一、單選題
1．下列關(guān)于傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)敘述錯誤的是( )
A.制作泡菜利用了乳酸菌的乳酸發(fā)酵
B.酵母菌在無氧條件下利用葡萄汁產(chǎn)生酒精
C.醋酸菌在無氧條件下利用乙醇產(chǎn)生乙酸
D.制作腐乳利用了毛霉等微生物的蛋白酶
2．《舌尖上的中國》講述四川泡菜時曾強調(diào)“腌泡菜也有大講究”。下列有關(guān)泡菜制作的敘述，錯誤的是( )
A.蔬菜應(yīng)新鮮，若放置時間過長，蔬菜中的亞硝酸鹽含量會升高
B.制作泡菜時泡菜壇要密封，主要是為乳酸菌的生長繁殖創(chuàng)造無氧條件
C.泡菜制作過程中食鹽用量過低易造成雜菌大量繁殖
D.將配制好的鹽水煮沸后冷卻待用，冷卻的目的是降低水中氧氣的含量
3．微生物接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。下列關(guān)于這兩種接種方法的敘述,錯誤的是( )
A.都能用于微生物的計數(shù)B. 都只能用于固體培養(yǎng)基接種
C.接種培養(yǎng)后均可獲得單個菌落D.接種工具使用后都需要滅菌
4．下列有關(guān)平板劃線操作的敘述,錯誤的是( )
A. 將接種環(huán)放在火焰上灼燒,直到接種環(huán)燒紅
B. 接種環(huán)在平板上隨機劃線時不要劃破培養(yǎng)基
C. 在沾取菌液前后均要將盛有菌液的試管口通過火焰
D. 平板冷卻后倒置,放入恒溫箱中培養(yǎng)
5．取9個潔凈培養(yǎng)皿,均分為3組(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),各組分別加入等量的不同培養(yǎng)基,每個平板均接種0.1 mL大腸桿菌菌液,37 ℃培養(yǎng)36 h后,統(tǒng)計菌落數(shù)(見下表)。下列相關(guān)敘述錯誤的是( )
A.Ⅰ組和Ⅱ組說明維生素可以促進(jìn)大腸桿菌生長繁殖
B.Ⅱ組和Ⅲ組說明大腸桿菌的正常生長需要葡萄糖
C.3組實驗均采用了稀釋涂布平板法,以便菌落計數(shù)
D.3組實驗所使用的培養(yǎng)基均需62 ℃、30 min滅菌
6．下列關(guān)于細(xì)胞工程的敘述,正確的是( )
A.細(xì)胞核移植和細(xì)胞融合技術(shù),都改變了細(xì)胞中的染色體數(shù)目
B.用酒精對植物組織培養(yǎng)的材料表面進(jìn)行消毒時,需要長時間浸潤
C.經(jīng)細(xì)胞核移植培育出的新個體只具有一個親本的遺傳性狀
D.通過組織培養(yǎng)可以迅速獲得大量脫毒植物幼苗
7．我國科學(xué)家培育“熒光小鼠”的技術(shù)流程時如下圖所示。圖中字母表示的有關(guān)技術(shù)或原理,匹配錯誤的是( )
A.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法B.核移植C.有絲分裂D.胚胎移植
8．下列關(guān)于基因工程的敘述,錯誤的是( )
A.載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)
B.限制性內(nèi)切核酸酶能識別特定的核苷酸序列,而DNA連接酶不能識別
C.人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原不具有生物活性
D. 終止密碼子不屬于基因表達(dá)載體的組成部分
9．下圖為利用胚胎干細(xì)胞進(jìn)行治療性克隆的基本過程。下列相關(guān)敘述正確的是( )
A.正常情況下,②中去核的卵細(xì)胞為處于MⅠ期的卵母細(xì)胞
B.從結(jié)構(gòu)與功能相適應(yīng)的角度分析,胚胎干細(xì)胞分裂能力強,細(xì)胞核小
C.利用胚胎干細(xì)胞發(fā)展而來的治療性克隆需要嚴(yán)格監(jiān)督
D. 在③構(gòu)建的重組細(xì)胞發(fā)育的過程中,細(xì)胞開始分化發(fā)生在桑葚胚期
