湖北省武漢市部分重點中學2023-2024學年高二下學期期末聯(lián)考生物試卷（Word版附解析）

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本試卷共8頁，22題。滿分100分。考試用時75分鐘。 考試時間:2024年6月27日上午10:15—11:30
?？荚図樌?br>注意事項：
1.答題前，先將自己的姓名、準考證號填寫在試卷和答題卡上，并將準考證號條形碼貼在答題卡上的指定位置。
2.選擇題的作答：每小題選出答案后，用2B鉛筆把答題卡上對應題目的答案標號涂黑。寫在試卷、草稿紙和答題卡上的非答題區(qū)域均無效。
3.非選擇題的作答：用黑色簽字筆直接答在答題卡上對應的答題區(qū)域內(nèi)。寫在試卷、草稿紙和答題卡上的非答題區(qū)域均無效。
4.考試結束后，請將本試卷和答題卡一并上交。
一、選擇題：本題共18小題，每題2分，共36分。在每小題給出的四個選項中，只有一項是符合題目要求的。
1. 傳統(tǒng)發(fā)酵技術通常是家庭式或作坊式的，豆豉一般以黃豆為原料，通過微生物群落共同發(fā)酵而成。利用傳統(tǒng)發(fā)酵技術制作風味豆豉的主要工藝流程如下圖。下列敘述正確的是（ ）

A. 傳統(tǒng)方法制作豆豉，以混合菌種的液體發(fā)酵為主
B. 參與前期發(fā)酵、后期發(fā)酵過程中的菌種代謝類型一致
C. 調(diào)味過程中添加鹽可抑制雜菌生長，白酒和風味料只是調(diào)節(jié)口味
D. 黃豆煮熟的目的主要是破壞黃豆內(nèi)部結構，使蛋白質(zhì)變性，同時起到消毒的作用
【答案】D
【解析】
【分析】1、參與腐乳制作的微生物主要是毛霉，其新陳代謝類型是異養(yǎng)需氧型。
2、腐乳制作的原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪分解成甘油和脂肪酸。
【詳解】A、傳統(tǒng)發(fā)酵是以混合菌種的固體或半固體發(fā)酵為主，A錯誤；
B、結合圖示可知，參與前期發(fā)酵的菌種需要氧氣，后發(fā)酵過程密封發(fā)酵，是厭氧型，故代謝不一致，B錯誤；
C、調(diào)味過程中添加鹽可抑制雜菌生長，白酒和風味料既可以調(diào)節(jié)口味也可以抑制雜菌生長，C錯誤；
D、蛋白質(zhì)在高溫條件下空間結構改變而變性，黃豆煮熟目的主要是破壞黃豆內(nèi)部結構，使蛋白質(zhì)變性，易于被酶水解，同時起到消毒的作用，D正確。
故選D。
2. 研究發(fā)現(xiàn)，小鼠四倍體胚胎具有發(fā)育缺陷，只能發(fā)育成胎盤等胚胎以外的結構。ES 細胞能夠誘導分化形成除胎盤外的其他細胞類型。四倍體胚胎與ES細胞的嵌合體則會使二者的發(fā)育潛能相互補償，可得到ES小鼠。下列敘述正確的是（ ）
A. 嵌合體胚胎發(fā)育至原腸胚時需移植入與之生理狀態(tài)相同的小鼠子宮內(nèi)才可以進一步發(fā)育
B. 嵌合體胚胎移植時，可通過對受體注射免疫抑制劑來提高移植成功率
C. ES 細胞和iPS細胞都只能從胚胎中獲取，限制了二者的廣泛應用
D. 嵌合體發(fā)育形成的ES小鼠基因型與供體ES細胞的基因型相同
【答案】D
【解析】
【分析】胚胎工程是指對動物早期胚胎或配子所進行的多種顯微操作和處理技術。包括體外受精、胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干細胞培養(yǎng)等技術。胚胎工程的許多技術，實際是在體外條件下，對動物自然受精和早期胚胎發(fā)育條件進行的模擬操作。
【詳解】A、嵌合體胚胎發(fā)育至桑葚胚或囊胚期再移植入與之生理狀態(tài)相同的小鼠子宮內(nèi)才可以進一步發(fā)育，A錯誤；
B、同種生物的嵌合體胚胎移植時，外來胚胎移入子宮不會引起免疫排斥，故不需要對受體注射免疫抑制劑，B錯誤；
C、ES細胞存在于早期胚胎或原始性腺，只能從胚胎中獲取，iPS細胞是人工誘導產(chǎn)生的，可以從體細胞中誘導產(chǎn)生，C錯誤；
D、四倍體胚胎只能發(fā)育成胎盤等胚胎以外的結構，而ES 細胞能夠誘導分化形成除胎盤外的其他細胞類型，四倍體胚胎與ES細胞的嵌合體則會使二者的發(fā)育潛能相互補償，可得到ES小鼠，所以嵌合體發(fā)育形成的ES小鼠基因型與供體ES細胞的基因型相同，D正確。
故選D。
3. 下列有關發(fā)酵工程及其應用表述正確的是（ ）
A. 通過發(fā)酵工程從微生物細胞中提取的單細胞蛋白，可制成微生物飼料
B. 微生物農(nóng)藥是利用微生物或其代謝物來防治病蟲害的
C. 選育菌種可直接向發(fā)酵罐中接種從而進行相關發(fā)酵
D. 分離、提純產(chǎn)物是發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)
【答案】B
【解析】
【分析】發(fā)酵工程，是指采用現(xiàn)代工程技術手段，利用微生物的某些特定功能，為人類生產(chǎn)有用的產(chǎn)品，或直接把微生物應用于工業(yè)生產(chǎn)過程的一種新技術。發(fā)酵工程的內(nèi)容包括菌種的選育、培養(yǎng)基的配制、滅菌、擴大培養(yǎng)和接種、發(fā)酵過程和產(chǎn)品的分離提純等方面。
【詳解】A、單細胞蛋白即微生物菌體，不需要從微生物細胞中提取，A錯誤；
B、微生物農(nóng)藥是利用微生物或其代謝物來防治病蟲害的，是生物防治的重要手段，B正確；
C、選育的菌種通過擴大培養(yǎng)后，再向發(fā)酵罐中接種從而進行相關發(fā)酵，C錯誤；
D、發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵是發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)，D錯誤。
故選B。
4. 草莓營養(yǎng)價值高，中國國內(nèi)優(yōu)良品種草莓栽培的品種很多。下圖為利用現(xiàn)代生物技術改良草莓品系的過程，相關敘述錯誤的是（ ）
A. 過程Ⅱ可直接用聚乙二醇作為化學誘導劑來誘導植物細胞融合
B. 過程Ⅰ的原理是基因重組，能定向改變生物的遺傳性狀
C. 利用植物體細胞雜交技術，可以實現(xiàn)遠緣雜交育種
D. 雜種細胞 A 形成的標志是再生出新的細胞壁
【答案】A
【解析】
【分析】過程Ⅰ是利用基因工程技術把胰島素基因?qū)刖G色草莓細胞，胰島素基因得到了表達，產(chǎn)生了產(chǎn)胰島素的草莓，定向改變了草莓的性狀。過程Ⅱ利用植物細胞融合技術獲得了具鳳梨味的綠草莓。
