細(xì)胞的全能性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性
產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細(xì)胞
1.基因工程的3種基本工具
2.基因工程的操作流程(1)獲取目的基因的3種途徑
提醒：①?gòu)腸DNA文庫(kù)獲取的目的基因不含啟動(dòng)子和終止子。②利用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)藥物時(shí)，應(yīng)將目的基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子連接到一起。
(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建——重組質(zhì)粒的構(gòu)建
(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
(4)目的基因的檢測(cè)與鑒定
3.轉(zhuǎn)基因生物的三大安全性問題(1)______安全：滯后效應(yīng)、過敏原、營(yíng)養(yǎng)成分改變等。(2)______安全：對(duì)生物_________的影響等。(3)環(huán)境安全：對(duì)生態(tài)系統(tǒng)_________的影響等。
題型一　工具酶的應(yīng)用1.下圖是表達(dá)新基因用的質(zhì)粒的示意圖，若要將目的基因插入到質(zhì)粒上的A處，則切割基因時(shí)可用的是(　　)
A.HindⅢ B.EcRⅠ C.EcB D.PstⅠ解析　A處有3處(BamHⅠ、EcB、ClaⅠ)限制酶的切點(diǎn)，結(jié)合題中選項(xiàng)可知，只有使用EcB限制酶切割時(shí)，才能讓目的基因插入到A處。答案　C
題型二　基因工程的應(yīng)用及蛋白質(zhì)工程2.(2019·無錫一模)下列關(guān)于基因工程的敘述，正確的是(　　)A.構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)需要在目的基因前加上起始密碼子B.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法可以將目的基因隨機(jī)插入受體細(xì)胞的染色體DNA上C.標(biāo)記基因中不能有限制酶的識(shí)別位點(diǎn)以防止其被破壞而失去作用D.導(dǎo)入人胰島素基因的大腸桿菌可直接生產(chǎn)出有活性的人胰島素
解析　構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)需要在目的基因前加上啟動(dòng)子；農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒的T－DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上，依據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點(diǎn)，采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T－DNA上，可以將目的基因隨機(jī)插入受體細(xì)胞的染色體DNA上；標(biāo)記基因中可以有限制酶的識(shí)別位點(diǎn)，為了防止標(biāo)記基因被破壞而失去作用，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，使用的限制酶應(yīng)該不具有識(shí)別標(biāo)記基因中的限制酶的識(shí)別位點(diǎn)的能力；導(dǎo)入人胰島素基因的大腸桿菌，因沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，不能對(duì)胰島素進(jìn)行加工，所以不能直接生產(chǎn)出有活性的人胰島素。答案　B
1.PCR相關(guān)技術(shù)原理與條件
微專題2　PCR技術(shù)及DNA的粗提取與鑒定
2.PCR的反應(yīng)過程及結(jié)果
3.DNA的粗提取與鑒定
1.(2019·常州一模)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，其原理與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制類似(如圖所示)。圖中引物為單鏈DNA片段，它是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。下列敘述錯(cuò)誤的有(　　)
A.用PCR方法擴(kuò)增目的基因時(shí)不必知道基因的全部序列B.設(shè)計(jì)引物時(shí)需要避免引物之間形成堿基互補(bǔ)配對(duì)而造成引物自連C.退火溫度過高可能導(dǎo)致PCR反應(yīng)得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物D.第四輪循環(huán)產(chǎn)物中同時(shí)含有引物A和引物B的DNA片段所占的比例為15/16
解析　PCR是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定的DNA分子片段的技術(shù)，其前提是有一段已知目的基因的核苷酸序列，不需要知道其全部序列就可擴(kuò)增；PCR過程中需要兩種引物分子，不同引物能靠堿基互補(bǔ)配對(duì)而形成(部分)雙鏈的話會(huì)造成引物不能同模板DNA結(jié)合，也就不能發(fā)生進(jìn)一步的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，這一點(diǎn)需要避免；若退火溫度過高，則引物與模板DNA無法形成部分雙鏈，PCR也就不能發(fā)生；由圖可知，由原來的每條母鏈為模板合成的兩個(gè)新DNA分子中，只含有引物A或引物B，而以新合成的子鏈為模板合成新DNA分子時(shí)，兩種引物都含有，故第四輪循環(huán)共產(chǎn)生16個(gè)DNA分子，其中2分子DNA只含有1種引物，因此同時(shí)含有A和B引物的DNA分子是14個(gè)，占14/16。答案　D
1.把握細(xì)胞工程六大技術(shù)原理
2.植物組織培養(yǎng)過程(1)植物組織培養(yǎng)的2個(gè)關(guān)鍵
