考點01 植物細(xì)胞工程
1．（2024·甘肅）蘭州百合栽培過程中易受病毒侵染，造成品質(zhì)退化。某研究小組嘗試通過組織培養(yǎng)技術(shù)獲得脫毒苗，操作流程如下圖。下列敘述正確的是（ ）
A．①為脫分化過程，1號培養(yǎng)基中的愈傷組織是排列規(guī)則的薄壁組織團(tuán)塊
B．②為再分化過程，愈傷組織細(xì)胞分化時可能會發(fā)生基因突變或基因重組
C．3號培養(yǎng)基用于誘導(dǎo)生根，其細(xì)胞分裂素濃度與生長素濃度的比值大于1
D．百合分生區(qū)附近的病毒極少，甚至無病毒，可以作為該研究中的外植體
1．D
【分析】植物組織培養(yǎng)過程是：離體的植物器官、組織或細(xì)胞脫分化形成愈傷組織，然后再分化生成根、芽，最終形成植物體。植物組織培養(yǎng)依據(jù)的原理是植物細(xì)胞的全能性。
【詳解】A、在脫分化過程中，1號培養(yǎng)基中的愈傷組織是排列不規(guī)則的薄壁組織團(tuán)塊，A錯誤；
B、愈傷組織細(xì)胞分化時可能會發(fā)生基因突變，但基因重組發(fā)生在減數(shù)分裂過程中，而愈傷組織細(xì)胞的分化過程是有絲分裂，所以不會發(fā)生基因重組，B錯誤。
C、3號培養(yǎng)基用于誘導(dǎo)生根，其細(xì)胞分裂素濃度與生長素濃度的比值應(yīng)該小于1，C錯誤；
D、百合分生區(qū)附近的病毒極少，甚至無病毒，因此可以作為該研究中的外植體，D正確；
故選D。
2．（2024·北京）大豆葉片細(xì)胞的細(xì)胞壁被酶解后，可獲得原生質(zhì)體。以下對原生質(zhì)體的敘述錯誤的是（ ）
A．制備時需用纖維素酶和果膠酶
B．膜具有選擇透過性
C．可再生出細(xì)胞壁
D．失去細(xì)胞全能性
2．D
【分析】植物體細(xì)胞雜交就是將不同種的植物體細(xì)胞，在一定的條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種細(xì)胞培育成新的植物體的技術(shù)。該技術(shù)涉及的原理是細(xì)胞膜的流動性和細(xì)胞的全能性。
【詳解】A、大豆葉片細(xì)胞是植物細(xì)胞，具有細(xì)胞壁，其細(xì)胞壁的成分是纖維素和果膠，所以制備原生質(zhì)體，需用纖維素酶和果膠酶進(jìn)行處理，A正確；
B、生物膜的功能特點是具有選擇透過性，所以膜具有選擇透過性，B正確；
C、原生質(zhì)體可以再生出新的細(xì)胞壁，C正確；
D、分離出的原生質(zhì)體具有全能性，可用于植物體細(xì)胞雜交，為雜種植株的獲得提供了理論基礎(chǔ)，D錯誤。
故選D。
3．（2024·安徽）植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)在生產(chǎn)中已得到應(yīng)用。某興趣小組嘗試?yán)迷摷夹g(shù)培養(yǎng)胡蘿卜細(xì)胞并獲取番茄紅素，設(shè)計了以下實驗流程和培養(yǎng)裝置（如圖），請同學(xué)們進(jìn)行評議。下列評議不合理的是（ ）
A．實驗流程中應(yīng)該用果膠酶等處理愈傷組織，制備懸浮細(xì)胞
B．裝置中的充氣管應(yīng)置于液面上方，該管可同時作為排氣管
C．裝置充氣口需要增設(shè)無菌濾器，用于防止雜菌污染培養(yǎng)液
D．細(xì)胞培養(yǎng)需要適宜的溫度，裝置需增設(shè)溫度監(jiān)測和控制設(shè)備
3．B
【分析】植物細(xì)胞培養(yǎng)是指在離體條件下對單個植物細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行培養(yǎng)使其增殖的技術(shù)。
【詳解】A、植物細(xì)胞壁的主要成分是纖維素和果膠，欲利用愈傷組織制備懸浮細(xì)胞，可用纖維素酶和果膠酶進(jìn)行處理愈傷組織，A正確；
B、裝置中的充氣管應(yīng)置于液面下方，以利于培養(yǎng)液中的溶氧量的增加，該管不能同時作為排氣管，B錯誤；
C、為了防止雜菌污染培養(yǎng)液，裝置充氣口需要增設(shè)無菌濾器，C正確；
D、細(xì)胞培養(yǎng)時需要保證適宜的溫度，因此裝置需增設(shè)溫度監(jiān)測和控制設(shè)備，D正確。
故選B。
4．（2024·湖北）植物甲抗旱、抗病性強(qiáng)，植物乙分蘗能力強(qiáng)、結(jié)實性好?？蒲腥藛T通過植物體細(xì)胞雜交技術(shù)培育出兼有甲、乙優(yōu)良性狀的植物丙，過程如下圖所示。下列敘述錯誤的是（ ）
A．過程①中酶處理的時間差異，原因可能是兩種親本的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)有差異
B．過程②中常采用滅活的仙臺病毒或PEG誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合
C．過程④和⑤的培養(yǎng)基中均需要添加生長素和細(xì)胞分裂素
D．可通過分析植物丙的染色體，來鑒定其是否為雜種植株
4．B
【分析】1、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)將來自兩個不同植物的體細(xì)胞融合成一個雜種細(xì)胞（植物體細(xì)胞雜交技術(shù)），把雜種細(xì)胞培育成植株（植物組織培養(yǎng)技術(shù)）。其原理是植物細(xì)胞具有全能性和細(xì)胞膜具有流動性。雜種細(xì)胞再生出新的細(xì)胞壁是體細(xì)胞融合完成的標(biāo)志，細(xì)胞壁的形成與細(xì)胞內(nèi)高爾基體有重要的關(guān)系。植物體細(xì)胞雜交技術(shù)可以克服遠(yuǎn)源雜交不親和的障礙、培育作物新品種方面所取得的重大突破。
2、分析題圖：圖示為甲、乙兩種植物細(xì)胞融合并培育新植株的過程，其中①表示去壁獲取原生質(zhì)體的過程；②③表示人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合以及再生出新細(xì)胞壁的過程；④表示脫分化形成愈傷組織；⑤表示再分化以及個體發(fā)育形成植株丙的過程。
【詳解】A、酶解是為了去除植物細(xì)胞的細(xì)胞壁，過程①中酶處理的時間不同，說明兩種親本的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)有差異，A正確；
B、過程②為原生質(zhì)體的融合，常用PEG誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合，滅活的仙臺病毒可誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合，不能用于植物，B錯誤；
C、過程④脫分化和⑤再分化的培養(yǎng)基中均需要添加生長素和細(xì)胞分裂素，但在兩個過程中比例不同，C正確；
D、植物丙是植物甲和植物乙體細(xì)胞雜交形成的個體，應(yīng)具備兩者的遺傳物質(zhì)，因此可通過分析植物丙的染色體，來鑒定其是否為雜種植株，D正確。
故選B。
5．（2024·吉林）迷迭香酸具有多種藥理活性。進(jìn)行工廠化生產(chǎn)時，先誘導(dǎo)外植體形成愈傷組織，再進(jìn)行細(xì)胞懸浮培養(yǎng)獲得迷迭香酸，加入誘導(dǎo)劑茉莉酸甲酯可大幅提高產(chǎn)量。下列敘述錯誤的是（ ）
A．迷迭香頂端幼嫩的莖段適合用作外植體
B．誘導(dǎo)愈傷組織時需加入NAA和脫落酸
C．懸浮培養(yǎng)時需將愈傷組織打散成單個細(xì)胞或較小的細(xì)胞團(tuán)
D．茉莉酸甲酯改變了迷迭香次生代謝產(chǎn)物的合成速率
5．B
【分析】1、植物組織培養(yǎng)就是在無菌和人工控制的條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。
2、植物組織培養(yǎng)的條件：①細(xì)胞離體和適宜的外界條件（如適宜溫度、適時的光照、pH和無菌環(huán)境等）；②一定的營養(yǎng)（無機(jī)、有機(jī)成分）和植物激素（生長素和細(xì)胞分裂素）。
【詳解】A、迷迭香頂端幼嫩的莖段適合用作外植體，生長旺盛，分裂能力較強(qiáng)，A正確；
B、誘導(dǎo)愈傷組織時需加入NAA和細(xì)胞分裂素，B錯誤；
C、懸浮培養(yǎng)時需將愈傷組織打散成單個細(xì)胞或較小的細(xì)胞團(tuán)，獲得更多的營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣，使得其可以進(jìn)一步分裂，C正確；
D、加入誘導(dǎo)劑茉莉酸甲酯可大幅提高產(chǎn)量，推測茉莉酸甲酯改變了迷迭香次生代謝產(chǎn)物（不是植物生長所必須的）的合成速率，D正確。
故選B。
6．（2024·浙江）山藥在生長過程中易受病毒侵害導(dǎo)致品質(zhì)和產(chǎn)量下降。采用組織培養(yǎng)技術(shù)得到脫毒苗，可恢復(fù)其原有的優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)特性，流程如圖。下列操作不可行的是（ ）
外植體→愈傷組織→叢生芽→試管苗
A．選擇芽尖作為外植體可減少病毒感染
B．培養(yǎng)基中加入抗生素可降低雜菌的污染
C．將叢生芽切割后進(jìn)行繼代培養(yǎng)可實現(xiàn)快速繁殖
D．提高生長素和細(xì)胞分裂素的比值可促進(jìn)愈傷組織形成叢生芽
6．D
【分析】植物組織培養(yǎng)技術(shù)：1、過程：離體的植物組織，器官或細(xì)胞(外植體)→愈傷組織→胚狀體→植株(新植體)。2、原理：植物細(xì)胞的全能性。3、條件：①細(xì)胞離體和適宜的外界條件(如適宜溫度、適時的光照、pH和無菌環(huán)境等) ；②一定的營養(yǎng)(無機(jī)、有機(jī)成分)和植物激素(生長素和細(xì)胞分裂素)。
【詳解】A、芽尖等分生組織分裂旺盛，且含病毒少，取材時常選用其作為外植體，A正確；
B、培養(yǎng)基中有大量的營養(yǎng)物質(zhì)容易被細(xì)菌污染，加入抗生素可降低雜菌的污染，B正確；
C、將叢生芽切割后轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上繼續(xù)進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)稱為繼代培養(yǎng)，其又可分為第二代培養(yǎng)、第三代培養(yǎng)等。大多數(shù)植物每隔4~6周進(jìn)行一次繼代培養(yǎng)，每進(jìn)行一次繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)物一般能增殖3~4倍。正因為培養(yǎng)物可以不斷繼代培養(yǎng)，所以離體繁殖速度比常規(guī)方法通常要快數(shù)萬倍，可實現(xiàn)快速繁殖，C正確；
D、提高生長素和細(xì)胞分裂素的比值可促進(jìn)愈傷組織形成根而不是芽，D錯誤。
故選D。
7．（2024·山東）下列關(guān)于植物愈傷組織的說法正確的是（ ）
A．用果膠酶和膠原蛋白酶去除愈傷組織的細(xì)胞壁獲得原生質(zhì)體
B．融合的原生質(zhì)體需再生出細(xì)胞壁后才能形成愈傷組織
C．體細(xì)胞雜交獲得的雜種植株細(xì)胞中具有來自親本的2個細(xì)胞核
D．通過愈傷組織再生出多個完整植株的過程屬于無性繁殖
7．BD
【分析】植物體細(xì)胞雜交過程：將植物細(xì)胞A與植物細(xì)胞B用纖維素酶和果膠酶處理，得到不含細(xì)胞壁的原生質(zhì)體A和原生質(zhì)體B，運用物理方法或化學(xué)方法誘導(dǎo)融合，形成雜種細(xì)胞，再利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將雜種細(xì)胞培養(yǎng)成雜種植株。
【詳解】A、植物細(xì)胞壁的主要成分是纖維素和果膠，故用果膠酶和纖維素酶去除愈傷組織的細(xì)胞壁獲得原生質(zhì)體，A錯誤；
B、用纖維素酶和果膠酶分別處理不同的植物細(xì)胞，得到原生質(zhì)體，運用物理方法或化學(xué)方法誘導(dǎo)融合，形成雜種細(xì)胞，再利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將雜種細(xì)胞培養(yǎng)成雜種植株，故融合的原生質(zhì)體需再生出細(xì)胞壁后才能形成愈傷組織，B正確；
C、體細(xì)胞雜交獲得的雜種植株細(xì)胞中具有來自親本的的遺傳物質(zhì)，只有1個細(xì)胞核，C錯誤；
D、通過愈傷組織再生出多個完整植株的過程屬于植物的組織培養(yǎng)，從繁殖看屬于無性繁殖，D正確。
故選BD。
8．（2024·浙江）植物體在干旱、蟲害或微生物侵害等脅迫過程中會產(chǎn)生防御物質(zhì)，這類物質(zhì)屬于次生代謝產(chǎn)物。次生代謝產(chǎn)物在植物抗蟲、抗病等方面發(fā)揮作用，也是藥物、香料和色素等的重要來源。次生代謝產(chǎn)物X的研發(fā)流程如下：
篩選高產(chǎn)細(xì)胞→細(xì)胞生長和產(chǎn)物X合成關(guān)系的確定→發(fā)酵生產(chǎn)X
回答下列問題：
(1)獲得高產(chǎn)細(xì)胞時，以X含量高的植物品種的器官和組織作為 ，經(jīng)脫分化形成愈傷組織，然后通過液體振蕩和用一定孔徑的篩網(wǎng)進(jìn)行 獲得分散的單細(xì)胞。
(2)對分離獲得的單細(xì)胞進(jìn)行 培養(yǎng)，并通過添加 或營養(yǎng)缺陷培養(yǎng)方法獲取細(xì)胞周期同步、遺傳和代謝穩(wěn)定、來源單一的細(xì)胞群。為進(jìn)一步提高目標(biāo)細(xì)胞的X含量，將微生物菌體或其產(chǎn)物作為誘導(dǎo)子加入到培養(yǎng)基中，該過程模擬了 的脅迫。
(3)在大規(guī)模培養(yǎng)高產(chǎn)細(xì)胞前，需了解植物細(xì)胞生長和產(chǎn)物合成的關(guān)系。培養(yǎng)細(xì)胞生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物的模型分為3種，如圖所示。若X只在細(xì)胞生長停止后才能合成，則X的合成符合圖 （填“甲”“乙”“丙”），根據(jù)該圖所示的關(guān)系，從培養(yǎng)階段及其目標(biāo)角度，提出獲得大量X的方法。
(4)多種次生代謝產(chǎn)物在根部合成與積累，如人參、三葉青等藥用植物，可通過 培養(yǎng)替代細(xì)胞懸浮培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物。隨著基因組測序和功能基因組學(xué)的發(fā)展，在全面了解生物體合成某次生代謝產(chǎn)物的 和 的基礎(chǔ)上，可利用合成生物學(xué)的方法改造酵母菌等微生物，利用 工程生產(chǎn)植物的次生代謝產(chǎn)物。
