第 = 1 \* ROMAN I卷 （選擇題，共50分）
一、單選題（共25題，每題2分）
1．某研究小組利用菜花為材料進(jìn)行“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．提取DNA時(shí)可加入酒精，使溶于酒精的蛋白質(zhì)等物質(zhì)溶解
B．使用玻璃棒時(shí)應(yīng)沿一個(gè)方向輕緩攪拌，便于DNA的析出并保持結(jié)構(gòu)完整
C．研磨液經(jīng)離心后靜置，上清液中會(huì)析出白色絲狀物
D．在沸水浴加熱條件下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色
2．生物技術(shù)的進(jìn)步在給人類帶來福祉的同時(shí)，會(huì)引起人們對(duì)其安全性的關(guān)注，也會(huì)與倫理道德發(fā)生碰撞，帶來新的倫理困惑與挑戰(zhàn)。下列對(duì)生物技術(shù)的安全性與倫理問題的說法錯(cuò)誤的是（ ）
A．“基因污染”的危害在于引起了遺傳物質(zhì)的改變，難以立即消除
B．轉(zhuǎn)基因技術(shù)本身是中性的，對(duì)人類的影響關(guān)鍵在于利用它的人
C．應(yīng)該通過立法，禁止生物武器的生產(chǎn)和擴(kuò)散
D．設(shè)計(jì)試管嬰兒技術(shù)是為了不生出患病的孩子，無需考慮性別
3．農(nóng)桿菌是一種生活在土壤中的微生物，能侵染雙子葉和裸子植物。當(dāng)植物受傷時(shí)，農(nóng)桿菌首先吸附于植物表面?zhèn)冢軅参锓置诘姆宇惢衔锟梢哉T導(dǎo)農(nóng)桿菌的Vir基因表達(dá)產(chǎn)生Vir蛋白。其中VirD1/D2蛋白復(fù)合體可將Ti質(zhì)粒上的一段T-DNA單鏈（T鏈）切下并形成VirD2-T鏈復(fù)合物。轉(zhuǎn)移至植物細(xì)胞中的VirD2-T鏈復(fù)合物結(jié)合VirE2等蛋白形成T復(fù)合體進(jìn)入細(xì)胞核，將T鏈隨機(jī)整合到染色體上。下列說法錯(cuò)誤的是（ ）
A．農(nóng)桿菌質(zhì)粒是一種能實(shí)現(xiàn)DNA轉(zhuǎn)移和整合的天然系統(tǒng)
B．Vir基因位于T-DNA中，其產(chǎn)物對(duì)T-DNA的轉(zhuǎn)移及整合必不可少
C．VirD1/D2蛋白復(fù)合體起到限制酶的作用
D．VirE2蛋白可能具有引導(dǎo)VirD2-T鏈復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞核的功能
4．噬菌體展示技術(shù)（如圖）可將某些蛋白質(zhì)呈遞至噬菌體表面，便于對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行篩選、鑒定。以下對(duì)該技術(shù)的分析錯(cuò)誤的是（ ）
A．該技術(shù)是將目的基因插入到噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置
B．該技術(shù)可對(duì)人和其他動(dòng)物的抗體庫進(jìn)行體外建庫篩選
C．可利用抗原—抗體雜交技術(shù)篩選目標(biāo)蛋白
D．通過該技術(shù)獲取抗體，需要用抗原免疫、細(xì)胞融合等步驟
5．我國(guó)科學(xué)家成功用誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）克隆出了活體小鼠，部分流程如下圖所示，其中Kdm4d為組蛋白去甲基化酶，TSA為組蛋白脫乙酰酶抑制劑。下列說法錯(cuò)誤的是（ ）

A．組蛋白乙酰化和去甲基化可以使生物發(fā)生可遺傳變化
B．①過程中小分子化合物能誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞脫分化為iPS細(xì)胞
C．③過程獲得的重構(gòu)胚細(xì)胞中的線粒體來自去核的卵母細(xì)胞
D．若④過程中對(duì)重構(gòu)胚進(jìn)行胚胎分割，移植后可獲得多只克隆鼠
6．DNA電泳是基因工程中最基本的技術(shù)，廣泛用于核酸等成分的分離和鑒定。下列關(guān)于電泳技術(shù)的敘述，錯(cuò)誤的是（ ）
