1.(2023·廣東梅州二模)“篩選”是生物工程中常用的技術(shù)手段,下列關(guān)于篩選的敘述錯(cuò)誤的是( D )
A.單克隆抗體制備過程中,在完成細(xì)胞融合后,第一次篩選出的是雜交瘤細(xì)胞
B.基因工程中通過標(biāo)記基因篩選出的細(xì)胞不一定含有重組質(zhì)粒
C.植物體細(xì)胞雜交過程中,原生質(zhì)體融合后獲得的細(xì)胞需要進(jìn)行篩選
D.用選擇培養(yǎng)基對(duì)微生物進(jìn)行篩選時(shí),實(shí)驗(yàn)組接種微生物,對(duì)照組不接種微生物
解析:單克隆抗體制備過程中,在完成細(xì)胞融合后,第一次篩選出的是雜交瘤細(xì)胞,第二次篩選出的是能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞;基因工程中通過標(biāo)記基因篩選出的細(xì)胞不一定含重組質(zhì)粒,如只含有普通質(zhì)粒;植物體細(xì)胞雜交過程中,原生質(zhì)體融合后獲得的細(xì)胞需要進(jìn)行篩選,選出雜種細(xì)胞;用選擇培養(yǎng)基對(duì)微生物進(jìn)行篩選時(shí),對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)基不同,但均需接種相同的微生物(樣品),若實(shí)驗(yàn)組菌落數(shù)少于對(duì)照組,說明選擇培養(yǎng)基具有篩選作用。
2.(2023·山東濰坊二模)《禮記·月令》中記載:“[仲冬之月]乃命大酋,秫稻必齊,曲蘗必時(shí),湛熾(清潔煮沸)必絜,水泉必香,陶器必良,火齊必得。兼用六物,大酋監(jiān)之,毋有差貸?！边@是一套比較完整的釀酒工藝流程,對(duì)于釀酒時(shí)節(jié)、原料選擇等都有嚴(yán)格規(guī)定,更對(duì)我國釀酒技術(shù)的發(fā)展有著深遠(yuǎn)的影響。下列說法正確的是( C )
A.“秫稻必齊”可為釀酒提供豐富的糖,隨著發(fā)酵的進(jìn)行糖含量會(huì)
升高
B.為防止二次污染,應(yīng)在“湛熾”后立即接種釀酒的酒曲
C.“陶器必良”可以確保酵母菌產(chǎn)生酒精的同時(shí)避免乙酸的產(chǎn)生
D.在適宜的溫度下發(fā)酵,發(fā)酵液的溫度并不會(huì)隨發(fā)酵的進(jìn)行而改變
解析:釀酒過程中,酵母菌進(jìn)行無氧呼吸分解糖類產(chǎn)生酒精和二氧化碳,糖含量下降;在“湛熾”后立即接種釀酒的酒曲,會(huì)殺死酵母菌,應(yīng)在冷卻后加入酒曲;“陶器必良”是為了有良好的容器從而控制好發(fā)酵過程氣體條件(無氧條件),可以確保酵母菌產(chǎn)生酒精的同時(shí)避免乙酸的產(chǎn)生;在發(fā)酵的過程中,酵母菌進(jìn)行呼吸作用,產(chǎn)生的熱能會(huì)使發(fā)酵液的溫度升高。
3.(2023·山東菏澤二模)液體深層培養(yǎng)是指以獲得大量發(fā)酵產(chǎn)物為目的的發(fā)酵罐大容量液體培養(yǎng),可通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的pH和溫度、營養(yǎng)條件以及氣體環(huán)境促使微生物迅速生長,產(chǎn)生大量代謝物,是發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)的基本培養(yǎng)方法。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是( C )
A.在進(jìn)行液體深層培養(yǎng)前需要對(duì)發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基進(jìn)行嚴(yán)格滅菌
B.在培養(yǎng)厭氧微生物時(shí),前期密封保持無氧,后期可根據(jù)產(chǎn)物不同決定是否放氣
C.若發(fā)酵產(chǎn)品是微生物代謝物,發(fā)酵結(jié)束后,可通過過濾、沉淀等方法獲得
D.液體深層培養(yǎng)過程中要密切關(guān)注培養(yǎng)液的pH、溫度以及營養(yǎng)物質(zhì)的消耗情況