8．(1) 外植體 過濾
(2) 擴(kuò)大 過量的胸苷 微生物侵害
(3) 丙 將細(xì)胞培養(yǎng)至穩(wěn)定期（即停止生長時期）一定時間后，通過分離提純獲得大量X
(4) 根的水培養(yǎng) 相關(guān)基因組成 基因表達(dá)過程 基因工程和發(fā)酵
【分析】1、植物組織培養(yǎng)就是在無菌和人工控制的條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。2、植物組織培養(yǎng)的條件：①細(xì)胞離體和適宜的外界條件（如適宜溫度、適時的光照、pH和無菌環(huán)境等）；②一定的營養(yǎng)（無機(jī)、有機(jī)成分）和植物激素（生長素和細(xì)胞分裂素）。
【詳解】（1）植物體的器官和組織、細(xì)胞都可以作為外植體，經(jīng)脫分化形成愈傷組織，將愈傷組織進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，使其分散成小的細(xì)胞團(tuán)或單細(xì)胞，然后用適當(dāng)孔徑的不銹鋼篩網(wǎng)過濾，除去大的細(xì)胞團(tuán)和殘渣，離心除去小的殘渣，得到單細(xì)胞懸浮液。
（2）分離獲得的單細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，并通過添加過量胸苷，（向細(xì)胞培養(yǎng)液中加入過量胸苷（TdR），處于S期的細(xì)胞立刻被抑制，洗去TdR后可恢復(fù)正常分裂，而處于其它時期的細(xì)胞不受過量TdR影響）或營養(yǎng)缺陷培養(yǎng)方法獲取細(xì)胞周期同步、遺傳和代謝穩(wěn)定、來源單一的細(xì)胞群。將微生物菌體或其產(chǎn)物作為誘導(dǎo)子加入到培養(yǎng)基中，模擬了微生物侵害的迫害條件。
（3）由題可知X只在細(xì)胞生長停止后才能合成，所以丙圖符合。所以要獲得大量X的方法，是將細(xì)胞培養(yǎng)知穩(wěn)定期（即停止生長時期）一定時間后，通過分離提純獲得大量X。
（4）由題知，多種次生代謝產(chǎn)物在根部合成與積累，所以要對根進(jìn)行培養(yǎng)，為了方便進(jìn)行次生代謝物的收集，可以對根進(jìn)行水培。要大量獲得次生代謝物可以通過基因工程，將相關(guān)基因轉(zhuǎn)入酵母菌體內(nèi)，然后通過發(fā)酵工程獲得，基因工程的前提是要了解生物體合成某次生代謝產(chǎn)物的相關(guān)基因組成和基因表達(dá)過程。
9．（2023·河北）植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)是將單個細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行液體培養(yǎng)增殖的技術(shù)。下列敘述錯誤的是（ ）
A．植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的培養(yǎng)基須經(jīng)無菌處理
B．經(jīng)纖維素酶和果膠酶充分處理后，植物細(xì)胞團(tuán)分散為單個完整的懸浮細(xì)胞
C．為使懸浮細(xì)胞正常生長，培養(yǎng)基須保持適當(dāng)?shù)臏囟?、pH和滲透壓
D．利用懸浮培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)次生代謝物，可減少植物資源的消耗
9．B
【分析】植物細(xì)胞培養(yǎng)需要在無菌條件下進(jìn)行人工操作：保證水、無機(jī)鹽、碳源（常用蔗糖）、氮源（含氮有機(jī)物）、生長因子（維生素）等營養(yǎng)物質(zhì)的供應(yīng)；需要添加一些植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，主要是生長素和細(xì)胞分裂素；愈傷組織再分化到一定階段，形成葉綠體，能進(jìn)行光合作用，故需光照。
【詳解】A、為了避免雜菌污染，植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的培養(yǎng)基須經(jīng)無菌處理，A正確；
B、纖維素酶和果膠酶處理植物細(xì)胞獲得的是原生質(zhì)體，不能獲得單個完整的懸浮細(xì)胞，B錯誤；
C、細(xì)胞的正常生長需要適宜的條件，因此，為使懸浮細(xì)胞正常生長，培養(yǎng)基須保持適當(dāng)?shù)臏囟?、pH和滲透壓，C正確；
D、利用懸浮培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)次生代謝物，可減少植物資源的消耗，同樣也不受季節(jié)和天氣得限制，D正確。
故選B。
10．（2023·江蘇）研究者通過體細(xì)胞雜交技術(shù)，探索利用條斑紫菜和擬線紫菜培育雜種紫菜。下列相關(guān)敘述正確的是（ ）
A．從食用紫菜的動物消化道內(nèi)提取蛋白酶，用于去除細(xì)胞壁
B．原生質(zhì)體需在低滲溶液中長期保存，以防止過度失水而死亡
C．檢測原生質(zhì)體活力時可用苯酚品紅或甲紫溶液處理，活的原生質(zhì)體被染色
D．聚乙二醇促進(jìn)原生質(zhì)體融合后，以葉綠體顏色等差異為標(biāo)志可識別雜種細(xì)胞
10．D
【分析】植物體細(xì)胞雜交是指將不同來源的植物體細(xì)胞，在一定條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種新培育成新植物體的技術(shù)。
【詳解】A、從食用紫菜的動物消化道內(nèi)提取蛋白酶，不能用于去除細(xì)胞壁，因為紫菜細(xì)胞的細(xì)胞壁成分中沒有蛋白質(zhì)，A錯誤；
B、獲得的原生質(zhì)體若處在低滲溶液中，會吸水漲破，B錯誤；
C、檢測原生質(zhì)體活力時可用臺盼藍(lán)染色，活的原生質(zhì)體不能被染色，C錯誤；
D、聚乙二醇作為誘導(dǎo)劑可促進(jìn)原生質(zhì)體融合，對于雜種細(xì)胞可以葉綠體顏色等差異為標(biāo)志來進(jìn)行識別，D正確。
故選D。
11．（2023·山東）利用植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在離體條件下對單個細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行培養(yǎng)使其增殖，可獲得植物細(xì)胞的某些次生代謝物。下列說法正確的是（ ）
A．利用該技術(shù)可獲得某些無法通過化學(xué)合成途徑得到的產(chǎn)物
B．植物細(xì)胞體積小，故不能通過該技術(shù)進(jìn)行其產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)
C．次生代謝物是植物所必需的，但含量少，應(yīng)選擇產(chǎn)量高的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)
D．該技術(shù)主要利用促進(jìn)細(xì)胞生長的培養(yǎng)條件提高單個細(xì)胞中次生代謝物的含量
11．A
【分析】由于植物細(xì)胞的次生代謝物含量很低，從植物組織提取會大量破壞植物資源，有些產(chǎn)物又不能或難以通過化學(xué)合成途徑得到，因此人們期望利用植物細(xì)胞培養(yǎng)來獲得目標(biāo)產(chǎn)物，這個過程就是細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)。
【詳解】A、有些產(chǎn)物不能或難以通過化學(xué)合成途徑得到，故可利用該技術(shù)可獲得某些無法通過化學(xué)合成途徑得到的產(chǎn)物，A正確；
B、利用植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在離體條件下對單個細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行培養(yǎng)使其增殖，可獲得植物細(xì)胞的某些次生代謝物，故可通過該技術(shù)進(jìn)行植物細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)，B錯誤；
C、次生代謝物不是植物生長所必需的，其含量少，可以通過增加細(xì)胞的數(shù)量來增加次生代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量，C錯誤；
D、細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)主要是利用促進(jìn)細(xì)胞分裂的培養(yǎng)條件，提高了多個細(xì)胞中次生代謝物的含量，不能提高單個細(xì)胞中次生代謝物的含量，D錯誤。
故選A。
12．（2023·湖北）栽培稻甲產(chǎn)量高、品質(zhì)好，但每年只能收獲一次。野生稻乙種植一次可連續(xù)收獲多年，但產(chǎn)量低。中國科學(xué)家利用栽培稻甲和野生稻乙雜交，培育出兼具兩者優(yōu)點的品系丙，為全球作物育種提供了中國智慧。下列敘述錯誤的是（ ）
A．該成果體現(xiàn)了生物多樣性的間接價值
B．利用體細(xì)胞雜交技術(shù)也可培育出品系丙
C．該育種技術(shù)為全球農(nóng)業(yè)發(fā)展提供了新思路
D．品系丙的成功培育提示我們要注重野生種質(zhì)資源的保護(hù)
12．A
【分析】生物多樣性的直接價值提現(xiàn)在食用、藥用、文學(xué)藝術(shù)創(chuàng)作等，間接價值體現(xiàn)在調(diào)節(jié)生態(tài)系統(tǒng)的功能上，培育新品系不屬于間接價值，潛在價值指的是尚未發(fā)現(xiàn)的。植物體細(xì)胞雜交是以原生質(zhì)體培養(yǎng)為基礎(chǔ)，人工誘導(dǎo)使不同親本原生質(zhì)體融合，并通過對異核體的培養(yǎng)產(chǎn)生體細(xì)胞雜種的技術(shù)。體細(xì)胞雜交在轉(zhuǎn)移抗逆性狀，進(jìn)行作物改良，實現(xiàn)遠(yuǎn)緣重組，創(chuàng)造新型物種，以及定向轉(zhuǎn)移胞質(zhì)基因控制的性狀和利用配子一體細(xì)胞雜交產(chǎn)生三倍體植物上顯示出重要的應(yīng)用前景，并對豐富種質(zhì)、保持和促進(jìn)生物多樣性具有重大的意義。
【詳解】A、生物多樣性的直接價值提現(xiàn)在食用、藥用、文學(xué)藝術(shù)創(chuàng)作等，間接價值體現(xiàn)在調(diào)節(jié)生態(tài)系統(tǒng)的功能上，培育新品系不屬于間接價值，A錯誤；
B、植物體細(xì)胞雜交是以原生質(zhì)體培養(yǎng)為基礎(chǔ)，人工誘導(dǎo)使不同親本原生質(zhì)體融合，并通過對異核體的培養(yǎng)產(chǎn)生體細(xì)胞雜種的技術(shù)。植物體細(xì)胞雜交使遠(yuǎn)緣雜交不親和的植物有可能實現(xiàn)遺傳物質(zhì)重組，創(chuàng)造和培養(yǎng)植物新品種乃至新物種，尤其在多基因控制農(nóng)藝性狀的改良上具有較大優(yōu)勢。因此可以利用該方法培育品系丙，B正確；
C、該育種技術(shù)把栽培稻和野生稻雜交，為全球農(nóng)業(yè)發(fā)展提供了新思路，C正確；
D、品系丙的成功培育需要依靠野生稻的參與，提示我們要注重野生種質(zhì)資源的保護(hù)，D正確。
故選A。
13．（2023·廣東）人參皂苷是人參的主要活性成分?？蒲腥藛T分別誘導(dǎo)人參根與胡蘿卜根產(chǎn)生愈傷組織并進(jìn)行細(xì)胞融合，以提高人參皂苷的產(chǎn)率。下列敘述錯誤的是（ ）
A．細(xì)胞融合前應(yīng)去除細(xì)胞壁
B．高Ca2+—高pH溶液可促進(jìn)細(xì)胞融合
C．融合的細(xì)胞即為雜交細(xì)胞
D．雜交細(xì)胞可能具有生長快速的優(yōu)勢
13．C
【分析】植物體細(xì)胞雜交技術(shù)：就是將不同種的植物體細(xì)胞原生質(zhì)體在一定條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種細(xì)胞培育成完整植物體的技術(shù)。
【詳解】A、在細(xì)胞融合前，必須先用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁，再誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合，A正確；
B、人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合有物理法和化學(xué)法，用高Ca2+—高pH溶液可促進(jìn)細(xì)胞融合，B正確；
C、融合的細(xì)胞中有人參根-人參根細(xì)胞、人參根-胡蘿卜根細(xì)胞、胡蘿卜根-胡蘿卜根細(xì)胞，只有人參根-胡蘿卜根細(xì)胞才是雜交細(xì)胞，C錯誤；
D、雜交細(xì)胞含兩種細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，可能具有生長快速的優(yōu)勢，D正確。
故選C。
14．（2023·浙江）甲植物細(xì)胞核基因具有耐鹽堿效應(yīng)，乙植物細(xì)胞質(zhì)基因具有高產(chǎn)效應(yīng)。某研究小組用甲、乙兩種植物細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞雜交相關(guān)研究，基本過程包括獲取原生質(zhì)體、誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合、篩選融合細(xì)胞、雜種植株再生和鑒定，最終獲得高產(chǎn)耐鹽堿再生植株?；卮鹣铝袉栴}：
(1)根據(jù)研究目標(biāo)，在甲、乙兩種植物細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞雜交前，應(yīng)檢驗兩種植物的原生質(zhì)體是否具備 的能力。為了便于觀察細(xì)胞融合的狀況，通常用不同顏色的原生質(zhì)體進(jìn)行融合，若甲植物原生質(zhì)體采用幼苗的根為外植體，則乙植物可用幼苗的 為外植體。
(2)植物細(xì)胞壁的主要成分為 和果膠，在獲取原生質(zhì)體時，常采用相應(yīng)的酶進(jìn)行去壁處理。在原生質(zhì)體融合前，需對原生質(zhì)體進(jìn)行處理，分別使甲原生質(zhì)體和乙原生質(zhì)體的 失活。對處理后的原生質(zhì)體在顯微鏡下用 計數(shù)，確定原生質(zhì)體密度。兩種原生質(zhì)體1∶1混合后，通過添加適宜濃度的PEG進(jìn)行融合；一定時間后，加入過量的培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋，稀釋的目的是 。