A．凝膠的濃度也會(huì)影響DNA分子的遷移速率
B．瓊脂糖溶液中加入的核酸染料利于DNA在紫外燈下被檢測(cè)
C．制備瓊脂糖凝膠時(shí)，需待凝膠溶液完全冷卻后再加入適量的核酸染料攪拌混勻
D．一般情況下分子量較大的擴(kuò)增產(chǎn)物與點(diǎn)樣處的距離較小
7．傳染性早熟病毒（IPV）是一種導(dǎo)致羅氏沼蝦性早熟和生長(zhǎng)緩慢的新型病毒，主要侵染羅氏沼蝦的神經(jīng)組織。研究人員利用蝦類神經(jīng)細(xì)胞系培養(yǎng)技術(shù)來研究IPV病毒與宿主細(xì)胞的互作情況，如圖是部分培養(yǎng)過程。下列說法正確的是（ ）
A．乙過程加入木瓜蛋白酶是為了創(chuàng)造無菌、無毒的培養(yǎng)環(huán)境
B．戊過程屬于傳代培養(yǎng)過程，在該過程中可獲得蝦類神經(jīng)細(xì)胞系
C．丁過程會(huì)出現(xiàn)懸浮或貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞，可以直接采用離心法進(jìn)行收集
D．為避免培養(yǎng)過程中雜菌污染，丙、丁過程培養(yǎng)瓶蓋必須旋緊以防漏氣
8．科學(xué)家將細(xì)胞毒素與單克隆抗體結(jié)合制成抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC），ADC可以選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞，從而大大降低對(duì)健康細(xì)胞的毒害作用。其作用機(jī)制如圖所示。下列說法正確的是（ ）
A．制備單克隆抗體涉及的技術(shù)有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞核移植
B．ADC能實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷，其原理是抗體與藥物特異性結(jié)合
C．ADC經(jīng)胞吞進(jìn)入腫瘤細(xì)胞的過程需要載體蛋白參與并消耗能量
D．細(xì)胞毒素可能通過激活腫瘤細(xì)胞中凋亡基因的表達(dá)來殺傷腫瘤細(xì)胞
9．下圖是兩種二倍體植物細(xì)胞（甲、乙）融合并培育新植株的過程。下列說法錯(cuò)誤的是（ ）
A．過程④⑤⑥需要根據(jù)生長(zhǎng)發(fā)育進(jìn)程更換不同的培養(yǎng)基
B．過程⑥煉苗后的植株移栽到含有蔗糖和多種植物激素的基質(zhì)上
C．過程①可用酶解法去除細(xì)胞壁，過程③表示細(xì)胞壁的再生
D．過程②要用聚乙二醇等方法誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合，體現(xiàn)了細(xì)胞膜的流動(dòng)性
10．植物無糖組織培養(yǎng)技術(shù)，又稱光自養(yǎng)微繁殖技術(shù)，它以CO2代替糖作為植物體的碳源。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，該技術(shù)與傳統(tǒng)植物組織培養(yǎng)技術(shù)相比，能顯著提高苗的質(zhì)量和產(chǎn)苗率，縮短培養(yǎng)周期，降低生產(chǎn)成本。下列說法錯(cuò)誤的是（ ）
A．同一植物不同部位的細(xì)胞獲得的愈傷組織基因型相同
B．脫分化過程不只發(fā)生在植物組織離體培養(yǎng)過程中
C．CO2代替糖作為植物體的碳源，在一定程度上可以降低雜菌污染
D．植物無糖組織培養(yǎng)技術(shù)需加大培養(yǎng)室中空氣流動(dòng)，從而提高光合速率
11．青蒿素是目前世界上唯一有特效的抗瘧疾藥物，主要從黃花蒿的葉片中提取，但提取量很少。為了提高青蒿素的產(chǎn)量，科學(xué)家選取黃花蒿葉柄的幼嫩莖段進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)，發(fā)現(xiàn)它的愈傷組織中沒有青蒿素，但是由愈傷組織形成的芽和苗中均有少量青蒿素。下列說法正確的是（ ）
A．對(duì)所選取的黃花蒿葉柄的幼嫩莖段應(yīng)做徹底的滅菌處理