10．下列有關(guān)蛋白質(zhì)工程的敘述,錯誤的是( )
A.蛋白質(zhì)工程發(fā)展的基礎(chǔ)是基因工程
B.蛋白質(zhì)工程是從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā),找到并改變相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列,獲得所需要的蛋白質(zhì)的過程
C.T4溶菌酶中引入二硫鍵提高了它的熱穩(wěn)定性,是蛋白質(zhì)工程應(yīng)用的體現(xiàn)
D.蛋白質(zhì)工程只能改造現(xiàn)有的蛋白質(zhì),不能制造新的蛋白質(zhì)
11．植物在生長發(fā)育過程中，需要不斷從環(huán)境中吸收水。下列有關(guān)植物體內(nèi)水的敘述，錯誤的是( )
A.細(xì)胞的有氧呼吸過程不消耗水但能產(chǎn)生水
B.結(jié)合水是植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)的重要組成成分
C.根系吸收的水有利于植物保持固有姿態(tài)
D.越冬的植物體內(nèi)自由水與結(jié)合水的比值下降，利于越冬
12．無機鹽是生物體的組成成分，對維持生命活動有重要作用。下列敘述錯誤的是( )
A.適當(dāng)補充I-，可預(yù)防缺碘引起的甲狀腺功能減退癥
B.Mg2+存在于葉綠體的類胡蘿卜素中
C.血液中Ca2+含量過低，人體易出現(xiàn)肌肉抽搐
D.對體液pH起著重要的調(diào)節(jié)作用
13．下列有關(guān)限制酶和DNA連接酶的敘述正確的是( )
A.用限制酶酶切獲得一個外源基因時得到兩個切口，有2個磷酸二酯鍵被斷開
B.限制酶識別序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越大
C.序列—CATG↓—和—G↓GATCC—被限制酶切出的黏性末端堿基數(shù)不同
D.T4DNA連接酶和E·cliDNA連接酶都能催化平末端和黏性末端的連接
14．在“DNA的粗提取與鑒定”實驗中，甲、乙、丙、丁四個小組除表中所列處理方法不同外，其他操作步驟均正確，但實驗結(jié)果卻不同。下列有關(guān)敘述不正確的是( )
A.實驗材料選擇錯誤的組別是丙
B.沸水浴后試管中溶液顏色變藍(lán)的組別是甲、丁
C.甲組實驗現(xiàn)象不明顯的原因是25 ℃的酒精對DNA的凝集效果差
D.乙組實驗不成功僅因為在鑒定時加入了雙縮脲試劑
15．一片沼澤地中含有多種微生物，下列有關(guān)敘述正確的是( )
A.病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，在活細(xì)胞內(nèi)增殖
B.酵母菌有細(xì)胞壁和擬核，屬于單細(xì)胞原核生物
C.藍(lán)細(xì)菌在物質(zhì)循環(huán)中發(fā)揮重要作用
D.硝化細(xì)菌含染色質(zhì)，是該生態(tài)系統(tǒng)的消費者
16．在食品工業(yè)、生物制藥治理環(huán)境污染等方面然的微生物的參與，下列關(guān)于生物的敘述，不正確的是( )
A.乳酸菌細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄和翻譯能同時進(jìn)行
B.酵母菌和大腸桿菌都有細(xì)胞壁和生物膜系統(tǒng)
C.顫藻細(xì)胞內(nèi)沒有葉綠體，但能進(jìn)行光合作用
D.破傷風(fēng)桿菌屬于原核生物，不能發(fā)生染色體變異
二、填空題
17．C、H、O、N、P、S在玉米和人細(xì)胞（干）以及活細(xì)胞中的含量（%）如下表，請分析回答下列問題：
（1）以上元素在活細(xì)胞中的含量明顯比人細(xì)胞（干）多的是氧元素和氫元素，發(fā)生差異的原因是活細(xì)胞中含量最多的化合物是_______。這兩種元素在人體細(xì)胞干重中主要存在于_______中。