(3)將融合原生質(zhì)體懸浮液和液態(tài)的瓊脂糖混合，在凝固前倒入培養(yǎng)皿，融合原生質(zhì)體分散固定在平板中，并獨立生長、分裂形成愈傷組織。同一塊愈傷組織所有細(xì)胞源于 。下列各項中能說明這些愈傷組織只能來自于雜種細(xì)胞的理由是哪幾項？
A．甲、乙原生質(zhì)體經(jīng)處理后失活，無法正常生長、分裂
B．同種融合的原生質(zhì)體因甲或乙原生質(zhì)體失活而不能生長、分裂
C．培養(yǎng)基含有抑制物質(zhì)，只有雜種細(xì)胞才能正常生長、分裂
D．雜種細(xì)胞由于結(jié)構(gòu)和功能完整可以生長、分裂
(4)愈傷組織經(jīng) 可形成胚狀體或芽。胚狀體能長出 ，直接發(fā)育形成再生植株。
(5)用PCR技術(shù)鑒定再生植株。已知甲植物細(xì)胞核具有特異性DNA序列a，乙植物細(xì)胞質(zhì)具有特異性DNA序列b；M1、M2為序列a的特異性引物，N1、N2為序列b的特異性引物。完善實驗思路：
Ⅰ．提取純化再生植株的總DNA，作為PCR擴(kuò)增的 。
Ⅱ．將DNA提取物加入PCR反應(yīng)體系， 為特異性引物，擴(kuò)增序列a；用同樣的方法擴(kuò)增序列b。
Ⅲ．得到的2個PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng) 后，若每個PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在凝膠中均出現(xiàn)了預(yù)期的 個條帶，則可初步確定再生植株來自于雜種細(xì)胞。
14．(1) 再生 葉
(2) 纖維素 細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核 血細(xì)胞計數(shù)板 降低PEG濃度，使其失去融合作用
(3) 同一個雜種融合原生質(zhì)體 ABD
(4) 再分化 根和芽
(5) 模板 M1、M2 凝膠電泳 1
【分析】1、植物組織培養(yǎng)過程：離體的植物組織經(jīng)過脫分化形成愈傷組織，經(jīng)過再分化愈傷組織又能重新分化為有結(jié)構(gòu)的組織和器官，最終形成完整的植株。
2、植物體細(xì)胞雜交可以克服植物有性雜交不親和性、打破物種之間的生殖隔離，操作過程包括:原生質(zhì)體制備、原生質(zhì)體融合、雜種細(xì)胞篩選、雜種細(xì)胞培養(yǎng)、雜種植株再生以及雜種植株鑒定等步驟。
【詳解】（1）在甲、乙兩種植物細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞雜交前，應(yīng)檢驗兩種植物的原生質(zhì)體是否具備再生的能力。為了便于觀察細(xì)胞融合的狀況，通常用不同顏色的原生質(zhì)體進(jìn)行融合，若甲植物原生質(zhì)體采用幼苗的根為外植體，則乙植物可用幼苗的葉為外植體。
（2）植物細(xì)胞壁的主要成分為纖維素和果膠，在獲取原生質(zhì)體時，常采用相應(yīng)的酶進(jìn)行去壁處理。甲植物細(xì)胞核基因具有耐鹽堿效應(yīng)，乙植物細(xì)胞質(zhì)基因具有高產(chǎn)效應(yīng)，在原生質(zhì)體融合前，需對原生質(zhì)體進(jìn)行處理，分別使甲原生質(zhì)體和乙原生質(zhì)體的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核失活，融合后具有甲植物的細(xì)胞核基因和乙植物的細(xì)胞質(zhì)基因。對處理后的原生質(zhì)體在顯微鏡下用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)，確定原生質(zhì)體密度。兩種原生質(zhì)體1∶1混合后，通過添加適宜濃度的PEG進(jìn)行融合；一定時間后，加入過量的培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋，稀釋的目的是降低PEG濃度,使其失去融合作用。
（3）將融合原生質(zhì)體懸浮液和液態(tài)的瓊脂糖混合，在凝固前倒入培養(yǎng)皿，融合原生質(zhì)體分散固定在平板中，并獨立生長、分裂形成愈傷組織。同一塊愈傷組織所有細(xì)胞源于同一個雜種融合的原生質(zhì)體。未融合的原生質(zhì)體因為細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核的失活，無法正常生長、分裂；同種融合的原生質(zhì)體也因為甲原生質(zhì)體細(xì)胞質(zhì)或乙原生質(zhì)體細(xì)胞核失活而不能生長、分裂；只有雜種細(xì)胞才具備有活性的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，可以生長、分裂，因此這些愈傷組織只能來自于雜種細(xì)胞。故選ABD。
（4）愈傷組織經(jīng)再分化可形成胚狀體或芽。胚狀體能長出根和芽，直接發(fā)育形成再生植株。
（5）Ⅰ．提取純化再生植株的總DNA，作為PCR擴(kuò)增的模板。
Ⅱ．將DNA提取物加入PCR反應(yīng)體系，M1、M2為特異性引物，擴(kuò)增序列a；用同樣的方法擴(kuò)增序列b。
Ⅲ．得到的2個PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳后，若每個PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在凝膠中均出現(xiàn)了預(yù)期的1個條帶，則可初步確定再生植株來自于雜種細(xì)胞。
15．（2022·重慶）植物體細(xì)胞通常被誘導(dǎo)為愈傷組織后才能表現(xiàn)全能性。研究發(fā)現(xiàn)，愈傷組織的中層細(xì)胞是根或芽再生的源頭干細(xì)胞，其在不同條件下，通過基因的特異性表達(dá)調(diào)控生長素、細(xì)胞分裂素的作用，表現(xiàn)出不同的效應(yīng)（見如表）。已知生長素的生理作用大于細(xì)胞分裂素時有利于根的再生；反之，有利于芽的再生。下列推論不合理的是（ ）
A．WOX5失活后，中層細(xì)胞會喪失干細(xì)胞特性
B．WOX5+PLT可能有利于愈傷組織中生長素的積累
C．ARR5促進(jìn)細(xì)胞分裂素積累或提高細(xì)胞對細(xì)胞分裂素的敏感性
D．體細(xì)胞中生長素和細(xì)胞分裂素的作用可能相互抑制
15．C
【分析】植物細(xì)胞一般具有全能性。在一定的激素和營養(yǎng)等條件的誘導(dǎo)下，已經(jīng)分化的細(xì)胞可以經(jīng)過脫分化，即失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能，轉(zhuǎn)變成未分化的細(xì)胞，進(jìn)而形成不定形的薄壁組織團(tuán)塊，這稱為愈傷組織。愈傷組織能重新分化成芽、根等器官，該過程稱為再分化。植物激素中生長素和細(xì)胞分裂素是啟動細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵激素。生長素的用量比細(xì)胞分裂素用量，比值高時，有利于根的分化、抑制芽的形成；比值低時，有利于芽的分化、抑制根的形成。比值適中時，促進(jìn)愈傷組織的形成。
【詳解】A、根據(jù)表格信息可知，WOX5能維持未分化狀態(tài)，使植物細(xì)胞保持分裂能力強(qiáng)、較大的全能性，若WOX5失活后，中層細(xì)胞會喪失干細(xì)胞分裂能力強(qiáng)、分化程度低的特性，A正確；
B、由題干信息“生長素的生理作用大于細(xì)胞分裂素時有利于根的再生”，再結(jié)合表格信息，WOX5+PLT可能誘導(dǎo)出根，可推測WOX5+PLT可能有利于愈傷組織中生長素的積累，B正確；
C、由題意可知，生長素的生理作用小于細(xì)胞分裂素時有利于芽的再生，而抑制ARR5能誘導(dǎo)出芽，可知ARR5被抑制時細(xì)胞分裂素較多，故可推測ARR5抑制細(xì)胞分裂素積累或降低細(xì)胞對細(xì)胞分裂素的敏感性，C錯誤；
D、由題干信息可知，出芽或出根都是生長素與細(xì)胞分裂素含量不均衡時才會發(fā)生，故可推測體細(xì)胞中生長素和細(xì)胞分裂素的作用可能相互抑制，D正確。
故選C。
16．（2022·遼寧）藍(lán)莓細(xì)胞富含花青素等多酚類化合物。在藍(lán)莓組織培養(yǎng)過程中，外植體切口處細(xì)胞被破壞，多酚類化合物被氧化成褐色醌類化合物，這一過程稱為褐變。褐變會引起細(xì)胞生長停滯甚至死亡，導(dǎo)致藍(lán)莓組織培養(yǎng)失敗。下列敘述錯誤的是（ ）
A．花青素通常存在于藍(lán)莓細(xì)胞的液泡中
B．適當(dāng)增加培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至新鮮培養(yǎng)基的頻率以減少褐變
C．在培養(yǎng)基中添加合適的抗氧化劑以減少褐變
D．宜選用藍(lán)莓成熟葉片為材料制備外植體
16．D
【分析】根據(jù)題干信息：在藍(lán)莓組織培養(yǎng)過程中，外植體切口處細(xì)胞被破壞，多酚類化合物被氧化成褐色醌類化合物，這一過程稱為褐變。減少褐變的措施有：減少氧化劑的濃度，如勤換培養(yǎng)基，或添加抗氧化劑。在植物組織培養(yǎng)的過程中，一般選用代謝旺盛、再生能力強(qiáng)的器官或組織為材料制備外植體。
【詳解】A、液泡中含有糖類、無機(jī)鹽、色素和蛋白質(zhì)等，其中的色素是指水溶性色素，如花青素，A正確；
B、適當(dāng)增加培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至新鮮培養(yǎng)基的頻率可減少代謝積累的氧化劑的濃度，從而減少褐變，B正確；
C、根據(jù)題干信息：在藍(lán)莓組織培養(yǎng)過程中，外植體切口處細(xì)胞被破壞，多酚類化合物被氧化成褐色醌類化合物，這一過程稱為褐變，可知在培養(yǎng)基中添加合適的抗氧化劑以減少褐變，C正確；
D、一般選用代謝旺盛、再生能力強(qiáng)的器官或組織為材料制備外植體，D錯誤。
故選D。
17．（2022·浙江）下列關(guān)于菊花組織培養(yǎng)的敘述，正確的是（ ）
A．用自然生長的莖進(jìn)行組培須用適宜濃度的乙醇和次氯酸鈉的混合液消毒
B．培養(yǎng)瓶用專用封口膜封口可防止外界雜菌侵入并阻止瓶內(nèi)外的氣體交換
C．組培苗鍛煉時采用蛭石作為栽培基質(zhì)的原因是蛭石帶菌量低且營養(yǎng)豐富
D．不帶葉片的菊花幼莖切段可以通過器官發(fā)生的途徑形成完整的菊花植株
17．D
【分析】植物組織培養(yǎng)技術(shù)：1、過程：離體的植物組織，器官或細(xì)胞（外植體）→愈傷組織→胚狀體→植株（新植體）．2、原理：植物細(xì)胞的全能性．3、條件：①細(xì)胞離體和適宜的外界條件（如適宜溫度、適時的光照、pH和無菌環(huán)境等）；②一定的營養(yǎng)（無機(jī)、有機(jī)成分）和植物激素（生長素和細(xì)胞分裂素）。
【詳解】A、 自然生長莖段的消毒屬于外植體消毒，先用70%酒精，再用無菌水清洗，再用5%次氯酸鈉消毒處理，最后再用無菌水清洗，A錯誤；
B、培養(yǎng)瓶用專用封口膜封口的目的是防止雜菌污染，并不影響氣體交換，B錯誤；
C、組培苗鍛煉時采用蛭石作為栽培基質(zhì)的原因是蛭石比較松軟，持水性也較好，有利于幼苗的生根和葉片的生長，C錯誤；
D、不帶葉片的菊花莖的切段可通過植物組織培養(yǎng)分化出芽和根這種器官發(fā)生的途徑形成完整的菊花植株，D正確。
故選D。
18．（2022·浙江）農(nóng)作物秸稈的回收利用方式很多，其中之一是將秸稈碎化后作為食用菌的栽培基質(zhì)。碎化秸稈中纖維所起的作用，相當(dāng)于植物組織培養(yǎng)中固體培養(yǎng)基的（ ）
A．瓊脂+蔗糖B．蔗糖+激素
C．激素+無機(jī)鹽D．無機(jī)鹽+瓊脂
18．A
【分析】植物組織培養(yǎng)基的主要成分是無機(jī)營養(yǎng)物（主要由大量元素和微量元素兩部分組成）、有機(jī)物（維生素、蔗糖、瓊脂等）和生長調(diào)節(jié)物質(zhì)（植物生長素類、細(xì)胞分裂素、赤霉素等）。培養(yǎng)基中的碳水化合物通常是蔗糖，作為培養(yǎng)基內(nèi)的碳源和能源外，對維持培養(yǎng)基的滲透壓也起重要作用。培養(yǎng)基中添加了瓊脂，主要是作為培養(yǎng)基的支持物，使培養(yǎng)基呈固體狀態(tài)，而成為固體培養(yǎng)基。
秸稈是食用菌栽培的主要基質(zhì),其中的纖維素和木質(zhì)素在食用菌菌絲生長過程中大量降解,秸稈栽培食用菌是秸稈利用的最佳途徑。
【詳解】據(jù)題干的信息，“秸稈碎化后作為食用菌的栽培基質(zhì)”，秸稈中的纖維素在食用菌菌絲生長過程中大量降解，提供碳源和能源，這相當(dāng)于植物組織培養(yǎng)基中添加的蔗糖；秸稈中的纖維素是固體，可以作為培養(yǎng)基的支持物，使培養(yǎng)基呈固體狀態(tài)，這相當(dāng)于植物組織培養(yǎng)基中添加的瓊脂。
故選A。
考點02 動物細(xì)胞工程
19．（2024·吉林）從小鼠胚胎中分離獲取胚胎成纖維細(xì)胞進(jìn)行貼壁培養(yǎng)，在傳代后的不同時間點檢測細(xì)胞數(shù)目，結(jié)果如圖。下列敘述正確的是（ ）
A．傳代培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿需密封防止污染
B．選?、俚募?xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)比②更合理
C．直接用離心法收集細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)
D．細(xì)胞增長進(jìn)入平臺期可能與細(xì)胞密度過大有關(guān)
19．D
【分析】動物細(xì)胞培養(yǎng)的流程：取動物組織塊（動物胚胎或幼齡動物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶處理分散成單個細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶處理分散成單個細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)。動物細(xì)胞培養(yǎng)需要的條件有：①無菌、無毒的環(huán)境；②營養(yǎng)；③溫度和pH；④氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2；動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)主要應(yīng)用在：制備病毒疫苗、制備單克隆抗體、檢測有毒物質(zhì)等。
