與PCR技術相關的生物學科素養(yǎng)主要體現(xiàn)角度：
1．生命觀念主要體現(xiàn)
(1)物質(zhì)與能量觀：PCR擴增目的基因需要模板、原料并消耗能量。
(2)結構與功能觀：PCR儀、微量移液管、微量離心管等的使用以及注意事項。
2．科學思維主要體現(xiàn)
(1)歸納與概括：比較PCR技術和DNA體內(nèi)復制的異同。
(2)分析與推理：PCR技術中引物的選取。
3．科學探究主要體現(xiàn)
(1)實驗操作能力：探究DNA片段的擴增及電泳實驗中PCR反應體系的配方的配制以及實驗流程中的動手操作能力。
(2)實驗現(xiàn)象的觀察、分析能力：對DNA片段的擴增及電泳實驗結果的觀察、分析。
4．社會責任主要體現(xiàn)
PCR擴增的用途包括獲取目的基因、對感染疾病(核酸檢測)的診斷等。
(2023·廣東卷)種子大小是作物重要的產(chǎn)量性狀。研究者對野生型擬南芥(2n＝10)進行誘變，篩選到一株種子增大的突變體。通過遺傳分析和測序，發(fā)現(xiàn)野生型DA1基因發(fā)生一個堿基G到A的替換，突變后的基因為隱性基因，據(jù)此推測突變體的表型與其有關，開展相關實驗。
回答下列問題：
(1)擬采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將野生型DA1基因轉(zhuǎn)入突變體植株，若突變體表型確由該突變造成，則轉(zhuǎn)基因植株的種子大小應與________植株的種子大小相近。
(2)用PCR反應擴增DA1基因，用限制性內(nèi)切核酸酶對PCR產(chǎn)物和________進行切割，用DNA連接酶將兩者連接。為確保插入的DA1基因可以正常表達，其上下游序列需具備______________________。
(3)轉(zhuǎn)化后，TDNA(其內(nèi)部基因在減數(shù)分裂時不發(fā)生交換)可在基因組單一位點插入也可以同時插入多個位點。在插入片段均遵循基因分離及自由組合定律的前提下，選出單一位點插入的植株，并進一步獲得目的基因穩(wěn)定遺傳的植株(如圖1)，用于后續(xù)驗證突變基因與表型的關系。
①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化T0代植株并自交，將T1代種子播種在選擇培養(yǎng)基上，能夠萌發(fā)并生長的陽性個體即表示其基因組中插入了________。
②T1代陽性植株自交所得的T2代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基，選擇陽性率約________%的培養(yǎng)基中幼苗繼續(xù)培養(yǎng)。
③將②中選出的T2代陽性植株________(填“自交”“與野生型雜交”或“與突變體雜交”)所得的T3代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基，陽性率達到________%的培養(yǎng)基中的幼苗即為目標轉(zhuǎn)基因植株。為便于在后續(xù)研究中檢測該突變，研究者利用PCR擴增野生型和突變型基因片段，再使用限制性內(nèi)切核酸酶X切割產(chǎn)物，通過核酸電泳即可進行突變檢測，相關信息見圖2，在電泳圖中將酶切結果對應位置的條帶涂黑。
解析：(1)根據(jù)題干信息可知，突變后的基因為隱性基因，則野生型DA1基因為顯性基因，因此采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將野生型DA1基因轉(zhuǎn)入突變體植株，若突變體表型確由該突變造成，則轉(zhuǎn)基因植株的種子大小應與野生型植株的種子大小相近。(2)利用PCR技術擴增DA1基因后，應該用同種限制性內(nèi)切酶核酸對DA1基因和運載體進行切割，再用DNA連接酶將兩者連接起來；在基因表達載體中，啟動子位于目的基因的首端，終止子位于目的基因的尾端，因此為確保插入的DA1基因可以正常表達，其上下游序列需具備啟動子和終止子。