（2）由表中數(shù)據(jù)可以看出在玉米細(xì)胞（干）中所占比例明顯高于人細(xì)胞（干）的元素是氧，發(fā)生這種差異的一個主要原因是組成玉米細(xì)胞的化合物中_______較多，此類化合物由_______（元素）組成。
（3）大豆收獲后，要進(jìn)行晾曬才能入倉儲存，所除去的水分主要是細(xì)胞中的_______水。將曬干的大豆種子加熱，除去的水是細(xì)胞中的_______水。
（4）植物細(xì)胞內(nèi)自由水與結(jié)合水的比值越_______，則細(xì)胞的代謝越強。
18．研究表明，芒果廢棄物中較難分解的成分為纖維素。合理選擇并使用纖維素降解微生物對減輕芒果廢棄物污染和資源浪費是一項重大突破。已知剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不與水解后的纖維二糖、葡萄糖等發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們在含有纖維素的培養(yǎng)基中加剛果紅時，剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物;而當(dāng)纖維素被纖維素分解菌分解后，復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以這些菌為中心的透明圈。為選擇并培養(yǎng)能夠分解芒果中纖維素的細(xì)菌，某科研小組進(jìn)行了如下操作。請分析回答相關(guān)問題:
(1)對配制的培養(yǎng)基用__________________滅菌效果最好，目的是________________________。
(2)取10g樣品，放入盛有30mL選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，振蕩培養(yǎng)1-2d，增加溶氧量，目的是________________________;然后采用__________________法將微生物接種到固體培養(yǎng)基上，該方法統(tǒng)計樣品的菌落數(shù)目比活菌的實際數(shù)目____________（填“多”或“少”）。
(3)待菌群生長后，挑取不同形態(tài)特征的菌落分離，接種至以______________為唯一碳源的培養(yǎng)基上，加入能與培養(yǎng)基中的碳源形成紅色復(fù)合物的剛果紅;一段時間后應(yīng)挑選形成______________的菌落來選纖維素分解菌。
三、讀圖填空題
19．圖1表示利用生物技術(shù)制備抗X的單克隆抗體的過程;圖2表示體外受精培育優(yōu)質(zhì)奶牛的過程;圖3表示番茄和馬鈴薯植物細(xì)胞融合和再生植株的過程。請據(jù)圖回答下列問題。
圖1
圖2
圖3
(1)圖1中融合后的細(xì)胞經(jīng)過多次篩選才能獲得理想的細(xì)胞,此類細(xì)胞的特點是____________________________________________。該過程所用的生物技術(shù)有___________________________________________。
(2)圖2中參與體外受精的精子需要經(jīng)過______________的過程,才能與卵子受精。若要獲得多頭與此優(yōu)質(zhì)奶牛相同的小牛,可對圖2囊胚中的______________均等分割后進(jìn)行胚胎移植。以上技術(shù)是在___________ (填“體內(nèi)”或“體外”)完成的。
(3)圖3中過程①是植物細(xì)胞形成__________________的階段,該階段所用的酶是_________________________________。在形成再生植株的過程中與組織培養(yǎng)有相似之處的步驟是___________ (填序號)。
20．某研究機構(gòu)利用細(xì)菌將人的血清白蛋白基因?qū)胨倔w內(nèi),借助水稻合成了人的血清白蛋白,這種蛋白質(zhì)和人體自然產(chǎn)生的血清白蛋白是完全一致的,這一成果轟動了生物界。結(jié)合圖示回答轉(zhuǎn)基因水稻培育過程的相關(guān)問題。