【詳解】A、在進行體細胞雜交之前，必須先利用纖維素酶和果膠酶去除細胞壁，獲得具有活力的原生質(zhì)體，再用聚乙二醇作為化學誘導劑來誘導原生質(zhì)體的融合，A錯誤；
B、過程Ⅰ利用基因工程技術，其原理是基因重組，使導入了胰島素基因的草莓產(chǎn)生了胰島素，能定向改變生物的遺傳性狀，B正確；
C、利用植物體細胞雜交技術，可以實現(xiàn)遠緣雜交育種,C正確；
D、雜種細胞A形成的標志是再生出細胞壁，該過程涉及的細胞器主要是高爾基體，D正確。
故選A。
5. 研究者從溫泉中篩選出能高效產(chǎn)生耐高溫淀粉酶的嗜熱細菌的過程如圖1所示。將得到的嗜熱細菌懸液轉接到特定固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到若干菌落后用碘液作顯色處理，結果如圖2所示。下列敘述正確的是（ ）

A. 過程①②一般都取1m l.菌液轉移
B. 圖中的Ⅰ號培養(yǎng)基應在滅菌后將pH 調(diào)至中性或弱堿性
C. 實驗中所有的操作工具都必須采用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌
D. 若操作正確，可從圖2中挑選周圍不顯藍色的菌落作為目標菌種的純培養(yǎng)物
【答案】D
【解析】
【分析】選擇培養(yǎng)基是指一類根據(jù)特定微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某理化因素抗性的原理而設計的培養(yǎng)基。具有只允許特定的微生物生長，而同時抑制或阻止其他微生物生長的功能。
【詳解】A、過程①為稀釋過程，一般都取1ml菌液轉移，過程②為稀釋涂布過程，一般取0.1ml菌液進行涂布，A錯誤；
B、微生物培養(yǎng)時，應先調(diào)pH再滅菌，B錯誤；
C、實驗使用的培養(yǎng)基應采用高壓蒸汽滅菌，而培養(yǎng)皿等一般使用干熱滅菌法進行滅菌，C錯誤；
D、淀粉與碘液反應呈藍色，且淀粉酶可將淀粉水解，實驗的目的是要篩選出能高效產(chǎn)生耐高溫淀粉酶的嗜熱細菌，則可從圖2中挑選周圍不顯藍色的菌落作為目標菌種的純培養(yǎng)物，D正確。
故選D。
6. 植物細胞工程在農(nóng)業(yè)，醫(yī)藥工業(yè)等方面有著廣泛的應用，相關敘述正確的是（ ）
A. 快速繁殖花卉過程中，可以改良植物的性狀
B. 利用花藥離體培養(yǎng)獲得玉米幼苗，直接從中選擇出具有優(yōu)良性狀的個體
C. 植物組織培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)的細胞容易受到培養(yǎng)條件和誘變因素的影響而產(chǎn)生突變
D. 植物頂端分生組織附近的病毒很少，甚至無病毒，因此人們?yōu)榱双@得抗病毒苗常常利用莖尖進行植物組織培養(yǎng)
【答案】C
【解析】
【分析】1、植物細胞工程技術的應用：植物繁殖的新途徑（微型繁殖、作物脫毒、人工種子）、作物新品種的培育（單倍體育種、突變體的利用）、細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)。
2、由于植物細胞的次生代謝物含量很低，從植物組織提取會大量破壞植物資源，有些產(chǎn)物又不能或難以通過化學合成途徑得到，因此人們期望利用植物細胞培養(yǎng)來獲得目標產(chǎn)物，這個過程就是細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)。植物細胞培養(yǎng)是指在離體條件下對單個植物細胞或細胞團進行培養(yǎng)使其增殖的技術。
【詳解】A、植物的快速繁殖技術是指用于快速繁殖優(yōu)良品種的植物組織培養(yǎng)技術，它可以保持植物的遺傳特性，不可以改良植物的性狀A錯誤；
B、利用花藥離體培養(yǎng)可獲得玉米幼苗的單倍體，再經(jīng)過誘導染色體數(shù)目加倍后，再直接從中選擇出具有優(yōu)良性狀的個體，這樣能夠極大的縮短育種年限，B錯誤；
C、在植物的組織培養(yǎng)過程中，由于培養(yǎng)細胞一直處于不斷增殖的狀態(tài)，因此易受培養(yǎng)條件和誘變因素(如射線、化學物質(zhì)等)的影響而產(chǎn)生突變，C正確；
D、植物頂端分生區(qū)附近（如莖尖）的病毒極少，甚至無病毒，因此，切取一定大小的莖尖進行組織培養(yǎng)，再生的植株就有可能不帶病毒，從而獲得脫毒苗，用這種方法獲得的植株不抗病毒，D錯誤。
故選C
7. 實驗小鼠皮膚細胞培養(yǎng)的基本過程如圖所示。下列敘述正確的是（ ）

A. 圖中丙和丁分別表示的是原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)，其培養(yǎng)原理不同
B. 傳代培養(yǎng)時，懸浮培養(yǎng)的細胞直接用離心法收集，無須再用酶處理
C. 體外培養(yǎng)的細胞既能貼壁生長又能懸浮生長，都會發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象
D. 動物細胞培養(yǎng)應在95%的氧氣和5%的 CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)液中的 CO?用于維持pH
【答案】B
【解析】
【分析】動物細胞培養(yǎng)的流程：取動物胚胎或幼齡動物器官、組織。將材料剪碎，并用胰蛋白酶（或用膠原蛋白酶）處理（消化），形成分散的單個細胞，將處理后的細胞移入培養(yǎng)基中配成一定濃度的細胞懸浮液。懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。當貼壁細胞分裂生長到互相接觸時，細胞就會停止分裂增殖，出現(xiàn)接觸抑制。此時需要將出現(xiàn)接觸抑制的細胞重新使用胰蛋白酶處理。再配成一定濃度的細胞懸浮液。
【詳解】A、丙培養(yǎng)細胞1是原代培養(yǎng)，該過程是獲得組織細胞中進行的初次培養(yǎng)，丁培養(yǎng)細胞2是傳代培養(yǎng)，該過程是將分瓶后的細胞培養(yǎng)稱傳代培養(yǎng)，二者培養(yǎng)原理相同，都為細胞的增殖，A錯誤；
B、傳代培養(yǎng)時，懸浮培養(yǎng)的細胞沒有出現(xiàn)貼壁生長的現(xiàn)象，因而可以直接用離心法收集，無須再用酶處理，B正確；
C、、體外培養(yǎng)的細胞既能貼壁生長又能懸浮生長，能貼壁生長的細胞會發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象，懸浮生長的細胞不會，C錯誤；
