛羊等反芻動物的胃,可用來發(fā)酵處理秸稈,提高秸稈的營養(yǎng)價值。
為了增強發(fā)酵效果,研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產(chǎn)菌株,并對其降解纖維素能力進行了研究。 請回答下列問題:
(1)在樣品稀釋和涂布平板步驟中,下列選項不需要的是 (填序號)。
①酒精燈 ②培養(yǎng)皿 ③顯微鏡 ④無菌水
(2)在涂布平板時,滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過多的原因是 。
(3)向試管內(nèi)分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時,若試管口粘附有培養(yǎng)基,需要用酒精棉球擦凈的原因是 。
(4)剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物,但并不與纖維素降解產(chǎn)物纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應。 研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上,篩到了幾株有透明降解圈的菌落(見下圖)。 圖中降解圈大小與纖維素酶的 有關。 圖中降解纖維素能力最強的菌株是 (填圖中序號)。

(5)研究人員用篩選到的纖維素酶高產(chǎn)菌株 J1 和 J4,在不同溫度和 pH 條件下進行發(fā)測得發(fā)酵液中酶活性的結果見下圖,推測菌株 更適合用于人工瘤胃發(fā)酵,理是 。

10.（2015·海南卷.30）【生物－選修1：生物技術實踐】（15分）生產(chǎn)果汁時，用果膠酶處理果泥可提高果汁的出汁率?；卮鹣铝邢嚓P問題：
（1）某同學用三種不同的果膠酶進行三組實驗，各組實驗除酶的來源不同外，其他條件都相同，測定各組的出汁量，據(jù)此計算各組果膠的活性的平均值并進行比較。這一實驗的目的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（2）現(xiàn)有一種新分離出來的果膠酶，為探究其最適溫度，某同學設計了如下實驗：取試管16支，分別加入等量的果泥、果膠酶、緩沖液，混勻，平均分為4組，分別置于0℃、5℃、10℃、40℃下保溫相同時間，然后，測定各試管中的出汁量并計算各組出汁量平均值。該實驗溫度設置的不足之處有＿＿＿和＿＿＿＿。
（3）某同學取5組試管（A～E）分別加入等量的同種果泥，在A、B、C、D4個實驗組的試管中分別加入等量的緩沖液和不同量的同種果膠酶，然后，補充蒸餾水使4組試管內(nèi)液體體積相同；E組加入蒸餾水使試管中液體體積與實驗組相同。將5組試管置于適宜溫度下保溫一定時間后，測定各組的出汁量。通過A～D組實驗可比較不同實驗組出汁量的差異。本實驗中，若要檢測加入酶的量等于0而其他條件均與實驗組相同時的出汁量，E組設計＿＿＿（填“能”或“不能”）達到目的，其原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
11.（2015·天津卷.7）DHA對腦神經(jīng)發(fā)育至關重要。以A、B兩種單細胞真核藻為親本，利用細胞融合技術選育高產(chǎn)DHA融合藻。兩種藻特性如下表。
親本藻
優(yōu)勢代謝類型
生長速率（g/L.天）
固體培養(yǎng)基上菌落直徑
DHA含量（‰）
A藻
自養(yǎng)
0.06
小
0.7
B藻
異養(yǎng)
0.14
大
無
據(jù)表回答：
（1）選育的融合藻應具有A藻 與B藻 的優(yōu)點。
（2）誘導融合前需用纖維素酶處理兩種藻，其目的是獲得 。
（3）通過以下三步篩選融合藻，步驟 可淘汰B藻，步驟 可淘汰生長速成率較慢的藻落，再通過步驟 獲取生產(chǎn)所需的融合藻。
步驟a：觀察藻落的大小
步驟b:用不含有機碳源（碳源——生物生長的碳素來源）的培養(yǎng)基進行光照培養(yǎng)
步驟c：測定DHA含量
（4） 以獲得的融合藻為材料進行甲、乙、丙三組試驗，結果如下圖。

①甲組條件下，融合藻產(chǎn)生[H]的細胞器是 ；丙組條件下產(chǎn)生ATP的細胞器是 。
②與甲、丙兩組相比，乙組融合藻生長速率較快，原因是在該培養(yǎng)條件下 。甲、乙兩組DHA產(chǎn)量均較高，但實際生產(chǎn)中往往采用甲組的培養(yǎng)條件，其原因是 。
12.（2015·山東卷.35） (12分)【生物—生物技術實踐】
乳糖酶能夠催化乳糖水解為葡萄糖和半乳糖，具有重要應用價值。乳糖酶的制備及固定化步驟如下：
產(chǎn)乳糖酶微生物L的篩選
乳糖酶的固定化
乳糖酶的提取純化
產(chǎn)乳糖酶微生物L的培養(yǎng)