(1)②過程常用的方法是____________，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時需將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的___________中。
(2)③經(jīng)歷的生理過程主要有脫分化和___________兩個階段。培育出轉(zhuǎn)基因水稻完整個體所依據(jù)的生物學(xué)原理是_________________________________。
(3)基因工程的最后步驟是目的基因的檢測與鑒定,在此步驟可對培育的植株進(jìn)行分子水平的檢測,可通過___________等技術(shù)檢測人血清白蛋白基因是否插入水稻細(xì)胞染色體DNA上及該基因是否__________出mRNA，通過___________技術(shù)檢測人血清白蛋白基因是否翻譯成血清白蛋白。
21．圖1是某基因工程中構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程示意圖，載體質(zhì)粒P0具有四環(huán)素抗性基因（tetr)和氨芐青霉素抗性基因（ampr）。請回答下列問題：
（1）EcR V酶切位點為，EcR V酶切出來的線性載體P1為___________末端。
（2）用Taq DNA聚合酶進(jìn)行PCR擴增獲得的目的基因片段，其兩端各自帶有一個腺嘌呤脫氧核苷酸。載體P1用酶處理，在兩端各添加了一個堿基為__________的脫氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在__________酶作用下，形成重組質(zhì)粒P3。
（3）為篩選出含有重組質(zhì)粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板進(jìn)行篩選，得到A、B、C三類菌落，其生長情況如下表（“+”代表生長，“﹣”代表不生長）。根據(jù)表中結(jié)果判斷，應(yīng)選擇的菌落是__________（填表中字母）類，另外兩類菌落質(zhì)粒導(dǎo)入情況分別是______________________、____________________。
（4）為鑒定篩選出的菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質(zhì)粒，擬設(shè)計引物進(jìn)行PCR鑒定。圖2所示為甲、乙、丙3條引物在正確重組質(zhì)粒中的相應(yīng)位置，PCR鑒定時應(yīng)選擇的一對引物是__________。某學(xué)生嘗試用圖中另外一對引物從某一菌落的質(zhì)粒中擴增出了400bp片段，原因是____________________________。
參考答案
1．答案：C
解析：醋酸菌在有氧條件下可利用乙醇產(chǎn)生乙酸。
2．答案：D
解析：鹽水煮沸后冷卻的目的是避免高溫殺死乳酸菌，D錯誤。
3．答案：A
解析：平板劃線法和稀釋涂布平板法都可用于分離菌種,獲得單菌落,但平板劃線法不能進(jìn)行計數(shù),稀釋涂布平板法可用于微生物計數(shù), A錯誤。
4．答案：B
解析：A、將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅，以達(dá)到徹底滅菌效果，A正確；
B、用接種環(huán)在培養(yǎng)基上劃線時，應(yīng)把培養(yǎng)基劃分成多個首尾相連的區(qū)域。在每次劃線時要劃三至五條平行線，劃線位置不是隨機的，B錯誤；
C、在沾取菌液前后均要將盛有菌液的試管口通過火焰，防止雜菌污染，C正確；
D、為了避免培養(yǎng)基被污染和防止培養(yǎng)基水分過快揮發(fā)，應(yīng)將平板冷卻后倒置放入恒溫箱中培養(yǎng)，D正確。
故選B。
5．答案：D
