?2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編——專題20基因工程

一、單選題
1．（2022·重慶·統(tǒng)考高考真題）將人胰島素A鏈上1個天冬氨酸替換為甘氨酸，B鏈末端增加2個精氨酸，可制備出一種人工長效胰島素。下列關(guān)于該胰島素的敘述，錯誤的是（????）
A．進入人體后需經(jīng)高爾基體加工
B．比人胰島素多了2個肽鍵
C．與人胰島素有相同的靶細(xì)胞
D．可通過基因工程方法生產(chǎn)
2．（2022·遼寧·統(tǒng)考高考真題）抗蟲和耐除草劑玉米雙抗12-5是我國自主研發(fā)的轉(zhuǎn)基因品種。為給監(jiān)管轉(zhuǎn)基因生物安全提供依據(jù)，采用PCR方法進行目的基因監(jiān)測，反應(yīng)程序如圖所示。下列敘述正確的是（????）

A．預(yù)變性過程可促進模板DNA邊解旋邊復(fù)制
B．后延伸過程可使目的基因的擴增更加充分
C．延伸過程無需引物參與即可完成半保留復(fù)制
D．轉(zhuǎn)基因品種經(jīng)檢測含有目的基因后即可上市
3．（2022·北京·統(tǒng)考高考真題）下列高中生物學(xué)實驗中，對實驗結(jié)果不要求精確定量的是（　　）
A．探究光照強度對光合作用強度的影響
B．DNA的粗提取與鑒定
C．探索生長素類調(diào)節(jié)劑促進插條生根的最適濃度
D．模擬生物體維持pH的穩(wěn)定
4．（2022·湖北·統(tǒng)考高考真題）滅菌、消毒、無菌操作是生物學(xué)實驗中常見的操作。下列敘述正確的是（　?。?br /> A．動、植物細(xì)胞DNA的提取必須在無菌條件下進行
B．微生物、動物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染
C．為防止蛋白質(zhì)變性，不能用濕熱滅菌法對牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進行滅菌
D．可用濕熱滅菌法對實驗中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進行滅菌
5．（2022·山東·高考真題）關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實驗，下列說法錯誤的是（????）
A．過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進行是為了防止DNA降解
B．離心研磨液是為了加速DNA的沉淀
C．在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色
D．粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)
6．（2022·浙江·統(tǒng)考高考真題）羊瘙癢病是感染性蛋白粒子PrPSc引起的。某些羊體內(nèi)存在蛋白質(zhì)PrPc，但不發(fā)病。當(dāng)羊感染了PrPSc后，PrPSc將PrPc不斷地轉(zhuǎn)變?yōu)镻rPSc，導(dǎo)致PrPSc積累，從而發(fā)病。把患瘙癢病的羊組織勻漿接種到小鼠后，小鼠也會發(fā)病。下列分析合理的是（????）
A．動物體內(nèi)的PrPSc可全部被蛋白酶水解
B．患病羊體內(nèi)存在指導(dǎo)PrPSc合成的基因
C．產(chǎn)物PrPSc對PrPc轉(zhuǎn)變?yōu)镻rPSc具有反饋抑制作用
D．給PrPc基因敲除小鼠接種PrPSc，小鼠不會發(fā)病
7．（2021·江蘇·高考真題）下圖是剔除轉(zhuǎn)基因植物中標(biāo)記基因的一種策略，下列相關(guān)敘述錯誤的是（????）

A．分別帶有目的基因和標(biāo)記基因的兩個質(zhì)粒，都帶有T-DNA序列
B．該方法建立在高轉(zhuǎn)化頻率基礎(chǔ)上，標(biāo)記基因和目的基因須轉(zhuǎn)到不同染色體上
C．若要獲得除標(biāo)記基因的植株，轉(zhuǎn)化植株必須經(jīng)過有性繁殖階段遺傳重組
D．獲得的無篩選標(biāo)記轉(zhuǎn)基因植株發(fā)生了染色體結(jié)構(gòu)變異
8．（2021·湖北·統(tǒng)考高考真題）限制性內(nèi)切酶EcoRI識別并切割雙鏈DNA，用EcoRI完全酶切果蠅基因組DNA，理論上得到DNA片段的平均長度（堿基對）約為（????）
A．6 B．250
C．4000 D．24000
9．（2021·湖北·統(tǒng)考高考真題）某實驗利用PCR技術(shù)獲取目的基因，實驗結(jié)果顯示除目的基因條帶（引物與模板完全配對）外，還有2條非特異條帶（引物和模板不完全配對）。為了減少反應(yīng)非特異條帶的產(chǎn)生，以下措施中有效的是（????）
A．增加模板DNA的量
B．延長熱變性的時間
C．延長延伸的時間
D．提高復(fù)性的溫度
10．（2021·遼寧·統(tǒng)考高考真題）腈水合酶（N0）廣泛應(yīng)用于環(huán)境保護和醫(yī)藥原料生產(chǎn)等領(lǐng)域，但不耐高溫。利用蛋白質(zhì)工程技術(shù)在N0的α和β亞基之間加入一段連接肽，可獲得熱穩(wěn)定的融合型腈水合酶（N1）。下列有關(guān)敘述錯誤的是（　　）
A．N1與N0氨基酸序列的差異是影響其熱穩(wěn)定性的原因之一
B．加入連接肽需要通過改造基因?qū)崿F(xiàn)
C．獲得N1的過程需要進行轉(zhuǎn)錄和翻譯
D．檢測N1的活性時先將N1與底物充分混合，再置于高溫環(huán)境
11．（2021·天津·統(tǒng)考高考真題）孟德爾說：“任何實驗的價值和效用，取決于所使用材料對于實驗?zāi)康牡倪m合性?！毕铝袑嶒灢牧线x擇不適合的是（????）

A．用洋蔥鱗片葉表皮觀察細(xì)胞的質(zhì)壁分離和復(fù)原現(xiàn)象
B．用洋蔥根尖分生區(qū)觀察細(xì)胞有絲分裂
C．用洋蔥鱗片葉提取和分離葉綠體中的色素
D．用洋蔥鱗片葉粗提取DNA
12．（2021·北京·統(tǒng)考高考真題）關(guān)于物質(zhì)提取、分離或鑒定的高中生物學(xué)相關(guān)實驗，敘述錯誤的是（　?。?br /> A．研磨肝臟以破碎細(xì)胞用于獲取含過氧化氫酶的粗提液
B．利用不同物質(zhì)在酒精溶液中溶解性的差異粗提DNA
C．依據(jù)吸收光譜的差異對光合色素進行紙層析分離
D．利用與雙縮脲試劑發(fā)生顏色變化的反應(yīng)來鑒定蛋白質(zhì)
13．（2021·山東·統(tǒng)考高考真題）我國考古學(xué)家利用現(xiàn)代人的 DNA 序列設(shè)計并合成了一種類似磁鐵的“引子”，成功將極其微量的古人類 DNA 從提取自土壤沉積物中的多種生物的 DNA 中識別并分離出來，用于研究人類起源及進化。下列說法正確的是（????）
A．“引子”的徹底水解產(chǎn)物有兩種
B．設(shè)計“引子”的 DNA 序列信息只能來自核 DNA
C．設(shè)計“引子”前不需要知道古人類的 DNA 序列
D．土壤沉積物中的古人類雙鏈 DNA 可直接與“引子”結(jié)合從而被識別
14．（2021·山東·統(tǒng)考高考真題）粗提取 DNA 時，向雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水并攪拌，過濾后所得濾液進行下列處理后再進行過濾，在得到的濾液中加入特定試劑后容易提取出 DNA相對含量較高的白色絲狀物的處理方式是（????）
A．加入適量的木瓜蛋白酶
B．37～40℃的水浴箱中保溫 10～15 分鐘
C．加入與濾液體積相等的、體積分?jǐn)?shù)為 95%的冷卻的酒精
D．加入 NaCl 調(diào)節(jié)濃度至 2mol/L→過濾→調(diào)節(jié)濾液中 NaCl 濃度至 0．14mol/L
15．（2020·海南·統(tǒng)考高考真題）下列關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實驗的敘述，錯誤的是（????）
A．羊的成熟紅細(xì)胞可作為提取DNA的材料
B．提取植物細(xì)胞的DNA時，需要加入一定量的洗滌劑和食鹽
C．預(yù)冷的酒精溶液能抑制核酸水解酶活性，防止DNA水解
D．在沸水浴條件下，DNA與二苯胺反應(yīng)呈現(xiàn)藍(lán)色
16．（2020·北京·統(tǒng)考高考真題）人體感染新冠病毒后，機體會產(chǎn)生多種特異性抗體。我國科學(xué)家從康復(fù)者的漿細(xì)胞中克隆出針對病毒表面抗原的抗體基因相關(guān)序列，構(gòu)建表達(dá)載體并在相應(yīng)系統(tǒng)中表達(dá)，可制備出全人源單克隆抗體。以下表述錯誤的是（????）
A．該單抗可直接用于新冠病毒的核酸檢測
B．在該單抗制備過程中利用了基因工程技術(shù)
C．該單抗可與新冠病毒相應(yīng)蛋白特異性結(jié)合
D．可用抗原-抗體反應(yīng)檢測抗體基因表達(dá)產(chǎn)物
17．（2020·北京·統(tǒng)考高考真題）為了對重金屬污染的土壤進行生物修復(fù)，研究者將從楊樹中克隆的重金屬轉(zhuǎn)運蛋白（HMA3）基因與外源高效啟動子連接，導(dǎo)入楊樹基因組中（如圖）。

為檢測獲得的轉(zhuǎn)基因楊樹苗中是否含有導(dǎo)入的HMA3基因，同時避免內(nèi)源HMA3基因的干擾，在進行PCR擴增時，應(yīng)選擇的引物組合是（????）
A．①+③ B．①+②
C．③+② D．③+④
18．（2020·江蘇·統(tǒng)考高考真題）生物學(xué)實驗常呈現(xiàn)“五顏六色”的變化。下列實驗中溶液顏色變化的敘述正確的是（????）
A．在新鮮的梨汁中加入斐林試劑，混勻后在加熱條件下由無色變成磚紅色
B．在厭氧發(fā)酵的果汁中加入酸性重鉻酸鉀溶液，混勻后由藍(lán)色變成灰綠色
C．在DNA溶液中加入二苯胺試到，混勻后在沸水浴條件下逐漸變成藍(lán)色
D．在氨基酸溶液中加入雙縮脲試劑，混勻后逐漸變成紫色
19．（2020·山東·統(tǒng)考高考真題）人體內(nèi)一些正常或異常細(xì)胞脫落破碎后，其DNA會以游離的形式存在于血液中，稱為cfDNA；胚胎在發(fā)育過程中也會有細(xì)胞脫落破碎，其DNA進入孕婦血液中，稱為cffDNA。近幾年，結(jié)合DNA測序技術(shù)，cfDNA和cffDNA在臨床上得到了廣泛應(yīng)用。下列說法錯誤的是（????）
A．可通過檢測cfDNA中的相關(guān)基因進行癌癥的篩查
B．提取cfDNA進行基因修改后直接輸回血液可用于治療遺傳病
C．孕婦血液中的cffDNA可能來自于脫落后破碎的胎盤細(xì)胞
D．孕婦血液中的cffDNA可以用于某些遺傳病的產(chǎn)前診斷
20．（2020·天津·統(tǒng)考高考真題）在天花病毒的第四代疫苗研究中，可利用天花病毒蛋白的亞單位（在感染和致病過程中起重要作用的成分）制作疫苗。注射該疫苗可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生識別天花病毒的抗體。下列分析錯誤的是（????）
A．可通過基因工程途徑生產(chǎn)這種疫苗
B．天花病毒蛋白的亞單位是該病毒的遺傳物質(zhì)
C．該方法制備的疫苗不會在機體內(nèi)增殖
D．天花病毒蛋白的亞單位是疫苗中的抗原物質(zhì)
21．（2020·浙江·高考真題）下列關(guān)于基因工程的敘述，正確的是（????）
A．若受體大腸桿菌含有構(gòu)建重組質(zhì)粒時用到的限制性核酸內(nèi)切酶，則一定有利于該重組質(zhì)粒進入受體并保持結(jié)構(gòu)穩(wěn)定
B．抗除草劑基因轉(zhuǎn)入某抗鹽植物獲得2個穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)基因品系，抗性鑒定為抗除草劑抗鹽和抗除草劑不抗鹽。表明一定是抗鹽性的改變與抗除草劑基因的轉(zhuǎn)入無關(guān)
C．抗除草劑基因轉(zhuǎn)入某植物獲得轉(zhuǎn)基因植株，其DNA檢測均含目的基因，抗性鑒定為抗除草劑和不抗除草劑。表明一定是前者表達(dá)了抗性蛋白而后者只表達(dá)抗性基因RNA
D．已知不同分子量DNA可分開成不同條帶，相同分子量的為一條帶。用某種限制性核酸內(nèi)切酶完全酶切環(huán)狀質(zhì)粒后，出現(xiàn)3條帶。表明該質(zhì)粒上一定至少有3個被該酶切開的位置
22．（2019·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的敘述，錯誤的是
A．用同樣方法從等體積兔血和雞血中提取的DNA量相近
B．DNA析出過程中，攪拌操作要輕柔以防DNA斷裂
C．預(yù)冷的乙醇可用來進一步純化粗提的DNA
D．用二苯胺試劑鑒定DNA需要進行水浴加熱
23．（2019·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下列生物技術(shù)操作對遺傳物質(zhì)的改造，不會遺傳給子代的是
A．將胰島素基因表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌，篩選獲得基因工程菌
B．將花青素代謝基因?qū)胫参矬w細(xì)胞，經(jīng)組培獲得花色變異植株
C．將腸乳糖酶基因?qū)肽膛Ｊ芫?，培育出產(chǎn)低乳糖牛乳的奶牛
D．將腺苷酸脫氨酶基因轉(zhuǎn)入淋巴細(xì)胞后回輸患者，進行基因治療
24．（2019·北京·統(tǒng)考高考真題）甲、乙是嚴(yán)重危害某二倍體觀賞植物的病害。研究者先分別獲得抗甲、乙的轉(zhuǎn)基因植株，再將二者雜交后得到F1，結(jié)合單倍體育種技術(shù)，培育出同時抗甲、乙的植物新品種，以下對相關(guān)操作及結(jié)果的敘述，錯誤的是
A．將含有目的基因和標(biāo)記基因的載體導(dǎo)入受體細(xì)胞
B．通過接種病原體對轉(zhuǎn)基因的植株進行抗病性鑒定
C．調(diào)整培養(yǎng)基中植物激素比例獲得F1花粉再生植株
D．經(jīng)花粉離體培養(yǎng)獲得的若干再生植株均為二倍體