【詳解】A、傳代培養(yǎng)時需要營造無菌、無毒以及95%空氣+5%CO2的氣體環(huán)境，而非密封，A錯誤；
B、選取②的細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)比①更合理，②時細(xì)胞增長開始變得緩慢，B錯誤；
C、對于貼壁生長的細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)時，先需要用胰蛋白酶等處理，使之分散為單個細(xì)胞，然后再用離心法收集，C錯誤；
D、細(xì)胞增長進(jìn)入平臺期可能與細(xì)胞密度過大、細(xì)胞間產(chǎn)生接觸抑制有關(guān)，D正確。
故選D。
20．（2024·浙江）某動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，細(xì)胞貼壁生長至接觸抑制時，需分裝培養(yǎng)，實驗操作過程如圖。
下列敘述錯誤的是（ ）
A．①加消化液的目的是使細(xì)胞與瓶壁分離
B．②加培養(yǎng)液的目的是促進(jìn)細(xì)胞增殖
C．③分裝時需調(diào)整到合適的細(xì)胞密度
D．整個過程需要在無菌、無毒條件下進(jìn)行
20．B
【分析】動物細(xì)胞培養(yǎng)條件：（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物。（2）營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)。（3）溫度和PH：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4。（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO2（維持培養(yǎng)液的PH）。
【詳解】A、①加消化液的目的是使細(xì)胞與瓶壁分離，A正確；
B、②加培養(yǎng)液，多次加培養(yǎng)液先洗去殘留的消化酶，然后終止消化液的消化作用，并對細(xì)胞加以稀釋，B錯誤；
C、③分裝時需調(diào)整到合適的細(xì)胞密度，因為若密度過大細(xì)胞直接仍存在接觸抑制，C正確；
D、動物細(xì)胞培養(yǎng)需要無菌無毒環(huán)境，因此整個過程需要在無菌、無毒條件下進(jìn)行，D正確。
故選B。
21．（2024·江西）某病毒顆粒表面有一特征性的大分子結(jié)構(gòu)蛋白S（含有多個不同的抗原決定基，每一個抗原決定基能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生一種抗體）。為了建立一種靈敏、高效檢測S蛋白的方法，研究人員采用雜交瘤技術(shù)制備了抗-S單克隆抗體（如圖）。下列說法正確的是（ ）
A．利用膠原蛋白酶處理，可分散貼壁生長的骨髓瘤細(xì)胞
B．制備的單克隆抗體A和單克隆抗體B是相同的單克隆抗體
C．用于生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞可傳代培養(yǎng)，但不能凍存
D．單克隆抗體A和單克隆抗體B都能夠特異性識別S蛋白
21．AD
【分析】單克隆抗體的制備：用特定的抗原對小鼠進(jìn)行免疫，并從該小鼠的脾中得到能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞，將多種B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合，利用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選：在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長。對上述經(jīng)選擇培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞。將抗體檢測呈陽性的雜交瘤細(xì)胞在體外條件下大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取大量的單克隆抗體。
【詳解】A、膠原蛋白酶可以催化分解細(xì)胞外的膠原蛋白，因此利用膠原蛋白酶處理，可分散貼壁生長的骨髓瘤細(xì)胞，A正確；
B、由于蛋白S含有多個不同的抗原決定基，每一個抗原決定基能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生一種抗體，單克隆抗體A和單克隆抗體B來自不同的雜交瘤細(xì)胞，因此制備的單克隆抗體A和單克隆抗體B不是相同的單克隆抗體，B錯誤；
C、用于生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞可傳代培養(yǎng)，也可以冷凍保存，C錯誤；
D、單克隆抗體A和單克隆抗體B都來自篩選出的雜交瘤細(xì)胞，因此都能夠特異性識別S蛋白上的抗原決定簇，D正確。
故選AD。
22．（2024·湖北）糖尿病是危害人類健康的主要疾病之一?；謴?fù)功能性胰島B細(xì)胞總量是治療糖尿病的重要策略。我國學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，向患有糖尿病的小鼠注射胰高血糖素受體單克隆抗體（mAb），可以促進(jìn)胰島A細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)少數(shù)胰島A細(xì)胞向胰島B細(xì)胞轉(zhuǎn)化，促進(jìn)功能性胰島B細(xì)胞再生。根據(jù)上述實驗結(jié)果，下列敘述錯誤的是（ ）
A．mAb的制備可能涉及細(xì)胞融合技術(shù)
B．注射mAb可降低胰腺分泌胰高血糖素的量
C．mAb和胰高血糖素均能與胰高血糖素受體特異性結(jié)合
D．胰高血糖素主要通過促進(jìn)肝糖原分解和非糖物質(zhì)轉(zhuǎn)化為糖，升高血糖水平
22．B
【分析】血糖調(diào)節(jié)是神經(jīng)調(diào)節(jié)和體液調(diào)節(jié)共同作用的結(jié)果。胰島素是唯一降血糖的激素，胰高血糖素和腎上腺素是升血糖的激素。血糖平衡調(diào)節(jié)：由胰島A細(xì)胞分泌胰高血糖素（分布在胰島外圍）提高血糖濃度，促進(jìn)血糖來源；由胰島B細(xì)胞分泌胰島素（分布在胰島內(nèi)）降低血糖濃度，促進(jìn)血糖去路，減少血糖來源。
【詳解】A、單克隆抗體的制備涉及細(xì)胞融合技術(shù)和動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，mAb屬于單克隆抗體，其制備可能涉及細(xì)胞融合技術(shù)，A正確；
B、單克隆抗體（mAb），可以促進(jìn)胰島A細(xì)胞增殖；而胰島A細(xì)胞可分泌胰高血糖素，可見注射mAb可提高胰島A細(xì)胞分泌胰高血糖素的量，B錯誤；
C、題干信息，mAb是胰高血糖素受體單克隆抗體，可見Ab和胰高血糖素均能與胰高血糖素受體特異性結(jié)合，C正確；
D、胰高血糖素主要作用于肝，促進(jìn)肝糖原分解成葡萄糖進(jìn)入血液，促進(jìn)非糖物質(zhì)轉(zhuǎn)變成糖，使血糖濃度回升到正常水平，D正確。
故選B。
23．（2024·全國）某種病原體的蛋白質(zhì)A可被吞噬細(xì)胞攝入和處理，誘導(dǎo)特異性免疫?；卮鹣铝袉栴}。
(1)病原體感染誘導(dǎo)產(chǎn)生漿細(xì)胞的特異性免疫方式屬于 。
(2)溶酶體中的蛋白酶可將蛋白質(zhì)A的一條肽鏈水解成多個片段，蛋白酶切斷的化學(xué)鍵是 。
(3)不采用熒光素標(biāo)記蛋白質(zhì)A，設(shè)計實驗驗證蛋白質(zhì)A的片段可出現(xiàn)在吞噬細(xì)胞的溶酶體中，簡要寫出實驗思路和預(yù)期結(jié)果 。
23．(1)體液免疫
(2)肽鍵
(3)實驗思路：以蛋白質(zhì)A的片段為抗原，制備單克隆抗體，利用差速離心法將吞噬細(xì)胞中的溶酶體分離，并提取溶酶體中的蛋白質(zhì)，利用抗原抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測
預(yù)期結(jié)果：出現(xiàn)雜交帶，表明蛋白質(zhì)A的片段可出現(xiàn)在吞噬細(xì)胞的溶酶體中
【分析】非特異性免疫（先天性免疫）：第一道防線：皮膚、黏膜等；第二道防線：體液中的殺菌物質(zhì)和吞噬細(xì)胞；特異性免疫（獲得性免疫）第三道防線：由免疫器官和免疫細(xì)胞借助血液循環(huán)和淋巴循環(huán)組成。
【詳解】（1）特異性免疫包括體液免疫和細(xì)胞免疫。病原體感染誘導(dǎo)產(chǎn)生漿細(xì)胞的特異性免疫方式屬于體液免疫。
（2）蛋白酶可將蛋白質(zhì)A的一條肽鏈水解成多個片段，因此蛋白酶切斷的是肽鍵。
（3）為驗證蛋白質(zhì)A的片段可出現(xiàn)在吞噬細(xì)胞的溶酶體中，可以蛋白質(zhì)A的片段為抗原，制備單克隆抗體，利用差速離心法將吞噬細(xì)胞中的溶酶體分離，并提取溶酶體中的蛋白質(zhì)，利用抗原抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測，若出現(xiàn)雜交帶，則表明蛋白質(zhì)A的片段可出現(xiàn)在吞噬細(xì)胞的溶酶體中。
24．（2024·廣東）某些腫瘤細(xì)胞表面的PD-L1與細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）表面的PD-1結(jié)合能抑制CTL的免疫活性，導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸。免疫檢查點療法使用單克隆抗體阻斷PD-Ll和PD-1的結(jié)合，可恢復(fù)CTL的活性，用于腫瘤治療。為進(jìn)一步提高療效，研究者以黑色素瘤模型小鼠為材料，開展該療法與化療的聯(lián)合治療研究。部分結(jié)果見圖。
回答下列問題：
(1)據(jù)圖分析， 療法的治療效果最佳，推測其原因是 。
(2)黑色素瘤細(xì)胞能分泌吸引某類細(xì)胞靠近的細(xì)胞因子CXCL1.為使CTL響應(yīng)此信號，可在CTL中導(dǎo)入 基因后再將其回輸小鼠體內(nèi)，從而進(jìn)一步提高治療效果。該基因的表達(dá)產(chǎn)物應(yīng)定位于CTL的 （答位置）且基因?qū)牒蟛挥绊慍TL 的能力。
(3)某興趣小組基于現(xiàn)有抗體—藥物偶聯(lián)物的思路提出了兩種藥物設(shè)計方案。方案一：將化療藥物與PD-L1 單克隆抗體結(jié)合在一起。方案二：將化療藥物與PD-1單克隆抗體結(jié)合在一起。你認(rèn)為方案 （填“一”或“二”）可行，理由是 。
24．(1) 聯(lián)合 該療法既發(fā)揮了化療藥物的作用，也增加了活化的CTL數(shù)量
(2) CXCL1受體 (細(xì)胞膜)表面 殺傷腫瘤細(xì)胞
(3)一 方案一的偶聯(lián)物既可阻斷PD-1與PD-L1 結(jié)合，恢復(fù)CTL的活性，又使化療藥物靶向腫瘤細(xì)胞
【分析】根據(jù)題圖可知，腫瘤細(xì)胞表面的PD-L1通過與T細(xì)胞表面的PD-1蛋白特異性結(jié)合，抑制T細(xì)胞增殖分化，從而逃避免疫系統(tǒng)的攻擊。
【詳解】（1）由圖a可知，聯(lián)合療法腫瘤體積最小，再根據(jù)圖b可知，采用聯(lián)合療法時活化的CTL的數(shù)目明顯高于免疫檢查點療法和化療等，原因是該療法既發(fā)揮了化療藥物的作用，也增加了活化的CTL數(shù)量。
（2）由于黑色素瘤細(xì)胞能分泌吸引某類細(xì)胞靠近的細(xì)胞因子CXCL1，故要進(jìn)一步提高治療效果，可以在CTL中導(dǎo)入細(xì)胞因子CXCL1受體基因，使CTL表達(dá)出細(xì)胞因子CXCL1受體，達(dá)到治療的效果。由于細(xì)胞因子是一類肽類化合物，故該基因的表達(dá)產(chǎn)物應(yīng)定位于CTL的細(xì)胞膜上，且基因?qū)牒蟛挥绊慍TL殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。
（3）某腫瘤細(xì)胞表面的PD-L1與細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）表面的PD-1結(jié)合能抑制CTL的免疫活性，故應(yīng)該將化療藥物與PD-L1 單克隆抗體結(jié)合在一起，即方案一的偶聯(lián)物既可阻斷PD-1與PD-L1 結(jié)合，恢復(fù)CTL的活性，又使化療藥物靶向腫瘤細(xì)胞。
25．（2023·遼寧）大量懸浮培養(yǎng)產(chǎn)流感病毒的單克隆細(xì)胞，可用于流感疫苗的生產(chǎn)。下列敘述錯誤的是（ ）
A．懸浮培養(yǎng)單克隆細(xì)胞可有效避免接觸抑制
B．用于培養(yǎng)單克隆細(xì)胞的培養(yǎng)基通常需加血清
C．當(dāng)病毒達(dá)到一定數(shù)量時會影響細(xì)胞的增殖
D．培養(yǎng)基pH不會影響單克隆細(xì)胞的病毒產(chǎn)量
25．D
【分析】培養(yǎng)動物細(xì)胞使用合成培養(yǎng)基時需要加入血清等一些天然成分，必須保證環(huán)境是無菌、無毒的，培養(yǎng)液還需要定期更換。O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。細(xì)胞貼附在培養(yǎng)瓶的瓶壁上稱為細(xì)胞貼壁，貼壁細(xì)胞在生長增殖時會發(fā)生接觸抑制的現(xiàn)象。
【詳解】A、懸浮培養(yǎng)單克隆細(xì)胞，可以保證足夠的氣體交換，通過振蕩或轉(zhuǎn)動裝置使細(xì)胞始終處于分散懸浮于培養(yǎng)液內(nèi)，可有效避免接觸抑制，A正確；
B、由于細(xì)胞的生長是比較復(fù)雜的過程，血清中含有一些必須的因子，用于培養(yǎng)單克隆細(xì)胞的培養(yǎng)基通常需加血清，B正確；
C、病毒借助于細(xì)胞進(jìn)行繁殖，利用了活細(xì)胞的物質(zhì)、能量、酶等，當(dāng)病毒達(dá)到一定數(shù)量時細(xì)胞的生命活動受到影響，會影響細(xì)胞的增殖，C正確；
D、細(xì)胞的正常生命活動需要適宜的pH，培養(yǎng)基pH會影響細(xì)胞代謝，進(jìn)而影響單克隆細(xì)胞的病毒產(chǎn)量，D錯誤。
故選D。
