?高二生物
一、選擇題：本題共15小題，每小題只有一個(gè)選項(xiàng)符合題目要求。
1. 甲流是由甲型流感病毒引起的流感。甲型流感病毒是負(fù)鏈RNA病毒，負(fù)鏈RNA不能直接編碼蛋白質(zhì)，需要通過(guò)病毒自身的復(fù)制機(jī)制產(chǎn)生正鏈RNA，再用于編碼病毒蛋白。奧司他韋能阻止甲型流感病毒在人體宿主細(xì)胞的復(fù)制和釋放，是治療甲流的有效藥物之一。下列說(shuō)法正確的是（　　）
A. 甲型流感病毒的遺傳物質(zhì)徹底水解的產(chǎn)物有4種
B. 甲型流感病毒與其宿主細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的區(qū)別主要是無(wú)核膜包被的細(xì)胞核
C. 甲型流感病毒感染人體細(xì)胞時(shí)，只把其核酸注入到宿主細(xì)胞內(nèi)
D. 使用奧司他韋治療甲流時(shí)，在感染初期使用效果更好
【答案】D
【解析】
【分析】病毒屬于非細(xì)胞生物，主要由核酸和蛋白質(zhì)外殼構(gòu)成，依賴活的宿主細(xì)胞才能完成生命活動(dòng)。病毒的復(fù)制方式屬于繁殖，自身只提供核酸作為模板，合成核酸和蛋白質(zhì)的原料及酶等均有宿主細(xì)胞提供。
【詳解】A、甲型流感病毒是負(fù)鏈RNA病毒，其遺傳物質(zhì)徹底水解的產(chǎn)物有6種，包括核糖、磷酸和A、U、C、G四種堿基，A錯(cuò)誤；
B、甲型流感病毒沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，與其宿主細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的區(qū)別主要是有無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)，B錯(cuò)誤；
C、甲型流感病毒的負(fù)鏈RNA不能直接編碼蛋白，需要通過(guò)病毒自身的復(fù)制機(jī)制產(chǎn)生正鏈RNA，所以甲型流感病毒感染人體細(xì)胞時(shí)，可能會(huì)將其所含的RNA復(fù)制酶和RNA一塊注入宿主細(xì)胞內(nèi) ，C錯(cuò)誤；
D、奧司他韋能阻止甲型流感病毒在人體宿主細(xì)胞的復(fù)制和釋放，感染初期進(jìn)入細(xì)胞中的病毒較少，在感染初期使用效果更好，D正確。
故選D。
2. 光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)時(shí)，有時(shí)需要對(duì)樣本進(jìn)行染色，使其在顯微鏡下更加明顯。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（　?。?br /> A. 若需要觀察的樣本染色較淺，反光鏡應(yīng)由平面調(diào)至凹面
B. 高倍鏡下可看到葉肉細(xì)胞中葉綠體的形態(tài)和分布，無(wú)需染色
C. 觀察花生子葉中的脂肪顆粒時(shí)，需先用蘇丹Ⅲ染液對(duì)其染色
D. 對(duì)洋蔥根尖細(xì)胞的染色體進(jìn)行染色，應(yīng)使用醋酸洋紅液等堿性染料
【答案】A
【解析】
【分析】標(biāo)本染色較淺或無(wú)色，為了能夠觀察到物像，需要調(diào)暗視野亮度。
脂肪可用蘇丹Ⅲ染液（或蘇丹Ⅳ染液）鑒定，呈橘黃色（或紅色）。
葉肉細(xì)胞中的葉綠體，呈綠色、扁平的橢球形或球形，散布于細(xì)胞質(zhì)中，可以在高倍顯微鏡下觀察它的形態(tài)。
【詳解】A、標(biāo)本染色較淺或無(wú)色，為了能夠觀察到物像，需要調(diào)暗視野亮度，觀察時(shí)應(yīng)選用平面鏡和小光圈，A錯(cuò)誤；
B、葉綠體含有葉綠素，高倍鏡下可看到葉肉細(xì)胞中葉綠體的形態(tài)和分布，無(wú)需染色，B正確；
C、觀察花生子葉中的脂肪顆粒時(shí)，需先用蘇丹Ⅲ染液對(duì)其染色，再用50%乙醇溶液對(duì)染色后的花生切片洗去浮色，C正確；
D、對(duì)洋蔥根尖細(xì)胞的染色體進(jìn)行染色，應(yīng)使用醋酸洋紅液或甲紫等堿性染料，便于觀察，D正確。
故選A。
3. 骨骼肌細(xì)胞膜損傷后，會(huì)被TRIM72分子快速感知，該分子會(huì)將細(xì)胞內(nèi)囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)到損傷部位形成膜補(bǔ)丁，進(jìn)而修復(fù)細(xì)胞膜。TRIM72屬于TRIM蛋白家族成員，具有RING、B-box、Coiled-coil和SPRY四個(gè)區(qū)域，B-box區(qū)相互作用有利于TRIM72分子間二硫鍵的形成，促進(jìn)TRIM72的寡聚化，SPRY區(qū)能與囊泡結(jié)合。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（　?。?br /> A. 細(xì)胞膜受損后會(huì)改變細(xì)胞膜的通透性，影響細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)
B. B-box區(qū)與SPRY區(qū)功能不同的直接原因是分子結(jié)構(gòu)不同
C. 多個(gè)TRIM72分子形成寡聚體的過(guò)程中會(huì)脫下水分子
D. SPRY區(qū)能與囊泡結(jié)合說(shuō)明該區(qū)域具有一定的親脂性
【答案】C
【解析】
【分析】細(xì)胞膜的功能是：①作為細(xì)胞的邊界將細(xì)胞與外界環(huán)境隔開(kāi)，保護(hù)內(nèi)部環(huán)境的穩(wěn)定，②細(xì)胞膜具有控制物質(zhì)進(jìn)出的功能，③細(xì)胞膜具有進(jìn)行細(xì)胞間信息交流的功能。
【詳解】A、細(xì)胞膜有控制物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞的功能，受損后細(xì)胞膜通透改變，影響細(xì)胞穩(wěn)態(tài)，A正確；
B、蛋白質(zhì)的功能不同直接原因是分子結(jié)構(gòu)不同，B正確；
C、TRIM72分子形成寡聚體的過(guò)程中，二硫鍵的形成，不會(huì)脫下水分子，C錯(cuò)誤；
D、SPRY區(qū)能與囊泡結(jié)合說(shuō)明該區(qū)域具有一定的親脂性，D正確。
故選C。
4. 根結(jié)線蟲(chóng)是一種寄生于植物根部的細(xì)長(zhǎng)線蟲(chóng)，會(huì)導(dǎo)致根部形成根結(jié)，阻礙營(yíng)養(yǎng)和水分的吸收。研究發(fā)現(xiàn)，一種芽孢桿菌合成的次生代謝產(chǎn)物能抑制根結(jié)線蟲(chóng)的生長(zhǎng)和繁殖。下列說(shuō)法正確的是（　　）
A. 根結(jié)線蟲(chóng)代謝和遺傳的基本單位是細(xì)胞核
B. 根細(xì)胞吸收水分的過(guò)程體現(xiàn)了細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性
C. 與根結(jié)線蟲(chóng)細(xì)胞相比，根尖分生區(qū)細(xì)胞特有的結(jié)構(gòu)是細(xì)胞壁
D. 芽孢桿菌合成次生代謝產(chǎn)物的過(guò)程需要多種細(xì)胞器的分工合作
【答案】C
【解析】
【分析】1、細(xì)胞器：
（1）核糖體是無(wú)膜的結(jié)構(gòu)，能將氨基酸脫水縮合形成多肽鏈（或蛋白質(zhì)），是蛋白質(zhì)的“裝配機(jī)器”。
（2）溶酶體中含有多種水解酶（水解酶的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)），能夠分解很多種物質(zhì)以及衰老、損傷的細(xì)胞器，清除侵入細(xì)胞的病毒或病菌，被比喻為細(xì)胞內(nèi)的“酶?jìng)}庫(kù)”“消化系統(tǒng)”。
（3）內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞內(nèi)表面積最大的膜結(jié)構(gòu)。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的功能是蛋白質(zhì)的加工運(yùn)輸以及與脂質(zhì)合成有關(guān)。
（4）高爾基體在動(dòng)物細(xì)胞中與分泌物的形成有關(guān)，植物中與有絲分裂中細(xì)胞壁形成有關(guān)。
（5）液泡主要存在于植物細(xì)胞中，內(nèi)有細(xì)胞液，含有糖類、無(wú)機(jī)鹽、色素和蛋白質(zhì)等，可以調(diào)節(jié)植物細(xì)胞內(nèi)的環(huán)境，充盈的液泡還可以使植物細(xì)胞保持堅(jiān)挺。
2、原核生物的細(xì)胞核沒(méi)有核膜，即沒(méi)有真正的細(xì)胞核。真核細(xì)胞有細(xì)胞核。
【詳解】A、根結(jié)線蟲(chóng)代謝和遺傳的基本單位是細(xì)胞，A錯(cuò)誤；
B、根細(xì)胞吸收水分的過(guò)程體現(xiàn)了細(xì)胞膜具有選擇透過(guò)性，B錯(cuò)誤；
C、與根結(jié)線蟲(chóng)是動(dòng)物，沒(méi)有細(xì)胞壁，與根結(jié)線蟲(chóng)細(xì)胞相比，根尖分生區(qū)細(xì)胞特有的結(jié)構(gòu)是細(xì)胞壁，C正確；
D、芽孢桿菌是原核生物，只有核糖體一種細(xì)胞器，D錯(cuò)誤。