解析:為了防止微生物的污染,在進(jìn)行液體深層培養(yǎng)前需要對(duì)發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基進(jìn)行嚴(yán)格滅菌;在培養(yǎng)厭氧微生物時(shí),前期密封保持無氧,后期可根據(jù)產(chǎn)物是否含有氣體決定是否放氣;發(fā)酵產(chǎn)品不同,分離、提純的方法不同,如果發(fā)酵產(chǎn)品是微生物細(xì)胞本身,可采用過濾、沉淀等方法將菌體分離和干燥,如果產(chǎn)品是代謝物,可用萃取、蒸餾、離子交換等方法進(jìn)行提取;營養(yǎng)物質(zhì)、pH、溫度等條件會(huì)影響微生物的代謝,所以液體深層培養(yǎng)過程中要密切關(guān)注培養(yǎng)液的pH、溫度以及營養(yǎng)物質(zhì)的消耗情況。
4.利用微生物分解纖維素對(duì)廢棄物污染的減輕和作物秸稈再利用具有重要意義。某興趣小組從富含纖維素的土壤中取樣,加入選擇培養(yǎng)基中進(jìn)行振蕩培養(yǎng),之后接種于鑒別培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),篩選出能夠分解纖維素的微生物。下列敘述錯(cuò)誤的是( C )
A.選擇培養(yǎng)的目的是促進(jìn)纖維素分解菌的生長,抑制其他微生物的
生長
B.振蕩培養(yǎng)可以增加溶解氧量,有利于微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的充分接觸和利用
C.鑒別培養(yǎng)基上涂布接種時(shí),將0.1 mL菌液滴到培養(yǎng)基表面再用接種環(huán)涂布均勻
D.加入剛果紅的培養(yǎng)基上所出現(xiàn)的有透明圈的菌落,可能是細(xì)菌或真菌繁殖而成
解析:選擇培養(yǎng)的原理是人為提供有利于目的菌生長的條件,同時(shí)抑制或阻止其他微生物的生長,因此選擇培養(yǎng)的目的是促進(jìn)纖維素分解菌的生長,抑制其他微生物的生長;振蕩培養(yǎng)可以增加溶解氧量,有利于微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的充分接觸和利用;鑒別培養(yǎng)基上涂布接種時(shí),將0.1 mL菌液滴到培養(yǎng)基表面再用涂布器涂布均勻;加入剛果紅的培養(yǎng)基上所出現(xiàn)的有透明圈的菌落是由能夠分解纖維素的微生物形成的,能夠分解纖維素的微生物既有真菌也有細(xì)菌。
5.(2023·山東泰安二模)野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長,氨基酸營養(yǎng)缺陷型突變株無法合成某種氨基酸,只能在完全培養(yǎng)基上生長。如圖為得到和純化某氨基酸營養(yǎng)缺陷型突變株的部分流程圖,①②③④代表培養(yǎng)基,A、B、C表示操作步驟,D、E為菌落。下列說法正確的是( D )
A.步驟B的操作是用涂布器把1 mL菌液均勻地涂布在②表面
B.步驟C操作時(shí)應(yīng)先將無菌絨布轉(zhuǎn)運(yùn)至④培養(yǎng)基上
C.圖中①②④為基本培養(yǎng)基,③為完全培養(yǎng)基
D.經(jīng)C過程原位影印及培養(yǎng)后,應(yīng)從培養(yǎng)基④中挑取D進(jìn)行純化培養(yǎng)
解析:步驟B操作是將0.1 mL菌液滴加到培養(yǎng)基表面,再用涂布器將菌液均勻地涂布在②表面;步驟C操作時(shí)應(yīng)先將無菌絨布轉(zhuǎn)運(yùn)到③基本培養(yǎng)基上,再轉(zhuǎn)運(yùn)到④培養(yǎng)基上,這樣可以保證③培養(yǎng)基中營養(yǎng)成分不被④影響;題圖中①②④中所有大腸桿菌都能生存,為完全培養(yǎng)基,③中突變的大腸桿菌不能生存,為基本培養(yǎng)基;從圖中可看出,D在基本培養(yǎng)基中無法生長,在完全培養(yǎng)基中可生長,說明D是某氨基酸營養(yǎng)缺陷型菌落,故經(jīng)C過程影印及培養(yǎng)后,可從④培養(yǎng)基中挑取D菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)。
6.(2023·湖南婁底二模)2021年6月,我國首個(gè)原創(chuàng)性抗體—藥物偶聯(lián)物(ADC)獲批上市。該藥采用人源化抗HER2抗體,通過可切割的接頭與高效毒性分子MMAE偶聯(lián)。ADC被腫瘤細(xì)胞內(nèi)吞后,載荷MMAE被釋放到細(xì)胞質(zhì)中后,可抑制細(xì)胞中微管蛋白聚合,進(jìn)而影響紡錘體的形成。下列敘述錯(cuò)誤的是( D )