D、動物細胞培養(yǎng)應在95%的空氣不是氧氣和5%的 CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)液中的 CO?用于維持培養(yǎng)液的pH，D錯誤。
故選B。
8. 為探究矮牽牛原生質(zhì)體的培養(yǎng)條件和植株再生能力，某研究小組的實驗過程如下圖。下列敘述正確的是（ ）

A. 過程①獲得的原生質(zhì)體是由細胞膜、液泡膜以及這兩層膜之間的細胞質(zhì)組成
B. 獲取的原生質(zhì)體不宜懸浮在低滲溶液中，以防止其吸水漲破
C. 過程②需提高生長素的比例以促進芽的分化
D. 過程③需用秋水仙素處理誘導細胞壁再生
【答案】B
【解析】
【分析】由圖可知，①表示用纖維素酶和果膠酶處理得到原生質(zhì)體的過程；②③均表示再分化過程。
【詳解】A、原生質(zhì)層是由細胞膜、液泡膜以及這兩層膜之間的細胞質(zhì)組成，A錯誤；
B、獲取的原生質(zhì)體不宜懸浮在低滲溶液中，以防止其吸水漲破，B正確；
C、②誘導芽分化時，需要提高細胞分裂素的比例，C錯誤；
D、③可以表示誘導根的分化形成幼苗，此時細胞壁已經(jīng)形成，不需要使用秋水仙素，D錯誤。
故選B。
9. 多種方法獲得的早期胚胎，均需移植給受體才能獲得后代。下圖列舉了幾項技術成果。據(jù)此分析，下列相關敘述正確的是（ ）
A. 胚胎移植前可取內(nèi)細胞團的細胞鑒定性別
B. ①過程得到的試管動物與供體母本性狀相同
C. ③可通過②技術實現(xiàn)擴大化生產(chǎn)，①②可通過③技術實現(xiàn)性狀改良
D. ②過程將牛的體細胞核移植到去核卵母細胞中，培育獲得克隆動物是一種培育新物種的方式
【答案】C
【解析】
【分析】1、動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個胚胎最終發(fā)育為動物。
2、分析圖可知，圖中過程①是培育試管動物，過程②是克隆技術，屬于無性繁殖，過程③是轉基因技術獲得轉基因動物。
【詳解】A、胚胎移植前可取滋養(yǎng)層的細胞鑒定性別，A錯誤；
B、①過程得到的試管動物性狀是由提供卵子的供體母本和提供精子的父本共同決定的，B錯誤；
C、克隆技術可得到大量同種個體，所以③轉基因動物可通過②克隆動物技術實現(xiàn)擴大化生產(chǎn)，轉基因技術可導入外源優(yōu)良基因，所以①②可通過③轉基因技術實現(xiàn)性狀改良，C正確；
D、過程②是克隆技術，將牛的體細胞核移植到去核卵母細胞中，培育獲得克隆動物遺傳物質(zhì)基本與供體?；鞠嗤?，進而得到大量同種個體，所以沒有培育新物種，D錯誤。
故選C。
10. 乳腺癌、胃癌細胞表面有大量的HER2蛋白，T細胞表面有CD3蛋白和CD28蛋白。研究人員將上述三種蛋白作為抗原分別制備單克隆抗體，然后將其在體外解偶聯(lián)后重新偶聯(lián)制備得到三特異性抗體，簡稱三抗(如下圖)，下列敘述正確的是（ ）
A. 同時注射3 種抗原蛋白，可刺激B細胞增殖分化為分泌三抗的漿細胞
B. 利用抗原一抗體雜交的原理篩選圖示三抗時需要3種相應抗原蛋白
C. 該抗體的基本組成單位是氨基酸，其功能與分子的空間結構無關
D. 用單克隆抗體技術制備的三種抗體直接融合可得到三特異性抗體
【答案】B
【解析】
【分析】單克隆抗體的制備過程：①給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，然后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細胞；②誘導B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合；③利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；④進行克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞；⑤用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選出來的雜交瘤細胞或?qū)⑵渥⑷胄∈蟾骨恢信囵B(yǎng)，最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。
【詳解】A、同時注射3種抗原會刺激B細胞分化形成不同的漿細胞，進而產(chǎn)生三種抗體，但一種漿細胞只能產(chǎn)生一種抗體，并不能產(chǎn)生三抗，A錯誤；
B、由于抗體具有特異性，所以利用抗原—抗體雜交的原理篩選圖示三抗時需要3種相應抗原蛋白，B正確；
C、抗體的本質(zhì)是蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)的基本組成單位是氨基酸，蛋白質(zhì)的功能與分子的空間結構密切相關，C錯誤；
D、三特異性抗體指的是一種抗體，通過蛋白質(zhì)工程構建三特異性抗體的基因表達載體，然后獲得相應的雜交瘤細胞，最終獲得三特異性抗體，不是三種單抗融合而成，D錯誤。
故選B。
11. 不對稱PCR 是利用不等量的一對引物來產(chǎn)生大量單鏈DNA(ssDNA)的方法。加入的一對引物中含量較少的被稱為限制性引物，含量較多的被稱為非限制性引物。PCR 反應的最初的若干次循環(huán)中，其擴增產(chǎn)物主要是雙鏈DNA(dsDNA)，但當限制性引物消耗完后，就會產(chǎn)生大量的 ssDNA。不對稱PCR的過程如下圖所示。假設模板 DNA 分子初始數(shù)量為a個，6次循環(huán)后開始擴增產(chǎn)ssDNA。下列敘述正確的是（ ）
A. 該不對稱PCR 過程中需要 個限制性引物
B. 兩種引物與模板鏈結合時，需將溫度控制在 左右
C. 據(jù)圖可知，最后大量獲得的 ssDNA 與圖中甲鏈的堿基序列相同
D. 上述過程中子鏈分別沿限制性引物的5'端、非限制性引物的 端延伸
【答案】C
【解析】
【分析】PCR原理：在解旋酶作用下，打開DNA雙鏈，每條DNA單鏈作為母鏈，以4種游離脫氧核苷酸為原料，合成子鏈，在引物作用下，DNA聚合酶從引物3'端開始延伸DNA鏈，即DNA的合成方向是從子鏈的5'端向3'端延伸的。實際上就是在體外模擬細胞內(nèi)DNA的復制過程。DNA的復制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈。
【詳解】A、PCR擴增時引物是新子鏈的一部分，假設模板DNA分子初始數(shù)量為a個，6次循環(huán)后產(chǎn)生a.26個DNA分子，因此該不對稱PCR過程中需要（26-1）a個限制性引物，A錯誤；