(1)篩選產(chǎn)乳糖酶的微生物L時，宜用__________作為培養(yǎng)基中的唯一碳源。培養(yǎng)基中瓊脂的作用是___________。從功能上講，這種培養(yǎng)基屬于___________。
(2)培養(yǎng)微生物L前，宜采用__________方法對接種環(huán)進行滅菌。
(3)純化后的乳糖酶可用電泳法檢測其分子量大小。在相同條件下，帶電荷相同的蛋白質(zhì)電泳速度越快，說明其分子量越___________.
(4)乳糖酶宜采用化學結合法（共價鍵結合法）進行固定化，可通過檢測固定化乳糖酶的___________確定其應用價值。除化學結合法外，酶的固定化方法還包括___________、_____________、離子吸附法及交聯(lián)法等。
13.( 2015·課標I卷.39) [生物——選修1：生物技術實踐]（15分）
已知微生物A可以產(chǎn)生油脂，微生物B可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)。回答有關問題：
（1）顯微觀察時，微生物A菌體中的油脂通?？捎糜? 染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，可選用 （填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”）從菌體中提取。
（2）為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應選用以 為碳源的固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
（3）若要測定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用 直接計數(shù)；若要測定其活菌數(shù)量，可選用 法進行計數(shù)。
（4）為了確定微生物B產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度，某同學測得相同時間內(nèi)，在35℃、40℃、45℃溫度下降解10g油脂所需酶量依次為4mg、1mg、6mg，則上述三個溫度中， ℃條件下該酶活力最小。為了進一步確定該酶的最適溫度，應圍繞 ℃設計后續(xù)實驗。
14.( 2015·課標II卷.39)【生物——選修1：生物技術實踐】（15分）
回答與胡蘿卜有關的問題：
（1） 胡羅卜含有的胡羅卜素中，最主要的是 （填“α—胡羅卜素”或“β—胡羅卜素”或“γ—胡羅卜素”），該胡羅卜素在人體內(nèi)可以轉變成兩分子 ，后者缺乏會引起人在弱光下視物不清的病癥，該疾病稱為 ，胡羅卜素是 （填“揮發(fā)性”或“非揮發(fā)性”）物質(zhì)。
（2） 工業(yè)生產(chǎn)上，用養(yǎng)殖的巖藻作為原料提取胡羅卜素時， （填“需要”或“不需要”）將新鮮的巖藻干燥。
（3） 現(xiàn)有乙醇和乙酸乙酯兩種溶劑，應選用其中的 作為胡羅卜素的萃取劑，不選用另外一種的理由是 。
15.（2015·上海卷.綜合題四）回答下列有關微生物的問題。（9分）
霍亂弧菌（圖21）經(jīng)口感染，通過胃到達小腸，在小腸黏膜細胞的表面生長繁殖并產(chǎn)生霍亂腸毒素，后者導致感染人群腹瀉甚至死亡。
45．霍亂弧菌能穿透粘液層（分布于小腸黏膜細胞表面）通常借助于__________。
A．腸道的蠕動　 　B．消化液的流動　　 C．細菌鞭毛的運動　D．小腸上皮細胞微絨毛的擺動
用含硫代硫酸鈉、檸檬酸鈉、膽酸納、蔗糖的TCBS培養(yǎng)基（pH8.6）能從天然樣品中有效地分離出霍亂弧菌。
46．這種TCBS培養(yǎng)基屬于______。
A．酸性通用　　B．堿性通用　　C．酸性選擇　　D．堿性選擇
研究顯示、霍亂腸毒素為蛋白質(zhì)，其編碼基因位于CTX噬菌體基因組中．無毒型霍亂弧菌經(jīng)CTX噬菌體感染后，會轉變?yōu)楫a(chǎn)毒素的菌株，且其子代細菌即便在無噬菌體感染的條件下，同樣能穩(wěn)定維持其產(chǎn)毒素特性。
47．造成霍亂弧菌這一特點的機制可能是______。
A．霍亂腸毒素在霍亂弧菌細胞分裂時分裂子代細胞
B．霍亂腸毒素能選擇性殺死不含毒素編碼基因的霍亂弧菌
C．CTX噬菌體感染霍亂弧菌后增殖了大量且穩(wěn)定的噬菌體
D．CTX噬菌體在感染霍亂弧菌期間將其基因組插入至宿主基因組上
48．不食不潔生水和生貝殼類海產(chǎn)品是防止霍亂發(fā)生措施之一，這屬于傳染病預防措施中的_________。
49．下列各圖中，能準確反映霍亂弧菌疫苗接種者血清中抗霍亂弧菌抗體的濃度隨時間變化趨勢的是_____。
【2014年】
1．[2014·廣東卷] 下列敘述錯誤的是(　　)
A．酵母菌在無氧條件下利用葡萄汁產(chǎn)生酒精
B．醋酸菌在無氧條件下利用乙醇產(chǎn)生醋酸
C．泡菜腌制利用了乳酸菌的乳酸發(fā)酵
D．腐乳制作利用了毛霉等微生物的蛋白酶和脂肪酶
2．[2014·江蘇卷] (多選)某同學設計了如圖所示的發(fā)酵裝置，下列有關敘述正確的是(　　)