A.傳統(tǒng)鼠源性單抗可能會(huì)引起人體產(chǎn)生相應(yīng)抗體進(jìn)而影響ADC的
效果
B.ADC中接頭穩(wěn)定性偏低會(huì)導(dǎo)致藥物分子脫落而對(duì)正常細(xì)胞造成損傷
C.連接抗體和MMAE的接頭可能在腫瘤細(xì)胞溶酶體中被蛋白酶破壞
D.MMAE可能抑制腫瘤細(xì)胞內(nèi)著絲粒分裂從而使其停滯在分裂中期
解析:傳統(tǒng)鼠源性單抗對(duì)人體來說是抗原,可能會(huì)引起人體產(chǎn)生相應(yīng)抗體,使得單抗藥物療效減弱,進(jìn)而影響ADC的效果;抗體—藥物偶聯(lián)物(ADC)是采用人源化抗HER2抗體,通過可切割的接頭與高效毒性分子MMAE偶聯(lián),因此ADC中接頭穩(wěn)定性偏低會(huì)導(dǎo)致藥物分子脫落而對(duì)正常細(xì)胞造成損傷,造成“脫靶毒性”;連接抗體和MMAE的接頭本質(zhì)是蛋白質(zhì),因此可能在腫瘤細(xì)胞溶酶體中被蛋白酶破壞;據(jù)題意可知,
ADC被腫瘤細(xì)胞內(nèi)吞后,可抑制細(xì)胞中微管蛋白聚合,進(jìn)而影響紡錘體的形成,導(dǎo)致紡錘絲無法牽拉染色體移向兩極,但不影響著絲粒的
分裂。
7.精子載體法是以精子作為載體攜帶外源基因進(jìn)入卵細(xì)胞的方法,利用該方法制備轉(zhuǎn)基因鼠的基本流程如圖。下列敘述正確的是( C )
A.導(dǎo)入外源基因的精子需放入ATP溶液中進(jìn)行獲能處理才具備受精能力
B.導(dǎo)入外源基因的精子和卵細(xì)胞經(jīng)過②過程后即轉(zhuǎn)化完成
C.過程③需將受精卵體外培養(yǎng)至桑葚胚或囊胚期才可進(jìn)行胚胎移植
D.過程④進(jìn)行同期發(fā)情處理以降低代孕母體對(duì)外來胚胎的免疫排斥反應(yīng)
解析:導(dǎo)入外源基因的精子需放入人工配制的獲能溶液中來模仿雌性生殖道內(nèi)的獲能環(huán)境,來達(dá)到獲能狀態(tài);目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為轉(zhuǎn)化,導(dǎo)入外源基因的精子和卵細(xì)胞經(jīng)過②過程后并不意味著轉(zhuǎn)化完成;通過體外受精技術(shù)獲得的胚胎,需在體外培養(yǎng)到桑葚胚或囊胚階段才可移植;④是胚胎移植過程,需要對(duì)供體和受體用相關(guān)激素進(jìn)行同期發(fā)情處理,保證胚胎移入相同的生理環(huán)境,受體(代孕母體)對(duì)移入子宮的外來胚胎基本不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。
8.(2023·湖南株洲一模)科研人員用電融合的方法誘導(dǎo)母羊的乳腺上皮細(xì)胞與另一只羊的去核卵細(xì)胞融合,然后將重構(gòu)胚移植到代孕母羊的體內(nèi),最終培育出了克隆羊多莉,下表是科學(xué)家獲得的部分實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),下列敘述錯(cuò)誤的是( D )
A.兩組羔羊的性狀基本與核供體相同
B.本實(shí)驗(yàn)涉及細(xì)胞培養(yǎng)、核移植和胚胎移植技術(shù)
C.②組比①組成功率高,可能因?yàn)榕咛ゼ?xì)胞分化程度低
D.①移植成功率較低可能是代孕母羊?qū)ε咛ギa(chǎn)生了免疫排斥反應(yīng)
解析:由于遺傳物質(zhì)主要在細(xì)胞核中,所以兩組羔羊性狀主要與核供體相同;本實(shí)驗(yàn)涉及細(xì)胞培養(yǎng)、核移植和胚胎移植技術(shù);②組比①組成功率高,可能因?yàn)榕咛ゼ?xì)胞分化程度低,全能性高;代孕母羊一般不會(huì)對(duì)移植來的胚胎產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)。
9.(2023·山東濟(jì)寧二模)為了解決雜交瘤細(xì)胞在傳代培養(yǎng)中出現(xiàn)來自B淋巴細(xì)胞的染色體丟失的問題,研究者除了用抗原刺激之外,還用EBV(一種病毒顆粒)感染動(dòng)物B淋巴細(xì)胞,并使之成為“染色體核型穩(wěn)定”的細(xì)胞株。上述細(xì)胞株能夠在HAT培養(yǎng)基中存活,但對(duì)烏苯苷(Oua)敏感,圖示為該實(shí)驗(yàn)操作示意圖。下列敘述合理的是( A )