(3)①根據(jù)題干信息和圖形分析，將T0代植株的花序浸沒在農(nóng)桿菌(TDNA上含有DA1基因和卡那霉素抗性基因)液中轉(zhuǎn)化，再將獲得的T1代種子播種在選擇培養(yǎng)基(含有卡那霉素)上，若在選擇培養(yǎng)基上有能夠萌發(fā)并生長的陽性個體，則說明含有卡那霉素抗性基因，即表示其基因組中插入DA1基因和卡那霉素抗性基因。②T1代陽性植株都含有DA1基因，由于TDNA(其內(nèi)部基因在減數(shù)分裂時不發(fā)生交換)可在基因組單一位點插入也可以同時插入多個位點，所以不確定是單一位點插入還是多位點插入，若是單一位點插入，相當于一對等位基因的雜合子，其自交后代應該出現(xiàn)3∶1的性狀分離比，而題干要求選出單一位點插入的植株，因此應該選擇陽性率約75%的培養(yǎng)基中幼苗繼續(xù)培養(yǎng)。③將以上獲得的T2代陽性植株自交，再將得到的T3代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基上，若某培養(yǎng)基上全部為具有卡那霉素抗性的植株即為需要選擇的植株，即陽性率達到100%的培養(yǎng)基中的幼苗即為目標轉(zhuǎn)基因植株。根據(jù)圖形分析，野生型和突變型基因片段的長度都是150bp，野生型的基因沒有限制酶X的切割位點，而突變型的基因有限制酶X的切割位點，結合圖中的數(shù)據(jù)分析可知電泳圖中，野生型只有150bp，突變型有50bp和100bp，如圖：
答案：(1)野生型
(2)運載體 啟動子和終止子
(3)①DA1基因和卡那霉素抗性基因 ②75 ③自交 100 圖見解析
1．(2023·廣東梅州大埔縣虎山中學校考模擬預測)新冠病毒的抗原性與感染性與其表面的S蛋白(刺突糖蛋白)密切相關，現(xiàn)利用基因工程的方法生產(chǎn)相關疫苗。圖甲為構建S蛋白基因表達載體的過程，圖乙為重組質(zhì)粒被相關酶切后的電泳結果。請回答下列問題。
(1)①過程所使用的酶為______，為保證PCR技術擴增S蛋白基因正常進行，該反應體系的主要成分有________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
PCR技術中低溫復性的目的是__________________。
(2)通過PCR技術可在cDNA分子中專一性擴增出S蛋白基因，其原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
PCR過程經(jīng)過4次循環(huán)，需要的引物的數(shù)量是________個。
(3)構建好的重組質(zhì)粒長度共2 000bp，用限制酶HindⅢ及限制酶HindⅢ和BamHⅠ分別對重組質(zhì)粒進行切割并電泳，結果如圖乙所示，可推測BamHⅠ在重組質(zhì)粒上有______個酶切位點。
(4)腺病毒疫苗進入人體后，S蛋白基因利用人體細胞的蛋白質(zhì)表達系統(tǒng)指導S蛋白的合成，其過程是________________________(用文字和箭頭表示)。
解析：(1)①過程是利用RNA合成DNA的過程，是逆轉(zhuǎn)錄，需要逆轉(zhuǎn)錄酶，PCR過程中，其反應體系的主要成分有模板DNA、脫氧核苷酸、引物、耐高溫的DNA聚合酶；低溫復性的目的是讓引物結合到互補DNA鏈。(2)由于在PCR技術中引物是根據(jù)S蛋白基因的一段已知序列設計合成的，所以能夠?qū)Ｒ恍缘臄U增出S蛋白基因。PCR技術大量擴增目的基因時，緩沖液中需要加入的引物個數(shù)計算公式為2n＋1－2，因此若一個該DNA分子在PCR儀中經(jīng)過4次循環(huán)，需要24＋1－2＝30個引物。(3)用HindⅢ將質(zhì)粒2 000bp切割后形成了形成了200bp、400bp和1 400bp共3個片段，而用HindⅢ和BamHⅠ將質(zhì)粒切割后形成了200bp、420bp、560bp的片段，2 000＝420×2＋560＋200×3，所以一共形成了6個片段，因此有5個酶切位點，因此BamHⅠ在重組質(zhì)粒上有5－2＝3個酶切位點。(4)腺病毒載體重組新型冠狀病毒疫苗中決定S蛋白產(chǎn)生的為cDNA，S蛋白的產(chǎn)生包括以DNA的一條鏈為模板合成mRNA的轉(zhuǎn)錄過程和以mRNA為模板合成蛋白質(zhì)的翻譯過程，其過程如下：S蛋白的cDNA→轉(zhuǎn)錄→mRNA→翻譯→蛋白。
