一、未知
1．在第19屆杭州亞運(yùn)會(huì)開(kāi)幕式中“數(shù)字人點(diǎn)火，零碳主火炬”是我們實(shí)現(xiàn)“雙碳”目標(biāo)的舉措之一。中國(guó)提出“雙碳”目標(biāo)具有重要的全球性意義，下列不屬于其具有全球性原因的是（ ）
A．碳循環(huán)具有全球性B．生物圈具有全球性
C．大氣環(huán)流具有全球性D．每條食物鏈具有全球性
2．效應(yīng)細(xì)胞毒性T細(xì)胞可以特異性地與靶細(xì)胞結(jié)合，并釋放穿孔素等殺傷性物質(zhì)，使靶細(xì)胞死亡。該過(guò)程屬于（ ）
A．細(xì)胞凋亡B．細(xì)胞壞死C．細(xì)胞分化D．細(xì)胞增殖
3．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一段時(shí)間后，需要將原培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的細(xì)胞稀釋后轉(zhuǎn)移到多個(gè)培養(yǎng)瓶進(jìn)行傳代培養(yǎng)。下列不屬于需要進(jìn)行傳代培養(yǎng)原因的是（ ）
A．細(xì)胞出現(xiàn)了接觸抑制現(xiàn)象B．細(xì)胞出現(xiàn)了貼壁生長(zhǎng)現(xiàn)象
C．營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)枯竭D．培養(yǎng)空間有限
4．農(nóng)諺有云：“雨生百谷”?！坝辍庇欣诜N子的萌發(fā)，是“百谷”豐收的基礎(chǔ)。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．種子萌發(fā)時(shí)，細(xì)胞內(nèi)水的含量升高
B．種子萌發(fā)時(shí)，細(xì)胞內(nèi)代謝水平升高
C．需氧呼吸中，水是丙酮酸生成的原料
D．光合作用中，水的光解發(fā)生在類囊體薄膜上
5．為研究外來(lái)物種梭鱸在鴨綠江水豐水庫(kù)的生長(zhǎng)情況，科研人員捕獲了198尾梭鱸樣本進(jìn)行年齡鑒定，調(diào)查結(jié)果如下表。梭鱸最大年齡可達(dá)17齡，性成熟年齡為雌性3-5齡，雄性2-4齡。
下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．198尾梭鱸應(yīng)來(lái)自于多個(gè)不同的采樣點(diǎn)
B．水豐水庫(kù)梭鱸種群的年齡結(jié)構(gòu)為增長(zhǎng)型
C．梭鱸入侵鴨綠江水豐水庫(kù)的時(shí)間相對(duì)較短
D．水豐水庫(kù)梭鱸種群的K值約為400尾
6．甲狀腺激素在人體生命活動(dòng)的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．成年甲亢患者的體表溫度偏高
B．幼年呆小癥患者的甲狀腺激素偏低
C．甲狀腺激素含量偏高會(huì)抑制促甲狀腺激素釋放激素的分泌
D．甲狀腺激素分泌不足會(huì)促進(jìn)促甲狀腺激素的分泌
7．果實(shí)在成熟前是種子發(fā)育的庇護(hù)場(chǎng)所，成熟后是種子的傳播載體。已知茉莉酸是植物體內(nèi)一種重要的防御激素，與乙烯共同調(diào)節(jié)果實(shí)的成熟度及適口性。下列推論不合理的是（ ）
A．果實(shí)未成熟時(shí)乙烯少、茉莉酸多
B．果實(shí)成熟時(shí)乙烯多、茉莉酸少
C．果實(shí)受到侵害時(shí)，茉莉酸含量將增加
D．乙烯與茉莉酸存在拮抗關(guān)系
8．ATP處理能使酚類（對(duì)人體有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值）含量上升從而延長(zhǎng)黃瓜保鮮時(shí)間，4CL是酚類合成的關(guān)鍵酶。研究小組將鮮切黃瓜在1.6mml/LATP處理10min后，測(cè)定其在10℃、72h貯藏期間的4CL活性．結(jié)果如下圖所示（CK為對(duì)照組）。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．ATP處理后鮮切黃瓜4CL酶活性呈先升后降的趨勢(shì)