B．對(duì)分化培養(yǎng)基滅菌前需添加生長(zhǎng)素類、細(xì)胞分裂素類和赤霉素類等生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑
C．黃花蒿的愈傷組織中沒有青蒿素是因?yàn)橄嚓P(guān)基因沒有表達(dá)
D．生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素比值高時(shí)，可促進(jìn)愈傷組織再分化形成芽
12．不同的微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求各不相同。下列說法正確的是（ ）
A．微生物的培養(yǎng)基都需要加入水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，缺一不可
B．在培養(yǎng)霉菌時(shí)，一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱堿性
C．加入剛果紅的培養(yǎng)基只允許纖維素分解菌生長(zhǎng)，可借此分離該細(xì)菌
D．以尿素為唯一氮源且含酚紅的培養(yǎng)基可選擇和鑒別尿素分解菌
13．茄子褐紋病是一種由褐紋病菌引起的病害，給茄子的生長(zhǎng)和產(chǎn)量造成很大的影響?？蒲腥藛T通過篩選出對(duì)褐紋病菌有較強(qiáng)拮抗作用的微生物，制備生物農(nóng)藥，用于防治茄子褐紋病。其實(shí)驗(yàn)主要流程如下：①茄子褐紋病菌的分離純化和菌種保存；②土壤根系微生物的分離純化和菌種保存；③抑菌圈試驗(yàn)篩選較強(qiáng)拮抗作用的根系微生物菌株和菌種保存。（抑菌圈是一個(gè)以待測(cè)微生物菌落為圓心的圓，其周圍細(xì)菌生長(zhǎng)受到抑制而形成的透明圈）。下列說法錯(cuò)誤的是（ ）
A．接種前將滅菌的培養(yǎng)基放置一段時(shí)間，目的是檢測(cè)培養(yǎng)基滅菌是否合格
B．②步驟中，對(duì)土壤溶液進(jìn)行梯度稀釋后再涂布的目的是便于計(jì)數(shù)
C．抑菌圈試驗(yàn)所用的瓊脂平板應(yīng)該含有茄子褐紋病菌，且該病菌在瓊脂中分布均勻
D．培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察并比較抑菌圈的大小，抑菌圈越大則說明拮抗作用越強(qiáng)
14．在傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)中，果醋的制作往往在果酒制作基礎(chǔ)上進(jìn)行。下列關(guān)于家庭制作葡萄酒和葡萄醋過程的敘述，正確的是（ ）
A．制作葡萄酒前，需反復(fù)沖洗葡萄以避免雜菌污染
B．酵母菌與醋酸菌呼吸作用產(chǎn)生CO2的場(chǎng)所始終相同
C．發(fā)酵初期不通氣，轉(zhuǎn)為醋酸發(fā)酵后，適當(dāng)通氣并適當(dāng)提高溫度
D．在O2和糖源充足時(shí)，醋酸菌能將酒精先轉(zhuǎn)化為乙醛，再將乙醛轉(zhuǎn)化為醋酸
15．《齊民要術(shù)》中關(guān)于用白菜等原料腌漬泡菜的方法記錄如下：收菜時(shí)，即擇取好者，作鹽水，令極咸，于鹽水中洗菜，即內(nèi)甕中，其洗菜鹽水，澄取清者泄于甕中。發(fā)酵數(shù)日后可得到酸脆可口的泡菜。下列說法正確的是（ ）
A．“洗菜鹽水，澄取清者泄于甕中”，有利于保留部分乳酸菌
B．腌制泡菜的早期有一些氣體產(chǎn)生，需定期打開蓋子排出
C．將鹽水煮沸和保持壇蓋邊沿的水槽中始終有水，都是為了避免雜菌污染
D．泡菜中亞硝酸鹽的含量在發(fā)酵過程中會(huì)不斷下降，腌制溫度和時(shí)間對(duì)其有影響
16．某小組為了探究不同手機(jī)屏幕的細(xì)菌分布情況進(jìn)行了如圖所示的兩組實(shí)驗(yàn)。下列相關(guān)敘述正確的是（ ）
A．該實(shí)驗(yàn)是為了探究細(xì)菌分布情況，所以取樣前取樣工具不需要進(jìn)行無菌處理
B．取適量菌懸液接種到培養(yǎng)基中，需要將培養(yǎng)基正放培養(yǎng)一定時(shí)間