26．（2023·天津）多種方法獲得的早期胚胎，均需移植給受體 才能獲得后代。下圖列舉了幾項技術(shù)成果。
下列敘述正確的是 （ ）
A．經(jīng)胚胎移植產(chǎn)生的后代與受體均保持一致
B．①需獲得MII期的去核卵母細(xì)胞
C．②能大幅改良動物性狀
D．③可通過②技術(shù)實現(xiàn)擴(kuò)大化生產(chǎn)，①②可通過③技術(shù)實現(xiàn)性狀改良
26．D
【分析】動物核移植是將動物的一個細(xì)胞的細(xì)胞核移入一個已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個胚胎最終發(fā)育為動物。
【詳解】A、子代動物的遺傳性狀與供體基本一致，但與受體無關(guān)，A錯誤；
B、核移植過程中需要處于MII中期的去核卵母細(xì)胞，而過程1是培育試管動物，需要培育到適宜時期（桑葚胚或囊胚等時期）進(jìn)行胚胎移植，B錯誤；
C、過程2得到的是克隆動物，是無性生殖的一種，不能大幅改良動物性狀，C錯誤；
D、過程2克隆技術(shù)可得到大量同種個體，為過程3提供了量產(chǎn)方式；過程3是轉(zhuǎn)基因技術(shù)，轉(zhuǎn)基因可導(dǎo)入外源優(yōu)良基因，為過程1、2提供了改良性狀的方式，D正確。
故選D。
27．（2023·江蘇）我國科學(xué)家利用猴胚胎干細(xì)胞首次創(chuàng)造了人工“猴胚胎”，研究流程如圖所示。下列相關(guān)敘述正確的有（ ）
A．猴的成纖維細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞功能不同，但具有相同的基因組
B．囊胚細(xì)胞②③都由細(xì)胞①分裂分化形成，但表達(dá)的基因都不同
C．移植前細(xì)胞和囊胚的培養(yǎng)都要放在充滿CO?的培養(yǎng)箱中進(jìn)行
D．移植后胚胎的發(fā)育受母體激素影響，也影響母體激素分泌
27．AD
【分析】胚胎干細(xì)胞具有全能性，利用猴胚胎干細(xì)胞首次創(chuàng)造了人工“猴胚胎”，是利用了胚胎干細(xì)胞的全能性。
【詳解】A、由于猴的成纖維細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞是由猴胚胎干細(xì)胞分裂分化而來，雖然功能不同，但基因組相同，A正確；
B、囊胚細(xì)胞②③都由細(xì)胞①分裂分化形成，但表達(dá)的基因有部分不同，但有部分基因所有細(xì)胞都表達(dá)（如呼吸酶基因），B錯誤；
C、動物細(xì)胞培養(yǎng)和早期胚胎培養(yǎng)需要在95%空氣和5%二氧化碳的環(huán)境中培養(yǎng)，C錯誤；
D、胚胎移植后胚胎的發(fā)育受母體激素影響，也影響母體激素分泌，D正確。
故選AD。
28．（2023·北京）甲狀旁腺激素（PTH）水平是人類多種疾病的重要診斷指標(biāo)。研究者制備單克隆抗體用于快速檢測PTH，有關(guān)制備過程的敘述不正確的是（ ）
A．需要使用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
B．需要制備用PTH免疫的小鼠
C．利用抗原-抗體結(jié)合的原理篩選雜交瘤細(xì)胞
D．篩選能分泌多種抗體的單個雜交瘤細(xì)胞
28．D
【分析】單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。
【詳解】A、單克隆抗體制備過程中需要對骨髓瘤細(xì)胞等進(jìn)行培養(yǎng)，即需要使用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，A正確；
B、該操作的目的是制備單克隆抗體用于快速檢測PTH，故應(yīng)用PTH刺激小鼠，使其產(chǎn)生相應(yīng)的B細(xì)胞，B正確；
C、抗原與抗體的結(jié)合具有特異性，可利用抗原-抗體結(jié)合的原理篩選雜交瘤細(xì)胞，C正確；
D、由于一種B細(xì)胞經(jīng)分化形成漿細(xì)胞后通常只能產(chǎn)生一種抗體，故篩選出的單個雜交瘤細(xì)胞無法分泌多種抗體，D錯誤。
故選D。
29．（2023·湖北）某病毒對動物養(yǎng)殖業(yè)危害十分嚴(yán)重。我國學(xué)者擬以該病毒外殼蛋白A為抗原來制備單克隆抗體，以期快速檢測該病毒，其主要技術(shù)路線如圖所示。
回答下列問題：
(1)與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合前，已免疫的脾細(xì)胞（含漿細(xì)胞） （填“需要”或“不需要”）通過原代培養(yǎng)擴(kuò)大細(xì)胞數(shù)量；添加脂溶性物質(zhì)PEG可促進(jìn)細(xì)胞融合，該過程中PEG對細(xì)胞膜的作用是 。
(2)在雜交瘤細(xì)胞篩選過程中，常使用特定的選擇培養(yǎng)基（如HAT培養(yǎng)基），該培養(yǎng)基對 和 生長具有抑制作用。
(3)單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進(jìn)行雜交，其目的是 。
(4)構(gòu)建重組質(zhì)粒需要使用DNA連接酶。下列屬于DNA連接酶底物的是 。
29．(1) 不需要 使細(xì)胞接觸處的磷脂分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合
(2) 未融合的親本細(xì)胞 融合的具有同種核的細(xì)胞
(3)通過抗體檢測呈陽性來獲得分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞
(4)④
【分析】單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。
【詳解】（1）漿細(xì)胞是高度分化的細(xì)胞，不能增殖，所以不需要通過原代培養(yǎng)擴(kuò)大細(xì)胞數(shù)量。脂溶性物質(zhì)PEG可使細(xì)胞接觸處的磷脂分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。
（2）在雜交瘤細(xì)胞篩選過程中，用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長。
（3）單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進(jìn)行雜交，是運用了抗原-抗體雜交技術(shù)，抗體檢測呈陽性的細(xì)胞，即為所需的雜交瘤細(xì)胞。
（4）DNA連接酶能連接DNA片段，脫氧核苷酸的磷酸基團(tuán)位于5'端，-OH位于3'端，①②③脫氧核苷酸鏈的兩端基團(tuán)有誤；DNA連接酶能催化合成磷酸二酯鍵，即將一條脫氧核苷酸5'端的磷酸基團(tuán)與另一條脫氧核苷酸鏈的3'端的-OH相連，④符合題意。
故選④。
30．（2023·湖南）某些植物根際促生菌具有生物固氮、分解淀粉和抑制病原菌等作用?；卮鹣铝袉栴}：
(1)若從植物根際土壤中篩選分解淀粉的固氮細(xì)菌，培養(yǎng)基的主要營養(yǎng)物質(zhì)包括水和 。
(2)現(xiàn)從植物根際土壤中篩選出一株解淀粉芽孢桿菌H，其產(chǎn)生的抗菌肽抑菌效果見表。據(jù)表推測該抗菌肽對 的抑制效果較好，若要確定其有抑菌效果的最低濃度，需在 μg·mL-1濃度區(qū)間進(jìn)一步實驗。
注：“+”表示長菌，“-”表示未長菌。
(3)研究人員利用解淀粉芽孢桿菌H的淀粉酶編碼基因M構(gòu)建高效表達(dá)質(zhì)粒載體，轉(zhuǎn)入大腸桿菌成功構(gòu)建基因工程菌A。在利用A菌株發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶M過程中，傳代多次后，生產(chǎn)條件未變，但某子代菌株不再產(chǎn)生淀粉酶M。分析可能的原因是 （答出兩點即可）。
(4)研究人員通過肺上皮干細(xì)胞誘導(dǎo)生成肺類器官，可自組裝或與成熟細(xì)胞組裝成肺類裝配體，如圖所示。肺類裝配體培養(yǎng)需要滿足適宜的營養(yǎng)、溫度、滲透壓、pH以及 （答出兩點）等基本條件。肺類裝配體形成過程中是否運用了動物細(xì)胞融合技術(shù) （填“是”或“否”）。
(5)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）是一種耐藥菌，嚴(yán)重危害人類健康?？蒲腥藛T擬用MRSA感染肺類裝配體建立感染模型，來探究解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽是否對MRSA引起的肺炎有治療潛力。以下實驗材料中必備的是 。
①金黃色葡萄球菌感染的肺類裝配體 ②MRSA感染的肺類裝配體 ③解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽 ④生理鹽水 ⑤青霉素（抗金黃色葡萄球菌的藥物） ⑥萬古霉素（抗MRSA的藥物）
30．(1)無機(jī)鹽、淀粉
(2) 金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌 1.73~3.45
(3)淀粉酶編碼基因M發(fā)生突變；重組質(zhì)粒在大腸桿菌分裂過程中丟失
(4) 無菌、無毒環(huán)境，含95%空氣和5%CO2的氣體環(huán)境 否
(5)②③④⑥
【分析】動物培養(yǎng)的條件：
1、營養(yǎng)：在使用合成培養(yǎng)基時，通常需要加入血清等一些天然成分。
2、無菌、無毒的環(huán)境：對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行滅菌處理以及在無菌環(huán)境下進(jìn)行操作:定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝物積累對細(xì)胞自身造成危害。
3、適宜溫度、pH和滲透壓：哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)的溫度多為(36.5±0.5)℃；pH多為7.2~7.4；動物細(xì)胞培養(yǎng)還需要考慮滲透壓。
4、氣體環(huán)境：O2：細(xì)胞代謝所必需的；CO2：維持培養(yǎng)液pH。
【詳解】（1）由題意可知，根際促生菌具有固氮作用，可利用空氣中的氮氣作為氮源，因此用于篩選根際促生菌的培養(yǎng)基的主要營養(yǎng)物質(zhì)包括水、無機(jī)鹽和淀粉。
（2）由題表可知，在抗菌肽濃度為3.45-55.20 μg·mL-1范圍內(nèi)，金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌均不能生長，表明該抗菌肽對它們的抑菌效果較好；因為抗菌肽的濃度為1.73μg·mL-1時，它們均能生長，所以要確定抗菌肽抑菌效果的最低濃度，應(yīng)在1.73~3.45 μg·mL-1的濃度區(qū)間進(jìn)一步實驗。
（3）在利用A菌株發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶M過程中，傳代多次后，生產(chǎn)條件未變，但某子代菌株不再產(chǎn)生淀粉酶M，可能的原因是淀粉酶編碼基因M發(fā)生突變；或者是重組質(zhì)粒在大腸桿菌分裂過程中丟失。
（4）肺類裝配體培養(yǎng)需要滿足適宜的營養(yǎng)、溫度、滲透壓、pH以及無菌、無毒環(huán)境，含95%空氣和5%CO2的氣體環(huán)境等基本條件；由圖示可知，肺類裝配體形成的過程中沒有運用動物細(xì)胞融合技術(shù)，只涉及了細(xì)胞的分裂和分化等內(nèi)容。
（5）科研人員擬用MRSA感染肺類裝配體建立感染模型，來探究解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽是否對MRSA引起的肺炎有治療潛力，必備實驗材料為：②MRSA感染的肺類裝配體、 ③解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽、④生理鹽水（設(shè)置對照實驗使用）、 ⑥萬古霉素（抗MRSA的藥物，比較解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽的療效），故選②③④⑥。
31．（2023·浙江）賴氨酸是人體不能合成的必需氨基酸，而人類主要食物中的賴氨酸含量很低，利用生物技術(shù)可提高食物中賴氨酸含量?；卮鹣铝袉栴}：
(1)植物細(xì)胞合成的賴氨酸達(dá)到一定濃度時，能抑制合成過程中兩種關(guān)鍵酶的活性，導(dǎo)致賴氨酸含量維持在一定濃度水平，這種調(diào)節(jié)方式屬于 。根據(jù)這種調(diào)節(jié)方式，在培養(yǎng)基中添加 ，用于篩選經(jīng)人工誘變的植物懸浮細(xì)胞，可得到抗賴氨酸類似物的細(xì)胞突變體，通過培養(yǎng)獲得再生植株。
(2)隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)與動物細(xì)胞工程結(jié)合和發(fā)展，2011年我國首次利用轉(zhuǎn)基因和體細(xì)胞核移植技術(shù)成功培育了高產(chǎn)賴氨酸轉(zhuǎn)基因克隆奶牛。其基本流程為：
①構(gòu)建乳腺專一表達(dá)載體。隨著測序技術(shù)的發(fā)展，為獲取富含賴氨酸的酪蛋白基因（目的基因），可通過檢索 獲取其編碼序列，用化學(xué)合成法制備得到。再將獲得的目的基因與含有乳腺特異性啟動子的相應(yīng)載體連接，構(gòu)建出乳腺專一表達(dá)載體。
②表達(dá)載體轉(zhuǎn)入牛胚胎成纖維細(xì)胞（BEF）。將表達(dá)載體包裹到磷脂等構(gòu)成的脂質(zhì)體內(nèi)，與BEF膜發(fā)生 ，表達(dá)載體最終進(jìn)入細(xì)胞核，發(fā)生轉(zhuǎn)化。
③核移植。將轉(zhuǎn)基因的BEF作為核供體細(xì)胞，從牛卵巢獲取卵母細(xì)胞，經(jīng)體外培養(yǎng)及去核后作為 。將兩種細(xì)胞進(jìn)行電融合，電融合的作用除了促進(jìn)細(xì)胞融合，同時起到了 重組細(xì)胞發(fā)育的作用。
④重組細(xì)胞的體外培養(yǎng)及胚胎移植。重組細(xì)胞體外培養(yǎng)至 ，植入代孕母牛子宮角，直至小牛出生。
