微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用【知識(shí)梳理】 一、培養(yǎng)基的概念、種類及營(yíng)養(yǎng)要素1.概念:人們按照微生物對(duì)__營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)__的不同需求,配制出供其__生長(zhǎng)繁殖__的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。2.種類:按照培養(yǎng)基的__物理狀態(tài)__劃分為__液體培養(yǎng)基__和__固體培養(yǎng)基__。3.營(yíng)養(yǎng)要素:各種培養(yǎng)基一般都含有水、__碳源__、__氮源__、__無機(jī)鹽__,此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)__pH__、__特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)__以及__氧氣__的要求。二、無菌技術(shù)1.獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止__雜菌__的入侵。2.消毒和滅菌(1)消毒,常用方法有__煮沸__消毒法、__巴氏__消毒法和__化學(xué)藥劑__消毒法。(2)滅菌,常用方法:__干熱__滅菌、__灼燒__滅菌、__高壓蒸汽__滅菌。三、純化大腸桿菌的無菌操作本實(shí)驗(yàn)使用__固體__培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌的純化培養(yǎng),可分成__制備培養(yǎng)基__和__純化大腸桿菌__兩個(gè)階段進(jìn)行。四、篩選菌株1.自然界中目的菌株篩選的依據(jù):根據(jù)它對(duì)__生存環(huán)境__的要求,到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。2.實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理:人為提供有利于__目的菌株__生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等),同時(shí)__抑制__或__阻止__其他微生物生長(zhǎng)。3.篩選分解尿素的細(xì)菌:在選擇培養(yǎng)基的配方中,把尿  素作為培養(yǎng)基中的唯一__氮源__,原則上只有能夠利用__尿素__的微生物才能夠生長(zhǎng)。五、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法1.常用方法:__間接計(jì)數(shù)(活菌計(jì)數(shù))__法。2.統(tǒng)計(jì)依據(jù):當(dāng)樣品的__稀釋度__足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來源于樣品稀釋液中的一個(gè)__活菌__。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。3.操作:(1)設(shè)置重復(fù)組,增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。(2)為保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般選擇菌落數(shù)在__30~300__的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。4.計(jì)算公式:每克樣品中的菌株數(shù)=(C÷V)×M,其中C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的__平均菌落數(shù)__,V代表涂布平板時(shí)所用的__稀釋液的體積__,M代表__稀釋倍數(shù)__。六、設(shè)置對(duì)照1.對(duì)照實(shí)驗(yàn):是指除了__被測(cè)試條件__以外,其他條件都相同的實(shí)驗(yàn)。2.主要目的:排除實(shí)驗(yàn)組中__非測(cè)試因素__對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。例如,為了確認(rèn)培養(yǎng)基是否被雜菌污染,需以不進(jìn)行接種的培養(yǎng)基培養(yǎng)作為空白對(duì)照。七、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1.土壤取樣:(1)取樣原因:土壤有“微生物的__天然培養(yǎng)基__”之稱,同其他生物環(huán)境相比,土壤中的微生物數(shù)量__最大__,種類__最多__。(2)土壤要求:富含__有機(jī)質(zhì)__,pH接近__中性__且潮濕。(3)取樣部位:距地表約__3~8_cm__的土壤層。2.樣品稀釋:(1)稀釋原因:樣品的__稀釋程度__直接影響平板上生長(zhǎng)的__菌落數(shù)目__。(2)稀釋標(biāo)準(zhǔn):選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng),保證獲得菌落數(shù)在__30~300之間__,便于計(jì)數(shù)。3.