B．ATP處理48h后，鮮切黃瓜的4CL酶活性和總酚的含量均最高
C．低溫儲(chǔ)存能延長(zhǎng)黃瓜保鮮時(shí)間，因此本實(shí)驗(yàn)須在相對(duì)低溫條件下完成
D．可增設(shè)不同ATP濃度處理以探究促進(jìn)黃瓜保鮮的最適ATP濃度
9．氨芐青霉素在高溫下易降解，在含氨芐青霉素的固體培養(yǎng)基中接種沒(méi)有氨芐青霉素抗性的大腸桿菌，培養(yǎng)一段時(shí)間后培養(yǎng)基上出現(xiàn)了菌落。對(duì)該現(xiàn)象的原因分析不合理的是（ ）
A．大腸桿菌發(fā)生了基因突變
B．培養(yǎng)基滅菌不徹底，出現(xiàn)了雜菌
C．培養(yǎng)基中的氨芐青霉素因時(shí)間過(guò)長(zhǎng)已失效
D．先對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌再加入無(wú)菌的氨芐青霉素
10．遼寧省建昌縣發(fā)現(xiàn)了赫氏近鳥(niǎo)龍化石，其身體骨架結(jié)構(gòu)與恐龍非常接近，但骨架周圍有清晰的羽毛印痕，顯示其后肢和尾部都有飛羽。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．赫氏近鳥(niǎo)龍化石為鳥(niǎo)類起源于恐龍?zhí)峁┝俗C據(jù)
B．赫氏近鳥(niǎo)龍化石為生物具有統(tǒng)一性提供了證據(jù)
C．赫氏近鳥(niǎo)龍化石為恐龍經(jīng)常使用后肢而進(jìn)化為鳥(niǎo)類提供了證據(jù)
D．赫氏近鳥(niǎo)龍化石為鳥(niǎo)類和恐龍具有某些相似的解剖學(xué)特征提供了證據(jù)
11．研究表明，組蛋白的某些氨基酸在去乙?；傅淖饔孟掳l(fā)生去乙?；约霸诩谆D(zhuǎn)移酶的作用下發(fā)生甲基化，均可引起裂殖酵母著絲粒部位的某些基因沉默。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．乙?；图谆鶎儆诒碛^遺傳修飾
B．沉默基因的堿基序列未發(fā)生變化
C．組蛋白去乙酰化增加了其與DNA的親和力以抑制基因表達(dá)
D．甲基化導(dǎo)致DNA聚合酶不能與啟動(dòng)子結(jié)合引起基因沉默
12．脫氧核酶是人工合成的具有催化活性的單鏈DNA分子。下圖為脫氧核酶RadDz3與靶DNA結(jié)合并進(jìn)行定點(diǎn)切割的示意圖。切割斷裂位點(diǎn)位于底物鳥(niǎo)嘌呤核苷酸中的脫氧核糖4’碳原子位置，導(dǎo)致脫氧核糖裂解，從而使底物DNA鏈斷裂。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．RadDz3具有專一性
B．RadDz3脫氧核酶含有C、H、O、N、P等元素
C．RadDz3分子內(nèi)部堿基間具有氫鍵
D．RadDz3水解底物DNA中的磷酸二酯鍵
13．為了對(duì)某湖泊進(jìn)行綜合治理并合理利用資源，研究人員對(duì)該湖泊的能量流動(dòng)情況進(jìn)行了調(diào)查分析，部分調(diào)查結(jié)果如下圖所示（圖中I、Ⅱ表示兩個(gè)營(yíng)養(yǎng)級(jí)，單位為103kJ/m2·a），下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．甲表示部分能量流向分解者
B．流入該湖泊的總能量大于生產(chǎn)者固定的太陽(yáng)能總量
C．能量在I、Ⅱ兩個(gè)營(yíng)養(yǎng)級(jí)間的傳遞效率約為3%
D．此生態(tài)系統(tǒng)的產(chǎn)品輸出總量為25.1×103kJ