⑤檢測。DNA水平檢測：利用PCR技術(shù)，以非轉(zhuǎn)基因牛耳組織細(xì)胞作為陰性對照，以 為陽性對照，檢測到轉(zhuǎn)基因牛耳組織細(xì)胞中存在目的基因。RNA水平檢測：從非轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因牛耳組織細(xì)胞，提取總RNA，對總RNA進(jìn)行 處理，以去除DNA污染，再經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA，并以此為 ，利用特定引物擴(kuò)增目的基因片段。結(jié)果顯示目的基因在轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，而不在牛耳組織細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，原因是什么？ 。
31．(1) 負(fù)反饋調(diào)節(jié) 過量賴氨酸類似物
(2) 基因數(shù)據(jù)庫 融合 核受體細(xì)胞 激活 早期囊胚 轉(zhuǎn)基因BEF DNA酶 PCR的模板 構(gòu)建的表達(dá)載體只含有乳腺特異性啟動子，只能在乳腺細(xì)胞中啟動轉(zhuǎn)錄，而在牛耳細(xì)胞中不能表達(dá)。
【分析】負(fù)反饋調(diào)節(jié)是指在一個系統(tǒng)中，系統(tǒng)工作的效果，反過來又作為信息調(diào)節(jié)該系統(tǒng)的工作，并且使系統(tǒng)工作的效果減弱或受到限制，有助于系統(tǒng)保持穩(wěn)定?；蚬こ碳夹g(shù)的基本步驟：(1)目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等；(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法；(4)目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因-DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA-分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗原抗體雜交技術(shù).個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。
【詳解】（1）負(fù)反饋調(diào)節(jié)是指在一個系統(tǒng)中，系統(tǒng)工作的效果，反過來又作為信息調(diào)節(jié)該系統(tǒng)的工作，并且使系統(tǒng)工作的效果減弱或受到限制，有助于系統(tǒng)保持穩(wěn)定。植物細(xì)胞合成的賴氨酸達(dá)到一定濃度時，能抑制合成過程中兩種關(guān)鍵酶的活性，導(dǎo)致賴氨酸含量維持在一定濃度水平，這種調(diào)節(jié)方式屬于負(fù)反饋調(diào)節(jié)。如果想得到抗賴氨酸類似物的細(xì)胞突變體可在培養(yǎng)基中添加過量賴氨酸類似物。
（2）①從基因數(shù)據(jù)庫獲取獲取目的基因編碼序列，用化學(xué)合成法制備可得到目的基因。
②表達(dá)載體包裹到磷脂等構(gòu)成的脂質(zhì)體內(nèi)，根據(jù)細(xì)胞膜成分，其與BEF膜發(fā)生融合。
③去核的卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞，其處于減數(shù)第二次分裂中期，因為卵母細(xì)胞中含有促使細(xì)胞核表達(dá)全能性的物質(zhì)和營養(yǎng)條件。電融合的作用除了促進(jìn)細(xì)胞融合，同時起到了激活重組細(xì)胞發(fā)育的作用。
④胚胎發(fā)育到適宜階段可取出向受體移植。牛、羊一般要培養(yǎng)到桑椹胚或囊胚階段；植入代孕母牛子宮角，直至小牛出生。
⑤陽性對照：按照當(dāng)前實驗方案一定能得到正面預(yù)期結(jié)果的對照實驗。陽性對照是已知的對測量結(jié)果有影響的因素，目的是確定實驗程序無誤。陰性對照和陽性對照相反，按照當(dāng)前的實驗方案一定不能得到正面預(yù)期結(jié)果的對照實驗。排除未知變量對實驗產(chǎn)生的不利影響。本實驗以非轉(zhuǎn)基因牛耳組織細(xì)胞作為陰性對照，為了檢測到轉(zhuǎn)基因牛耳組織細(xì)胞中存在目的基因。應(yīng)該以含有目的基因的牛耳組織細(xì)胞為陽性對照。為了除去DNA污染，可以使用DNA酶使其水解。經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA，并以此為PCR的模板進(jìn)行擴(kuò)增。目的基因在轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，而不在牛耳組織細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，原因是構(gòu)建的表達(dá)載體只含有乳腺特異性啟動子，只能在乳腺細(xì)胞中啟動轉(zhuǎn)錄，而在牛耳細(xì)胞中不能表達(dá)。
32．（2022·湖北）某興趣小組開展小鼠原代神經(jīng)元培養(yǎng)的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其培養(yǎng)的原代神經(jīng)元生長緩慢，其原因不可能的是（ ）
A．實驗材料取自小鼠胚胎的腦組織
B．為了防止污染將培養(yǎng)瓶瓶口密封
C．血清經(jīng)過高溫處理后加入培養(yǎng)基
D．所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性
32．A
【分析】小鼠原代神經(jīng)元培養(yǎng)屬于動物細(xì)胞培養(yǎng)，需要在無菌無毒和培養(yǎng)液提供類似內(nèi)環(huán)境的條件下進(jìn)行。
【詳解】A、小鼠胚胎腦組織中含有豐富的原代神經(jīng)元，細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，不會造成生長緩慢，A符合題意；
B、培養(yǎng)瓶瓶口密封會使培養(yǎng)液中缺氧，影響細(xì)胞有氧呼吸，造成供能不足，可能使細(xì)胞生長緩慢，B不符合題意；
C、血清經(jīng)過高溫處理后，其中活性成分變性，失去原有功能，細(xì)胞生存環(huán)境嚴(yán)重惡化，可能使細(xì)胞生長緩慢，C不符合題意；
D、小鼠內(nèi)環(huán)境為弱堿性，所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性，使細(xì)胞生存環(huán)境惡劣，可能造成細(xì)胞生長緩慢，D不符合題意。
故選A。
33．（2022·山東）如圖所示，將由2種不同的抗原分別制備的單克隆抗體分子，在體外解偶聯(lián)后重新偶聯(lián)可制備雙特異性抗體，簡稱雙抗。下列說法錯誤的是（ ）
A．雙抗可同時與2種抗原結(jié)合
B．利用雙抗可以將蛋白類藥物運送至靶細(xì)胞
C．篩選雙抗時需使用制備單克隆抗體時所使用的2種抗原
D．同時注射2種抗原可刺激B細(xì)胞分化為產(chǎn)雙抗的漿細(xì)胞
33．D
【分析】單克隆抗體的制備過程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。
【詳解】A、根據(jù)抗原和抗體發(fā)生特異性結(jié)合的原理推測，雙抗可同時與2種抗原結(jié)合，A正確；
B、 根據(jù)抗原與抗體能夠發(fā)生特異性結(jié)合的特性，利用雙抗可以將蛋白類藥物運送至靶細(xì)胞，從而使藥物發(fā)揮相應(yīng)的作用，B正確；
C、在兩種不同的抗原刺激下，B細(xì)胞增殖、分化產(chǎn)生不同的漿細(xì)胞分泌形成兩種抗體，因此，篩選雙抗時需使用制備單克隆抗體時所使用的2種抗原來進(jìn)行抗原-抗體檢測，從而實現(xiàn)對雙抗的篩選，C正確；
D、 同時注射2種抗原可刺激B細(xì)胞分化形成不同的漿細(xì)胞，而不是分化成產(chǎn)雙抗的漿細(xì)胞，D錯誤。
故選D。
34．（2022·江蘇）下圖表示利用細(xì)胞融合技術(shù)進(jìn)行基因定位的過程，在人-鼠雜種細(xì)胞中人的染色體會以隨機(jī)方式丟失，通過分析基因產(chǎn)物進(jìn)行基因定位?，F(xiàn)檢測細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中人的4種酶活性，只有Ⅱ具有芳烴羥化酶活性，只有Ⅲ具有胸苷激酶活性，Ⅰ、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脫氫酶活性。下列相關(guān)敘述正確的有（ ）
A．加入滅活仙臺病毒的作用是促進(jìn)細(xì)胞融合
B．細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分別為人-人、人-鼠、鼠-鼠融合細(xì)胞
C．芳烴羥化酶基因位于2號染色體上，乳酸脫氫酶基因位于11號染色上
D．胸苷激酶基因位于17號染色體上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色體上
34．ACD
【分析】分析題干信息：Ⅰ保留X、11號染色體，Ⅱ保留2、11號染色體，具有芳烴羥化酶活性，Ⅲ，保留X、11、17號染色體具有胸苷激酶活性，Ⅰ、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脫氫酶活性，所以支配芳烴羥化酶合成的基因位于2號染色體上，支配胸苷激酶合成的基因位于17號染色體上；支配磷酸甘油酸激合成的基因位于X號染色體上；支配乳酸脫氫酶合成的基因位于11號染色體上。
【詳解】A、動物細(xì)胞融合過程中，可以利用滅活的仙臺病毒或聚乙二醇作誘導(dǎo)劑促進(jìn)細(xì)胞融合，A正確；
B、細(xì)胞Ⅲ中保留了人的X、11、17號染色體，故不會是鼠-鼠融合細(xì)胞，B錯誤；
CD、根據(jù)分析可知，芳烴羥化酶基因位于2號染色體上，乳酸脫氫酶基因位于11號染色上， 胸苷激酶基因位于17號染色體上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色體上，CD正確。
故選ACD。
35．（2022·遼寧）某抗膜蛋白治療性抗體藥物研發(fā)過程中，需要表達(dá)N蛋白胞外段，制備相應(yīng)的單克隆抗體，增加其對N蛋白胞外段特異性結(jié)合的能力。
Ⅰ．N蛋白胞外段抗原制備，流程如圖1
(1)構(gòu)建重組慢病毒質(zhì)粒時，選用氨芐青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因，目的是 。用脂質(zhì)體將重組慢病毒質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒導(dǎo)入病毒包裝細(xì)胞，質(zhì)粒被包在脂質(zhì)體 （填“雙分子層中”或“兩層磷脂分子之間”）。
(2)質(zhì)粒在包裝細(xì)胞內(nèi)組裝出由 組成的慢病毒，用慢病毒感染海拉細(xì)胞進(jìn)而表達(dá)并分離、純化N蛋白胞外段。
Ⅱ．N蛋白胞外段單克隆抗體制備，流程如圖2
(3)用N蛋白胞外段作為抗原對小鼠進(jìn)行免疫后，取小鼠脾組織用 酶處理，制成細(xì)胞懸液，置于含有混合氣體的 中培養(yǎng)，離心收集小鼠的B淋巴細(xì)胞，與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。
(4)用選擇性培養(yǎng)基對融合后的細(xì)胞進(jìn)行篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，將其接種到96孔板，進(jìn)行 培養(yǎng)。用 技術(shù)檢測每孔中的抗體，篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，經(jīng)體外擴(kuò)大培養(yǎng)，收集 ，提取單克隆抗體。
(5)利用N蛋白胞外段抗體與藥物結(jié)合，形成 ，實現(xiàn)特異性治療。
35．(1) 檢測目的基因是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞 雙分子層中
(2)蛋白質(zhì)外殼和含N蛋白胞外段基因的核酸
(3) 胰蛋白酶或膠原蛋白 CO2培養(yǎng)箱
(4) 克隆化 抗原抗體雜交 細(xì)胞培養(yǎng)液
(5)抗體-藥物偶聯(lián)物/ADC
【分析】1、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。
2、兩次篩選：①篩選得到雜交瘤細(xì)胞（去掉未雜交的細(xì)胞以及自身融合的細(xì)胞）；②篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群。
3、雜交瘤細(xì)胞的特點：既能大量增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體。
【詳解】（1）構(gòu)建重組慢病毒質(zhì)粒時，為檢測目的基因是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞，常選用氨芐青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因。重組慢病毒質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒導(dǎo)入病毒包裝細(xì)胞需要依賴膜融合，故質(zhì)粒被包在脂質(zhì)體雙分子層中（即磷脂雙分子層）。
（2）由于目的基因為N蛋白胞外段基因，在包裝細(xì)胞內(nèi)組裝出由蛋白質(zhì)外殼和含有N蛋白胞外段基因的核酸組成的慢病毒，用慢病毒感染海拉細(xì)胞進(jìn)而表達(dá)并分離、純化N蛋白胞外段。
（3）進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)時，需要取小鼠脾組織用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，制成細(xì)胞懸液，置于含有95%空氣和5%的CO2混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
（4）用選擇性培養(yǎng)基對融合后的細(xì)胞進(jìn)行篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，將其接種到96孔板，進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。用抗原抗體雜交技術(shù)檢測每孔中的抗體，篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，經(jīng)體外擴(kuò)大培養(yǎng)，收集細(xì)胞培養(yǎng)液，提取單克隆抗體。
（5）利用N蛋白胞外段抗體與藥物結(jié)合，形成抗體-藥物偶聯(lián)物ADC，實現(xiàn)特異性治療。