C．該實(shí)驗(yàn)中使用的接種方法一般不可以用來統(tǒng)計(jì)手機(jī)屏幕上的細(xì)菌數(shù)量
D．兩組結(jié)果不同可能與取樣環(huán)境、手機(jī)使用者的使用習(xí)慣等有關(guān)
17．通過核移植等技術(shù)獲得克隆哺乳動(dòng)物（二倍體）的一般流程如圖所示。下列說法錯(cuò)誤的是（ ）
A．從哺乳動(dòng)物卵巢中采集到的卵母細(xì)胞直接進(jìn)行過程①
B．過程①表示去核，去除的就是卵母細(xì)胞的紡錘體一染色體復(fù)合物
C．過程②構(gòu)建的重構(gòu)胚具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力
D．可以通過乙醇、蛋白酶合成抑制劑等方法激活重構(gòu)胚
18．犬細(xì)小病毒（CPV）主要感染幼犬，傳染性極強(qiáng)，被感染個(gè)體死亡率也高。利用小鼠制備抗CPV單克隆抗體的基本流程如圖所示。下列敘述正確的是（ ）
A．用抗CPV抗體對(duì)疑似感染CPV的幼犬進(jìn)行檢測(cè)依據(jù)的是DNA復(fù)制的原理
B．注射CPV后，從小鼠脾臟中獲得的B淋巴細(xì)胞均可以產(chǎn)生抗CPV抗體
C．過程②可以利用一定方法誘導(dǎo)細(xì)胞融合，得到的一定是雜交瘤細(xì)胞
D．體外培養(yǎng)能產(chǎn)生抗CPV抗體的雜交瘤細(xì)胞，可獲取大量抗CPV單克隆抗體
19．下圖表示四倍體蘭花葉片植物組織培養(yǎng)的過程，下列相關(guān)敘述不正確的是（ ）
A．此蘭花的花藥離體培養(yǎng)獲得的植株為二倍體植株
B．通過消毒和無菌操作避免①②過程發(fā)生雜菌污染
C．需用生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)調(diào)控①②過程D．在②③過程中基因進(jìn)行選擇性表達(dá)
20．利用甲（2n=20）、乙（2n=40）兩種植物的各自優(yōu)勢(shì)，通過植物細(xì)胞工程技術(shù)培育高產(chǎn)、耐鹽的雜種植株的實(shí)驗(yàn)流程如圖所示。下列相關(guān)敘述正確的是（ ）
A．a(chǎn)處理有時(shí)會(huì)使用牛消化道提取液，說明提取液中含有纖維素酶和果膠酶
B．b形成的標(biāo)志是出現(xiàn)新的細(xì)胞壁，該階段體現(xiàn)了細(xì)胞膜的流動(dòng)性和植物細(xì)胞的全能性
C．c是愈傷組織經(jīng)脫分化和再分化后得到的具有耐鹽性狀的幼芽
D．d植株為二倍體雜種植株，具有甲、乙兩個(gè)親本的遺傳特征
21．PCR引物的3'端為結(jié)合模板DNA的關(guān)鍵，5'端無嚴(yán)格限制，可用于添加限制酶切點(diǎn)等序列，dNTP是DNA合成的原料，還可供能。下列相關(guān)說法錯(cuò)誤的是（ ）
A．圖示環(huán)節(jié)所需的溫度比下一個(gè)環(huán)節(jié)的低
B．引物的設(shè)計(jì)要有一段已知目的基因的核苷酸序列
C．TaqDNA聚合酶只能從引物的3'端開始延伸DNA鏈
D．1個(gè)循環(huán)后，兩個(gè)子代DNA分子的脫氧核苷酸數(shù)量相同
22．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化其水解。將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入菊花體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A．將幾丁質(zhì)酶基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上構(gòu)建基因表達(dá)載體
B．可通過顯微注射法將農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花受體細(xì)胞
C．可用PCR等技術(shù)檢測(cè)目的基因是否成功導(dǎo)入
D．可用真菌接種實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因菊花對(duì)真菌的抗性程度