A．該裝置可阻止空氣進入，用于果酒發(fā)酵
B．該裝置便于果酒發(fā)酵中產(chǎn)生的氣體排出
C．去除彎管中的水，該裝置可滿足果醋發(fā)酵時底層發(fā)酵液中大量醋酸菌的呼吸
D．去除彎管中的水后，該裝置與巴斯德的鵝頸瓶作用相似
3．[2014·全國卷] 某同學在①②③三種條件下培養(yǎng)大腸桿菌，這三種條件是：
①以葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基，不斷補充培養(yǎng)基，及時去除代謝產(chǎn)物?、谝云咸烟菫樘荚吹呐囵B(yǎng)基，不補充培養(yǎng)基，不去除代謝產(chǎn)物?、垡云咸烟呛腿樘菫樘荚吹呐囵B(yǎng)基，不補充培養(yǎng)基，不去除代謝產(chǎn)物
根據(jù)培養(yǎng)結果繪制的一段時間內(nèi)菌體數(shù)的對數(shù)隨時間變化的趨勢圖如下：
　
　　　　　甲　　　　　　　乙　　　　　　　丙
假設三種培養(yǎng)基中初始總糖量相等，則①②③三種條件依次對應的趨勢圖是(　　)
A．甲、乙、丙　　　　　B．乙、丙、甲
C．丙、甲、乙 D．丙、乙、甲
4．[2014·江蘇卷] 下列關于加酶洗衣粉的敘述，正確的是(　　)
A．高溫易使酶失活，因此冷水洗滌去污效果應該比溫水好
B．洗衣粉中表面活性劑對堿性蛋白酶活性有一定的促進作用
C．在pH低于7.0的自來水中，堿性蛋白酶依然能起作用
D．洗衣粉中酶主要是通過快速分解溶在水里的污漬發(fā)揮作用
5．[2013·江蘇卷] 下列有關固定化酶和固定化細胞的敘述，正確的是(　　)
A．可用包埋法制備固定化酵母細胞
B．反應產(chǎn)物對固定化酶的活性沒有影響
C．葡萄糖異構酶固定前后專一性不同
D．固定化細胞可以催化各種反應底物的一系列反應
6．[2013·江蘇卷] 某同學用洋蔥進行DNA粗提取和鑒定實驗，操作錯誤的是(　　)
A．加入洗滌劑后用力進行快速、充分的研磨
B．用蛋白酶純化過濾后的研磨液中的DNA
C．加入酒精后用玻璃棒輕緩攪拌
D．加二苯胺試劑搖勻后沸水浴加熱
7．[2013·重慶卷] 下列與實驗相關的敘述，錯誤的是(　　)
A．馬鈴薯塊莖搗碎后的提取液可檢測出蛋白質(zhì)
B．光學顯微鏡可用于觀察植物細胞的質(zhì)壁分離現(xiàn)象
C．檢測酵母菌培養(yǎng)過程中是否產(chǎn)生CO2可判斷其呼吸方式
D．在95%乙醇中加入無水Na2CO3后可提高色素的溶解度
8．[2013·山東卷] 胡蘿卜素是一種常用的食用色素，可分別從胡蘿卜或產(chǎn)胡蘿卜素的微生物菌體中提取獲得，流程如下：


　　　　?。栓D→―→―→
(1)篩選產(chǎn)胡蘿卜素的酵母菌 R 時，可選用__________________或平板劃線法接種。采用平板劃線法接種時需先灼燒接種環(huán)，其目的是________。
(2)培養(yǎng)酵母菌 R 時，培養(yǎng)基中的蔗糖和硝酸鹽可分別為酵母菌R的生長提供________和________。
(3)從胡蘿卜中提取胡蘿卜素時，干燥過程應控制好溫度和________以防止胡蘿卜素分解；萃取過程中宜采用________方式加熱以防止溫度過高；萃取液濃縮前需進行過濾，其目的是______________。
(4)紙層析法可用于鑒定所提取的胡蘿卜素。鑒定過程中需用胡蘿卜素標準品作為________。
9．[2013·四川卷] 普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人將地衣芽孢桿菌的α－淀粉酶基因轉入酵母菌中，經(jīng)篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種(過程如圖甲所示)。