A.雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體能針對(duì)相應(yīng)抗原而不針對(duì)EBV
B.導(dǎo)致EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞死亡的原因完全相同
C.HAT培養(yǎng)基和Oua篩選去除的均是未融合的EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞
D.滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理是促進(jìn)骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞核融合
解析:分析題意可知,本實(shí)驗(yàn)中EBV的作用是使B淋巴細(xì)胞染色體核型更穩(wěn)定,而不是刺激B淋巴細(xì)胞分化成漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體,所以該雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體能針對(duì)相應(yīng)抗原而不針對(duì)EBV;EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞由于對(duì)烏苯苷敏感而死亡,骨髓瘤細(xì)胞由于無法在HAT培養(yǎng)基上繁殖而死亡,二者死亡原因不同;HAT培養(yǎng)基去除的是未融合的骨髓瘤細(xì)胞和瘤—瘤融合細(xì)胞,烏苯苷(Oua)去除的是未融合的EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞和同種EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞融合的細(xì)胞;滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理是促進(jìn)骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞膜融合。
10.(2023·山東日照一模)研究人員利用植物體細(xì)胞雜交技術(shù),將培育的野生獼猴桃的單倍體的細(xì)胞與栽培二倍體獼猴桃細(xì)胞的原生質(zhì)體融合,獲得了三倍體植株,為其種質(zhì)改良開辟了新途徑。下列說法錯(cuò)誤的是( D )
A.原生質(zhì)體獲得后需要在等滲培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)
B.原生質(zhì)體融合時(shí)可采用高Ca2+—高pH法進(jìn)行誘導(dǎo)
C.三倍體植株的形成需經(jīng)過脫分化和再分化等培養(yǎng)過程
D.單倍體與二倍體能進(jìn)行基因交流,二者屬于同一物種
解析:因?yàn)樵|(zhì)體沒有細(xì)胞壁的保護(hù),所以需要在等滲培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng),防止細(xì)胞失水和吸水;誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的化學(xué)法包括聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2+—高pH融合法等;雜種細(xì)胞形成雜種植株需要利用植物組織培養(yǎng)技術(shù),涉及脫分化和再分化等培養(yǎng)過程;單倍體與二倍體不能進(jìn)行基因交流,二者不屬于同一物種。
11.(2023·重慶萬州模擬)某實(shí)驗(yàn)小組利用菜花進(jìn)行DNA的提取及電泳鑒定,并對(duì)菜花非常保守的葉綠體基因trnL進(jìn)行PCR擴(kuò)增。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是( C )
A.將預(yù)冷的酒精溶液加入菜花研磨濾液離心獲得的上清液中,靜置可見絲狀物
B.用二苯胺鑒定DNA時(shí),試管中溶液無藍(lán)色出現(xiàn)可能是DNA提取量過少或無
C.PCR反應(yīng)體系中必須含有trnL基因的引物、Ca2+、4種脫氧核糖核苷酸等成分