23．纖維素酶廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品發(fā)酵、造紙、廢水處理等領(lǐng)域。研究人員利用蛋白質(zhì)工程將細(xì)菌纖維素酶的相應(yīng)氨基酸替換后，纖維素酶熱穩(wěn)定性得到了提高。下列有關(guān)該技術(shù)的說法，正確的是（ ）
A．改造后的纖維素酶的較高熱穩(wěn)定性不可遺傳
B．對(duì)纖維素酶的改造需要以基因工程為基礎(chǔ)C．改造纖維素酶無需構(gòu)建基因表達(dá)載體
D．對(duì)纖維素酶的改造是通過直接改造mRNA實(shí)現(xiàn)的
24．DNA瓊脂糖凝膠電泳的分子篩選效應(yīng)是指作為支持介質(zhì)的瓊脂糖，具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，使大分子物質(zhì)在通過時(shí)受到較大阻力，借此分離不同大小的DNA片段。下列說法錯(cuò)誤的是（ ）
A．瓊脂糖凝膠電泳可用于分離、鑒定DNA分子的混合物
B．洋蔥研磨液需要用濾紙過濾，以保證提取的DNA量
C．凝膠制備中加入的核酸染料能與DNA分子結(jié)合，用于分離后DNA的檢測(cè)
D．用二苯胺試劑鑒定DNA時(shí)，需沸水浴加熱冷卻后再觀察顏色變化
25．四種限制酶的切割位點(diǎn)如圖所示，下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）

A．上圖中SmaⅠ、EcRV兩種酶切割后的DNA片段不能用E．cliDNA連接酶連接
B．圖中SmaⅠ、EcRV兩種酶切割后的DNA片段，可以用T4 DNA連接酶連接
C．DNA連接酶催化目的基因片段與質(zhì)粒載體片段連接的化學(xué)鍵是磷酸二酯鍵
D．限制酶能識(shí)別特定的核苷酸序列，有專一性，不同的限制酶切割不能產(chǎn)生相同的黏性末端
第 = 2 \* ROMAN II卷 （非選擇題，共50分）
26．微生物馴化是指在微生物培養(yǎng)過程中，逐步加入某種物質(zhì)，讓其逐漸適應(yīng)，從而得到對(duì)此物質(zhì)高耐受或能降解該物質(zhì)的微生物?？蒲腥藛T現(xiàn)采用微生物馴化結(jié)合傳統(tǒng)接種的方法篩選能高效降解有機(jī)磷農(nóng)藥——敵敵畏的微生物，并設(shè)計(jì)了如下實(shí)驗(yàn)流程。請(qǐng)據(jù)此回答以下問題：
(1)已知馴化培養(yǎng)基成分為蛋白胨、葡萄糖、氯化鈉、磷酸二氫鉀、水等，馴化時(shí)逐步加入的物質(zhì)X是 。依照物理性質(zhì)劃分，馴化培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基，其中蛋白胨可提供 （至少答兩點(diǎn)）。
(2)用于篩選的樣品應(yīng)來自 的土壤。將馴化后的微生物接種于培養(yǎng)基B的方法為 。
(3)將培養(yǎng)基B中分離得到的單菌落分別接種于以敵敵畏為唯一碳源的培養(yǎng)基C，培養(yǎng)24小時(shí)后，通過測(cè)定培養(yǎng)基中 ，可篩選分解敵敵畏能力較強(qiáng)的微生物。為統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)基C中的微生物數(shù)量，在如圖所示的稀釋度下涂布了4個(gè)平板培養(yǎng)基D，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)分別為250、247、312、253，測(cè)得培養(yǎng)基C中菌落數(shù)為1.25×107個(gè)/mL，則涂布的菌液Y為 mL。該統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目 （填“多”或“少”），理由是 。
27．隨著生物科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，動(dòng)物的生殖方式變得越來越多樣化。如圖是胚胎工程技術(shù)研究及應(yīng)用的相關(guān)情況，供體1是良種荷斯坦高產(chǎn)奶牛，供體2是健康的黃牛，請(qǐng)據(jù)圖分析并回答下列問題。