故選C。
5. 我國(guó)古代勞動(dòng)人民根據(jù)紅曲霉有耐酸的特點(diǎn)，采用明礬和酸米來(lái)調(diào)節(jié)酸度抑制雜菌，培養(yǎng)出高純度的紅曲，紅曲可以用于傳統(tǒng)黃酒的制作。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（　?。?br /> A. 將紅曲加入發(fā)酵壇內(nèi)相當(dāng)于微生物培養(yǎng)過(guò)程中的“接種”
B. 通過(guò)明礬和酸米調(diào)節(jié)底物的酸度抑制雜菌的生長(zhǎng)屬于選擇培養(yǎng)
C. 黃酒釀造初期利用木耙攪拌，目的是通氣和調(diào)節(jié)溫度以加快菌種的生長(zhǎng)繁殖
D. 黃酒制作屬于傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)，其所用的大米、糯米等需要進(jìn)行嚴(yán)格滅菌
【答案】D
【解析】
【分析】1、直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一次發(fā)酵保存下來(lái)的面團(tuán)、鹵汁等發(fā)酵物中的微生物進(jìn)行發(fā)酵、制作食品的技術(shù)一般稱為傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)。
2、傳統(tǒng)發(fā)酵以混合菌種的固體發(fā)酵及半固體發(fā)酵為主，通常是家庭式或作坊式的。利用傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)制作的食品還有酒、醬、醬油、醋、泡菜和豆或等。
【詳解】A、微生物培養(yǎng)工程中的“接種”是放入微生物，題干說(shuō)紅曲可以用于傳統(tǒng)黃酒的制作，即將紅曲加入發(fā)酵壇內(nèi)相當(dāng)于微生物培養(yǎng)過(guò)程中的“接種”，A正確；
B、選擇培養(yǎng)基是允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，所以通過(guò)明礬和酸米調(diào)節(jié)底物的酸度抑制雜菌的生長(zhǎng)屬于選擇培養(yǎng)，B正確；
C、黃酒釀造初期利用木耙攪拌，增加溶氧量，有利于散熱，從而達(dá)到通氣和調(diào)節(jié)溫度的目的，以加快菌種的生長(zhǎng)繁殖，C正確；
D、黃酒制作屬于傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)，傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)是直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一次發(fā)酵保存下來(lái)的面團(tuán)、鹵汁等發(fā)酵物中的微生物進(jìn)行發(fā)酵、制作食品的技術(shù)，所以其所用的大米、糯米等不需要進(jìn)行嚴(yán)格滅菌，D錯(cuò)誤。
故選D。
6. 為純化某種細(xì)菌，某小組在培養(yǎng)基上劃線接種了該種細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（　?。?br />
A. 接種環(huán)應(yīng)該在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒實(shí)現(xiàn)滅菌
B. 每次接種前接種環(huán)都需灼燒滅菌，完成圖示接種過(guò)程至少需灼燒3次
C. 使用后的培養(yǎng)基在丟棄前要進(jìn)行滅菌處理，以免污染環(huán)境
D. 為驗(yàn)證培養(yǎng)基滅菌是否合格，該實(shí)驗(yàn)應(yīng)再設(shè)計(jì)一個(gè)未接種的培養(yǎng)基作為對(duì)照
【答案】B
【解析】
【分析】微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的關(guān)鍵是防止雜菌污染，無(wú)菌操作分為消毒和滅菌，其中消毒只是殺死物體表面的微生物，而殺菌是殺死所有微生物，常用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌和灼燒滅菌。
【詳解】A、接種時(shí)，對(duì)接種環(huán)等金屬用具通常用灼燒滅菌法，將接種環(huán)直接在酒精燈火焰的燃燒層充分灼燒，可以迅速?gòu)氐椎販缇?，A正確；
B、平板劃線法接種和分離微生物時(shí)，每劃線一次需灼燒一次接種環(huán)，最后一次劃線結(jié)束時(shí)，為防止菌種污染仍需要灼燒一次，共需灼燒4次接種環(huán)，B錯(cuò)誤；
C、為了防止環(huán)境污染或感染操作者，使用過(guò)的培養(yǎng)基在丟棄之前要進(jìn)行滅菌處理，C正確；
D、微生物培養(yǎng)過(guò)程應(yīng)該進(jìn)行無(wú)菌操作，配制培養(yǎng)基要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，可以將一個(gè)未接種的平板倒置培養(yǎng)作為對(duì)照以檢測(cè)培養(yǎng)基滅菌是否徹底，D正確。
故選B。
7. 木質(zhì)素是一類復(fù)雜的有機(jī)聚合物，在細(xì)胞壁的形成中特別重要，賦予木材和樹(shù)皮剛性且不容易腐爛的特性?？蒲腥藛T從木材場(chǎng)土壤中篩選分離出木質(zhì)素分解菌并進(jìn)行鑒定，實(shí)驗(yàn)流程如圖所示。下列說(shuō)法正確的是（　?。?br />
A. 取土樣時(shí)用的鐵鏟和取樣袋在使用前都需要消毒，操作完成后一定要洗手
B. 圖示的接種方法還可用于微生物的計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少
C. 若每次稀釋倍數(shù)都是10倍，則步驟④試管內(nèi)是9mL無(wú)菌水，共將土壤稀釋了105倍
D. 若培養(yǎng)得到⑥所示的菌落，則所用的培養(yǎng)基是以木質(zhì)素為唯一碳源
【答案】B
【解析】
【分析】微生物常見(jiàn)的接種的方法。①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落；②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)梯度稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。
【詳解】A、取土樣時(shí)用的鐵鏟和取樣袋在使用前都需要滅菌，操作完成后一定要洗手，A錯(cuò)誤；
B、圖示的接種方法是稀釋涂布平板法，方法還可用于微生物的計(jì)數(shù)，該方法接種時(shí)當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞（細(xì)菌）連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，統(tǒng)計(jì)結(jié)果往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少，B正確；
C、若每次稀釋倍數(shù)都是10倍，則步驟④試管內(nèi)是9mL無(wú)菌水，共將土壤稀釋了104倍，C錯(cuò)誤；
D、若培養(yǎng)得到了如步驟⑥所示的菌落，已知這些細(xì)菌均為異養(yǎng)型細(xì)菌，菌5周圍沒(méi)有透明圈，說(shuō)明菌5不是木質(zhì)素分解菌；菌1～4周圍均有透明圈，說(shuō)明這些菌是木質(zhì)素分解菌，則步驟⑥所用的培養(yǎng)基是添加了木質(zhì)素的牛肉膏蛋白胨的培養(yǎng)基，D錯(cuò)誤。
故選B。
8. 甜葉菊植株中所含的甜菊糖是理想的蔗糖替代甜味劑，但甜葉菊種子繁殖遺傳性狀不穩(wěn)定?？蒲腥藛T利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)提高甜葉菊的繁殖效率，其不同階段的培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（　?。?br />
A. 培養(yǎng)至圖1所示過(guò)程一般不需要光照
B. 愈傷組織再分化為根和叢芽，本質(zhì)上是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果
C. 與圖1相比，圖2培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素含量的比值顯著高于1
D. 若用該技術(shù)直接生產(chǎn)甜菊糖，只需培養(yǎng)至圖1所示的階段
【答案】C
【解析】
【分析】1、植物組織培養(yǎng)技術(shù)是指將離體的植物器官、組織或細(xì)胞等，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其形成完整植株的技術(shù)。
2、植物細(xì)胞培養(yǎng)是指在離體條件下對(duì)單個(gè)植物細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行培養(yǎng)使其增殖的技術(shù)。
【詳解】A、培養(yǎng)至圖1所示的過(guò)程，為脫分化過(guò)程，該培養(yǎng)過(guò)程一般不需要光照，A正確；