14．疣粒野生稻對(duì)水稻白葉枯病具有高度的抗性?？蒲腥藛T利用疣粒野生稻和栽培稻的原生質(zhì)體進(jìn)行體細(xì)胞雜交培育抗白葉枯病水稻，主要流程如下圖所示。下列敘述正確的是（ ）
A．①過(guò)程為去除細(xì)胞壁，需加入經(jīng)高壓蒸汽滅菌的纖維素酶液
B．②過(guò)程須加入較高濃度的聚乙二醇，目的是維持一定的滲透壓
C．測(cè)定原生質(zhì)體密度時(shí)，可用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板或稀釋涂布平板法
D．碘乙酰胺處理目的是讓細(xì)胞質(zhì)失活，以簡(jiǎn)化篩選程序
15．褐色脂肪組織（BAT）細(xì)胞線粒體內(nèi)膜上有一種特殊的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（UCP），其作用機(jī)制如下圖所示。ATP與ADP的比值會(huì)影響UCP的活性。下列敘述正確的是（ ）
A．H+由膜間隙通過(guò)主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入線粒體基質(zhì)
B．激活UCP會(huì)抑制線粒體內(nèi)膜上ATP的合成
C．線粒體基質(zhì)中ATP與ADP的比值減小，有利于BAT產(chǎn)熱
D．圖示兩種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白結(jié)構(gòu)和功能不同的根本原因是基因的選擇性表達(dá)
16．生活在潮間帶（海、陸過(guò)渡地帶）的濱螺常以滸苔（一種藻類植物）為食。圖表示某潮間帶中的藻類物種數(shù)與濱螺密度的關(guān)系，下列敘述正確的是（ ）
A．濱螺密度的變化會(huì)改變潮間帶中滸苔的生態(tài)位
B．濱螺密度的增加過(guò)程中，群落發(fā)生了演替
C．隨著濱螺密度增加，滸苔密度先增加后下降
D．隨著濱螺密度增加，藻類之間的競(jìng)爭(zhēng)強(qiáng)度逐漸增加
17．1937年霍奇金以蛙坐骨神經(jīng)為材料，研究冷卻阻滯對(duì)動(dòng)作電位在神經(jīng)纖維上傳導(dǎo)的影響，記錄距冷卻阻滯點(diǎn)不同距離處神經(jīng)纖維膜內(nèi)電位變化，結(jié)果如下圖。下列敘述正確的是（ ）
A．若沒(méi)有冷卻阻滯，則a、b兩處的電位峰值不同
B．若增大刺激強(qiáng)度，則a、b兩處的電位峰值可增大
C．該實(shí)驗(yàn)可證明冷卻阻滯會(huì)抑制去極化過(guò)程
D．該實(shí)驗(yàn)可證明冷卻阻滯會(huì)抑制興奮的傳導(dǎo)速度
18．模型構(gòu)建是研究生物學(xué)的基本方法之一，下圖表示系統(tǒng)中不同成分之間的關(guān)系示意圖。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．若該圖表示碳循環(huán)示意圖的一部分，則A可表示大氣中的二氧化碳
B．若該圖表示內(nèi)分泌負(fù)反饋調(diào)節(jié)示意圖，則B可表示下丘腦
C．若該圖表示內(nèi)環(huán)境各成分之間物質(zhì)交換示意圖，則A可表示血漿
D．若該圖表示胰島分泌活動(dòng)的調(diào)節(jié)示意圖，則A可表示胰島
19．把小鼠瘤細(xì)胞和人的成纖維細(xì)胞懸液混合，使其融合成為雜種細(xì)胞。由于人-鼠雜種細(xì)胞中人的染色體會(huì)隨著培養(yǎng)的進(jìn)行隨機(jī)、逐代丟失，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行酶活性分析可用于基因定位。下表為三種雜種細(xì)胞I、Ⅱ、Ⅲ中人體相關(guān)酶活性情況。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）