(1)圖中產(chǎn)生小牛的幾個(gè)途徑中，屬于有性繁殖途徑的為應(yīng)用 (填數(shù)字)。
(2)應(yīng)用1中，通過電融合法使A、B兩細(xì)胞融合，供體核進(jìn)入卵母細(xì)胞，形成 ，最終發(fā)育的良種小牛性別為 (選填雌性或雄性)。
(3)應(yīng)用2過程中得到的胚胎應(yīng)該移植到 的雌性動(dòng)物體內(nèi)。在應(yīng)用2、3、4中，若要使精子和卵母細(xì)胞在體外成功結(jié)合，需要對(duì)精子進(jìn)行 處理。
(4)通過應(yīng)用1和應(yīng)用2得到的胚胎，其核遺傳物質(zhì)在來源上的區(qū)別是 。
(5)應(yīng)用3可解決良種動(dòng)物快速大量繁殖的問題：對(duì)囊胚階段的胚胎通過胚胎分割技術(shù)獲得二分胚①和②，操作時(shí)需要注意 ，否則會(huì)影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。
(6)應(yīng)用4中細(xì)胞進(jìn)行定向誘導(dǎo)，可分化形成各種組織和器官，說明胚胎干細(xì)胞具有 。
28．下圖1、2分別是單克隆抗體制備過程和克隆羊培育過程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問題：
(1)圖1和圖2所示的過程中，都必須用到的動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)手段是 。
(2)獲取小鼠新鮮的骨髓瘤組織，在37℃下用 消化30-40分鐘形成分散細(xì)胞。
(3)圖1中②過程常在 (生物法)誘導(dǎo)下完成，兩兩融合形成的細(xì)胞共有 種，所以需要利用 培養(yǎng)基篩選出既能無限增殖又能分泌抗體的 細(xì)胞。單克隆抗體與常規(guī)的血清抗體相比，最大的優(yōu)越性是 。
(4)圖2 克隆羊“多莉”從理論上證明了 ；若不考慮變異及環(huán)境因素的影響，親代和其克隆子代性狀 (填“是”或“不是”)完全相同的，原因是 。
29．為研究干旱脅迫基因LEA和VOC對(duì)甘藍(lán)型油菜油脂的積累機(jī)制，科研人員構(gòu)建了兩個(gè)基因表達(dá)載體。其中基因LEA與熒光素酶基因（Luc）構(gòu)建成基因表達(dá)載體甲，基因VOC和標(biāo)記基因構(gòu)建成基因表達(dá)載體乙，相關(guān)序列及酶切位點(diǎn)如圖所示。箭頭表示轉(zhuǎn)錄方向。
(1)利用PCR擴(kuò)增LEA基因時(shí)，需要在引物的 （填“3'端”或“5'端”）添加限制酶識(shí)別序列，添加序列對(duì)應(yīng)的限制酶是 ，若產(chǎn)物中除了目的基因外有其他DNA片段存在，從引物角度考慮，原因可能是 。
(2)為了構(gòu)建基因表達(dá)載體甲，依據(jù)圖中已知堿基序列，在PCR擴(kuò)增儀中加入的引物的堿基序列為5'- -3'和5' -3'?；虮磉_(dá)載體中啟動(dòng)子的作用是 。
(3)常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胗筒耸荏w細(xì)胞，依據(jù)農(nóng)桿菌的侵染特點(diǎn)，目的基因?qū)⒉迦隩i質(zhì)粒的 上，經(jīng)過轉(zhuǎn)化作用，進(jìn)入油菜細(xì)胞，并將其插入 ，從而使其得以維持穩(wěn)定和表達(dá)。
(4)乙酰-CA羧化酶基因（AC）是油脂合成過程的關(guān)鍵酶基因，甘油三酯酯酶基因（ATGL）是油脂分解過程的關(guān)鍵酶基因。將基因表達(dá)載體甲、乙分別導(dǎo)入植物細(xì)胞培養(yǎng)成轉(zhuǎn)基因植物A、B，在干旱脅迫的環(huán)境下培養(yǎng)兩種轉(zhuǎn)基因植物和正常植物，分別檢測(cè)植物體內(nèi)AC和ATGL基因的表達(dá)水平，結(jié)果如下圖。
①在分子水平上，用 方法檢測(cè)AC酶和ATGL酶的含量可得到上述表格結(jié)果。
②基于以上研究，干旱脅迫基因LEA和VOC在甘藍(lán)型油菜油脂積累中的機(jī)制是 。