D.將混合液注入凝膠的加樣孔時(shí),需留一個(gè)加樣孔加入指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物
解析:DNA不溶于冷卻的酒精溶液,所以將預(yù)冷的酒精溶液加入菜花研磨濾液離心獲得的上清液中,靜置可見絲狀物;正常情況下二苯胺與DNA在沸水浴條件下反應(yīng)呈藍(lán)色,試管中溶液無藍(lán)色出現(xiàn),可能是DNA的提取量過少或未提取到DNA;利用PCR擴(kuò)增trnL基因,則反應(yīng)體系中應(yīng)含有trnL基因的引物、耐高溫的DNA聚合酶、模板、Mg2+、4種脫氧核糖核苷酸等成分,DNA聚合酶需要Mg2+激活,Ca2+不是必須加入的成分。
12.注射胰島素是治療1型糖尿病的主要手段。如圖是利用基因工程生產(chǎn)人胰島素的操作示意圖,下列敘述錯(cuò)誤的是( B )
A.通過過程⑤的重復(fù)進(jìn)行,可以短時(shí)間內(nèi)獲得大量的胰島素基因
B.以細(xì)胞1中提取的mRNA為模板,也可擴(kuò)增出胰高血糖素的基因
C.過程⑦將目的基因與基因載體相連,這是基因工程的核心步驟
D.丙中往往含標(biāo)記基因,便于篩選含胰島素基因的受體細(xì)胞
解析:⑤為PCR過程,表示目的基因的擴(kuò)增過程,通過過程⑤的重復(fù)進(jìn)行,可以短時(shí)間內(nèi)獲得大量的胰島素基因;細(xì)胞1中含胰島素mRNA,可知細(xì)胞1是胰島B細(xì)胞,由于基因的選擇性表達(dá),細(xì)胞1中不含胰高血糖素mRNA,不能擴(kuò)增出胰高血糖素的基因;⑦為基因表達(dá)載體的構(gòu)建,這是基因工程的核心步驟;丙重組質(zhì)粒中往往含標(biāo)記基因,便于篩選含胰島素基因的受體細(xì)胞。
13.(2023·福建莆田二模)乙肝病毒表面主蛋白是由H基因控制合成。下圖是將H基因?qū)肽辰湍妇a(chǎn)乙肝疫苗的過程。5′A和3′TT分別是該酵母菌中某基因的啟動(dòng)子和終止子,此啟動(dòng)子還能使外源基因在酵母菌中高效表達(dá),3′A是該基因下游的序列?？茖W(xué)家將改造過的P質(zhì)粒與H基因連接形成重組質(zhì)粒,再在重組質(zhì)粒特定部位酶切,形成的重組DNA片段可以整合到酵母菌染色體上,最終實(shí)現(xiàn)H基因的表達(dá)。下列敘述錯(cuò)誤的是( D )
A.構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí),可在H基因兩側(cè)分別接上SnaBⅠ和AvrⅡ的識(shí)別序列
B.步驟1中,將重組質(zhì)粒先導(dǎo)入大腸桿菌的目的是復(fù)制出大量重組
質(zhì)粒
C.步驟3中,用BglⅡ?qū)χ亟M質(zhì)粒進(jìn)行酶切可以獲得圖示的重組DNA片段
D.用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基可以篩選出含有H基因的酵母菌
解析:為實(shí)現(xiàn)H基因和P質(zhì)粒重組,可在H基因兩側(cè)接上限制酶SnaBⅠ和AvrⅡ的識(shí)別序列,然后用兩種限制酶分別切割質(zhì)粒和H基因,這樣設(shè)計(jì)的優(yōu)點(diǎn)是確保定向連接(避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化及反向連接);將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌,其目的是為了讓質(zhì)粒在大腸桿菌擴(kuò)增,來獲取大量重組質(zhì)粒;步驟3中,重組DNA片段首尾分別是5′A和3′A,只有用BglⅡ?qū)χ亟M質(zhì)粒進(jìn)行酶切才可以獲得圖示的重組DNA片段;重組DNA片段只含卡那霉素抗性基因,所以用含卡那霉素的培養(yǎng)基可以篩選出含有H基因的酵母菌。
二、非選擇題
14.一部手機(jī)上攜帶的細(xì)菌種類繁多,包括沙門氏菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、變形桿菌等,這已成為致病細(xì)菌傳播的重要途徑之一。為驗(yàn)證該觀點(diǎn),A、B兩地大學(xué)分別組織一組科研人員進(jìn)行實(shí)驗(yàn)調(diào)查。如圖是A組和B組的實(shí)驗(yàn)流程和實(shí)驗(yàn)結(jié)果。下表是2種可供選擇的培養(yǎng)基配方。