答案：(1)逆轉(zhuǎn)錄酶 模板DNA、脫氧核苷酸、引物、耐高溫的DNA聚合酶 引物結合到互補DNA鏈
(2)引物是根據(jù)S蛋白基因的一段已知序列設計合成的 30
(3)3
(4)S蛋白的cDNA→轉(zhuǎn)錄→mRNA→翻譯→蛋白
2．(2023·廣東統(tǒng)考模擬預測)DNA條形碼相當于物種的身份證，是利用短的標準DNA片段對物種進行快速鑒定的新技術，在發(fā)現(xiàn)新物種、保護野生動物、監(jiān)督外來入侵物種等方面有重要作用。該技術的主要步驟為提取樣本DNA、PCR擴增、產(chǎn)物測序及序列比對，最后將結果提交至DNA序列數(shù)據(jù)庫。線粒體細胞色素C氧化酶亞基Ⅰ(COXⅠ)被公認為動物DNA標準條形碼片段并得到廣泛應用。
(1)如何判斷兩個生物是否為同一物種？________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
但該方法不適用于只能進行無性生殖的生物，DNA條形碼正好可彌補這一缺陷。
(2)采用稀釋涂布平板法和平板劃線法能將單個微生物分散在固體培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)獲得單菌落，最終通過觀察菌落的____________等特征來進行初步的物種鑒定。
(3)已知某種動物COXⅠ基因單鏈的核苷酸序列(虛線處省略了部分序列)為5′—GGTCAACAA…TGAAGTTTA—3′，利用PCR擴增COXⅠ基因時所需的引物序列為(已知引物的長度為9個核苷酸)________________________________和________________________________，所需的酶為______________________________，該酶在實際PCR過程中的最適溫度為________。
(4)擴增得到的PCR產(chǎn)物在測序之前一般先通過________對產(chǎn)物進行初步鑒定，在凝膠中DNA分子的遷移速率與
________________________________________________________________________
等有關，加樣之前需要將PCR產(chǎn)物與________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
混合，再用微量移液器將混合液緩慢注入凝膠的加樣孔內(nèi)。
解析：(1)能夠在自然狀態(tài)下相互交配并且產(chǎn)生可育后代的一群生物稱為一個物種，不同物種間一般是不能相互交配的，即使交配成功，也不能產(chǎn)生可育的后代。(2)采用平板劃線法和稀釋涂布平板法能將單個微生物分散在固體培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)獲得單菌落。一般來說，在相同的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征，通過觀察菌落的形狀、大小和顏色等特征可初步進行物種鑒定。(3)由于子鏈合成的方向是從子鏈的5′端向3′端延伸，引物選擇如箭頭所示，，根據(jù)堿基互補配對原則，引物為5′—GGTCAACAA—3′和5′—TAAACTTCA—3′。PCR不需要DNA解旋酶，但需要耐高溫的DNA聚合酶，該酶在實際PCR過程中的最適溫度為72℃。(4)瓊脂糖凝膠電泳可對DNA分子進行鑒定，也可實現(xiàn)樣品中各種分子的分離。電泳過程中不同DNA分子產(chǎn)生的不同的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構象等有關，加樣之前需要將PCR產(chǎn)物與凝膠載樣緩沖液(內(nèi)含指示劑)混合，再用微量移液器將混合液緩慢注入凝膠的加樣孔內(nèi)，凝膠載樣緩沖液中的指示劑可以顯示電泳過程，以便適時終止電泳。