30．近年來，我國(guó)科研 工作者在國(guó)際上首次利用體細(xì)胞成功創(chuàng)建克隆獼猴中 中、華華和夢(mèng)夢(mèng)。體細(xì)胞克隆猴的誕生，是人類認(rèn)識(shí)克隆技術(shù)，研究細(xì)胞功能和治療性克隆的里程碑式研究結(jié)果。同時(shí)，也是人類干細(xì)胞研究方興未艾事業(yè)的一個(gè)開始?？寺∩鲜霁J猴的操作流程如圖1。與此同時(shí)，我國(guó)科研人員利用大鼠、小鼠兩個(gè)遠(yuǎn)親物種創(chuàng)造出世界首例異源二倍體胚胎干細(xì)胞（AdESCs），操作流程如圖2。請(qǐng)回答下列問題：

(1)利用 酶處理一只流產(chǎn)獼猴胎兒的皮膚，獲取分散的成纖維細(xì)胞，制備細(xì)胞懸液。然后放入氣體條件是 的恒溫箱中培養(yǎng)。
(2)請(qǐng)你推測(cè)圖1中注入的神秘濃度比的藥物的作用是 ，注入細(xì)胞的方法是
(3)通常情況下，卵母細(xì)胞要發(fā)育到減數(shù)第 次分裂中期時(shí)才適合核移植，早期胚胎要發(fā)育到 時(shí)才適合進(jìn)行胚胎移植。
(4)我們大膽推測(cè)，通過體細(xì)胞克隆猴的研究，將來會(huì)找到讓高度分化的人體細(xì)胞逆向生成 的方法，進(jìn)而誘導(dǎo)克隆出 用于替換人體相應(yīng)病變的結(jié)構(gòu)
(5)圖2過程涉及的現(xiàn)代生物技術(shù)有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、早期胚胎培養(yǎng)和 不用大鼠和小鼠直接交配制備異源二倍體胚胎干細(xì)胞的原因是二者之間存在
正常植株
轉(zhuǎn)基因A植株
轉(zhuǎn)基因B植株
AC酶
ATGL酶
參考答案：
1．C2．D3．B4．D5．A6．C7．B8．D9．B10．A11．C12．D13．B14．C15．A16．D17．A18．D19．A20．A
21．D22．B23．B24．B25．D
26．(1)敵敵畏 液體 碳源、氮源（和維生素）
(2) （常年）施用敵敵畏 平板劃線法
(3) 敵敵畏的剩余量 0.2 少 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落
27．(1)應(yīng)用2(2) 重構(gòu)胚 雌性
(3)同種的、生理狀態(tài)相同 獲能
(4)應(yīng)用1獲得的小牛細(xì)胞核遺傳物質(zhì)來自供體1；應(yīng)用2獲得的小牛核遺傳物質(zhì)一半來自供體1、一半來自優(yōu)良公牛。
(5)將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行均等分割(6)發(fā)育的全能性
28．(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)(2)胰蛋白酶或膠原蛋白酶
(3)滅活病毒 3 選擇 雜交瘤 特異性強(qiáng)，靈敏度高，可大量制備
(4)動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性 不是 克隆羊的細(xì)胞質(zhì)基因來自①羊。
29．(1) 5'端 EcR V和Xbal 引物特異性差，引物GC含量太低
(2) -GATATCATGGGC- -TCTAGACTAGTG- 啟動(dòng)和調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄
(3) T-DNA 染色體DNA
(4)抗原-抗體雜交 LEA通過促進(jìn)AC的表達(dá)使植物油脂增加；VOC通過抑制ATGL的表達(dá)從而減弱油脂的降低
30．(1)胰蛋白酶（或膠原蛋白酶） 95%空氣和5%的CO2
(2)激活重構(gòu)胚， 使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程 顯微注射法
(3)二 桑椹胚或囊胚(4)胚胎干細(xì)胞 相應(yīng)器官
(5)動(dòng)物細(xì)胞融合（孤雌單倍體胚胎干細(xì)胞和孤雄單倍體胚胎干細(xì)胞融合） 生殖隔離

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