甲

乙
(1)圖甲中，過程①需要的酶有_________________________。為達到篩選目的，平板內(nèi)的固體培養(yǎng)基應以________作為唯一碳源。②③過程需重復幾次，目的是_____________________________________。
(2)某同學嘗試過程③的操作，其中一個平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖乙所示。該同學的接種方法是__________________；推測該同學接種時可能的操作失誤是
________________________________________________________________________。
(3)以淀粉為原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的適宜條件下密閉發(fā)酵，接種________菌的發(fā)酵罐需要先排氣，其原因是________________________________________________________________________[來
________________________________________________________________________。
(4)用凝膠色譜法分離α－淀粉酶時，在色譜柱中移動速度較慢的蛋白質(zhì)，相對分子質(zhì)量較________。
10．L1[2014·海南卷] [生物——選修1：生物技術實踐]
已知泡菜中亞硝酸鹽含量與泡制時間有關。為了測定不同泡制天數(shù)泡菜中亞硝酸鹽的含量，某同學設計了一個實驗，實驗材料、試劑及用具包括：刻度移液管、比色管、不同濃度的亞硝酸鈉標準溶液、亞硝酸鹽的顯色劑、不同泡制天數(shù)的泡菜濾液等。
回答相關問題：
(1)請完善下列實驗步驟。
①標準管的制備：用______________________和顯色劑制成顏色深淺不同的系列標準管。
②樣品管的制備：用刻度移液管分別吸取一定量的__________________________，加到不同的比色管中，然后在各個比色管中加入等量的顯色劑進行顯色，得到樣品管。
③將每個________分別與系列標準管進行比較，找出與樣品管顏色深淺________的標準管，該管中亞硝酸鈉含量即代表樣品管中亞硝酸鹽含量，記錄各樣品管亞硝酸鹽的含量。
(2)下圖表示的是泡菜中______________________趨勢。

(3)泡菜制作過程中產(chǎn)酸的細菌主要是________(填“醋酸桿菌”或“乳酸菌”)。
11．[2014·四川卷] 有機農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長期使用會污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機制的實驗過程如圖甲、乙所示。

甲

乙
(1)微生物生長繁殖所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、________四類，該實驗所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是____________________________________。
(2)與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長素和________，這些植物激素一般需要事先單獨配制成________保存?zhèn)溆谩?br /> (3)純化菌株時，通常使用的劃線工具是________。劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有___________________________________________
________________________________________________________________________。
(4)為探究苯磺隆的降解機制，將該菌種的培養(yǎng)液過濾離心，取上清液做圖乙所示實驗。該實驗的假設是________________________________，該實驗設計是否合理？為什么？____________________。
12．[2014·江蘇卷] 為了獲得β-胡蘿卜素產(chǎn)品，某小組開展了產(chǎn)β-胡蘿卜素酵母的篩選與色素提取實驗。請回答下列問題：

(1)實驗用的培養(yǎng)皿常用的兩種滅菌方法是__________；為了減少滅菌后器皿被污染，滅菌前應該________。
(2)為了篩選出酵母菌，培養(yǎng)基中添加了青霉素，其目的是________________。
(3)上圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖，圖中甲、乙、丙指示的依次是________。(填序號)
①安全閥、放氣閥、壓力表
②放氣閥、安全閥、壓力表
③安全閥、放氣閥、溫度表
④放氣閥、安全閥、溫度表
(4)為了將分離到的菌株純化，挑取了菌落在3塊相同平板上劃線，結果其中一塊平板的各劃線區(qū)均未見菌生長，最可能的原因是____________________。
(5)為增加β-胡蘿卜素提取量，在研磨酵母細胞時，添加石英砂的目的是________________；研磨時________(填“需要”或“不需要”)添加CaCO3，理由是________________________。
13．[2014·新課標全國卷Ⅰ] [生物——選修1：生物技術實踐] 植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解。回答下列問題：
(1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復合酶，其中的葡萄糖苷酶可將________分解成________。
(2)在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時，CR可與纖維素形成________色復合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的________。
(3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學設計了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成分見下表)：

酵母膏
無機鹽
淀粉
纖維素粉
瓊脂
CR溶液
水
培養(yǎng)基甲
＋
＋
＋
＋
－
＋
＋
培養(yǎng)基乙
＋
＋
＋
－
＋
＋
＋
注：“＋”表示有，“－”表示無。
據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲____________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是__________________；培養(yǎng)基乙________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_____________________________________________________________。
14．[2014·新課標全國卷Ⅱ] [生物——選修1：生物技術實踐]
為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細菌含量，并進行了細菌分離等工作?；卮鹣铝袉栴}：
(1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白干板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是__________________________；然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為________。
(2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌。操作時，接種環(huán)通過________滅菌，在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是________________________________________。
(3)示意圖A和B中，________表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結果。