微生物的培養(yǎng)與觀察:(1)培養(yǎng):根據(jù)不同微生物的需要,控制適宜的培養(yǎng)__溫度__和培養(yǎng)時(shí)間。(2)觀察:觀察方法:每隔24 h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目,最后選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。菌落的特征:包括菌落的__形狀__、__大小__、隆起程度和__顏色__等。八、操作提示1.無菌操作:(1)取土樣的用具在使用前都需要__滅菌 __。(2)實(shí)驗(yàn)操作均應(yīng)在__火焰旁__進(jìn)行。2.做好標(biāo)記:本實(shí)驗(yàn)使用的平板和試管比較多,為避免混淆,使用前應(yīng)標(biāo)明培養(yǎng)基的__種類__、__培養(yǎng)日期__以及平板上培養(yǎng)樣品的__稀釋度__等。3.制定計(jì)劃:對(duì)于耗時(shí)較長(zhǎng)的生物實(shí)驗(yàn),要事先制定計(jì)劃,以便提高_(dá)_工作效率__。4.菌種鑒定:細(xì)菌合成的__脲酶__將尿素分解成氨,使培養(yǎng)基的__堿性__增強(qiáng)。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入__酚紅__指示劑,培養(yǎng)某種細(xì)菌后,若指示劑變____,可初步鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素。九、纖維素與纖維素酶1.纖維素(1)化學(xué)組成:由__C、H、O__三種元素組成,是地球上含量最豐富的__多糖__類物質(zhì)。(2)分布及作用:__棉花__是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物,此外木材、作物秸稈等也富含纖維素;纖維素是構(gòu)成植物__細(xì)胞壁__的主要組成成分之一。(3)某些商品纖維素水溶性的__羧甲基纖維素鈉__(CMC—Na)不溶于水的__微晶纖維素__(Avicel)2.纖維素酶(1)組成:纖維素酶是一種__復(fù)合酶__,包括三種組分,即__C1__、__Cx__、__葡萄糖苷酶__。(2)作用:C1酶和Cx酶使纖維素分解成__纖維二糖__,__葡萄糖苷酶__將纖維二糖分解為__葡萄糖__。十、纖維素分解菌的篩選1.方法:__剛果紅__染色法。2.原理(1)含纖維素的培養(yǎng)基中加入的__剛果紅__,可與纖維素形成__紅色復(fù)合物__。(2)當(dāng)纖維素被__纖維素酶__分解后,形成的__纖維二糖__、__葡萄糖__不和剛果紅發(fā)生這種反應(yīng),紅色復(fù)合物就無法形成,培養(yǎng)基中出現(xiàn)以__纖維素分解菌__為中心的透明圈,可通過是否產(chǎn)生__透明圈__來篩選纖維素分解菌。十一、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1.流程2.纖維素分解菌大多分布在__富含纖維素__的環(huán)境中。3.通過選擇培養(yǎng)基可增加纖維素分解菌的濃度。   1.下列有關(guān)培養(yǎng)基敘述正確的是(  )A.培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分都有碳源、氮源、水、無機(jī)鹽B.除水以外的無機(jī)物都屬于無機(jī)鹽C.用培養(yǎng)基培養(yǎng)甲型H1N1流感病毒作為科學(xué)研究D.培養(yǎng)基配制過程中應(yīng)調(diào)pH,適應(yīng)各微生物的生長(zhǎng)【解析】固氮微生物培養(yǎng)基可無氮源,有的無機(jī)物如NH4NO3可作氮源,甲型H1N1流感病毒必須寄生在細(xì)胞內(nèi),不能用培養(yǎng)基培養(yǎng)。【答案】D2.某一種細(xì)菌要從環(huán)境中獲取現(xiàn)成的亮氨酸(20種必需氨基酸中的一種)才能生長(zhǎng),此菌株對(duì)鏈霉素敏感。實(shí)驗(yàn)者用誘變劑處理此菌株,想篩選出下表中細(xì)菌菌株類型。根據(jù)實(shí)驗(yàn)者的目的,選用的培養(yǎng)基類型是(  )選項(xiàng)篩選不需要亮氨酸的菌株篩選抗鏈霉素菌株篩選不需要亮氨酸的抗鏈霉素菌株L SL SL SL SL SL SL SL SL SL SL SL S注:L:亮氨酸 S:鏈霉素 “+”:加入 “-”:不加入如:L:不加亮氨酸 S:加入鏈霉素A.              B.                  C.                 D.【解析】不需要亮氨酸的菌株能夠在不含亮氨酸的培養(yǎng)基上正常生長(zhǎng),而其他微生物則不能;抗鏈霉素的菌株能夠在含鏈霉素的培養(yǎng)基上正常生長(zhǎng),而其他微生物則不能;要篩選不需要亮氨酸的抗鏈霉素的菌株需要在不含亮氨酸但含有鏈霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。【答案】B3.在接種操作的過程中,操作不正確的是(  )A.要將接種環(huán)灼燒滅菌B.取下棉塞后要將試管口灼燒滅菌C.將接種環(huán)伸入試管內(nèi),先接觸長(zhǎng)菌多的部位D.接種后還要將管口滅菌加塞【解析】將灼燒過的接種環(huán)伸入菌種管內(nèi),在試管內(nèi)壁或未長(zhǎng)菌落的培養(yǎng)基上接觸一下,讓其充分冷卻,然后輕輕刮取少許菌落,再從菌種管內(nèi)抽出接種環(huán)。