答案：(1)能相互交配且能產(chǎn)生可育后代，則為同一物種；若不能交配或交配后不能產(chǎn)生可育后代，則為不同物種
(2)形狀、大小和顏色
(3)5′－GGTCAACAA－3′ 5′－TAAACTTCA－3′ 耐高溫的DNA聚合酶 72 ℃
(4)瓊脂糖凝膠電泳 凝膠的濃度、DNA分子的大小和構象 凝膠載樣緩沖液(內(nèi)含指示劑)
3．(2023·廣東一模)表面展示技術是通過重組DNA技術，將外源蛋白與細胞表面的蛋白質(zhì)組裝成融合蛋白，從而可展示在細胞表面?；卮鹣铝袉栴}。
(1)若要將芽孢表面蛋白基因ctB與外源的綠色熒光蛋白基因gfp構建成基因表達載體，下圖中最適合通過綠色熒光(綠色熒光蛋白在紫外光下會產(chǎn)生綠色熒光)確定融合蛋白成功表達的是____。
注：Ampr為氨卡青霉素抗性基因；→表示轉(zhuǎn)錄方向；UAG，UAA，UGA是終止密碼子，AUG是起始密碼子。
(2)芽孢表面蛋白是實現(xiàn)表面展示技術的關鍵蛋白，結合上述材料，試分析該蛋白在表面展示技術中的作用是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)導入基因表達載體后的芽孢桿菌接種在含有____________的固體培養(yǎng)基上，以獲得攜帶載體的單菌落，該過程被稱為微生物的____培養(yǎng)。
(4)培養(yǎng)基中可能既有含基因表達載體的單菌落，也有含________的單菌落，因此還需要對DNA進行提取，常用酒精初步分離DNA和蛋白質(zhì)，這里酒精的作用原理是________________________________________________________________________
______________。
(5)若要確定表面展示技術在芽孢桿菌上構建成功，應在紫外光環(huán)境下對其進行______水平的檢測。
解析：(1)若要將芽孢表面蛋白基因ctB與外源的綠色熒光蛋白基因gfp構建成基因表達載體，則需要將ctB和gfp一起表達，即使用一個啟動子和終止子，并且ctB在前，gfp在后，才能通過綠色熒光(綠色熒光蛋白在紫外光下會產(chǎn)生綠色熒光)確定融合蛋白成功表達，為了能夠順利表達gfp則中間不能出現(xiàn)終止密碼子，轉(zhuǎn)錄時模板鏈的方向應是3′到5′，D中mRNA中間會出現(xiàn)終止密碼。只有C項符合題意，C項正確。(2)蛋白在表面展示技術中的作用是芽孢表面蛋白是可以定位在細胞表面的，在與外源蛋白形成融合蛋白后，可將外源蛋白展示(定位在芽孢桿菌表面)。(3)由于表達載體中含有Ampr基因，則若轉(zhuǎn)基因成功能夠在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長，所以可以將芽孢桿菌接種在含有氨芐青霉素的固體培養(yǎng)基上，以獲得攜帶載體的單菌落，該過程被稱為微生物的選擇培養(yǎng)。(4)培養(yǎng)基中可能既有含基因表達載體的單菌落，也有含空載體(不含目的基因的載體、不含外源基因的載體)的單菌落，因此還需要對DNA進行提取，然后進行鑒定，由于DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精，所以可以用酒精初步分離DNA和蛋白質(zhì)。(5)由于綠色熒光蛋白在紫外光下會產(chǎn)生綠色熒光，所以可在紫外光環(huán)境下對芽孢桿菌進行個體(細胞)水平進行檢測。
答案：(1)C
(2)芽孢表面蛋白是可以定位在細胞表面的，在與外源蛋白形成融合蛋白后，可將外源蛋白展示/定位在芽孢桿菌表面
(3)氨芐青霉素/Amp 選擇
(4)空載體(不含目的基因的載體、不含外源基因的載體) DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精
(5)個體/細胞
4．(2023·廣東一模)中國科學家采集了某深海海域的沉積物樣品，分離、鑒定得到其中的深海放線菌，以期獲得具有前景的抗生素替代品。據(jù)此回答下列問題：