二、多選題
25．（2022·河北·統(tǒng)考高考真題）人染色體DNA中存在串聯(lián)重復(fù)序列，對這些序列進行體外擴增、電泳分離后可得到個體的DNA指紋圖譜。該技術(shù)可用于親子鑒定和法醫(yī)學(xué)分析。下列敘述錯誤的是（　?。?br /> A．DNA分子的多樣性、特異性及穩(wěn)定性是DNA鑒定技術(shù)的基礎(chǔ)
B．串聯(lián)重復(fù)序列在父母與子女之間的遺傳不遵循孟德爾遺傳定律
C．指紋圖譜顯示的DNA片段屬于人體基礎(chǔ)代謝功能蛋白的編碼序列
D．串聯(lián)重復(fù)序列突變可能會造成親子鑒定結(jié)論出現(xiàn)錯誤

三、綜合題
26．（2023·浙江·統(tǒng)考高考真題）甲植物細(xì)胞核基因具有耐鹽堿效應(yīng)，乙植物細(xì)胞質(zhì)基因具有高產(chǎn)效應(yīng)。某研究小組用甲、乙兩種植物細(xì)胞進行體細(xì)胞雜交相關(guān)研究，基本過程包括獲取原生質(zhì)體、誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合、篩選融合細(xì)胞、雜種植株再生和鑒定，最終獲得高產(chǎn)耐鹽堿再生植株?；卮鹣铝袉栴}：
(1)根據(jù)研究目標(biāo)，在甲、乙兩種植物細(xì)胞進行體細(xì)胞雜交前，應(yīng)檢驗兩種植物的原生質(zhì)體是否具備__________的能力。為了便于觀察細(xì)胞融合的狀況，通常用不同顏色的原生質(zhì)體進行融合，若甲植物原生質(zhì)體采用幼苗的根為外植體，則乙植物可用幼苗的__________為外植體。
(2)植物細(xì)胞壁的主要成分為__________和果膠，在獲取原生質(zhì)體時，常采用相應(yīng)的酶進行去壁處理。在原生質(zhì)體融合前，需對原生質(zhì)體進行處理，分別使甲原生質(zhì)體和乙原生質(zhì)體的__________失活。對處理后的原生質(zhì)體在顯微鏡下用__________計數(shù)，確定原生質(zhì)體密度。兩種原生質(zhì)體1∶1混合后，通過添加適宜濃度的PEG進行融合；一定時間后，加入過量的培養(yǎng)基進行稀釋，稀釋的目的是__________。
(3)將融合原生質(zhì)體懸浮液和液態(tài)的瓊脂糖混合，在凝固前倒入培養(yǎng)皿，融合原生質(zhì)體分散固定在平板中，并獨立生長、分裂形成愈傷組織。同一塊愈傷組織所有細(xì)胞源于__________。下列各項中能說明這些愈傷組織只能來自于雜種細(xì)胞的理由是哪幾項？__________
A ．甲、乙原生質(zhì)體經(jīng)處理后失活，無法正常生長、分裂
B．同種融合的原生質(zhì)體因甲或乙原生質(zhì)體失活而不能生長、分裂
C．培養(yǎng)基含有抑制物質(zhì)，只有雜種細(xì)胞才能正常生長、分裂
D．雜種細(xì)胞由于結(jié)構(gòu)和功能完整可以生長、分裂
(4)愈傷組織經(jīng)__________可形成胚狀體或芽。胚狀體能長出__________，直接發(fā)育形成再生植株。
(5)用PCR技術(shù)鑒定再生植株。已知甲植物細(xì)胞核具有特異性DNA序列a，乙植物細(xì)胞質(zhì)具有特異性DNA序列b；M1、M2為序列a的特異性引物，N1、N2為序列b的特異性引物。完善實驗思路：
Ⅰ．提取純化再生植株的總DNA，作為PCR擴增的__________。
Ⅱ．將DNA提取物加入PCR反應(yīng)體系，__________為特異性引物，擴增序列a；用同樣的方法擴增序列b。
Ⅲ．得到的2個PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)__________后，若每個PCR擴增產(chǎn)物在凝膠中均出現(xiàn)了預(yù)期的__________個條帶，則可初步確定再生植株來自于雜種細(xì)胞。
27．（2022·天津·高考真題）研究者擬構(gòu)建高效篩選系統(tǒng)，將改進的苯丙氨酸合成關(guān)鍵酶基因P1導(dǎo)入谷氨酸棒桿菌，以提高苯丙氨酸產(chǎn)量。

(1)如圖是該高效篩選系統(tǒng)載體的構(gòu)建過程。載體1中含有KanR（卡那霉素抗性基因）和SacB兩個標(biāo)記基因，為去除篩選效率較低的SacB，應(yīng)選擇引物________和________，并在引物的________（5＇∕3＇）端引入XhoⅠ酶識別序列，進行PCR擴增，產(chǎn)物經(jīng)酶切、連接后環(huán)化成載體2。
(2)PCR擴增載體3中篩選效率較高的標(biāo)記基因RpsL（鏈霉素敏感基因）時，引物應(yīng)包含___________（EcoRⅠ∕HindⅢ∕XhoⅠ）酶識別序列，產(chǎn)物經(jīng)單酶切后連接到載體2構(gòu)建高效篩選載體4。
(3)將改進的P1基因整合到載體4構(gòu)建載體5。將載體5導(dǎo)入鏈霉素不敏感（由RpsL突變造成）、卡那霉素敏感的受體菌。為獲得成功導(dǎo)入載體5的菌株，應(yīng)采用含有__________的平板進行初步篩選。
(4)用一定的方法篩選出如下菌株：P1基因脫離載體5并整合到受體菌擬核DNA，且載體5上其他DNA片段全部丟失。該菌的表型為__________。
A．卡那霉素不敏感、鏈霉素敏感
B．卡那霉素敏感、鏈霉素不敏感
C．卡那霉素和鏈霉素都敏感
D．卡那霉素和鏈霉素都不敏感
(5)可采用__________技術(shù)鑒定成功整合P1基因的菌株。之后以發(fā)酵法檢測苯丙氨酸產(chǎn)量。
28．（2022·重慶·統(tǒng)考高考真題）改良水稻的株高和產(chǎn)量性狀是實現(xiàn)袁隆平先生“禾下乘涼夢”的一種可能途徑。研究人員克隆了可顯著增高和增產(chǎn)的eui基因，并開展了相關(guān)探索。
步驟I：
步驟II：
(1)花藥培養(yǎng)能縮短育種年限，原因是________。在步驟I的花藥培養(yǎng)過程中，可產(chǎn)生單倍體愈傷組織，將其培養(yǎng)于含________的培養(yǎng)基上，可促進產(chǎn)生二倍體愈傷組織。I中能用于制造人工種子的材料是________。
(2)步驟II中，eui基因克隆于cDNA文庫而不是基因組文庫，原因是________；在構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時使用的工具酶有________。為篩選含重組Ti質(zhì)粒的菌株，需在培養(yǎng)基中添加________。獲得的農(nóng)桿菌菌株經(jīng)鑒定后，應(yīng)侵染I中的________，以獲得轉(zhuǎn)基因再生植株。再生植株是否含有eui基因的鑒定方法是________，移栽后若發(fā)育為更高且豐產(chǎn)的稻株，則可望“禾下乘涼”。
29．（2022·江蘇·統(tǒng)考高考真題）纖毛是廣泛存在的細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)，功能異?？梢鸲喾N疾病。因此，研究纖毛形成的作用機制具有重要意義。請回答下列問題。
(1)纖毛結(jié)構(gòu)如圖1所示，由細(xì)胞膜延伸形成的纖毛膜主要由中心體轉(zhuǎn)變而來，中心體在有絲分裂中的功能是__________________。

(2)某病人腎小管上皮細(xì)胞纖毛異常，為了分析纖毛相關(guān)基因X是否發(fā)生了變異，對基因X進行了PCR擴增與產(chǎn)物測序。從細(xì)胞樣品中分離DNA時，可通過交替調(diào)節(jié)鹽濃度將與核蛋白結(jié)合的DNA分離出來，溶液中添加NaC1至2．0mo1/L的目的是__________________。PCR擴增時，需在__________________催化下，在引物__________________端進行DNA鏈的延伸，獲得擴增產(chǎn)物用于測序。
(3)為研究蛋白質(zhì)X在細(xì)胞中的定位，構(gòu)建綠色熒光蛋白GFP與X的融合蛋白，融合蛋白具有綠色熒光，可示其在細(xì)胞內(nèi)位置。將X-GFP基因融合片段M導(dǎo)入如圖Ⅱ所示載體質(zhì)粒Y，構(gòu)建Y-M重組質(zhì)粒（在EcoRⅤ位點插入片段）。請完成下表。

分步實驗?zāi)繕?biāo)
簡易操作、結(jié)果、分析
PCR鑒定正向重組質(zhì)粒Y-M（圖Ⅱ中融合片段M中有白色的箭頭，代表方向）
①選擇圖Ⅱ引物_____________；②PCR目的產(chǎn)物約為_____________bp。
確保M及連接處序列正確，Y-M的連接處上游含有Hind III+EcoR V的識別序列，下游含有EcoR V+BamH I的識別序列
③質(zhì)粒測序，圖Ⅲ中正確的是____________（選填序列編號）
檢測融合蛋白定位
④對照質(zhì)粒Y-GFP（僅表達(dá)GFP）與實驗質(zhì)粒Y-M分別導(dǎo)入細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)對照組整個細(xì)胞均有綠色熒光，而實驗組熒光集中在纖毛基部，說明________________________。
(4)為研究另一纖毛病相關(guān)基因Z表達(dá)的變化，采用熒光定量PCR法檢測健康人與病人基因Z的轉(zhuǎn)錄水平。采集樣本、提取總RNA，經(jīng)_____________形成cDNA作為模板，PCR擴增結(jié)果顯示，在總cDNA模板量相等的條件下，健康人Ct值為15，而病人Ct值為20（Ct值是產(chǎn)物熒光強度達(dá)到設(shè)定閾值時的PCR循環(huán)數(shù)）。從理論上估算，在PCR擴增20個循環(huán)的產(chǎn)物中，健康人樣品的目的產(chǎn)物大約是病人的_____________倍。
30．（2022·河北·統(tǒng)考高考真題）蛋白酶抑制劑基因轉(zhuǎn)化是作物抗蟲育種的新途徑。某研究團隊將胰蛋白酶抑制劑（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制劑（StPinlA）的基因單獨或共同轉(zhuǎn)化棉花，獲得了轉(zhuǎn)基因植株?；卮鹣铝袉栴}：
(1)蛋白酶抑制劑的抗蟲機制是________。
(2)________是實施基因工程的核心。
(3)利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法時，必須將目的基因插入到質(zhì)粒的________上，此方法的不足之處是________。
(4)為檢測目的基因在受體細(xì)胞基因組中的整合及其轉(zhuǎn)錄和翻譯，可采用的檢測技術(shù)有________（寫出兩點即可）。
(5)確認(rèn)抗蟲基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)后，還需進一步做抗蟲的________以鑒定其抗性程度。下圖為三種不同遺傳操作產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因棉花抗蟲實驗結(jié)果，據(jù)結(jié)果分析________（填“NaPI”或“StPinlA”或“NaPI＋StPinlA”）轉(zhuǎn)基因棉花的抗蟲效果最佳，其原因是________。

(6)基因突變可產(chǎn)生新的等位基因，在自然選擇的作用下，昆蟲種群的基因頻率會發(fā)生________。導(dǎo)致昆蟲朝著一定的方向不斷進化。提此推測，胰蛋白酶抑制劑轉(zhuǎn)基因作物長期選擇后，某些害蟲具有了抗胰蛋白酶抑制劑的能力，其分子機制可能是________（寫出兩點即可）。
31．（2022·北京·統(tǒng)考高考真題）生態(tài)文明建設(shè)已成為我國的基本國策。水中雌激素類物質(zhì)（E物質(zhì)）污染會導(dǎo)致魚類雌性化等異常，并通過食物鏈影響人體健康和生態(tài)安全。原產(chǎn)南亞的斑馬魚，其肌細(xì)胞、生殖細(xì)胞等存在E物質(zhì)受體，且幼體透明?？茖W(xué)家將綠色熒光蛋白（GFP）等基因轉(zhuǎn)入斑馬魚，建立了一種經(jīng)濟且快速的水體E物質(zhì)監(jiān)測方法。
(1)將表達(dá)載體導(dǎo)入斑馬魚受精卵的最佳方式是_______。
(2)為監(jiān)測E物質(zhì)，研究者設(shè)計了下圖所示的兩種方案制備轉(zhuǎn)基因斑馬魚，其中ERE和酵母來源的UAS是兩種誘導(dǎo)型啟動子，分別被E物質(zhì)-受體復(fù)合物和酵母來源的Gal4蛋白特異性激活，啟動下游基因表達(dá)。與方案1相比，方案2的主要優(yōu)勢是_______，因而被用于制備監(jiān)測魚（MO）。