B、愈傷組織再分化為根和叢芽，發(fā)生細(xì)胞分化，細(xì)胞分化本質(zhì)上是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果，B正確；
C、圖1培養(yǎng)基中（脫分化過(guò)程）生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素含量的比值約等于1，促進(jìn)愈傷組織的形成；圖2培養(yǎng)基中（再分化過(guò)程）生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素含量的比值小于1，促進(jìn)芽的分化，C錯(cuò)誤；
D、若用該技術(shù)直接生產(chǎn)甜菊糖（細(xì)胞產(chǎn)物），只需培養(yǎng)至圖1（愈傷組織）所示的階段即可，D正確。
故選D。
9. 細(xì)胞培養(yǎng)肉技術(shù)是一種新型食品合成生物技術(shù)，其合成過(guò)程是首先將肌肉干細(xì)胞從肌肉組織中分離出來(lái)，隨后在體外大規(guī)模培養(yǎng)細(xì)胞獲得肌肉、脂肪等組織，再經(jīng)食品化加工得到肉類食品。下列說(shuō)法正確的是（　?。?br /> A. 宜用胃蛋白酶處理肌肉組織得到分散的肌肉干細(xì)胞
B. 培養(yǎng)過(guò)程中需要定期更換培養(yǎng)液，以防止雜菌污染
C. 體外大規(guī)模培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，培養(yǎng)箱中需要O2，不需要CO2
D. 肌肉干細(xì)胞具有組織特異性，只能培養(yǎng)獲得肌肉、脂肪等組織
【答案】D
【解析】
【分析】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程：取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)。
【詳解】A、宜用胰蛋白酶處理肌肉組織得到分散的肌肉干細(xì)胞，A錯(cuò)誤；
B、培養(yǎng)過(guò)程中需要定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害，B錯(cuò)誤；
C、體外大規(guī)模培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，培養(yǎng)箱中需要O2供細(xì)胞代謝利用，需要CO2維持pH，C錯(cuò)誤；
D、成體干細(xì)胞具有組織特異性，只能分化為特定的細(xì)胞或組織，肌肉干細(xì)胞屬于成體干細(xì)胞具有組織特異性，只能培養(yǎng)獲得肌肉、脂肪等組織，D正確。
故選D。
10. 荷斯坦奶牛產(chǎn)奶量高，某公司引進(jìn)了純種荷斯坦奶牛，欲利用胚胎移植和胚胎分割技術(shù)繁育高產(chǎn)的荷斯坦奶牛群體。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（　?。?br /> A. 胚胎分割可以提高胚胎的利用率
B. 胚胎移植一般選擇囊胚或原腸胚時(shí)期的胚胎
C. 胚胎分割可看作動(dòng)物無(wú)性繁殖或克隆的方法之一
D. 胚胎移植實(shí)質(zhì)上是早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移
【答案】B
【解析】
【分析】1、胚胎移植是指將通過(guò)體外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀態(tài)相同的雌性動(dòng)物體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。
2、胚胎分割是指采用機(jī)械方法將早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等，經(jīng)移植獲得同卵雙胎或多胎的技術(shù)。來(lái)自同一胚胎的后代具有相同的遺傳物質(zhì)，因此胚胎分割可以看作動(dòng)物無(wú)性繁殖或克隆的方法之一。
【詳解】A、胚胎分割可以將早期胚胎分割多份，再經(jīng)移植獲得同卵雙胎或多胎，所以說(shuō)胚胎分割可以提高胚胎的利用率，A正確；
B、胚胎移植一般選擇桑葚胚或囊胚時(shí)期的胚胎，B錯(cuò)誤；
C、胚胎分割使得來(lái)自同一胚胎的后代具有相同的遺傳物質(zhì)，因此胚胎分割可以看作動(dòng)物無(wú)性繁殖或克隆的方法之一，C正確；
D、胚胎移植實(shí)質(zhì)上是早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移，D正確。
故選B。
11. 科研人員用基因工程的方法從大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)獲得了干擾素，干擾素主要用于治療慢性甲型和乙型肝炎。下列說(shuō)法正確的是（　?。?br /> A. 干擾素是一種具有干擾病毒復(fù)制作用的糖蛋白
B. 轉(zhuǎn)錄干擾素基因需要用到解旋酶和RNA聚合酶
C. 發(fā)酵生產(chǎn)的干擾素屬于大腸桿菌的初生代謝產(chǎn)物
D. 只要檢測(cè)出大腸桿菌細(xì)胞中含有干擾素基因就可用于生產(chǎn)干擾素
【答案】A
【解析】
【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。
（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。
【詳解】A、干擾素是一種具有干擾病毒復(fù)制作用的糖蛋白，A正確；
B、轉(zhuǎn)錄干擾素基因需要用到RNA聚合酶，不需要解旋酶，B錯(cuò)誤；
C、發(fā)酵生產(chǎn)的干擾素（細(xì)胞生命活動(dòng)不需要的產(chǎn)物）屬于大腸桿菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物，C錯(cuò)誤；
D、大腸桿菌細(xì)胞中有干擾素基因不一定表達(dá)，需要檢查有沒(méi)有產(chǎn)生干擾素，D錯(cuò)誤。
故選A。
12. 科研人員將4個(gè)基因（Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4）通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)入小鼠成纖維細(xì)胞中，然后在培養(yǎng)ES細(xì)胞的培養(yǎng)基上培養(yǎng)2~3周后，這些細(xì)胞顯示出ES細(xì)胞的形態(tài)，具有活躍的分裂能力，稱為iPS細(xì)胞。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（　?。?br /> A. 實(shí)驗(yàn)中使用的逆轉(zhuǎn)錄病毒屬于基因工程中的載體
B. 導(dǎo)入的4個(gè)基因可能與基因表達(dá)調(diào)控有關(guān)
C. 若要了解每個(gè)基因作用的相對(duì)大小，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的對(duì)照組應(yīng)導(dǎo)入上述4個(gè)基因
D. iPS細(xì)胞進(jìn)一步分化成各種組織細(xì)胞的過(guò)程不能體現(xiàn)細(xì)胞的全能性
【答案】D
【解析】
【分析】1、iPS細(xì)胞是誘導(dǎo)多能干細(xì)胞，是在體外誘導(dǎo)體細(xì)胞產(chǎn)生的，能分化成為具有特定功能的細(xì)胞來(lái)治療疾病。無(wú)須破壞胚胎，且避免免疫排斥反應(yīng)。
2、ES細(xì)胞是胚胎干細(xì)胞，來(lái)源于早期胚胎，能夠分化成為動(dòng)物體內(nèi)的任何細(xì)胞，并進(jìn)一步形成組織、器官甚至生物個(gè)體。局限性是需從胚胎中獲取，涉及倫理問(wèn)題，限制了它在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用。
【詳解】A、題干中將4個(gè)基因（Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4）通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)入小鼠成纖維細(xì)胞中，使用的逆轉(zhuǎn)錄病毒屬于基因工程中的運(yùn)載體，A正確；
B、題干中說(shuō)導(dǎo)入4個(gè)基因后，在培養(yǎng)ES細(xì)胞培養(yǎng)基上培養(yǎng)2~3周后，這些細(xì)胞顯示出ES細(xì)胞的形態(tài)，具有活躍的分裂能力，所以說(shuō)導(dǎo)入的4個(gè)基因可能與基因表達(dá)調(diào)控有關(guān)，B正確；
C、若要了解每個(gè)基因作用的相對(duì)大小，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的對(duì)照組應(yīng)導(dǎo)入上述4個(gè)基因，實(shí)驗(yàn)組分別加入4個(gè)基因中的3個(gè)基因，通過(guò)比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，得出每個(gè)基因作用的相對(duì)大小，C正確；