解析：三組實驗所使用的培養(yǎng)基均需要高壓蒸汽滅菌，D錯誤
6．答案：D
解析：A項，細(xì)胞核移植未改變細(xì)胞染色體的數(shù)目，細(xì)胞融合技術(shù)含有2個親本的遺傳物質(zhì)，染色體數(shù)目改變，A錯誤；
B項，用酒精消毒30s后用水清洗即可，B錯誤；
C項，經(jīng)過細(xì)胞核移植培育的新個體具有兩個親本的遺傳物質(zhì)，C錯誤；
D項，用莖尖、根尖等分生組織進(jìn)行組織培養(yǎng)，可以迅速獲得大量脫毒苗，D正確。
7．答案：A
解析：A項，目的基因?qū)雱游锛?xì)胞的方法是顯微注射法，A錯誤；
B項，含目的基因的細(xì)胞核與去核的卵母細(xì)胞通過核移植技術(shù)形成重組細(xì)胞，B正確；
C項，重組細(xì)胞發(fā)育成早期胚胎的過程進(jìn)行有絲分裂，C正確；
D項，早期胚胎需要通過胚胎移植技術(shù)移植到受體子宮內(nèi)發(fā)育成個體，D正確。
8．答案： A
9．答案： C
10．答案： D
11．答案：A
解析：細(xì)胞的有氧呼吸第二階段消耗水,第三階段產(chǎn)生水, A錯誤。
12．答案：B
解析：?Mg2+存在于葉綠體的葉綠素中,類胡蘿卜素中不含Mg2+,B錯誤。
13．答案：B
解析：A、用限制酶剪切獲得一個目的基因時得到兩個切口，有4個磷酸二酯鍵被水解，A錯誤；
B、限制性核酸內(nèi)切酶識別序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越大，B正確；
C、-CATG↓-和-G↓GATCC-序列被限制酶切出的黏性末端堿基數(shù)相同，都是4個，C錯誤；
D、T4DNA連接酶和E·cliDNA連接酶都能催化黏性末端的連接，只有T4DNA連接酶還可以連接平末端，D錯誤。
故選B。
14．答案： D
解析：雞血、菜花中都含有DNA，而豬是哺乳動物，其成熟的紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核和各種細(xì)胞器，不含DNA，因此實驗材料選擇錯誤的組別是丙，A正確；甲、乙、丁組的實驗材料中都含有DNA，但乙組為植物，將植物細(xì)胞放入蒸餾水中時，植物細(xì)胞不會吸水漲破，且DNA應(yīng)該用二苯胺試劑鑒定，而不能用雙縮脲試劑鑒定，因此沸水浴后試管中溶液顏色變藍(lán)的組別是甲、丁，B正確、D錯誤。
15．答案： C
16．答案：B
解析：A、乳酸菌為原核生物，無核膜，故細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄和翻譯可同時進(jìn)行，A正確；
B、生物膜系統(tǒng)包括細(xì)胞膜、細(xì)胞器膜和核膜，大腸桿菌為原核生物，細(xì)胞內(nèi)無核膜和眾多細(xì)胞器膜，故不具備生物膜系統(tǒng)，B錯誤；
C、顫藻屬于藍(lán)藻，為原核生物，沒有葉綠體，但含有光合作用有關(guān)的酶和色素（葉綠素和藻藍(lán)素），能進(jìn)行光合作用，C正確；
D、破傷風(fēng)桿菌屬于原核生物，細(xì)胞中無染色體，不能發(fā)生染色體變異，D正確。
故選B。
17．答案：（1）水；蛋白質(zhì)
（2）糖類；C、H、O
（3）自由；結(jié)合
（4）大
解析：（1）活細(xì)胞中含量最多的化合物是水，高達(dá)80%～90%；在人體細(xì)胞干物質(zhì)中，蛋白質(zhì)的含量最高，因此干物質(zhì)中氧元素和氫元素主要存在于蛋白質(zhì)中。
（2）由表中數(shù)據(jù)可以看出在玉米細(xì)胞（干）中所占比例明顯高于人細(xì)胞（干）的元素是氧，發(fā)生這種差異的一個主要原因是組成玉米細(xì)胞的化合物中糖類（或淀粉）較多，此類化合物由C、H、O組成。
（3）大豆收獲后，要進(jìn)行晾曬才能入倉儲存，所除去的水分主要是細(xì)胞中的自由水。將曬干的大豆種子加熱，除去的水是細(xì)胞中的結(jié)合水。