B、當將溫度降至50℃左右時，兩種引物通過堿基互補配對原則與模板鏈結合，B錯誤；
C、非限制性引物是與乙鏈結合，所以最后大量獲得的ssDNA與圖中甲鏈的堿基序列一致，C正確；
D、擴增時耐高溫DNA聚合酶將4種脫氧核苷酸連接至引物的3'端，D錯誤。
故選C。
12. 某細菌DNA分子上有4個Sau3AI的酶切位點，經(jīng) Sau3AI處理后會形成4個大小不同的DNA片段。若是用 BamHI處理，則只會形成2個大小不同的DNA片段。Sau3AI和BamHI的識別序列及切割位點如表所示。下列敘述錯誤的是（ ）
A. 若用兩種酶共同處理，會形成6個大小不同的DNA片段
B. 上述兩種限制酶切割后可形成相同的黏性末端
C. 該DNA 分子上有兩個 BamH1的酶切位點
D. 該細菌 DNA 分子是環(huán)狀的
【答案】A
【解析】
【分析】限制酶主要從原核生物中分離純化出來。特異性：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，形成黏性末端和平末端兩種。
【詳解】A、分析題干信息知該DNA分子上有4個Sau3A I的酶切位點，有2個BamH I的酶切位點，但是BamH I識別序列中包含Sau3A I的識別序列，所以同時用兩種酶共同處理，不會形成6個大小不同的DNA片段，A錯誤；
B、BamH I和Sau3A I兩種限制酶切割后形成的黏性末端均為GATC，B正確；
C、該DNA分子上有4個Sau3A I的酶切位點，經(jīng)Sau3A I處理后形成4個DNA片段，可知該DNA分子為環(huán)狀DNA，用BamH I處理后，得到2個DNA片段，說明該DNA分子上有兩個BamH I的酶切位點，C正確；
D、該DNA分子上有4個Sau3A I的酶切位點，經(jīng)Sau3A I處理后形成4個DNA片段，可知該DNA分子為環(huán)狀DNA，D正確。
故選A。
13. 某同學利用洋蔥為實驗材料，進行DNA 粗提取和鑒定實驗。下列有關敘述錯誤的是（ ）
A. 該同學也可選擇雞血、豬肝等動物細胞為實驗材料提取 DNA，但方法可能有所不同
B. 向含有DNA 的粗提取液中加入體積分數(shù)為95%的冷酒精后，出現(xiàn)的白色絲狀物為DNA
C. 鑒定 DNA 時需先將 DNA 溶解在2ml/L NaCl 溶液，再加入二苯胺試劑并進行沸水浴加熱
D. 將洋蔥切碎加研磨液研磨、過濾后，濾液放置4℃冰箱中靜置幾分鐘后，DNA 存在于沉淀物中
【答案】D
【解析】
【分析】1、DNA的粗提取與鑒定的實驗原理是：①DNA的溶解性，DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的氯化鈉溶液中的溶解度不同，利用這一特點可以選擇適當濃度的鹽溶液可以將DNA溶解或析出，從而達到分離的目的；②DNA不容于酒精溶液，細胞中的某些蛋白質(zhì)可以溶解于酒精，利用這一原理可以將蛋白質(zhì)和DNA進一步分離；③DNA對于酶、高溫和洗滌劑的耐受性，蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但是不能水解DNA，蛋白質(zhì)不能耐受較高溫度，DNA能耐受較高溫度洗滌劑能瓦解細胞膜，但是對DNA沒有影響；④在沸水浴的條件下DNA遇二苯胺會呈現(xiàn)藍色；
2、DNA粗提取與鑒定的實驗中，不同操作步驟中加水的作用不同，破碎細胞獲取含DNA的濾液時加蒸餾水的目的是使血細胞漲破；出去濾液中的雜質(zhì)時，加蒸餾水的目的是降低NaCl溶液濃度使DNA析出。
【詳解】A、不同類型的生物材料(如植物細胞、動物細胞、微生物)中DNA的提取過程雖有相似之處，但也存在差異。例如，使用動物血液作為實驗材料時，通常利用紅細胞破裂釋放出的DNA進行提取，而不需要研磨和去除細胞壁的過程，A正確；
B、在DNA提取過程中，當加入高濃度酒精后，DNA會因不溶于酒精而析出，形成白色的絮狀或絲狀沉淀，這就是粗提取得到的DNA，B正確；
C、鑒定DNA時，常用的方法之一就是二苯胺顯色反應。需要將DNA樣品溶解在適當?shù)腘aCl溶液中，然后加入二苯胺試劑，在沸水中加熱后，若存在DNA，則反應液會變?yōu)樗{色，C正確；
D、在DNA粗提取實驗中，通 常首先通過研磨和加入適量的洗滌劑與食鹽溶液來釋放細胞中的DNA，并破壞細胞膜和其他細胞結構。然后，在此混合液中DNA會溶解在溶液中，并隨同蛋白質(zhì)、多糖等其他物質(zhì)一起存在。DNA在一定濃度的NaCl溶液中溶解度較高，所以初步處理后的濾液經(jīng)過離心或靜置 后，DNA不會形成沉淀，而是在溶液中，D錯誤。
故選D。
14. 如圖表示培育轉基因抗病毒農(nóng)作物的過程圖，下列有關敘述正確的是（ ）
A. a過程中目的基因需要插入到Ti質(zhì)粒的 T-DNA 中
B. 實驗用的 Ti質(zhì)粒中通常至少含有一個抗生素合成基因
C. 我國科學家將Bt 基因?qū)朊藁毎捎昧宿r(nóng)桿菌轉化法
D. 抗病毒基因一旦導入農(nóng)作物細胞中，就能獲得抗病毒農(nóng)作物
【答案】A
【解析】
【分析】基因工程技術的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測與鑒定。
【詳解】A、a過程構建重組質(zhì)粒時，需要將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA分子中，否則農(nóng)桿菌將不能把目的基因轉移至農(nóng)作物的染色體上，A正確；
B、基因工程中常用抗生素抗性基因作為標記基因來篩選含有目的基因的受體細胞，因此重組質(zhì)粒中通常要至少保留一個標記基因，B錯誤；
C、我國科學家將Bt基因?qū)朊藁毎捎昧嘶ǚ酃芡ǖ婪ǎ珻錯誤；
D、抗病毒基因即使導入農(nóng)作物細胞中，也不一定能獲得抗病毒植株，還需要經(jīng)過多次檢測和篩選才行，D錯誤。
故選A。
15. 常規(guī)PCR只能擴增兩引物間的DNA區(qū)段，要擴增已知DNA序列兩側的未知DNA序列，可用反向PCR技術。反向PCR技術擴增的原理如圖所示。下列敘述錯誤的是（ ）
A. 酶切階段，L中不能含有酶切時所選限制酶的識別序列
B. 環(huán)化階段，可選用E.cli DNA連接酶或T4 DNA連接酶
C. 圖中引物，應選擇引物1和引物4，且二者間不能互補配對
D. PCR擴增，每輪循環(huán)前應加入限制酶將環(huán)狀DNA切割成線狀
【答案】D
【解析】
【分析】PCR只能擴增兩端序列已知的基因片段，反向PCR可擴增中間一段已知序列，而兩端序列未知的基因片段。酶切時用限制性內(nèi)切酶，環(huán)化時用DNA鏈接酶，再用引物和DNA聚合酶擴增。在環(huán)化后，通過一對方向相反的引物實現(xiàn)已知序列兩側基因序列的擴增。