A　　　　　　　　　　B
(4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進行靜置培養(yǎng)，另一部分進行振蕩培養(yǎng)。結果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中________的含量，同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高________的利用率。
15．[2014·四川卷] 有機農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長期使用會污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機制的實驗過程如圖甲、乙所示。

甲

乙
(1)微生物生長繁殖所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、________四類，該實驗所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是____________________________________。
(2)與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長素和________，這些植物激素一般需要事先單獨配制成________保存?zhèn)溆谩?br /> (3)純化菌株時，通常使用的劃線工具是________。劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有_________________________________________
________________________________________________________________________。
(4)為探究苯磺隆的降解機制，將該菌種的培養(yǎng)液過濾離心，取上清液做圖乙所示實驗。該實驗的假設是________________________________，該實驗設計是否合理？為什么？____________________。
16．[2014·浙江卷] 下面是關于固定化酶和細菌培養(yǎng)實驗的問題。請回答：
(1)某興趣小組欲利用固定化酶進行酶解淀粉的實驗，分組見下表。
組別
固定化酶柱長度(cm)
淀粉溶液的流速(mL·min－1)
甲
10
0.3
乙
10
0.5
丙
15
0.3
丁
15
0.5
將吸附了α-淀粉酶的石英砂裝入柱中后，需用蒸餾水充分洗滌固定化酶柱，以除去____________。按上表分組，將配制好的淀粉溶液加入到固定化酶柱中，然后取一定量的流出液進行KI-I2檢測。若流出液呈紅色，表明有____________生成；若各組呈現(xiàn)的顏色有顯著差異，則流出液中淀粉水解產(chǎn)物濃度最高的是____________組。
(2)下列關于上述固定化酶實驗的敘述，錯誤的是(　　)
A．固定化酶柱長度和淀粉溶液流速決定了酶柱中酶的含量
B．淀粉溶液流速過快會導致流出液中含有淀粉
C．各組實驗所用的淀粉溶液濃度應相同
D．淀粉溶液的pH對實驗結果有影響
(3)現(xiàn)有一份污水樣品，某興趣小組欲檢測其中的細菌數(shù)，進行以下實驗。將一定量的污水樣品進行濃度梯度稀釋。取適量不同稀釋度的稀釋液，用____________法分別接種于固體平面培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后進行計數(shù)。該實驗應注意，接種前，從盛有____________的容器中將玻璃刮刀取出，放在酒精燈火焰上灼燒，冷卻后待用；分組時，需用______________作為對照。
(4)在上述細菌培養(yǎng)實驗中進行計數(shù)時，應計數(shù)的是接種了(　　)
A．各個稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的細菌數(shù)
B．合理稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的細菌數(shù)
C．各個稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的菌落數(shù)
D．合理稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的菌落數(shù)
17．[2014·天津卷] 嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生的β-葡萄糖苷酶(BglB)是一種耐熱纖維素酶，為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應用，開展了以下試驗：
Ⅰ.利用大腸桿菌表達BglB酶
(1)PCR擴增bglB基因時，選用________________________基因組DNA作模板。
(2)下圖為質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。bglB基因不含圖中限制酶識別序列。為使PCR擴增的bglB基因重組進該質(zhì)粒，擴增的bglB基因兩端需分別引入________和______不同限制酶的識別序列。

注：圖中限制酶的識別序列及切割形成的黏性末端均不相同
(3)大腸桿菌不能降解纖維素，但轉入上述構建好的表達載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因為________________________________。
Ⅱ.溫度對BglB酶活性的影響
(4)據(jù)圖1、2可知，80 ℃保溫30分鐘后，BglB酶會__________；為高效利用BglB酶降解纖維素，反應溫度最好控制在________(單選)。
A．50 ℃　　B．60 ℃　　C．70 ℃　　D．80 ℃

圖1　溫度對BglB酶活性的影響

圖2　BglB酶的熱穩(wěn)定性
注：酶的熱穩(wěn)定性是酶在一定溫度下，保溫一段時間后通過其活性的保持程度來反映的
Ⅲ.利用分子育種技術提高BglB酶的熱穩(wěn)定性
在PCR擴增bglB基因的過程中，加入誘變劑可提高bglB基因的突變率。經(jīng)過篩選，可獲得能表達出熱穩(wěn)定性高的BglB酶的基因。
(5)與用誘變劑直接處理嗜熱土壤芽胞桿菌相比，上述育種技術獲取熱穩(wěn)定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR過程中________(多選)。
A．僅針對bglB基因進行誘變
B．bglB基因產(chǎn)生了定向突變
C．bglB基因可快速累積突變
D．bglB基因突變不會導致酶的氨基酸數(shù)目改變
【2013年】
1．[2013·江蘇卷] 將圖中果酒發(fā)酵裝置改裝后用于探究酵母菌呼吸方式的實驗，下列相關操作錯誤的是(　　)