(3)現(xiàn)擬制備一種不育的監(jiān)測魚SM，用于實際監(jiān)測。SM需經(jīng)MO和另一親本（X）雜交獲得。欲獲得X，需從以下選項中選擇啟動子和基因，構(gòu)建表達(dá)載體并轉(zhuǎn)入野生型斑馬魚受精卵，經(jīng)培育后進行篩選。請將選項的序號填入相應(yīng)的方框中。
Ⅰ.啟動子：____。
①ERE②UAS③使基因僅在生殖細(xì)胞表達(dá)的啟動子（P生）④使基因僅在肌細(xì)胞表達(dá)的啟動子（P?。?br /> Ⅱ.基因：______
A．GFP????B．Gal4????C．雌激素受體基因（ER）??D．僅導(dǎo)致生殖細(xì)胞凋亡的基因（dg）
(4)SM不育的原因是：成體SM自身產(chǎn)生雌激素，與受體結(jié)合后_______造成不育。
(5)使擬用于實際監(jiān)測的SM不育的目的是_______。
32．（2022·海南·統(tǒng)考高考真題）以我國科學(xué)家為主的科研團隊將OSNL（即4個基因Oct4／Sox2／Nanog／Lin28A的縮寫）導(dǎo)入黑羽雞胚成纖維細(xì)胞（CEFs），誘導(dǎo)其重編程為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS），再誘導(dǎo)iPS分化為誘導(dǎo)原始生殖細(xì)胞（iPGCs），然后將iPGCs注射到孵化2.5天的白羽雞胚血管中，最終獲得具有黑羽雞遺傳特性的后代，實驗流程如圖?；卮鹣铝袉栴}。

(1)CEFs是從孵化9天的黑羽雞胚中分離獲得的，為了獲得單細(xì)胞懸液，雞胚組織剪碎后需用___________________________處理。動物細(xì)胞培養(yǎng)通常需要在合成培養(yǎng)基中添加______________等天然成分，以滿足細(xì)胞對某些細(xì)胞因子的需求。
(2)體外獲取OSNL的方法有______________（答出1種即可）。若要在CEFs中表達(dá)外源基因的蛋白，需構(gòu)建基因表達(dá)載體，載體中除含有目的基因和標(biāo)記基因外，還須有啟動子和______________等。啟動子是______________識別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動____________________________。
(3)iPS細(xì)胞和iPGCs細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能不同的根本原因是______________。
(4)誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)與體細(xì)胞核移植技術(shù)的主要區(qū)別是__________。
(5)該實驗流程中用到的生物技術(shù)有________________（答出2點即可）。
33．（2022·湖北·統(tǒng)考高考真題）“端穩(wěn)中國碗，裝滿中國糧”，為了育好中國種，科研人員在雜交育種與基因工程育種等領(lǐng)域開展了大量的研究。二倍體作物M的品系甲有抗蟲、高產(chǎn)等多種優(yōu)良性狀，但甜度不高。為了改良品系甲，增加其甜度，育種工作者做了如下實驗；
【實驗一】遺傳特性及雜交育種的研究
在種質(zhì)資源庫中選取乙、丙兩個高甜度的品系，用三個純合品系進行雜交實驗，結(jié)果如下表。
雜交組合
F1表現(xiàn)型
F2表現(xiàn)型
甲×乙
不甜
1/4甜、3/4不甜
甲×丙
甜
3/4甜，1/4不甜
乙×丙
甜
13/16甜、3/16不甜
【實驗二】甜度相關(guān)基因的篩選
通過對甲、乙、丙三個品系轉(zhuǎn)錄的mRNA分析，發(fā)現(xiàn)基因S與作物M的甜度相關(guān)。
【實驗三】轉(zhuǎn)S基因新品系的培育
提取品系乙的mRNA，通過基因重組技術(shù)，以Ti質(zhì)粒為表達(dá)載體，以品系甲的葉片外植體為受體，培有出轉(zhuǎn)S基因的新品系。
根據(jù)研究組的實驗研究，回答下列問題：
(1)假設(shè)不甜植株的基因型為AAbb和Aabb，則乙、丙雜交的F2中表現(xiàn)為甜的植株基因型有_____種。品系乙基因型為_______。若用乙×丙中F2不甜的植株進行自交，F(xiàn)3中甜∶不甜比例為_____。
(2)下圖中，能解釋（1）中雜交實驗結(jié)果的代謝途徑有___________。

(3)如圖是S基因的cDNA和載體的限制性內(nèi)切核酸酶（限制性核酸內(nèi)切酶）酶譜。為了成功構(gòu)建重組表達(dá)載體，確保目的基因插入載體中方向正確，最好選用_____________酶切割S基因的cDNA和載體。

(4)用農(nóng)桿菌侵染品系甲葉片外植體，其目的是________。
(5)除了題中所示的雜交育種和基因工程育種外，能獲得高甜度品系，同時保持甲的其他優(yōu)良性狀的育種方法還有___________（答出2點即可）。
34．（2022·山東·高考真題）某種類型的白血病由蛋白P引發(fā)，蛋白UBC可使P被蛋白酶識別并降解，藥物A可通過影響這一過程對該病起到治療作用。為探索藥物A治療該病的機理，需構(gòu)建重組載體以獲得融合蛋白FLAG-P和FLAG-P△。P△是缺失特定氨基酸序列的P，F(xiàn)LAG是一種短肽，連接在P或P△的氨基端，使融合蛋白能與含有FLAG抗體的介質(zhì)結(jié)合，但不影響P或P△的功能。
(1)為構(gòu)建重組載體，需先設(shè)計引物，通過PCR特異性擴增P基因。用于擴增P基因的引物需滿足的條件是_______、為使PCR產(chǎn)物能被限制酶切割，需在引物上添加相應(yīng)的限制酶識別序列，該限制酶識別序列應(yīng)添加在引物的______（填“3'端”或“5'端”）。
(2)PCR擴增得到的P基因經(jīng)酶切連接插入載體后，與編碼FLAG的序列形成一個融合基因，如圖甲所示，其中“ATGTGCA”為P基因編碼鏈起始序列。將該重組載體導(dǎo)入細(xì)胞后，融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA序列正確，翻譯出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正確，但P基因?qū)?yīng)的氨基酸序列與P不同。據(jù)圖甲分析，出現(xiàn)該問題的原因是______。修改擴增P基因時使用的帶有EcoRⅠ識別序列的引物來解決該問題，具體修改方案是______。

(3)融合蛋白表達(dá)成功后，將FLAG-P、FLAG-P△、藥物A和UBC按照圖乙中的組合方式分成5組。各組樣品混勻后分別流經(jīng)含F(xiàn)LAG抗體的介質(zhì)，分離出與介質(zhì)結(jié)合的物質(zhì)并用UBC抗體檢測，檢測結(jié)果如圖丙所示。已知FLAG-P和FLAG-P△不能降解UBC，由①②③組結(jié)果的差異推測，藥物A的作用是______；由②④組或③⑤組的差異推測，P△中缺失的特定序列的作用是______。

(4)根據(jù)以上結(jié)果推測，藥物A治療該病的機理是______。
35．（2022·山東·高考真題）果蠅的正常眼與無眼是1對相對性狀，受1對等位基因控制，要確定該性狀的遺傳方式，需從基因與染色體的位置關(guān)系及顯隱性的角度進行分析。以正常眼雌果蠅與無眼雄果蠅為親本進行雜交，根據(jù)雜交結(jié)果繪制部分后代果蠅的系譜圖，如圖所示。不考慮致死、突變和X、Y染色體同源區(qū)段的情況。

(1)據(jù)圖分析，關(guān)于果蠅無眼性狀的遺傳方式，可以排除的是______。若控制該性狀的基因位于X染色體上，Ⅲ-1與Ⅲ-2雜交的子代中正常眼雄果蠅的概率是______。
(2)用Ⅱ-1與其親本雄果蠅雜交獲得大量子代，根據(jù)雜交結(jié)果______（填“能”或“不能”）確定果蠅正常眼性狀的顯隱性，理由是______。
(3)以系譜圖中呈現(xiàn)的果蠅為實驗材料設(shè)計雜交實驗，確定無眼性狀的遺傳方式。（要求：①只雜交一次；②僅根據(jù)子代表型預(yù)期結(jié)果；③不根據(jù)子代性狀的比例預(yù)期結(jié)果）實驗思路：_______；預(yù)期結(jié)果并得出結(jié)論：______。
(4)若果蠅無眼性狀產(chǎn)生的分子機制是由于控制正常眼的基因中間缺失一段較大的DNA片段所致，且該對等位基因的長度已知。利用PCR及電泳技術(shù)確定無眼性狀的遺傳方式時，只以Ⅱ-3為材料，用1對合適的引物僅擴增控制該對性狀的完整基因序列，電泳檢測PCR產(chǎn)物，通過電泳結(jié)果______（填“能”或“不能”）確定無眼性狀的遺傳方式，理由是______。
36．（2022·湖南·高考真題）水蛭是我國的傳統(tǒng)中藥材，主要藥理成分水蛭素為水蛭蛋白中重要成分之一，具有良好的抗凝血作用。擬通過蛋白質(zhì)工程改造水蛭素結(jié)構(gòu)，提高其抗凝血活性?；卮鹣铝袉栴}:
(1)蛋白質(zhì)工程流程如圖所示，物質(zhì)a是_______，物質(zhì)b是_______。在生產(chǎn)過程中，物質(zhì)b可能不同，合成的蛋白質(zhì)空間構(gòu)象卻相同，原因是_______________________。

(2)蛋白質(zhì)工程是基因工程的延伸，基因工程中獲取目的基因的常用方法有___________、__________和利用 PCR 技術(shù)擴增。PCR 技術(shù)遵循的基本原理是____________________。
(3)將提取的水蛭蛋白經(jīng)甲、乙兩種蛋白酶水解后，分析水解產(chǎn)物中的肽含量及其抗凝血活性，結(jié)果如圖所示。推測兩種處理后酶解產(chǎn)物的抗凝血活性差異主要與肽的______（填“種類”或“含量”）有關(guān)，導(dǎo)致其活性不同的原因是______________________________。

(4)若要比較蛋白質(zhì)工程改造后的水蛭素、上述水蛭蛋白酶解產(chǎn)物和天然水蛭素的抗凝血活性差異，簡要寫出實驗設(shè)計思路________________________________________。
37．（2022·湖南·高考真題）中國是傳統(tǒng)的水稻種植大國，有一半以上人口以稻米為主食。在培育水稻優(yōu)良品種的過程中，發(fā)現(xiàn)某野生型水稻葉片綠色由基因C控制。回答下列問題:
(1)突變型1葉片為黃色，由基因C突變?yōu)镃1所致，基因C1純合幼苗期致死。突變型1連續(xù)自交3代，F(xiàn)3成年植株中黃色葉植株占______。
(2)測序結(jié)果表明，突變基因C1轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物編碼序列第727位堿基改變，由5＇-GAGAG-3＇變?yōu)?＇-GACAG-3＇，導(dǎo)致第______位氨基酸突變?yōu)開_____，從基因控制性狀的角度解釋突變體葉片變黃的機理_____________________________________。（部分密碼子及對應(yīng)氨基酸:GAG谷氨酸;AGA精氨酸;GAC天冬氨酸;ACA蘇氨酸;CAG谷氨酰胺）
(3)由C突變?yōu)镃1產(chǎn)生了一個限制酶酶切位點。從突變型1葉片細(xì)胞中獲取控制葉片顏色的基因片段，用限制酶處理后進行電泳（電泳條帶表示特定長度的DNA片段），其結(jié)果為圖中___（填“I”“Ⅱ”或“Ⅲ”）。??