【詳解】A、在酶切階段，已知序列L中不能含有酶切時所選限制酶的識別序列，不然會將已知序列L切斷，造成序列識別混亂，A正確；
B、T4 DNA連接酶或E.cli DNA連接酶都可以用來連接黏性末端，因此環(huán)化階段，可選用E.cli DNA連接酶或T4 DNA連接酶，B正確；
C、PCR過程需要兩種引物，能分別與目的基因兩條鏈的3'端通過堿基互補配對結合，為保證延伸的是已知序列兩側的未知序列，應該選擇引物1和引物4，且二者間不能互補配對，C正確；
D、質(zhì)粒上目的基因擴增不受模板環(huán)狀形態(tài)干擾，不需要添加限制酶就可以擴增出所需片段，D錯誤。
故選D。
16. 基因工程自20世紀70年代興起后，在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等方面得到了飛速的發(fā)展。下列關于基因工程應用的敘述正確的是（ ）
A. 通過X射線、紫外線綜合處理，將青霉素產(chǎn)量低的菌種培育成產(chǎn)量高的菌株屬于基因工程技術的應用
B. 通過將腸乳糖酶導入到奶牛乳腺細胞中，以降低乳汁中乳糖含量，從而解決部分人群的乳糖不耐受問題
C. 與人細胞分泌的天然生長激素相比，將人的生長激素基因?qū)氪竽c桿菌制備的工程菌無法對生長激素進行正常的加工和修飾
D. 通過制備山羊膀胱生物反應器，使人乳鐵蛋白基因只存在于膀胱細胞中，進而可以從尿液中分離純化出所需要的人乳鐵白蛋白，實現(xiàn)大量制備的目的
【答案】C
【解析】
【分析】基因工程技術的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ㄊ歉惺軕B(tài)細胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術；個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。
【詳解】A、通過X射線、紫外線綜合處理，將青霉素產(chǎn)量低菌種培育成產(chǎn)量高的菌株屬于誘變育種，A錯誤；
B、乳糖酶可降解乳糖，可降低乳汁中乳糖含量，科學家是通過將腸乳糖酶基因?qū)氲侥膛Ｈ橄偌毎?，而不是乳糖酶，B錯誤；
C、由于大腸桿菌缺乏對蛋白質(zhì)進行加工和分裝的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，因此與人細胞分泌的天然生長激素相比，將人的生長激素基因?qū)氪竽c桿菌制備的工程菌無法對生長激素進行正常的加工和修飾，C正確；
D、作為膀胱生物反應器的山羊體內(nèi)所有細胞都含有目的基因，但是只有在于膀胱細胞中才能表達目的基因，D錯誤。
故選C。
17. 已知生物體內(nèi)有一種轉運蛋白Y，如果將蛋白Y 中某一個氨基酸替換，改變后的蛋白質(zhì) Y1不但保留了蛋白Y原有的功能，而且具備了酶的催化功能。下列敘述正確的是（ ）
A. 蛋白質(zhì)工程和基因工程的根本區(qū)別是操作對象的差異
B. 可以通過對 Y 蛋白基因改造或人工合成獲得 Y1蛋白基因
C. 蛋白質(zhì)工程在設計蛋白質(zhì)結構時的依據(jù)是現(xiàn)有基因的脫氧核苷酸序列
D. 蛋白質(zhì)工程與中心法則的信息流動方向一致，即DNA→mRNA→蛋白質(zhì)
【答案】B
【解析】
【分析】蛋白質(zhì)工程概念及基本原理（1）蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結構規(guī)律及其生物功能的關系作為基礎，通過基因修飾或基因合成，對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。（基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)）。（2）蛋白質(zhì)工程崛起的緣由：基因工程只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)。（3）蛋白質(zhì)工程的基本原理：它可以根據(jù)人的需求來設計蛋白質(zhì)的結構，又稱為第二代的基因工程。（4）基本途徑：預期蛋白質(zhì)功能→設計預期的蛋白質(zhì)結構→推測應有氨基酸序列→找到對應的脫氧核苷酸序列（基因），最終還是回到基因工程上來解決蛋白質(zhì)的合成。
【詳解】A、蛋白質(zhì)工程和基因工程的根本區(qū)別是蛋白質(zhì)工程可制造出自然界沒有的蛋白質(zhì)，A錯誤；
B、蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結構規(guī)律及其生物功能的關系作為基礎，通過基因修飾或基因合成，對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，因此可以通過對Y蛋白基因改造或人工合成獲得Y1蛋白基因，B正確；
C、蛋白質(zhì)工程在設計蛋白質(zhì)結構時的依據(jù)是人類的意愿，C錯誤；
D、蛋白質(zhì)工程與中心法則的信息流動方向相反，D錯誤。
故選B。
18. 生物技術的安全性與倫理性一直是人類關注和討論的熱點問題。下列敘述正確的是（ ）
A. 治療性克隆是無性生殖，生殖性克隆是有性生殖
B. 只要有證據(jù)表明產(chǎn)品有害，就應該禁止轉基因技術的應用
C. 基因編輯技術可用于疾病預防領域研究，但不能用于設計完美嬰兒
D. 生殖性克隆人理論上能豐富人類基因的多樣性，可在特定人群中進行相關實驗
【答案】C
【解析】
【分析】1、轉基因技術給人類帶來了琳瑯滿目的產(chǎn)品，也引發(fā)了社會對轉基因產(chǎn)品安全性的關注和爭論。
2、治療性克隆是指利用克隆技術產(chǎn)生特定細胞、組織、器官，用它們來修復或替代受損的細胞組織和器官，從而達到治療疾病的目的；生殖性克隆是指通過克隆技術產(chǎn)生獨立生存的新個體，它面臨很多倫理問題。我國不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實驗。
【詳解】A、治療性克隆和生殖性克隆都是基于核移植的無性生殖，A錯誤；
B、轉基因作為一項技術本身是中性的，有證據(jù)表明產(chǎn)品有害，就應該禁止該產(chǎn)品的應用，而不是禁止轉基因技術的應用，B錯誤；
C、基因編輯技術可用于疾病預防領域研究，但若設計完美試管嬰兒，已經(jīng)涉及到新生命的誕生，會造成生物技術安全與倫理問題，所以不能用于設計完美嬰兒，C正確；