【答案】C4.下列有關(guān)微生物培養(yǎng)與應(yīng)用的說法正確的是(  )A.天然培養(yǎng)基是指直接取自自然界不需加工的培養(yǎng)基B.接種前需對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手等進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理C.大腸桿菌的純化培養(yǎng)過程包括培養(yǎng)基的配制和純化大腸桿菌兩個(gè)階段D.分離分解尿素的細(xì)菌時(shí),尿素是培養(yǎng)基中唯一的氮源和碳源【解析】天然培養(yǎng)基是成分不明確的培養(yǎng)基,并不是不需加工配制的培養(yǎng)基;實(shí)驗(yàn)者的雙手需進(jìn)行消毒處理;分離分解尿素的細(xì)菌時(shí),尿素是唯一氮源而不是唯一碳源。【答案】C5.以下有關(guān)生物技術(shù)實(shí)踐的敘述中,不正確的是(  )A.除活菌計(jì)數(shù)法外,顯微鏡直接計(jì)數(shù)也是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法B.在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌,符合生物與環(huán)境相適應(yīng)的生物學(xué)觀點(diǎn)C.在釀酒生產(chǎn)上,常向發(fā)酵罐中加少量尿素,其目的是作為氮源,用于酵母菌合成蛋白質(zhì)和核酸D.不能用稀釋涂布平板法來測(cè)定土壤溶液中某活菌數(shù)目【解析】除活菌計(jì)數(shù)法外,顯微鏡直接計(jì)數(shù)也是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法,A正確;在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌,符合生物與環(huán)境相適應(yīng)的生物學(xué)觀點(diǎn),B正確;在釀酒生產(chǎn)上,常向發(fā)酵罐中加少量尿素,其目的是作為氮源,用于酵母菌合成蛋白質(zhì)和核酸,C正確;可用稀釋涂布平板法來測(cè)定土壤溶液中某活菌數(shù)目,D錯(cuò)誤。【答案】D6.微生物培養(yǎng)是微生物工程中的基礎(chǔ)技術(shù),下列相關(guān)敘述正確的是(  )A.病毒和細(xì)菌的培養(yǎng)基成分相同B.平板劃線法中的“線”是連續(xù)的、不分區(qū)域的C.微生物培養(yǎng)基中并不是都必須添加碳源或氮源D.在微生物培養(yǎng)操作過程中,為防止雜菌污染,需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行消毒【解析】 病毒必須寄生在活細(xì)胞內(nèi)才能進(jìn)行生命活動(dòng),如可用活雞胚培養(yǎng)病毒;平板劃線法每次劃線前都要灼燒接種環(huán),劃線是分區(qū)域的;微生物種類不同,對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求不同,應(yīng)根據(jù)所培養(yǎng)微生物的需要確定培養(yǎng)基的成分;對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿要進(jìn)行滅菌,而不是消毒。【答案】C7.用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)(  )可以用相同的培養(yǎng)基 都需要使用接種針進(jìn)行接種 都需要在火焰旁進(jìn)行接種 都可以用來計(jì)數(shù)活菌A.①②      B.③④C.①③ D.②④【解析】平板劃線法或稀釋涂布平板法都使用固體培養(yǎng)基;平板劃線法使用接種針進(jìn)行操作,而稀釋涂布平板法使用涂布器進(jìn)行操作;純化時(shí),要進(jìn)行無菌操作,需要在火焰旁接種,避免空氣中的微生物混入培養(yǎng)基;平板劃線法一般用于分離而不是計(jì)數(shù)。【答案】C8.鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基中碳源為(  )A.CMC-Na B.木聚糖C.纖維素 D.裂解酶   【解析】分離纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基中,加入纖維素粉,而鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基中加入的是纖維素鈉(CMC-Na)。【答案】A 9.在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí),一同學(xué)從對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落,而其他同學(xué)只篩選出大約50個(gè)菌落。該同學(xué)的結(jié)果產(chǎn)生的原因可能有(  )土樣不同 培養(yǎng)基被污染 操作失誤 沒有設(shè)置對(duì)照A.①②③ B.②③④C.①③④ D.①②④【解析】實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同,最可能的原因是土樣不同,其次是操作失誤或培養(yǎng)基被污染,而與是否設(shè)置對(duì)照沒有關(guān)系。