(4)突變型2葉片為黃色，由基因C的另一突變基因C2所致。用突變型2與突變型1雜交，子代中黃色葉植株與綠色葉植株各占50%。能否確定C2是顯性突變還是隱性突變?______（填“能”或“否”），用文字說明理由_____________________________________。
38．（2022·廣東·高考真題）“綠水逶迤去，青山相向開”大力發(fā)展低碳經(jīng)濟已成為全社會的共識?；谀承┧缶奶厥獯x能力，有研究者以某些工業(yè)廢氣（含CO2等一碳溫室氣體，多來自高污染排放企業(yè)）為原料，通過厭氧發(fā)酵生產(chǎn)丙酮，構(gòu)建一種生產(chǎn)高附加值化工產(chǎn)品的新技術(shù)。

回答下列問題：
(1)研究者針對每個需要擴增的酶基因（如圖）設(shè)計一對________________，利用PCR技術(shù)，在優(yōu)化反應(yīng)條件后擴增得到目標(biāo)酶基因。
(2)研究者構(gòu)建了一種表達(dá)載體pMTL80k，用于在梭菌中建立多基因組合表達(dá)庫，經(jīng)篩選后提高丙酮的合成量。該載體包括了啟動子、終止子及抗生素抗性基因等，其中抗生素抗性基因的作用是________________，終止子的作用是________________。
(3)培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)重組梭菌大量表達(dá)上述酶蛋白時，出現(xiàn)了生長遲緩的現(xiàn)象，推測其原因可能是________________，此外丙酮的積累會傷害細(xì)胞，需要進一步優(yōu)化菌株和工藝才能擴大應(yīng)用規(guī)模。
(4)這種生產(chǎn)高附加值化工產(chǎn)品的新技術(shù)，實現(xiàn)了________________，體現(xiàn)了循環(huán)經(jīng)濟特點。從“碳中和”的角度看，該技術(shù)的優(yōu)勢在于________________，具有廣泛的應(yīng)用前景和良好的社會效益。
39．（2022·全國·統(tǒng)考高考真題）新冠疫情出現(xiàn)后，病毒核酸檢測和疫苗接種在疫情防控中發(fā)揮了重要作用。回答下列問題。
(1)新冠病毒是一種RNA病毒，檢測新冠病毒RNA（核酸檢測）可以采取RT-PCR法。這種方法的基本原理是先以病毒RNA為模板合成cDNA，這一過程需要的酶是______，再通過PCR技術(shù)擴增相應(yīng)的DNA片段。根據(jù)檢測結(jié)果判斷被檢測者是否感染新冠病毒。
(2)為了確保新冠病毒核酸檢測的準(zhǔn)確性，在設(shè)計PCR引物時必須依據(jù)新冠病毒RNA中的______來進行。PCR過程每次循環(huán)分為3步，其中溫度最低的一步是______。
(3)某人同時進行了新冠病毒核酸檢測和抗體檢測（檢測體內(nèi)是否有新冠病毒抗體），若核酸檢測結(jié)果為陰性而抗體檢測結(jié)果為陽性，說明______（答出1種情況即可）；若核酸檢測和抗體檢測結(jié)果均為陽性，說明______。
(4)常見的病毒疫苗有滅活疫苗、蛋白疫苗和重組疫苗等。已知某種病毒的特異性蛋白S（具有抗原性）的編碼序列（目的基因）。為了制備蛋白疫苗，可以通過基因工程技術(shù)獲得大量蛋白S?；蚬こ痰幕静僮髁鞒淌莀_____。
40．（2021·重慶·高考真題）為了研究PDCD4基因?qū)π∈笞訉m內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響，進行了相關(guān)實驗。
(1)取小鼠子宮時，為避免細(xì)菌污染，手術(shù)器具應(yīng)進行______處理；子宮取出剪碎后，用______處理一定時間，可獲得分散的子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞，再分離獲得基質(zhì)細(xì)胞用于培養(yǎng)。
(2)培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)有________（填寫兩種）；培養(yǎng)箱中CO2濃度為5%，其主要作用是____________。
(3)在含PDCD4基因的表達(dá)載體中，啟動子的作用是__________________。為了證明PDCD4基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡的作用，以含PDCD4基因的表達(dá)載體和基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)為實驗組，還應(yīng)設(shè)立兩個對照組，分別為_______________________________。經(jīng)檢測，實驗組中PDCD4表達(dá)水平和細(xì)胞凋亡率顯著高于對照組，說明該基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡具有______（填“抑制”或“促進”）作用。
41．（2021·江蘇·高考真題）某小組為研究真菌基因m的功能，構(gòu)建了融合表達(dá)蛋白M和tag標(biāo)簽的質(zhì)粒，請結(jié)合實驗流程回答下列問題：

(1)目的基因的擴增
①提取真菌細(xì)胞______，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，進一步獲得基因m片段。
②為了獲得融合tag標(biāo)簽的蛋白M，設(shè)計引物P2時，不能包含基因m終止密碼子的編碼序列，否則將導(dǎo)致______。
③熱啟動PCR可提高擴增效率，方法之一是：先將除TaqDNA聚合酶（Taq酶）以外的各成分混合后，加熱到80℃以上再混入酶，然后直接從94℃開始PCR擴增，下列敘述正確的有______
A．Taq酶最適催化溫度范圍為50～60℃
B．與常規(guī)PCR相比，熱啟動PCR可減少反應(yīng)起始時引物錯配形成的產(chǎn)物
C．兩條子鏈的合成一定都是從5′端向3′端延伸
D．PCR產(chǎn)物DNA堿基序列的特異性體現(xiàn)了Taq酶的特異性
(2)重組質(zhì)粒的構(gòu)建
①將Sma I切開的載體A與添加同源序列的m混合，用特定DNA酶處理形成黏性末端，然后降溫以促進______，形成A-m結(jié)合體。將A-m結(jié)合體導(dǎo)入大腸桿菌，利用大腸桿菌中的DNA聚合酶及______酶等，完成質(zhì)粒的環(huán)化。
②若正確構(gòu)建的重組質(zhì)粒A—m仍能被Sma I切開，則Sma I的酶切位點可能在______。
(3)融合蛋白的表達(dá)
①用含有尿嘧啶的培養(yǎng)基培養(yǎng)URA3基因缺失型酵母，將其作為受體菌，導(dǎo)入質(zhì)粒A-m，然后涂布于無尿嘧啶的培養(yǎng)基上，篩選獲得目的菌株，其機理是______。
②若通過抗原一抗體雜交實驗檢測到酵母蛋白中含tag標(biāo)簽，說明______，后續(xù)實驗可借助tag標(biāo)簽進行蛋白M的分離純化。
42．（2021·海南·高考真題）CRISPR/Cas9是一種高效的基因編輯技術(shù)，Cas9基因表達(dá)的Cas9蛋白像一把“分子剪刀”，在單鏈向?qū)NA（SgRNA）引導(dǎo)下，切割DNA雙鏈以敲除目標(biāo)基因或插入新的基因。CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的工作原理如圖所示。

回答下列問題。
(1)過程①中，為構(gòu)建CRISPR/Cas9重組質(zhì)粒，需對含有特定sgRNA編碼序列的DNA進行酶切處理，然后將其插入到經(jīng)相同酶切處理過的質(zhì)粒上，插入時所需要的酶是____________。
(2)過程②中，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞的方法是____________。
(3)過程③~⑤中，SgRNA與Cas9蛋白形成復(fù)合體，該復(fù)合體中的SgRNA可識別并與目標(biāo)DNA序列特異性結(jié)合，二者結(jié)合所遵循的原則是____________。隨后，Cas9蛋白可切割____________序列。
(4)利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)敲除一個長度為1200bp的基因，在DNA水平上判斷基因敲除是否成功所采用的方法是____________，基因敲除成功的判斷依據(jù)是____________。
(5)某種蛋白酶可高效降解羽毛中的角蛋白?？蒲腥藛T將該蛋白酶基因插入到CRISPR/Cas9質(zhì)粒中獲得重組質(zhì)粒，隨后將其導(dǎo)入到大腸桿菌細(xì)胞，通過基因編輯把該蛋白酶基因插入到基因組DNA中，構(gòu)建得到能大量分泌該蛋白酶的工程菌。據(jù)圖簡述CRISPR/Cas9重組質(zhì)粒在受體細(xì)胞內(nèi)，將該蛋白酶基因插入到基因組DNA的編輯過程：________________________。
43．（2021·福建·統(tǒng)考高考真題）微生物吸附是重金屬廢水的處理方法之一。金屬硫蛋白（MT）是一類廣泛存在于動植物中的金屬結(jié)合蛋白，具有吸附重金屬的作用。科研人員將棗樹的MT基因?qū)氪竽c桿菌構(gòu)建工程菌。回答下列問題：
(1)根據(jù)棗樹的MTcDNA的核苷酸序列設(shè)計了相應(yīng)的引物（圖1甲），通過PCR擴增MT基因。已知A位點和B位點分別是起始密碼子和終止密碼子對應(yīng)的基因位置。選用的引物組合應(yīng)為___________。

(2)本實驗中，PCR所用的DNA聚合酶擴增出的MT基因的末端為平末端。由于載體E只有能產(chǎn)生黏性末端的酶切位點，需借助中間載體P將MT基因接入載體E。載體P和載體E的酶切位點及相應(yīng)的酶切序列如圖1乙所示。
①選用___________酶將載體P切開，再用___________（填“T4DNA或“E·coli81DNA”）連接酶將MT基因與載體P相連，構(gòu)成重組載體P′。
②載體P′不具有表達(dá)MT基因的___________和___________。選用___________酶組合對載體P′和載體E進行酶切，將切下的MT基因和載體E用DA連接酶進行連接，將得到的混合物導(dǎo)入到用___________離子處理的大腸桿菌，篩出MT工程菌。
(3)MT基因在工程菌的表達(dá)量如圖2所示。結(jié)果仍無法說明已經(jīng)成功構(gòu)建能較強吸附廢水中重金屬的MT工程菌，理由是___________。

44．（2021·遼寧·統(tǒng)考高考真題）PHB2蛋白具有抑制細(xì)胞增殖的作用。為初步探究某動物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細(xì)胞增殖的原因，研究者從基因數(shù)據(jù)庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列（簡稱phb2基因），大小為0．9kb（1kb=1000堿基對），利用大腸桿菌表達(dá)該蛋白?；卮鹣铝袉栴}：
(1)為獲取phb2基因，提取該動物肝臟組織的總RNA，再經(jīng)__________過程得到cDNA，將其作為PCR反應(yīng)的模板，并設(shè)計一對特異性引物來擴增目的基因。
(2)圖1為所用載體圖譜示意圖，圖中限制酶的識別序列及切割位點見下表。為使phb2基因（該基因序列不含圖1中限制酶的識別序列）與載體正確連接，在擴增的phb2基因兩端分別引入__________和__________兩種不同限制酶的識別序列。經(jīng)過這兩種酶酶切的phb2基因和載體進行連接時，可選用__________（填“E．coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）。

相關(guān)限制酶的識別序列及切割位點
名稱
識別序列及切割位點
名稱
識別序列及切割位點
HindⅢ
A↓AGCTTTTCGA↑A
EcoRI
G↓AATTCCTTAA↑G
PvitⅡ
CAG↓CTGGTC↑GAC
PstI
CTGC↓AGGA↑CGTC
KpnI
G↓GTACCCCATG↑G
BamHI
G↓GATCCCCTAG↑G
注：箭頭表示切割位點
(3)轉(zhuǎn)化前需用CaCl2處理大腸桿菌細(xì)胞，使其處于__________的生理狀態(tài)，以提高轉(zhuǎn)化效率。
(4)將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，隨機挑取菌落（分別編號為1、2、3、4）培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，用（2）中選用的兩種限制酶進行酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)電分離，結(jié)果如圖2，________號菌落的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。

注：M為指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物；小于0．2kb的DNA分子條帶未出現(xiàn)在圖中
(5)將純化得到的PHB2蛋白以一定濃度添加到人宮頸癌細(xì)胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)24小時后，檢測處于細(xì)胞周期（示意圖見圖3）不同時期的細(xì)胞數(shù)量，統(tǒng)計結(jié)果如圖4。分析該蛋白抑制人宮頸癌細(xì)胞增殖可能的原因是將細(xì)胞阻滯在細(xì)胞周期的__________（填“G1”或“S”或“G2/M”）期。


45．（2021·天津·統(tǒng)考高考真題）乳酸菌是乳酸的傳統(tǒng)生產(chǎn)菌，但耐酸能力較差，影響產(chǎn)量。釀酒酵母耐酸能力較強，但不產(chǎn)生乳酸。研究者將乳酸菌的乳酸脫氫酶基因（LDH）導(dǎo)入釀酒酵母，獲得能產(chǎn)生乳酸的工程菌株。下圖1為乳酸和乙醇發(fā)酵途徑示意圖，圖2為構(gòu)建表達(dá)載體時所需的關(guān)鍵條件。