(1)經(jīng)發(fā)現(xiàn),手機(jī)上存在著大量的微生物,如酵母菌和綠膿桿菌等,這兩種微生物的主要區(qū)別是 。
(2)從物理性質(zhì)上看,題述兩種培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基,為達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康?應(yīng)選擇上表中的培養(yǎng)基 ,理由是
。
(3)為防止外來雜菌的入侵,對(duì)實(shí)驗(yàn)使用的培養(yǎng)基應(yīng)使用濕熱滅菌,下列所示的操作步驟的正確順序是( )
①讓壓力表的壓力降為零 ②加熱滅菌鍋,打開排氣閥,排除鍋內(nèi)冷空氣 ③打開排氣閥,排除鍋內(nèi)熱蒸汽 ④關(guān)閉排氣閥,讓鍋內(nèi)溫度上升 ⑤向滅菌鍋內(nèi)放入待滅菌物品 ⑥到達(dá)所需壓力時(shí),控制熱源,維持壓力
A.⑤①②④⑥③B.⑤②④⑥①③
C.⑤②④⑥③①D.⑤②⑥①④③
(4)如圖所示,A、B兩地的科研人員均完成了實(shí)驗(yàn),但實(shí)驗(yàn)結(jié)果卻完全不同?？蒲腥藛T推測(cè)可能A組的培養(yǎng)基被污染了,如何證明A組培養(yǎng)基是否被雜菌污染?

。
(5)取樣面積如圖所示,由于手機(jī)上存在各種微生物,為了準(zhǔn)確計(jì)數(shù)平板上的細(xì)菌數(shù)量,依據(jù)不同微生物具有不同的菌落特征如
(寫出兩點(diǎn)即可)等方面加以區(qū)分?？蒲腥藛T將上述菌懸液進(jìn)行梯度稀釋,取0.1 mL稀釋倍數(shù)為102的樣品接種到4個(gè)平板上,經(jīng)培養(yǎng)計(jì)數(shù),4個(gè)平板的細(xì)菌菌落數(shù)分別是108、10、105、102,則該取樣區(qū)域細(xì)菌密度約為 個(gè)/cm2。
解析:(1)酵母菌屬于真核生物,綠膿桿菌屬于原核生物,兩者最主要的區(qū)別在于酵母菌具有以核膜為界限的細(xì)胞核,而綠膿桿菌沒有以核膜為界限的細(xì)胞核(或是否有以核膜為界限的細(xì)胞核)。
(2)由于培養(yǎng)基配方中有瓊脂,所以從物理性質(zhì)上看,題述兩種培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基。由于培養(yǎng)基甲可滿足多種微生物的營養(yǎng)需要,而培養(yǎng)基乙缺乏氮源,不能滿足多種微生物的營養(yǎng)需要,所以應(yīng)選擇培養(yǎng)基甲進(jìn)行培養(yǎng),收集菌落。
(3)濕熱滅菌的步驟:向滅菌鍋內(nèi)放入待滅菌物品;加熱滅菌鍋,打開排氣閥,排除鍋內(nèi)冷空氣;關(guān)閉排氣閥,讓鍋內(nèi)溫度上升;到達(dá)所需壓力時(shí),控制熱源,維持壓力;讓壓力表的壓力降為零;打開排氣閥,排除鍋內(nèi)熱蒸汽,即操作順序應(yīng)為⑤②④⑥①③。
(4)證明A組培養(yǎng)基是否被雜菌污染的操作如下,將未接種的A組培養(yǎng)基在相同的條件下進(jìn)行培養(yǎng),如果未接種的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長,說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染,反之則說明培養(yǎng)基被雜菌
污染。
(5)可根據(jù)菌落的形狀、大小、顏色、隆起程度、邊緣等菌落特征區(qū)分菌落;根據(jù)題干數(shù)據(jù),取30～300個(gè)菌落的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),則該取樣區(qū)域細(xì)菌密度為(108+105+102)÷3÷0.1×10×102÷(7×15)=1×
104(個(gè)/cm2)。
答案:(1)酵母菌具有以核膜為界限的細(xì)胞核,而綠膿桿菌沒有以核膜為界限的細(xì)胞核(或是否有以核膜為界限的細(xì)胞核)
(2)固體 甲 培養(yǎng)基甲具有微生物生長所需要的各種營養(yǎng)物質(zhì),培養(yǎng)基乙缺乏氮源,不能滿足多種微生物的營養(yǎng)需要
(3)B
(4)將未接種的A組培養(yǎng)基在相同的條件下進(jìn)行培養(yǎng),如果未接種的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長,說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染,反之則說明培養(yǎng)基被雜菌污染