注：“×”代表細(xì)胞不具有此酶活性，“√”代表細(xì)胞具有此酶活性
A．可通過(guò)顯微鏡檢并對(duì)照區(qū)分出雜種細(xì)胞I、Ⅱ、Ⅲ
B．用于融合的小鼠瘤細(xì)胞須是相關(guān)酶的基因缺陷類型
C．對(duì)某一個(gè)Ⅱ細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即可獲得大量的芳烴羥化酶
D．胸苷激酶基因位于17號(hào)染色體上，磷酸甘油酸激酶基因位于，X染色體上
20．用32P標(biāo)記基因型為AaXBY的雄性個(gè)體（2n=4）某一精原細(xì)胞所有染色體DNA，讓其在含31P的培養(yǎng)液中進(jìn)行細(xì)胞分裂。依據(jù)細(xì)胞中染色體數(shù)和核DNA分子數(shù)的數(shù)量關(guān)系劃分細(xì)胞類型如圖1。分裂過(guò)程中某個(gè)細(xì)胞（M）中染色體及基因組成如下圖2所示，此細(xì)胞中有2條染色體DNA含有32P。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．M所處時(shí)期屬于類型丙，形成過(guò)程中發(fā)生了交叉互換
B．形成M至少經(jīng)歷一次甲類型細(xì)胞所處時(shí)期、兩次胞質(zhì)分裂
C．與M來(lái)自同一初級(jí)精母細(xì)胞的另一同期細(xì)胞有2條含32P的染色體
D．若不考慮基因突變和染色體畸變，則培養(yǎng)液中會(huì)出現(xiàn)4種基因型的精細(xì)胞
21．森林茶園是指以產(chǎn)出生態(tài)茶葉為目標(biāo)，符合綠色、有機(jī)種植標(biāo)準(zhǔn)，伴生有其他野生或栽培木本植物的一種茶園。回答下列問(wèn)題：
(1)森林茶園茶樹(shù)間隙分布有馬尾松等常綠樹(shù)種，還有青岡等多種落葉闊葉樹(shù)種，其中灌木層和草本層植物種類也較為豐富，具有明顯的 ?！跋碴幣聫?qiáng)光”是茶樹(shù)生長(zhǎng)特性之一，森林茶園中一些高大的喬木起到了 的作用，是森林茶園中茶樹(shù)生長(zhǎng)良好的重要原因。
(2)采用燈光誘捕法對(duì)昆蟲(chóng)類群進(jìn)行調(diào)查，其調(diào)查結(jié)果可反映昆蟲(chóng)類群的豐富度及某些昆蟲(chóng)種群的 。在此方法中，燈光屬于 信息。與人工種植的高密度茶園相比，森林茶園的昆蟲(chóng)類群豐富度高，原因之一是森林茶園豐富的植被為昆蟲(chóng)提供了 ?？梢?jiàn)森林茶園的營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)更復(fù)雜， 穩(wěn)定性更高。
(3)紫莖澤蘭和飛機(jī)草均為多年生叢生型灌木，是兩種入侵雜草。生物入侵總體上會(huì)導(dǎo)致茶園生物多樣性 ，但調(diào)查發(fā)現(xiàn)膜翅目昆蟲(chóng)在雜草入侵過(guò)程中反而有所增加，推測(cè)其原因可能是 （寫(xiě)出兩點(diǎn)）。入侵的紫莖澤蘭可用于生產(chǎn)飼料、制紙等，因此可對(duì)人工拔除的紫莖澤蘭進(jìn)行 利用，以使能量流向?qū)θ祟愑幸娴姆较颉?br>22．我國(guó)關(guān)于多年生水稻的研究成果入選2022年度十大科學(xué)突破。相關(guān)研究表明，多年生作物具有更保守的生長(zhǎng)策略，只有部分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)分配給繁殖器官，其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)貯存在根系等器官為下一年生長(zhǎng)發(fā)育提供營(yíng)養(yǎng)。圖1表示Rubisc酶（催化CO2固定）活化機(jī)理，圖2、圖3分別表示2020年、2021年不同品種多年生水稻的生物量分配比例。
回答下列問(wèn)題：