(1)乳酸脫氫酶在轉(zhuǎn)基因釀酒酵母中參與厭氧發(fā)酵的場所應(yīng)為___________。
(2)獲得轉(zhuǎn)基因釀酒酵母菌株的過程如下：
①設(shè)計引物擴增乳酸脫氫酶編碼序列。
為使擴增出的序列中編碼起始密碼子的序列由原核生物偏好的GTG轉(zhuǎn)變?yōu)檎婧松锲玫腁TG，且能通過雙酶切以正確方向插入質(zhì)粒，需設(shè)計引物1和2。其中引物1的5′端序列應(yīng)考慮___________和___________。
②將上述PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒重組后，導(dǎo)入大腸桿菌，篩選、鑒定，擴增重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒上有____________，所以能在大腸桿菌中擴增。啟動子存在物種特異性，易被本物種的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)識別并啟動轉(zhuǎn)錄，因此重組質(zhì)粒上的乳酸脫氫酶編碼序列___________（能/不能）在大腸桿菌中高效表達(dá)。
③提取重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)入不能合成尿嘧啶的釀酒酵母菌株，在___________的固體培養(yǎng)基上篩選出轉(zhuǎn)基因釀酒酵母，并進行鑒定。
(3)以葡萄糖為碳源，利用該轉(zhuǎn)基因釀酒酵母進行厭氧發(fā)酵，結(jié)果既產(chǎn)生乳酸，也產(chǎn)生乙醇。若想進一步提高其乳酸產(chǎn)量，下列措施中不合理的是___________（單選）。
A．進一步優(yōu)化發(fā)酵條件
B．使用乳酸菌LDH基因自身的啟動子
C．敲除釀酒酵母的丙酮酸脫羧酶基因
D．對轉(zhuǎn)基因釀酒酵母進行誘變育種
46．（2021·北京·統(tǒng)考高考真題）新冠病毒（SARS-CoV-2）引起的疫情仍在一些國家和地區(qū)肆虐，接種疫苗是控制全球疫情的最有效手段。新冠病毒疫苗有多種，其中我國科學(xué)家已研發(fā)出的腺病毒載體重組新冠病毒疫苗（重組疫苗）是一種基因工程疫苗，其基本制備步驟是：將新冠病毒的S基因連接到位于載體上的腺病毒基因組DNA中，重組載體經(jīng)擴增后轉(zhuǎn)入特定動物細(xì)胞，進而獲得重組腺病毒并制成疫苗。
(1)新冠病毒是RNA病毒，一般先通過_______得到cDNA，經(jīng)_______獲取S基因，酶切后再連接到載體。
(2)重組疫苗中的S基因應(yīng)編碼________。
A．病毒與細(xì)胞識別的蛋白
B．與病毒核酸結(jié)合的蛋白
C．催化病毒核酸復(fù)制的酶
D．幫助病毒組裝的蛋白
(3)為保證安全性，制備重組疫苗時刪除了腺病毒的某些基因，使其在人體中無法增殖，但重組疫苗仍然可以誘發(fā)人體產(chǎn)生針對新冠病毒的特異性免疫應(yīng)答。該疫苗發(fā)揮作用的過程是：接種疫苗→________→_________→誘發(fā)特異性免疫反應(yīng)。
(4)重組疫苗只需注射一針即可完成接種。數(shù)周后，接種者體內(nèi)仍然能檢測到重組腺病毒DNA，但其DNA不會整合到人的基因組中。請由此推測只需注射一針即可起到免疫保護作用的原因________。
47．（2021·北京·統(tǒng)考高考真題）玉米是我國重要的農(nóng)作物，研究種子發(fā)育的機理對培育高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的玉米新品種具有重要作用。
(1)玉米果穗上的每一個籽粒都是受精后發(fā)育而來。我國科學(xué)家發(fā)現(xiàn)了甲品系玉米，其自交后的果穗上出現(xiàn)嚴(yán)重干癟且無發(fā)芽能力的籽粒，這種異常籽粒約占1/4。籽粒正常和干癟這一對相對性狀的遺傳遵循孟德爾的________定律。上述果穗上的正常籽粒均發(fā)育為植株，自交后，有些植株果穗上有約1/4干癟籽粒，這些植株所占比例約為________。
(2)為闡明籽粒干癟性狀的遺傳基礎(chǔ)，研究者克隆出候選基因A/a。將A基因?qū)氲郊灼废抵校@得了轉(zhuǎn)入單個A基因的轉(zhuǎn)基因玉米。假定轉(zhuǎn)入的A基因已插入a基因所在染色體的非同源染色體上，請從下表中選擇一種實驗方案及對應(yīng)的預(yù)期結(jié)果以證實“A基因突變是導(dǎo)致籽粒干癟的原因”________。
實驗方案
預(yù)期結(jié)果
I．轉(zhuǎn)基因玉米×野生型玉米II．轉(zhuǎn)基因玉米×甲品系
III．轉(zhuǎn)基因玉米自交
IV．野生型玉米×甲品系
①正常籽粒：干癟籽粒≈1：1②正常籽粒：干癟籽?！?：1
③正常籽粒：干癟籽?！?：1
④正常籽粒：干癟籽粒≈15：1
(3)現(xiàn)已確認(rèn)A基因突變是導(dǎo)致籽粒干癟的原因，序列分析發(fā)現(xiàn)a基因是A基因中插入了一段DNA（見圖1），使A基因功能喪失。甲品系果穗上的正常籽粒發(fā)芽后，取其植株葉片，用圖1中的引物1、2進行PCR擴增，若出現(xiàn)目標(biāo)擴增條帶則可知相應(yīng)植株的基因型為_________。
(4)為確定A基因在玉米染色體上的位置，借助位置已知的M/m基因進行分析。用基因型為mm且籽粒正常的純合子P與基因型為MM的甲品系雜交得F1，F(xiàn)1自交得F2。用M、m基因的特異性引物，對F1植株果穗上干癟籽粒（F2）胚組織的DNA進行PCR擴增，擴增結(jié)果有1、2、3三種類型，如圖2所示。
統(tǒng)計干癟籽粒（F2）的數(shù)量，發(fā)現(xiàn)類型1最多、類型2較少、類型3極少。請解釋類型3數(shù)量極少的原因________。
48．（2021·山東·統(tǒng)考高考真題）人類γ基因啟動子上游的調(diào)控序列中含有 BCL11A 蛋白結(jié)合位點，該位點結(jié)合 BCL11A 蛋白后，γ基因的表達(dá)被抑制。通過改變該結(jié)合位點的序列，解除對γ基因表達(dá)的抑制，可對某種地中海貧血癥進行基因治療?？蒲腥藛T擴增了γ基因上游不同長度的片段，將這些片段分別插入表達(dá)載體中進行轉(zhuǎn)化和熒光檢測，以確定 BCL11A 蛋白結(jié)合位點的具體位置。相關(guān)信息如圖所示。

（1）為將擴增后的產(chǎn)物定向插入載體指導(dǎo)熒光蛋白基因表達(dá)，需在引物末端添加限制酶識別序列。據(jù)圖可知，在 F1～F7末端添加的序列所對應(yīng)的限制酶是____，在 R 末端添加的序列所對應(yīng)的限制酶是_____。本實驗中，從產(chǎn)物擴增到載體構(gòu)建完成的整個過程共需要____種酶。
（2）將構(gòu)建的載體導(dǎo)入除去 BCL11A 基因的受體細(xì)胞，成功轉(zhuǎn)化后，含 F1～F6與 R 擴增產(chǎn)物的載體表達(dá)熒光蛋白，受體細(xì)胞有熒光，含 F7與 R 擴增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無熒光。含 F7 與 R 擴增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無熒光的原因是____。
（3）向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素，含 F1～F4與 R 擴增產(chǎn)物的受體細(xì)胞不再有熒光，而含 F5～F6與 R 擴增產(chǎn)物的受體細(xì)胞仍有熒光。若γ基因上游調(diào)控序列上與引物序列所對應(yīng)的位置不含有 BCL11A 蛋白的結(jié)合位點序列，據(jù)此結(jié)果可推測，BCL11A 蛋白結(jié)合位點位于_____，理由是___。
49．（2021·浙江·統(tǒng)考高考真題）回答下列（一）、（二）小題：
（一）回答與甘蔗醋制作有關(guān)的問題：
（1）為了獲得釀造甘蔗醋的高產(chǎn)菌株，以自然發(fā)酵的甘蔗渣為材料進行篩選。首先配制醋酸菌選擇培養(yǎng)基：將適量的葡萄糖、KH2PO4、MgSO4溶解并定容，調(diào)節(jié)pH，再高壓蒸汽滅菌，經(jīng)__________后加入3%體積的無水乙醇。然后將10 g自然發(fā)酵的甘蔗渣加入選擇培養(yǎng)基，振蕩培養(yǎng)24 h。用__________將少量上述培養(yǎng)液涂布到含CaCO3的分離培養(yǎng)基上，在30 ℃培養(yǎng)48h。再挑取分離培養(yǎng)基上具有__________的單菌落若干，分別接種到與分離培養(yǎng)基成分相同的__________培養(yǎng)基上培養(yǎng)24 h后，置于4 ℃冰箱中保存。
（2）優(yōu)良產(chǎn)酸菌種篩選。將冰箱保存的菌種分別接入選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)一段時間后，取合適接種量的菌液在30 ℃、150 r/min 條件下振蕩培養(yǎng)。持續(xù)培養(yǎng)至培養(yǎng)液中醋酸濃度不再上升，或者培養(yǎng)液中______含量達(dá)到最低時，發(fā)酵結(jié)束。篩選得到的優(yōu)良菌種除了產(chǎn)酸量高外，還應(yīng)有____________________（答出2點即可）等特點。
（3）制醋過程中，可將甘蔗渣制作成固定化介質(zhì)，經(jīng)_________后用于發(fā)酵。其固定化方法為_________。
（二）斑馬魚是一種模式動物，體外受精發(fā)育，胚胎透明、便于觀察，可用于水質(zhì)監(jiān)測，基因功能分析以及藥物毒性與安全性評價等。
（1）由于人類活動產(chǎn)生的生活污水日益增多，大量未經(jīng)處理的污水直接排入河流、湖泊會引起水體__________，導(dǎo)致藻類大量繁殖形成水華。取水樣喂養(yǎng)斑馬魚，可用斑馬魚每周的體重和死亡率等指標(biāo)監(jiān)測水體污染程度。
（2）為了研究某基因在斑馬魚血管發(fā)育過程中的分子調(diào)控機制，用 DNA 連接酶將該基因連接到質(zhì)粒載體形成_______，導(dǎo)入到大腸桿菌菌株 DH5α 中。為了能夠連接上該目的基因、并有利于獲得含該目的基因的 DH5α 陽性細(xì)胞克隆，質(zhì)粒載體應(yīng)含有__________（答出2點即可）。提取質(zhì)粒后，采用____法，將該基因?qū)氲桨唏R魚受精卵細(xì)胞中，培養(yǎng)并觀察轉(zhuǎn)基因斑馬魚胚胎血管的發(fā)育情況。
（3）為了獲取大量斑馬魚胚胎細(xì)胞用于藥物篩選，可用__________分散斑馬魚囊胚的內(nèi)細(xì)胞團，取分散細(xì)胞作為初始材料進行__________培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶中添加成纖維細(xì)胞作為__________，以提高斑馬魚胚胎細(xì)胞克隆的形成率。
50．（2021·湖南·統(tǒng)考高考真題）M 基因編碼的M蛋白在動物A的肝細(xì)胞中特異性表達(dá)?，F(xiàn)設(shè)計實驗，將外源DNA片段F插入M 基因的特定位置，再通過核移植、胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)獲得M 基因失活的轉(zhuǎn)基因克隆動物A，流程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：


（1）在構(gòu)建含有片段F的重組質(zhì)粒過程中，切割質(zhì)粒DNA的工具酶是_________，這類酶能將特定部位的兩個核苷酸之間的_________斷開。
（2）在無菌、無毒等適宜環(huán)境中進行動物A成纖維細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)時，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是_________。
（3）與胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)相比，體細(xì)胞核移植技術(shù)的成功率更低，原因是_________。從早期胚胎中分離獲得的胚胎干細(xì)胞，在形態(tài)上表現(xiàn)為_________（答出兩點即可），功能上具有_________。
（4）鑒定轉(zhuǎn)基因動物：以免疫小鼠的_________淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進行融合，篩選融合雜種細(xì)胞，制備M蛋白的單克隆抗體。簡要寫出利用此抗體確定克隆動物A中M 基因是否失活的實驗思路_________。
51．（2021·河北·統(tǒng)考高考真題）采礦污染和不當(dāng)使用化肥導(dǎo)致重金屬鎘（Cd）在土壤中過量積累。利用植物修復(fù)技術(shù)將土壤中的Cd富集到植物體內(nèi)，進行后續(xù)處理（例如，收集植物組織器官異地妥善儲存），可降低土壤中Cd的含量。為提高植物對Cd污染土壤的修復(fù)能力，研究者將酵母液泡Cd轉(zhuǎn)運蛋白（YCF1）基因?qū)胧茉囍参?，并檢測了相關(guān)指標(biāo)。
回答下列問題：
（1）為獲取YCF1基因，將酵母細(xì)胞的全部DNA提取、切割后與載體連接，導(dǎo)入受體菌的群體中儲存，這個群體稱為__________。
（2）將DNA序列插入Ti質(zhì)粒構(gòu)建重組載體時，所需要的兩種酶是__________。構(gòu)建的重組基因表達(dá)載體中必須含有標(biāo)記基因，其作用是______________________________。
（3）進行前期研究時，將含有YCF1基因的重組載體導(dǎo)入受試雙子葉植物印度芥菜，采用最多的方法是__________。研究者進一步獲得了轉(zhuǎn)YCF1基因的不育楊樹株系，采用不育株系作為實驗材料的目的是______________________________。
（4）將長勢一致的野生型和轉(zhuǎn)基因楊樹苗移栽到Cd污染的土壤中，半年后測定植株干重（圖1）及不同器官中Cd含量（圖2）。據(jù)圖1可知，與野生型比，轉(zhuǎn)基因植株對Cd具有更強的__________（填“耐性”或“富集能力”）；據(jù)圖2可知，對轉(zhuǎn)基因植株的__________進行后續(xù)處理對于緩解土壤Cd污染最為方便有效。

（5）已知YCF1特異定位于轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞的液泡膜上。據(jù)此分析，轉(zhuǎn)基因楊樹比野生型能更好地適應(yīng)高Cd環(huán)境的原因是____________________。相較于草本植物，采用楊樹這種喬木作為Cd污染土壤修復(fù)植物的優(yōu)勢在于___________（寫出兩點即可）。
52．（2021·全國·統(tǒng)考高考真題）用一段由放射性同位素標(biāo)記的DNA片段可以確定基因在染色體上的位置。某研究人員使用放射性同位素32P標(biāo)記的脫氧腺苷三磷酸(dATP，dA-Pα~Pβ~Pγ)等材料制備了DNA片段甲（單鏈），對W基因在染色體上的位置進行了研究，實驗流程的示意圖如下。

回答下列問題：
（1）該研究人員在制備32p標(biāo)記的DNA片段甲時，所用dATP的α位磷酸基團中的磷必須是32P，原因是_______。
（2）該研究人員以細(xì)胞為材料制備了染色體樣品，在混合操作之前去除了樣品中的RNA分子，去除RNA分子的目的是_______。
（3）為了使片段甲能夠通過堿基互補配對與染色體樣品中的W基因結(jié)合，需要通過某種處理使樣品中的染色體DNA_______。
（4）該研究人員在完成上述實驗的基礎(chǔ)上，又對動物細(xì)胞內(nèi)某基因的mRNA進行了檢測，在實驗過程中用某種酶去除了樣品中的DNA，這種酶是_______。
53．（2021·全國·統(tǒng)考高考真題）PCR技術(shù)可用于臨床的病原菌檢測。為檢測病人是否感染了某種病原菌，醫(yī)生進行了相關(guān)操作：①分析PCR擴增結(jié)果；②從病人組織樣本中提取DNA；③利用PCR擴增DNA片段；④采集病人組織樣本?；卮鹣铝袉栴}：
（1）若要得到正確的檢測結(jié)果，正確的操作順序應(yīng)該是_________（用數(shù)字序號表示）。
（2）操作③中使用的酶是_________。PCR 反應(yīng)中的每次循環(huán)可分為變性、復(fù)性、________三步，其中復(fù)性的結(jié)果是_______ 。
（3）為了做出正確的診斷，PCR反應(yīng)所用的引物應(yīng)該能與_______ 特異性結(jié)合。
（4）PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)是指_______。該技術(shù)目前被廣泛地應(yīng)用于疾病診斷等方面。
54．（2021·廣東·統(tǒng)考高考真題）非細(xì)胞合成技術(shù)是一種運用合成生物學(xué)方法，在細(xì)胞外構(gòu)建多酶催化體系，獲得目標(biāo)產(chǎn)物的新技術(shù)，其核心是各種酶基因的挖掘、表達(dá)等。中國科學(xué)家設(shè)計了4步酶促反應(yīng)的非細(xì)胞合成路線（如圖），可直接用淀粉生產(chǎn)肌醇（重要的醫(yī)藥食品原料），以期解決高溫強酸水解方法造成的嚴(yán)重污染問題，并可以提高產(chǎn)率。