(1)研究人員欲篩選出深海放線菌進行研究，取1 g沉積物樣品接種在液體培養(yǎng)基中搖瓶培養(yǎng)，稀釋后取菌液通過__________法接種到高氏一號(加數(shù)滴質(zhì)量分數(shù)為10%的酚)培養(yǎng)基表面以獲得單菌落。培養(yǎng)基中的酚能抑制細菌等雜菌的生長，而放線菌能在該培養(yǎng)基上正常生長，這種培養(yǎng)基屬于__________(填“選擇”或“鑒別”)培養(yǎng)基。
(2)通過PCR技術擴增分離得到的放線菌的16S rRNA基因可進行菌株的種屬鑒定。PCR技術中起關鍵作用的酶是__________。該技術能在放線菌總的DNA中專一性擴增出16S rRNA基因的原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
PCR產(chǎn)物一般可通過__________鑒定。
(3)紫色桿菌的紫色菌素(一種毒素，致死率高)能使培養(yǎng)基呈紫色，已知呋喃酮C30能明顯抑制紫色菌素的產(chǎn)生。研究人員篩選出了放線菌菌株A，用甲醇將菌株A發(fā)酵產(chǎn)物提取后配制成溶液，對提取物能否抑制紫色菌素的產(chǎn)生進行了研究。
①將紫色桿菌菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面，待菌液干燥后，將無菌圓紙片貼于培養(yǎng)基表面，按圖1所示在濾紙片上滴加溶液。該實驗以__________組為對照，通過比較A、B、C三組的__________可知提取物是否能抑制紫色菌素的產(chǎn)生。
②實驗表明甲醇溶液不會影響紫色桿菌的繁殖，培養(yǎng)過程中對A、B、C三組紫色桿菌的數(shù)量進行監(jiān)測，結果如圖2所示，據(jù)圖推測，深海放線菌A的提取物作為抗生素替代品的優(yōu)點是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：(1)分離和純化微生物常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，題干信息提示菌液已經(jīng)先經(jīng)過稀釋，推知這里的接種方法是稀釋涂布平板法。該培養(yǎng)基允許放線菌生長，同時抑制或阻止其他細菌等雜菌的生長，推知該培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基。(2)PCR技術的變性(90℃以上)、復性(50℃左右)、延伸(72℃左右)階段需要的溫度都比較高，所以需要耐高溫的DNA聚合酶。引物是一段能與DNA母鏈部分堿基互補配對的短單鏈核酸，因此能特異性擴增出目的基因片段，該PCR中引物能與16S rRNA基因特異性結合，因此能在放線菌總的DNA中專一性擴增出16S rRNA基因。PCR擴增的產(chǎn)物是DNA分子，DNA分子具有可解離的基團，在一定的pH條件下，這些基團可以帶上正電荷或者負電荷，在電場作用下，這些帶電分子會向著與其所帶的電荷相反的電極移動，因此PCR產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定。(3)①研究提取物的作用時，一般需要設置空白對照和陽性對照。由題干可知呋喃酮C30能明顯抑制紫色菌素的產(chǎn)生，推知陽性對照滴加5μL呋喃酮C30，而菌株A發(fā)酵產(chǎn)物通過甲醇提取，推知空白對照滴加5μL甲醇溶液，即該實驗以A、C組為對照。由于紫色菌素使得培養(yǎng)基呈紫色，若提取物能抑制紫色菌素產(chǎn)生，則會產(chǎn)生褪色圈(透明圈)，根據(jù)褪色圈的直徑即可推知其抑制作用大小。②由圖1可知，滴加呋喃酮C30和菌株A提取物后，紫色桿菌的數(shù)量與空白對照組(滴加甲醇溶液)差別不大，推知提取物不會影響致病菌的生長，但是致病菌產(chǎn)生的紫色菌素卻有區(qū)別，推知提取物不會對致病菌進行選擇，使得其不會產(chǎn)生耐藥性。
答案：(1)稀釋涂布平板/涂布平板 選擇