(1)據(jù)圖1分析，影響Rubisc酶活化的環(huán)境因素有 ，該酶催化形成的三碳酸，被還原劑 還原形成三碳糖。缺鎂會(huì)導(dǎo)致多年生水稻光合速率下降，原因有 （寫(xiě)出兩點(diǎn)）。
(2)在繪制生物量分配比例圖時(shí)，須測(cè)定各部分 的干重或鮮重總量。由圖2、圖3可知，大部分水稻光合產(chǎn)物貯存于 部分，研究發(fā)現(xiàn)其可溶性糖含量高，增加了細(xì)胞的 能力，從而提高其抗倒伏能力。若各品系總生物量相同，2020年 品種產(chǎn)量最高。
(3)研究發(fā)現(xiàn)，pR107品種在2021年收割后，來(lái)年無(wú)法由地下部分長(zhǎng)出新苗，而其他品種基本正常，原因是一方面2021年P(guān)R107品種的 低，導(dǎo)致大部分生物量集中在繁殖部分及營(yíng)養(yǎng)部分，另一方面2021年P(guān)R107品種的 低，導(dǎo)致其因缺少營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而無(wú)法正常越冬。
23．流行性感冒（流感）由流感病毒引起，傳播速度快、波及范圍廣，嚴(yán)重時(shí)可致人死亡。人體通過(guò)神經(jīng)調(diào)節(jié)、體液調(diào)節(jié)和免疫調(diào)節(jié)對(duì)流感病毒入侵作出反應(yīng)。回答下列問(wèn)題：
(1)通常情況下，平均氣溫與最低氣溫越低，感冒就診人數(shù)越多。這主要是因?yàn)闅鉁鼐S持在較低值，人們吸入冷空氣，鼻腔 收縮，上呼吸道對(duì)異物的清掃能力減弱，即 免疫減弱，增加了病毒侵染機(jī)會(huì)。寒冷刺激下，人體軀干、四肢的骨骼肌會(huì)產(chǎn)生不自主戰(zhàn)栗，此反應(yīng)的神經(jīng)中樞位于下丘腦和 ，直接引發(fā)骨骼肌戰(zhàn)栗的傳出神經(jīng) （填“是”或“不是”）交感神經(jīng)。
(2)冷空氣的移動(dòng)會(huì)加速空氣對(duì)流，容易引起流感病毒傳播。當(dāng)流感病毒侵染人體呼吸道上皮細(xì)胞時(shí)，會(huì)經(jīng)過(guò) 、脫殼、生物合成和成熟釋放等幾個(gè)階段。若要用PCR技術(shù)驗(yàn)證某咽拭子樣品中有流感病毒，請(qǐng)完善實(shí)驗(yàn)思路：
①提取、純化樣品中的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄后獲得DNA，作為PCR擴(kuò)增的 。
② 。
③ 。
(3)接種疫苗是較好的預(yù)防流感措施。HA和NA是流感病毒表面的兩種糖蛋白，向人體注射這兩種物質(zhì)時(shí)，可引發(fā)機(jī)體的 （填“細(xì)胞”“體液”或“細(xì)胞和體液”）免疫。HA、NA氨基酸序列的變異頻率非常高，導(dǎo)致每年流行的病毒毒株可能不同。某人注射HA類疫苗一段時(shí)間后，未能起到免疫預(yù)防作用，請(qǐng)以坐標(biāo)曲線圖形式（縱坐標(biāo)表示抗體數(shù)量，橫坐標(biāo)表示接受疫苗或病毒時(shí)間）表示其原理 。
(4)現(xiàn)以某種實(shí)驗(yàn)小鼠為材料制備抗血清。欲獲得某一種較高濃度的抗體，在你的實(shí)驗(yàn)思路中，關(guān)鍵是需要對(duì)小鼠進(jìn)行 。為什么? 。
24．果蠅中正常翅脈（A）對(duì)間斷翅脈（a）為顯性。基因型為aa的果蠅中，80%的個(gè)體表現(xiàn)為間斷翅脈，20%的個(gè)體表現(xiàn)為正常翅脈，且在各代群體中該比率保持不變。果蠅的眼色有伊紅眼、淡色眼和乳白眼，分別由復(fù)等位基因e、t和i控制。回答下列問(wèn)題：
(1)僅考慮翅脈性狀，正常翅脈的果蠅基因型可能有 種。下列選項(xiàng)中哪幾項(xiàng)可能是基因型為aa個(gè)體表現(xiàn)為正常翅脈的原因?