D、細(xì)胞的全能性是指細(xì)胞經(jīng)分裂和分化后，仍具有產(chǎn)生完整有機(jī)體或分化成其他各種細(xì)胞的潛能和特性，而iPS細(xì)胞進(jìn)一步分化成各種組織細(xì)胞的過(guò)程能體現(xiàn)細(xì)胞的全能性，D錯(cuò)誤。
故選D。
13. 研究發(fā)現(xiàn)，在某植物液泡膜上的Na+/K+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白可提高其耐鹽堿能力?？蒲腥藛T以該轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白對(duì)應(yīng)的AINHX基因作為目的基因，通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出了耐鹽堿的馬鈴薯，AINHX基因兩端的核苷酸序列如下表所示。下列說(shuō)法正確的是（　?。?br /> 已知序列
5'-AACTATGCGCTCATGA- - - - GCAATGCGTAGCCTCT
3'-TTGATACGCGAGTACT- - - - CGTTACGCATCGGAGA
PCR引物
①5'-TTGATACGCGAGTACT ②5'-GCAATGCGTAGCCTCT
③5'-AGAGGCTACGCATTGC ④5'-AACTATGCGCTCATGA

A. 構(gòu)建表達(dá)載體使用的工具酶是限制酶、DNA連接酶和載體
B. 利用PCR技術(shù)擴(kuò)增AINHX基因時(shí)，需要選擇引物③和④
C. 培育耐鹽堿的馬鈴薯時(shí)，可利用顯微注射法將重組載體導(dǎo)入受體細(xì)胞
D. 應(yīng)從分子水平上對(duì)轉(zhuǎn)基因馬鈴薯進(jìn)行檢測(cè)，以確定其能否表現(xiàn)出耐鹽堿的特性
【答案】B
【解析】
【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟:
(1)目的基因的獲取:方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。
(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建:是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等，標(biāo)記基因可便于目的基因的鑒定和篩選。
(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞:根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不-樣。 將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法;將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法;將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。
(4) 目基因的檢測(cè)與鑒定:分子水平上的檢測(cè):①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因一 _DNA分子雜交技術(shù);②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA一-分 子雜交技術(shù);③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)一抗原 抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定:抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。
【詳解】A、構(gòu)建基因表達(dá)載體使用的工具是限制酶、DNA連接酶和載體，使用的工具酶是限制酶、DNA連接酶，而載體不是工具酶，A錯(cuò)誤；
B、引物是一段已知目的基因的核苷酸序列，③與已知目的基因的這條鏈3'-TTGATACGCGAGTACT- - - - CGTTACGCATCGGAGA的5'到3'的部分序列相同，④與已知目的基因的這條鏈5'-AACTATGCGCTCATGA- - - - GCAATGCGTAGCCTCT的5'到3'的部分序列相同，所以利用PCR技術(shù)擴(kuò)增AINHX基因時(shí)，需要選擇引物③和④，B正確；
C、培育耐鹽堿的馬鈴薯時(shí)，常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將重組載體導(dǎo)入受體細(xì)胞，C錯(cuò)誤；
D、確定其能否表現(xiàn)出耐鹽堿的特性，應(yīng)從個(gè)體水平上對(duì)轉(zhuǎn)基因馬鈴薯進(jìn)行檢測(cè)，D錯(cuò)誤。
故選B。
14. 胰島素用于治療糖尿病，但胰島素注射后易在皮下堆積，需較長(zhǎng)時(shí)間才能進(jìn)入血液，進(jìn)入血液后又易被分解，因此治療效果受到影響?？蒲腥藛T研制了速效胰島素，其生產(chǎn)過(guò)程如圖所示。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（　?。?br />
A. 速效胰島素的生產(chǎn)需要用到蛋白質(zhì)工程和發(fā)酵工程
B. 大腸桿菌合成的新的胰島素不能正常發(fā)揮作用
C. 除人工合成DNA外，還可以通過(guò)定點(diǎn)突變技術(shù)獲得目的基因
D. 可以用Ca2+處理的方法直接將新的胰島素基因?qū)氪竽c桿菌細(xì)胞中
【答案】D
【解析】
【分析】蛋白質(zhì)工程的過(guò)程：預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有氨基酸序列→找到對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列（基因）。蛋白質(zhì)工程得到的蛋白質(zhì)一般不是天然存在的蛋白質(zhì)。

【詳解】A、圖示的前半部分是利用蛋白質(zhì)工程設(shè)計(jì)速效胰島素的生產(chǎn)過(guò)程，后半部分是利用發(fā)酵工程生產(chǎn)速效胰島素的過(guò)程，A正確；
B、大腸桿菌是原核生物，沒(méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體對(duì)胰島素原進(jìn)行加工，因此大腸桿菌合成的新的胰島素不能正常發(fā)揮作用，B正確；
C、基因定點(diǎn)突變是指按照特定的要求，使基因的特定序列發(fā)生插入、刪除、置換、重排等變異，除人工合成DNA外，還可以通過(guò)定點(diǎn)突變技術(shù)獲得目的基因，C正確；
D、可以用Ca2+處理的方法可以將含有新的胰島素基因的基因表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中，D錯(cuò)誤。
故選D。
15. 下列有關(guān)生物技術(shù)的安全性與倫理問(wèn)題說(shuō)法，正確的是（　　）
A. 可以通過(guò)在體內(nèi)和體外對(duì)基因進(jìn)行敲除、插入等設(shè)計(jì)完美嬰兒
B. 生殖性克隆是指利用克隆技術(shù)產(chǎn)生特定的細(xì)胞、組織和器官治療疾病的技術(shù)
C. 將α-淀粉酶基因與目的基因一起轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞可以防止轉(zhuǎn)基因花粉的傳播
D. 只要有證據(jù)表明轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品有害，就應(yīng)該禁止轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用
【答案】C
【解析】
【分析】轉(zhuǎn)基因生物的安全性問(wèn)題：食物安全（滯后效應(yīng)、過(guò)敏源、營(yíng)養(yǎng)成分改變）、生物安全（對(duì)生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對(duì)生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）。對(duì)待轉(zhuǎn)基因技術(shù)的利弊，正確的做法應(yīng)該是趨利避害，不能因噎廢食。
【詳解】A、利用基因編輯技術(shù)設(shè)計(jì)試管嬰兒，設(shè)計(jì)完美試管嬰兒，已經(jīng)涉及到新生命的誕生，會(huì)造成生物技術(shù)安全與倫理問(wèn)題，不能對(duì)嬰兒進(jìn)行基因設(shè)計(jì)，A錯(cuò)誤；
B、治療性克隆是指利用克隆技術(shù)產(chǎn)生特定的細(xì)胞、組織和器官治療疾病的技術(shù)，我國(guó)禁止生殖性克隆，B錯(cuò)誤；
C、將玉米的α-淀粉酶基因與目的基因轉(zhuǎn)入植物中，由于α-淀粉酶基因可以阻斷淀粉儲(chǔ)藏而使花粉失活，因此可以防止轉(zhuǎn)基因花粉的傳播，C正確；
D、科技是把雙刃劍，要發(fā)展有利的一面，限制有危害的一面，不能因噎廢食，D錯(cuò)誤。
故選C。
二、選擇題：本題共5小題，每小題有一個(gè)或多個(gè)選項(xiàng)符合題目要求。