(5)菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色 1×104
15.(2023·湖南懷化二模)H18雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗人肝癌細(xì)胞單克隆抗體HAb18對(duì)人體肝癌的靶向治療具有重要的意義,但H18雜交瘤細(xì)胞在培養(yǎng)過程中的凋亡現(xiàn)象制約著細(xì)胞的高密度培養(yǎng)以及生產(chǎn)能力的提高。研究人員利用PCR獲得bclXL基因(抗凋亡基因),構(gòu)建
bclXL基因的真核表達(dá)載體,通過脂質(zhì)體法導(dǎo)入H18雜交瘤細(xì)胞,篩選出穩(wěn)定表達(dá)bclXL的H18.D4雜交瘤細(xì)胞,從而提高了大規(guī)模高密度培養(yǎng)下單克隆抗體HAb18的產(chǎn)量,流程如圖1?；卮鹣铝袉栴}。
(1)在無菌、無毒等適宜環(huán)境中進(jìn)行人肝癌細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)時(shí),需要定期更換培養(yǎng)液,目的是 。
圖1中步驟②向小鼠體內(nèi)注射人肝癌細(xì)胞懸液,間隔注射3次,其目的是 。
(2)利用PCR獲取bclXL基因,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示除bclXL基因條帶(引物與模板完全配對(duì)),還有2條非特異條帶(引物和模板不完全配對(duì))。為了減少反應(yīng)中非特異條帶的產(chǎn)生,可采取 的措施。
(3)構(gòu)建bclXL基因的真核表達(dá)載體,研究人員選擇了pEF質(zhì)粒作為載體,因?yàn)槠渚哂心鼙徽婧思?xì)胞識(shí)別的啟動(dòng)子,作用是
。
用脂質(zhì)體將真核表達(dá)載體導(dǎo)入H18雜交瘤細(xì)胞,質(zhì)粒被包在脂質(zhì)體
(填“雙分子層中”或“兩層磷脂分子之間”)。
(4)正丁酸鈉(NaBu)能誘導(dǎo)雜交瘤細(xì)胞凋亡。研究人員利用
0.4 mml/L的NaBu溶液分別誘導(dǎo)H18、H18.D4雜交瘤細(xì)胞凋亡,檢測(cè)細(xì)胞凋亡比例及抗體分泌量,結(jié)果如圖2。
根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可得到的結(jié)論是
。
解析:(1)細(xì)胞培養(yǎng)過程中可產(chǎn)生代謝物,培養(yǎng)液中的營養(yǎng)也會(huì)被消耗,定期更換培養(yǎng)液可以清除代謝物,防止代謝物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害,同時(shí)給細(xì)胞提供足夠的營養(yǎng);培育對(duì)肝癌細(xì)胞免疫的小鼠需在一定時(shí)間內(nèi)間隔注射3次人肝癌細(xì)胞懸液,其目的是增強(qiáng)免疫,刺激小鼠產(chǎn)生更多的能分泌抗人肝癌細(xì)胞抗體的B淋巴細(xì)胞。
(2)非特異性產(chǎn)物增加的原因可能是復(fù)性溫度過低造成引物與模板的結(jié)合位點(diǎn)增加,故可通過適當(dāng)提高復(fù)性的溫度來減少非特異條帶的
產(chǎn)生。
(3)啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn),用于驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄過程;重組質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞需要依賴膜融合,故質(zhì)粒被包在脂質(zhì)體雙分子層中。
(4)由圖分析,在0.4 mml/L的NaBu溶液中,相比于H18雜交瘤細(xì)胞,H18.D4雜交瘤細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯少得多,且抗體分泌量較多。
答案:(1)清除代謝物,防止細(xì)胞代謝物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害;補(bǔ)充營養(yǎng)物質(zhì) 刺激小鼠產(chǎn)生更多能分泌抗人肝癌細(xì)胞抗體的B淋巴細(xì)胞