D、克隆為無性繁殖，可見生殖性克隆人不能豐富人類基因的多樣性，我國禁止生殖性克隆人實驗，D錯誤。
故選C。
二、非選擇題：本題共4 小題，共64分。
19. 某些老陳醋會出現(xiàn)產(chǎn)氣現(xiàn)象，原因是老陳醋中含有產(chǎn)氣細菌。產(chǎn)氣細菌是一類能產(chǎn)生過氧化氫酶的細菌，產(chǎn)氣菌產(chǎn)生的氣體積累會引起脹瓶，影響產(chǎn)品安全。實驗小組以瓶裝變質(zhì)老陳醋(脹瓶)、未變質(zhì)老陳醋為實驗材料，篩選出導致老陳醋產(chǎn)氣的細菌。回答下列問題：
（1）為了篩選產(chǎn)氣細菌，實驗人員設置了甲、乙、丙三組培養(yǎng)基，甲作為空白對照組，乙接種未變質(zhì)的老陳醋，丙接種_________。闡述如何從上述培養(yǎng)基中初步篩選疑似產(chǎn)氣細菌的菌株：_____________。
（2）實驗小組初步篩選出了A1、A2和A3三株疑似的產(chǎn)氣細菌，篩選過程如下圖所示。
①過程a的接種方法是______________。如需統(tǒng)計菌落的數(shù)目，最好選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結果，以防止培養(yǎng)時間不足導致______________，或培養(yǎng)時間太長導致_____________。
②現(xiàn)有5%的過氧化氫溶液，A1、A2和A3菌株，必要的培養(yǎng)基等實驗器材。寫出判斷A1、A2和A3三種菌株是否為產(chǎn)氣細菌的實驗思路：_____________。
（3）分別用三組平板培養(yǎng)A1、A2、A3三種菌株，然后在培養(yǎng)基上分別加入等量一定濃度的青霉素溶液，培養(yǎng)一段時間后可以觀察到一圈清晰區(qū)(抑菌圈)。測量清晰區(qū)的直徑，數(shù)據(jù)如下表：
該實驗的目的是_____________。從表中數(shù)據(jù)可以看出，不同濃度青霉素對 A1菌株的影響是_____________.
【答案】（1） ①. 等量的變質(zhì)老陳醋 ②. 對比乙和丙培養(yǎng)基上的菌落特征，從丙培養(yǎng)基上分離出和乙培養(yǎng)基形態(tài)不同的菌落
（2） ①. 稀釋涂布平板法 ②. 遺漏菌落的種類和數(shù)目 ③. 菌落粘連影響計數(shù) ④. 將A1、A2和A3菌株分別接種到滴有5%的過氧化氫溶液的培養(yǎng)基上，若產(chǎn)生氣泡則為產(chǎn)氣細菌
（3） ①. 探究不同濃度青霉素對 A1、A2、A3菌株的抑制作用 ②. 在一定范圍內(nèi)，隨著青霉素濃度的增加，對 A1的抑菌效果越來越好
【解析】
【分析】題中用瓶裝變質(zhì)老陳醋（脹瓶）、未變質(zhì)老陳醋為實驗材料，經(jīng)過分離、純化、并初步篩選出A1、A2和A3三株疑似的產(chǎn)氣細菌，進一步探究了不同濃度青霉素對A1、A2、A3菌株的抑制作用，表中數(shù)據(jù)所示的清晰區(qū)直徑（抑菌圈）越大，代表該菌種生長受到的抑制作用越強。
【小問1詳解】
為了篩選產(chǎn)氣細菌，實驗人員設置了甲、乙、丙三組培養(yǎng)基，甲作為空白對照組，乙接種未變質(zhì)的老陳醋，丙接種等量的變質(zhì)老陳醋，對比乙和丙培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)，從丙培養(yǎng)基上分離出和乙培養(yǎng)基形態(tài)不同的菌落，可以從上述培養(yǎng)基中初步篩選疑似產(chǎn)氣細菌的菌株。
【小問2詳解】
過程a所得待測培養(yǎng)基中菌落的分布較為均勻，據(jù)此判斷，該過程所采用的接種方法為稀釋涂布平板法。統(tǒng)計菌落種類和數(shù)量時要每隔24h觀察統(tǒng)計一次，直到各類菌落數(shù)目穩(wěn)定，能有效防止因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的種類和數(shù)目；或培養(yǎng)時間太長導致菌落粘連影響計數(shù)、培養(yǎng)基表面干燥脫水影響菌落數(shù)目的統(tǒng)計。因為老陳醋中的產(chǎn)氣細菌是一類能產(chǎn)生過氧化氫酶的細菌，若有5%的過氧化氫溶液，A1、A2和A3菌株，必要的培養(yǎng)基等實驗器材，可以將A1、A2和A3菌株分別接種到滴有5%的過氧化氫溶液的培養(yǎng)基上，觀察是否產(chǎn)生氣泡，若產(chǎn)生氣泡則為產(chǎn)氣細菌。
【小問3詳解】
根據(jù)題意和表格信息分析可知，該實驗的目的是探究不同濃度青霉素對A1、A2、A3菌株的抑制作用。從表中數(shù)據(jù)可以看出，在一定范圍內(nèi)，隨著青霉素濃度的增加，對 A1的抑菌效果越來越好。
20. 甘草酸(GA)是甘草地下部分的一種重要生理活性物質(zhì)，具有阻止病毒復制、恢復免疫力、抑制癌細胞生長等功效。傳統(tǒng)的GA一直依賴于植物提取，屬于資源依賴型產(chǎn)品?？蒲腥藛T一直在探索借助生物工程技術生產(chǎn)GA，以解決甘草酸及其他稀缺天然產(chǎn)物獲取過程中存在的資源短缺等問題。
（1）甘草酸由于其在植物細胞中含量低，栽培甘草質(zhì)量差異較大，科研人員可通過細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)，以獲得_____________(初生代謝物/次生代謝物)，主要應用的技術是_____________，來獲得大量甘草細胞，用于誘導和提取甘草酸。
（2）在明確甘草酸的生物合成途徑和其中幾種關鍵酶后，科研人員嘗試借助基因工程和發(fā)酵工程，開發(fā)了酵母細胞工廠合成甘草酸的途徑。具體如下：
Ⅰ構建基因表達載體?？蒲腥藛T獲取幾種關鍵酶基因，借助PCR 技術大量擴增后，為使其在受體細胞中高效表達，要將獲得的目的基因插入______________和_____________之間，構建出基因表達載體。
Ⅱ?qū)⒛康幕驅(qū)胧荏w細胞。將基因表達載體導入感受態(tài)的酵母菌細胞中。
Ⅲ為了快速檢測甘草酸，科研人員利用細胞工程技術制備了抗甘草酸的單克隆抗體，其基本操作過程如圖所示。

圖中給小鼠注射甘草酸一牛血清白蛋白結合抗原的目的是______________；相較于植物細胞融合，促進過程②特有的方法是_____________來誘導細胞甲和骨髓瘤細胞的融合。進行過程③的篩選后，得到雜交瘤細胞。④過程的目的是______________。制備的單克隆抗體檢測GA 所利用的技術是______________.