回答下列問題：
（1）研究人員采用PCR技術(shù)從土壤微生物基因組中擴增得到目標(biāo)酶基因。此外，獲得酶基因的方法還有___________。（答出兩種即可）
（2）高質(zhì)量的DNA模板是成功擴增出目的基因的前提條件之一。在制備高質(zhì)量DNA模板時必須除去蛋白，方法有___________。（答出兩種即可）
（3）研究人員使用大腸桿菌BL21作為受體細(xì)胞、pET20b為表達(dá)載體分別進行4種酶的表達(dá)。表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時，首先應(yīng)制備___________細(xì)胞。為了檢測目的基因是否成功表達(dá)出酶蛋白，需要采用的方法有___________。
（4）依圖所示流程，在一定的溫度、pH等條件下，將4種酶與可溶性淀粉溶液混合組成一個反應(yīng)體系。若這些酶最適反應(yīng)條件不同，可能導(dǎo)致的結(jié)果是___________。在分子水平上，可以通過改變___________，從而改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，實現(xiàn)對酶特性的改造和優(yōu)化。
55．（2021·全國·高考真題）用DNA重組技術(shù)可以賦予生物以新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人類需要的生物產(chǎn)品。在此過程中需要使用多種工具酶，其中4種限制性核酸內(nèi)切酶的切割位點如圖所示。

回答下列問題：
（1）常用的DNA連接酶有E. coli DNA連接酶和T4DNA連接酶。上圖中__________酶切割后的DNA片段可以用E. coli DNA連接酶連接。上圖中___________酶切割后的DNA片段可以用T4DNA連接酶連接。
（2）DNA連接酶催化目的基因片段與質(zhì)粒載體片段之間形成的化學(xué)鍵是____________。
（3）DNA重組技術(shù)中所用的質(zhì)粒載體具有一些特征，如質(zhì)粒DNA分子上有復(fù)制原點，可以保證質(zhì)粒在受體細(xì)胞中能___________；質(zhì)粒DNA分子上有______________，便于外源DNA插入；質(zhì)粒DNA分子上有標(biāo)記基因（如某種抗生素抗性基因），利用抗生素可篩選出含質(zhì)粒載體的宿主細(xì)胞，方法是______________。
（4）表達(dá)載體含有啟動子，啟動子是指__________________。
56．（2020·海南·統(tǒng)考高考真題）某課題組用生物技術(shù)制備轉(zhuǎn)基因小鼠的過程，如圖所示。

回答下列問題。
（1）通常把目的基因轉(zhuǎn)入雄原核而不是雌原核，從兩者形態(tài)差異上分析，原因是_______________。
（2）把桑椹胚植入假孕母鼠子宮前，需要對胚胎進行性別鑒定，目前最有效的方法是SRY-PCR法。操作的基本程序是：先從被測胚胎中取出幾個細(xì)胞，提取DNA，然后用位于Y染色體的性別決定基因，即SRY基因的一段堿基設(shè)計__________，以胚胎細(xì)胞中的DNA作為模板，進行PCR擴增，最后用SRY特異性探針檢測擴增產(chǎn)物。出現(xiàn)陽性反應(yīng)者，胚胎為_________；出現(xiàn)陰性反應(yīng)者，胚胎為_________。
（3）若目的基因的表達(dá)產(chǎn)物是某種特定的蛋白質(zhì)，檢測目的基因在子代轉(zhuǎn)基因小鼠中是否成功表達(dá)，常用的分子檢測方法是______________，檢測的基本思路是_________________。
57．（2020·北京·統(tǒng)考高考真題）枯草芽孢桿菌可分泌纖維素酶。研究者篩選到一株降解纖維素能力較強的枯草芽孢桿菌菌株（B菌），從中克隆得到了一種纖維素酶（C1酶）基因。將獲得的C1酶基因與高效表達(dá)載體（HT質(zhì)粒）連接，再導(dǎo)入B菌，以期獲得降解纖維素能力更強的工程菌。
（1）纖維素屬于__________糖，因此經(jīng)過一系列酶催化最終可降解成單糖，該單糖是__________。
（2）對克隆到的C1酶基因測序，與數(shù)據(jù)庫中的C1酶基因編碼序列相比有兩個堿基對不同，但兩者編碼出的蛋白的氨基酸序列相同，這是因為____________________。
（3）C1酶基因以B鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，轉(zhuǎn)錄時mRNA自身的延伸方向為5'→3'。為了使C1酶基因按照正確的方向與已被酶切的HT質(zhì)粒連接，克隆C1酶基因時在其兩端添加了Sma I和BamH I的酶切位點。該基因內(nèi)部沒有這兩種酶切位點。圖1中酶切位點1和2所對應(yīng)的酶分別是__________。

（4）將纖維素含量為20%的培養(yǎng)基分為三組，一組接種工程菌，對照組1不進行處理，對照組2進行相應(yīng)處理。在相同條件下培養(yǎng)96小時，檢測培養(yǎng)基中纖維素的含量。結(jié)果（圖2）說明工程菌降解纖維素的能力最強。對照組2的處理應(yīng)為____________________。
（5）預(yù)期該工程菌在處理廢棄物以保護環(huán)境方面可能的應(yīng)用__________。（舉一例）
58．（2020·江蘇·統(tǒng)考高考真題）如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，簡捷地分析出已知序列兩側(cè)的序列，具體流程如下圖（以EcoR I酶切為例）：

請據(jù)圖回答問題：
（1）步驟I用的EcoR I是一種__________酶，它通過識別特定的__________切割特定位點。
（2）步驟Ⅱ用的DNA連接酶催化相鄰核苷酸之間的3′-羥基與5′-磷酸間形成__________；PCR循環(huán)中，升溫到95℃是為了獲得__________；TaqDNA聚合酶的作用是催化__________。
（3）若下表所列為已知的DNA序列和設(shè)計的一些PCR引物，步驟Ⅲ選用的PCR引物必須是__________（從引物①②③④中選擇，填編號）。

DNA序列（虛線處省略了部分核苷酸序列）
已知序列

PCR引物
①5′- AACTATGCGCTCATGA-3′②5′- GCAATGCGTAGCCTCT-3′
③5′- AGAGGCTACGCATTGC-3′
④5′- TCATGAGCGCATAGTT-3′
（4）對PCR產(chǎn)物測序，經(jīng)分析得到了片段F的完整序列。下列DNA單鏈序列中（虛線處省略了部分核苷酸序列），結(jié)果正確的是_________________。
A． 5′- AACTATGCG-----------AGCCCTT-3′
B． 5′- AATTCCATG-----------CTGAATT-3′
C． 5′- GCAATGCGT----------TCGGGAA-3′
D． 5′- TTGATACGO----------CGAGTAC-3′
59．（2020·山東·統(tǒng)考高考真題）水稻胚乳中含直鏈淀粉和支鏈淀粉，直鏈淀粉所占比例越小糯性越強?？蒲腥藛T將能表達(dá)出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列轉(zhuǎn)入水稻，實現(xiàn)了對直鏈淀粉合成酶基因（Wx基因）啟動子序列的定點編輯，從而獲得了3個突變品系。

（1）將能表達(dá)出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列插入Ti質(zhì)粒構(gòu)建重組載體時，所需的酶是______， 重組載體進入水稻細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為_____________。
（2）根據(jù)啟動子的作用推測，Wx基因啟動子序列的改變影響了______，從而改變了 Wx基因的轉(zhuǎn)錄水平。與野生型水稻相比，3個突變品系中Wx基因控制合成的直鏈淀粉合成酶的氨基酸序列___ (填：發(fā)生或不發(fā)生)改變，原因是_____________。
（3）為檢測啟動子變化對Wx基因表達(dá)的影響，科研人員需要檢測Wx基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA （Wx mRNA）的量。檢測時分別提取各品系胚乳中的總RNA，經(jīng)_____過程獲得總 cDNA。通過PCR技術(shù)可在總cDNA中專一性的擴增出 Wx基因的cDNA，原因是_____________。
（4）各品系Wx mRNA量的檢測結(jié)果如圖所示，據(jù)圖推測糯性最強的品系為_____，原因是_____________。
60．（2020·天津·統(tǒng)考高考真題）Ⅰ型糖尿病是因免疫系統(tǒng)將自身胰島素作為抗原識別而引起的自身免疫病。小腸黏膜長期少量吸收胰島素抗原，能誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)識別該抗原后應(yīng)答減弱，從而緩解癥狀?？蒲腥藛T利用Ⅰ型糖尿病模型小鼠進行動物實驗，使乳酸菌在小鼠腸道內(nèi)持續(xù)產(chǎn)生人胰島素抗原，為此構(gòu)建重組表達(dá)載體，技術(shù)路線如下。

據(jù)圖回答：
（1）為使人胰島素在乳酸菌中高效表達(dá)，需改造其編碼序列。下圖是改造前后人胰島素B鏈編碼序列的起始30個核苷酸序列。據(jù)圖分析，轉(zhuǎn)錄形成的mRNA中，該段序列所對應(yīng)的片段內(nèi)存在堿基替換的密碼子數(shù)有________個。

（2）在人胰島素A、B肽鏈編碼序列間引入一段短肽編碼序列，確保等比例表達(dá)A、B肽鏈。下列有關(guān)分析正確的是________。
A．引入短肽編碼序列不能含終止子序列
B．引入短肽編碼序列不能含終止密碼子編碼序列
C．引入短肽不能改變A鏈氨基酸序列
D．引入短肽不能改變原人胰島素抗原性
（3）在重組表達(dá)載體中，SacⅠ和XbaⅠ限制酶僅有圖示的酶切位點。用這兩種酶充分酶切重組表達(dá)載體，可形成________種DNA片段。
（4）檢測轉(zhuǎn)化的乳酸菌發(fā)現(xiàn)，信號肽-重組人胰島素分布在細(xì)胞壁上。由此推測，信號肽的合成和運輸所經(jīng)歷的細(xì)胞結(jié)構(gòu)依次是________________________________。
（5）用轉(zhuǎn)化的乳酸菌飼喂Ⅰ型糖尿病模型小鼠一段時間后，小鼠體內(nèi)出現(xiàn)人胰島素抗原，能夠特異性識別它的免疫細(xì)胞有________。
A．B細(xì)胞?????????????
B．T細(xì)胞????????????????
C．吞噬細(xì)胞???????????
D．漿細(xì)胞
61．（2020·浙江·高考真題）回答下列（一）、（二）小題：
（一）回答與柑橘加工與再利用有關(guān)的問題：
（1）柑橘果實經(jīng)擠壓獲得果汁后，需用果膠酶處理，主要目的是提高果汁的__________。為確定果膠酶的處理效果，對分別加入不同濃度果膠酶的果汁樣品，可采用3種方法進行實驗：①取各處理樣品，添加相同體積的__________，沉淀生成量較少的處理效果好。②對不同處理進行離心，用比色計對上清液進行測定，OD值__________的處理效果好。③對不同處理進行__________，記錄相同體積果汁通過的時間，時間較短的處理效果好。
（2）加工后的柑橘殘渣含有抑菌作用的香精油及較多的果膠等。為篩選生長不被香精油抑制且能高效利用果膠的細(xì)菌，從腐爛殘渣中分離得到若干菌株，分別用無菌水配制成__________，再均勻涂布在LB固體培養(yǎng)基上。配制適宜濃度的香精油，浸潤大小適宜并已__________的圓形濾紙片若干，再貼在上述培養(yǎng)基上。培養(yǎng)一段時間后，測量濾紙片周圍抑制菌體生長形成的透明圈的直徑大小。從直徑__________的菌株中取菌接種到含有適量果膠的液體培養(yǎng)基試管中培養(yǎng)，若有果膠酶產(chǎn)生，搖晃試管并觀察，與接種前相比，液體培養(yǎng)基的__________下降。
（二）回答與基因工程和植物克隆有關(guān)的問題：
（1）天然農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上存在著一段DNA片段（T-DNA），該片段可轉(zhuǎn)移并整合到植物細(xì)胞染色體上。為便于轉(zhuǎn)基因植物在組織培養(yǎng)階段的篩選，設(shè)計重組Ti質(zhì)粒時，應(yīng)考慮T-DNA中要有可表達(dá)的目的基因，還需要有可表達(dá)的__________。
（2）結(jié)合植物克隆技術(shù)進行轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?，為獲得轉(zhuǎn)基因植株，農(nóng)桿菌侵染的宿主一般要選用具有優(yōu)良性狀、較高的遺傳穩(wěn)定性、__________及易被農(nóng)桿菌侵染等特點的植物材料。若植物材料對農(nóng)桿菌不敏感，則可用__________的轉(zhuǎn)基因方法。
（3）利用帶側(cè)芽的莖段獲得叢狀苗的過程與利用莖段誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織再獲得叢狀苗的過程相比，前者總培養(yǎng)時間__________，且不經(jīng)歷__________過程，因而其遺傳性狀穩(wěn)定，是大多數(shù)植物快速繁殖的常用方法。
（4）與發(fā)芽培養(yǎng)基相比，配制轉(zhuǎn)基因叢狀苗生根培養(yǎng)基時，可根據(jù)實際情況適當(dāng)添加__________，促進叢狀苗基部細(xì)胞分裂形成愈傷組織并進一步分化形成__________，最終形成根。還可通過改變MS培養(yǎng)基促進生根，如_____（A．提高蔗糖濃度B．降低培養(yǎng)基濃度C．提高大量元素濃度D．不添加瓊脂）。
62．（2020·全國·統(tǒng)考高考真題）W是一種具有特定功能的人體蛋白質(zhì)。某研究小組擬仿照制備乳腺生物反應(yīng)器的研究思路，制備一種膀胱生物反應(yīng)器來獲得W，基本過程如圖所示。