提醒：①固體培養(yǎng)基組成：無機(jī)營(yíng)養(yǎng)、有機(jī)營(yíng)養(yǎng)、激素、瓊脂。②植物組織培養(yǎng)中添加蔗糖的目的是提供營(yíng)養(yǎng)和調(diào)節(jié)滲透壓。
(2)針對(duì)三類目標(biāo)(試管苗、人工種子、細(xì)胞產(chǎn)物)的培養(yǎng)流程
(3)概念：植物體細(xì)胞雜交就是將不同種的植物體細(xì)胞，在一定條件下融合成
，并把雜種細(xì)胞培育成新的植物體的技術(shù)。
不管是染色體數(shù)、基因型還是染色體組數(shù)都采用直接相加的方法。
(4)雜種細(xì)胞的形成標(biāo)志——新細(xì)胞壁的形成。(5)培養(yǎng)雜種植株的技術(shù)——植物組織培養(yǎng)。
提醒：①動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中兩次使用胰蛋白酶：第一次：處理剪碎的組織，使其分散成單個(gè)細(xì)胞。第二次：使貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞從瓶壁上脫落下來。
②傳代細(xì)胞的特點(diǎn)傳代培養(yǎng)到10代以內(nèi)的細(xì)胞核型穩(wěn)定，10～50代時(shí)部分細(xì)胞核型可能發(fā)生變化，50代以后遺傳物質(zhì)可能發(fā)生變化。③避免雜菌污染的措施：培養(yǎng)液及培養(yǎng)用具滅菌處理，加入一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液。④區(qū)分原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的關(guān)鍵是是否分瓶培養(yǎng)。
5.理清動(dòng)物體細(xì)胞核移植
提醒：(1)選擇受體細(xì)胞為去核卵母細(xì)胞的原因①營(yíng)養(yǎng)豐富；②體積大，易操作；③含有激發(fā)細(xì)胞核全能性表達(dá)的物質(zhì)。(2)核移植獲得的克隆動(dòng)物與提供細(xì)胞核的親本性狀可能不同的三個(gè)原因：①克隆動(dòng)物遺傳物質(zhì)來自兩個(gè)親本。②發(fā)育過程中可能發(fā)生基因突變或染色體變異。③外界環(huán)境可能引起不可遺傳的變異。
題型一　植物細(xì)胞工程1.下列有關(guān)細(xì)胞工程的敘述，正確的是(　　)A.PEG是促細(xì)胞融合劑，可直接誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合B.用原生質(zhì)體制備人工種子，要防止細(xì)胞破裂C.骨髓瘤細(xì)胞經(jīng)免疫處理，可直接獲得單克隆抗體D.核移植克隆的動(dòng)物，其線粒體DNA來自供卵母體
解析　PEG是促細(xì)胞融合劑，但植物細(xì)胞不能直接融合，需先去壁形成原生質(zhì)體才能融合，A錯(cuò)誤；制備人工種子應(yīng)用完整的植物細(xì)胞，不需制備原生質(zhì)體，B錯(cuò)誤；骨髓瘤細(xì)胞不能產(chǎn)生抗體，C錯(cuò)誤；核移植克隆的動(dòng)物，其線粒體只來自卵細(xì)胞即線粒體DNA來自供卵母體，D正確。答案　D
題型二　動(dòng)物細(xì)胞工程2.(2019·泰州一模)單克隆抗體可抑制病毒對(duì)宿主細(xì)胞的侵染。下列關(guān)于單抗制備的相關(guān)敘述中，錯(cuò)誤的是(　　)A.為提高單抗制備成功率，往往需要多次給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物注射同一種抗原B.給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物注射抗原后，相應(yīng)抗體檢測(cè)呈陽性說明發(fā)生了體液免疫C.單抗的制備過程中需用到DNA分子雜交技術(shù)和抗原—抗體雜交技術(shù)D.動(dòng)物體內(nèi)存在很多種漿細(xì)胞，每種漿細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體
解析　為提高單抗制備成功率，往往需要多次給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物注射同一種抗原； 抗體是體液免疫產(chǎn)生，給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物注射抗原后，相應(yīng)抗體檢測(cè)呈陽性，說明發(fā)生了體液免疫； 基因工程中需用到DNA分子雜交技術(shù)和抗原—抗體雜交技術(shù)而單抗的制備過程中，用不到DNA分子雜交。答案　C
1.理清胚胎移植、胚胎分割和胚胎干細(xì)胞的內(nèi)在聯(lián)系
巧記胚胎工程操作的“4個(gè)兩” ①精子的兩種獲能處理：培養(yǎng)法和化學(xué)誘導(dǎo)法。
2.試管嬰兒和設(shè)計(jì)試管嬰兒的異同點(diǎn)
設(shè)計(jì)試管嬰兒比試管嬰兒多出的是過程④，兩種技術(shù)均屬于有性生殖，其中屬于解決不孕夫婦生育問題的是試管嬰兒技術(shù)。
1. 下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞工程和胚胎工程的敘述，正確的是(　　)A.乳腺細(xì)胞比乳腺癌細(xì)胞更容易進(jìn)行離體培養(yǎng)B.細(xì)胞核移植主要在同種動(dòng)物、同種組織的細(xì)胞之間進(jìn)行C.采用胚胎分割技術(shù)產(chǎn)生同卵多胚的數(shù)量是有限的D.培養(yǎng)早期胚胎的培養(yǎng)液中含維生素、激素等多種能源物質(zhì)
解析　癌細(xì)胞比成熟動(dòng)物細(xì)胞更易進(jìn)行離體培養(yǎng)，體外培養(yǎng)的癌細(xì)胞對(duì)生長(zhǎng)因子的需要量顯著低于正常細(xì)胞，A錯(cuò)誤；細(xì)胞核移植不一定是在同種動(dòng)物、同種組織之間進(jìn)行，如可以將一種生物體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到另一種生物去核的卵母細(xì)胞中，B錯(cuò)誤；隨著胚胎分割次數(shù)的增多，分割胚的發(fā)育能力明顯降低，獲取同卵多胚的數(shù)量有限，C正確；維生素和激素都不能提供能量，D錯(cuò)誤。答案　C

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