A．環(huán)境因素影響了相關(guān)基因的表達(dá)
B．相關(guān)基因發(fā)生了表觀遺傳修飾
C．其他基因影響了相關(guān)基因的表達(dá)
(2)為探究果蠅翅脈和眼色性狀的遺傳規(guī)律，進(jìn)行了兩組雜交實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如下表所示。
①e、t和i基因位于 染色體上，e、t和i之間的顯、隱性關(guān)系為 。果蠅眼色和翅脈性狀的遺傳遵循 定律。
②雜交組合二中母本的基因型是 ，子一代個(gè)體中與父本基因型及表現(xiàn)型均相同的個(gè)體占 。
③雜交實(shí)驗(yàn)一子一代雄性正常翅脈果蠅基因型及比例是 （只寫(xiě)翅脈相關(guān)基因）。
(3)果蠅體細(xì)胞有三對(duì)常染色體。為確定控制翅脈的基因（A/a）在果蠅染色體上的位置，借助位置已知的M/m基因進(jìn)行分析。用基因型為mmAA的正常翅脈果蠅P與基因型為MMaa的間斷翅脈品系Q雜交得F?，F(xiàn)?自由交配得F2。用M、m基因的特異性引物，對(duì)F2間斷翅脈果蠅體內(nèi)組織的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，電泳結(jié)果有1、2、3三種類型，如圖所示。統(tǒng)計(jì)間斷翅脈（F2）的數(shù)量，發(fā)現(xiàn)類型3個(gè)體最多、類型2較少、無(wú)類型1出現(xiàn)。據(jù)此推測(cè)，控制翅脈的基因（A/a）與M/m基因 （填“位于”或“不位于”）同一對(duì)染色體上，其中出現(xiàn)類型2的原因是 。
25．γ-干擾素具有抗病毒、抗腫瘤、調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和免疫功能。畢赤酵母基因組含有AOX1基因，使得其能利用甲醇作為碳源。AOX1基因的啟動(dòng)子為甲醇誘導(dǎo)型強(qiáng)啟動(dòng)子。當(dāng)培養(yǎng)基中甲醇為唯一碳源時(shí)，A0X1基因表達(dá)被誘導(dǎo)到高水平。研究人員利用畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)豬γ-干擾素，實(shí)現(xiàn)了豬γ-干擾素的高效表達(dá)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
(1)豬γ-干擾素基因的克?。翰樵? 中豬γ-干擾素基因（長(zhǎng)度為0.4kb）序列，設(shè)計(jì)并合成引物，以豬基因組為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。下圖1為pPIC9K載體（圖中箭頭表示轉(zhuǎn)錄方向），圖2為豬γ-干擾素基因，圖3為三種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)。為使PCR獲得的基因與質(zhì)粒載體能正確連接，需在兩種引物的 端加入限制性內(nèi)切核酸酶識(shí)別序列。研究人員設(shè)計(jì)了引物PL和PR供選擇使用。綜合各圖分析PCR時(shí)相應(yīng)的引物在圖2中結(jié)合位置正確是
A．①處：PL、④處：PR B．②處：PL、③處：PR
C．①處：PR、④處：PL D．②處：PR、③處：PL
引物PL：5’-TTTGAATTCTGCCAGGCGCCCTTTTTT-3’
引物PR：5’-TTTGCGGCCGCTTATTTTGATGCTCT-3’