36．（2022·海南）以我國科學(xué)家為主的科研團(tuán)隊將OSNL（即4個基因Oct4／Sx2／Nang／Lin28A的縮寫）導(dǎo)入黑羽雞胚成纖維細(xì)胞（CEFs），誘導(dǎo)其重編程為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS），再誘導(dǎo)iPS分化為誘導(dǎo)原始生殖細(xì)胞（iPGCs），然后將iPGCs注射到孵化2.5天的白羽雞胚血管中，最終獲得具有黑羽雞遺傳特性的后代，實驗流程如圖?；卮鹣铝袉栴}。
(1)CEFs是從孵化9天的黑羽雞胚中分離獲得的，為了獲得單細(xì)胞懸液，雞胚組織剪碎后需用 處理。動物細(xì)胞培養(yǎng)通常需要在合成培養(yǎng)基中添加 等天然成分，以滿足細(xì)胞對某些細(xì)胞因子的需求。
(2)體外獲取OSNL的方法有 （答出1種即可）。若要在CEFs中表達(dá)外源基因的蛋白，需構(gòu)建基因表達(dá)載體，載體中除含有目的基因和標(biāo)記基因外，還須有啟動子和 等。啟動子是 識別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動 。
(3)iPS細(xì)胞和iPGCs細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能不同的根本原因是 。
(4)誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)與體細(xì)胞核移植技術(shù)的主要區(qū)別是 。
(5)該實驗流程中用到的生物技術(shù)有 （答出2點即可）。
36．(1) 胰蛋白酶、膠原蛋白酶等 動物血清
(2)PCR技術(shù)、人工合成法 終止子 RNA聚合酶 目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終表達(dá)出所需要的蛋白質(zhì)
(3)基因的選擇性表達(dá)
(4)誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)是將已經(jīng)分化的細(xì)胞誘導(dǎo)為類似胚胎干細(xì)胞的一種細(xì)胞（iPS），再誘導(dǎo)iPS分化為誘導(dǎo)原始生殖細(xì)胞（iPGCs）的技術(shù)，而細(xì)胞核移植技術(shù)是將動物的一個細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞內(nèi)，使這個重組的細(xì)胞發(fā)育為胚胎，繼而發(fā)育為動物個體的技術(shù)
(5)基因工程、動物細(xì)胞培養(yǎng)
【分析】胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）具有自我更新及多向分化潛能，為發(fā)育學(xué)、遺傳學(xué)、人類疾病的發(fā)病機(jī)理與替代治療等研究提供非常寶貴的資源。iPS細(xì)胞技術(shù)是借助基因?qū)爰夹g(shù)將某些特定因子基因?qū)雱游锘蛉说捏w細(xì)胞，以將其重編程或誘導(dǎo)為ES細(xì)胞樣的細(xì)胞，即iPS細(xì)胞。
【詳解】（1）動物細(xì)胞培養(yǎng)時，雞胚組織剪碎后需用胰蛋白酶處理，以獲得單細(xì)胞懸液。動物細(xì)胞培養(yǎng)時一般需要在合成培養(yǎng)基中添加血清等天然成分，以滿足細(xì)胞對某些細(xì)胞因子的需求。
（2）OSNL為目的基因，體外獲取目的基因可通過PCR技術(shù)大量擴(kuò)增或通過人工合成法來合成?；虮磉_(dá)載體中除目的基因外，還必須有啟動子、終止子、復(fù)制原點和標(biāo)記基因等。啟動子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質(zhì)。
（3）據(jù)圖可知，由iPS細(xì)胞誘導(dǎo)形成iPGCs細(xì)胞經(jīng)過了細(xì)胞分化，該過程遺傳物質(zhì)沒有改變，導(dǎo)致其細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能不同的根本原因是基因的選擇性表達(dá)。
（4）誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)是將已經(jīng)分化的細(xì)胞誘導(dǎo)為類似胚胎干細(xì)胞的一種細(xì)胞（iPS），再誘導(dǎo)iPS分化為誘導(dǎo)原始生殖細(xì)胞（iPGCs）的技術(shù)，而細(xì)胞核移植技術(shù)是將動物的一個細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞內(nèi)，使這個重組的細(xì)胞發(fā)育為胚胎，繼而發(fā)育為動物個體的技術(shù)。
（5）由圖可知，該實驗流程中將OSNL基因?qū)腚u胚成纖維細(xì)胞利用了基因工程技術(shù)，誘導(dǎo)多能干細(xì)胞過程利用了動物細(xì)胞培養(yǎng)的技術(shù)。
37．（2022·福建）美西螈具有很強(qiáng)的再生能力。研究表明，美西螈的巨噬細(xì)胞在斷肢再生的早期起重要作用。為研究巨噬細(xì)胞的作用機(jī)制，科研人員制備了抗巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志蛋白CD14的單克隆抗體，具體方法如下。回答下列問題：
（一）基因工程抗原的制備
(1)根據(jù)美西螈CD14基因的核苷酸序列，合成引物，利用PCR擴(kuò)增CD14片段。已知DNA聚合酶催化引物的3’—OH與加入的脫氧核苷酸的5’—P形成磷酸二酯鍵，則新合成鏈的延伸方向是 （填“ 5’→3’ ”或“ 3’→5’ ”）。
(2)載體和CD14片段的酶切位點及相應(yīng)的酶切 抗性基因序列如圖1所示。用Xh I和Sal 1分別酶切CD14和載體后連接，CD14接入載體時會形成正向連接和反向連接的兩種重組DNA．可進(jìn)一步用這兩種限制酶對CD14的連接方向進(jìn)行鑒定，理由是 。培養(yǎng)能表達(dá)CD14蛋白的大腸桿菌，分離純化目的蛋白。
（二）抗CD14單克隆抗體的制備流程如圖2所示：
(3)步驟①和步驟⑤分別向小鼠注射 和 。
(4)步驟②所用的SP2/0細(xì)胞的生長特點是 。
(5)吸取③中的上清液到④的培養(yǎng)孔中，根據(jù)抗原—抗體雜交原理，需加入 ① 進(jìn)行專一抗體檢測，檢測過程發(fā)現(xiàn)有些雜交瘤細(xì)胞不能分泌抗CD14抗體，原因是 ② 。
(6)步驟⑥從 中提取到大量的抗CD14抗體，用于檢測巨噬細(xì)胞。
37．(1)5'→3'
(2)正向連接的重組DNA有這兩種酶切位點（限制酶的識別序列）；而反向連接的重組DNA會形成新的序列，沒有這兩種酶的酶切位點（沒有限制酶的識別序列）
(3) CD14蛋白/CD14抗原 分泌抗CD14抗體的雜交瘤細(xì)胞
(4)能在體外無限增殖
(5) CD14蛋白 參與形成雜交瘤細(xì)胞的B淋巴細(xì)胞種類多，有的不能分泌抗CD14抗體
(6)小鼠腹水
【分析】1、PCR原理：在解旋酶作用下，打開DNA雙鏈，每條DNA單鏈作為母鏈，以4種游離脫氧核苷酸為原料，合成子鏈，在引物作用下，DNA聚合酶從引物3'端開始延伸DNA鏈，即DNA的合成方向是從子鏈的5'端自3'端延伸的。實際上就是在體外模擬細(xì)胞內(nèi)DNA的復(fù)制過程。DNA的復(fù)制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈。
2、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。
【詳解】（1）PCR擴(kuò)增時，DNA聚合酶催化引物的3'-OH與加入的脫氧核苷酸的5'-P形成磷酸二酯鍵，因此新鏈合成的方向是從5'→3'。
（2）可進(jìn)一步用限制酶XhⅠ和SalⅠ對CD14的連接方向進(jìn)行鑒定，是因為正向連接的重組DNA有這兩種酶切位點（限制酶的識別序列）；而反向連接的重組DNA會形成新的序列，沒有這兩種酶的酶切位點（沒有限制酶的識別序列）。
（3）步驟①是注射特定抗原，針對本實驗?zāi)康目芍@得抗CD14單克隆抗體，故應(yīng)該注射CD14蛋白/CD14抗原；步驟⑤是將分泌抗CD14抗體的雜交瘤細(xì)胞注入小鼠體內(nèi)培養(yǎng)，以獲得大量單克隆抗體。
（4）步驟②所用的SP2/0細(xì)胞是骨髓瘤細(xì)胞，特點是能在體外無限增殖。
（5）根據(jù)抗原—抗體雜交原理，應(yīng)該用CD14蛋白檢測其中是否含抗CD14蛋白的抗體。因為形成雜交瘤細(xì)胞的B淋巴細(xì)胞種類很多，因此有些雜交瘤細(xì)胞不能分泌抗CD14抗體。
（6）從制備單克隆抗體的流程可知，將雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔后，最終要從小鼠的腹水中提取抗CD14抗體。
考點03 胚胎工程
38．（2024·北京）我國科學(xué)家體外誘導(dǎo)食蟹猴胚胎干細(xì)胞，形成了類似囊胚的結(jié)構(gòu)（類囊胚），為研究靈長類胚胎發(fā)育機(jī)制提供了實驗體系（如圖）。相關(guān)敘述錯誤的是（ ）
A．實驗證實食蟹猴胚胎干細(xì)胞具有分化潛能
B．實驗過程中使用的培養(yǎng)基含有糖類
C．類囊胚的獲得利用了核移植技術(shù)
D．可借助胚胎移植技術(shù)研究類囊胚的后續(xù)發(fā)育
38．C
【分析】該過程利用胚胎干細(xì)胞創(chuàng)造出了類胚胎結(jié)構(gòu)，并在體外培養(yǎng)至原腸胚時期，將類囊胚移植進(jìn)雄猴體內(nèi)后，成功引起了雌猴的早期妊娠反應(yīng)有可能會產(chǎn)生新生個體，該過程屬于無性生殖。
【詳解】A、體外誘導(dǎo)食蟹猴胚胎干細(xì)胞， 形成了類似囊胚的結(jié)構(gòu)(類囊胚)，證實了食蟹猴胚胎干細(xì)胞具有分化潛能，A正確；
B、實驗過程中使用的培養(yǎng)基需含有糖類，糖類可為細(xì)胞培養(yǎng)提供能源物質(zhì)，B正確；
C、類囊胚的獲得利用了動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，并沒有進(jìn)行核移植，C錯誤；
D、可借助胚胎移植技術(shù)將類囊胚移植到相應(yīng)的雌性受體中繼續(xù)胚胎發(fā)育，從而可以用來研究類囊胚的后續(xù)發(fā)育，D正確。
故選C。
39．（2024·甘肅）甘加藏羊是甘肅高寒牧區(qū)的優(yōu)良品種，是季節(jié)性發(fā)情動物，每年產(chǎn)羔一次，每胎一羔，繁殖率較低。為促進(jìn)畜牧業(yè)發(fā)展，研究人員通過體外受精、胚胎移植等胚胎工程技術(shù)提高藏羊的繁殖率，流程如下圖。下列敘述錯誤的是（ ）
A．藏羊甲需用促性腺激素處理使其卵巢卵泡發(fā)育和超數(shù)排卵
B．藏羊乙的獲能精子能與剛采集到的藏羊甲的卵母細(xì)胞受精
C．受體藏羊丙需和藏羊甲進(jìn)行同期發(fā)情處理
D．后代丁的遺傳物質(zhì)來源于藏羊甲和藏羊乙
39．B
【分析】胚胎移植基本程序主要包括：1、對供、受體的選擇和處理。2、配種或人工授精。3、對胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存。4、對胚胎進(jìn)行移植。5、移植后的檢查。
【詳解】A、促性腺激素能作用于卵巢，藏羊甲需用促性腺激素處理使其卵巢卵泡發(fā)育和超數(shù)排卵，A正確；
B、從卵巢中剛采集的卵母細(xì)胞需培養(yǎng)成熟（減數(shù)第二次分裂中期）后才可與獲能的精子進(jìn)行體外受精，B錯誤；
C、在胚胎移植前要對接受胚胎的受體和供體進(jìn)行同期發(fā)情處理，使受體的生理狀況相同，因此受體藏羊丙需和藏羊甲進(jìn)行同期發(fā)情處理，C正確；
D、后代丁是由藏羊甲的卵細(xì)胞和藏羊乙的精子結(jié)合形成的受精卵發(fā)育而來，因此后代丁的遺傳物質(zhì)來源于藏羊甲和藏羊乙，D正確。
故選B。
40．（2024·湖北）研究者探究不同濃度的雌激素甲對牛的卵母細(xì)胞和受精卵在體外發(fā)育的影響，實驗結(jié)果如下表所示。根據(jù)實驗數(shù)據(jù)，下列敘述錯誤的是（ ）
A．實驗結(jié)果說明甲抑制卵裂過程
B．甲濃度過高抑制第一極體的排出
C．添加1μg/mL的甲可提高受精后胚胎發(fā)育能力
D．本實驗中，以第一極體的排出作為卵母細(xì)胞成熟的判斷標(biāo)準(zhǔn)
40．A
【分析】據(jù)表可知，較對照組（甲濃度為0μg/mL）而言，甲濃度增大均使卵母細(xì)胞數(shù)量增多，對與第一機(jī)體排出個數(shù)、成熟率、卵裂數(shù)、卵裂率都呈先增加，后下降的趨勢。
【詳解】A、由表可知，甲低濃度時促進(jìn)卵裂，高濃度時抑制卵裂，A錯誤；
B、對照組第一極體排出個數(shù)為70個，甲濃度過高（＞10μg/mL，第一極體排出個數(shù)＜70）抑制第一極體的排出，B正確；
C、添加1μg/mL的甲，卵裂數(shù)增大，即該條件可提高受精后胚胎發(fā)育能力，C正確；
D、卵母細(xì)胞成熟的判斷標(biāo)準(zhǔn)是第一極體的排出，D正確。
故選A。
41．（2024·湖北）波爾山羊享有“世界山羊之王”的美譽(yù)，具有生長速度快、肉質(zhì)細(xì)嫩等優(yōu)點。生產(chǎn)中常采用胚胎工程技術(shù)快速繁殖波爾山羊。下列敘述錯誤的是（ ）
A．選擇遺傳性狀優(yōu)良的健康波爾母山羊進(jìn)行超數(shù)排卵處理
B．胚胎移植前可采集滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行遺傳學(xué)檢測
C．普通品質(zhì)的健康杜泊母綿羊不適合作為受體
D．生產(chǎn)中對提供精子的波爾公山羊無需篩選
41．D
【分析】胚胎移植的基本程序主要包括：①對供、受體的選擇和處理。選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體，有健康的體質(zhì)和正常繁殖能力的受體，供體和受體是同一物種。并用激素進(jìn)行同期發(fā)情處理，用促性腺激素對供體母牛做超數(shù)排卵處理。②配種或人工授精。③對胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存。配種或輸精后第7天，用特制的沖卵裝置，把供體母牛子宮內(nèi)的胚胎沖洗出來（也叫沖卵）。對胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查，此時的胚胎應(yīng)發(fā)育到桑葚或胚囊胚階段。直接向受體移植或放入-196℃的液氮中保存。④對胚胎進(jìn)行移植。⑤移植后的檢查。對受體母牛進(jìn)行是否妊娠的檢查。