（4）植物細(xì)胞內(nèi)自由水與結(jié)合水的比值越高，則細(xì)胞的代謝越強，抗逆性越差。
18．答案：（1）高壓蒸汽；殺死所有微生物，包括芽孢和孢子
（2）增加纖維素分解菌的濃度； 稀釋涂布平板；少
（3）纖維素；透明圈
解析：(1)高壓蒸汽滅菌不僅可以殺死細(xì)菌、真菌等微生物，還可以殺死芽孢和孢子等抗逆性強的繁殖體，所以滅菌效果較好。對配制的培養(yǎng)基滅菌一般采用高壓蒸汽滅菌效果最好，目的是殺死所有微生物，包括芽孢和孢子。
(2)振蕩培養(yǎng)可以增加溶氧量，菌種分離純化前，先用液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的濃度，以確保后續(xù)操作能夠分離到所需菌種;分離純化的過程中一般采用固體培養(yǎng)基，接種方法有平板劃線和稀釋涂布平板法。只有稀釋涂布平板法可以計數(shù)。統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)少，因為當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。
(3)要篩選分解纖維素的分解菌，所以培養(yǎng)基要以纖維素為唯一碳源，培養(yǎng)基中還要加入能與培養(yǎng)基中的碳源形成紅色復(fù)合物的剛果紅，一段時間后如果菌落周圍出現(xiàn)透明圈，說明纖維素被分解。
19．答案：(1)既能迅速大量增殖又能產(chǎn)生抗X的抗體;動物細(xì)胞融合技術(shù)和動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
(2)獲能;內(nèi)細(xì)胞團;體外
(3)原生質(zhì)體;纖維素酶和果膠酶；④⑤(⑥)
解析：(1)圖1是制備抗X抗原的單克隆抗體的過程，要想獲得分泌抗X抗原的抗體，需要對小鼠注射相應(yīng)的抗原即X抗原。融合后經(jīng)篩選的細(xì)胞為雜交瘤細(xì)胞，具備雙親細(xì)胞的遺傳特性，此類細(xì)胞的特點是既能無限增殖又能產(chǎn)生抗X的抗體;兩類細(xì)胞融合需要細(xì)胞融合技術(shù)，雜交瘤細(xì)胞在體內(nèi)或體外培養(yǎng)，需要細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，所以該過程所用的生物技術(shù)有動物細(xì)胞融合技術(shù)和動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。
(2)圖2精子需要成熟和獲能的過程才具備受精的能力;若要獲得多頭與此優(yōu)質(zhì)奶牛相同的小牛，可以在體外進(jìn)行胚胎分割，胚胎分割需要對囊胚中內(nèi)細(xì)胞團均分;以上操作過程都在體外進(jìn)行。
(3)圖3所示為植物體細(xì)胞雜交和植物組織培養(yǎng)過程，體細(xì)胞雜交的第一步就是制備原生質(zhì)體;植物細(xì)胞壁成分主要是纖維素和果膠，可以利用纖維素酶和果膠酶將植物細(xì)胞壁分解掉，進(jìn)而形成原生質(zhì)體。
20．答案：（1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；T-DNA
（2）再分化；植物細(xì)胞的全能性
（3）PCR ；轉(zhuǎn)錄；抗原—抗體雜交
解析：(1)②過程是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入水稻細(xì)胞，常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法;將目的基因插入農(nóng)桿菌T質(zhì)粒的T-DNA中，以利于T-DNA將目的基因轉(zhuǎn)入到植物的染色體上。
(2)③經(jīng)歷的生理過程主要有脫分化(變成愈傷組織)和再分化(形成相應(yīng)的細(xì)胞);將植物細(xì)胞發(fā)育成完整個體依據(jù)的是植物細(xì)胞的全能性。