(2)重組載體的構(gòu)建與克隆：pPIC9K載體是整合型載體，可將5'AOX1序列和3'AOX1序列之間的片段（包含5'A0X1強(qiáng)啟動(dòng)子下游的目的基因和His4等基因）整合到酵母菌的染色體DNA上。上述PCR產(chǎn)物經(jīng)雙酶切后，與事先酶切處理后的質(zhì)粒pPIC9K（取長(zhǎng)度為9.3kb片段）混合，用 連接，然后導(dǎo)入大腸桿菌菌株。將大腸桿菌接種至含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其目的是 。大腸桿菌經(jīng)擴(kuò)增后提取質(zhì)粒，經(jīng)電泳分離、鑒定，取其中長(zhǎng)度約 kb的條帶，獲得重組質(zhì)粒。用限制性內(nèi)切核酸酶將重組質(zhì)粒切成線性化DNA備用。
(3)重組質(zhì)粒導(dǎo)入酵母細(xì)胞：取實(shí)驗(yàn)室保存的畢赤酵母菌株GS115（組氨酸合成缺陷型），用0.1ml/L的LiAC（醋酸鋰）處理使其處于感受態(tài)，然后將線性化重組質(zhì)粒與之混合，在50%的PEG溶液中給予短暫的 實(shí)現(xiàn)對(duì)畢赤酵母的轉(zhuǎn)化。然后用 法將其接種于不含組氨酸的平板上，培養(yǎng)獲得分離良好的單菌落。不含組氨酸的培養(yǎng)基可篩選出導(dǎo)入線性重組質(zhì)粒的畢赤酵母，原因是 。進(jìn)一步篩選出成功整合至相應(yīng)染色體的畢赤酵母。
(4)γ-干擾素的誘導(dǎo)表達(dá)：將所選菌株在液體培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)若干天，每隔24小時(shí)在培養(yǎng)基中加入 ，以誘導(dǎo)畢赤酵母表達(dá)y-干擾素。對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行 ，然后收集上清液，再用 方法對(duì)上清液中的產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)、鑒定。
(5)豬γ-干擾素抗病毒活性的測(cè)定：已知γ-干擾素通過(guò)與宿主細(xì)胞表面受體結(jié)合，誘導(dǎo)產(chǎn)生多種抗病毒蛋白，從而抑制病毒復(fù)制?，F(xiàn)以水皰性口炎病毒（VSV）及其宿主細(xì)胞（牛腎細(xì)胞）為實(shí)驗(yàn)材料，以病變細(xì)胞比例為檢測(cè)指標(biāo)，下列測(cè)定γ-干擾素抗病毒活性的方案合理的是_________
A．一定濃度的上清液與水皰性口炎病毒（VSV）溶液混合
B．一定濃度的上清液與牛腎細(xì)胞混合，加入水皰性口炎病毒（VSV）
C．一定濃度的上清液與牛腎細(xì)胞共孵育24h后，加入水皰性口炎病毒（VSV）
生長(zhǎng)期
1齡
2齡
3齡
4齡
5齡
尾數(shù)
99尾
73
19
6
1
雜種細(xì)胞
保留的人染色體
芳烴羥化酶
胸苷激酶
磷酸甘油酸激酶
I
11號(hào)、X
×
×
√
Ⅱ
2號(hào)、11號(hào)
√
×
×
Ⅲ
11號(hào)、17號(hào)、X
×
√
√
雜交組合
親本
子一代
♀
♂
♀
♂
一
正常翅
脈乳白眼
正常翅
脈淡色眼
正常翅脈淡色眼：間斷
翅脈淡色眼=4：1
正常翅脈乳白眼：間斷
翅脈乳白眼=4：1
二
正常翅脈
伊紅眼
間斷翅
脈淡色眼
正常翅脈伊紅眼：正常翅脈淡色
眼：間斷翅脈伊紅眼：間斷
翅脈淡色眼=3：3：2：2
正常翅脈伊紅眼：正常翅
脈淡色眼：間斷翅脈
伊紅眼：間斷翅
脈淡色眼=3：3：2：2

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