【詳解】A、選擇遺傳性狀優(yōu)良的健康波爾母山羊作為供體，進(jìn)行超數(shù)排卵處理，A正確；
B、胚胎移植前，采集部分滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行遺傳學(xué)檢測，B正確；
C、作為受體的杜泊母山羊只需具備健康的體質(zhì)和正常繁殖能力即可，但山羊和綿羊是不同的物種，具有生殖隔離，不能將山羊的胚胎移植到綿羊子宮發(fā)育，即普通品質(zhì)的健康杜泊母綿羊不適合作為受體，C正確；
D、生產(chǎn)中需選擇品質(zhì)良好的波爾公山羊提供精子，D錯誤。
故選D。
42．（2023·廣東）科學(xué)家采用體外受精技術(shù)獲得紫羚羊胚胎，并將其移植到長角羚羊體內(nèi)，使后者成功妊娠并產(chǎn)仔，該工作有助于恢復(fù)瀕危紫羚羊的種群數(shù)量。此過程不涉及的操作是（ ）
A．超數(shù)排卵B．精子獲能處理
C．細(xì)胞核移植D．胚胎培養(yǎng)
42．C
【分析】體外受精主要包括：卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng)、精子的采集和獲能、受精。
（1）卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng)①主要方法是：用促性腺激素處理，使其超數(shù)排卵，然后，從輸卵管中沖取卵子。②第二種方法：從已屠宰母畜的卵巢中采集卵母細(xì)胞或直接從活體動物的卵巢中吸取卵母細(xì)胞。
（2）精子的采集和獲能①收集精子的方法：假陰道法、手握法和電刺激法；②對精子進(jìn)行獲能處理：包括培養(yǎng)法和化學(xué)誘導(dǎo)法。
（3）受精：在獲能溶液或?qū)Ｓ玫氖芫芤褐型瓿墒芫^程。
【詳解】由題干信息可知，該過程通過體外受精獲得胚胎，再通過胚胎移植，使長角羚羊成功妊娠并產(chǎn)仔，因此需要進(jìn)行超數(shù)排卵、精子獲能處理，并對獲得的受精卵進(jìn)行胚胎培養(yǎng)；由于該過程為有性生殖，因此不需要涉及細(xì)胞核移植，所以C正確、ABD錯誤。
故選C。
43．（2023·浙江）在家畜優(yōu)良品種培育過程中常涉及胚胎工程的相關(guān)技術(shù)。下列敘述錯誤的是（ ）
A．經(jīng)獲能處理的精子才能用于體外受精
B．受精卵經(jīng)體外培養(yǎng)可獲得早期胚胎
C．胚胎分割技術(shù)提高了移植胚胎的成活率
D．胚胎移植前需對受體進(jìn)行選擇和處理
43．C
【分析】胚胎移植的基本程序主要包括：①對供、受體的選擇和處理（選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體，有健康的體質(zhì)和正常繁殖能力的受體，用激素進(jìn)行同期發(fā)情處理，用促性腺激素對供體母牛做超數(shù)排卵處理）；②配種或人工授精；③對胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存（對胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查，此時的胚胎應(yīng)發(fā)育到桑葚胚或囊胚階段）；④對胚胎進(jìn)行移植；⑤移植后的檢查。
【詳解】A、精子需要經(jīng)過獲能處理才具有受精能力，A正確；
B、受精卵經(jīng)體外培養(yǎng)可獲得早期胚胎，B正確；
C、胚胎分割可以獲得多個胚胎，分割次數(shù)越多，分割后胚胎成活的概率越小，C錯誤；
D、胚胎移植前，需選擇健康體質(zhì)和正常繁殖能力的受體且進(jìn)行同期發(fā)情處理，D正確。
故選C。
44．（2022·江蘇）下列關(guān)于動物細(xì)胞工程和胚胎工程的敘述正確的是（ ）
A．通常采用培養(yǎng)法或化學(xué)誘導(dǎo)法使精子獲得能量后進(jìn)行體外受精
B．哺乳動物體外受精后的早期胚胎培養(yǎng)不需要額外提供營養(yǎng)物質(zhì)
C．克隆牛技術(shù)涉及體細(xì)胞核移植、動物細(xì)胞培養(yǎng)、胚胎移植等過程
D．將小鼠桑葚胚分割成2等份獲得同卵雙胎的過程屬于有性生殖
44．C
【分析】哺乳動物的體外受精主要包括卵母細(xì)胞的采集、精子的獲取和受精等幾個主要步驟。胚胎分割是指采用機(jī)械方法將早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等，經(jīng)移植獲得同卵雙胎或多胎的技術(shù)。來自同一胚胎的后代具有相同的遺傳物質(zhì)，因此，胚胎分割可以看做動物無性繁殖或克隆的方法之一。
【詳解】A、精子獲能是獲得受精的能力，不是獲得能量，A錯誤；
B、哺乳動物體外受精后的早期胚胎培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，例如需要有糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然成分，B錯誤；
C、克隆牛技術(shù)涉及體細(xì)胞核移植、動物細(xì)胞培養(yǎng)、胚胎移植等過程，C正確；
D、胚胎分割可以看做動物無性繁殖或克隆的方法，D錯誤。
故選C。
45．（2022·北京）將黑色小鼠囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)部分細(xì)胞注射到白色小鼠囊胚腔中，接受注射的囊胚發(fā)育為黑白相間的小鼠（Mc）。據(jù)此分析，下列敘述錯誤的是（ ）
A．獲得Mc的生物技術(shù)屬于核移植
B．Mc表皮中有兩種基因型的細(xì)胞
C．注射入的細(xì)胞會分化成Mc的多種組織
D．將接受注射的囊胚均分為二，可發(fā)育成兩只幼鼠
45．A
【分析】胚胎發(fā)育的過程：①卵裂期：細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，數(shù)量增加，胚胎總體積不增加；②桑葚胚：32個細(xì)胞左右的胚胎（之前所有細(xì)胞都能發(fā)育成完整胚胎的潛能屬全能細(xì)胞）；③囊胚：細(xì)胞開始分化，其中個體較大的細(xì)胞叫內(nèi)細(xì)胞團(tuán)將來發(fā)育成胎兒的各種組織；而滋養(yǎng)層細(xì)胞將來發(fā)育成胎膜和胎盤；胚胎內(nèi)部逐漸出現(xiàn)囊胚腔（注：囊胚的擴(kuò)大會導(dǎo)致透明帶的破裂胚胎伸展出來，這一過程叫孵化）﹔④原腸胚：內(nèi)細(xì)胞團(tuán)表層形成外胚層，下方細(xì)胞形成內(nèi)胚層，由內(nèi)胚層包圍的囊腔叫原腸腔。
【詳解】A、內(nèi)細(xì)胞團(tuán)是已經(jīng)分化的細(xì)胞組成，獲得Mc的生物技術(shù)并未利用核移植技術(shù)，A錯誤；
B、接受注射的囊胚發(fā)育為黑白相間的小鼠，說明Mc表皮中有兩種基因型的細(xì)胞，B正確；
C、內(nèi)細(xì)胞團(tuán)能發(fā)育成胎兒的各種組織，注射的細(xì)胞來自黑色小鼠的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，會分化成Mc的多種組織，C正確；
D、利用胚胎分割技術(shù)將接受注射的囊胚均分為二，可發(fā)育成兩只幼鼠，D正確。
故選A。
46．（2022·全國）某牧場引進(jìn)一只產(chǎn)肉性能優(yōu)異的良種公羊，為了在短時間內(nèi)獲得具有該公羊優(yōu)良性狀的大量后代，該牧場利用胚胎工程技術(shù)進(jìn)行了相關(guān)操作。回答下列問題，
(1)為了實現(xiàn)體外受精需要采集良種公羊的精液，精液保存的方法是 。在體外受精前要對精子進(jìn)行獲能處理，其原因是 ；精子體外獲能可采用化學(xué)誘導(dǎo)法，誘導(dǎo)精子獲能的藥物是 （答出1點即可）。利用該公羊的精子進(jìn)行體外受精需要發(fā)育到一定時期的卵母細(xì)胞，因為卵母細(xì)胞達(dá)到 時才具備與精子受精的能力。
(2)體外受精獲得的受精卵發(fā)育成囊胚需要在特定的培養(yǎng)液中進(jìn)行，該培養(yǎng)液的成分除無機(jī)鹽、激素、血清外，還含的營養(yǎng)成分有 （答出3點即可）等。將培養(yǎng)好的良種囊胚保存?zhèn)溆谩?br>(3)請以保存的囊胚和相應(yīng)數(shù)量的非繁殖期受體母羊為材料進(jìn)行操作，以獲得具有該公羊優(yōu)良性狀的后代。主要的操作步驟是 。
46．(1) 冷凍保存 剛排出的精子必須在雌性生殖道內(nèi)發(fā)生相應(yīng)生理變化后才能獲得受精能力 肝素或鈣離子載體A23187 MⅡ期
(2)維生素、氨基酸、核苷酸
(3)對受體母羊進(jìn)行發(fā)情處理，合適的時間，將保存的囊胚移植入受體母羊的子宮
【分析】試管動物技術(shù)是指通過人工操作使卵子和精子在體外條件下成熟和受精，并通過培養(yǎng)發(fā)育為早期胚胎后，再經(jīng)移植后產(chǎn)生后代的技術(shù)。
【詳解】（1）精液可以冷凍保存，使用前再將精液解凍離心分離。剛排出的精子必須在雌性生殖道內(nèi)發(fā)生相應(yīng)生理變化后才能獲得受精能力，故在體外受精前要對精子進(jìn)行獲能處理。通常采用的體外獲能方法有培養(yǎng)法和化學(xué)誘導(dǎo)法，化學(xué)誘導(dǎo)法是將精子放在一定濃度的肝素或鈣離子載體A23187溶液中，用化學(xué)藥物誘導(dǎo)精子獲能。卵母細(xì)胞需要培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期（MⅡ中期）才能具備與精子受精的能力。
（2）進(jìn)行早期胚胎培養(yǎng)的培養(yǎng)液中，除了無機(jī)鹽、激素、血清外，還含有維生素、氨基酸、核苷酸等。
（3）要利用保存的囊胚和相應(yīng)數(shù)量的非繁殖期受體母羊為材料，獲得具有該公羊優(yōu)良性狀的后代，主要是利用胚胎移植技術(shù)，即對受體母羊進(jìn)行發(fā)情處理，將保存的囊胚進(jìn)行胚胎移植，對受體母羊進(jìn)行是否妊娠的檢查，一段時間后受體母羊產(chǎn)下具有該公羊優(yōu)良性狀的后代。
考點04 生物技術(shù)的安全性和倫理問題
47．（2024·浙江）關(guān)于生物技術(shù)的安全與倫理問題在我國相關(guān)法規(guī)明令禁止的是（ ）
A．試管動物的培育B．轉(zhuǎn)基因食品的生產(chǎn)
C．治療性克隆的研究D．生物武器的發(fā)展和生產(chǎn)
47．D
【分析】1、我國政府一再重申 四不原則:不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實驗。
2、2010年，在第65 屆聯(lián)合國大會上，我國政府重申支持《禁止生物武器公約》的宗旨和目標(biāo)，全面、嚴(yán)格履行公約義務(wù)，支持不斷加強(qiáng)公約的約束力，并主張全面禁止和徹底銷毀生物武器等各類大規(guī)模殺傷性武器。
【詳解】A、試管動物的培育屬于胚胎工程，沒有禁止，A正確；
B、我過目前不反對轉(zhuǎn)基因的食品的生產(chǎn)，B正確；
C、中國政府禁止生殖性克隆，支持治療性克隆，C正確；
D、生物武器致病能力強(qiáng)、攻擊范圍廣，世界范圍內(nèi)應(yīng)全面禁止生物武器，D錯誤。
故選D。
48．（2023·浙江）以哺乳動物為研究對象的生物技術(shù)已獲得了長足的進(jìn)步。對生物技術(shù)應(yīng)用于人類，在安全與倫理方面有不同的觀點，下列敘述正確的是（ ）
A．試管嬰兒技術(shù)應(yīng)全面禁止
B．治療性克隆不需要監(jiān)控和審查
C．生殖性克隆不存在倫理道德方面的風(fēng)險
D．我國不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實驗
48．D
【分析】生殖性克隆是指通過克隆技術(shù)產(chǎn)生獨立生存的新個體。治療性克隆是指利用克隆技術(shù)產(chǎn)生特定的細(xì)胞、組織和器官，用它們來修復(fù)或替代受損的細(xì)胞、組織和器官，從而達(dá)到治療疾病的目的。兩者有著本質(zhì)的區(qū)別。
【詳解】A、我國政府一再重申四不原則：不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實驗，但治療性克隆可在有效監(jiān)控和嚴(yán)格審查下實施，A錯誤；
B、我國政府同樣重視治療性克隆所涉及的倫理問題，主張對治療性克隆進(jìn)行有效監(jiān)控和嚴(yán)格審查，B錯誤；
C、生殖性克隆人沖擊了現(xiàn)有的一些有關(guān)婚姻、家庭和兩性關(guān)系的倫理道德觀念，C錯誤；
D、我國政府一再重申四不原則：不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實驗，D正確。
故選D。
考點
三年考情（2022-2024）
命題趨勢
考點1 植物細(xì)胞工程
2024·甘肅、北京、安徽、湖北、吉林、浙江、山東
2023·河北、江蘇、山東、湖北、廣東、浙江
2022·重慶、遼寧、浙江
從近三年全國各地的高考試題來看，常出現(xiàn)的考點是植物細(xì)胞工程、動物細(xì)胞工程、胚胎工程和生物技術(shù)的安全性和倫理問題，此部分內(nèi)容集中在非選擇題部分考察。
考點2 動物細(xì)胞工程
2024·吉林、浙江、江西、湖北、全國、廣東
2023·遼寧、天津、江蘇、北京、湖北、湖南、浙江
2022·湖北、山東、江蘇、遼寧、海南、福建
考點3 胚胎工程
2024·北京、甘肅、湖北
2023·廣東、浙江
2022·江蘇、北京、全國
考點4 生物技術(shù)的安全性和倫理問題
2024·浙江
2023·浙江
條件
基因表達(dá)產(chǎn)物和相互作用
效應(yīng)
①
WOX5
維持未分化狀態(tài)
②
WOX5+PLT
誘導(dǎo)出根
③
WOX5+ARR2，抑制ARR5
誘導(dǎo)出芽
測試菌
抗菌肽濃度/（μg?mL-1）
55.20
27.60
13.80
6.90
3.45
1.73
0.86
金黃色葡萄球菌
-
-
-
-
-
+
+
枯草芽孢桿菌
-
-
-
-
-
+
+
禾谷鐮孢菌
-
+
+
+
+
+
+
假絲酵母
-
+
+
+
+
+
+
甲的濃度（μg/mL）
卵母細(xì)胞（個）
第一極體排出（個）
成熟率（%）
卵裂數(shù)（個）
卵裂率（％）
0
106
70
66.0
28
40.0
1
120
79
65.8
46
58.2
10
113
53
46.9
15
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