A．探究有氧條件下酵母菌呼吸方式時打開閥a
B．經(jīng)管口3取樣檢測酒精和CO2 的產(chǎn)生情況
C．實驗開始前對改裝后整個裝置進行氣密性檢查
D．改裝時將盛有澄清石灰水的試劑瓶與管口2連通
2．[2013·江蘇卷] 某研究性學習小組以櫻桃番茄為材料進行果酒、果醋發(fā)酵實驗。下列相關敘述正確的是(　　)
A．酵母菌是嗜溫菌，所以果酒發(fā)酵所需的最適溫度較高
B．先供氧進行果醋發(fā)酵，然后隔絕空氣進行果酒發(fā)酵
C．與人工接種的發(fā)酵相比，自然發(fā)酵獲得的產(chǎn)品品質(zhì)更好
D．適當加大接種量可以提高發(fā)酵速率、抑制雜菌生長繁殖
3．[2013·安徽卷] 下圖為通過DNA分子雜交鑒定含有某特定DNA的細菌克隆示意圖。下列敘述正確的是(　　)

A．根據(jù)培養(yǎng)皿中菌落數(shù)可以準確計算樣品中含有的活菌實際數(shù)目
B．外源DNA必須位于重組質(zhì)粒的啟動子和終止子之間才能進行復制
C．重組質(zhì)粒與探針能進行分子雜交是因為DNA分子脫氧核糖和磷酸交替連接
D．放射自顯影結果可以顯示原培養(yǎng)皿中含有特定DNA的細菌菌落位置
4．[2013·廣東卷] 以下為某興趣小組獲得的實驗結果及其分析，正確的是(　　)

5．[2013·江蘇卷] 某研究小組從有機廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是(　　)
A．培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進行滅菌
B．轉換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進行劃線
C．接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
D．培養(yǎng)過程中每隔一周觀察一次
6．[2013·江蘇卷] 某研究性學習小組以櫻桃番茄為材料進行果酒、果醋發(fā)酵實驗。下列相關敘述正確的是(　　)
A．酵母菌是嗜溫菌，所以果酒發(fā)酵所需的最適溫度較高
B．先供氧進行果醋發(fā)酵，然后隔絕空氣進行果酒發(fā)酵
C．與人工接種的發(fā)酵相比，自然發(fā)酵獲得的產(chǎn)品品質(zhì)更好
D．適當加大接種量可以提高發(fā)酵速率、抑制雜菌生長繁殖
源:學科網(wǎng)]
7．[2013·新課標全國卷Ⅱ] [生物——選修1：生物技術實踐]
臨床使用抗生素前，有時需要做細菌耐藥實驗。實驗時，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實驗步驟操作，以確定某致病菌對不同抗生素的敏感性。
回答下列問題：
(1)為了從樣本中獲取致病菌單菌落，可用________法或__________法將樣本接種于固體培養(yǎng)基表面，經(jīng)過選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。
(2)取該單菌落適當稀釋，用________法接種于固體培養(yǎng)基表面，在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，使其均勻生長，布滿平板。
(3)為了檢測該致病菌對于抗生素的敏感性，將分別含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，培養(yǎng)一段時間后，含A的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素A________；含B的濾紙片周圍沒有出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素B________；含C的濾紙片周圍的透明圈比含A的小，說明______________；含D的濾紙片周圍的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素D的________。
(4)根據(jù)上述實驗結果，為達到抗菌目的，最好應選用抗生素________。
8．[2013·四川卷] 普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人將地衣芽孢桿菌的α－淀粉酶基因轉入酵母菌中，經(jīng)篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種(過程如圖甲所示)。