16. 線粒體自噬是指將老化、受損的線粒體分解，并產(chǎn)生新線粒體進(jìn)行替代的過(guò)程。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（　?。?br /> A. 線粒體具雙層膜，且內(nèi)、外膜面積差異不大
B. 動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)線粒體自噬往往需要溶酶體的參與
C. 線粒體自噬會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)ATP的含量明顯減少
D. 線粒體自噬是為維持線粒體和細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的一種主動(dòng)性自噬
【答案】AC
【解析】
【分析】線粒體是細(xì)胞進(jìn)行有氧呼吸的主要場(chǎng)所，是細(xì)胞的動(dòng)力車間，細(xì)胞生命活動(dòng)所需的能量，大約95%來(lái)自線粒體。
【詳解】A、線粒體具雙層膜，內(nèi)膜內(nèi)折形成嵴增大膜面積，內(nèi)、外膜面積差異很大，A錯(cuò)誤；
B、受損的線粒體由雙層膜包裹，形成自噬小體，自噬小體最終與溶酶體融合，被其中的水解酶降解，B正確；
C、ATP在細(xì)胞內(nèi)含量相對(duì)穩(wěn)定，線粒體自噬不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)ATP的含量明顯減少，C錯(cuò)誤；
D、線粒體自噬可維持線粒體和細(xì)胞穩(wěn)態(tài)，是基因控制的一種主動(dòng)性自噬，D正確。
故選AC。
17. 微生物發(fā)酵可以將糧食（如玉米、小麥等）及各種植物纖維加工成燃料乙醇，將燃料乙醇和普通汽油按一定比例混配，就形成了目前廣泛使用的乙醇汽油。下列說(shuō)法正確的是（　?。?br /> A. 微生物發(fā)酵結(jié)束后，可以采用過(guò)濾、沉淀等純化措施來(lái)獲得乙醇
B. 發(fā)酵過(guò)程要隨時(shí)檢測(cè)培養(yǎng)液中的微生物數(shù)量和產(chǎn)物濃度
C. 可以使用非糧食生物材料（如秸稈）來(lái)規(guī)避生產(chǎn)乙醇汽油導(dǎo)致糧食短缺的風(fēng)險(xiǎn)
D. 通過(guò)微生物發(fā)酵可以從微生物細(xì)胞中提取單細(xì)胞蛋白作食品添加劑
【答案】BC
【解析】
【分析】1、如果發(fā)酵產(chǎn)品是微生物細(xì)胞本身，可在發(fā)酵結(jié)束之后，采用過(guò)濾、沉淀等方法將菌體分離和干燥，即可得到產(chǎn)品；如果產(chǎn)品是代謝物，可根據(jù)產(chǎn)物的性質(zhì)采取適當(dāng)?shù)奶崛?、分離和純化措施來(lái)獲得產(chǎn)品。
2、按照我國(guó)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，乙醇汽油是90%的普通汽油與10%的燃料乙醇調(diào)和而成的，由于燃料乙醇所占比例較低，雖然需要消耗部分糧食，但不會(huì)增加糧食短缺的風(fēng)險(xiǎn)。而且在生產(chǎn)燃料乙醇時(shí)，可以利用秸桿、稻草等加工轉(zhuǎn)化為乙醇，糧食、稻米用于人們生活，以降低糧食短缺的風(fēng)險(xiǎn)。
【詳解】A、因?yàn)槲⑸锇l(fā)酵結(jié)束后，產(chǎn)品是代謝物，可根據(jù)產(chǎn)物的性質(zhì)采取適當(dāng)?shù)奶崛　⒎蛛x和純化措施來(lái)獲得產(chǎn)品，A錯(cuò)誤；
B、發(fā)酵過(guò)程要隨時(shí)檢測(cè)培養(yǎng)液中的微生物數(shù)量和產(chǎn)物濃度，以了解發(fā)酵進(jìn)程，B正確；
C、乙醇汽油是90%的普通汽油與10%的燃料乙醇調(diào)和而成的，由于燃料乙醇所占比例較低，雖然需要消耗部分糧食，但不會(huì)增加糧食短缺的風(fēng)險(xiǎn)。而且在生產(chǎn)燃料乙醇時(shí)，可以利用秸桿、稻草等加工轉(zhuǎn)化為乙醇，所以可以使用非糧食生物材料（如秸稈）來(lái)規(guī)避生產(chǎn)乙醇汽油導(dǎo)致糧食短缺的風(fēng)險(xiǎn)，C正確；
D、單細(xì)胞蛋白，也叫微生物蛋白，它是用許多工農(nóng)業(yè)廢料及石油廢料，人工培養(yǎng)的微生物菌體。因而，單細(xì)胞蛋白不是一種純蛋白質(zhì)，而是由蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、核酸及不是蛋白質(zhì)的含氮化合物、維生素和無(wú)機(jī)化合物等混合物組成的細(xì)胞質(zhì)團(tuán)，通過(guò)發(fā)酵工程獲得的大量的微生物菌體是單細(xì)胞蛋白，所以通過(guò)微生物發(fā)酵可以從微生物細(xì)胞中提取單細(xì)胞蛋白，但不能作為食品添加劑，D錯(cuò)誤。
故選BC。
18. 我國(guó)科學(xué)家經(jīng)多年反復(fù)試驗(yàn)，獲得了體細(xì)胞克隆猴。培育過(guò)程中，為提高胚胎的發(fā)育率和妊娠率，研究人員將組蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重構(gòu)胚，同時(shí)用組蛋白脫乙酰酶抑制劑TSA處理了重構(gòu)胚，克隆猴的培育流程如圖所示。下列說(shuō)法正確的是（　?。?br />
A. 從胎猴中取出的體細(xì)胞，需在添加天然血清的合成培養(yǎng)基中培養(yǎng)
B. 卵母細(xì)胞的“去核”實(shí)際是指去除卵母細(xì)胞的紡錘體-染色體復(fù)合物
C. TSA處理重構(gòu)胚可降低組蛋白的乙酰化水平，從而提高胚胎的發(fā)育率和妊娠率
D. 與鼠相比，培育克隆猴對(duì)人類疾病致病機(jī)制的研究、新藥研發(fā)等具有更重要的意義
【答案】ABD
【解析】
【分析】動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)條件：
（1）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：糖類、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素等構(gòu)成的合成培養(yǎng)基，通常需要加入血清等天然成分；
（2）穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境：
a.適宜的溫度、PH和滲透壓；
b.適宜的氣體環(huán)境；
c.無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境。
【詳解】A、因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要在由糖類、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素等構(gòu)成的合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，加入血清等天然成分，所以從胎猴中取出的體細(xì)胞，需在添加天然血清的合成培養(yǎng)基中培養(yǎng)，A正確；
B、將卵母細(xì)胞培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期后，進(jìn)行去核操作，去核事實(shí)上是去除卵母細(xì)胞的紡錘體-染色體結(jié)構(gòu)，B正確；
C、TSA是組蛋白脫乙酰酶抑制劑，用TSA處理重構(gòu)胚可提高組蛋白的乙?；剑{(diào)節(jié)重構(gòu)胚相關(guān)基因的表達(dá)，從而提高胚胎的發(fā)育率和妊娠率，C錯(cuò)誤；
D、猴屬于靈長(zhǎng)類動(dòng)物，與人更接近，因此與鼠相比，培育克隆猴對(duì)人類疾病致病機(jī)制的研究、新藥研發(fā)等具有更重要的意義，D正確。
故選ABD。
19. 重疊延伸PCR技術(shù)是設(shè)計(jì)含突變點(diǎn)的互補(bǔ)核苷酸片段作為引物，在PCR過(guò)程中，互補(bǔ)的核苷酸片段形成重疊，重疊的部分互為模板，通過(guò)多次PCR擴(kuò)增，從而獲得突變基因的方法?？蒲腥藛T將枯草芽孢桿菌的甘油激酶的第270位氨基酸M突變?yōu)?，構(gòu)建出了對(duì)甘油高效利用的枯草芽孢桿菌。下列說(shuō)法正確的是（　　）

A. 通過(guò)PCR1獲得產(chǎn)物AB需要進(jìn)行2輪PCR擴(kuò)增
B. 無(wú)法通過(guò)AB下鏈和CD上鏈獲得突變產(chǎn)物AD
C. 在同一反應(yīng)體系中加入四種引物可以同時(shí)獲得大量產(chǎn)物AB和CD
D. 通過(guò)重疊延伸PCR技術(shù)對(duì)甘油激酶的改造屬于蛋白質(zhì)工程
【答案】BD
【解析】
【分析】1、PCR原理：在解旋酶作用下，打開(kāi)DNA雙鏈，每條DNA單鏈作為母鏈，以4種游離脫氧核苷酸為原料，合成子鏈，在引物作用下，DNA聚合酶從引物3'端開(kāi)始延伸DNA鏈，即DNA的合成方向是從子鏈的5'端自3'端延伸的。實(shí)際上就是在體外模擬細(xì)胞內(nèi)DNA的復(fù)制過(guò)程。DNA的復(fù)制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈。