(3) PCR可以檢測目的基因是否轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞，若成功轉(zhuǎn)入目的基因，則加入相應(yīng)的引物，則PCR能擴增出產(chǎn)物;基因形成RNA的過程稱為轉(zhuǎn)錄;抗原-抗體雜交可以用來檢測目的基因是否表達(dá)成功，即是否有相應(yīng)的蛋白質(zhì)。
21．答案：（1）平
（2）胸腺嘧啶（T）；DNA連接
（3）B；A類菌落含有P0 ；C類菌落未轉(zhuǎn)入質(zhì)粒
（4）乙丙；目的基因反向連接
解析：（1）本題考查基因工程的相關(guān)知識,意在考查考生的理解能力和獲取信息能力。EcR V酶切位點在酶所識別序列的中心軸線處,產(chǎn)生的是平末端。
（2）DNA連接酶對平末端的連接效率較低,因此通常要將平末端改造成黏性末端后再進(jìn)行連接。由于目的基因片段的兩端各自帶一個腺嘌呤脫氧核苷酸,根據(jù)堿基互補配對原則,處理后的質(zhì)粒兩端需要各添加一個堿基為胸腺嘧啶的脫氧核苷酸;要將處理后的質(zhì)粒與目的基因連接起來,需要用DNA連接酶。
（3）由于四環(huán)素抗性基因中含有EcR V酶識別的序列及切割位點,所以形成的重組質(zhì)粒中四環(huán)素抗性基因已經(jīng)被破壞,而氨芐青霉素抗性基因正常。根據(jù)表中結(jié)果可知,A菌落抗氨芐青霉素和四環(huán)素,說明A菌落中導(dǎo)入的是P0質(zhì)粒;B菌落抗氨芐青霉素而不抗四環(huán)素,說明B菌落中導(dǎo)入的是重組質(zhì)粒;C菌落既不抗氨芐青霉素,也不抗四環(huán)素,說明C菌落中沒有導(dǎo)入質(zhì)粒。
（4）由于處理后的P0質(zhì)粒的兩個末端都含一個胸腺嘧啶的脫氧核苷酸,而目的基因片段的兩端各自帶一個腺嘌呤脫氧核苷酸,所以目的基因在和P0質(zhì)粒連接時可能會出現(xiàn)兩種情況:正向連接和反向連接。分析圖2可知,理論上可以選擇的引物組合有甲和丙、乙和丙兩種情況。如果選擇甲和丙這對引物,則無論目的基因是否正確插入,擴增的片段都是50 bp+300 bp+ 100 bp=450 bp,不符合要求;如果選擇乙和丙這對引物,正向連接和反向連接后所得結(jié)果不同,所以應(yīng)選擇乙和丙這對引物進(jìn)行PCR鑒定。如果目的基因和P0質(zhì)粒反向連接,則引物乙會出現(xiàn)在重組質(zhì)粒的外側(cè),此時若加入引物甲和乙,則可以擴增出300 bp+100 bp=400 bp的片段。
組別
培養(yǎng)基
平均菌落數(shù)
1
2
3
Ⅰ
瓊脂、葡萄糖、NH4NO3
30
31
27
Ⅱ
瓊脂、葡萄糖、NH4NO3、維生素
169
178
193
Ⅲ
瓊脂、NH4NO3、維生素
0
0
1
組別
實驗
材料
提取核物質(zhì)時加入的溶液
去除雜質(zhì)時加
入的溶液
DNA鑒定時加
入的試劑
甲
雞血
蒸餾水
體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精(25 ℃)
二苯胺試劑
乙
菜花
蒸餾水
體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精(冷卻)
雙縮脲試劑
丙
豬血
蒸餾水
體積分?jǐn)?shù)為95%
的酒精(冷卻)
二苯胺試劑
丁
雞血
蒸餾水
體積分?jǐn)?shù)為95%
的酒精(冷卻)
二苯胺試劑
元素
O
C
H
N
P
S
玉米細(xì)胞（干）
44.43
43.57
6.24
1.46
0.20
0.17
人細(xì)胞（干）
14.62
55.99
7.46
9.33
3.11
0.78
活細(xì)胞
65.0
18.0
10.00
3.0
1.40
0.30
菌落類型
平板類型
A
B
C
無抗生素
+
+
+
氨芐青霉素
+
+
-
四環(huán)素
+
-
-
氨芐青霉素+四環(huán)素
+
-
-

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