（1）步驟①中需要使用的工具酶有________________。步驟②和③所代表的操作分別是________________和________________。步驟④稱為________________。
（2）與乳腺生物反應(yīng)器相比，用膀胱生物反應(yīng)器生產(chǎn)W的優(yōu)勢在于不受轉(zhuǎn)基因動物的______________（答出2點即可）的限制。
（3）一般來說，在同一動物個體中，乳腺上皮細(xì)胞與膀胱上皮細(xì)胞的細(xì)胞核中染色體DNA所含的遺傳信息________________（填相同或不同），原因是_________。
（4）從上述流程可知，制備生物反應(yīng)器涉及胚胎工程，胚胎工程中所用到的主要技術(shù)有_____________（答出2點即可）。
63．（2020·浙江·統(tǒng)考高考真題）回答下列（一）、（二）小題：
（一）回答與泡菜制作有關(guān)的問題：
（1）用蘿卜等根菜類蔬菜制作泡菜，用熱水短時處理，可抑制某些微生物產(chǎn)生_____，從而使成品泡菜口感較脆。同時，該處理也會使泡菜發(fā)酵時間縮短，其原因是_______。
（2）泡菜發(fā)酵初期，由于泡菜罐加蓋并水封，會使______菌被逐漸抑制。發(fā)酵中期，乳酸菌大量繁殖，會使______菌受到抑制。發(fā)酵后期，乳酸生產(chǎn)過多，會使乳酸菌受到抑制。
（3）從泡菜汁中可分離制作酸奶的乳酸菌，首先對經(jīng)多次發(fā)酵的泡菜汁進行過濾，然后取濾液進行______，再用______的方法在某種含牛乳的專用的培養(yǎng)基中進行初步篩選。該培養(yǎng)基必須含有______，以便于觀察是否產(chǎn)酸。
（4）自然界中醋桿菌常與乳酸菌共同生長。若要篩選出醋桿菌，則其專用的培養(yǎng)基中應(yīng)添加______。
（二）回答與基因工程和植物克隆有關(guān)的問題：
（1）為了獲取某植物葉片無菌的原生質(zhì)體，先將葉片經(jīng)表面消毒并去除下表皮，再將其置于經(jīng)______處理的較高滲透壓的混合酶液中。酶解后，經(jīng)多次離心獲得原生質(zhì)體。然后測定該原生質(zhì)體的活性，可采用的方法有______（答出2點即可）。
（2）若要獲得已知序列的抗病基因，可采用______或PCR的方法。為了提高目的基因和質(zhì)粒重組的成功率，選擇使用______，對含目的基因的DNA片段進行處理，使其兩端形成不同的黏性末端，對質(zhì)粒也進行相同的處理，然后用DNA連接酶連接形成重組質(zhì)粒。通過在大腸桿菌中______，以獲得大量的重組質(zhì)粒，最終將其導(dǎo)入原生質(zhì)體中。
（3）原生質(zhì)體在培養(yǎng)過程中，只有重新形成______后，才可進行有絲分裂。多次分裂形成的小細(xì)胞團可通過______或器官發(fā)生的途徑再生植株。
（2019·上?！じ呖颊骖}）肺囊性纖維化（CF）是一種遺傳病。患者肺功能不完善，影響正常生活。圖是某患者甲組遺傳病系譜。

64．該遺傳病是由_____染色體上的_____（顯性/隱性）控制的。
65．不考慮基因突變，1-1可能不含有致病基因的細(xì)胞有 。
A．卵細(xì)胞
B．初級卵母細(xì)胞
C．第一極體
D．次級卵母細(xì)胞
為了避免患者胎兒的出生，要做基因檢測。已知CF基因有260對堿基。對該家族相關(guān)成員CF蛋白基因進行基因檢測，用BSTvI酶來切割，結(jié)果如表2所示：

Ⅰ-1
Ⅱ-1
Ⅱ-2
Ⅱ-5
91bp
√
√

√
169bp
√
√

√
260bp
√

√


66．據(jù)表判斷，CF上BSTvI的酶切位點有__個，Ⅱ-1基因型為___。
67．為了避免患病胎兒的出生，Ⅱ-6是否需要進一步做CF基因檢測，為什么？_________________________________________________________________________。
68．從根本上治療遺傳病的方法是 。
A．加強鍛煉
B．?dāng)z入CF蛋白
C．基因檢測
D．將CF基因?qū)敕尾可掀ぜ?xì)胞

（2019·上?！じ呖颊骖}）接種疫苗是預(yù)防疾病的措施之一。圖顯示了某種DNA疫苗的制備與使用過程，人體內(nèi)將產(chǎn)生抗r的抗體。

69．圖所示抗原蛋白基因最可能是致病菌M的 。
A．特有致病基因
B．特有不致病基因
C．全部致病基因
D．全部不致病基因
70．圖所示的1-IV階段中，需要使用DNA連接酶的是 ______階段。篩選含有目的基因的受體細(xì)胞，發(fā)生在______階段。
71．圖所示的第V階段，抗原蛋白r和抗r抗體的不同 。
A．基因來源的物種
B．轉(zhuǎn)錄mRNA序列
C．表達(dá)兩種蛋白的細(xì)胞
D．翻譯時tRNA所來源的物種
72．結(jié)合圖及所學(xué)的知識，比較DNA疫苗和致病菌M，用“是”或“否”填寫表相關(guān)內(nèi)容。

核苷酸式入體
激發(fā)體液免疫
激發(fā)細(xì)胞免疫
較高致病性
DNA疫苗




致病菌M





73．（2019·海南·統(tǒng)考高考真題）人的T細(xì)胞可以產(chǎn)生某種具有臨床價值的蛋白質(zhì)（Y），該蛋白質(zhì)由一條多肽鏈組成。目前可以利用現(xiàn)代生物技術(shù)生產(chǎn)Y?；卮鹣铝袉栴}。
（1）若要獲得Y的基因，可從人的T細(xì)胞中提取___________作為模板，在____________催化下合成cDNA，再利用_______________技術(shù)在體外擴增獲得大量Y的基因。
（2）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。若將上述所得Y的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的__________________中，得到含目的基因的重組Ti質(zhì)粒，則可用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將該基因?qū)肽撤N植物的葉肉細(xì)胞中。若該葉肉細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)、篩選等得到了能穩(wěn)定表達(dá)Y的愈傷組織，則說明Y的基因已經(jīng)_______________。
（3）天然的Y通常需要在低溫條件下保存。假設(shè)將Y的第6位氨基酸甲改變?yōu)榘被嵋铱商岣咂錈岱€(wěn)定性，若要根據(jù)蛋白質(zhì)工程的原理對Y進行改造以提高其熱穩(wěn)定性，具體思路是__________________。
74．（2019·江蘇·統(tǒng)考高考真題）圖1是某基因工程中構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程示意圖，載體質(zhì)粒P0具有四環(huán)素抗性基因（tetr)和氨芐青霉素抗性基因（ampr）。請回答下列問題：

（1）EcoRV酶切位點為，EcoR V酶切出來的線性載體P1為___________末端。
（2）用TaqDNA聚合酶進行PCR擴增獲得的目的基因片段，其兩端各自帶有一個腺嘌呤脫氧核苷酸。載體P1用酶處理，在兩端各添加了一個堿基為___________的脫氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在__________酶作用下，形成重組質(zhì)粒P3。
（3）為篩選出含有重組質(zhì)粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板進行篩選，得到A、B、C三類菌落，其生長情況如下表（“+”代表生長，“﹣”代表不生長）。根據(jù)表中結(jié)果判斷，應(yīng)選擇的菌落是__________（填表中字母）類，另外兩類菌落質(zhì)粒導(dǎo)入情況分別是_____、________________。

（4）為鑒定篩選出的菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質(zhì)粒，擬設(shè)計引物進行PCR鑒定。圖2所示為甲、乙、丙3條引物在正確重組質(zhì)粒中的相應(yīng)位置，PCR鑒定時應(yīng)選擇的一對引物是__________。某學(xué)生嘗試用圖中另外一對引物從某一菌落的質(zhì)粒中擴增出了400bp片段，原因是_______________。
75．（2019·北京·統(tǒng)考高考真題）光合作用是地球上最重要的化學(xué)反應(yīng)，發(fā)生在高等植物、藻類和光合細(xì)菌中。
（1）地球上生命活動所需的能量主要來源于光反應(yīng)吸收的____________，在碳（暗）反應(yīng)中，RuBP羧化酶（R酶）催化CO2與RuBP（C5）結(jié)合，生成2分子C3，影響該反應(yīng)的外部因素，除光照條件外還包括_________________________（寫出兩個）；內(nèi)部因素包括_____________（寫出兩個）。
（2）R酶由8個大亞基蛋白（L）和8個小亞基蛋白（S）組成。高等植物細(xì)胞中L由葉綠體基因編碼并在葉綠體中合成，S由細(xì)胞核基因編碼并在___________中由核糖體合成后進入葉綠體，在葉綠體的___________中與L組裝成有功能的酶。
（3）研究發(fā)現(xiàn)，原核生物藍(lán)藻（藍(lán)細(xì)菌）R酶的活性高于高等植物，有人設(shè)想通過基因工程技術(shù)將藍(lán)藻R酶的S、L基因轉(zhuǎn)入高等植物，以提高后者的光合作用效率。研究人員將藍(lán)藻S、L基因轉(zhuǎn)入某高等植物（甲）的葉綠體DNA中，同時去除甲的L基因。轉(zhuǎn)基因植株能夠存活并生長。檢測結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因植株中的R酶活性高于未轉(zhuǎn)基因的正常植株。
①由上述實驗?zāi)芊竦贸觥稗D(zhuǎn)基因植株中有活性的R酶是由藍(lán)藻的S、L組裝而成”的推測________？請說明理由。______
②基于上述實驗，下列敘述中能夠體現(xiàn)生物統(tǒng)一性的選項包括______。
a．藍(lán)藻與甲都以DNA作為遺傳物質(zhì)
b．藍(lán)藻與甲都以R酶催化CO2的固定
c．藍(lán)藻R酶大亞基蛋白可在甲的葉綠體中合成
d．在藍(lán)藻與甲的葉肉細(xì)胞中R酶組裝的位置不同
76．（2019·全國·統(tǒng)考高考真題）基因工程中可以通過PCR技術(shù)擴增目的基因?；卮鹣铝袉栴}。
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀╛_______和________。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是________。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是________。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的________。
（3）目前在PCR反應(yīng)中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是________。
77．（2019·浙江·統(tǒng)考高考真題）回答下列（一）、（二）小題：
（一）回答與果膠和果膠酶有關(guān)的問題：
（1）通常從腐爛的水果上分離產(chǎn)果膠酶的微生物，其原因除水果中果膠含量較高外，還因為______。
（2）為了獲得高產(chǎn)果膠酶微生物的單菌落，通常對分離或誘變后的微生物懸液進行______。
（3）在某種果汁生產(chǎn)中，用果膠酶處理顯著增加了產(chǎn)量，其主要原因是果膠酶水解果膠使______。果汁生產(chǎn)中的殘渣果皮等用于果膠生產(chǎn)，通常將其提取液濃縮后再加入______。使之形成絮狀物，然后通過離心、真空干燥等步驟獲得果膠制品。
（4）常用固定化果膠酶處理含果膠的污水，其主要優(yōu)點有______和可連續(xù)處理等。在建立和優(yōu)化固定化果膠酶處理工藝時，除考慮果膠酶的活性和用量、酶反應(yīng)的溫度、pH、作用時間等環(huán)境因素外，還需考慮的主要有______和______。
（二）回答與利用生物技術(shù)培育抗病品種有關(guān)的問題：
（1）通過抗病性強的植株獲取抗病目的基因有多種方法?，F(xiàn)已獲得純度高的抗病蛋白（可作為抗原），可通過______技術(shù)獲得特異性探針，并將______中所有基因進行表達(dá)，然后利用該探針，找出能與探針特異性結(jié)合的表達(dá)產(chǎn)物，進而獲得與之對應(yīng)的目的基因。
（2）將上述抗病基因通過轉(zhuǎn)基因的方法導(dǎo)入植物的分生組織可獲得抗病性強的植株。若在試管苗期間用分子水平方法判斷抗病基因是否表達(dá)，應(yīng)檢測______（A．質(zhì)粒載體??B．轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物??C．抗性基因??D．病原微生物）。
（3）植物細(xì)胞在培養(yǎng)過程中往往會發(fā)生______，可利用這一特性篩選抗致病真菌能力強的細(xì)胞。篩選時在培養(yǎng)基中加入______，并將存活的細(xì)胞進一步培養(yǎng)至再生植株。若利用______培養(yǎng)建立的細(xì)胞系用于篩選，則可快速獲得穩(wěn)定遺傳的抗病植株。
（4）用抗病品種與高產(chǎn)品種進行雜交育種過程中，有時會遇到因胚發(fā)育中止而得不到可育種子的情況。若要使該胚繼續(xù)發(fā)育獲得植株，可采用的方法是______。