2、PCR反應(yīng)過(guò)程是：變性→復(fù)性→延伸。
【詳解】A、通過(guò)PCR1獲得產(chǎn)物AB需要進(jìn)行3輪PCR擴(kuò)增，A錯(cuò)誤；
B、AB下鏈的延伸方向向左，CD上鏈的延伸方向向右，所以無(wú)法通過(guò)AB下鏈和CD上鏈獲得突變產(chǎn)物AD，B正確；
C、需要分別在不同的反應(yīng)體系中通過(guò)PCR獲得AB和CD，C錯(cuò)誤；
D、通過(guò)重疊延伸PCR技術(shù)對(duì)甘油激酶的改造，創(chuàng)造了自然界不存在的蛋白質(zhì)，則屬于蛋白質(zhì)工程，D正確。
故選BD。
20. 關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（　?。?br /> A. DNA溶于酒精，蛋白質(zhì)不溶于酒精，利用這一原理初步分離DNA與蛋白質(zhì)
B. 將研磨液過(guò)濾到燒杯中，在冰箱放置一段時(shí)間后，上清液中含DNA和蛋白質(zhì)
C. 將析出的絲狀物或沉淀物溶于2mol/L的NaCl溶液中，加入二苯胺試劑在沸水浴下鑒定DNA
D. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果變色不明顯，可能是研磨不充分導(dǎo)致DNA不能從細(xì)胞核中充分釋放
【答案】A
【解析】
【分析】DNA的粗提取與鑒定的實(shí)驗(yàn)原理是：①DNA的溶解性，DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的氯化鈉溶液中的溶解度不同，利用這一特點(diǎn)可以選擇適當(dāng)濃度的鹽溶液可以將DNA溶解或析出，從而達(dá)到分離的目的；②DNA不溶于酒精溶液，細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)可以溶解于酒精，利用這一原理可以將蛋白質(zhì)和DNA進(jìn)一步分離；③DNA對(duì)于酶、高溫和洗滌劑的耐受性，蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但是不能水解DNA，蛋白質(zhì)不能耐受較高溫度，DNA能耐受較高溫度洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜，但是對(duì)DNA沒(méi)有影響；
【詳解】A、DNA不溶于酒精溶液，而細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)可以溶解于酒精，利用這一原理可以將蛋白質(zhì)和DNA進(jìn)一步分離，A錯(cuò)誤；
B、DNA提取的實(shí)驗(yàn)中，要將研磨液過(guò)濾到燒杯中，在冰箱放置一段時(shí)間后，取上清液，所以上清液中含有DNA和蛋白質(zhì)，低溫可以防止DNA被分解，B正確；
C、DNA鑒定時(shí)，將提取到的絲狀物溶解在2mol/L的NaCl溶液中，加入二苯胺試劑，在水浴加熱下呈現(xiàn)藍(lán)色，C正確；
D、如果出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果變色不明顯，可能是研磨不充分導(dǎo)致DNA不能從細(xì)胞核中充分釋放，提取的DNA分子減少，D正確。
故選A。
三、非選擇題：本題共5小題。
21. 細(xì)胞作為生命活動(dòng)的基本單位，其形態(tài)、結(jié)構(gòu)、功能保持相對(duì)穩(wěn)定。如圖為高等動(dòng)物細(xì)胞亞顯微結(jié)構(gòu)模式圖，細(xì)胞中的各種結(jié)構(gòu)既各司其職又相互配合，使細(xì)胞成為基本的生命系統(tǒng)。

（1）圖中標(biāo)注的結(jié)構(gòu)中，_______（填標(biāo)號(hào)）參與構(gòu)成了該細(xì)胞的生物膜系統(tǒng)。
（2）在高等植物細(xì)胞中不存在的結(jié)構(gòu)是圖中的______（填標(biāo)號(hào)）；在原核細(xì)胞中也存在的細(xì)胞器是_______。
（3）與皮膚的表皮細(xì)胞相比，心肌細(xì)胞中_____的數(shù)量明顯增多，判斷的理由是_____。
（4）某具有分泌功能的動(dòng)物細(xì)胞，在合成并分泌蛋白質(zhì)前后幾種生物膜面積的變化如右圖所示。圖中b代表的細(xì)胞結(jié)構(gòu)對(duì)應(yīng)上圖中的_______（填標(biāo)號(hào)），a膜面積發(fā)生變化的原因是______。

【答案】（1）①②④⑥⑦
（2） ①. ③ ②. 核糖體
（3） ①. 線粒體 ②. 心肌細(xì)胞消耗的能量多，而細(xì)胞生命活動(dòng)所需能量大部分來(lái)自線粒體
（4） ①. ⑥ ②. a代表內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜，分泌蛋白的合成與分泌過(guò)程中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜一部分會(huì)脫離形成囊泡，使a膜面積減小
【解析】
【分析】①細(xì)胞膜，②線粒體，③中心體，④內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，⑤核糖體，⑥高爾基體，⑦細(xì)胞核。
【小問(wèn)1詳解】
據(jù)圖可知，①是細(xì)胞膜，②是線粒體，③是中心體，④是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，⑤是核糖體，⑥是高爾基體，⑦是細(xì)胞核，中心體和核糖體沒(méi)有膜結(jié)構(gòu)，細(xì)胞膜、核膜和細(xì)胞器膜構(gòu)成了生物膜系統(tǒng)，則圖中的①②④⑥⑦參與構(gòu)成了該細(xì)胞的生物膜系統(tǒng)。
【小問(wèn)2詳解】
在高等植物細(xì)胞中沒(méi)有③中心體。原核生物只有核糖體一種細(xì)胞器。
【小問(wèn)3詳解】
心肌細(xì)胞消耗能量多于皮膚細(xì)胞，而細(xì)胞生命活動(dòng)所需能量大部分來(lái)自線粒體，所以心肌細(xì)胞含有較多的線粒體。
【小問(wèn)4詳解】
在分泌蛋白合成與分泌過(guò)程中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)粗加工后“出芽”形成囊泡，囊泡與高爾基體膜融合，這樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜轉(zhuǎn)化為高爾基體膜；高爾基體再加工后，也“出芽”形成囊泡，囊泡與細(xì)胞膜融合，這樣高爾基體膜就轉(zhuǎn)化為細(xì)胞膜。所以分泌蛋白合成與分泌過(guò)程中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜面積減少，即a；細(xì)胞膜面積增多，即c；高爾基體膜面積幾乎不變，即b。a代表內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜，分泌蛋白的合成與分泌過(guò)程中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜一部分會(huì)脫離形成囊泡，使a膜面積減小。
22. 血紅蛋白是由血紅素和珠蛋白組成，具有運(yùn)輸氧氣和二氧化碳的功能。血紅素能使血液呈紅色；珠蛋白肽鏈有兩種，一種是由141個(gè)氨基酸組成的α鏈，另一種是非α鏈，包括β、δ、γ三種，各有146個(gè)氨基酸。
（1）β、δ、y三種非α鏈在結(jié)構(gòu)上不同的原因是______（答出2點(diǎn)即可）。
（2）不同血紅蛋白的珠蛋白肽鏈組成不同，成人的血紅蛋白主要由兩條α鏈和兩條β鏈組成。據(jù)此推測(cè)，合成這樣一分子血紅蛋白需要脫掉________個(gè)水分子。
（3）Fe是組成血紅素的重要元素，這體現(xiàn)了無(wú)機(jī)鹽具有的_______功能。
（4）強(qiáng)酸能夠改變蛋白質(zhì)分子內(nèi)部相互作用力，如氫鍵、疏水力、范德華力，從而改變蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)使蛋白質(zhì)變性。變性的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變得伸展、松散，從而暴露出更多的肽鍵。為驗(yàn)證強(qiáng)酸使蛋白質(zhì)變性的這一原理，現(xiàn)提供血紅蛋白、豆?jié){、梨汁、雙縮脲試劑、斐林試劑、蘇丹Ⅲ染液、稀鹽酸溶液、蒸餾水，請(qǐng)從中選擇合適的材料和試劑設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，要求簡(jiǎn)要寫出實(shí)驗(yàn)思路并預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)思路：________。
預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果：________。
【答案】（1）組成肽鏈的氨基酸種類和排列順序不同，肽鏈盤曲折疊形成的空間結(jié)構(gòu)不同
（2）570 （3）構(gòu)成細(xì)胞內(nèi)復(fù)雜化合物