甲

乙
(1)圖甲中，過程①需要的酶有_________________________。為達到篩選目的，平板內(nèi)的固體培養(yǎng)基應以________作為唯一碳源。②③過程需重復幾次，目的是___________________________________。
(2)某同學嘗試過程③的操作，其中一個平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖乙所示。該同學的接種方法是__________________；推測該同學接種時可能的操作失誤是
________________________________________________________________________。
(3)以淀粉為原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的適宜條件下密閉發(fā)酵，接種________菌的發(fā)酵罐需要先排氣，其原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(4)用凝膠色譜法分離α－淀粉酶時，在色譜柱中移動速度較慢的蛋白質(zhì)，相對分子質(zhì)量較________。
9．[2013·浙江卷] 利用紫甘薯制酒可提高其附加值。請回答：
(1)為提高紫甘薯的利用率，工廠化生產(chǎn)時，可加入果膠酶和淀粉酶，其中果膠酶可來自__________等微生物。
由于酶在水溶液中不穩(wěn)定，因此常將酶固定在某種介質(zhì)上制成________。
(2)果膠酶可將紫甘薯勻漿中的果膠水解成________。
A．半乳糖醛酸和葡萄糖
B．半乳糖和果糖
C．半乳糖醛酸甲酯和果糖
D．半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯
(3)紫甘薯勻漿流經(jīng)α－淀粉酶柱后，取適量流出的液體，經(jīng)脫色后加入KI－I2溶液，結果液體呈紅色。表明該液體中含有______。
A．淀粉 　　B．糊精 　　C．麥芽糖　　 D．葡萄糖
(4)在發(fā)酵前，為使酵母菌迅速發(fā)生作用，取適量的干酵母，加入溫水和______。一段時間后，酵母懸液中會出現(xiàn)氣泡，該氣泡內(nèi)的氣體主要是______。將酵母菌接種到待發(fā)酵液后，隨發(fā)酵的進行，酵母菌在______條件下產(chǎn)生了酒精和二氧化碳。
(5)下圖表示發(fā)酵液pH對酒精濃度的影響。據(jù)圖判斷，最佳pH是______。

【2012年】
1．[2012·江蘇卷] 下列關于制作果酒、果醋和腐乳的敘述，合理的是(　　)
A．在果酒發(fā)酵后期擰開瓶蓋的間隔時間可延長
B．條件適宜時醋酸菌可將葡萄汁中的糖分解成醋酸
C．果酒發(fā)酵過程中發(fā)酵液密度會逐漸減小
D．將長滿毛霉的豆腐裝瓶腌制時，底層和近瓶口處需加大用鹽量
2．[2012·全國卷] 下列關于細菌的敘述，正確的是(　　)
A．不同種類細菌的生長均需要相同碳源
B．常用液體培養(yǎng)基分離獲得細菌單菌落
C．細菌大量培養(yǎng)過程中，芽孢形成于細菌生長的調(diào)整期
D．培養(yǎng)基中含有高濃度NaCl有利于金黃色葡萄球菌的篩選
3．[2012·北京卷] 高中生物學實驗中，在接種時不進行嚴格無菌操作對實驗結果影響最大的一項是(　　)
A．將少許干酵母加入到新鮮的葡萄汁中
B．將毛霉菌液接種在切成小塊的鮮豆腐上
C．將轉基因植物葉片接種到無菌培養(yǎng)基上
D．將土壤浸出液涂布在無菌的選擇培養(yǎng)基上
4．[2012·江蘇卷] 下列關于酶和固定化酵母細胞的研究與應用的敘述，錯誤的是(　　)
A．從酶的固定方式看，吸附法比化學結合法對酶活性影響小
B．作為消化酶使用時，蛋白酶制劑以口服方式給藥
C．尿糖試紙含有固定化的葡萄糖酶和過氧化氫酶，可以反復使用
D．將海藻酸鈉凝膠珠用無菌水沖洗，目的是洗去CaCl2和雜菌
5．[2012·江蘇卷] 下列關于“探究加酶洗衣粉和普通洗衣粉的洗滌效果”的敘述，合理的是(　　)
A．先用熱水溶解洗衣粉，再將水溫調(diào)節(jié)到最適溫度
B．實驗的觀察指標可以是相同洗滌時間內(nèi)污漬的殘留程度
C．相同pH時加酶洗衣粉洗滌效果好于普通洗衣粉
D．衣物質(zhì)地和洗衣粉用量不會影響實驗結果
6．[2012·江蘇卷] 下列關于“DNA粗提取與鑒定實驗”的敘述，正確的是(　　)
A．洗滌劑能瓦解細胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度
B．將DNA絲狀物放入二苯胺試劑中沸水浴后冷卻變藍
C．常溫下菜花勻漿中有些酶類會影響DNA的提取
D．用玻棒緩慢攪拌濾液會導致DNA獲得量減少
7．[2012·浙江卷] 天然的玫瑰沒有藍色花，這是由于缺少控制藍色色素合成的基因B，而開藍色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B?，F(xiàn)用基因工程技術培育藍玫瑰，下列操作正確的是(　　)
A．提取矮牽牛藍色花的mRNA，經(jīng)逆轉錄獲得互補的DNA，再擴增基因B
B．利用限制性核酸內(nèi)切酶從開藍色花矮牽牛的基因文庫中獲取基因B
C．利用DNA聚合酶將基因B與質(zhì)粒連接后導入玫瑰細胞
D．將基因B直接導入大腸桿菌，然后感染并轉入玫瑰細胞
8．[2012·廣東卷] 培育草莓脫毒苗所采用的主要技術是(　　)
A．組織培養(yǎng)　　　　　　　B．細胞雜交
C．顯微注射 D．核移植
9．[2012·課標全國卷] [生物—選修3現(xiàn)代生物科技專題]
根據(jù)基因工程的有關知識，回答下列問題：
(1)限制性內(nèi)切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有________和________。
(2)質(zhì)粒運載體用EcoR Ⅰ切割后產(chǎn)生的片段如下：
　　　　　AATTC……G
　　　　　　　　G……CTTAA
為使運載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoR Ⅰ切割外，還可用另一種限制性內(nèi)切酶切割，該酶必須具有的特點是___________________________________________________________________。
(3)按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即________DNA連接酶和________DNA連接酶。
(4)反轉錄作用的模板是________，產(chǎn)物是_______。若要在體外獲得大量反轉錄產(chǎn)物，常采用_______技術。
(5)基因工程中除質(zhì)粒外，________和________也可作為運載體。
(6)若用重組質(zhì)粒轉化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，原因是______________________________________________。
10．[2012·江蘇卷] 圖11表示含有目的基因D 的DNA 片段長度(bp 即堿基對)和部分堿基序列，圖12表示一種質(zhì)粒的結構和部分堿基序列?，F(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4 種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。請回答下列問題：