四、非選擇題組
78．（2022·遼寧·統(tǒng)考高考真題）某抗膜蛋白治療性抗體藥物研發(fā)過程中，需要表達(dá)N蛋白胞外段，制備相應(yīng)的單克隆抗體，增加其對N蛋白胞外段特異性結(jié)合的能力。
Ⅰ．N蛋白胞外段抗原制備，流程如圖1

(1)構(gòu)建重組慢病毒質(zhì)粒時，選用氨芐青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因，目的是___________。用脂質(zhì)體將重組慢病毒質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒導(dǎo)入病毒包裝細(xì)胞，質(zhì)粒被包在脂質(zhì)體___________（填“雙分子層中”或“兩層磷脂分子之間”）。
(2)質(zhì)粒在包裝細(xì)胞內(nèi)組裝出由___________組成的慢病毒，用慢病毒感染海拉細(xì)胞進而表達(dá)并分離、純化N蛋白胞外段。
Ⅱ．N蛋白胞外段單克隆抗體制備，流程如圖2

(3)用N蛋白胞外段作為抗原對小鼠進行免疫后，取小鼠脾組織用___________酶處理，制成細(xì)胞懸液，置于含有混合氣體的___________中培養(yǎng)，離心收集小鼠的B淋巴細(xì)胞，與骨髓瘤細(xì)胞進行融合。
(4)用選擇性培養(yǎng)基對融合后的細(xì)胞進行篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，將其接種到96孔板，進行___________培養(yǎng)。用___________技術(shù)檢測每孔中的抗體，篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，經(jīng)體外擴大培養(yǎng)，收集___________，提取單克隆抗體。
(5)利用N蛋白胞外段抗體與藥物結(jié)合，形成___________，實現(xiàn)特異性治療。
79．（2022·浙江·高考真題）回答下列（一）、（二）小題：
（一）回答與產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌育種有關(guān)的問題：
(1)為快速分離產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌，可將土樣用___________制成懸液，再將含有懸液的三角瓶置于80℃的___________中保溫一段時間，其目的是___________。
(2)為提高篩選效率，可將菌種的___________過程與菌種的產(chǎn)酶性能測定一起進行：將上述懸液稀釋后涂布于淀粉為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，采用___________顯色方法，根據(jù)透明圈與菌落直徑比值的大小，可粗略估計出菌株是否產(chǎn)酶及產(chǎn)酶性能。
(3)為了獲得高產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌，可利用現(xiàn)有菌種，通過___________后再篩選獲得，或利用轉(zhuǎn)基因、___________等技術(shù)獲得。
（二）回答與植物轉(zhuǎn)基因和植物克隆有關(guān)的問題：
(4)在用農(nóng)桿菌侵染的方法進行植物轉(zhuǎn)基因過程中，通常要使用抗生素，其目的一是抑制___________生長，二是篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞。當(dāng)選擇培養(yǎng)基中抗生素濃度___________時，通常會出現(xiàn)較多假陽性植株，因此在轉(zhuǎn)基因前需要對受體進行抗生素的___________檢測。
(5)為提高培育轉(zhuǎn)基因植株的成功率，植物轉(zhuǎn)基因受體需具有較強的___________能力和遺傳穩(wěn)定性。對培養(yǎng)的受體細(xì)胞遺傳穩(wěn)定性的早期檢測，可通過觀察細(xì)胞內(nèi)___________形態(tài)是否改變進行判斷，也可通過觀察分裂期染色體的___________，分析染色體組型是否改變進行判斷。
(6)植物轉(zhuǎn)基因受體全能性表達(dá)程度的高低主要與受體的基因型、培養(yǎng)環(huán)境、繼代次數(shù)和___________長短等有關(guān)。同時也與受體的取材有關(guān)，其中受體為___________時全能性表達(dá)能力最高。
80．（2022·浙江·統(tǒng)考高考真題）回答下列（一）、（二）小題：
（一）紅曲霉合成的紅曲色素是可食用的天然色素，具有防腐、降脂等功能。研究者進行了紅曲色素的提取及紅色素的含量測定實驗，流程如下：

(1)取紅曲霉菌種斜面，加適量____________洗下菌苔，制成菌懸液并培養(yǎng)，解除休眠獲得____________菌種。經(jīng)液體發(fā)酵，收集紅曲霉菌絲體，紅曲霉菌絲體與70%乙醇溶液混合，經(jīng)浸提、____________，獲得的上清液即為紅曲色素提取液。為進一步提高紅曲色素得率，可將紅曲霉細(xì)胞進行____________處理。
(2)紅曲色素包括紅色素、黃色素和橙黃色素等，紅色素在390nm、420nm和505nm波長處均有較大吸收峰。用光電比色法測定紅曲色素提取液甲的紅色素含量時，通常選用505nm波長測定的原因是____________。測定時需用____________作空白對照。
(3)生產(chǎn)上提取紅曲色素后的殘渣，經(jīng)__________處理后作為飼料添加劑或有機肥，這屬于廢棄物的無害化和__________處理。
（二）我國在新冠疫情方面取得了顯著的成效，但全球疫情形勢仍然非常嚴(yán)峻、尤其是病毒出現(xiàn)了新變異株——德爾塔、奧密克戎，更是威脅著全人類的生命健康。
(4)新冠病毒核酸定性檢測原理是：以新冠病毒的單鏈RNA為模板，利用__________酶合成DNA，經(jīng)PCR擴增，然后在擴增產(chǎn)物中加入特異的__________，如果檢測到特異的雜交分子則核酸檢測為陽性。
(5)接種疫苗是遏制新冠疫情蔓延的重要手段。腺病毒疫苗的制備技術(shù)要點是：將腺病毒的復(fù)制基因敲除；以新冠病毒的__________基因為模板合成的DNA插入腺病毒基因組，構(gòu)建重組腺病毒。重組腺病毒在人體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生新冠病毒抗原，從而引發(fā)特異性免疫反應(yīng)。在此過程中，腺病毒的作用是作為基因工程中目的基因的____________。將腺病毒復(fù)制基因敲除的目的是____________。
(6)單克隆抗體有望用于治療新冠肺炎。單克隆抗體的制備原理是：取免疫陽性小鼠的____________細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞混合培養(yǎng)，使其融合，最后篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。與植物組織培養(yǎng)相比，雜交瘤細(xì)胞擴大培養(yǎng)需要特殊的成分，如胰島素和____________。

五、選擇題組
（2021·天津·統(tǒng)考高考真題）閱讀下列材料，完成下面小題。
S蛋白是新冠病毒識別并感染靶細(xì)胞的重要蛋白，作為抗原被宿主免疫系統(tǒng)識別并應(yīng)答，因此S蛋白是新冠疫苗研發(fā)的重要靶點。下表是不同類型新冠疫苗研發(fā)策略比較。
類型
研發(fā)策略
滅活疫苗
新冠病毒經(jīng)培養(yǎng)、增殖，用理化方法滅活后制成疫苗。
腺病毒載體疫苗
利用改造后無害的腺病毒作為載體，攜帶S蛋白基因，制成疫苗。接種后，S蛋白基因啟動表達(dá)。
亞單位疫苗
通過基因工程方法，在體外合成S蛋白，制成疫苗。
核酸疫苗
將編碼S蛋白的核酸包裹在納米顆粒中，制成疫苗。接種后，在人體內(nèi)產(chǎn)生S蛋白。
減毒流感病毒載體疫苗
利用減毒流感病毒作為載體，帶S蛋白基因，并在載體病毒表面表達(dá)S蛋白，制成疫苗。
81．自身不含S蛋白抗原的疫苗是（????）
A．滅活疫苗
B．亞單位疫苗
C．核酸疫苗
D．減毒流感病毒載體疫苗
82．通常不引發(fā)細(xì)胞免疫的疫苗是（????）
A．腺病毒載體疫苗
B．亞單位疫苗
C．核酸疫苗
D．減毒流感病毒載體疫苗

（2020·天津·統(tǒng)考高考真題）閱讀下列材料，回答下列小題。
在應(yīng)用基因工程改變生物遺傳特性，進而利用種間關(guān)系進行生物防治方面，中國科學(xué)家取得了許多重要進展。
資料一：人類使用化學(xué)農(nóng)藥防治害蟲，致使環(huán)境不斷惡化。王成樹等從黃肥尾蝎中克隆出一種神經(jīng)毒素基因AalT，將其導(dǎo)入能寄生在許多害蟲體內(nèi)的綠僵菌中，增強綠僵菌致死害蟲的效應(yīng)，可有效控制蟲害大規(guī)模爆發(fā)。
資料二：小麥赤霉病是世界范圍內(nèi)極具毀滅性的農(nóng)業(yè)真菌病害。王宏偉、孔令讓等從長穗偃麥草中克隆出抗赤霉病主效基因Fhb7。將Fhb7導(dǎo)入小麥，其表達(dá)產(chǎn)物可減輕赤霉菌對小麥的感染，從而避免小麥赤霉病大規(guī)模爆發(fā)。
資料三：瘧疾由受瘧原蟲感染的雌按蚊通過叮咬在人群中傳播。王四寶等從幾種微生物中克隆出5種不同抗瘧機制的基因，將它們導(dǎo)入按蚊的腸道共生菌AS1中。在按蚊腸道內(nèi)，AS1工程菌分泌的基因表達(dá)產(chǎn)物可殺滅瘧原蟲。因AS1可在按蚊親代和子代種群中擴散，所以在含AS1工程菌按蚊的群落中，瘧疾傳播一般可被阻斷。
83．目的基因是基因工程的關(guān)鍵要素。關(guān)于上述資料中涉及的目的基因，下列分析正確的是（????）
A．來源：必須從動物、植物或微生物的基因組文庫中直接獲取
B．作用：上述基因表達(dá)產(chǎn)物一定影響防治對象的生長或存活
C．轉(zhuǎn)化：均可采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
D．應(yīng)用：只有將目的基因?qū)敕乐螌ο蟛拍苓_(dá)到生物防治目的
84．在利用種間關(guān)系進行生物防治的措施中，下列分析錯誤的是（????）
A．施用綠僵菌工程菌減少蟲害，不改變綠僵菌與害蟲之間存在寄生關(guān)系
B．引入Fhb7增強小麥的抗菌性，目的是調(diào)節(jié)真菌對植物的寄生能力
C．AS1工程菌分泌的多種表達(dá)產(chǎn)物不改變AS1與按蚊之間存在共生關(guān)系
D．使AS1工程菌分泌多種表達(dá)產(chǎn)物殺滅瘧原蟲，目的是調(diào)節(jié)按蚊對人的寄生能力

相關(guān)試卷

2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編——專題22胚胎工程：

這是一份2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編——專題22胚胎工程，文件包含2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編專題22胚胎工程解析版docx、2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編專題22胚胎工程原卷版docx等2份試卷配套教學(xué)資源，其中試卷共18頁， 歡迎下載使用。

2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編——專題21細(xì)胞工程：

這是一份2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編——專題21細(xì)胞工程，文件包含2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編專題21細(xì)胞工程解析版docx、2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編專題21細(xì)胞工程原卷版docx等2份試卷配套教學(xué)資源，其中試卷共79頁， 歡迎下載使用。

2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編——專題14免疫調(diào)節(jié)：

這是一份2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編——專題14免疫調(diào)節(jié)，文件包含2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編專題14免疫調(diào)節(jié)解析版docx、2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編專題14免疫調(diào)節(jié)原卷版docx等2份試卷配套教學(xué)資源，其中試卷共101頁， 歡迎下載使用。

英語朗讀寶

相關(guān)試卷 更多

2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編——專題13體液經(jīng)調(diào)節(jié)

2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編——專題13體液經(jīng)調(diào)節(jié)
2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編——專題12神經(jīng)調(diào)節(jié)

2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編——專題12神經(jīng)調(diào)節(jié)
2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編——專題5遺傳的細(xì)胞基礎(chǔ)

2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編——專題5遺傳的細(xì)胞基礎(chǔ)
2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編——專題3細(xì)胞的代謝

2019-2023年高考生物學(xué)分類匯編——專題3細(xì)胞的代謝
資料下載及使用幫助
版權(quán)申訴
版權(quán)申訴
若您為此資料的原創(chuàng)作者，認(rèn)為該資料內(nèi)容侵犯了您的知識產(chǎn)權(quán)，請掃碼添加我們的相關(guān)工作人員，我們盡可能的保護您的合法權(quán)益。
入駐教習(xí)網(wǎng)，可獲得資源免費推廣曝光，還可獲得多重現(xiàn)金獎勵，申請 精品資源制作， 工作室入駐。
版權(quán)申訴二維碼
高考專區(qū)
歡迎來到教習(xí)網(wǎng)
  • 900萬優(yōu)選資源，讓備課更輕松
  • 600萬優(yōu)選試題，支持自由組卷
  • 高質(zhì)量可編輯，日均更新2000+
  • 百萬教師選擇，專業(yè)更值得信賴
微信掃碼注冊
qrcode
二維碼已過期
刷新

微信掃碼，快速注冊

手機號注冊
手機號碼

手機號格式錯誤

手機驗證碼 獲取驗證碼

手機驗證碼已經(jīng)成功發(fā)送，5分鐘內(nèi)有效

設(shè)置密碼

6-20個字符，數(shù)字、字母或符號

注冊即視為同意教習(xí)網(wǎng)「注冊協(xié)議」及「隱私條款」
QQ注冊
手機號注冊
微信注冊

注冊成功

返回
頂部