（4） ①. 實(shí)驗(yàn)思路：選取豆?jié){作為實(shí)驗(yàn)材料，并均等分為甲、乙兩組；甲組加入適量的稀鹽酸溶液，乙組加入等量的蒸餾水；一段時(shí)間后，向甲、乙兩組加入等量的雙縮脲試劑，觀察并比較兩組的顏色變化 ②. 預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果：甲、乙兩組的溶液都呈紫色，甲組的紫色比乙組更深
【解析】
【分析】蛋白質(zhì)水解后為氨基酸。脫下的水分子數(shù)=肽鍵數(shù)目=氨基酸數(shù)-肽鏈數(shù)，若有n個(gè)氨基酸分子縮合成m條肽鏈，則可形成（n-m）個(gè)肽鍵，脫去（n-m）個(gè)水分子，至少有氨基和羧基分別為m個(gè)。
【小問(wèn)1詳解】
蛋白質(zhì)具有多樣性，β、δ、y三種非α鏈在結(jié)構(gòu)上不同的原因是組成肽鏈的氨基酸種類和排列順序不同，肽鏈盤曲折疊形成的空間結(jié)構(gòu)不同。
【小問(wèn)2詳解】
脫去水分子數(shù)=氨基酸數(shù)一肽鏈數(shù)，人的血紅蛋白主要由兩條α鏈和兩條β鏈組成，則脫掉的水分子=（141＋146）×2-4=570個(gè)。
【小問(wèn)3詳解】
Fe是組成血紅素的重要元素，這體現(xiàn)了無(wú)機(jī)鹽具有的構(gòu)成細(xì)胞內(nèi)復(fù)雜化合物的功能。
【小問(wèn)4詳解】
分析題意，實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖球?yàn)證強(qiáng)酸使蛋白質(zhì)變性的這一原理，實(shí)驗(yàn)的自變量是酸的有無(wú)，因變量是蛋白質(zhì)是否變性，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)遵循對(duì)照與單一變量原則，故可設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)如下：
實(shí)驗(yàn)思路：選取豆?jié){作為實(shí)驗(yàn)材料，并均等分為甲、乙兩組；甲組加入適量的稀鹽酸溶液，乙組加入等量的蒸餾水；一段時(shí)間后，向甲、乙兩組加入等量的雙縮脲試劑，觀察并比較兩組的顏色變化。
預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果：甲、乙兩組的溶液都呈紫色，甲組的紫色比乙組更深。
23. 不同動(dòng)物乳汁的成分雖各有差異，但都含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，是微生物生長(zhǎng)繁殖的良好培養(yǎng)基。乳制品一旦被微生物污染，會(huì)腐敗變質(zhì)而失去食用價(jià)值，甚至引起食物中毒。
（1）鮮乳汁常用巴氏消毒法處理，其優(yōu)點(diǎn)是_______。若要制成發(fā)酵乳，需要對(duì)鮮乳汁進(jìn)行滅菌后再接種乳酸菌發(fā)酵，此處的滅菌是指_______。
（2）根據(jù)食品安全的有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，每毫升合格的牛奶中細(xì)菌總數(shù)不超過(guò)50000個(gè)。若要測(cè)定牛奶中微生物數(shù)量，可利用特定的______在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)，但該方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往比實(shí)際的活菌數(shù)要偏_____，原因是______。
（3）通常新擠出的乳汁在25℃可保持6h不腐敗變質(zhì)，在這段時(shí)間內(nèi)細(xì)菌是受到抑制的，待乳汁的自身殺菌作用消失后，將乳汁置于室溫下，可以觀察到乳汁所特有的菌群交替現(xiàn)象，如圖所示。推測(cè)下列說(shuō)法合理的是_______。

A. 新鮮乳汁中含有溶菌酶等抗菌物質(zhì)，對(duì)微生物具有抑制作用
B. 新擠出的乳汁在25℃保持6h后，乳汁中的微生物全部來(lái)自空氣
C. 乳鏈球菌代謝使乳汁pH降低后，因乳酸桿菌耐酸能力強(qiáng)而開(kāi)始大量繁殖
D. 當(dāng)pH降低至3．0~3．5時(shí)，絕大多數(shù)細(xì)菌受到抑制，真菌開(kāi)始大量繁殖
E. 乳汁的乳糖在胨化細(xì)菌階段前基本已消耗掉，能分解蛋白質(zhì)和脂肪的胨化細(xì)菌開(kāi)始大量繁殖
【答案】（1） ①. 可以殺死乳汁中的絕大多數(shù)微生物，并且不會(huì)破壞牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分 ②. 使用強(qiáng)烈理化方法殺死鮮乳汁中所有的微生物
（2） ①. 細(xì)菌計(jì)數(shù)板（或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板） ②. 大 ③. 顯微鏡直接計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和 （3）ACDE
【解析】
【分析】1、消毒是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。
2、滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
3、利用顯微鏡進(jìn)行直接計(jì)數(shù)，也是一種常用的、快速直觀的測(cè)定微生物數(shù)量的方法。該方法利用特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)，然后再計(jì)算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和。
【小問(wèn)1詳解】
巴氏消毒法的優(yōu)點(diǎn)是可以殺死牛奶中的絕大多數(shù)微生物，并且不破壞牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分；若要制成發(fā)酵乳，需要對(duì)鮮乳汁進(jìn)行滅菌后再接種乳酸菌發(fā)酵，此處的滅菌是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死鮮乳汁內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
【小問(wèn)2詳解】
利用顯微鏡進(jìn)行直接計(jì)數(shù)，利用特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)，然后再計(jì)算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量，所以要測(cè)定牛奶中微生物數(shù)量，可利用特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板（或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板）在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)，該計(jì)數(shù)結(jié)果往往比實(shí)際數(shù)目偏大，原因是顯微鏡統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和。
【小問(wèn)3詳解】
A、通常新擠出的乳汁在25℃可保持6h不腐敗變質(zhì)，在這段時(shí)間內(nèi)細(xì)菌是受到抑制的，說(shuō)明新鮮乳汁中含有溶菌酶等抗菌物質(zhì)，對(duì)微生物具有抑制作用，A正確；
B、新擠出的乳汁在25℃保持6h后，由曲線可知，6h后的乳汁中喊你有少量的乳鏈球菌和乳酸桿菌，所以6h后乳汁中的微生物不全部來(lái)自空氣，B錯(cuò)誤；
C、由圖可知，6h后，乳鏈球菌的含量逐漸增加，PH逐漸下降，而乳酸桿菌隨著P會(huì)下降，乳酸桿菌的數(shù)量逐漸增加，所以乳鏈球菌代謝使乳汁pH降低后，因乳酸桿菌耐酸能力強(qiáng)而開(kāi)始大量繁殖，C正確；
D、由圖可知，當(dāng)pH降低至3．0~3．5時(shí)，乳鏈球菌和乳酸桿菌的數(shù)量下降直至為0，即絕大多數(shù)細(xì)菌受到抑制，真菌開(kāi)始大量繁殖，D正確；
E、由圖可知，PH降至3~3.5時(shí)，真菌數(shù)量先增加后減少，意味著乳汁中的乳糖基本消耗完了，真菌沒(méi)有可以利用的碳源，所以數(shù)量下降；而胨化細(xì)菌因?yàn)槟芊纸獾鞍踪|(zhì)和脂肪，開(kāi)始大量繁殖，E正確。
故選ACDE。
24. 癌癥的免疫療法是指重新激活抗腫瘤的免疫細(xì)胞，進(jìn)而克服腫瘤的免疫細(xì)胞，進(jìn)而克服腫瘤的免疫逃逸、某些種類癌細(xì)胞表面高表達(dá)銀蛋白PSMA，CD28是T細(xì)胞表面受體，T細(xì)胞的有效激活依賴于CD28在癌細(xì)胞與T細(xì)胞結(jié)合部位的聚集。科研人員嘗試構(gòu)建雙特異性抗體PSMA×CD28的生產(chǎn)流程，如圖1所示；雙特異性抗體PSMA×CD28的結(jié)構(gòu)及作用機(jī)理，如圖2所示。

（1）據(jù)圖1分析，制備雙特異性抗體PSMA×CD28的過(guò)程中，用到的動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)主要有_______（答出2點(diǎn)即可）。