(2)耐高溫的DNA聚合酶 引物能與16S rRNA基因特異性結合/引物是根據(jù)16S rRNA基因一段已知序列設計合成的 瓊脂糖凝膠電泳
(3)①A、C 褪色(透明)圈直徑 ②不會影響致病菌的生長，從而不會脅迫致病菌使其產(chǎn)生耐藥性/不易對致病菌形成選擇壓力而導致其產(chǎn)生耐藥性
5．(2023·廣東一模)β-丙氨酸作為重要的中間體，廣泛應用于醫(yī)藥、食品、化工等領域。L-天冬氨酸-α-脫羧酶(PanD)能夠催化β-丙氨酸的生成，但天然PanD活力(酶活力是指酶催化一定化學反應的能力)較低且易失活。研究人員運用蛋白質(zhì)工程對酶基因進行分子改造，在未知PanD三維結構和功能關系的情況下，通過易錯PCR技術引入隨機突變，再進行定向篩選，最終獲得活力和穩(wěn)定性均較高的PanD?；卮鹣铝袉栴}。
(1)易錯PCR與普通PCR相似，每次循環(huán)也包括了__________________________三步，但可通過改變PCR反應條件來提高堿基錯配的幾率。在PCR反應體系中，Mg2＋可以提高已發(fā)生錯配區(qū)域的穩(wěn)定性，Mn2＋可以降低DNA聚合酶對底物的專一性。因此，與普通PCR相比，易錯PCR的反應體系中應適當______(填“提高”或“降低”)Mg2＋濃度、______(填“提高”或“降低”)Mn2＋濃度。通過多輪的易錯PCR及篩選，可以獲取所需的PanD基因。
(2)研究人員對比改造前后的兩種PanD，發(fā)現(xiàn)改造后的PanD的第305位氨基酸由賴氨酸突變?yōu)榻z氨酸，推測突變后酶活力升高的原因是
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)為將能表達高活力PanD的大腸桿菌應用于工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)β-丙氨酸，研究人員還探究了發(fā)酵的最佳反應條件，研究中發(fā)現(xiàn)了隨著底物濃度升高，β-丙氨酸產(chǎn)量下降的現(xiàn)象，推測其原因可能是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
因此在工業(yè)生產(chǎn)中，要采用________________(填“一次足量添加”或“多次分批補料”)的投料策略。
解析：(1)PCR每次循環(huán)包括：①高溫變性：DNA解旋過程；②低溫復性：引物結合到互補鏈DNA上；③升溫延伸：合成子鏈。易錯PCR與普通PCR相似，每次循環(huán)也包括了變性、復性、延伸三步。PCR技術是指通過DNA的雙鏈復制，在耐高溫的TaqDNA聚合酶的催化下，遵循堿基互補配對原則，擴增DNA片段。TaqDNA聚合酶的負責將堿基與模板鏈正確地互補配對，Mn2＋可以降低DNA聚合酶對底物的專一性，也就是說Mn2＋能提高堿基與模板鏈的錯配，增加其突變率；非互補的堿基對由于氫鍵不易形成，穩(wěn)定性差，Mg2＋可以提高該錯配區(qū)的穩(wěn)定性，因此與普通PCR相比，易錯PCR的反應體系中應適當提高Mg2＋濃度，提高Mn2＋濃度。(2)組成PanD酶的305位氨基酸由賴氨酸突變?yōu)榻z氨酸后，由于該酶的氨基酸種類改變，導致酶的空間結構發(fā)生改變，結構決定功能，進而使酶活力提升。(3)將能表達高活力PanD的大腸桿菌應用于工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)β丙氨酸，隨著底物濃度升高，導致發(fā)酵液濃度增加，進而使大腸桿菌失水較多，甚至死亡，不能高效的表達高活力PanD，為了維持發(fā)酵液的濃度，在工業(yè)生產(chǎn)中，要采用多次分批補料的投料策略。
答案：(1)變性、復性、延伸 提高 提高
(2)組成PanD的氨基酸種類改變，導致酶的空間結構發(fā)生改變，進而使酶活力提升
(3)隨著底物濃度升高，導致發(fā)酵液濃度增加，進而使大腸桿菌失水較多，甚至死亡，不能高效的表達高活力PanD 多次分批補料

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