(2)適當(dāng)提高復(fù)性溫度
(3)可被RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合,驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄 雙分子層中
(4)在0.4 mml/L的NaBu溶液中,相比于H18雜交瘤細(xì)胞,H18.D4雜交瘤細(xì)胞抗凋亡能力強(qiáng)且抗體分泌量多
16.(2023·湖南岳陽二模)玉米是重要的糧食作物,其葉片細(xì)胞中的P蛋白是一種水通道蛋白,由P基因編碼,在植物生長發(fā)育過程中對(duì)水分的吸收具有重要的調(diào)節(jié)功能?？蒲腥藛T成功培育出超量表達(dá)P蛋白的轉(zhuǎn)基因玉米,回答下列問題。
(1)利用PCR技術(shù)以圖1中的DNA片段為模板擴(kuò)增P基因,需要的引物有 (從A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選擇)。
(2)培育超量表達(dá)P蛋白的轉(zhuǎn)基因玉米過程中所用DNA片段和Ti質(zhì)粒的酶切位點(diǎn)如圖2所示(Ti質(zhì)粒上的TDNA可轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞,并整合到該細(xì)胞的染色體DNA上)。為使P基因在玉米植株中超量表達(dá),應(yīng)優(yōu)先選用 酶組合,理由是
;
不選用圖中其他限制酶的原因是
。
(3)將農(nóng)桿菌浸泡過的玉米愈傷組織去菌后進(jìn)行植物組織培養(yǎng),培養(yǎng)基中需加入 (填“潮霉素”“卡那霉素”或“潮霉素或卡那霉素”)進(jìn)行篩選。
(4)P蛋白在玉米株系的表達(dá)量如圖3所示,可作為超量表達(dá)P蛋白轉(zhuǎn)基因玉米的生理特性研究實(shí)驗(yàn)材料的有 。
解析:(1)引物需結(jié)合在模板鏈的3′端,因此需要的引物為B、C。
(2)為使P基因在玉米植株中超量表達(dá),則需要強(qiáng)啟動(dòng)子,因此應(yīng)優(yōu)先選用BamHⅠ和SacⅠ酶組合,原因是該兩種限制酶能將P基因和強(qiáng)啟動(dòng)子完整切割,且在與Ti質(zhì)粒連接的過程中可避免自身環(huán)化等問題;不選用圖中其他限制酶的原因是EcRⅠ和NtⅠ會(huì)破壞P基因,HindⅢ會(huì)將強(qiáng)啟動(dòng)子和P基因分離。
(3)由圖可知,TDNA上的標(biāo)記基因是潮霉素抗性基因,因此將農(nóng)桿菌浸泡過的玉米愈傷組織去菌后進(jìn)行植物組織培養(yǎng),培養(yǎng)基中需加入潮霉素進(jìn)行篩選。
(4)a4玉米株系的P蛋白表達(dá)量與野生型玉米差異不顯著,所以排除a4玉米株系,可作為超量表達(dá)P蛋白轉(zhuǎn)基因玉米的生理特性研究實(shí)驗(yàn)材料的有a1、a2、a3株系。
答案:(1)B、C
(2)BamHⅠ和SacⅠ 該兩種限制酶能將P基因和強(qiáng)啟動(dòng)子完整切割,且在與Ti質(zhì)粒連接的過程中可避免自身環(huán)化等問題 EcRⅠ和NtⅠ會(huì)破壞P基因,HindⅢ會(huì)將強(qiáng)啟動(dòng)子和P基因分離
(3)潮霉素
(4)a1、a2、a3株系實(shí)驗(yàn)組序號(hào)
①
②
核供體細(xì)胞
6歲母羊的乳腺上皮細(xì)胞
發(fā)育到第9天的早期胚胎細(xì)胞
融合成功細(xì)胞數(shù)
277
385
早期發(fā)育成功胚胎數(shù)
29
90
移植后成功懷孕母羊數(shù)/代孕母羊數(shù)
1/13
14/27
出生并成活羔羊數(shù)
1(多莉)
4
培養(yǎng)基
名稱
配方
培養(yǎng)基甲
牛肉膏5 g,蛋白胨10 g,NaCl 5 g,蒸餾水1 000 mL,瓊脂20 g
培養(yǎng)基乙
葡萄糖15 g,KH2PO4 1 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,KCl 0.5 g,
FeSO4·7H2O 0.01 g,蒸餾水1 000 mL,瓊脂20 g

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