【答案】（1） ①. 次生代謝物 ②. 植物細胞培養(yǎng)
（2） ①. 啟動子 ②. 終止子 ③. 對小鼠進行免疫處理，得到能產(chǎn)生特定抗體的B 淋巴細胞 ④. 滅活病毒誘導法 ⑤. 通過抗體檢測呈陽性來獲得分泌所需抗體的雜交瘤細胞 ⑥. 抗原-抗體雜交技術
【解析】
【分析】題圖分析：圖示為利用細胞工程技術制備了抗甘草酸的單克隆抗體過程，其中①為對小鼠進行免疫處理，②是誘導細胞甲與骨髓瘤細胞融合，③是篩選得到細胞丙，④對的雜交瘤細胞進行克隆化培育和抗體檢測，⑤對細胞丁進行體內(nèi)或體外培養(yǎng)。
【小問1詳解】
植物代謝會產(chǎn)生一些一般認為不是植物基本生命活動所必需的產(chǎn)物稱為次生代謝產(chǎn)物，甘草酸屬于次生代謝產(chǎn)物；細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)，主要應用的技術是植物細胞培養(yǎng)，是指在離體條件下對單個植物細胞或細胞團進行培養(yǎng)使其增殖技術。
【小問2詳解】
Ⅰ、啟動子是一段特殊序列的DNA片段，位于基因上游，緊挨轉錄起始位點，是RNA聚合酶結合和識別的部位，有了它才能驅(qū)動基因的轉錄；終止子也是一段特殊序列的DNA片段，位于基因下游，使轉錄在所需要的地方停下來；故構建基因表達載體應將獲得的目的基因插入到啟動子和終止子之間。
Ⅲ、圖中給小鼠注射甘草酸一牛血清白蛋白結合抗原的目的是對小鼠進行免疫處理，得到能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞。 圖中過程②是誘導細胞甲和骨髓瘤細胞融合的過程，該過程使用特有的方法是滅活病毒誘導法，是動物細胞特有的誘導細胞融合的方法。
然后在HAT培養(yǎng)基上進行過程③的第一次篩選后，得到細胞丙是雜交瘤細胞。然后再進行第二次篩選即④過程，過程④代表對上述培養(yǎng)的雜交瘤細胞進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)過多次篩選獲得細胞丁，目的是通過抗體檢測呈陽性來獲得分泌所需抗體的雜交瘤細胞；制備的單克隆抗體檢測GA甘草酸所利用的技術是抗原-抗體雜交技術。
21. 中國科學家在國際上首次成功構建了高比例胚胎干細胞貢獻的活嵌合體猴(將食蟹猴的胚胎干細胞注入到受體胚胎后發(fā)育而成)，這對于理解靈長類胚胎干細胞全能性具有重要意義，為遺傳修飾模型猴的構建奠定了技術基礎。其技術路線如下圖所示：

注：胚胎干細胞是指食蟹猴胚胎干細胞，具有較高的多能性。
（1）科學家將綠色熒光基因(GFP)導入胚胎干細胞，用于檢測胚胎干細胞在胚胎和個體中的分布。嵌合體猴體內(nèi)綠色熒光散亂分布的原因是______________.
（2）可用囊胚的_____________部分的細胞做DNA分析，進行性別鑒定。嵌合體猴體中體細胞的基因型_____________(填“相同”或“不同”)。
（3）嵌合體猴胚胎的培育涉及到了胚胎移植技術。此技術對代孕受體的要求是_____________。若想進一步提高胚胎的利用率，可采用_____________技術。
（4）科學家還利用胚胎干細胞的細胞核進行了核移植實驗得到克隆猴，并分別對克隆猴、卵細胞供體猴、代孕母猴和干細胞供體猴的線粒體DNA 中某一特異性序列進行了檢測、比對。分析可知，克隆猴的線粒體DNA 特異性序列與______________一致，原因是______________.
【答案】（1）注入的胚胎干細胞與桑葚胚細胞嵌合發(fā)育為內(nèi)細胞團細胞，共同發(fā)育為幼猴的各種組織
（2） ①. 滋養(yǎng)層 ②. 不同
（3） ①. 同種的、生理狀態(tài)相同的雌性動物 ②. 胚胎分割
（4） ①. 卵細胞供體猴 ②. 克隆猴的線粒體DNA 來源于卵細胞的細胞質(zhì)，與代孕母體猴和干細胞供體猴無關
【解析】
【分析】干細胞在形態(tài)上：體積小、細胞核大、核仁明顯；在功能上，具有發(fā)育的全能性。干細胞按分化潛能可分為全能干細胞（如胚胎干細胞可以分化形成所有的成體組織細胞，甚至發(fā)育成為完整的個體）、多能干細胞（具有多向分化的潛能，可以分化形成除自身組織細胞外的其他組織細胞，如造血干細胞、神經(jīng)干細胞、間充質(zhì)干細胞、皮膚干細胞等）和專能干細胞（維持某一特定組織細胞的自我更新，如腸上皮干細胞）三種類型。
【小問1詳解】
綠色熒光基因(GFP)導入胚胎干細胞，胚胎干細胞與桑葚胚細胞嵌合發(fā)育為內(nèi)細胞團細胞，進而共同發(fā)育為幼猴的各種組織，故嵌合體猴體內(nèi)綠色熒光散亂分布。
【小問2詳解】
可用囊胚的滋養(yǎng)層的細胞進行性別鑒定，根據(jù)綠色熒光散亂分布判斷嵌合體猴體中體細胞的基因型不同。
【小問3詳解】
胚胎移植是將胚胎移入同種的、生理狀態(tài)相同的雌性動物，通過胚胎分割可以提高胚胎的利用率。
【小問4詳解】
分析圖示可知，克隆猴的線粒體DNA特異性序列與卵細胞供體猴一致，并且不同于代孕母體猴和干細胞供體猴。克隆猴的線粒體DNA來源于卵細胞的細胞質(zhì)，與代孕母體猴和干細胞供體猴無關。
22. 科研團隊通過轉基因獲得了一種大腸桿菌工程菌，成為監(jiān)測殘留在生物組織或環(huán)境中的四環(huán)素水平的“報警器”，其監(jiān)測原理如圖1所示，天然大腸桿菌不具備圖1中所示基因。

（1）在上述研究中，需導入天然大腸桿菌的目的基因有______________。(選填序號)
①四環(huán)素合成相關基因 ②GFP 基因 ③TetR 基因 ④RNA 聚合酶基因
（2）據(jù)圖1，環(huán)境中四環(huán)素水平越高，該種大腸桿菌工程菌的熒光______________(選填“增強”“減弱”“不變”)。試概述該種四環(huán)素檢測方法的原理：_________________。