圖11　　　　　　　　　　　圖12
(1)圖11的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由__________________連接。
(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割圖11中DNA片段，產(chǎn)生的末端是________末端，其產(chǎn)物長度為________。
(3)若圖11中虛線方框內(nèi)的堿基對被T－A 堿基對替換，那么基因D 就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出圖11及其對應的DNA 片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，產(chǎn)物中共有________種不同長度的DNA 片段。
(4)若將圖12中質(zhì)粒和目的基因D 通過同種限制酶處理后進行連接，形成重組質(zhì)粒，那么應選用的限制酶是________。在導入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌， 一般需要用添加________的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。經(jīng)檢測，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達，其最可能的原因是_________________________________________________________________________________________。
11．[2012·福建卷] 肺細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術將let-7基因導入肺癌細胞實現(xiàn)表達，發(fā)現(xiàn)肺癌細胞的增殖受到抑制。該基因工程技術基本流程如圖1。
圖1
圖2
請回答：
(1)進行過程①時，需用____________酶切開載體以插入let-7基因。載體應有RNA聚合酶識別和結合的部位，以驅動let-7基因轉錄，該部位稱為________。
(2)進行過程②時，需用______酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細胞，以利于傳代培養(yǎng)。
(3)研究發(fā)現(xiàn)，let-7基因能影響癌基因RAS的表達，其影響機理如圖2。據(jù)圖分析，可從細胞中提取______進行分子雜交，以直接檢測let-7基因是否轉錄。肺癌細胞增殖受到抑制，可能是由于細胞中______(RAS mRNA/RAS蛋白)含量減少引起的。
12．[2012·山東卷] 辣椒素作為一種生物堿廣泛用于食品保健、醫(yī)藥工業(yè)等領域。辣椒素的獲得途徑如圖所示。

(1)圖中①和②分別表示辣椒組織培養(yǎng)中細胞的________和________過程。
(2)圖中培養(yǎng)外植體的培養(yǎng)基中常用的凝固劑是__________。培養(yǎng)基中的生長素和細胞分裂素用量的比值________(填“高”或“低”)時，有利于芽的分化。對培養(yǎng)基徹底滅菌時，應采取的滅菌方法是________________________________________________________________________。
(3)圖中外植體的消毒所需酒精的體積分數(shù)是__________。用酶解法將愈傷組織分離成單細胞時，常用的酶是________和纖維素酶。
(4)提取辣椒素過程中，萃取加熱時需安裝冷凝回流裝置，其目的是______________。

13．[2012·山東卷] 辣椒素作為一種生物堿廣泛用于食品保健、醫(yī)藥工業(yè)等領域。辣椒素的獲得途徑如圖所示。

(1)圖中①和②分別表示辣椒組織培養(yǎng)中細胞的________和________過程。
(2)圖中培養(yǎng)外植體的培養(yǎng)基中常用的凝固劑是__________。培養(yǎng)基中的生長素和細胞分裂素用量的比值________(填“高”或“低”)時，有利于芽的分化。對培養(yǎng)基徹底滅菌時，應采取的滅菌方法是________________________________________________________________________。
(3)圖中外植體的消毒所需酒精的體積分數(shù)是__________。用酶解法將愈傷組織分離成單細胞時，常用的酶是________和纖維素酶。
(4)提取辣椒素過程中，萃取加熱時需安裝冷凝回流裝置，其目的是______________。

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