（2）雙特異性抗體PSMA×CD28制備時(shí)，應(yīng)先將______（物質(zhì)X）分別注射到小鼠體內(nèi)再分離出B淋巴細(xì)胞。將B淋巴細(xì)胞分別與小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合，常用的誘導(dǎo)方法有____（答出2種即可）。
（3）抗體都是由兩條H鏈和兩條L鏈組成的4條肽鏈對(duì)稱結(jié)構(gòu)。據(jù)圖2分析，雜交瘤細(xì)胞A×B會(huì)產(chǎn)生多種抗體，原因是______。雙特異性抗體PSMA×CD28協(xié)助殺傷癌細(xì)胞的機(jī)理是_____。
【答案】（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合
（2） ①. PSMA、CD28 ②. PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導(dǎo)法
（3） ①. 融合細(xì)胞會(huì)表達(dá)出兩種L鏈和兩種H鏈，而L鏈和H鏈又是隨機(jī)組合的 ②. 雙特異性抗體PSMA×CD28既能結(jié)合PSMA，又能結(jié)合CD28，使CD28在癌細(xì)胞與T細(xì)胞結(jié)合部位聚集，從而有效激活T細(xì)胞殺傷癌細(xì)胞
【解析】
【分析】1、癌細(xì)胞形成的根本原因是原癌基因和抑癌基因發(fā)生基因突變。
2、癌細(xì)胞的主要特征：①細(xì)胞形態(tài)發(fā)生顯著改變；②細(xì)胞表面的糖蛋白減少；③獲得無(wú)限增殖的能力。
【小問(wèn)1詳解】
制備雙特異性單克隆抗體的過(guò)程中用到的動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)有動(dòng)物細(xì)胞融合和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。
【小問(wèn)2詳解】
雙特異性抗體PSMA×CD28制備時(shí)，PSMA、CD28相當(dāng)于抗原，需要先將PSMA、CD28分別注射到小鼠體內(nèi)刺激小鼠產(chǎn)生B淋巴細(xì)胞，再分離出B淋巴細(xì)胞。B淋巴細(xì)胞與小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合的方法有PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導(dǎo)法等。
【小問(wèn)3詳解】
融合細(xì)胞會(huì)表達(dá)出兩種L鏈和兩種H鏈，而L鏈和H鏈又是隨機(jī)組合的，所以雜交瘤細(xì)胞A×B會(huì)產(chǎn)生多種抗體。雙特異性抗體PSMA×CD28協(xié)助殺傷癌細(xì)胞的機(jī)理是雙特異性抗體PSMA×CD28既能結(jié)合PSMA，又能結(jié)合CD28，使CD28在癌細(xì)胞與T細(xì)胞結(jié)合部位聚集，從而有效激活T細(xì)胞殺傷癌細(xì)胞。
25. 小鼠腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因（kissl基因）僅在特定組織中表達(dá)，在雌性激素誘導(dǎo)下，細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)可以與kissl基因啟動(dòng)子P的特定區(qū)域結(jié)合，激活kissl基因的轉(zhuǎn)錄。

（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增kissl基因時(shí)，設(shè)計(jì)引物的作用是______。PCR是在PCR擴(kuò)增儀中自動(dòng)完成的，完成以后常采用_______來(lái)鑒定PCR的產(chǎn)物。
（2）據(jù)圖分析，在構(gòu)建kissl基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)使用限制酶______對(duì)圖1所示質(zhì)粒和圖2所示含kissl基因的DNA片段分別進(jìn)行切割，此過(guò)程選用這兩種限制酶的原因是______。
（3）研究人員擴(kuò)增了不同長(zhǎng)度的啟動(dòng)子片段P1~P5，分別構(gòu)建這些片段與綠色熒光蛋白基因融合的載體，轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)_______（填“含kissl基因且能表達(dá)”或“含kissl基因不能表達(dá)”或“不含kissl基因”）的小鼠細(xì)胞中，以確定不同片段的轉(zhuǎn)錄活性。對(duì)導(dǎo)入不同啟動(dòng)子的細(xì)胞進(jìn)行綠色熒光強(qiáng)度檢測(cè)，結(jié)果如圖所示請(qǐng)推測(cè)哪種啟動(dòng)子片段的轉(zhuǎn)錄活性最高，并闡釋你的理由_______。根據(jù)啟動(dòng)子P的激活機(jī)制，推測(cè)啟動(dòng)子P應(yīng)用于基因工程的優(yōu)勢(shì)是_______。


【答案】（1） ①. 使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸 ②. 瓊脂糖凝膠電泳
（2） ①. HindⅢ和KpnI ②. 目的基因和啟動(dòng)子含HindⅢ和KpnI的識(shí)別序列；HindⅢ和KpnI酶切后構(gòu)建的表達(dá)載體中目的基因與啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄方向一致
（3） ①. 含kiss1基因且能表達(dá) ②. P3的轉(zhuǎn)錄活性最高，因?yàn)閷?dǎo)入P3的細(xì)胞中綠色熒光強(qiáng)度最強(qiáng) ③. 以P作為目的基因的啟動(dòng)子，可通過(guò)外源雌激素調(diào)控啟動(dòng)子的激活，進(jìn)而調(diào)控目的基因的表達(dá)
【解析】
【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等，標(biāo)記基因可便于目的基因的鑒定和篩選。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法；（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因——DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA——分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)——抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。
【小問(wèn)1詳解】
PCR技術(shù)中的引物使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸。常采用瓊脂糖凝膠電泳來(lái)鑒定PCR的產(chǎn)物。
【小問(wèn)2詳解】
質(zhì)粒上啟動(dòng)子和終止子之間有四個(gè)酶切位點(diǎn)，目的基因和啟動(dòng)子上含HindⅢ和KpnI的識(shí)別序列，且HindⅢ和KpnI酶切后構(gòu)建的表達(dá)載體中目的基因與啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄方向一致，因此選擇限制酶HindⅢ和KpnI對(duì)質(zhì)粒和含kissl基因的DNA片段分別進(jìn)行切割。
【小問(wèn)3詳解】
腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因（kissl基因）僅在特定組織中表達(dá)，在雌性激素誘導(dǎo)下，細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)可以與kissl基因啟動(dòng)子P的特定區(qū)域結(jié)合，激活kissl基因的轉(zhuǎn)錄，實(shí)驗(yàn)探究不同片段的轉(zhuǎn)錄活性，應(yīng)選擇有kissl基因且能表達(dá)的小鼠細(xì)胞作為轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞，以探究細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)與哪一片段結(jié)合后轉(zhuǎn)錄活性最高。由圖可知，在不同長(zhǎng)度的啟動(dòng)子片段P1~P5，P3的細(xì)胞中綠色熒光強(qiáng)度最強(qiáng)，故P3啟動(dòng)子片段的轉(zhuǎn)錄活性最高。由題意“細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)可以與kissl基因啟動(dòng)子P的特定區(qū)域結(jié)合，激活kissl基因的轉(zhuǎn)錄”可知，啟動(dòng)子P應(yīng)用于基因工程時(shí)，以P作為目的基因的啟動(dòng)子，可通過(guò)外源雌激素調(diào)控啟動(dòng)子的激活，進(jìn)而調(diào)控目的基因的表達(dá)。

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