（3）圖2是2個DNA片段、質(zhì)粒及其上的限制性內(nèi)切核酸酶的識別序列的分布情況；其中質(zhì)粒上的代表青霉素抗性基因。表為相關限制性內(nèi)切核酸酶的識別序列與切割位點。

若要拼接DNA片段1和2，結合圖2和上表中信息，在特定工具酶作用下能成功拼接位點處堿基序列為____________或_______________。
（4）研究人員設計了一個同時含DNA片段1和2的重組質(zhì)粒的拼接方案，結合圖表信息，你認為最終建構成功的重組質(zhì)粒示意圖最合理的是______________。

（5）為了確定組質(zhì)粒和大腸桿菌工程菌建構成功，可用 PCR 技術進行檢測，PCR 完成以后常采用_____________來鑒定 PCR的產(chǎn)物。也可通過觀察四環(huán)素濃度變化是否能引起大腸桿菌工程菌熒光強度的相應改變來進行鑒定。
【答案】（1）②③ （2） ①. 增強 ②. 當環(huán)境中沒有四環(huán)素時，由于tetR 基因的表達產(chǎn)物tetR 蛋白對啟動子2的抑制作用，使得GFP基因不能表達出綠色熒光蛋白而不發(fā)光，當環(huán)境中存在四環(huán)素時，可以解除這種抑制作用，且四環(huán)素水平越高，表達的GFP蛋白越多，熒光越強(或表述為：四環(huán)素可解除 tetR蛋白對GFP基因表達的抑制作用，并使大腸桿菌工程菌的GFP蛋白表達量隨四環(huán)素水平的增加而增加)
（3） ①. 5'…T CTAG T…3' 5'…A CTAG A…3' ②. 3'…A GATC A…5' 3'…T GATC T…5'
（4）D （5）瓊脂糖凝膠電泳
【解析】
【分析】基因工程技術的基本步驟：（1）目的基因的獲取。（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ㄊ歉惺軕B(tài)細胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定。
【小問1詳解】
據(jù)圖1分析可知，啟動子1可與RNA聚合酶結合，促進TetR基因的表達TetR蛋白，TetR蛋白抑制啟動子2與RNA聚合酶的結合，抑制GFP（綠色熒光蛋白）基因的表達綠色熒光蛋白。四環(huán)素可以抑制TetR蛋白的作用，因此當環(huán)境中沒有四環(huán)素時，GFP（綠色熒光蛋白）基因不表達；當環(huán)境中有四環(huán)素時，四環(huán)素能夠解除TetR蛋白對啟動子2的抑制作用，最終使菌體發(fā)出綠色熒光。因此可以通過檢測熒光強弱來判定環(huán)境中的四環(huán)素濃度，因此需導入天然大腸桿菌的目的基因有②③。
【小問2詳解】
據(jù)圖1分析可知，當環(huán)境中不含四環(huán)素時，該大腸桿菌工程菌TetR基因的表達的TetR蛋白會抑制啟動子2與RNA聚合酶的結合，抑制GFP（綠色熒光蛋白）基因的表達綠色熒光蛋白，因此不發(fā)處熒光。當環(huán)境中有四環(huán)素時，四環(huán)素能夠解除TetR蛋白對啟動子2的抑制作用，最終使菌體發(fā)出綠色熒光。并且環(huán)境中四環(huán)素水平越高，抑制TetR蛋白作用越強，解除TetR蛋白對啟動子2的抑制作用的能力越強，GFP（綠色熒光蛋白）基因表達能力越強，熒光就會增強。
因此，概述該種四環(huán)素檢測方法的原理：四環(huán)素可以打破（解除）tetR蛋白對GFP基因表達的抑制作用，并使大腸桿菌工程菌的GFP蛋白表達量隨四環(huán)素水平的增加而增加，或表述為：當環(huán)境中沒有四環(huán)素時，由于tetR基因的表達產(chǎn)物tetR蛋白對啟動子2的抑制作用，使得GFP基因不能表達出綠色熒光蛋白（GFP蛋白）而不發(fā)光，當環(huán)境中存在四環(huán)素時，可以解除這種抑制作用，綠色熒光蛋白得以表達并發(fā)光，四環(huán)素水平越高，表達的GFP蛋白越多，熒光越強。
【小問3詳解】
據(jù)圖2分析可知，DNA片段1兩端的限制酶識別序列分別是XbaⅠ和EcRⅠ，而DNA片段2兩端的限制酶識別序列是SpeⅠ和BamHⅠ，若要讓兩個DNA片段連接在一起，需要經(jīng)酶切后獲得相同的黏性末端。據(jù)表格分析，XbaⅠ和SpeⅠ酶切能獲得相同的黏性末端，因此DNA片段1用XbaⅠ酶切，DNA片段2用SpeⅠ酶切，然后在用DNA連接酶將兩個DNA片段連接在一起，所以在特定工具酶作用下能成功拼接的位點處堿基序列為5'…TCTAGT…3' 和5'…ACTAGA…3'或者是3'…AGATCA…5' 和3'…TGATCT…5'。
【小問4詳解】
ABCD、根據(jù)小問3分析，DNA片段1用XbaⅠ酶切，DNA片段2用SpeⅠ酶切，然后在用DNA連接酶將兩個DNA片段連接在一起，啟動子1和啟動子2是反向連接的，如圖CD所示，兩個片段經(jīng)連接后的序列既不能被SpeⅠ酶切，也不能被XbaⅠ酶切，綜上所述，ABC錯誤，D正確。
故選D。
【小問5詳解】限制酶名稱
識別序列及切割位點
BamHI
G↓ GATCC
Sau3AI
↓GATC
細菌
不同濃度青霉素條件下清晰區(qū)直徑/ mm
5/(μg·mL?1)
7.5/(μg·mL?1)
10/(μg·mL?1)
15/(μg·mL?1)
20/(μg·mL?1)
A1
0.2
2
8
13
17
A2
7
10
12
15
16
A3
5
6
5
6
6
限制酶
EcR I
Xba I
Spe I
BamHI
識別序列及切割位點
5'…G↓AATT C…3'
3'…C TTAA↑G…5'
5'…T↓CTAG A…3'
3'…A GATC↑T…5'
5'…A↓CTAG T…3'
3'…T GATC↑A…5'
5'…G↓ GATC C…3'
3'…C CTAG↑G…5'