【答案】A 10.在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)一種廣泛使用的除草劑(含氮有機(jī)化合物)在土壤中不易降解,長(zhǎng)期使用可污染土壤。為修復(fù)被該除草劑污染的土壤,可按下面程序選育能降解該除草劑的細(xì)菌(已知該除草劑在水中溶解度低,含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明)。(1)制備土壤浸出液時(shí),為避免菌體濃度過高,需將浸出液進(jìn)行________處理。(2)要從長(zhǎng)期使用該除草劑的土壤中分離目的菌,從物理性質(zhì)、用途方面來看,上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點(diǎn)是_______________________。(3)在劃線培養(yǎng)時(shí),只有很少菌落出現(xiàn),大部分細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)的主要原因是__________或有氧條件抑制了這些細(xì)菌的生長(zhǎng)。(4)在固體培養(yǎng)基上形成的菌落中,無透明帶菌落利用的氮源主要是________,有透明帶菌落利用的氮源主要是________,據(jù)此可篩選出目的菌。(5)科研人員用放射線處理該細(xì)菌獲得兩個(gè)突變株A和B,然后對(duì)突變株A和B進(jìn)行實(shí)驗(yàn),結(jié)果如下表所示:接種的菌種一般培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)處理及結(jié)果A不生長(zhǎng)添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲,能生長(zhǎng)B不生長(zhǎng)添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙,能生長(zhǎng)A+B能生長(zhǎng)不添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲、乙就能生長(zhǎng)突變株A不能在一般培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的原因是_________________。突變株A和B混合在一起接種于一般培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)的最可能原因是_____________________。【解析】 (1)制備土壤浸出液時(shí),為避免菌體濃度過高,需將浸出液進(jìn)行稀釋處理。(2)從物理性質(zhì)來看,題圖培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基;從用途方面來看,該培養(yǎng)基是以含氮除草劑為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。(3)在以該除草劑為唯一氮源的培養(yǎng)基上,不能降解該除草劑的細(xì)菌(除具有固氮能力的細(xì)菌外)是不能生長(zhǎng)的。(4)含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明,菌落周圍形成透明帶是由于該除草劑被某些細(xì)菌降解導(dǎo)致的。(5)突變株A的生長(zhǎng)依賴于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲,突變株B的生長(zhǎng)依賴于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙。不添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲和乙,二者混合培養(yǎng)時(shí)都能生長(zhǎng),最可能的原因是突變株A為突變株B提供了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙,突變株B為突變株A提供了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲。【答案】 (1)稀釋 (2)以該除草劑為唯一氮源的固體培養(yǎng)基 (3)培養(yǎng)基中缺少這些細(xì)菌可利用的氮源 (4)氮?dú)狻≡摮輨?5)突變株A缺乏合成營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲所需要的酶 突變株A生長(zhǎng)需要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲,突變株B可以提供;突變株B生長(zhǎng)需要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙,突變株A可以提供  11.下列關(guān)于微生物分離和培養(yǎng)的敘述,錯(cuò)誤的是(  )A.可采用干熱滅菌法對(duì)微生物培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌B.測(cè)定土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)目,常用菌落計(jì)數(shù)法C.分離土壤中不同的微生物,要采用不同的稀釋度D.分離能分解尿素的細(xì)菌,要以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的氮源【解析】培養(yǎng)基滅菌通常用的是高壓蒸汽滅菌法,而干熱滅菌法通常適用于玻璃器皿、金屬用具等耐高溫且不適合其他方法的物品;分離能分解尿素的細(xì)菌,用的選擇培養(yǎng)基里尿素是唯一的氮源,這樣才能分離出分解尿素的細(xì)菌。【答案】A 12.某學(xué)者欲研究被石油污染過的土壤中的細(xì)菌數(shù)并從中篩選出能分解石油的細(xì)菌。下列有關(guān)操作錯(cuò)誤的是(  )A.利用平板劃線法對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)B.利用以石油為唯一碳源的培養(yǎng)基篩選能分解石油的細(xì)菌C.采用稀釋涂布平板法分離菌種D.稱取土壤和稀釋土壤溶液時(shí)應(yīng)在火焰旁【解析】平板劃線法能對(duì)細(xì)菌分離純化但不能計(jì)數(shù),通常將被石油污染過的土壤浸出液稀釋后,采用稀釋涂布平板法分離分解石油的細(xì)菌菌種,并對(duì)菌種進(jìn)行計(jì)數(shù);篩選能分解石油的細(xì)菌只能利用以石油為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基;稱取土壤和稀釋土壤溶液過程中的每一步都要在火焰旁操作。【答案】A 13.細(xì)菌莢膜的觀察是微生物形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察的基本內(nèi)容之一。硅酸鹽細(xì)菌在無氮培養(yǎng)基、鉀細(xì)菌培養(yǎng)基及硅酸鹽細(xì)菌培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng),形成較厚的莢膜。下表1為無氮培養(yǎng)基的配方,表2是每種培養(yǎng)基上每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)及菌落直徑情況。請(qǐng)回答下列問題:表1 無氮培養(yǎng)基的配方葡萄糖10.0 gK2SO40.2 gK2HPO40.2 gCaCO35.0 gMgSO4·7H2O0.2 g瓊脂20.0 gNaCl0.2 g將上述物質(zhì)溶解后,用蒸餾水定容至1 000 mL表2 各稀釋度平板上菌落數(shù)及菌落直徑培養(yǎng)基種類各稀釋度對(duì)應(yīng)的平均菌落數(shù)菌落直徑(mm)103104105106無氮培養(yǎng)基323201.0~2.0鉀細(xì)菌培養(yǎng)基36640.6多數(shù)小于1.5硅酸鹽細(xì)菌培養(yǎng)基50851.2多數(shù)大于2.0(1)根據(jù)無氮培養(yǎng)基的配方可知,從物理性質(zhì)上看該培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基;從功能上看,該培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基,理由是_______________。(2)硅酸鹽細(xì)菌能在無氮培養(yǎng)基中生長(zhǎng),推測(cè)該細(xì)菌具有__________________功能。(3)為統(tǒng)計(jì)硅酸鹽細(xì)菌的數(shù)目,應(yīng)采用____________法進(jìn)行接種,該方法的所有操作都應(yīng)在_______附近進(jìn)行。(4)進(jìn)行上述實(shí)驗(yàn)的同時(shí)也設(shè)置了空白對(duì)照,空白對(duì)照的培養(yǎng)基中________________,說明培養(yǎng)基滅菌合格。根據(jù)表2中的數(shù)據(jù)可以得出,用____________培養(yǎng)基篩選硅酸鹽細(xì)菌的效果最好。【解析】 (1)培養(yǎng)基中添加了一定的瓊脂,且該培養(yǎng)基是用來觀察菌落與測(cè)定菌落直徑的,因此該培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基。無氮培養(yǎng)基里不含氮源,故從功能上看,該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。(2)硅酸鹽細(xì)菌能在無氮培養(yǎng)基中生長(zhǎng),推測(cè)該細(xì)菌具有固氮功能。(3)從“稀釋度”以及“菌落數(shù)”等信息可以分析出,硅酸鹽細(xì)菌的接種方法應(yīng)是稀釋涂布平板法,所有操作都應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。(4)為檢測(cè)培養(yǎng)基滅菌是否合格,需設(shè)置空白對(duì)照:空白對(duì)照的培養(yǎng)基中無菌落長(zhǎng)出,說明培養(yǎng)基滅菌合格。從“平均菌落數(shù)”以及“菌落直徑”可以看出,硅酸鹽細(xì)菌培養(yǎng)基篩選硅酸鹽細(xì)菌的效果最好。【答案】 (1)固體 選擇 配制的培養(yǎng)基中無氮源 (2)固定空氣中氮?dú)獾?或固氮) (3)稀釋涂布平板 酒精燈火焰 (4)無菌落長(zhǎng)出 硅酸鹽細(xì)菌  

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